发明内容:
本发明的目的在于提供酱科缬草属药用植物欧缬草(Valerianaofficinalis Linn.)的种子繁殖和种植方法。该方法从欧洲(德国)引进欧缬草种子,成功地选择实验地进行播种试验、育苗试验、苗期管理、移苗试验等,最后进行大田规模化栽培。本发明人工繁殖的欧缬草可用于制备改善睡眠保健食品和药物。
为了实现本发明的上述目的,本发明提供了如下的技术方案:
欧缬草的种子繁殖方法,包括取欧缬草种子,选择实验地进行播种、育苗、移苗、苗期管理、栽培步骤。
播种实验地选择土壤为石灰岩发育而成的山地红壤,PH值6-6.8,呈弱酸性。
播种时间选在10月初。
播种基质选择容积比为腐叶土(腐熟)∶猪粪(腐熟)∶生红壤=8∶1∶1,充分拌匀,筛制后用塑料膜覆盖以保持水分。
播种优选33×25×8cm塑料筐进行播种:首先在筐底垫1-2cm透水层,放入播种基质后用边缘直的木板沿筐缘扒平,越平越好,但不能压;在表面用激光打孔的细喷头喷一点水后,放入水盆或缸中,让水将筐中基质浸透后慢慢提取出筐,渗水后基质表面下沉1-2cm,每筐播种500粒左右,盖土厚度1-2mm,最后用塑料膜覆盖以保持水分和温度;4天后,当种子萌发出土时,要及时揭开塑料膜;若生产数量极大时,可用苗床进行播种,苗床宽1.2m,播种基质面用边缘直的狭木板扒平,均匀撒播完种子后,可用木板轻轻镇压种子,盖土1mm后用松针等物覆盖,最后用细喷头浇透水;幼苗出土达60%,分2-3次揭去覆盖物。
幼苗移植是当幼苗出土1月,长出真叶后,移植到6.5×6.5cm塑料苗杯中,每平方米可培育300杯苗,基质与播种用的相同;移苗当晴天时选在早上进行;苗栽好浇透水后上面要遮去70%左右直射光,一周后逐渐揭去遮阳网。
苗期管理是当苗刚出,浇水时出水要细要柔,千万不能冲着幼苗,浇水要浇透,忌天天浇水;有时会发生地下害虫危害,可用低毒易分解的杀地下害虫药防治。
栽培试验地选择在石灰岩发育成的以往种植玉米的熟土山地,深挖30cm打细后,整理成高床;苗杯定植株行距为30×40cm,采用穴植,底施用基肥为腐熟的农家肥,同时掺入普通过磷酸钙;用量为农家肥2吨/亩,普钙20公斤/亩,肥与土充分混合后即可脱去苗杯,将苗种植于穴中央;苗定植后,2-3天浇一次水,进入雨季后注意排水防涝,并根据天气情况补水;种植2个月时追一次尿素,用量为每亩4公斤;再过1个月施一次复合肥(N∶P∶K=15∶15∶15),用量每亩8公斤;再过1个月追施一次硫酸钾,用量每亩8公斤;进入雨季后,杂草萌发与生长较快,应及时铲除,同时翻松土壤,2-3周进行一次除草工作;当植株进入休眠后,进行采收。
本发明还提供了一种改善睡眠的药物,以上述种子繁殖和种植的欧缬草的提取物为原料,加入可接受的药用载体制备而得。
改善睡眠的保健品,以上述种子繁殖和种植的欧缬草的提取物为原料,加入可接受的药用载体制备而得。
具体实施方式:
下面的实施例可以使本专业人员更全面地理解本发明,但不以任何方式限制本发明。
实施例1:
欧缬草的种子繁殖和种植方法:
一、育苗试验:
试验地选在土壤为石灰岩发育而成的山地红壤,PH值6-6.8,呈弱酸性。试验材料欧缬草(Valeriana officnalis L.)种子(共计254粒,2005年7月由德国引入)分成两批,分别在2005年8月3日和9月22日在温室进行播种与幼苗培育试验。2006年1月开始,对欧缬草繁殖生物学特性进行观察与研究,并用采集到的种子进行播种时间(6-10月)、播种基质、幼苗移植等试验。2007年3月20日开始用3380杯容器苗进行田间试验:株行距、追肥、采收时间、产量等。
