CN101558041A - 基于吡啶酮骨架的半胱天冬酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及可用作半胱天冬酶抑制剂的吡啶酮衍生物，制备该吡啶酮衍生物的方法，和包含该吡啶酮衍生物的用于抑制半胱天冬酶的药物组合物。

Description

基于吡啶酮骨架的半胱天冬酶抑制剂
技术领域
本发明涉及吡啶酮衍生物或其药学可接受的盐作为对抗多种半胱天冬酶(Caspase)的抑制剂，所述多种半胱天冬酶包括半胱天冬酶-1[白细胞介素-1β-转化酶，ICE]，半胱天冬酶-3[凋亡酶/CPP-32]，半胱天冬酶-8，和半胱天冬酶-9，以及涉及包含吡啶酮衍生物或其药学可接受的盐的药物组合物用于抑制半胱天冬酶。
背景技术
半胱天冬酶是在最近10年期间被发现的为α2β2四聚体形式的新型的半胱氨酸蛋白酶。直到目前为止已知约14种半胱天冬酶。其中，半胱天冬酶-1(ICE)是一种细胞因子并参与生物学无活性的白细胞介素(prointerleukin)-1β的前体向生物学活性的白细胞介素-1β的转化。白细胞介素-1由白细胞介素-1α和白细胞介素-1β组成，其二者都是在单核细胞中以31KDa前体的形式被合成。仅白细胞介素-1β的前体被I CE活化。被半胱天冬酶-1水解的位置是Asp27-Gly28和Asp116-Ala117，后一位置的水解得到白细胞介素-1β。白细胞介素-1β已被报导担当引起炎症的重要递质(1，3)。半胱天冬酶-1在1989年被首次发现，并且由两个独立研究小组通过X射线结晶学方法测定了其立体三维结构。
广泛地研究了半胱天冬酶-3(CPP-32)作用或作用机理，并且在1996年测定了其三维结构(2)。从半胱天冬酶-3的前体活化得到的半胱天冬酶-3(凋亡酶)在(P4)Asp-X-X-Asp(P1)模体(motif)的位置被水解，并且已知的底物包括聚(ADP-核糖)聚合酶、U1 70,000Mr核内小核糖核蛋白、460,000Mr DNA-依赖性蛋白激酶的催化亚单位等。半胱天冬酶-7的X射线结构据报导与半胱天冬酶-3的X射线结构非常相似(4)。
半胱天冬酶-8和半胱天冬酶-9存在于半胱天冬酶-3，6，7的上游，并且已知所有这些半胱天冬酶参与细胞凋亡级联反应。半胱天冬酶-8的X射线结构在1999年被测定(5)，并且其抑制剂可特别有利地被用来治疗与细胞凋亡有关的疾病。
半胱天冬酶抑制剂是指抑制半胱天冬酶的活性并因此控制由半胱天冬酶活性引起的诸如炎症、细胞凋亡等症状的那些化合物。可通过给药该抑制剂进行治疗或被减弱的疾病或症状包括以下：痴呆，脑中风，由AIDS引起的脑损伤，糖尿病，胃溃疡，由肝炎病毒引起的脑损伤，肝炎诱导的肝脏疾病，急性肝炎，暴发性肝衰竭，脓毒病，器官移植排斥，风湿性关节炎，缺血性心脏病、和肝硬化(6)。
在目前为止已知的半胱天冬酶抑制剂中，最值得注意的不可逆的抑制剂如下所示：
Figure A20078004391500071
上述两个抑制剂都是基于它们不可逆地使该酶失活而抑制细胞凋亡的普通机理来表现出其活性(不可逆的、广谱的抑制剂)。已报道说不可逆的抑制剂具有比可逆的抑制剂更加有效的抑制活性(7)。IDUN公司的IDN-1965和Maxim公司的MX-1013二者据报道在肝损伤的细胞凋亡模型中都表现出活性(8，9)。这些化合物目前处于临床前试验阶段。
不可逆的抑制剂I DN-6556作为丙型肝炎患者的肝保护剂目前处于II期临床试验阶段(10，6-肝硬化-i)。
Figure A20078004391500072
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(7)Wu J.等人，Methods：A Companion to Methods in Enzymology，1999，17，320。
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(10)Hoglen N.C.等人，J.Pharmacol Exp.Ther.，2004，309(2)：634.Characterization of IDN-6556(3-[2-(2-tert-butyl-phenylaminooxalyl)-amino]-propionylamino)-4-oxo-5-(2，3，5，6-tetrafluoro-phenoxy)-pentanoic acid)：a liver-targeted caspaseinhibitor。
发明内容
发明要解决的技术问题
本发明人进行了广泛地研究以设计出可用作有效的并且对半胱天冬酶更具选择性的抑制剂的新型化合物。
解决技术问题的方案
为了实现这一目的，本发明人合成出许多化合物，并且测定了它们对半胱天冬酶的结合能力和抑制活性。结果，本发明人发现了下式(1)的吡啶酮化合物确实满足这种要求，并完成了本发明。
[式1]
Figure A20078004391500111
其中
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和X的定义参见下文。
因此，本发明提供了对半胱天冬酶具有有效抑制活性的式(1)的新型吡啶酮衍生物或其药学可接受的盐。
本发明的另一个目的是提供用于抑制半胱天冬酶的药物组合物，特别是用于预防炎症和细胞凋亡的组合物，其包括作为活性成分的式(1)的化合物或其药学可接受的盐以及药学可接受的载体。
有益效果
本发明的式(1)的化合物对半胱天冬酶具有优异的抑制活性，因此可有利地被用来治疗各种由半胱天冬酶介导的疾病和症状。
具体实施方式
首先，本发明中的重要的术语如下定义：
a)C1-C5-烷基：含1-5个碳原子的直链或支链烃，其包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基等。
b)C3-C10-环烷基：含3-10个碳原子的环烃，其包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。
c)芳基：芳基包括所有的芳香族的、杂芳族的及其被部分还原的衍生物。芳香族基团是指5-15元的单个或稠合的不饱和烃。杂芳族基团是指含1-5个选自氧、硫和氮的杂原子的芳基。所述芳基包括但不限于苯基、萘基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、咪唑啉基、异噁唑基、噁唑基、噻唑基等。
所述C1-C5-烷基、C3-C10-环烷基或芳基中的一个或多个氢可被选自以下的基团代替：酰基、氨基、烷氧羰基、羧基、羧基氨基、氰基、卤素、羟基、硝基、硫基、烷基、环烷基、烷氧基、芳基、芳基氧基、硫氧基(sulfoxy)和胍基。
d)天然的氨基酸包括以下：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。
另外，本说明书包括以下缩写：
N-溴代琥珀酰亚胺：NBS
O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐]：HATU
N，N-二甲基甲酰胺：DMF
二甲基亚砜：DMSO
N-甲基吗啉：NMM
2，2′-偶氮双(2-甲基丙腈)：AIBN
2，2，6，6-四甲基-1-哌啶基氧基，自由基：TEMPO
双(三甲基甲硅烷基)氨基锂：LiHMDS
N-(2-羟基乙基)哌嗪-N′-(2′-乙磺酸)：HEPES
3-[(3-胆酰胺丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸盐：CHAPS
乙二胺四乙酸：EDTA
二硫苏糖醇：DTT
下面更详细地说明本发明。本发明的一个方面涉及下式(1)的吡啶酮衍生物或其药学可接受的盐，其可用作半胱天冬酶的抑制剂。
[式1]
Figure A20078004391500131
其中
I)R1表示H，C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基，芳基，或所有的天然氨基酸的侧链残基，
II)R2表示H，C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基，芳基，或所有的天然氨基酸的侧链残基，
III)R3表示H，C1-C5-烷基，羟基，C1-C5-烷氧基或卤素，
IV)R4表示H，C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基或芳基，
V)R5表示H，C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基或芳基，
VI)R6表示H，C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基或芳基，
VII)R7和R8彼此独立地表示H，C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基或芳基，
VIII)X表示-CH2OR9(R9是C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基或芳基)，-CH2OC(＝O)R10(R10是C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基或芳基)或-CH2-W(W是卤素)。
在本发明的式(1)的化合物中，R1优选表示所有的天然氨基酸的侧链残基，更优选是-CH2COOH。当与R1连接的碳由于R1基团而变成立构中心时，式(1)的化合物可包括两类立体异构体或其混合物(非对映异构体混合物)。式(1)的化合物可包括酯形式(-CO2Y1，其中Y1是C1-C5-烷基)，磺酰胺形式(-CONHSO2Y2，其中Y2是C1-C5-烷基)，以及，当R1是包含羧基部分的氨基酸的侧链残基时，式(1)的化合物是药学可接受的盐形式；或者当R1是包含碱部分的氨基酸的侧链残基时，式(1)的化合物也可以以药学可接受的盐的形式存在。
