CN101195812A - 一株假单胞菌及其在生物去除含氮杂环化合物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株假单胞菌及其在生物去除含氮杂环化合物中的应用。该假单胞菌为假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001 CGMCC №.2223。该菌株不仅可以利用喹啉作为唯一的碳、氮源进行新陈代谢，而且能在高浓度的吡啶、喹啉双基质条件下(吡啶约400mg/L，喹啉约500mg/L)良好生长。它对吡啶的去除主要通过生物吸附，对喹啉的去除包括生物吸附和生物降解两个阶段，同时适量的外加碳源对喹啉降解具有促进作用。经检测，喹啉降解的中间产物主要为2－羟基喹啉和8－羟基香豆素，主要代谢终产物为NH4 +。BC001菌对氨苄青霉素、硫酸卡那霉素、氯霉素、四环素以及壮观霉素均无抗性，保证了使用的生态安全性。
Description
技术领域
本发明涉及一株假单胞菌及其在生物去除含氮杂环化合物中的应用。
背景技术
目前工业生产每天都产生和排放大量的芳香族化合物，这其中大约有三分之二都是杂环化合物。杂环化合物被广泛应用于工业溶剂、染料、炸药、医药及农药等领域。吡啶、喹啉是两种典型的含氮杂环化合物，常见于焦化废水、炼油废水、农药废水等，具有较大的刺激性气味、毒性、致癌性及致畸性，对人类、动植物及环境危害极大，由于它们对大多数微生物具有毒害作用，因此属于难生物降解的有机物。
利用生物强化技术处理杂环难降解有机物成为现今研究的热点之一，而向废水处理系统中投加特异性降解菌株的生物强化法，可以在不改变现有处理设施的基础上，提高污水处理的范围和能力，因而近年来受到了广泛的关注。但是，由于该方法中微生物的作用机制难以掌控，一些生物强化系统的处理效果并不理想，有的甚至是完全失败的。因此发现微生物的作用机理及代谢过程显得尤为重要。
以往发现的特异性降解吡啶的细菌主要包括Bacillus coagulans，Nocardioidessp.，Pimelobacter sp.，Pseudomonas putida，Pseudomonas sp.等；降解喹啉的细菌主要包括Pseudomonas stutzeri.，Rhodococcus sp.，Burkholderia pickettii，Comamonas sp.等。另外，白腐真菌对吡啶、喹啉也有一定的降解功能。以往的研究主要集中在单基质条件下微生物的降解过程及代谢途径，对双基质条件下，尤其是吡啶、喹啉含量都较高时，微生物的生长及生物去除研究很少，而实际废水往往含多种难降解有机物。
发明内容
本发明的目的是一株假单胞菌及其在生物去除含氮杂环化合物中的应用。
本发明所提供的假单胞菌为假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001 CGMCC№.2223。
所述假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001 CGMCC №.2223为阴性革兰氏杆菌，好氧，有运动性。在固体培养基中是黄褐色、边缘整齐的圆形菌落，在无机盐液体培养基中的培养特征为黄褐色悬浊液。对氨苄青霉素、硫酸卡那霉素、氯霉素、四环素以及壮观均无抗性，且不携带质粒。该菌株在好氧条件下可利用喹啉作为唯一碳源和氮源，并同时可耐受高浓度的吡啶；对喹啉降解的中间产物主要为2-羟基喹啉和8-羟基香豆素，主要代谢终产物为NH4 +。
所述假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001 CGMCC №.2223，已于2007年10月23日保藏于中国微生物菌种保藏管委理员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：中国北京市海淀区中关村北一条13号)，保藏号为CGMCC №.2223。
本发明的假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001 CGMCC №.2223来源于首钢焦化厂污水处理系统二沉池回流污泥，经驯化、分离、纯化得到，是废水处理系统中的优势菌株，适应废水处理系统实际运行条件的能力较强，因此该菌株能适应复杂的实际条件，这使得该菌的应用前景广阔。
本发明的假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001 CGMCC №.2223不仅可以利用喹啉作为唯一的碳、氮源进行新陈代谢，而且能在高浓度的吡啶、喹啉双基质条件下(吡啶约400mg/L，喹啉约500mg/L)良好生长。它对吡啶的去除主要通过生物吸附，对喹啉的去除包括生物吸附和生物降解两个阶段，并可达到很高的去除率(99.9％的喹啉可被降解)。同时适量的外加碳源不但不会影响本发明的菌株对喹啉的降解作用，而且对其降解具有促进作用。BC001菌降解喹啉的中间产物主要有2-羟基喹啉和8-羟基香豆素，其先将喹啉转化为其它一些含氮杂环化合物如2-羟基喹啉，当喹啉完全消耗，BC001菌便以这些中间产物做为碳、氮源生长，并将其中的氮部分转化为NH4 +，在整个代谢过程中，约有50％的氮转化为氨氮，NH4 +是BC001降解喹啉的一种最终产物。如果向培养液中补充充足的外加碳源(使微生物可利用的碳元素与氮元素质量比(C/N)约为20)，氨氮会被完全利用。上述特性使该菌株的实用性大大增强。