种植在露地的植株11月下旬开始休眠,到12月中旬完全进入休眠期,翌年3月中旬开始萌发进入生长期,1年生以上的采种母株4月底开始显花,7月初仍然有少数开花;采种期为5-8月。在温室中培养的植株,冬季不休眠,生长良好,3月底就开花。
欧缬草开花期与种子成熟期参差不齐,花期4-7月,果期5-8月,同一植株种子成熟亦如此。当扁平、长卵形的瘦果由绿变为黄褐色而且顶端缩萼形成的羽毛状冠毛张开如伞时种子成熟,瘦果变为深褐色时,由于种子长仅2-3毫米,冠毛12条左右,长6毫米,只要微风一吹,种子就随风飘落;因而,在种子成熟期每天都要进行采种工作,这样,才能采集到大量种子,以进行规模化生产。栽培欧缬草植株标本经研究专家陈虎彪教授鉴定无误。
具体操作如下:
德国引进的种子2005年8月3日播96粒种子,5天后开始出苗,成苗20株,育苗成苗率20.8%;8月25日播148粒种子,成苗52株,成苗率35.1%。2006年5月开始采集种子,并进行苗期试验,试验步骤和结果为:
1、最佳播种时间:用上述采集的种子的最佳播种时间是在10月初,幼苗在温室中培育以度过冬季,翌年3月底,即可用容器苗在田地种植,年底植株休眠后即可采收其根,形成商品。这样,可及时提供合格壮苗进行定植,缩短从苗到商品的培育时间,降低管理成本,提高农户的经济效益。
2、发芽试验:用上述德国引进的培育母株采集的种子进行发芽试验,均采用三次重复,结果为:种子干粒重为0.467g;发芽率为83%;发芽势为82%。发芽率和发芽势极为接近说明该批种子质量较好,出苗整齐。
3、播种的技术与方法:欧缬草的种粒较小,因而播种基质要细,管理要精细。通过种子播种试验得到结论是:好的播种基质是容积比为——腐叶土(腐熟)∶猪粪(腐熟)∶生红壤=8∶1∶1,方法是:播种基质充分拌均匀,筛制后用塑料膜覆盖以保持水分。成苗率最高的是用33×25×8cm塑料筐进行播种:首先在筐底垫1-2cm透水层,放入播种基质后用边缘直的木板沿筐缘扒平,越平越好,但不能压;在表面用激光打孔的细喷头喷一点水后,放入水盆(缸)中,让水将筐中基质浸透后慢慢提取出筐,渗水后基质表面下沉1-2cm,每筐播种500粒左右,盖土厚度1-2mm,最后用塑料膜覆盖以保持水分和温度;4天后,当种子萌发出土时,要及时揭开塑料膜。若生产数量极大时,可用苗床进行播种,苗床宽1.2m,播种基质面用边缘直的狭木板扒平,均匀撒播完种子后,可用木板轻轻镇压种子,盖土1mm后用松针等物覆盖,最后用细喷头浇透水。幼苗出土达60%分2-3次揭去覆盖物。
4、幼苗移植:步骤3长出的幼苗出土1月左右,长出真叶后,移植到6.5×6.5cm塑料苗杯中,每平方米可培育300杯苗,基质与播种用的相同;移苗工作晴天只能在早上进行;苗栽好浇透水后上面要遮去70%左右直射光,一周后逐渐揭去遮阳网。
5、苗期管理:欧缬草幼苗期要精细管理,苗刚出,浇水时出水要细要柔,千万不能冲着幼苗,否则会引起幼苗死亡,浇水要浇透,忌天天浇水;有时会发生地下害虫危害,可用低毒易分解的杀地下害虫药防治,苗期很少发生病害。
二、规模化栽培试验
1、试验地选择:试验地选在石灰岩发育成的山地,以往种植玉米的熟土。深挖30cm打细后,整理成高床。欧缬草分布广,虽对土壤要求不严,但在排水良好、肥沃的壤土上生长势好。