当R1是-CH2COOH时，本发明的化合物(式1a)可以以环状缩酮的形式(式1b)存在，因此，本领域技术人员可理解的是环状缩酮形式(式1b)也可被本发明所涵盖。
Figure A20078004391500141
式1a                                 式1b
另外，所述化合物的平衡形式应当被理解为涵盖它们的互变异构形式。
R2优选表示C1-C5-烷基，更优选甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基。当与R2连接的碳由于R2基团而变成立构中心时，式(1)的化合物可包括两类立体异构体或其混合物(非对映异构体混合物)。式(1)的化合物可包括酯形式(-CO2Y1，其中Y1是C1-C5-烷基)，磺酰胺形式(-CONHSO2Y2，其中Y2是C1-C5-烷基)，以及当R2是包含羧基部分的氨基酸的侧链残基时，式(1)的化合物是药学可接受的盐形式；或者，当R2是包含碱部分的氨基酸的侧链残基时，式(1)的化合物也可以以药学可接受的盐形式存在。
R3优选表示H、C1-C5-烷基、C1-C5-烷氧基或卤素，更优选H、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基、甲氧基、乙氧基、氟或氯。
R4优选表示H。
R5优选表示H。
R6优选表示未被取代的或者被C3-C10-环烷基或芳基取代的C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基或芳基各自是被取代或未被取代的；或者表示被取代的或未被取代的芳基。R6更优选表示未被取代的或者被C3-C10-环烷基或芳基取代的C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基或芳基各自是未被取代的或被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C5-烷基、羟基、C1-C5-烷氧基和卤素；或者表示芳基，其是未被取代的或被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C5-烷基、羟基、C1-C5-烷氧基和卤素。例如，R6是苯基，萘基，吲哚基，喹啉基，异喹啉基，咪唑啉基，异噁唑基，噁唑基或噻唑基，或者是被苯基、萘基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、咪唑啉基、异噁唑基、噁唑基、噻唑基或环己基取代的甲基，这些取代基各自是未被取代的或被一个或多个选自以下的取代基取代：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、三卤代甲基和卤素。
R7和R8各自优选表示H。
R9优选表示被一个或多个卤素取代的芳基，更优选被一个或多个氟取代的苯基，最优选是2，3，5，6-四氟苯基。
R10优选表示被一个或多个卤素取代的芳基，更优选被一个或多个氯取代的苯基，最优选是2，6-二氯苯基。
W优选表示F。
最优选的化合物是选自以下的化合物：
5-氟-3-[2-(4-甲基-2-氧代-1-苯基-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-4-氧代-戊酸(1)；
3-[2-(1-苄基-4-甲基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸(2)；
5-氟-3-[2-(4-甲基-2-氧代-1-苯乙基-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-4-氧代-戊酸(3)；
5-氟-3-[2-(1-异丁基-4-甲基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-4-氧代-戊酸(4)；
3-[2-(1-苄基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸(5)；
3-[2-(1-苄基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-3-甲基-丁酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸(6)；
3-[2-(1-苄基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-戊酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸(7)；和
3-{2-[1-(2-叔丁基-苄基)-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基]-丁酰氨基}-5-氟-4-氧代-戊酸(8)。
在以下的反应路线1-4中描述了对半胱天冬酶显示出抑制活性的式(1)的新型吡啶酮衍生物的制备方法。然而，在以下反应路线中举例说明的那些仅代表本发明中所用的典型方法。操作顺序、试剂、反应条件、溶剂等可不受限制地发生改变。
[反应路线1]
Figure A20078004391500161
如反应路线1所示，乙酰基乙醛二甲基缩醛、丙二腈和乙酸哌啶鎓(piperidinium)在合适的溶剂例如甲苯中反应，得到亚丙基丙二腈(2)和亚丙烯基丙二腈(3)。该混合物用浓硫酸处理，得到吡啶酮腈(4)，该吡啶酮腈(4)与甲基溴化镁反应得到乙酰基吡啶酮(5)。乙酰基吡啶酮化合物(5)、硫和吗啉反应得到硫代酰胺化合物(6)，其然后与浓硫酸在合适的溶剂例如甲醇中反应，得到所需的吡啶酮化合物(7)。当R 3是H时，所需的化合物可根据JAmer.Chem.Soc.，1959，81，740-743中已知的方法制备。
[反应路线2]
化合物(7)与合适的烷基卤化物反应以得到化合物(8)，如此获得的化合物(8)与LiHMDS和合适的烷基卤化物反应得到化合物(9)，如有必要，其然后被水解，得到脱保护的羧酸化合物(10)。
[反应路线3]
在上面的反应路线3和下面的反应路线4中，Z表示-OR9(R9是C1-C5-烷基、C3-C10-环烷基或芳基)、-OC(＝O)R10(R10是C1-C5-烷基、C3-C10-环烷基或芳基)或-W(W是卤素)。
如反应路线3所述，羧酸衍生物(10)与天冬氨酸衍生物(13)(参见下面的反应路线4)偶联，得到化合物(11)，然后使化合物(11)经历Dess-Martin高碘化物(periodene)氧化反应，并且，如有必要进行脱保护反应，得到所需化合物(1)。
反应路线3的化合物(1)中的官能团Z可以通过首先根据反应路线4的过程合成已经具有所需Z基团的化合物(13)、并使化合物(13)与羧酸化合物(10)反应来形成(参见WO 00/23421)。或者，所需的Z基团可在羧酸化合物(10)与天冬氨酸(β-叔丁基)甲酯偶合并水解后根据反应路线4的过程被随后引入。当Z是F时，可根据Tetrahedron Letters，1994，35(52)，9693-9696中已知的方法制造外消旋化合物。
[反应路线4]
本发明的式(1)的化合物对半胱天冬酶具有广谱抑制活性，这将通过以下试验结果被证实，并且因此其具有预防炎症和细胞凋亡的效果。因此，本发明提供用于抑制半胱天冬酶的药物组合物，特别是用于预防炎症和细胞凋亡的治疗性组合物，其包括式(1)的化合物或其药学可接受的盐作为活性成分以及药学可接受的载体。具体而言，本发明的组合物对于以下疾病具有治疗或预防效果：痴呆、脑中风、由AIDS引起的脑损伤、糖尿病、胃溃疡、由肝炎引起的脑损伤、肝炎诱导的肝脏疾病、急性肝炎、暴发性肝衰竭、脓毒病、器官移植排斥、风湿性关节炎、由于缺血性心脏疾病导致的心脏细胞凋亡、或肝硬化。
另外，本发明提供了式(1)的化合物或其药学可接受的盐抑制半胱天冬酶的用途，特别是用于预防炎症和细胞凋亡的用途。本发明还提供预防患者的炎症和细胞凋亡的方法，该方法包括对患者给予治疗有效量的式(1)的化合物或其药学可接受的盐。本发明还提供治疗或预防患者的以下疾病的方法：痴呆、脑中风、由AIDS引起的脑损伤、糖尿病、胃溃疡、由肝炎引起的脑损伤、肝炎诱导的肝脏疾病、急性肝炎、暴发性肝衰竭、脓毒病、器官移植排斥、风湿性关节炎、由缺血性心脏病导致的心脏细胞凋亡、或肝硬化，该方法包括对患者给予治疗有效量的式(1)的化合物或其药学可接受的盐。
式(1)的化合物可被配制成多种药物形式用于给药目的。为了制备本发明的药物组合物，将有效量的式(1)的化合物或其药学可接受的盐与可根据所制备制剂的不同而进行选择的药学可接受的载体混合。
半胱天冬酶抑制剂化合物可被配制成非肠道注射剂、经皮或口服制剂，根据其应用目的的不同而异。特别有利的是将该组合物配制成便于给药并且具有剂量均匀性的单位剂型。
对于口服制剂，可使用任何常用的药物载体。例如，水、二醇类、油类、醇类等可被用于诸如混悬剂、糖浆剂、酏剂和溶液剂的口服液体药剂；或者淀粉类、糖类、白陶土、润滑剂、粘合剂、崩解剂等可被用于诸如粉剂、丸剂、胶囊和片剂的固体制剂。由于片剂和胶囊便于给药，因此它们是最有利的剂量单位形式。还希望将片剂和丸剂配制成肠溶衣制剂。
对于非肠道制剂，无菌水常被用作载体，尽管也可使用其它成分例如溶解助剂。注射剂例如注射用无菌水性或油性混悬剂，可以根据已知工序采用合适的分散剂、润湿剂或助悬剂来制备。可用于制备注射剂的溶剂包括水、林格氏流体和等渗NaCl溶液以及可方便地用作溶剂或助悬媒介物的无菌硬化油(fixing oil)。包括甘油单酯或甘油二酯在内的任何无刺激性的硬化油可用于这一目的。脂肪酸例如油酸也可用于注射。
对于经皮给药，载体可包括渗透增强剂和/或合适的润湿剂，任选地组合有无显著皮肤刺激性的合适的添加剂。所述添加剂可使得容易穿过皮肤进行给药和/或可帮助所需组合物的制备。这些经皮制剂可通过多种方式诸如作为透皮贴剂、喷滴剂(spot-on)或软膏剂被给予。