质粒检测结果表明该菌不携带质粒，因此降解基因编码于染色体上。这一特性使得在利用质粒进行水平基因转移的过程中，避免了质粒的不相容性，是构建具备多种降解能力的基因工程菌的良好材料。
BC001菌对氨苄青霉素、硫酸卡那霉素、氯霉素、四环素以及壮观霉素均无抗性，在实际使用过程中不会向土著菌传递这些耐药因子，保证了使用的生态安全性。
附图说明
图1为BC001菌扫描电镜照片。
图2为吡啶、喹啉单基质条件下BC001菌的生物去除。
图3为吡啶和喹啉双基质条件下BC001菌的生物去除。
图4为双基质条件下外加碳源对喹啉生物降解的影响。
图5为喹啉降解过程中的氮转化。
图6为喹啉降解代谢中间产物1(2-羟基喹啉)检测结果。
图7为喹啉降解代谢中间产物2(8-羟基香豆素)检测结果。
图8为BC001菌对喹啉的部分代谢途径。
具体实施方式
下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。
下述实施例中的百分含量，如无特别说明，均为质量百分含量。
实施例1、假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001的分离、纯化及其鉴定
1、假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001的分离及纯化
假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001是从首钢焦化厂污水处理系统二沉池的活性污泥中取样，经驯化、分离及纯化得到的一株革兰氏阴性菌。具体步骤如下：
从首钢焦化厂废水处理系统中取活性污泥样本，在用多层纱布封口的容器(约2L)中进行间歇性曝气。定期加入10mL吡啶(50-300mg/L)、10mL喹啉(50-300mg/L)以及约50mL焦化废水原水，同时加入2mL磷酸盐缓冲液(每L含8.5gKH2PO4，21.75g K2HPO4，33.4g Na2HPO4·7H2O，1.7g NH4Cl，pH为7.2)以及2mL微量元素溶液(每L含1.5g FeCl3·6H2O，0.024g NiCl2·6H2O，0.19g CoCl2·6H2O，0.002g CuCl2·2H2O，0.024g Na2MoO4·2H2O，0.07g ZnCl2，0.006g H3BO3)，驯化40天。
取100mL上述驯化后的活性污泥于250mL锥形瓶中，加入0.01％的焦磷酸钠及数粒玻璃珠，在30℃，180rpm摇床下振荡30min以充分混匀，取出后在5000rpm下离心10分钟。将沉淀混匀至100mL含吡啶200mg/L、喹啉200mg/L的无机盐培养基(每L培养基含4.26g Na2HPO4，2.65g KH2PO4，0.2g MgSO4·7H2O，0.02g CaCl2，以及1mL微量元素溶液(组成同前)，在30℃，180rpm摇床下振荡培养5天；移取5mL菌悬液至100mL含吡啶300mg/L、喹啉300mg/L的无机盐培养基，在30℃，180rpm摇床下振荡培养4天。取0.1mL菌悬液转至含1.9％琼脂的无机盐固体培养基，涂布稀释分离，再经平板划线分离纯化。
由此，分离出一株能在吡啶、喹啉双基质下生长的细菌，命名为BC001。
该BC001菌株是阴性革兰氏杆菌，好氧，有运动性，在固体培养基中是黄褐色、缘整齐的圆形菌落，在无机盐液体培养基中的培养特征为黄褐色悬浊液。BC001的扫描电镜照片如图1所示。
2、BC001的16S rDNA鉴定
用16S rDNA序列分析法对BC001菌进行鉴定，发现BC001菌为假单胞菌。具体步骤如下：
以Tiangen细菌基因组DNA提取试剂盒提取BC001菌的基因组DNA，设计引物进行PCR片断基因扩增。引物序列为：
27F：5’AGAGTTTGATCATGGCTCAG 3’
1492R：5’TACGGTTACCTTGTTACGACTT 3’
PCR设定程序为：先94℃预变性2min；然后94℃变性1min，55℃退火1min，72℃延伸1min，共30个循环；最后72℃终延伸15min，4℃保存。经切胶回收纯化PCR产物后，测序。测序结果BC001菌的16S rDNA具有序列表中序列1的核苷酸序列。