2、定植:2007年3月20日-4月1日在试验地种植3380株步骤一中第4步骤所培育的塑料苗杯中的杯苗(连苗杯一起)定植;定植株行距为30×40cm,采用穴植,底施用基肥为腐熟的农家肥,同时掺入普通过磷酸钙。用量为农家肥2吨/亩,普钙20公斤/亩。肥与土充分混合后即可脱去苗杯,将苗种植于穴中央。
3、水肥管理:3-5月为云南的旱季,苗定植后,2-3天要浇一次水,进入雨季后注意排水防涝,并根据天气情况补水。5月份,种植的苗已进入快速生长期,追一次尿素,用量为每亩4公斤;6月份施一次复合肥(N∶P∶K=15∶15∶15),用量每亩8公斤;7月追施一次硫酸钾,用量每亩8公斤。
4、中耕除草:进入雨季后,杂草萌发与生长较快,应及时铲除,同时翻松土壤,利于植物根系生长。除草工作要做到除早除了,一般情况下2-3周进行一次除草工作。
5、产品采收:11月底-翌年2月,当植株进入休眠后,进行采收。2008年01月5-15日对07年3月份种植的2900株进行采挖,结果为:共采收到须根201.6公斤,折算亩产干根80-100公斤。
制剂实施例:
按实施例1的方法种子繁殖获得欧缬草根原料,进行提取(95%乙醇室温浸提,采用40升95%乙醇浸提5公斤欧缬草3次,得到1公斤乙醇提取物)或粉碎得到提取物或欧缬草根粉,按常规制成改善睡眠药效的片剂或胶囊。
[制剂实施例1]提取物为活性成分制作片剂:
按照本领域已知的方法制备片剂,每片含有下述成分:
欧缬草提取物 90mg
乳糖 100mg
硬脂酸镁 3mg
聚乙烯吡咯烷酮 7mg
合计 200mg
如果需要,片剂可用羟丙基甲基纤维素、滑石和着色剂进行膜包覆。
[制剂实施例2]提取物为活性成分制作胶囊:
按照本领域已知的方法制备胶囊剂,每个胶囊中含有下述成分:
欧缬草提取物 90mg
乳糖 80mg
玉米淀粉 25mg
硬脂酸镁 1mg
聚乙烯吡咯烷酮 4mg
合计 200mg
[制剂实施例3]原料胶囊的制作:
按照本领域已知的方法制备胶囊剂,每个胶囊中含有欧缬草根粉400mg。
试验例:
试验例可进一步说明本发明所述欧缬草的有益效果,这些试验例为本发明的药效学试验,即欧缬草改善睡眠的药理实验。
实验方法:
按实施例1的方法获得欧缬草根原料,经粉碎后过80目筛的生药粉于乳钵中加入0.5%CMC-Na研磨后配制成相应浓度的混悬液供动物灌胃用。实验动物为SPF级ICR小鼠,3~4周龄,雌雄各半,体重18~22g,由昆明医学院实验动物中心提供,生产许可证:SCXK(滇)2005-0008。IVC动物实验室。
采用中药药理实验方法学中的阈下剂量戊巴比妥钠协同催眠试验、阈剂量戊巴比妥钠睡眠时间测定试验的方法(这些方法见[1]李仪奎等.中药药理实验方法学.上海科学技术出版社,1991:330;[2]李仪奎等.中药药理实验方法学.上海科学技术出版社,1991:334和[3]陈奇等.中药药理研究方法学.1993:113~114中的描述)进行试验,均采用多次灌胃和单次腹腔注射两种给药方式。实验设置溶媒对照,以安定片为阳性对照。
实验结果:
1、对戊巴比妥钠阈下催眠剂量小鼠入睡率的影响:
取18~22g小鼠80只,按体重和性别随机分成8组:溶媒对照;阳性对照安定片;欧缬草根粉样品500、250、125mg/kg(多次给药为1.0、0.5、0.25g/kg);每组10只,雌雄各半。各组动物分别按剂量灌胃给药一次(多次给药试验除阳性对照组仅于试验当天给药一次外,其余各组动物每日按剂量灌胃给药一次,连续3天),空白对照组给予20ml/kg的0.5%CMC-Na,45min后(多次给药试验为末次给药后45min)各组小鼠腹腔注射戊巴比妥钠30mg/kg,记录15分钟内翻正反射消失达一分钟以上的动物数为入睡指标,用X2检验比较各给药组与对照组的差异。结果见表1和2。
表1单次给药对戊巴比妥钠阈下催眠剂量小鼠入睡率的影响(试验一)
与对照组相比:**P<0.01
实验结果表明:2.0mg/kg的安定灌胃给药一次,能明显提高阈下剂量戊巴比妥钠小鼠的入睡率;欧缬草单次给药对阈下剂量戊巴比妥钠有协同催眠趋势,与溶媒对照组相比无显著差异。
表2多次给药对戊巴比妥钠阈下催眠剂量小鼠入睡率的影响(试验二)
与对照组相比:*P<0.05,**P<0.01
实验结果表明:2.0mg/kg的安定灌胃给药一次、低剂量连续给药3天,能明显提高阈下剂量戊巴比妥钠小鼠的入睡率;欧缬草多次给药能明显提高阈下剂量戊巴比妥钠小鼠的入睡率,0.25g/kg剂量达到显著水平。
2、对阈剂量巴比妥钠小鼠睡眠时间的影响:
取18~22g小鼠80只,按体重和性别随机分成8组:溶媒对照;阳性对照安定片;欧缬草样品500、250、125mg/kg(多次给药为1.0、0.5、0.25g/kg);每组10只,雌雄各半。各组动物分别按剂量灌胃给药一次(多次给药试验除阳性对照组仅于试验当天给药一次外,其余各组动物每日按剂量灌胃给药一次,连续3天),空白对照组给予20ml/kg的0.5%CMC-Na,45min后(多次给药试验为末次给药后45min)各组小鼠腹腔注射戊巴比妥钠50mg/kg,以翻正反射消失为入睡时间,从翻正反射消失至恢复时间为睡眠持续时间。记录各只小鼠的入睡时间和睡眠恢复时间,t检验比较组间差异的显著性。结果见表3和4。
表3单次给药对阈剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠时间的影响(试验一)
与对照组相比:**P<0.01
实验结果表明:2.0mg/kg的安定灌胃给药一次,能明显缩短阈剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠的潜伏期、延长睡眠维持时间;欧缬草单次给药对小鼠睡眠潜伏期有缩短趋势,对睡眠维持时间无明显影响。
表4多次给药对阈剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠时间的影响(试验二)
与对照组相比:*P<0.05,**P<0.01
实验结果表明:2.0mg/kg的安定灌胃给药一次,能明显缩短阈剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠潜伏期、延长睡眠维持时间;样品1.0g/kg剂量连续灌胃给药3天,对睡眠潜伏期有缩短趋势(已接近统计学差异),样品0.25g/kg剂量连续灌胃给药3天,对睡眠时间有延长趋势。
3药理小结
欧缬草根粉以0.25g/kg、剂量连续灌胃给药3天,能明显提高阈下剂量戊巴比妥钠小鼠的入睡率;1.0g/kg连续灌胃给药3天,对睡眠潜伏期有缩短趋势;0.25g/kg剂量连续灌胃给药3天,对睡眠时间有延长趋势。即欧缬草有温和的催眠作用