当本发明的半胱天冬酶抑制剂用于临床目的时，优选以0.1-100mg/kg体重/天的量给予到受试患者。总的日剂量可以一次或以若干次被给予。然而，对于个体患者的具体给药剂量可以根据所用的具体化合物、受试患者的体重、性别、卫生学状况或饮食、给药时间或方法、排泄率、试剂的混合比、待治疗疾病的严重程度等的不同而不同。
实施例
通过以下实施例更具体地说明本发明，然而，可理解这些实施例意在举例说明本发明而并非以任何方式限制本发明的范围。
制备例1-1)
2-(3，3-二甲氧基-1-甲基-亚丙基)-丙二腈
将乙酰基乙醛二甲基缩醛(50g，378mmol)和乙酸哌啶鎓(5.5g，37.8mmol)溶解于甲苯(200ml)，在20分钟内向其中缓慢加入丙二腈(25g，378mmol)，将混合物在室温下搅拌16小时，反应混合物用水(100ml)洗涤，干燥(无水硫酸钠)，并减压浓缩，得到褐色液体化合物(63g，收率：92％)，其然后通过1H-NMR鉴定，为2-(3，3-二甲氧基-1-甲基-亚丙基)-丙二腈和[(2E)-3-甲氧基-1-甲基丙-2-烯-1-亚基]丙二腈为约10∶1比的混合物。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ4.57(t，1H)，3.39(s，6H)，2.88(d，2H)，2.35(s，3H)。
制备例1-2)
4-甲基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-甲腈
向2-(3，3-二甲氧基-1-甲基-亚丙基)-丙二腈和[(2E)-3-甲氧基-1-甲基丙-2-烯-1-亚基]丙二腈(38g，211mmol)的10∶1混合物中加入浓硫酸(34ml，633mmol)，将混合物在50℃搅拌2小时，反应混合物被冷却到室温，向其中加入水(100ml)，所得固体化合物经过滤，用水(50ml)洗涤，并干燥，得到标题化合物(21.1g，收率：75％)。
1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.31(s，1H)，7.65(d，1H)，6.30(d，1H)，2.36(s，3H)。
制备例1-3)
3-乙酰基-4-甲基-1H-吡啶-2-酮
在室温下在氮气氛下在10分钟内向甲基溴化镁(1.4M甲苯/四氢呋喃(75/25)溶液，327ml，458mmol)中加入制备例1-2)的化合物(20.5g，153mmol)，混合物搅拌回流3小时，反应混合物被冷却到室温，并搅拌12小时，在0℃反应混合物被缓慢加入6N盐酸水溶液(100ml)中，萃取，干燥(无水硫酸钠)，并减压浓缩，向残余物中加入乙醚(100ml)，得到浅黄色固体化合物，其然后经过滤和干燥，得到标题化合物(21.7g，收率：94％)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ12.94(s，1H)，7.31(d，1H)，6.18(d，1H)，2.58(s，3H)，2.26(s，3H)。
制备例1-4)
4-甲基-3-(2-吗啉-4-基-2-硫代-乙基)-1H-吡啶-2-酮
向3-乙酰基-4-甲基-1H-吡啶-2-酮(21.5g，142mmol)中加入硫(4.79g，149mmol)和吗啉(18.7ml，213mmol)，将混合物加热到120℃达8小时，反应混合物被冷却到室温，加入乙醇(50ml)，得到灰色固体化合物，其然后经过滤和干燥，得到标题化合物(27.3g，收率：76％)。
1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.31(s，1H)，7.15(d，1H)，6.03(d，1H)，4.24(t，2H)，4.00(t，2H)，3.80(s，2H)，3.68(m，4H)，2.11(s，3H)。
制备例1-5)
(4-甲基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-乙酸甲酯
向4-甲基-3-(2-吗啉-4-基-2-硫代-乙基)-1H-吡啶-2-酮(27.3g，108mmol)中加入甲醇(30ml)和浓硫酸(30ml)，将混合物加热到100℃达3小时，反应混合物被冷却到室温，用饱和碳酸钠水溶液中和，并通过硅藻土过滤以除去沉淀物，水层用二氯甲烷(50ml×3)萃取，干燥(无水硫酸钠)，并减压浓缩，向残余物中加入乙醚(100ml)，得到浅褐色固体化合物，其然后经过滤和干燥，得到标题化合物(16.9g，收率：86％)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ12.35(s，1H)，7.20(d，1H)，6.13(d，1H)，3.70(s，3H)，3.66(s，2H)，2.20(s，3H)。
制备例1-6)
(4-甲基-2-氧代-1-苯基-1，2-二氢-吡啶-3-基)-乙酸甲酯
向制备例1-5)的化合物(181mg，1.0mmol)、苯基硼酸(244mg，2.0eq)、Cu(OAc)2.H2O(40mg，0.2eq)、吡啶(0.16ml，2.0eq)、TEMPO(172mg，1.1eq)和分子筛(100mg，4A，粉末，预干燥)的混合物中加入CH2Cl2(10ml)，将混合物在室温下在氮气下搅拌1小时，反应混合物然后暴露于空气下，并搅拌1天，向其中加入饱和乙酸铵(30ml)，混合物用乙酸乙酯(100ml)萃取两次，将萃取物用低浓度的碳酸氢钠水溶液(NaHCO3，100ml×2)洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并减压浓缩，将残余物通过柱色谱(30-60％乙酸乙酯-己烷)纯化，得到标题化合物(236mg，收率92％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.47-7.44(m，2H)，7.40-7.35(m，3H)，7.21(d，1H)，6.12(d，1H)，3.69(s，3H)，3.68(s，2H)，2.23(s，3H)。
制备例1-7)
2-(4-甲基-2-氧代-1-苯基-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酸甲酯
在氮气下将制备例1-6)的化合物(230mg，0.89mmol)溶解于无水THF(10ml)，向其中加入1.0M LiHMDS/THF(1.07ml，1.2eq)，将混合物搅拌10分钟同时保持温度为-78℃，然后加入碘乙烷(0.11ml，1.5eq)并搅拌2小时，期间混合物缓慢回温到室温，加入水(20ml)，混合物用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，用氯化钠水溶液(100ml)洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并减压浓缩，得到260mg的标题化合物，为化学计量的收率。该化合物无需进一步纯化即可直接用于后续反应。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.44(t，2H)，7.40-7.34(m，3H)，7.18(d，1H)，6.09(d，1H)，3.77(dd，1H)，3.65(s，3H)，2.29-2.20(m，1H)，2.23(s，3H)，1.87(m，1H)，0.91(t，3H)。
制备例1-8)
2-(4-甲基-2-氧代-1-苯基-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酸
将制备例1-7)的化合物(253mg，0.89mmol)溶解于溶剂混合物(6ml，四氢呋喃∶MeOH∶H2O＝3∶2∶1)，加入LiOH·H2O(112mg，3.0eq)，将混合物加热和搅拌约4小时，反应混合物用1N盐酸水溶液中和，并减压蒸馏以除去大部分四氢呋喃，将残余物溶解于过量的乙酸乙酯(50ml)，用氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并减压浓缩，得到标题化合物(240mg)，为化学计量的收率。该化合物无需进一步纯化即可直接用于后续反应。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.53(t，2H)，7.47(m，1H)，7.37(d，2H)，7.32(d，1H)，6.37(d，1H)，2.39(s，3H)，2.29(m，1H)，2.03(m，2H)，0.95(t，3H)。
制备例1-9)
5-氟-3-[2-(4-甲基-2-氧代-1-苯基-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-4-氧代-戊酸叔丁基酯