将BC001菌的片断16S rDNA序列导入GenBank中进行BLAST同源性比对。分析结果表明，BC001菌与Pseudomonas sp.P4-7(EU137140)及Pseudomonas sp.PNP-1(EU099604)的同源性达到了100％。综合上述生理形态特征及16S rDNA鉴定结果，确定该菌为假单胞菌(Pseudomonas sp.)，即假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001。
假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001已于2007年10月23日保藏于中国微生物菌种保藏管委理员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：中国北京市海淀区中关村北一条13号)，保藏号为CGMCC №.2223。
实施例2、假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001 CGMCC №.2223对含氮杂环化合物的吸附、降解作用检测
1、假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001对吡啶、喹啉的生物去除作用检测
在吡啶单基质、喹啉单基质以及吡啶—喹啉双基质、吡啶—葡萄糖双基质、喹啉—葡萄糖双基质条件下，实施假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001 CGMCC №.2223对吡啶、喹啉的生物去除。发现假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001 CGMCC №.2223对吡啶的生物去除主要是生物吸附，而对喹啉的生物去除包括生物吸附和生物降解，外加适量碳源可促进喹啉的降解。具体实施步骤如下：
1)假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001 CGMCC №.2223菌悬液的制备
将假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001 CGMCC №.2223接种于100mL含500mg/L吡啶和500mg/L喹啉的LB液体培养基中，防止杂菌的侵入及保持菌生长活力，进行富集培养。将培养得到的菌液离心，用液体无机盐培养基(每L培养基含4.26gNa2HPO4，2.65g KH2PO4，0.2g MgSO4·7H2O，0.02g CaCl2，0.0012g MnSO4·H2O，以及1mL微量元素溶液(组成同实施例1的步骤1所述)洗涤三次以去除表面杂质，再转移至液体无机盐培养基，制备成菌液光密度值OD602为1～2的假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001 CGMCC №.2223菌悬液。
2)假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001对吡啶、喹啉的生物去除作用检测
各取10mL步骤1)所制备的假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001菌悬液，加入三个90mL以吡啶、喹啉或吡啶与喹啉作为唯一的碳源和氮源的液体无机盐培养基(即含有376mg/L吡啶的液体无机盐培养基、含有484mg/L喹啉的液体无机盐培养基或含有460mg/L喹啉和491mg/L吡啶的液体无机盐培养基)中，接种量均为0.062g/L，封口膜密封，在30℃，180rpm的摇床中振荡培养。设未加菌的以吡啶、喹啉或吡啶和喹啉作为唯一的碳、氮源的液体无机盐培养基，进行同等条件下的实验分别作为空白对照。每隔1～2小时取少量反应液，其中一部分直接用于测定菌体浓度，其余部分以0.45μm的滤膜过滤后进行吡啶及喹啉浓度的测定。
检测方法：
1、吡啶及喹啉浓度的测定：通过高效液相色谱(岛津LC10ADVP，SPD10AVPUV-Vis Detector；Diamonsil C18色谱柱，250×4.6mm，5μm)测定。
2、菌体浓度测定：通过岛津UV2401型紫外可见分光光度计测定光密度，吸收波长为602nm；投菌量通过干重法测定。
结果如下所述：
以吡啶为唯一碳源和氮源培养的假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001吡啶浓度的测定和菌体浓度测定结果如图2中A所示，以喹啉为唯一碳源和氮源培养的假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001喹啉浓度的测定和菌体浓度测定结果如图2中B所示，以吡啶和喹啉为碳源和氮源培养的假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001吡啶和喹啉浓度的测定和菌体浓度测定结果如图3所示。
