CN101193632A - 用于无义突变抑制治疗的口服活性1,2,4-噁二唑组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及使用1，2，4－噁二唑苯甲酸化合物治疗或预防与无义突变有关的疾病的特定剂量和给药方案。具体地说，本发明涉及在患与无义突变有关的疾病的哺乳动物中，使用3－[5－(2－氟－苯基)－[1，2，4]噁二唑－3－基]－苯甲酸的特定剂量和给药方案。
Description
1.发明领域
本发明涉及利用1，2，4-噁二唑苯甲酸化合物治疗或预防与无义突变有关的疾病的特定剂量和给药方案。具体地说，本发明涉及在患与无义突变有关的疾病的哺乳动物中，利用含3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸的特定剂量和给药方案。
2.发明背景
一种新型1，2，4噁二唑化合物和其用于治疗、预防或控制通过调节翻译提前终止或无义介导的mRNA降解来缓解的疾病，描述于2006年1月31日公告的美国专利号6,992,096B1中，发明名称“1，2，4噁二唑苯甲酸化合物和其用于无义抑制和疾病治疗的用途”，其整体引入本文以供参考。其中一种化合物是3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸。对于所有药物来说，治疗患有疾病如囊性纤维化(Cystic Fibrosis)和杜氏肌营养不良(Duchenne Muscular Dystrophy)的患者的正确剂量和给药方案对于获得无不良或有害作用的期望或最佳治疗效果是必需的。
因此，需要存在安全、有效、且无毒的剂量和给药方案，从而可以预防或降低任何不良反应或有害作用，或提供一种最佳的治疗效果或者两者，即提供期望的治疗整体效果(therapeutic profile)。
3.发明概述
本发明包括下述给药方案：以特定的时间间隔施用特定剂量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物，以调节翻译提前终止或无义介导的mRNA降解，或改善与其相关的一种或多种症状，同时降低或避免不良反应或有害作用。本方明进一步包括3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的特定剂量和单位剂型。
在一个实施方案中，本发明涉及在24小时期间内一次、两次或三次给有此需要的患者施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的方法。本发明还涉及在24小时时间间隔内一次、两次或三次给有此需要的患者施用含有有效量3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的药物组合物的方法。24小时期间内的每次给药剂量可以相同或者不同。在一个实施方案中，在24小时期间内给药3次时，前两次的给药量相同，第三次的剂量是第一次剂量的两倍。在另一个实施方案中，三次剂量全部相同。
在另一个实施方案中，本发明涉及治疗、预防或控制通过调节翻译提前终止或无义介导的mRNA降解来缓解的疾病的方法，包括在24小时期间内一次、两次或三次给有此需要的患者施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。优选地，给药是每天连续地进行三次，或者中断几天、几周、几月或几年。
本发明还涉及治疗、预防或控制通过调节翻译提前终止或无义介导的mRNA降解来缓解的疾病的方法，包括在24小时期间内一次、两次或三次给有此需要的患者施用含有效量3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的药物组合物。优选地，给药是每天连续地进行三次，或者中断几天、几周、几月或几年。
在一个实施方案中，本发明涉及一种施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的方法，其中在24小时期间内，给有此需要的患者施用一次、两次或三次该活性剂，其中优选每次给药间隔约4-14小时。在一个具体的实施方案中，逐渐增加第一次到第三次的活性剂剂量。
在另一个实施方案中，本发明涉及连续治疗，其中在某段时间内(如5、7、10、14、20、24、28、60或120天或更长时间内)给有此需要的患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
在另一个实施方案中，本发明涉及以剂量范围在0.1mg/kg-500mg/kg、1mg/kg-250mg/kg、1mg/kg-150mg/kg、1mg/kg-100mg/kg、1mg/kg-50mg/kg、1mg/kg-25mg/kg、1mg/kg-10mg/kg或2mg/kg-10mg/kg之间的单一剂量或分开剂量(每天三次)给有此需要的患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。在一个具体实施方案中，3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物是以约4mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约10mg/kg、约14mg/kg或约20mg/kg的剂量给药的。在另一个实施方案中，在24小时内施用前述实施方案中所述的任何剂量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物一次、两次或三次。
在另一个实施方案中，本发明涉及包含约35mg-约1400mg、约125mg-约1000mg、约250mg-约1000mg、或约500mg-约1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的单位剂量制剂。
在另一个实施方案中，本发明涉及包含35mg、50mg、70mg、100mg、125mg、140mg、175mg、200mg、250mg、280mg、350 mg、500mg、560mg、700mg、750mg、1000mg或1400mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的单位剂量制剂。在一个优选的实施方案中，本发明涉及包含125mg、250mg或1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的单位剂量制剂。
在另一个实施方案中，本发明涉及让患者的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的血浆浓度大于约0.1μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、约5μg/ml、约10μg/ml、约20μg/ml、约25μg/ml、约40μg/ml、约50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、300μg/ml、400μg/ml、或500μg/ml保持至少约1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小时或更长时间的方法，包括给有此需要的患者施用有效量3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
4.详细描述
4.1定义
用于本文的“翻译提前终止”指使对应氨基酸的密码子转变为终止密码子的突变结果。
用于本文的“无义介导的mRNA降解”指介导含有提前翻译终止密码子的mRNA降解的任何机理。在一个具体的实施方案中，无义介导的mRNA降解由DNA的无义突变所致。
用于本文的“提前终止密码子”或“提前结束密码子”指在对应氨基酸的密码子的位置出现终止密码子。
用于本文的“无义突变”是将与氨基酸对应的密码子变为终止密码子的点突变。在一个具体的实施方案中，无义突变是发生在DNA中，然后被转录入mRNA的突变。
用于本文的“无义抑制”指对翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解的抑制或压制。在一个具体实施方案中，mRNA降解是由DNA的无义突变导致的。
用于本文的“对翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解的调节”指通过改变无义抑制的水平调节基因表达。例如，如果要提高具有提前终止密码子的基因编码的缺陷蛋白的生成，即允许读过(readthrough)疾病基因的提前终止密码子，从而发生基因的翻译，那么翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解的调节伴随无义抑制的向上调节。
用于本文的术语“不良反应”或“副作用”包括但不限于恶心、呕吐、腹泻、头痛、血清丙氨酸转氨酶(ALT)增高、血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)增高、晕眩、血清肌酸激酶(CK)增高、腹痛、腹胀、眼痛、眼部肿胀、眼部烧伤、乳头敏感、乳房压痛、肌肉骨骼胸痛、皮疹、瘙痒、颌下淋巴结疼痛、血清乳酸脱氢酶(LDH)增高、血清醛缩酶增高和血清甘油三酯增高。
用于本文的术语“活性剂”、“药”和“药物”指3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
用于本文的术语“剂量”指一次施用的活性剂的量。
用于本文的术语“单位剂型”包括片剂；囊片；胶囊，例如，软弹性明胶胶囊；小药囊剂；扁囊剂；锭剂；糖锭剂；分散剂；粉剂；溶液；凝胶剂；适用于患者口服或粘膜给药的液体剂型，包括悬液(例如，含水或不含水液体悬液)、乳液(例如，水包油乳液或油包水乳液)，溶液和酏剂；和可重构以适用于向患者提供口服或胃肠外给药的液体剂型的灭菌固体(例如，晶型或非晶型固体)。该单位剂型不必必需以单一剂量给药。
用于本文的术语“给药方案”和“剂量”指每个时间单位给予的活性剂的量和给药时间。
用于本文的术语“患者”指动物(例如，母牛、马、羊、猪、小鸡、火鸡、鹌鹑、猫、狗、小鼠、大鼠、兔、豚鼠等)，优选哺乳动物例如非灵长目动物和灵长目动物(例如猴和人)，最优选人。在某些实施方案中，所述患者是胎儿、婴儿、儿童、青少年或成人。在一实施方案中，通过预筛选确定所述患者具有无义突变。在另一实施方案中，通过预筛选确定所述患者患有何种无义突变(即，UAA、UGA或UAG)。
本文所用术语“有效量”是指在疾病的处理和医治中，3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物足以提供治疗益处，或者足以延迟或最大限度地减少与所述疾病有关的症状的量。在一个实施方案中，术语“有效量”是指3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物足以在某段时间内获得期望的血浆水平的量。优选的有效量具体描述于本文中。
本文所用术语“控制”是指患者从施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物获得的有益效果，它并不导致疾病的治疗。
用于本文的术语“预防”是指通过施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物预防疾病或其症状在患者中发生、复发、传播或恶化。因为与无义突变相关的疾病可能是遗传性疾病，因此可以针对存在无义突变来对患者进行筛选。一旦通过筛选确定患者具有无义突变，那么就可给该患者施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物，从而预防疾病或其症状的发生、复发、传播或恶化。
用于本文的术语“治疗”是指根除或缓解疾病或与所述疾病相关的症状。在某些实施方案中，该术语指通过给患有这类病的患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物最大限度地减少疾病的传播或恶化。