将制备例1-8)中获得的羧酸衍生物(240mg，0.89mmol)、3-氨基-5-氟-4-羟基-戊酸叔丁基酯(参见Tetrahedron Letters，1994，35(52)，9693-9696，213mg，1.3eq)和HATU(406mg，1.2eq)的混合物冷却到0℃，向其中加入含三乙胺(0.50ml，4.0eq)的DMF溶剂(5ml)，将混合物反应1天。溶剂被减压蒸馏。残余物用乙酸乙酯(30ml×2)萃取，用水、碳酸氢钠水溶液和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并减压浓缩，向如此获得的化合物和Dess-Martin试剂(755mg，2.0eq)中加入无水二氯甲烷(4ml)，将混合物在室温下搅拌1小时，加入异丙醇(1ml)使反应停止，反应混合物在减压下通过硅藻土过滤以除去固体，用乙酸乙酯(20ml×2)萃取，将萃取物用水、饱和碳酸氢钠溶液和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并减压浓缩，将残余物通过柱色谱纯化(30-50％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物(298mg，收率73％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.86(br s，1H)，7.36-7.22(m，5H)，7.15(t，1H)，6.08(m，1H)，5.23-4.82(m，2H)，4.75(m，1H)，3.75(m，1H)，2.90-2.60(m，2H)，2.34&2.33(两个s，3H)，2.30-1.98(m，2H)，1.40&1.38(两个s，9H)，0.87(m，3H)。
实施例1)
5-氟-3-[2-(4-甲基-2-氧代-1-苯基-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-4-氧代-戊酸
Figure A20078004391500241
将制备例1-9)的化合物(240mg，0.524mmol)溶解于二氯甲烷(4ml)，在0℃向其中加入三氟乙酸(2ml)，将反应混合物搅拌1小时同时缓慢回温到室温，并减压浓缩，将残余物通过柱色谱纯化(10％甲醇-二氯甲烷)，得到标题化合物(179mg，收率85％)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ7.81(m，1H)，7.46(m，3H)，7.39(m，1H)，7.31(m，2H)，6.21(t，1H)，5.30-4.80(m，2H)，4.57-4.45(m，1H)，3.54(m，1H)，2.66-2.47(m，2H)，2.17(s，3H)，2.05-1.68(m，2H)，0.74(m，3H)。
制备例2-1)
(1-苄基-4-甲基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-乙酸甲酯
向制备例1-5)中的化合物(544mg，3.0mmol)和NaH(60％，分散在矿物油中，132mg，1.1eq)的混合物中加入DMF(5ml)，将混合物在0℃搅拌10分钟，向其中加入苄基溴(0.36ml，1.0eq)，将混合物在室温下在氮气下搅拌2小时，将反应混合物减压浓缩，残余物用乙酸乙酯(100ml)萃取两次，将萃取物用饱和碳酸氢钠溶液(NaHCO3，100ml×2)和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并减压浓缩，将残余物通过柱色谱纯化(30-50％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物(676mg，收率83％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.35-7.26(m，5H)，7.10(d，1H)，6.02(d，1H)，5.12(s，2H)，3.70(s，3H)，3.67(s，2H)，2.16(s，3H)。
制备例2-2)
2-(1-苄基-4-甲基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酸甲酯
在氮气下将制备例2-1)的化合物(271mg，1.0mmol)溶解于无水THF(6ml)，向其中加入1.0M Li HMDS/THF(1.1ml，1.1eq)，将混合物搅拌10分钟同时保持温度为-78℃，然后加入碘乙烷(0.21ml，1.5eq)并搅拌2小时，期间将混合物缓慢回温到室温，加入饱和乙酸铵溶液使反应停止，反应混合物用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，用氯化钠水溶液(100ml)洗涤，干燥(无水Na2SO4)，减压浓缩，并通过柱色谱纯化(40-50％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物(142mg，收率47％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.34-7.22(m，5H)，7.06(d，1H)，5.98(d，1H)，5.18-5.01(ABq，2H)，3.72(dd，1H)，3.63(s，3H)，2.24(m，1H)，2.17(s，3H)，1.85(m，1H)，0.88(t，3H)。
制备例2-3)
2-(1-苄基-4-甲基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酸
将制备例2-2)的化合物(140mg，0.468mmo l)溶解于溶剂混合物(10ml，四氢呋喃∶MeOH∶H2O＝3∶2∶1)，加入1N LiOH·H2O(1.4ml，3.0eq)，将混合物加热和搅拌约5小时，将反应混合物用1N盐酸水溶液中和，并减压蒸馏以除去大部分四氢呋喃，残余物溶解于过量的乙酸乙酯(50ml)，用氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并减压浓缩，得到标题化合物(134mg，收率100％)。该化合物无需进一步纯化即可直接用于后续反应。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.34-7.21(m，6H)，6.26(d，1H)，5.24-5.14(ABq，2H)，3.79(t，1H)，2.29(s，3H)，2.27(m，1H)，2.00(m，1H)，0.92(t，3H)。
制备例2-4)
3-[2-(1-苄基-4-甲基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁基酯
将制备例2-3)中获得的羧酸衍生物(133mg，0.468mmol)、3-氨基-5-氟-4-羟基-戊酸叔丁基酯(参见Tetrahedron Letters，1994，35(52)，9693-9696，116mg，1.2eq)和HATU(213mg，1.2eq)的混合物冷却到0℃，向其中加入三乙胺(0.26ml，4.0eq)的DMF溶剂(5ml)，将混合物在室温下反应2小时，溶剂被减压蒸馏，残余物用乙酸乙酯(30ml×2)萃取，用水、碳酸氢钠水溶液和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并减压浓缩，将残余物通过柱色谱纯化(40-60％乙酸乙酯-己烷)，得到3-[2-(1-苄基-4-甲基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-5-氟-4-羟基-戊酸叔丁基酯(140mg，收率63％)。向该化合物和Dess-Martin试剂(184mg，1.5eq)中加入无水二氯甲烷(4ml)，将混合物在室温下搅拌1小时，加入异丙醇(1ml)使反应停止，反应混合物在减压下通过硅藻土过滤以除去固体，用乙酸乙酯(20ml×2)萃取，将萃取物用水、饱和碳酸氢钠溶液和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并减压浓缩，将残余物通过柱色谱纯化(30-40％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物(110mg，收率81％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.40(两个br s，1H)，7.36-7.22(m，5H)，7.15(t，1H)，6.08(m，1H)，5.23-4.82(m，4H)，4.75(m，1H)，3.75(m，1H)，2.88-2.60(m，2H)，2.28&2.27(两个s，3H)，2.28-2.04(m，2H)，1.41&1.38(两个s，9H)，0.87(m，3H)。
实施例2)
3-[2-(1-苄基-4-甲基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸
Figure A20078004391500271
将制备例2-4)的化合物(100mg，0.212mmol)溶解于二氯甲烷(4ml)，在0℃向其中加入三氟乙酸(2ml)，将反应混合物搅拌1小时，同时缓慢回温到室温，并减压浓缩，将残余物通过柱色谱纯化(10％甲醇-二氯甲烷)，得到标题化合物(60mg，收率68％，白色粉末)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.40(br s，1H)，7.74(m，1H)，7.56(t，1H)，7.26-7.21(m，5H)，6.14(d，1H)，5.30-4.65(m，2H)，5.16(m，1H)，4.91(m，1H)，4.50-4.38(m，1H)，3.50(m，1H)，2.64-2.40(m，2H)，2.13(s，3H)，2.04-1.69(m，2H)，0.69(m，3H)。
制备例3-1)
(4-甲基-2-氧代-1-苯乙基-1，2-二氢-吡啶-3-基)-乙酸甲酯
向制备例1-5)的化合物(544mg，3.0mmol)和NaH(60％，分散在矿物油中，132mg，1.1eq)的混合物中加入DMF(5ml)，将混合物在0℃搅拌10分钟，向其中加入苯乙基溴(0.45ml，1.1eq)，将混合物在室温下在氮气下搅拌2小时，将反应混合物减压浓缩，残余物用乙酸乙酯(100ml)萃取两次，将萃取物用饱和碳酸氢钠溶液(NaHCO3，100ml×2)和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并减压浓缩，将残余物通过柱色谱纯化(30-50％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物(414mg，收率48％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.28-7.14(m，5H)，6.79(d，1H)，5.89(d，1H)，4.09(t，3H)，3.71(s，3H)，3.67(s，2H)，3.03(t，3H)，2.15(s，3H)。