图2中A所示的结果表明，以吡啶为唯一碳源和氮源培养的假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001培养液中吡啶浓度在短时间内下降，然后浓度不再改变，说明假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001对吡啶的去除主要是生物吸附作用，并且在短时间内完成，随着时间的推移，吸附量逐渐趋于稳定。同时可以推断吡啶自身所含的碳、氮源不能直接被假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001所利用；
图2中B所示的结果表明，以喹啉为唯一碳源和氮源培养的假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001培养液中喹啉浓度一直下降，浓度下降速度先快后慢再快，说明假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001对喹啉的去除主要经过两个阶段：生物吸附及生物降解。初期吸附后，微生物生长进入停滞期，微生物生长速度很慢。停滞期大约需要9h；此后进入微生物降解阶段，喹啉的降解速率很快，其浓度几乎呈直线性下降，菌的生长也同时进入对数期；大约在20.5h后，99.9％的喹啉被降解。说明假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001在好氧条件下能以喹啉作为唯一的碳源和氮源进行代谢活动。
图3所示的结果表明，假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001在以吡啶和喹啉双基质为碳源和氮源的培养条件下，对吡啶、喹啉的去除作用机理并没有发生太大的变化。
对比图3及图2中A所示的结果表明，尽管假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001在单基质和双基质条件下对吡啶的去除同为生物吸附，但去除量及趋势有所不同。由于在吡啶单基质为唯一碳源和氮源培养条件下，假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001并没有生长，生物吸附主要发生在初期阶段；而在吡啶和喹啉双基质为碳源和氮源培养条件下，生物吸附过程不仅包括初期阶段的吸附，同时还包括微生物生长期时的生物吸附，这是因为假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001能利用另一种基质——喹啉作为碳、氮源进行生长，因此，随着菌体密度的增加，吡啶的吸附量逐渐增大。同时，吡啶的存在并没有明显延长假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001的生长停滞期的时间，与喹啉单基质为唯一碳源和氮源培养条件下基本相同，都约为9h。这说明在吡啶和喹啉双基质培养条件下，吡啶的存在并不明显“干扰”假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001对喹啉这个新的可利用碳氮源的适应。因此，在双基质(吡啶和喹啉为碳源和氮源培养)与单基质(吡啶或喹啉为唯一碳源和氮源培养)条件下，停滞期的长短主要取决于假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001对新的可利用的碳、氮源的适应时间长短。
2、外来碳源对假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001对吡啶、喹啉的生物去除作用的影响实验
外加碳源实验是在无机盐培养基中加入一定比例的葡萄糖后进行的，同时为了缩短抑制期的时间，取1mL步骤1中步骤1)所述假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001菌悬液转入100mL含有400mg/L吡啶及500mg/L喹啉的无机盐培养基进行培养，培养至对数生长期。
分别按0.14g/L的接种量将上述培养至对数生长期的假单胞菌(Pseudomonassp.)BC001新鲜菌液分别接种于含有2.0g/L葡萄糖、396mg/L吡啶、490mg/L喹啉的无机盐培养基(每L培养基含4.26g Na2HPO4，2.65g KH2PO4，0.2gMgSO4·7H2O，0.02g CaCl2，0.0012g MnSO4·H2O，以及1mL微量元素溶液(组成同实施例1的步骤1所述)(添加2.0g/L葡萄糖的双基质条件)，或含有5.8g/L葡萄糖、373mg/L吡啶、511mg/L喹啉的无机盐培养基(添加58g/L葡萄糖的双基质条件)，进行降解实验，同时以接种相同量的假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001的无外加碳源(即含有438mg/L吡啶、528mg/L喹啉的无机盐培养基)为对照。