用于本文的术语“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的无毒酸或碱，包括无机酸和碱和有机酸和碱制备的盐。适合3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸的药学上可接受的碱加成盐包括但不限于：由铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌制备的金属盐，或由赖氨酸、N，N’-二苄基乙二胺、氯代普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、麦格鲁明(N-甲基葡糖胺)和普鲁卡因制备的有机盐。适合的无毒酸包括，但不限于无机和有机酸，例如乙酸、海藻酸、邻氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙烯磺酸(ethenesulfonic)、甲酸、富马酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡萄糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、乙醇酸、氢溴酸、氢氯酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、双羟萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、硫酸、酒石酸、和对甲苯磺酸。具体的无毒酸包括氢氯酸、氢溴酸、磷酸、硫酸、和甲磺酸。从而具体盐的实例包括盐酸盐和甲磺酸盐。盐的其它实例为本领域所熟知，参见，例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing，Easton PA(1990)。
用于本文的术语“水合物”是指3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐，进一步包括用分子间非共价力结合的化学计量或非化学计量量的水。
用于本文的术语“溶剂化物”是指3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐，进一步包括用分子间非共价力结合的化学计量或非化学计量量的溶剂。
4.2与翻译提前终止有关的疾病
本发明包括在患者中治疗、预防或控制通过抑制翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解来缓解的疾病和病症的方法，它包括根据本文描述的剂量和/或给药方案，给有此需要的患者施用有效量的口服生物可用的化合物(如3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物)。
在一个实施方案中，本发明包括与表现出翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解的基因有关的任何疾病的治疗、预防或控制。在一个实施方案中，所述疾病部分地由提前终止密码子所导致的基因表达缺失引起。表现出翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解的基因和与翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解有关的疾病的具体实例见于2002年6月21日提交的美国专利申请号60/390,747中，题为“调节翻译提前终止和无义介导的mRNA降解的小分子的鉴别方法”。在此其全文引入作为参考。
在一个具体的实施方案中，本文提供的方法、组合物、剂量、单位剂型和给药方案可用于在胚胎或胎儿中治疗、预防或控制与基因中的无义突变有关的疾病，所述胚胎或胎儿患有或易患与基因内的无义突变相关的疾病，例如本文所述的那些。按照该实施方案，给孕妇施用能通过胎盘传递给胚胎或胎儿的有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。在一个具体的实施方案中，将有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物口服施予孕妇。
与翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解的抑制有关或被其所缓解的疾病或病症包括但不限于：遗传病、癌症、自身免疫性疾病、血液病、胶原病、糖尿病、神经变性疾病、增生性疾病、心血管疾病、肺病、炎性疾病或中枢神经系统疾病。
在本发明方法的范围内的具体遗传疾病包括但不限于：多发性内分泌肿瘤(1、2和3型)、淀粉样变性病、粘多糖病(I和III型)、先天性肾上腺发育不全、结肠腺瘤性息肉病、先天性家族性视网膜血管瘤病(Von HippelLandau Disease)、卷发综合征(Menkes Syndrome)、血友病A型、血友病B型、胶原质VII、先天性肝内胆管发育不良征、Townes-Brocks综合征、横纹肌样瘤、大疱型表皮松解症、贺勒氏症、科-勒二氏综合征(Coffin-Lowry Syndrome)、无虹膜症、腓骨肌萎缩症、肌小管肌病、性联肌小管肌病、性联软骨发育不良、性联丙种球蛋白缺乏症、多囊肾病、脊髓性肌萎缩症、家族性大肠瘜肉症、丙酮酸脱氢酶缺乏症、苯丙酮尿症、纤维神经瘤1型、纤维神经瘤2型、阿尔茨海默氏病、家族性白痴病、瑞特综合症、Hermansky-Pudlak综合症、外胚层发育不良/皮肤脆性综合征、Leri-Weill软骨骨生成障碍症、佝偻病、低磷酸血性佝偻病、肾上腺脑白质营养不良症、回转性萎缩症、动脉粥样硬化、感音神经性耳聋症、肌张力障碍、Dent症、急性间歇性紫质症、考登综合征(Cowden Disease)、Herlitz大疱性表皮松解症、肝豆状核变性、下颌-面发育不良(Treacher-CollinsSyndrome)、丙酮酸激酶缺乏症、巨大症、侏儒症、甲状腺功能减退症、甲状腺功能亢进症、衰老、肥胖、帕金森氏症、C型尼曼匹克症、囊性纤维化、肌肉萎缩症、心脏病、肾结石、共济失调毛细血管扩张症、家族性高胆固醇血症、视网膜炎色素变性、溶酶体贮积症、结节性硬化症、杜氏肌肉营养不良症和马凡氏综合症。
在另一个实施方案中，所述遗传病是自身免疫性疾病。在优选实施方案中，所述自身免疫性疾病是类风湿性关节炎或移植物抗宿主疾病。
在另一个实施方案中，所述遗传病是血液病。在优选实施方案中，所述血液病是A型血友病、冯维勒布兰德氏病(3型)、共济失调-毛细血管扩张症、b-地中海贫血或肾结石。
在另一个实施方案中，所述遗传疾病是胶原病。在一个实施方案中，所述胶原病是成骨不全或肝硬化。
在另一个实施方案中，所述遗传疾病是糖尿病。
在另一个实施方案中，所述遗传疾病是炎性疾病。在一个优选实施方案中，所述炎性疾病是关节炎。
在另一个实施方案中，所述遗传疾病是中枢神经系统疾病。在一个实施方案中，所述中枢神经系统疾病是神经变性疾病。在一个优选实施方案中，所述中枢神经系统疾病是多发性硬化、肌营养不良、杜氏肌营养不良、阿尔茨海默氏病、家族性白痴病、晚期型婴儿神经元蜡样质脂褐质沉积病(LINCL)或帕金森氏病。
在另一个实施方案中，所述遗传疾病是癌症。在一个优选实施方案中，所述癌症是头癌和颈癌、眼癌、皮肤癌、口腔癌、喉癌、食道癌、胸癌、骨癌、肺癌、结肠癌、乙状结肠癌、直肠癌、胃癌、前列腺癌、乳癌、卵巢癌、肾癌、肝癌、胰癌、脑癌、肠癌、心脏癌或肾上腺癌。所述癌症可能是原发性或转移性的。癌症包括实体瘤，血癌和其他肿瘤。
在另一个优选实施方案中，所述癌症与肿瘤抑制基因有关(参见，如Garinis等2002，Hum Gen 111：115-117；Meyers等1998，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，95：15587-15591；Kung等2000，Nature Medicine6(12)：1335-1340)。这类肿瘤抑制基因包括，但不限于APC、ATM、BRAC1、BRAC2、MSH1、pTEN、Rb、CDKN2、NF1、NF2、WT1和p53。
在一特别优选的实施方案中，所述肿瘤抑制基因是p53基因。已在p53基因中鉴定出无义突变，意味着无义突变与癌症有关。已在p53基因中鉴别几种无义突变(参见，例如，Masuda等，2000，Tokai J Exp Clin Med.25(2)：69-77；Oh等，2000，Mol Cells 10(3)：275-80；Li等，2000，Lab Invest.80(4)：493-9；Yang等，1999，Zhonghua Zhong Liu Za Zhi 21(2)：114-8；Finkelstein等，1998，Mol Diagn.3(1)：37-41；Kajiyama等，1998，DisEsophagus.11(4)：279-83；Kawamura等，1999，Leuk Res.23(2)：115-26；Radig等，1998，Hum Pathol.29(11)：1310-6；Schuyer等，1998，Int J Cancer76(3)：299-303；Wang-Gohrke等，1998，Oncol Rep.5(1)：65-8；Fulop等，1998，J Reprod Med.43(2)：119-27；Ninomiya等，1997，J Dermatol Sci.14(3)：173-8；Hsieh等，1996，Cancer Lett.100(1-2)：107-13；Rall等，1996，Pancreas.12(1)：10-7；Fukutomi等，1995，Nippon Rinsho.53(11)：2764-8；Frebourg等，1995，Am J Hum Genet.56(3)：608-15；Dove等，1995，Cancer Surv.25：335-55；Adamsom等，1995，Br J Haematol.89(1)：61-6；Grayson等，1994，Am J Pediatr Hematol Oncol.16(4)：341-7；Lepelley等，1994，Leukemia.8(8)：1342-9；McIntyre等，1994，J Clin Oncol.12(5)：925-30；Horio等，1994，Oncogene.9(4)：1231-5；Nakamura等，1992，Jpn J Cancer Res.83(12)：1293-8；Davidoff等，1992，Oncogene.7(1)：127-33；和Ishioka等，1991，BiochemBiophys Res Commun.177(3)：901-6；这些公开引入到本文作为参考)。
在其它实施方案中，通过给予有此需要的患者有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物治疗、预防或控制的疾病包括但不限于：实体肿瘤、肉瘤、癌、纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、软骨肉瘤、骨原性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏肉瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠瘤、胰癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、骨髓癌、支气管癌、肾细胞癌、肝细胞瘤、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维耳姆斯氏瘤、宫颈癌、睾丸瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱瘤、上皮瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、卡波济氏肉瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、menangioma、黑素瘤、成神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤、血生成肿瘤、急性淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞B细胞白血病、急性成淋巴细胞T细胞白血病、急性成髓细胞白血病、急性前髓细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性红白血病、急性巨核细胞白血病、急性骨髓单核细胞白血病、急性非淋巴细胞白血病、急性未分化细胞白血病、慢性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、或多发性骨髓瘤。参见，如Harrison’s Principles of Internal Medicine，Eugene Braunwald等编，第491-762页(第15版，2001)。