制备例3-2)
2-(4-甲基-2-氧代-1-苯乙基-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酸甲酯
在氮气下将制备例3-1)的化合物(405mg，1.42mmol)溶解于无水THF(6ml)，向其中加入1.0M LiHMDS/THF(1.70ml，1.2eq)并搅拌10分钟，同时使反应混合物保持在-78℃，然后加入碘乙烷(0.17ml，1.5eq)并搅拌2小时，期间将混合物缓慢回温到室温，加入饱和乙酸铵溶液使反应停止，将反应混合物用乙酸乙酯(50ml ×2)萃取，用氯化钠水溶液(100ml)洗涤，干燥(无水Na2SO4)，减压浓缩，并通过柱色谱纯化(30-40％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物(320mg，收率72％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.28-7.19(m，5H)，6.74(d，1H)，5.84(d，1H)，4.13-4.06(m，2H)，3.74(m，1H)，3.68(s，3H)，3.02(t，2H)，2.25(m，1H)，2.16(s，3H)，1.85(m，1H)，0.89(t，3H)。
制备例3-3)
5-氟-3-[2-(4-甲基-2-氧代-1-苯乙基-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-4-氧代-戊酸叔丁基酯
将制备例3-2)的化合物(313mg，1.0mmol)根据与制备例2-3)相同的方法被水解，得到羧酸衍生物(296mg，99％)。将由此获得的羧酸衍生物(290mg，0.97mmol)、3-氨基-5-氟-4-羟基-戊酸叔丁基酯(参见Tetrahedron Letters，1994，35(52)，9693-9696，270mg，1.3eq)和HATU(456mg，1.2eq)的混合物冷却到0℃，向其中加入三乙胺(0.56ml，4.0eq)的DMF溶剂(5ml)，将混合物反应1天，溶剂被减压蒸馏，残余物用乙酸乙酯(30ml×2)萃取，用水、碳酸氢钠水溶液和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并减压浓缩，将残余物通过柱色谱纯化(50-70％乙酸乙酯-己烷)，得到5-氟-4-羟基-3-[2-(4-甲基-2-氧代-1-苯乙基-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-戊酸叔丁基酯(232mg，49％)。向该化合物和Dess-Martin试剂(300mg，1.5eq)中加入无水二氯甲烷(4ml)，将混合物在室温下搅拌1小时，加入异丙醇(1ml)使反应停止，将反应混合物在减压下通过硅藻土过滤以除去固体，用乙酸乙酯(20ml×2)萃取，将萃取物用水、饱和碳酸氢钠溶液和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并减压浓缩，将残余物通过柱色谱纯化(40-50％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物(170mg，收率74％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.52&8.37(两个br s，1H)，7.28-7.20(m，3H)，7.11(t，2H)，6.77(两个d，1H)，5.92(m，1H)，5.26-4.93(m，2H)，4.79(m，1H)，4.18-4.05(m，2H)，3.75(m，1H)，3.08-2.98(m，2H)，2.93-2.66(m，2H)，2.25&2.24(两个s，3H)，2.28-2.06(m，2H)，1.42&1.39(两个s，9H)，0.87(m，3H)。
实施例3)
5-氟-3-[2-(4-甲基-2-氧代-1-苯乙基-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-4-氧代-戊酸
Figure A20078004391500291
将制备例3-3)的化合物(165mg，0.339mmo l)溶解于二氯甲烷(4ml)，在0℃向其中加入三氟乙酸(2ml)，将反应混合物搅拌1小时，同时缓慢回温到室温，并减压浓缩，将残余物通过柱色谱纯化(80％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物(135mg，收率92％，白色粉末)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.31(br s，1H)，7.85-7.75(dd，1H)，7.31(m，1H)，7.24(m，2H)，7.18-7.14(m，3H)，6.02(t，1H)，5.40-4.97(m，2H)，4.58-4.42(m，1H)，4.07(m，1H)，3.98(m，1H)，3.48(m，1H)，2.87(m，2H)，2.72(m，1H)，2.43(m，1H)，2.11(m，3H)，2.01-1.73(m，2H)，0.69(m，3H)。
制备例4-1)
(1-异丁基-4-甲基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-乙酸甲酯
向制备例1-5)的化合物(362mg，2.0mmol)和Cs2CO3(977mg，1.5eq)的混合物中加入DMF(6ml)和异丁基溴(0.28ml，1.3eq)，将混合物在60℃在氮气下搅拌1天，反应混合物经减压浓缩，残余物用乙酸乙酯(100ml)萃取两次。萃取物用饱和碳酸氢钠溶液(NaHCO3，100ml×2)和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并减压浓缩，将残余物通过柱色谱纯化(30-50％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物(224mg，收率47％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.04(d，1H)，6.00(d，1H)，3.69(d，2H)，3.68(s，3H)，3.63(s，2H)，2.16(s，3H)，0.91(d，6H)。
制备例4-2)
2-(1-异丁基-4-甲基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酸甲酯
在氮气下将制备例4-1)的化合物(217mg，0.916mmol)溶解于无水THF(10ml)，向其中加入1.0M LiHMDS/THF(1.10ml，1.2eq)并搅拌10分钟，同时保持该反应混合物在-78℃。然后加入碘乙烷(0.11ml，1.5eq)并搅拌2小时，期间将混合物缓慢回温到室温，加入饱和乙酸铵溶液使反应停止，反应混合物用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，用氯化钠水溶液(100ml)洗涤，干燥(无水Na2SO4)，减压浓缩，并通过柱色谱纯化(30-40％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物(180mg，收率74％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.01(d，1H)，5.96(d，1H)，3.72-3.66(m，3H)，3.63(s，3H)，2.21(m，1H)，2.17(s，3H)，2.12(m，1H)，1.84(m，1H)，0.90-0.84(m，9H)。
制备例4-3)
5-氟-3-[2-(1-异丁基-4-甲基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-4-氧代-戊酸叔丁基酯
将制备例4-2)的化合物(180mg，0.679mmol)根据与制备例3-3)相同的步骤反应，得到标题化合物(149mg，收率50％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.49&8.44(两个br s，1H)，7.07(m，1H)，6.06(m，1H)，5.28-4.88(m，2H)，4.76(m，1H)，3.72(m，3H)，2.89-2.62(m，2H)，2.27(m，3H)，2.26-2.06(m，3H)，1.42&1.38(两个s，9H)，0.90(m，6H)，0.87(m，3H)。
实施例4)
5-氟-3-[2-(1-异丁基-4-甲基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-4-氧代-戊酸
Figure A20078004391500311