结果表明，在吡啶与喹啉共存的双基质条件下，不同的葡萄糖投加量均不能促使假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001降解吡啶，因此，可以确定吡啶本身的碳、氮源在有外加碳源的情况下仍然不能被假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001所利用。
添加葡萄糖的双基质条件下喹啉的降解速率结果如图4所示，结果表明，外加2.0g/L葡萄糖使原双基质体系中可利用的碳氮源比例提高到21∶1，由图4可以看出：经过初期吸附后，喹啉的降解速率明显比不加葡萄糖的降解速率快，8小时后98.9％的喹啉可以被假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001降解，而在不加葡萄糖的双基质条件下，喹啉降解需要近17h。外加5.8g/L葡萄糖使原双基质体系中可利用的碳氮源比例进一步提高到46∶1，在初期的生物吸附之后，从总体上看，喹啉的降解速率反而比不加葡萄糖的降解速率慢。这说明：适量的外加碳源能使微生物生长可利用的碳氮源达到较好的比例，从而对喹啉的降解具有促进作用，但是过多的外加碳源则会抑制喹啉的降解。
3、假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001对喹啉降解产物的监测
实施假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001对喹啉降解中间产物及终产物的监测，发现喹啉的代谢产物有2-羟基喹啉、8-羟基香豆素和NH4 +。具体方法为：以0.10g/L的接种量将步骤1中步骤1)制备的假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001菌液接种于含有400mg/L喹啉的液体无机盐培养基中，封口膜密封，在30℃，180rpm的摇床中振荡培养。设未加菌的灭菌含有421mg/L喹啉的液体无机盐培养基，进行同等条件下的实验作为空白对照。培养过程中每隔1～2小时取少量反应液按照下列方法检测喹啉浓度、氨氮浓度、中间产物。
检测方法：
1、喹啉浓度检测：反应液用0.45μm的滤膜过滤后，通过高效液相色谱(岛津LC10ADVP，SPD10AVP UV-Vis Detector；Diamonsil C18色谱柱，250×4.6mm，5μm)测定喹啉浓度。
2、氨氮浓度：反应液样品经0.22μm滤膜过滤，用水杨酸-次氯酸盐光度法(GB7481-87)测定。
3、中间产物：反应液样品经0.45μm滤膜过滤后，再经二氯甲烷等体积萃取，用预先烘干的无水硫酸钠过滤后，在GC/MS(Agilent 6890N GC/5973MSD，DB-5MS毛细管柱，30m×0.25mm×0.25μm)上进行中间产物的定性分析。
假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001降解过程中，喹啉浓度和氨氮浓度变化曲线如图5所示，从图5可以看出喹啉很快就被降解，此过程中，氨氮的浓度变化不大，第10小时内，喹啉的降解率达到96.6％，而氨氮的浓度基本没有变化，只达到了最大值的7％，这说明，假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001降解喹啉的过程中并没直接将喹啉中的氮转化成氨氮。10h后喹啉几乎完全降解，氨氮的量开始迅速增大，说明假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001降解喹啉的中间产物开始转化为氨氮。
假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001降解喹啉的中间产物检测结果如图6和图7所示，由图6可以看出假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001首先将喹啉中的氮转化成2-羟基喹啉。10h后喹啉几乎完全降解，氨氮的量开始迅速增大(图5)。这说明假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001先将喹啉转化为2-羟基喹啉等中间产物，当喹啉完全消耗，假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001能以2-羟基喹啉等中间产物为碳、氮源生长。结合图7可说明降解中间产物进一步脱氮生成8-羟基香豆素，并将其中的氮部分转化为氨氮，在整个代谢过程中，约有50％的氮转化为氨氮，氨氮是假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001降解喹啉的一种最终产物。向培养液中补充充足的灭菌葡萄糖作为碳源后，氨氮被完全利用。说明假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001降解喹啉的部分途径为如图8所示的反应过程。