4.3剂量和给药方案
不受限于任何理论，本发明部分地包括3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的具体剂量和给药方案，从而对抑制翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解进行优化。在一优选的实施方案中，所述无义介导的mRNA降解是由DNA的无义突变导致。
本发明的新方法包括治疗、预防和控制可通过抑制翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解而治疗或预防的疾病或其症状，同时降低或避免不良反应或有害作用，如毒性或副作用。本文所述的剂量和给药方案的优选给药途径是口服(即摄取溶液、胶体溶液或含超过活性剂饱和浓度的额外的活性剂溶液)
认为本文所述的剂量和给药方案有用是因为它们具有能获得和保持所述活性剂的期望血浆浓度的能力。不受限于理论，认为在如24小时或更长的时间内，获得并且保持活性剂(如第4.4部分所述的活性剂)的相对稳定的血浆浓度可以提供给患者有益的治疗效果。本文描述的剂量和给药方案可用于获得和保持活性剂的这种治疗性血浆浓度。
在一个实施方案中，本发明涉及施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的方法，其中在12或24小时内给有此需要的患者服用该活性剂一次。
在另一个实施方案中，本发明涉及施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的方法，其中在12或24小时内给有此需要的患者服用该活性剂两次，其中每次给药优选间隔约4-14小时，在一个实施方案中12小时。在这些实施方案中，所述活性剂可以在用餐时，如早餐和晚餐时服用。
在另一个实施方案中，本发明涉及施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的方法，其中在12或24小时内给有此需要的患者服用该活性剂三次，其中每次给药优选间隔约4-14小时。在一具体实施方案中，在早上服用一次该活性剂，中午服用一次，晚上服用一次。优选的用药间隔包括4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14小时。
在一个实施方案中，在整个24小时内活性剂剂量逐步加大。在另一个实施方案中，第二次的给药剂量增加(如加倍)。在另一个实施方案中，第一次和第二次的给药剂量保持稳定，第三次的给药剂量增加(如加倍)。在一具体实施方案中，24小时内的三次剂量是按照下述公式给药：1X、1X、2X，其中X是一个具体的起始剂量(如4mg/kg、7mg/kg或10mg/kg)。在另一个实施方案中，所述活性剂是在患者进食(即之前或之后)约10、15、30、45或60分钟内服用的。在一个实施方案中，将有效量的活性剂洒在或混在食物内。在另一个实施方案中，所述活性剂不与食物一起服用。
一个特别优选的给药方案是间隔约6-、6-、和12-小时在餐后30分钟内(如在早餐后的上午7:00，午餐后的下午1:00和晚餐后的下午-7:00)给患者施用活性剂。
而在另一个实施方案中，本发明涉及以剂量范围在0.1mg/kg-500mg/kg、1mg/kg-250mg/kg、1mg/kg-150mg/kg、1mg/kg-100mg/kg、1mg/kg-50mg/kg、1mg/kg-25mg/kg、1mg/kg-10mg/kg或2mg/kg和10mg/kg之间的单一剂量或分开剂量(如24小时内分三次)给有此需要的患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。在一个具体实施方案中，3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物是以约2-6mg/kg、约5-9mg/kg、约6-10mg/kg、约8-12mg/kg、约12-16mg/kg或约18-22mg/kg的剂量给药。在一个具体实施方案中，3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物是以约4mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约10mg/kg、约14mg/kg或约20mg/kg的剂量给药。在另一个实施方案中，在24小时内施用前述实施方案中所述的任何剂量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物三次。
在另一个实施方案中，本发明涉及连续疗法，其中在一段时间(如5、7、10、14、20、24、28、60或120天或更长的时间内)内，每天给有此需要的患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。在一个实施方案中，每个24小时期间内连续施用所述活性剂三次。在另一个实施方案中，所述活性剂是每天、每周、每月或每年连续给药。在一个具体实施方案中，所述活性剂是一连几天、几周、几月或几年，每24小时期间内以约4mg/kg，约4mg/kg和约8mg/kg的剂量连续给药三次。在一个具体实施方案中，所述活性剂是一连几天、几周、几月或几年，每24小时期间内以约7mg/kg，约7mg/kg和约14mg/kg的剂量连续给药三次。在一个具体实施方案中，所述活性剂是一连几天、几周、几月或几年，每24小时期间内以约10mg/kg，约10mg/kg和约20mg/kg的剂量连续给药三次。在所述活性剂给药的各个24小时期间内，优选的三次给药是间隔约6-、6、和12-小时(如在早餐后的上午～7:00，午餐后的下午～1:00和晚餐后的晚上～7:00)。优选用连续疗法治疗、预防或控制囊性纤维化和杜氏肌营养不良症。
一个疗程的治疗时间可跨1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1年、2年、3年、4年、5年或更长时间。治疗时间可以中断，中断时间可跨1天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1年、2年、3年、4年、5年或更长时间。这种决定可以让本领域的技术人员来确定(如医师)。
在一个具体实施方案中，治疗持续14天，随后的14天不进行治疗，接着再连续治疗14天。在一个实施方案中，在第二个14天治疗期间的给药剂量高于第一个14天治疗期间的给药剂量。作为非限制性的实施例，在24小时期间内，给有此需要的患者施用三剂3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物(如4mg/kg，4mg/kg和8mg/kg)，持续续14天，随后的14天不进行治疗，接着连续14天，在24小时期间内给有此需要的患者施用三剂3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物(如10mg/kg，10mg/kg和20mg/kg)。
在另一个实施方案中，连续治疗28天。
在某些实施方案中，按照本文所描述的剂量和给药方案并与第二种活性剂组合(如同时地或顺序地)施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。在具体实施方案中，按照本文所描述的剂量和给药方案并与氨基糖苷类、皮质类固醇、胰腺酶、抗生素、胰岛素，降血糖剂、Ω-3脂肪酸、化疗剂或酶替代疗法组合施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。第二活性剂可以局部、肠内(如口服、十二指肠、直肠)、肠道外(如静脉内、动脉内、肌肉内、皮下、皮内或腹膜内)或鞘内给药。在某些实施方案中，按照本文所描述的剂量和给药方案并与放射疗法组合施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
应该理解，给有此需要的患者施用的活性剂的量是或者可以基于相关患者的实际体重，或相关患者群(如白种男性、白种女性、非洲裔美国男性、非洲裔美国女性、亚洲男性或亚洲女性，包括成年人和儿童)的平均体重计算出来的。
4.4血浆浓度
在一个实施方案中，本发明涉及一种让患者内的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的血浆浓度大于：约0.1μg/ml、约0.5μg/ml、约2/ml、约5μg/ml、约10μg/ml、约20μg/ml、约25μg/ml、约40μg/ml、约50μg/ml、约100μg/ml、约150μg/ml、约200μg/ml、约250μg/ml或约500μg/ml保持至少约2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小时或更长时间的方法，包括给有此需要的患者施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。在一个具体实施方案中，采用口服给药。血浆内的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物水平可以如通过高效液相层析法(HPLC)来进行测定。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种让患者内的约0.1μg/ml至约500μg/ml或约2μg/ml至约10μg/ml的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物血浆浓度保持至少约2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小时或更长时间的方法，包括给有此需要的患者以相同或递增的剂量(如本文所述的1X、1X、2X)每天施用一次、两次或三次有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。在一个具体实施方案中，采用口服给药。
在一个具体实施方案中，通过每天给有此需要的患者施用所述活性剂一次、两次或三次，让患者的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的血浆水平保持高于约2μg/ml至少约2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小时或更长。在一个具体实施方案中，通过每天给有此需要的患者施用所述活性剂一次、两次或三次，让患者的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的血浆水平保持约2μg/ml至约10μg/ml至少约2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小时或更长。在一个具体实施方案中，通过每天给有此需要的患者施用所述活性剂一次、两次或三次，让患者的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的血浆水平保持高于约10μg/ml至少约2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小时或更长。在一个具体实施方案中，采用口服给药。
4.5患者群
本发明方法和组合物对其起作用的具体患者群包括患有或者易患(如由于环境或基因原因)与无义突变相关的疾病，如本文所述的那些疾病的成年人和儿童。
在一个实施方案中，通过预筛选来确定所述患者或患者亲属患有无义突变(即UAA、UGA或UAG)。
4.6药物组合物和单位剂型
含有3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的药物组合物和单一单位剂型也包括在本发明中。本发明的具体剂型可适用于口服、粘膜(包括舌下、口腔、直肠、鼻或阴道)或胃肠外(包括皮下、肌内、大剂量注射、动脉内、或静脉内)给药。优选的药物组合物和单一单位剂型可适用于口服给药。