将制备例4-3)的化合物(143mg，0.326mmol)溶解于二氯甲烷(4ml)，在0℃向其中加入三氟乙酸(2ml)，将反应混合物搅拌1小时，同时缓慢回温到室温，并减压浓缩，将残余物通过柱色谱纯化(80％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物(121mg，收率97％，白色粉末)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.27(br s，1H)，7.81-7.72(dd，1H)，7.43(m，1H)，6.08(m，1H)，5.33-4.91&4.65-4.28(m，3H)，3.71(m，1H)，3.54-3.46(m，2H)，2.70(m，1H)，2.40(m，1H)，2.12(s，3H)，1.99-1.71(m，2H)，0.78(s，6H)，0.67(s，3H)。
制备例5-1)
(2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-乙酸甲酯
将通过J.Amer.Chem.Soc.1959，81，p740中的已知方法获得的(2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-乙酸(1.51g，9.85mmol)溶解于MeOH(20ml)，向其中加入浓HCl，将混合物回流1小时，再将反应混合物减压蒸馏，得到1.65g的标题化合物，为化学计量的收率。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ12.86(br s，1H)，7.42(d，1H)，7.32(dd，1H)，6.26(t，1H)，3.71(s，3H)，3.56(s，2H)。
制备例5-2)
(1-苄基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-乙酸甲酯
向制备例5-1)的化合物(303mg，1.81mmol)和Cs2CO3(900mg，1.5eq)的混合物中加入DMF(4ml)和苄基溴(0.28ml，1.3eq)，将混合物在60℃在氮气下搅拌1天，将反应混合物减压浓缩，残余物用乙酸乙酯(100ml)萃取两次。萃取物用饱和碳酸氢钠溶液(NaHCO3，100ml×2)和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并减压浓缩，将残余物通过柱色谱纯化(30-50％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物(360mg，收率77％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.35-7.25(m，6H)，7.22(d，1H)，6.13(t，1H)，5.14(s，2H)，3.71(s，3H)，3.57(s，2H)。
制备例5-3)
2-(1-苄基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酸甲酯
在氮气下将制备例5-2)的化合物(80mg，0.311mmol)溶解于无水THF(4ml)，向其中加入1.0M LiHMDS/THF(0.40ml，1.2eq)并搅拌10分钟，同时反应混合物被保持在-78℃，然后加入碘乙烷(0.04ml，1.5eq)并搅拌2小时，期间将混合物缓慢回温到室温，加入饱和乙酸铵溶液使反应停止，反应混合物用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，用氯化钠水溶液(100ml)洗涤，干燥(无水Na2SO4)，减压浓缩，并通过柱色谱纯化(30-40％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物(33mg，收率37％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.45-7.22(m，6H)，7.15(m，1H)，6.14(t，1H)，5.21-5.07(ABq，2H)，3.90(t，1H)，3.68(s，3H)，2.00-1.76(m，2H)，0.94(t，3H)。
制备例5-4)
3-[2-(1-苄基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁基酯
将制备例5-3)的化合物(33mg，0.116mmol)根据与制备例3-3)的相同操作反应，得到标题化合物(42mg，收率79％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.89&7.82(两个br  d，1H)，7.35-7.22(m，7H)，6.24(m，1H)，5.28-4.65(m，5H)，3.75(m，1H)，2.91-2.58(m，2H)，2.18(m，1H)，1.72(m，1H)，1.41&1.39(两个s，9H)，0.94(m，3H)。
实施例5)
3-[2-(1-苄基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸
Figure A20078004391500331
将制备例5-4)的化合物(42mg，0.092mmol)溶解于二氯甲烷(4ml)，在0℃向其中加三氟乙酸(2ml)，将反应混合物搅拌1小时，同时缓慢回温到室温，并减压浓缩，将残余物通过制备型色谱纯化(10％甲醇/二氯甲烷)，得到标题化合物(30mg，收率81％，白色粉末)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.40(br s，1H)，8.48(br s，1H)，7.69(m，1H)，7.34(m，1H)，7.28-7.23(m，5H)，6.23(m，1H)，5.30-4.76(m，2H)，5.08(m，2H)，4.56-4.45(m，1H)，3.57(m，1H)，2.62-2.32(m，2H)，1.72-1.56(m，2H)，0.80(m，3H)。
制备例6-1)
2-(1-苄基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-3-甲基-丁酸甲酯
在氮气下将制备例5-2)(174mg，0.676mmo l)的化合物溶解于无水THF(10ml)，向其中加入1.0M LiHMDS/THF(1.00ml，1.5eq)并搅拌10分钟，同时反应混合物被保持在-78℃，然后加入2-碘丙烷(0.12ml，1.8eq)并搅拌0.5小时，期间将混合物缓慢回温到-50℃，再回温到0℃保持1.5小时，加入饱和乙酸铵溶液使反应停止，反应混合物用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，用氯化钠水溶液(100ml)洗涤，干燥(无水Na2SO4)，减压浓缩，并通过柱色谱纯化(25-30％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物(95mg，收率47％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.50(d，1H)，7.35-7.25(m，5H)，7.17(d，1H)，6.15(t，1H)，5.20-5.09(ABq，2H)，3.96(d，1H)，3.65(s，3H)，2.22(m，1H)，1.02(d，3H)，0.84(d，3H)。
制备例6-2)
3-[2-(1-苄基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-3-甲基-丁酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁基酯
将制备例6-1)的化合物(95mg，0.317mmol)根据与制备例3-3)相同的过程反应，得到标题化合物(14mg，收率97％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.94&7.81(两个br s，1H)，7.38-7.25(m，7H)，6.23(m，1H)，5.24-4.66(m，5H)，3.40(两个d，1H)，2.86-2.58(m，H)，2.55(m，1H)，1.41&1.40(两个s，9H)，1.04(两个d，3H)，0.78(d，3H)。
实施例6)
3-[2-(1-苄基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-3-甲基-丁酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸
Figure A20078004391500341
将制备例6-2)(132mg，0.279mmol)的化合物溶解于二氯甲烷(4ml)，在0℃向其中加入三氟乙酸(2ml)，将反应混合物搅拌1小时，同时缓慢回温到室温，并减压浓缩，将残余物通过柱色谱纯化(60％乙酸乙酯/己烷，和10％甲醇/二氯甲烷)，得到标题化合物(94mg，收率81％，白色粉末)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.40(br s，1H)，8.63-8.52(dd，1H)，7.66(m，1H)，7.49(m，1H)，7.27-7.21(m，5H)，6.23(m，1H)，5.21-4.86(m，4H)，4.59-4.43(m，1H)，3.54(m，1H)，2.72-2.41(m，2H)，2.10(m，1H)，0.88(m，3H)，0.69(m，3H)。
制备例7-1)
2-(1-苄基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-戊酸甲酯