实施例3、假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001的质粒检测
用改进的碱裂解法提取假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001的质粒，发现假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001不携带质粒。
所用试剂：
P1：溶解6.06g Tris base和3.72g Na2EDTA·2H2O于800mL蒸馏水中，调整pH至8.0，定容至1升，然后加入100mg RNase A。
P2：在950mL蒸馏水中加入8.0g NaOH，50mL浓度为20％(g/mL)的SDS溶液，混匀，定容至1升。
P3：在500mL蒸馏水中加入294.5g醋酸钾，用冰醋酸(约110mL)调整pH至5.5，定容至1升。
TE：每升蒸馏水加入1.576g Tris·Cl，调整pH至8.0；加入0.3722g EDTA·Na2。
具体实施方式如下：
1、用LB培养基培养假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001菌至对数生长期。
2、取3mL步骤1获得的假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001菌悬液，在8000rpm下离心5min，收集菌体，将多余液体用移液枪吸出。
3、加入溶液P1 300μL，充分悬浮。
4、加入溶液P2 300μL，轻柔颠倒5-6次，室温放置5min。
5、加入溶液P3 300μL，轻柔颠倒5-6次，冰浴5min。13000rpm离心10min。
6、移上清至干净的EP管，加等体积的苯酚和氯仿—异戊醇混合液(氯仿与异戊醇的体积比为24∶1)抽提。13000rpm离心5min。
7、移上清至另一EP管，加入0.7体积的异丙醇，颠倒混匀，13000rpm离心10～20min。
8、倒净上清，加入1mL体积百分含量为70％乙醇，13000rpm离心10min。
9、倒净上清，室温放置直至乙醇挥发。
10、20μL TE缓冲液溶解。
11、琼脂糖凝胶电泳分析，选用灵敏度较高的SYBR Gold后染色。
结果表明，按以上方法提取质粒，证明假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001中不携带质粒。如果携带相同复制子的两个质粒存在于同一个细胞中，会在复制和分配过程中彼此竞争，难以共存，这种现象称为质粒不相容性。BC001菌的降解基因不在质粒上，转入新质粒后，不会发生质粒不相容，因此BC001菌较适合作为质粒受体菌。这一特征对构造基因工程菌极为有利。
序列表
Claims (8)
1.假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001 CGMCC №.2223。
2.假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001 CGMCC №.2223在生物去除含氮杂环化合物中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述生物去除含氮杂环化合物为生物吸附和/或生物降解所述含氮杂环化合物。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述含氮杂环化合物为喹啉、吡啶，或它们的衍生物。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述生物去除含氮杂环化合物为去除污水中的含氮杂环化合物，具体方法为将假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001CGMCC №.2223接种于含有喹啉或其衍生物的污水中，在20-35℃培养。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述污水中的喹啉或其衍生物浓度为1000mg/L以下；所述污水中的吡啶及其衍生物的浓度为600mg/L以下。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述去除污水中的含氮杂环化合物的过程中，向污水中补充可利用的碳源，使微生物可利用的碳元素与氮元素的质量比为18-22。
8.以假单胞菌(Pseudomonas sp.)BC001 CGMCC №.2223为活性成分的活菌剂。
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