在一个实施方案中，药物组合物是固体口服剂型。在一个实施方案中，药物组合物是液体口服剂型。在一个实施方案中，本发明提供剂量、单位剂型和药物组合物，其中3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物是可以口服生物利用的。口服给药的优势可以包括易于给药、对剂量方案更高的患者顺从性、临床有效性、更少的并发症、更短的住院期和整体的费用节省。
在另一个实施方案中，本发明涉及含有约35mg至约1400mg、约125mg至约1000mg、约250mg至约1000mg、或约500mg至约100mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的单位剂型。在一个实施方案中，单位剂型包括3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物和一种或多种适合在瓶中悬浮于药学上可接受的溶剂(如水、牛奶、碳酸饮料、果汁、苹果酱、婴儿食品和婴儿配方)中的载体或赋形剂。
在另一个实施方案中，本发明涉及单位剂型含有35mg、50mg、70mg、100mg、125mg、140mg、175mg、200mg、250mg、280mg、350mg、500m、560mg、700mg、750mg、1000mg或1400mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的单位剂型。优选的单位剂型包括约125mg，约250或约1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。在一个实施方案中，单位剂型包括3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物和一种或多种适合在瓶中悬浮于药学上可接受的溶剂(如水、牛奶、碳酸饮料、果汁、苹果酱、婴儿食品和婴儿配方)中的载体或赋形剂。优选的单位剂型是粉剂和药囊剂。
虽然建议将本文描述的单位剂型保存在约2℃至约8℃之间，但在重新配制前可将单位剂型保存在室温下约48小时。在一个实施方案中，通过向含3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的瓶中直接添加约10mL水，让在悬浮液总体积内的浓度达到约25mg/mL，而实现250mg单位剂型的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的重新配制。对于1000mg单位剂型的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物来说，直接向含3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的瓶中加约20mL的水，让在悬浮液总体积内的浓度达到约50mg/mL。加入水之后，立刻将瓶子盖上，手动轻轻晃动至少约30秒，获得均一悬液。虽然在摄取前，该重新配制悬液可以在塑料瓶中保存长至24小时，但推荐在重新配制之后立刻使用该药物。如果在重新配制和给药之间延迟超过15分钟，建议再次手动轻轻晃动药瓶至少约30秒。建议直接从瓶子服用该悬液。如果是服用整个单位剂量，进一步建议将瓶子用水漂洗一次，将这些漂洗水摄入体内，以便保证在瓶中没有剩下粉剂。如果是服用部分量的单位剂量，那就可以用勺子或注射器获取合适剂量。
适合患者口服给药的本发明的单一单位剂型包括但不限于：小药囊；扁囊剂；片剂；囊片；胶囊，如软弹性明胶胶囊；锭剂；糖锭剂；分散剂；粉剂；溶液；液体剂型，包括悬液(例如，含水或不含水液体悬液)；乳液(例如，水包油乳液，或油包水乳液)；和酏剂。在一个实施方案中，本发明涉及含有超过饱和浓度的其它活性剂的胶体溶液或溶液。本发明所包括的具体剂型的这些和其它形式会相互不同，这对本领域的技术人员是显然的。参见Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing，Easton PA(1990)。
本发明进一步包括含3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的无水药物组合物和剂型。在低水份或低湿度的条件下，用无水或含低水分的各种成分，可制备本发明的无水药物组合物和剂型。
根据常规制药混合技术，通过使所述活性成分与至少一种载体或赋形剂密切混合，制备本发明的一般口服剂型。根据所希望的给药途径的剂型，赋形剂可采取多种形式。例如，适用于口服液体或气溶胶剂型的赋形剂包括但不限于水、乙二醇、油、醇、增味剂(如香草精)、防腐剂和着色剂。适用于固体口服剂型(例如，粉剂、片剂、小药囊、胶囊和胶囊药片)的赋形剂的实例包括，但不限于，淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、和崩解剂。
尤其优选的单位剂型是含有有效量活性剂的粉剂，所述粉剂适合与药学上可接受的载体(如水、牛奶、碳酸饮料、果汁、苹果酱、婴儿食品或婴儿配方)重新配制和后续口服给药。在一个具体实施方案子中，该粉剂任选地含有一种或多种与活性剂组合的载体或赋形剂。在另一个实施方案中，在给药或重新配制前，该粉剂保存在一密封容器中。而在另一个实施方案中，该粉剂装入胶囊内(如在明胶胶囊内)。
适合口服给药的液体制剂可采取，例如溶液、糖浆或悬液的形式，或者它们在使用前呈要用水或其它适用溶媒配制的干燥制品(如粉末或颗粒)形式。可用常规的方法，用药学上可接受的添加剂如悬浮剂(例如，山梨醇糖浆、纤维素衍生物或氢化可食用脂肪)；乳化剂(例如，卵磷脂或阿拉伯胶)；非水溶媒(例如，杏仁油、油酯、乙醇或分馏过的植物油)；和防腐剂(例如，甲基或丙基-对-羟基苯甲酸酯或山梨酸)制备这类液体制剂。需要时所述制剂也可含有缓冲盐、调味剂、着色剂和甜味剂。
可用于本发明固体口服剂型的赋形剂的实例包括但不限于粘合剂、填充剂、崩解剂和润滑剂。适用于药物组合物和剂型中的粘合剂包括但不限于玉米淀粉、马铃薯淀粉或其它淀粉、明胶、天然和合成的树胶例如阿拉伯胶、藻酸钠、藻酸、其它藻酸盐、粉状黄蓍胶、瓜尔胶、纤维素及其衍生物(例如，乙基纤维素、纤维素乙酸酯、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠)、聚乙烯基吡咯烷酮、甲基纤维素、预胶化淀粉、羟基丙基甲基纤维素(例如第2208、2906、2910号)、微晶纤维素、及它们的混合物。
优选的赋形剂包括LitesseUltra(精制葡聚糖)甘露醇、表面活性剂(聚乙二醇3350和Lutrolmicro F127(泊洛沙姆(poloxamer)407粉末))、崩解剂(交联聚维酮)、胶体二氧化硅(cab-o-sil)、Carbopol、聚丙烯酸和其它赋形剂(羟乙基纤维素，香草香料，硬脂酸镁[非牛源]和硅胶)。
适用于药物组合物和固体剂型中的填充剂的实例包括，但不限于，乳糖、滑石、碳酸钙(例如，颗粒或粉末)、微晶纤维素、粉末纤维素、葡萄糖结合剂、白陶土、木糖醇、硅酸、山梨糖醇、淀粉、预胶化淀粉及其混合物。本发明药物组合物中的粘合剂或填充剂一般以所述药物组合物或剂型的约50至约99％重量存在。
微晶纤维素的适用形式包括，但不限于，以AVICEL-PH-101、AVICEL-PH-103、AVICEL RC-581、AVICEL-PH-105出售的原料(从FMCCorporation，American Viscose Division，Avicel Sales，Marcus Hook，PA购得)及其混合物。具体粘合剂是以AVICEL RC-581出售的微晶纤维素和羧甲基纤维素钠的混合物。适用的无水或低水份赋形剂或添加剂包括AVICEL-PH-103TM和Starch 1500 LM。
5.实施例
以举例的方式给出下述非限制性实施例。
5.1实施例：3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸的制备
向3-氰基苯甲酸(44.14g，300mmol)的DMF(0.6L)溶液加入K2CO3(62.19g，450mmol)，室温下搅拌30分钟。用20分钟向该悬液加入碘代甲烷(28mL，450mmol)，于室温下再搅拌该反应混合物4小时。将该混合物倒入1.2L冰水中，搅拌30分钟，滤去沉淀物。将白色块状物溶解在甲醇(70mL)中，然后于冷水中再沉淀。得到产率为79％的白色粉末状所需产物(38g，LC/UV纯度99％)。1H-NMR(CDCl3)δ8.85(2H)，8.28(1H)，8.02(1H)，4.17(3H)。
室温下，向3-氰基苯甲酸甲酯(50g，310mmol)的乙醇(500mL)溶液加入50％含水羟胺(41ml，620mmol)。100℃下搅拌该反应混合物1小时，减压除去溶剂。将该油性残余物溶解在20/80乙醇/甲苯(50mL×2)中，然后再次浓缩。得到98％纯度(LC/UV)的白色粉末状所需酯(61g，定量产率)。1H-NMR(CDCl3)δ9.76(1H)，8.24(1H)，7.82(2H)，7.51(1H)，5.92(2H)，3.82(3H)。
于5℃，向3-(N-羟基甲脒基)-苯甲酸甲酯(60g，310mmol)的无水THF(200mL)溶液加入二异丙基乙胺(75mL，434mmol)，然后用20分钟向该混合物中添加2-氟代苯甲酰氯(48.1mL，403mmol)。室温下搅拌该反应混合物1小时。滤去沉淀物，减压浓缩该滤液。使残余物溶解在乙酸乙酯(400mL)中，再用水(200mL×2)洗涤。减压除去溶剂，于己烷中的60％乙酸乙酯中结晶所需产物，生成白色固体状所需产物(81g，产率83％)。1H-NMR(CDCl3)δ8.18(1H)，8.03(3H)，7.48(2H)，7.18(2H)，5.61(2H)，3.82(3H)。
在130℃下用Dean-Stark装置回流甲苯(500mL)中的44g 3-(N-2-氟代苯甲酰基甲脒基)-苯甲酸甲酯4小时。5℃下搅拌该反应混合物18小时。滤出白色沉淀，浓缩滤液，再于甲苯中结晶。得到白色固体状的99％纯度(LC/UV)的所需噁二唑(38g，产率92％)。1H-NMR(CDCl3)δ8.91(1H)，8.38(1H)，8.15(2H)，7.62(2H)，7.35(2H)，3.95(3H)。
向3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸甲酯(3.3g，11mmol)的THF(40mL)溶液加入1.5M含水NaOH(10mL，14mmol)。于100℃回流该反应混合物2小时。除去有机溶剂，用水(50mL)稀释含水溶液，接着用含水HCl酸化。过滤出白色沉淀，用冷水洗涤白色块状物，然后用冷冻干燥器干燥。得到98％纯度(LC/UV)的白色粉末状所需酸(3.0g，产率96％)。熔点242℃；IR 3000(芳香C-H)，1710(C＝O)；1H-NMR(D6-DMSO)δ8.31(IH)，8.18(2H)，8.08(IH)，7.88(2H)，7.51(2H)；13C-NMR(D6-DMSO)δ172.71，167.38，166.48，161.25，135.80，132.24，131.79，131.79，131.08，130.91，129.81，127.76，125.48，117.38，111.70；19F-NMR(D6-DMSO)δ109.7。
可用本领域所熟知的方法制备3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸的药学上可接受的盐。可按下述制备钠盐。向3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸甲酯(33g，111mol)的THF(400mL)溶液加入1.5M含水NaOH(100mL，144mmol)。于100℃回流该反应混合物2小时。减压除去有机溶剂，5℃下搅拌该含水溶液2小时。滤去白色沉淀物，浓缩滤液，再在水中沉淀。用冷水洗涤白色块状物，然后用冷冻干燥机干燥。得到98.6％纯度(LC/UV)的白色粉末状所需盐(33g，96％产率)。
5.2实施例2：无义突变介导的囊肿性纤维化的口服治疗
本实施例阐述了用于治疗无义突变介导的囊肿性纤维化的示例性给药方案。