在氮气下将制备例5-2)的化合物(183mg，0.711mmol)溶解于无水THF(10ml)，向其中加入1.0M LiHMDS/THF(0.92ml，1.3eq)并搅拌10分钟，同时反应混合物被保持在-78℃，然后加入碘代正丙烷(0.10ml，1.5eq)并搅拌2小时，期间将混合物缓慢回温到室温，加入饱和乙酸铵溶液使反应停止，反应混合物用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，用氯化钠水溶液(100ml)洗涤，干燥(无水Na2SO4)，减压浓缩，并通过柱色谱纯化(30％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物(133mg，收率62％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.36-7.27(m，6H)，7.18(dd，1H)，6.14(t，1H)，5.21-5.08(ABq，2H)，3.99(t，1H)，3.67(s，3H)，1.94(m，1H)，1.73(m，1H)，1.35(m，2H)，0.92(t，3H)。
制备例7-2)
3-[2-(1-苄基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-戊酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁基酯
将制备例7-1)的化合物(130mg，0.434mmol)根据与制备例3-3)相同的步骤反应，得到标题化合物(110mg，收率54％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.88&7.82(两个d，1H)，7.34-7.24(m，7H)，6.23(m，1H)，5.24-4.64(m，5H)，3.84(m，1H)，2.89-2.56(m，2H)，2.13(m，1H)，1.64(m，1H)，1.41&1.38(两个s，9H)，0.92(m，3H)。
实施例7)
3-[2-(1-苄基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基)-戊酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸
Figure A20078004391500351
将制备例7-2)的化合物(110mg，0.233mmol)溶解于二氯甲烷(4ml)，在0℃向其中加入三氟乙酸(2ml)，将反应混合物搅拌1小时，同时缓慢回温到室温，并减压浓缩，将残余物通过柱色谱纯化(10％甲醇/二氯甲烷)，得到标题化合物(58mg，收率60％，白色粉末)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.44(br s，1H)，7.68(m，1H)，7.35(m，1H)，7.30-7.23(m，5H)，6.23(q，1H)，5.22-4.66(m，2H)，5.12-5.03(m，2H)，4.55-4.45(m，1H)，3.67(m，1H)，2.62(m，2H)，1.71-1.50(m，2H)，1.20(m，2H)，0.82(m，3H)。
制备例8-1)
1-溴甲基-2-叔丁基-苯
向1-叔丁基-2-甲基-苯(940mg，6.34mmol)、NBS(1.24g，1.1eq)和AIBN(20mg，催化量)中加入CCl4(12ml)，将混合物回流1小时，通过过滤除去混悬的粒子，用CCl4洗涤，合并的有机层经减压浓缩，得到1.5g的黄色液体，为化学计量的收率。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.46(m，1H)，7.38(m，1H)，7.22-7.21(m，2H)，4.83(s，2H)，1.46(s，9H)。
制备例8-2)
[1-(2-叔丁基-苄基)-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基]-乙酸甲酯
向制备例5-1)的化合物(177mg，0.598mmol)和Cs2CO3(292mg，1.5eq)的混合物中加入DMF(6ml)和在制备例8-1)中获得的1-溴甲基-2-叔丁基-苯(177mg，1.3eq)，将混合物在60℃在氮气下搅拌3小时，将反应混合物减压浓缩，残余物用乙酸乙酯(100ml)萃取两次。萃取物用饱和碳酸氢钠溶液(NaHCO3，100ml×2)和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并减压浓缩，将残余物通过柱色谱纯化(15-50％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物(122mg，收率65％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.46(d，1H)，7.33(d，1H)，7.25(t，1H)，7.16(t，1H)，6.97(d，1H)，6.90(d，1H)，6.11(t，1H)，5.42(s，2H)，3.73(s，3H)，3.61(s，2H)，1，43(s，9H)。
制备例8-3)
2-[1-(2-叔丁基-苄基)-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基]-丁酸甲酯
在氮气下将制备例8-2)的化合物(120mg，0.383mmol)溶解于无水THF(10ml)，向其中加入1.0M Li HMDS/THF(0.50ml，1.2eq)并搅拌10分钟，同时反应混合物被保持在-78℃，然后加入碘乙烷(0.05ml，1.5eq)并搅拌2小时，期间将混合物缓慢回温到室温，加入饱和乙酸铵溶液使反应停止，反应混合物用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，用氯化钠水溶液(100ml)洗涤，干燥(无水Na2SO4)，减压浓缩，并通过柱色谱纯化(25-30％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物(50mg，收率38％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.46(d，1H)，7.36(d，1H)，7.25(t，1H)，7.16(t，1H)，6.93(d，1H)，6.88(d，1H)，6.12(t，1H)，5.48-5.34(ABq，2H)，3.95(t，1H)，3.63(s，3H)，2.00(m，1H)，1.83(m，1H)，1，42(s，9H)，0.95(t，3H)。
制备例8-4)
3-{2-[1-(2-叔丁基-苄基)-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基]-丁酰氨基}-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁基酯
将制备例8-3)的化合物(50mg，0.146mmol)根据与制备例3-3)相同的步骤反应，得到标题化合物(56mg，收率76％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ7.89&7.80(两个d，1H)，7.47(d，1H)，7.37(m，1H)，7.25(t，1H)，7.16(m，1H)，7.01(t，1H)，6.82(两个d，1H)，6.22(m，1H)，5.48-5.36(m，2H)，5.24-4.68(m，3H)，3.77(m，1H)，2.92-2.60(m，2H)，2.18(m，1H)，1.74(m，1H)，1，43(两个s，9H)，1.41&1.37(两个s，9H)，0.95(m，3H)。
实施例8)
3-{2-[1-(2-叔丁基-苄基)-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基]-丁酰氨基}-5-氟-4-氧代-戊酸
Figure A20078004391500381
将制备例8-4)的化合物(56mg，0.110mmol)溶解于二氯甲烷(2ml)，在0℃向其中加入三氟乙酸(1ml)，将反应混合物搅拌1小时，同时缓慢回温到室温，并减压浓缩，将残余物通过制备型色谱(10％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到标题化合物(40mg，收率80％，白色粉末)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.42(br s，1H)，7.52(m，1H)，7.43(t，1H)，7.37(d，1H)，7.15(t，1H)，7.07(m，1H)，6.56(d，1H)，6.29(m，1H)，5.33(m，2H)，5.22-4.66(m，2H)，4.56-4.45(m，1H)，3.57(m，1H)，2.61-2.46(m，2H)，1.75-1.56(m，2H)，1.40(s，9H)，0.79(m，3H)。
试验例1
半胱天冬酶抑制效果的试验
通过改进Thornberry，N.A.等人，Nature，1992，356，768；Thornberry，N.A.Methods in Enzymology，1994，244，615；Walker，N.P.C.等人，Cell，1994，78，343中的已知方法来表达、纯化和活化了已知作为α2β2形式的半胱氨酸蛋白酶的半胱天冬酶-1和半胱天冬酶-8，还通过类似方法纯化了半胱天冬酶-9，并检测了对它们的抑制活性。简而言之，将p10和p20亚单位(Thornberry，N.A.等人，Nature，1992，356，768)在大肠杆菌(E.coli)中表达并通过镍柱和阴离子交换色谱法纯化，得到半胱天冬酶-1、半胱天冬酶-8和半胱天冬酶-9。对于如此获得的半胱天冬酶-1使用荧光底物AcYVAD-AFC，对于如此获得的半胱天冬酶-8使用荧光底物AcDEVD-AFC，对于如此获得的半胱天冬酶-9使用荧光底物AcLEHD-AFC，用来测定所合成的抑制剂的比活度。酶反应在25℃下与各种浓度的抑制剂在包含50mM HEPES(pH7.50)、10％(w/v)蔗糖、0.1％(w/v)CHAPS、100mM NaCl、1mM EDTA和10mM DTT的缓冲溶液中进行，并且该反应对于10nM半胱天冬酶-1在50μM AcYVAD-AFC存在的条件下，对于2.1nM半胱天冬酶-8在50μMAcDEVD-AFC存在的条件下，以及对于200nM半胱天冬酶-9在150μMAcLEHD-AFC存在的条件下进行。抑制剂的抑制常数Ki和Kobs通过采用荧光光度计测量随时间推移的反应速率并通过获得初始速率常数来进行测定。Ki从Lineweaver Burk曲线计算，Kobs从以下公式1计算。