提供悬3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的浮用香草味粉末。该药物按照现行生产质量管理规范(cGMP)制备。该制剂可以包括粘合剂和悬浮剂、表面活性剂、和各种有助于该制备过程的少量赋形剂。将该混合物放在用箔封口和白色塑料儿童安全盖密封的40mL塑料(高密聚乙烯[HDPE])瓶中。每瓶包括125、250或1000mg药物，占制剂总重量的25.0％。另外，该混合物可以包括在小药囊制剂内，如实施例6所述。赋形剂(和其占总制剂重量的比例)包括悬浮剂(LitesseUltra[精制葡聚糖]-25.7％)、可提供味道遮蔽的粘合剂(甘露醇-25.0％)、表面活性剂(聚乙二醇3350-12.8％和LutrolmicroF127[泊洛沙姆(poloxamer)407粉末]-3.7％)、崩解剂(交联聚维酮-5.0％)，而且可包括分别小于2％的其它赋形剂(羟乙基纤维素，香草香料，硬脂酸镁[非牛源]和硅胶)。瓶子标签注明了药物成分、批号、药量和保存条件(如室温或5℃-8℃冷藏)。
药物的给药剂量以毫克药物/每千克患者体量为基础。药物剂量可以与可用的药瓶大小相一致。给药方案可以确保实际的总给药量绝不会小于需要剂量50mg以下或者大于需要剂量250mg以上(即总保持在5mg/kg的给定剂量水平)。例如，重40kg的患者以4mg/kg的剂量治疗，计算出的所需剂量就是160mg。该患者会得到一瓶250mg瓶装药(总共250mg)或6.25mg/kg/剂量。同一患者当以晚上8mg/kg的剂量治疗时，计算出的剂量是320mg，会得到两瓶250mg瓶装药(总共500mg)或12.5mg/kg。同一患者当以10mg/kg的剂量治疗时，计算出的剂量是400mg，会得到两瓶250mg瓶装药(总共500mg)或12.5mg/kg。同一患者当以晚上20mg/kg的剂量治疗时，计算出的剂量是800mg，会得到一瓶1000mg瓶装药(总共1000mg)或25mg/kg。
在室温下完成药品重新配制和给药。在重新配制前不需要对药品进行特别加热。将药品与任何药学上可接受的溶剂(如水、牛奶、碳酸饮料、果汁、苹果酱、婴儿食品和婴儿配方)配置在一起。对每瓶250mg来说，加入～10mL水或其它药学上可接受的溶剂，让悬液总体积内的浓度约为25mg/mL。对每瓶1000mg来说，加入～20mL水或其它药学上可接受的溶剂，让悬液总体积内的浓度约为50mg/mL。在给干研究药物添加水或其它药学上可接受的溶剂之后，马上将药瓶盖上，手动剧烈晃动约60秒，获得均一悬液。虽然在摄取前，该悬液可以在塑料瓶中保存长至24小时，但推荐在重新配制之后立刻食用该药物。如果在重新配制和给药之间延迟超过15分钟，那就要再手动剧烈晃动药瓶约60秒。
只要需要即可对患有或易患囊肿性纤维化的患者进行连续给药治疗。表1示出3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的示例性给药方案，其中每天间隔6-、6-和12-小时在用餐时给药三次(如上午～7:00、下午～1:00和晚上～7:00)。在一个具体实施方案中，给患者施用如表1所述的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物连续14天，接着14天不进行治疗，接着后面的14天给药，接着后面的14天不进行治疗。在另一个具体实施方案中，给患者施用如表1所述的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物连续14天，每日三次剂量4mg/kg，4mg/kg和8mg/kg，接着14天不进行治疗，接着后面的14天以每日三次剂量10mg/kg，10mg/kg和20mg/kg给药，然后后面的14天不进行治疗。在某个实施方案中，每天按照表1所示进行单独的每天给药方案。在另一个实施方案中，在不同时间段，按照表1所示进行不同的给药方案。
表1.给药方案
| 1 | 2 | 3 | |
| 方案 | TID用餐时给药 | TID用餐时给药 | TID用餐时给药 |
| 日程表 | 连续每日给药 | 连续每日给药 | 连续每日给药 |
| 时间 | 剂量 | ||
| 上午～7:00 | 4mg/kg | 7mg/kg | 10mg/kg |
| 下午～1:00 | 4mg/kg | 7mg/kg | 10mg/kg |
| 晚上～7:00 | 8mg/kg | 14mg/kg | 20mg/kg |
缩写：TID＝每日三次
优选患者服药是在餐后30分钟内进行的；理想情况是，服药是间隔约6-、6和12-小时进行的(如，在早餐后的上午～7:00，在午餐后的下午～1:00，和在晚餐后的晚上～7:00)。患者服药是用所需量的水或其它药学上可接受的溶剂填充每个药瓶，盖上盖并晃动各药瓶约60秒，然后根据剂量摄入所需要的药瓶数量和尺寸的药物。一次摄取一剂完整的重新配制药物。在服药后，将每个给药瓶用水或另一种药学上可接受的溶剂半填充，盖好盖并晃动，让患者摄入瓶中的水或其它药学上可接受的溶剂。这种冲洗步骤应进行一次。在一个特定的实施方案中，提供的药物是小药囊。在这些实施方案中，在给药前，可对适量的药物进行称重和测量，并和合适的药学上可接受的溶剂混合。
5.3实施例3：无义突变介导的杜氏肌营养不良的口服治疗
本实施例阐述了用于治疗无义突变介导的杜氏肌营养不良的示例性给药方案。
提供悬3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的浮用香草味粉末。该药物按照现行生产质量管理规范(cGMP)制备。该制剂可以包括粘合剂和悬浮剂、表面活性剂、和各种有助于该制备过程的少量赋形剂。将该混合物放在用箔封口和白色塑料儿童安全盖密封的40mL塑料(高密聚乙烯[HDPE])瓶中。每瓶包括125、250或1000mg药物，占制剂总重量的25.0％。另外，该混合物可以包括在小药囊制剂内，如实施例6所述。赋形剂(和其占总制剂重量的比例)包括悬浮剂(LitesseUltra[精制聚葡萄糖]-25.7％)、可提供味道遮蔽的粘合剂(甘露醇-25.0％)、表面活性剂(聚乙二醇3350-12.8％和LutrolmicroF127[泊洛沙姆(poloxamer)407粉末]-3.7％)、崩解剂(交联聚维酮-5.0％)，而且可包括分别小于2％的其它赋形剂(羟乙基纤维素，香草香料，硬脂酸镁[非牛源]和硅胶)。瓶子标签注明了药物成分、批号、药量和保存条件(如室温或5℃-8℃冷藏)。
药物的给药以毫克药物/每千克患者体量为基础。可以计算出与给患者施用的药物总毫克量相对应的总体积。例如，如果一名30公斤重患者按照4mg/kg计算，那么需要的剂量就是30×4＝120mg。该患者应该用250mg的剂量瓶服药。因为250mg剂量瓶中的每毫升悬液包含250/10＝25mg药物，所以对于每位4mg/kg剂量来说，该患者应服用120/25＝～5mL的悬液。当同一患者以晚间8mg/kg的剂量治疗时，算出的剂量是240mg，需要得到一瓶250mg瓶装药(10mL悬液)。应该用塑料的口服给药注射器从药瓶中吸出各种剂量的悬液体积。为了将＜10(对250mg瓶来说)或＜20mL(对1000mg瓶来说)的微量体积转移，应该将研究药物瓶中所需的量吸到合适类型和大小的给药注射器(如Baxa，Exacta-Med，有刻度的、不含橡胶的塑料口服给药注射器)中，并用同一个注射器给药。在药物重新配制的24小时内，可以从同一悬液瓶中取出＞1剂量；但是，重新配制药物的保存时间不应超过24小时，这样该材料可以用于再给相同的患者多次给药。如果1天内服用的药物总量超过了10mL(对250mg瓶装药来说)或20mL(对1000mg瓶装药来说)的重新配制药物，那么每次给药就要用一瓶新药。
在室温下完成药品重新配制和给药。在重新配制前不需要对药品进行特别加热。将药品与任何药学上可接受的溶剂(如水、牛奶、碳酸饮料、果汁、苹果酱、婴儿食品和婴儿配方)配置在一起。对每瓶250mg来说，加入～10mL水或其它药学上可接受的溶剂，让悬液总体积内的浓度约为25mg/mL。对每瓶1000mg来说，加入～20mL水或其它药学上可接受的溶剂，让悬液总体积内的浓度约为50mg/mL。在给干的研究药物添加水或其它药学上可接受的溶剂之后，马上将药瓶盖上，手动剧烈晃动约60秒，获得均一悬液。虽然在摄取前，该悬液可以在塑料瓶中保存长至24小时，但推荐在重新配制之后立刻食用该药物。如果在重新配制和给药之间延迟超过15分钟，那就要再手动剧烈晃动药瓶约60秒。
只要需要即可对患有或易患杜氏肌营养不良的患者进行连续给药治疗。表2示出3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的示例性给药方案，其中每天间隔6-、6-、和12-小时用餐时给药三次(如上午～7:00，下午～1:00和晚上～7:00)。在一个具体实施方案中，给患者施用如表2所述的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物连续28天。在某些实施方案中，每天按照表2所示进行单独的给药方案。在另一些实施方案中，在不同天数上，按照表2所示进行不同的给药方案。在某些实施方案中，提供的药物是小药囊。在这些实施方案中，在给药前，可对适量的药物进行称重和测量，并与合适的药学上可接受的溶剂混合。
表2.给药方案
| 1 | 2 | 3 | |
| 方案 | TID用餐时给药 | TID用餐时给药 | TID用餐时给药 |
| 日程表 | 连续每日给药 | 连续每日给药 | 连续每日给药 |
| 时间 | 剂量 | ||
| 上午～7:00 | 4mg/kg | 7mg/kg | 10mg/kg |
| 下午～1:00 | 4mg/kg | 7mg/kg | 10mg/kg |
| 晚上～7:00 | 8mg/kg | 14mg/kg | 20mg/kg |
缩写：TID＝每日三次
患者服药是在饭后30分钟内进行的；理想情况是，服药是间隔约6-、6和12-小时间隔进行的(如，在早餐后的上午～7:00，在午餐后的下午～1:00，和在晚餐后的晚上～7:00)。患者服药是用所需量的水或其它药学上可接受的溶剂填充每个药瓶，盖上盖，每瓶晃动约60秒，用口服给药注射器从瓶中吸出适量体积，直接从该给药注射器服药。根据剂量，一次服用一剂完整计算体积的重新配制药物。服药后，将该给药注射器填满与剂量体积相同体积的水或其它药学上可接受的溶剂，并让患者服用。这种冲洗步骤应进行一次。
治疗效力可通过测定足肌伸趾短肌(EDB)活组织检查中的营养不良蛋白水平基本测量中的变化来确定。
5.4实施例4：3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物无香剂的制备
提供3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物悬的浮用粉末。该药物按照现行生产质量管理规范(cGMP)制备。将该药物与粘合剂和悬浮剂、表面活性剂、和各种有助于该制备过程的少量赋形剂混合。将该混合物放在用箔封口和白色塑料儿童安全盖密封的40mL塑料(高密聚乙烯[HDPE])瓶中。每瓶包括约35mg、约70mg、约125mg、约140mg、约175mg、约250mg、约280mg、约350mg、约560mg、约700mg、约1000mg或约1400mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。赋形剂(和其占总制剂重量的比例)任选包括悬浮剂(LitesseUltra[精制葡聚糖]-25.7％)、可提供味道遮蔽的粘合剂(甘露醇-25.0％)、表面活性剂(聚乙二醇3350-12.8％和Lutrolmicro F127[泊洛沙姆(poloxamer)407粉末]-3.7％)、崩解剂(交联聚维酮-5.0％)，而且可包括分别小于2％的其它赋形剂(胶体二氧化硅、羟乙基纤维素、硬脂酸镁[非牛源]和硅胶)。瓶子标签注明了药物成分、批号、药量和保存条件(如室温或5℃-8℃冷藏)。在给药前，将药品与合适体积的药学上可接受的溶剂(如水、牛奶、碳酸饮料、果汁、苹果酱、婴儿食品或婴儿配方)重新组配。
5.5实施例5：3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物香型剂的制备
提供3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的悬浮用香草香型(通过添加香草精)粉末。该药物按照现行生产质量管理规范(cGMP)制备。将该药物与粘合剂和悬浮剂、表面活性剂、和各种有助于该制备过程的少量赋形剂混合。该混合物放在用箔封口和白色塑料儿童安全盖密封的40mL塑料(高密聚乙烯[HDPE])瓶中。每瓶包括约35mg、约70mg、约125mg、约140mg、约175mg、约250mg、约280mg、约350mg、约560mg、约700mg、约1000mg或约1400mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。赋形剂(和其占总制剂重量的比例)任选包括悬浮剂(LitesseUltra[精制聚葡萄糖]-25.7％)、可提供味道遮蔽的粘合剂(甘露醇-25.0％)、表面活性剂(聚乙二醇3350-12.8％和LutrolmicroF127[泊洛沙姆(poloxamer)407粉末]-3.7％)、崩解剂(交联聚维酮-5.0％)，而且可包括分别小于2％的其它赋形剂(胶体二氧化硅、羟乙基纤维素、香草香料、硬脂酸镁[非牛源]和硅胶)。瓶子标签注明了药物成分、批号、药量和保存条件(如室温或5℃-8℃冷藏)。在给药前，将药品与合适体积的药学上可接受的溶剂(如水、牛奶、碳酸饮料、果汁、苹果酱、婴儿食品或婴儿配方)重新组配。在重新配制前，该药品可在室温下储存长至48小时。
本文引述了大量参考文献，其整体全部引入本文以供参考。
5.6实施例6：3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的药囊剂
用含多个薄层的囊或药囊包裹混合物，所述多个薄层可包括纸层，铝箔层和沙林(surlyn)层。每个药囊包含约125mg、约250mg、约500mg或约1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。赋形剂(和其总制剂重量比)任选地包括下述表3和表4所示中的任一种。
表3.制剂
| 成分 | 重量％ |
| 3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物 | 25.0 |
| LitesseUltra | 24.75 |
| 聚乙二醇 | 12.8 |
| LutrolMicro | 3.7 |
| 甘露醇 | 25.0 |
| 羟乙基纤维素 | 1.5 |
| 香草香料 | 0.75 |
| 交联聚维酮 | 5.0 |
| 胶体二氧化硅 | 0.5 |
| 硬脂酸镁 | 0.5 |
| 滑石(Talc) | 0.5 |
表4.制剂
| 成分 | 重量％ |
| 3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物 | 25.0 |
| LitesseUltra | 25.65 |
| 聚乙二醇 | 12.8 |
| LutrolMicro | 3.7 |
| 甘露醇 | 25.0 |
| 羟乙基纤维素 | 1.5 |
| 香草香料 | 0.75 |
| 交联聚维酮 | 5.0 |
| 胶体二氧化硅 | 0.1 |
| 硬脂酸镁 | 0.5 |
药囊标签注明了药物成分、批号、药量和保存条件(如2℃-8℃冷藏)。在给药前，将适量的药品与合适体积的药学可接受溶剂(如水、牛奶、碳酸饮料、果汁、苹果酱、婴儿食品或婴儿配方)重新组配。在重新配制前，该药品可在室温下储存长至48小时。
5.7实施例7：跨上皮电位差(TEPD)分析
通过评估跨上皮生物电特性来测量跨上皮电位差(TEPD)，又称为鼻部电位差，会获得直接在分泌上皮细胞中钠和氯化物转运的灵敏度评价(Knowles等，1981，N.Engl.J.Med.305(25)：1489-95；Knowles等，1995，Hum.Gene Ther.6：445)。用标准化技术，在各鼻孔内进行TEPD(Standaert等，2004，Ped.Pulm.37：385-92)。在该过程中，用小型塑料导管评价跨鼻孔内鼻粘膜细胞外部细胞膜的电位差。TEPD值用毫伏或mV表示。氯化物电导等于或电性低于-5.0mV通常认为是正常范围。对沿下鼻甲划线的鼻上皮细胞进行TEPD评价，因为这些细胞比沿下呼吸道划线的呼吸上皮细胞更容易评价，而且显示这些细胞具有相同的离子转运特性(Knowles等，1981，Am.Rev.Respir.Dis.124(4)：484-90)。还可以对直肠上皮细胞和下呼吸道上皮细胞进行TEPD评价。由于CFTR蛋白在转运氯离子跨细胞膜中的作用，而且由于缺乏这种蛋白，囊肿性纤维化患者会有异常TEPD氯化物电导。作为一个技术指标(endpoint)，TEPD有其优势，因为它能检测氯化物转运的变化，该变化定量整合了呼吸道细胞中CFTR的存在、功能活性和顶端位置。另外，它是直接测量CFTR活性，不太可能会受CF的辅助疗法或治标疗法影响(全身给药的氨基糖苷类抗生素可能除外)。重要的证据是证明TEPD值可能与肺功能障碍及放射照相异常有关(Ho等，1997，Eur.Respir.J.10(9)：2018-22；Fajac等，1998，Eur.Respir.J.12(6)：1295-300；Sermet-Gaudelus等，2005，Am.J.Respit.Crit.Care Med.171(9)：1026-1031)。尤其是TEPD评估异丙肾上腺素诱导的CFTR氯化物活性显示出比在确定FEV1中的基因型和放射性评分更好的预测值(Ho等，1997，Eur RespirJ.10(9)：2018-22)。根据基准条件，TEPD评估的氯化物通道活性很难在CF患者中自发正常化；预计观察到的TEPD评估的氯化物通道活性的任何改进都会给CFTR校正疗法的药理活性予以特异性地指示。因此，它已成为旨在校正CFTR功能障碍的药理学和基因置换1-2期研究中的主要技术指标(Peckham等，1995，AJ.Clin Sci (London).89(3)：277-84；Wilschanski等，2003，N.Engl.J.Med.349(15)：1433-41)。
5.8实施例8：CFTR免疫荧光
利用标准化技术对患者的各鼻孔进行鼻腔粘膜刮除的采集和处理，通过免疫荧光和量化CFTR mRNA来测量CFTR蛋白(Clancy等，2001，Am.J.Respir.Crit.Care Med.163(7)：1683-92；Amaral等，2004，J Cyst.Fibros.3Suppl2：17-23)。正常上皮细胞(如来自鼻腔粘膜刮层)的免疫荧光染色揭示了大部分CFTR蛋白存在于顶端表面。在无义突变调节的CF动物模型中或在患无义突变调节的CF的患者中，CFTR染色不存在(如在患过早终止纯合突变的患者中)或者主要在核周区域内观察到(如在患ΔF508突变的患者内，ΔF508突变防止正常的CFTR细胞内运输)。通过免疫荧光评估，在动物模型和患者体内成功产生功能性野生型或非野生型CFTR蛋白都与顶端上皮CFTR蛋白的再现相关联(Clancy等，2001，Am.J Respir.Crit.Care Med.163(7)：1683-92；Wilschanski等，2003，N.Engl.J.Med.349(15)：1433-41)。
5.9实施例9：肺功能检查
肺功能检测，包括FEV1、FVC、和MEF25-75用标准肺活量测定程序来测量。肺功能评估(包括MEF25-75、FVC、特别是FEV1)已被公认是CF患者明确的临床技术指标(食品药品监督管理局，62nd Anti-InfectiveDrugs Advisory Committee.Discussion of NDA for tobramycin solution forinhalation(Tobi)for the management of cystic fibrosis patients.November，1997；Tiddens，2002，Pediatr.Pulmonol.34(3)：228-31)。FEV1和其它肺功能检查措施已被证明与就卫生保健利用来说的疾病严重度，预测发病率和IV抗生素使用有关，而且指示着CF相关死亡率的风险(食品药品监督管理局，62nd Anti-Infective Drugs Advisory Committee.Discussion of NDA fortobramycin solution for inhalation(Tobi)for the management of cysticfirosis patients.November，1997)。肺功能检查易于管理(即使对年仅7岁的患者)，而且使用的标准化设备和技术是可广泛获得的。考虑患者年龄、身高、和性别，用建好的规范方程进行解释。FEV1改善已公认能定量地演示有意义的CF临床益处，而且曾作为监管机构批准阿法链道酶(dornase alfa)和吸入式托普霉素的依据(食品药品监督管理局，62ndAnti-Infective Drugs Advisory Committee.Discussion of NDA fortobramycin solution for inhalation(Tobi)for the management of cysticfibrosis patients.November，1997)。
5.10实施例10：3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸口服治疗无义突变调节的囊性纤维化的II期研究
病人必须符合下列全部条件才有资格参与研究：
1.在确切异常汗液试验的书面证据的基础上，诊断
CF(利用毛果云香碱离子电渗试验，汗液氯化物＞60mEq/公升(LeGrys，Sweat testing：Sample collection and quantitativeanalysis：Approved guidelines-Second edition.NationalCommittee for Clinical Laboratory Standards 2000；Vol 20：14))；
2.利用TEPD测定的异常氯化物分泌(高于用无氯化物的氨氯吡脒和异丙肾上腺素进行的氯化物分泌的-5mV TEPD评估值)；
3.在cftr基因的一个等位基因上存在无义突变；
4.提供文件证明已经进行了cftr基因测序；
5.年龄≥18周岁；
6.体重≥40kg；
7.根据年龄、性别和身高预测FEV1≥40％(Knudson标准)(Knudson，1983，Am.Rev.Respi.rDis.127：725-734)；
8.在室内空气下的氧饱和度(由脉冲血氧定量法测定)≥92％；
9.男性和女性患者愿意在研究药品给药和随后的时间段内如果不是无菌手术避免性交或使用阻隔或医学方法避孕；
10.阴性怀孕测试(对于潜在的适龄生育女性)；
11.愿意并有能力遵守预定的访问、药品给药计划、研究程序(包括TEPD测量，临床实验室测试，和PK采样)、和研究限制；
12.有能力提供书面知情同意书；和
13.亲自签名并注明日期的知情同意文件的证据，表明该患者已被告知该试验的全部相关方面。
存在下列任何一种情况就排除病人参与研究：
1.事先或正存在的医学状况(如伴随疾病，精神状况，酗酒，滥用药物)、医疗史、身体结果、ECG结果、或化验异常，以研究人员的观点，可能会影响该患者的安全，从而导致不太可能让治疗过程或后续工作完成，或有可能妨碍研究结果的评估；
2.在开始研究治疗前2周内正患有急性疾病，包括急性上或下呼吸道感染；
3.在开始研究治疗前2个月内有肺部疾病重大并发症史(包括近大块咳血或气胸)；
4.筛检胸部x线异常提示除CF之外的临床上显著的活跃性肺疾病，或新的重大异常如肺不张或胸腔积液，这可能暗示着继发于CF的临床上显着的活跃性肺病变；
5.乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎抗体检测、或人免疫缺陷病毒(HIV)检测阳性；
6.血红蛋白＜10g/dL；
7.血清白蛋白＜2.5g/dL；
8.肝功能异常(血清总胆红素＞正常上限，或血清ALT、AST或GGT＞正常上限2.0倍)；
9.肾功能异常(血肌酐＞正常上限1.5倍)；
10.孕期或母乳喂养；
11.固体器官或血液移植史；
12.在开始研究治疗前的14天内，接触过另一种研究药物；
13.正在参与任何其它治疗性临床试验；
14.正在使用噻唑二酮过氧化物酶体增殖物激活的受体γ(PPARγ)激动剂，如罗格列酮(Avandia或等同物)或吡格列酮(Actos或等同物)；
15.在开始研究治疗前的14天内，鼻腔药物改变(包括使用皮质类固醇，色甘酸，异丙托溴铵，苯肾上腺素，或羟甲唑啉)；
16.在开始研究治疗前的14天内，用全身或吸入性类固醇的治疗改变；
17.在开始研究治疗前的14天内或研究治疗期间，使用或要求用吸入性庆大霉素或丁胺卡那霉素；或
18.在开始研究治疗前的14天内，需要用全身性氨基糖苷类抗生素。