[公式1]
Kobs＝-1n(1-At/Aoo)/t
其中
At表示在时间t的裂解(cleavage)速率(％)，
Aoo表示最大裂解速率(％)。
在405nm的激发波长和505nm的发射波长处使用MolecularDevice公司制的Spectra MAX GeminiXS荧光光度计进行测定。
抑制剂的体内抑制活性如下测定：采用Fa s抗体(UpstateBiotech 05-201)诱导Jurkat细胞(ATCC TIB-152)凋亡，当使用抑制剂处理该Jurkat细胞时，根据Francoeur A.M.和Assalian A.(1996)Biochemica 3，19-25中已知的WST-1方法检测颜色改变，来观察存活的Jurkat细胞数量。在440nm的吸收波长处采用MolecularDevice公司制的Spectra MAX 340光谱仪进行测定。
[表1]
实施例编号   半胱天冬酶-8Kobs/[I](M-1min-1)   Jurkat细胞IC50(μM)
  1   2.8E4   4.90
  2   1.1E5   2.43
  3   4.5E4
  4   4.4E4   0.39
  5   1.0E6   0.81
  6   2.1E5   2.16
  7   4.0E5   0.64
  8   2.0E6   0.18
试验例2
在小鼠中对由Fas抗体诱导的肝损伤的治疗效果
步骤1)血样的制备
将雄性Balb/c小鼠(6周龄，Charles River Laboratory，Osaka，日本)保持在22℃、55％的相对湿度和12小时光照-黑暗循环的条件下。随意供给食物和水。在无热原的磷酸盐缓冲液中溶解Fas抗体(Jo2；BDpharmingen，San Diego，California)，然后将其以0.15mg/kg的量通过尾静脉注射到每只小鼠中。在注射Fas抗体后，立刻给小鼠口服其中溶解有供试化合物的载体(将PEG400∶乙醇＝2∶1的混合物用磷酸盐缓冲液稀释20倍)或单独的载体，在给药6小时后，从这些小鼠的心脏获得血样。
步骤2：血浆转氨酶的活性的试验
使用ALT测试盒(Asan Pharm.Co.，Seoul，韩国)根据厂商说明书测定在步骤1中获得的血样的血浆ALT活性。结果显示注射Fas抗体显著增加了血浆的ALT活性，并且供试化合物以剂量依赖性方式抑制了增加的酶活性。基于这些结果，采用GraphPad公司的Prism软件计算了供试化合物的ED50值，为0.001-10mg/kg。
产业实用性
以上的试验结果表明，本发明的式(1)的化合物对半胱天冬酶具有优异的抑制活性，特别是在由Fas抗体诱导的肝损伤的动物模型中表现出治疗效果。因此，式(1)的化合物可有利地被用来治疗各种由半胱天冬酶介导的疾病和症状。

Claims (14)

1.式(1)的化合物或其药学可接受的盐：
[式1]
Figure A2007800439150002C1
其中
I)R1表示H，C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基，芳基，或所有的天然氨基酸的侧链残基，
II)R2表示H，C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基，芳基，或所有的天然氨基酸的侧链残基，
III)R3表示H，C1-C5-烷基，羟基，C1-C5-烷氧基或卤素，
IV)R4表示H，C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基或芳基，
V)R5表示H，C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基或芳基，
VI)R6表示H，C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基或芳基，
VII)R7和R8彼此独立地表示H，C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基或芳基，
VIII)X表示-CH2OR9(R9是C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基或芳基)，-CH2OC(＝O)R10(R10是C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基或芳基)或-CH2-W(W是卤素)。
2.权利要求1的化合物或其药学可接受的盐，其中R6表示未被取代的或被C3-C10-环烷基或芳基取代的C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基或芳基各自是取代或未被取代的；或者表示取代或未被取代的芳基。
3.权利要求2的化合物或其药学可接受的盐，其中R6表示未被取代的或被C3-C10-环烷基或芳基取代的C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基或芳基是未被取代的或被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C5-烷基、羟基、C1-C5-烷氧基和卤素；或者表示芳基，其是未被取代的或被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C5-烷基、羟基、C1-C5-烷氧基和卤素。
4.权利要求1的化合物或其药学可接受的盐，其中
I)R1表示所有的天然氨基酸的侧链残基，
II)R2表示C1-C5-烷基，
III)R3表示H、C1-C5-烷基、C1-C5-烷氧基或卤素，
IV)R4表示H，
V)R5表示H，
VI)R6表示未被取代的或被C3-C10-环烷基或芳基取代的C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基或芳基各自是未被取代的或被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C5-烷基、羟基、C1-C5-烷氧基和卤素；或者表示芳基，其是未被取代的或被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C5-烷基、羟基、C1-C5-烷氧基和卤素，
VII)R7和R8彼此独立地表示H，
VIII)X表示-CH2OR9(R9是C1-C5-烷基、C3-C10-环烷基或芳基)、-CH2OC(＝O)R10(R10是C1-C5-烷基、C3-C10-环烷基或芳基)或-CH2-W(W是卤素)。
5.权利要求1的化合物或其药学可接受的盐，其中
I)R1表示-CH2COOH，
II)R2表示C1-C5-烷基，
III)R3表示H、C1-C5-烷基、C1-C5-烷氧基或卤素，
IV)R4表示H，
V)R5表示H，
VI)R6表示未被取代的或被C3-C10-环烷基或芳基取代的C1-C5-烷基，C3-C10-环烷基或芳基各自是未被取代的或被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C5-烷基、羟基、C1-C5-烷氧基和卤素；或者表示芳基，其是未被取代的或被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C5-烷基、羟基、C1-C5-烷氧基和卤素，
VII)R7和R8彼此独立地表示H，
VIII)X表示-CH2O-(2，3，5，6-四氟苯基)、-CH2O-(2，6-二氯苯甲酰基)或-CH2-F。
6.3-{2-[1-(2-叔丁基-苄基)-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基]-丁酰氨基}-5-氟-4-氧代-戊酸。
7.用于抑制半胱天冬酶的药物组合物，其包括权利要求1-6中任一项的化合物或其药学可接受的盐作为活性成分以及药学可接受的载体。
8.权利要求7的组合物，用于预防炎症和细胞凋亡。
9.权利要求7的组合物，用于治疗或预防痴呆、脑中风、由AIDS引起的脑损伤、糖尿病、胃溃疡、由肝炎引起的脑损伤、肝炎诱导的肝脏疾病、急性肝炎、暴发性肝衰竭、脓毒病、器官移植排斥、风湿性关节炎、由缺血性心脏病导致的心脏细胞凋亡、或肝硬化。
10.权利要求7的组合物，用于治疗急性肝炎或肝硬化。
11.权利要求7的组合物，用于治疗风湿性关节炎。
12.权利要求1-6中任一项的化合物或其药学可接受的盐用于抑制半胱天冬酶的用途。
13.预防患者的炎症和细胞凋亡的方法，该方法包括对患者给予治疗有效量的权利要求1-6中任一项的化合物或其药学可接受的盐。
14.治疗或预防患者的以下疾病的方法：痴呆、脑中风、由AIDS引起的脑损伤、糖尿病、胃溃疡、由肝炎引起的脑损伤、肝炎诱导的肝脏疾病、急性肝炎、暴发性肝衰竭、脓毒病、器官移植排斥、风湿性关节炎、由缺血性心脏病导致的心脏细胞凋亡、或肝硬化，该方法包括对患者给予治疗有效量的权利要求1-6中任一项的化合物或其药学可接受的盐。
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