3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸以本文所述提供的制剂提供。按照下文的56天日程表，给15名患者(12名在以色列进行II期试验，3名在美国进行II期试验；7名患者是男性，8名女性；患者中位数年龄22岁；而且所有患者都有多种囊性纤维化病征和症状，包括一定程度的肺部机能障碍)口服施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸：每天三次(TID)以4mg/kg，4mg/kg和8mg/kg施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸14天，随后14天不进行治疗(第1循环，由28天组成)，接着每天三次(TID)以10mg/kg，10mg/kg和20mg/kg施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸14天，随后14天不进行治疗(第2循环，由28天组成)。
用上面所述的步骤评价临床终点。在治疗前，在第1循环和第2循环的第14和28天进行TEPD测定。在治疗前，在第1循环和第2循环的第14和28天，对各患者各鼻孔进行鼻粘膜刮除采集。在正在以色列进行的研究中，在治疗前，在第2循环的第1天，第1循环的第13或14天和第2循环的第13或14天进行肺部试验测量，包括FEV1，FVC和MEF25-75，在正在美国进行的研究中，在治疗前，在第2循环的第13或14天对同样参数进行测量。
TEPD氯化物电导的平均变化。该值是从治疗期开始至结束，各研究参与者的TEPD氯化物电导变化的平均值。例如，如果三名参与者各自的TEPD氯化物电导变化是-7.0mV，-2.0mV和-9.0mV，那么这些参与者的TEPD氯化物电导平均变化就是-6.0mV。
患者有氯化物电导反应的百分比。该百分比是在用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸治疗结束时，证明患者有TEPD氯化物电导反应的百分比。对于该试验的目的来说，氯化物电导反应定义为TEPD氯化物电导改善至少-5mV。例如，在基线为+1.0mV的TEPD氯化物电导值，治疗结束时TEPD氯化物电导值-6.0mV的患者内，该TEPD氯化物电导改善就是-7.0mV，代表一种氯化物电导反应。
患者TEPD氯化物电导值改善至正常范围内的百分比。如上所述，通常认为氯化物电导等于或电性低于-5.0mV为正常范围。这样，患者的基线TEPD氯化物电导值为+1.0mV，就认为该患者具有异常值，因为该值电性高于-5.0mV。如果，在治疗结束时，该患者的TEPD氯化物电导值改善为-6.0mV，那么就代表改善到正常范围内，因为该改善值的电性低于-5.0mV。
基于患者性别，年龄和身高，研究开始时的平均FEV1值是66％正常，研究开始时的平均FVC值是80％正常。进行分析的15名患者中有14名患者呼吸道移生绿脓假单胞菌，这是一种在囊性纤维化患者中常见的细菌感染，可导致重症肺炎。另外，这15名患者中的14名患者胰功能不全，需要进行慢性胰酶替代治疗。患者体重轻，研究开始时的平均体重是58.3kg。
表5显示5名患者的TEPD结果。对于每次测量来说，结果是在最佳鼻孔和两鼻孔平均值基础之上呈现的。从历史观点来说，通常的TEPD试验结果都是在最佳鼻孔基础之上呈现的。但是，最近囊性纤维化疗法发展网(Cystic Fibrosis Therapeutics Development Network)提供的指导方案建议TEPD结果应该以两个基础呈现。对患不同类型CFTR基因无义突变的患者内的TEPD氯化物电导的改善进行了标注。
表5
TEPD结果 低剂量水平 高剂量水平
结果 p-值 结果 p-值
TEPD氯化物电导平均变化：
最佳鼻孔.................................. -9.0mV ＜0.001 -6.4mV 0.010
两鼻孔平均................................ -6.7mV ＜0.001 -4.4mV 0.023
TEPD氯化物电导改善≥-5mV的
患者数量：
最佳鼻孔................................. 9/15(60％) ＜0.001 8/15(53％) ＜0.001
两鼻孔平均.......................... 6/15(40％) 0.005 7/15(47％) ＜0.001
TEPD氯化物电导改善为正常的
患者数量：
最佳鼻孔 8/15(53％) 0.008 8/15(53％) 0.008
两鼻孔平均 6/15(40％) 0.032 7/15(47％) 0.016
统计上的低和高3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸剂量水平的治疗效果并不显著，这说明进一步加大剂量可能并不需要，甚至较低剂量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸就能有效提高TEPD氯化物电导。还观察到了二级技术指标统计学上的显著结果和阳性趋势。具体地说，虽然该试验对于检测二级技术指标统计学上的显著变化并不十分有力，但观察到了从研究开始至较高剂量治疗循环结束时，患者平均FEV1、FVC和体重统计学上的显著改善。表6显示了该结果。由于肺功能变化，所以将一名患者除去，因为该患者在高剂量治疗循环结束时无法进行肺功能测量。
表6
技术指标 研究开 高剂量治疗结 变化 p-值
始 束
肺功能(根据性别、年
龄和身高，以正常百分
比表示)：
平均FEV1 65.8％ 69.1％ 3.3％ 0.015
平均FVC 80.2％ 85.1％ 4.9％ 0.037
体重 58.3kg 59.0kg 0.7kg 0.012
另外，虽然患者症状变化没有通过利用基本生活条件调查表来进行正式测量，但试验观察员还是需要询问患者囊性纤维化症状的变化。在包括在该临时分析的15名患者中，据报道有6名健康全面改善，据报道有6名咳嗽减弱，据报道有10名粘液浓度降低且粘液易于清除。
5.11实施例11：采用免疫荧光法和Western印迹检测抗肌营养不良蛋白(dystrophin)、肌糖蛋白(sarcoglycan)、肌营养不良蛋白聚糖表达
治疗前，在局部麻醉和有意识的镇静状态下(在某些情况下，可能需要全身麻醉)，对来自一只脚的EDB肌肉和上层皮肤进行活检，在治疗最后一天对来自另一只脚的EDB肌肉和上层皮肤进行活检。活检步骤按照标准化技术进行(Stedman，2000，Human Gene Therapy 11：777-90)。在该步骤中，将整个肌腹(只要可能)去掉。在治疗前采集活检时，将所述肌肉标本分成至少3份段片，治疗最后一天采集的活检标本分成至少2份段片。将活检标本置于沾有林格氏生理盐水的telfa纱布海绵之上。在低倍数的立体解剖显微镜下观察该活检标本，以便建立纤维取向。然后，只要可能就用一锋利手术刀沿一截面横切(垂直于纤维方向)，静止2分钟让痉挛停止。随后，将该样品冷冻在液氮冷却的异戊烷内，转移至液氮储存库并保持距离液/汽界面上方1英寸长达2分钟，使其缓慢冷却，在浸泡在液氮中前让异戊烷蒸发，用预冷(在液氮中和储存在干冰上)的箔包裹，该箔用研究编号、现场编号、患者编号、日期、患者英文缩写、和足侧(右脚或左脚)进行标记。
所有样品容器都清楚地以能鉴定出对象和采集日期的方式进行标识。标签固定在样品容器中的方式能防止标签脱落。程序完成后，为了进行分析/培养/重要观察，立刻发送样品。为了检测抗肌营养不良蛋白，使用3种可识别该蛋白C-端、N-端、和棒状结构域的商购抗体。为了检测肌糖蛋白和肌营养不良蛋白聚糖复合物，当可能时使用针对α-、β-、γ-和δ-肌糖蛋白，和β-肌营养不良蛋白聚糖的商购抗体。分析中使用落射荧光(Epifluorescence)显微镜；在荧光强度对比正常肌肉标本正常化后，用CCD相机捕获图像。数字化储存影像，保存用于今后观察和完成研究后进行最终评价。还可以用同样的抗体，对组织进行加工，以便用Western印迹检测抗肌营养不良蛋白，肌糖蛋白和β-肌营养不良蛋白聚糖。捕获显微图像，保存用于今后观察和完成研究后进行最终评价。剩下的肌肉组织样本保存作参与DMD的mRNA和蛋白的验证性实验。用免疫染色和Western印迹进行蛋白检测。
一般地，对DMD对象进行肌肉活检，并将其作为研究情况下的诊断成分和治疗效力的量度标准。选择EDB是因为它不是日常活动的必需肌肉，因此取样该肌肉不会使对象产生不良的功能结果。因为它很少被使用，因此EDB肌肉就不太可能表现出大幅的肌肉纤维化替换，从而可作为用于检测抗肌营养不良蛋白产生的适合组织。EDB肌肉样本提供了另外的实际优势，因为它很容易识别，可以在局部麻醉下进行解剖，并提供足够量的组织进行所需分析。免疫荧光和Western印迹是对肌肉活检标本进行的常规测试，从而可以确定完整长度的抗肌营养不良蛋白的存在与否。认为缺失抗肌营养不良蛋白就确诊为DMD。认为抗肌营养不良蛋白复位，定位至肌肉膜，是临床前和临床药理活性的直接测量方法(Barton-Davis，1999，J.Clin.Invest.104(4)：375-81；Politano，2003，Acta Myol.22(1)：15-21)。
5.12实施例12：上下肢肌测量法(myometry)
按照下述标准化步骤，用手提式肌收缩计进行上下肢肌测量(Beenakker，2001，Neuromuscul.Disord.11(5)：441-6；Hyde，2001，Neuromuscul.Disord.11(2)：165-70)。建议(取决于对象的基本功能状态)评估的肌肉组织包括髋关节外展肌、膝关节伸肌、肘屈肌和伸肌、和手部握力。可以做两侧评估，对各侧各肌肉组的三次测量进行记录。对治疗前，治疗的第二至最后一天，治疗后的后续时期的这些参数进行监测。在治疗前及治疗期间，在肌肉活检之前进行肌测量程序。
使用手提式测力计的肌测量评估是一种测量动态和非动态对象肌肉力量灵敏度高且可重现的方法(Beenakker，2001，Neuromuscul.Disord.11(5)：441-6；Hyde，2001，NeuromusculDisord.11(2)：165-70)。肌营养不良患者的测量评估者间信度(Inter-rater reliability)很高(Stuberg，1988，Phys.Ther.1988 68(6)：977-82；Hyde，2001，Neuromuscul.Disord.11(2)：165-70)。与人工肌肉力量测试相比，肌测量法是一种较灵敏且复杂性较低的肌肉功能测定法(McDonald，1995，Am.J.Phus.Med.Rehabil.(增刊5)：S70-92)。评估人员(如医师或物理治疗师)可以很容易的进行试验。
5.13实施例13：定时功能试验
定时功能试验包括从平躺姿势到站立所用时间、步行10米所用时间、爬登4节标准尺寸梯级所用时间(Mendell，1989，N.Engl.J.Med.320(24)：1592-7；Griggs，1991，Arch.Neurol.48(4)：383-8)。在进行治疗前，治疗第二天至最后一天，治疗后的后续时期对这些参数进行监测。在治疗前及治疗期间，在进行肌肉活检前进行定时功能测试。
这些试验(从平躺姿势到站立所用时间、步行10米所用时间、和爬登4节标准尺寸梯级所用时间)为动态对象的功能能力提供另一种测量。该试验可再现，容易实施，易于管理，且有文件记载对用类固醇的治疗干预有反应(Mendell，1989，N.Engl.J.Med.320(24)：1592-7；Griggs，1991，Arch.Neurol.48(4)：383-8)。
5.14实施例14：血清CK水平
血清CK活性是利用商购的NADH-联动力学检测进行评定的(Diagnostic Chemicals Ltd.，Oxford，CT)。血清CK水平是在治疗前、治疗期间的第1天(第一剂前)、第7天、第14天、第21天、和第27天、和治疗后的第42天和第56天进行测定的。杜氏肌营养不良症中的血清CK增高，因此是该疾病一种非常容易测量的诊断标记，且可作为药物药理活性的潜在生物标记(Mendell等，1989，New Eng.J.Med.320(24)：1592-1597)。
血清CK为全身肌肉完整性提供了一种量度。DMD患者血清中的该酶浓度增高50至100倍，对其水平进行测量可用于该疾病的早期诊断(Worton，The muscular dystrophies，In：Scriver C.R.，Beaudet A.L.，Sly W.S.，Valle D，eds.The metabolic and molecular basis of inherited disease.8th ed.Vol.4.New York：McGraw-Hill，2001：5493-523)。对血清CK水平进行测量可以监测该疾病的进展并作为一种肌肉损害标记物。虽然运动诱发的变化会导致变异性(Politano，2003，Acta.Myol.22(1)：15-21)，但该标记物有优势，因为它是可以很容易地、重复地和频繁地评估广泛使用的和可靠的检测。以前的临床研究显示，血清CK降低与用类固醇治疗时肌肉强度改善相一致(Reitter，1995，Brain Dev.17 Suppl：39-43)。
5.15实施例15：皮纤维原细胞和肌细胞培养
对来自患者的肌肉组织和皮肤进行研究，以确定在来自该患者的主要肌肉培养物中是否与体内产生抗肌营养不良蛋白相一致产生抗肌营养不良蛋白。当在体外通过用Myo-D-生成表达构建体(Wang，2001，Development 128：4623-33)转染而分化成肌细胞时，这些试验会评价来自患者的皮纤维原细胞是否会证明抗肌营养不良蛋白产生是对治疗有反应。皮细胞反应与临床活性之间的相关性可以提供一种简单易得的预测性试验，该试验可以选出用于治疗的未来患者或用于筛选出治疗DMD的新制剂。按如下方式培养细胞。在运输过程中，活检材料储存在人增殖培养基(或PBS)中，如果需要再置于冰上较长时间。如果该组织在24小时内不需要做好准备，则可将该材料冷冻在含10％DMSO的人增殖培养基中，并储存在液氮(或干冰)中。当该组织需要做准备调配成肌细胞培养物时，将活检材料用PBS洗净。PBS可保持该组织足够湿度地加入到培养皿中。将该活检材料用保险刀片彻底切碎，获得几乎均一的悬液。每克组织加入约2毫升的胶原酶/分散酶/CaCl2溶液，继续绞碎几分钟(如5×5×5mm的肌肉活检用1毫升的酶溶液)。将悬液转移至无菌试管，37℃下水浴孵育，直到混合物成为良好浆液(如约20至30分钟)。孵育时，再用吸量管上下吸取几次使悬液均一。如果需要，可以通过用注射器上下吸取来进行额外的重悬浮循环。将8mL的人增殖培养基加到该悬液内混合。该混合物1200rpm离心10分钟。细胞沉淀物用3ml的人增殖培养基重悬浮。将细胞植入用胶原包被的6孔平板中的一孔内，或根据材料的量，植入T25胶原包被的培养瓶内。细胞于37℃，5％CO2培育48小时。移去未吸附细胞，并转移至胶原包被的另一孔内(作备用)。向第一孔内加入新鲜的增殖培养基(3ml)。培育第一孔内的细胞汇合，并培育获得两瓶汇合的T75培养瓶。为了便于储存，可将细胞从T75培养瓶冷冻入4个含1ml冷冻培养基的冷冻管内。培养物的肌原细胞含量通过进行结蛋白染色来确定。如果结蛋白阳性细胞百分比太低，那就需要预植该培养物。
5.16实施例16：3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸口服治疗杜氏肌营养不良症的II期研究
患者必需满足下述全部条件才有资格参与研究：
1.在5岁呈现的临床表型基础上，诊断杜氏肌营养不良症(DMD)，呈现临床表型是血清CK增高，肌肉活检中缺失抗肌营养不良蛋白(用识别肌营养不良蛋白蛋白质C末端的抗体，肌纤膜染色阴性)；
2.在抗肌营养不良蛋白基因中存在无义突变；
3.有文件证明已经进行了抗肌营养不良蛋白基因测序或，如还没进行测序，有文件证明已送血样为验证抗肌营养不良蛋白测序；
4.两足的EDB肌肉体检或放射影像证据；
5.具备走动能力；
6.男性；
7.年龄≥5岁；
8.在知道有性活动的患者中，愿意在研究药品给药和随后的时间段内，避免性交或使用阻隔或医学方法避孕；
9.愿意并有能力遵守预定的访问、药品给药计划、实验室试验、研究限制、和研究程序(包括肌肉活检、肌测量和PK采样)；
10.如果年龄≥18岁能够提供书面知情同意，或如果年龄≥7岁提供书面知情同意(父母/监护人同意)。如果该患者年龄＜7岁，则父母/法定监护人的单独同意就可接受；和
11.亲自签名并注明日期的知情同意文件的证据(儿童年龄≥7岁还需要赞同，表明该患者/父母/法定监护人已被告知该试验的将要进行的全部相关方面。
存在下列任何一种情况就排除病人参与研究：
1.事先或正存在的医学状况(如伴随疾病、精神状况、酗酒、滥用药物)、医疗史、身体结果、ECG结果或化验异常，从研究人员的观点看可能会影响该患者的安全，从而导致不太可能让治疗过程或后续工作完成，或有可能妨碍研究结果的评估；
2.有充血性心脏衰竭的临床症状和体征(American College ofCardiology/American Heart Association Stage C or Stage D)(Hunt，2001，J.Am.Coll.Cardiol.38：2101-13)；
3.乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎抗体检测、或人免疫缺陷病毒(HIV)检测阳性；
4.血红蛋白＜10g/dL；
5.血清白蛋白＜2.5g/dL；
6.异常GGT或总胆红素(＞实验室正常上限)；
7.肾功能异常(血肌酐＞实验室正常上限1.5倍)；
8.固体器官或血液移植史；
9.正在进行免疫抑制治疗(除皮质类固醇)；
10.在开始研究治疗前的28天内，接触过另一种研究药物；
11.正在参与任何其它治疗性临床试验；
12.正在使用噻唑二酮过氧化物酶体增殖物激活的受体γ(PPARγ)激动剂，如罗格列酮(Avandia或等同物)或吡格列酮(Actos或等同物)；
13.在开始研究治疗前的3个月内，全身性皮质类固醇治疗改变(如治疗开始；治疗停止；改变类固醇剂量、日程、或类型)；或
14.在开始研究治疗前的3个月内，用全身性氨基糖苷类抗生素治疗。
如本文所述的制剂形式提供3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸。对各治疗组进行28天的给药治疗。第一组患者以给定剂量(4-，4-，和8-mg/kg)每天三次地用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸治疗28天。如果第一组患者对该药物有耐药力，那么第二组患者就每天三次地接受更高剂量水平(如10-，10-，和20-mg/kg)的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸。这样，每位患者就接受了总共84剂3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸。在28天治疗结束后，每位患者接下来的28天不进行治疗。
对每种剂量水平，建议每天三次间隔6-，6-和12-小时(±～30分钟)服用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸。最好是在餐后～30分钟内(如早餐后的上午～7:00AM、午餐后的下午～1:00、晚餐后的晚上～7:00)服用各剂量。虽然应认识到，根据门诊患者情况，给药方案会发生变化，但建议处方药的方案(包括给药间隔和给药方案与进餐的关系)应密切地跟随PK样本采集的时间。利用前述步骤来评价临床技术指标。
应理解，虽然本文描述的本发明的具体实施方案是用于阐释，但本文描述的发明并不限于本文所公开的特定实施方案的范围。这些实施方案意欲说明本发明的多个方面。任何等同的实施方案都落入本发明的范围内。事实上，除本文所给出和描述的那些内容之外，从前述描述对本发明进行各种改变对于本领域的技术人员来说都是显而易见的。
Claims (25)
1.治疗与无义突变相关疾病的方法，该方法包括以每天三次剂量给有此需要的患者施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
2.如权利要求1所述的方法，其中第一次和第二次剂量的量是相同的。
3.如权利要求1所述的方法，其中第三次剂量的量是第一次剂量的两倍。
4.如权利要求1所述的方法，其中三次剂量的量相同。
5.如权利要求1所述的方法，其中施用的第一次剂量是4mg/kg，第二次剂量是4mg/kg，第三次剂量是8mg/kg。
6.如权利要求1所述的方法，其中施用的第一次剂量是7mg/kg，第二次剂量是7mg/kg，第三次剂量是14mg/kg。
7.如权利要求1所述的方法，施用的第一次剂量是10mg/kg，第二次剂量是10mg/kg，第三次剂量是20mg/kg。
8.如权利要求1所述的方法，其中第二次剂量是在第一次剂量施用约6小时后施用的。
9.如权利要求1所述的方法，其中第三次剂量是在第二次剂量施用约6小时后施用的。
10.如权利要求1所述的方法，其中第一次剂量是在前一天施用第三次剂量约12小时后施用的。
11.如权利要求1所述的方法，其中将3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物连续给药28天。
12.如权利要求1所述的方法，其中将3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物连续给药14天。
13.如权利要求1所述的方法，其中将3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物连续施用14天，随后的14天不施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物，随后连续施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物14天。
14.如权利要求1所述的方法，其中所述剂量口服施用。
15.如权利要求1所述的方法，其中所述与无义突变相关的疾病是遗传病、癌症、自身免疫性疾病、血液病、胶原病、糖尿病、神经变性疾病、增生性疾病、心血管疾病、肺病、炎性疾病或中枢神经系统疾病。
16.如权利要求1所述的方法，其中所述与无义突变相关的疾病是囊性纤维化或杜氏肌营养不良症。
17.如权利要求1所述的方法，其中所述患者是人。
18.预防或控制与无义突变相关的疾病的方法，该方法包括以每天三次剂量给有此需要的患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
19.单位剂型，其包含125mg至1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
20.如权利要求19所述的单位剂型，其包含250mg至1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
21.如权利要求19所述的单位剂型，其包含125mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
22.如权利要求19所述的单位剂型，其包含250mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
23.如权利要求19所述的单位剂型，其包含1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
24.如权利要求19所述的单位剂型，其中所述剂型适合口服给药。
25.让患者的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的血浆浓度保持高于约2μg/ml至少约12小时的方法，该方法包括给有此需要的患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
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| CN106455571A (zh) * | 2014-03-06 | 2017-02-22 | Ptc医疗公司 | 1,2,4‑噁二唑苯甲酸的药物组合物和盐 |
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| CN108348527A (zh) * | 2015-10-30 | 2018-07-31 | Ptc医疗公司 | 用于治疗癫痫的方法 |
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Legal Events
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Application publication date: 20080604 |