CN101120652A - 通用提纯法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种通用提纯法，其实施过程分为两个阶段，从不育系与保持系(A×B)配对到原原种产生为第一阶段，原种生产为第二阶段，第一阶段进行一次，第二阶段则是反复利用优良株系的循环阶段。本发明从纵横两个方向研究杂交稻三系不育系育性恢复渐进性与差异性，既从横向差异中优中选优，建立优良株系，又从纵向渐进性中，测定不育系育性恢复步长，为确定原种生产程序和生产技术提供依据；通过对育性败育不彻底不育系湘香2号A、香5A研究，提出了不育系提纯新理论、新方法、新模式和新标准；用本发明生产的湘香2号A、香5A原种配制的杂交种，纯度稳定在98％左右，基本达到国标一级纯度标准，本发明技术路线正确，可操作性强。

Description

通用提纯法

【技术领域】

本发明涉及一种杂交水稻的亲本提纯技术，尤其是涉及一种通过在纵横两个方向测定不育系育性恢复渐进性与差异性基础上、针对品种育性特点设计原种生产程序和生产技术的通用提纯法，本发明既适用于提纯育性败育彻底的不育系，也适于提纯育性败育不彻底的不育系。

【背景技术】

三系杂交稻是由雄性不育系、雄性不育保持系和雄性不育恢复系(简称不育系、保持系和恢复系，分别以A、B、R表示，下同)配组而成。三个品系彼此制约，相互依存，其中不育系处于中心位置，对其要求特别严格，首先是育性败育要彻底，达到花粉不育株率100％，小穗不育度≥99.6％。我国早期选育的不育系都是育性败育彻底的不育系，如V20A、珍汕97A等，育性败育均能达标。后来由于种质资源的扩大，到上世纪八九十年代，国内陆续选育出一批极富特色的育性败育不彻底的不育系。如优IA、II-32A、湘香2号A、协青早A、丛广41A、龙特甫A等，这类育性败育不彻底不育系或因抗性特强，或因米质极佳，或因配合力好，优势强，或因开花习好，繁制种产量高等突出优点，备受业界青睐。但又由于这类不育系育性败育不彻底，可育性恢复速度快，自交结实现象比较严重，用经典的三系配套提纯法不能有效进行提纯，用其配制的杂交种往往纯度不达标，理赔事件时有发生，开发应用风险很大。与此同时，菲律宾国际水稻研究所也投入大量财力、物力，选育出一大批各具特色的育性败育不彻底的不育系，终因找不到有效的提纯方法，结果绝大部分不育系被淘汰了。

三系配套提纯法是将不育系、保持系和恢复系放在一起进行配套提纯的方法，也是准备作为国家标准的提纯方法，所以被认为具有权威性的经典的提纯方法。三系配套提纯法对提纯育性败育彻底的不育系是行之有效的，对纯化三系亲本，推动杂交水稻顺利发展起了重要作用，功不可抹。但在应用过程也暴露出一些问题，主要表现在：一是不能有效地提纯育性败育不彻底的不育系，首先是三系配套提纯法在功能设置上存在重大缺陷，即只有横向测试和筛选优良单株的功能而没有从纵向测试不育系恢复步长和育性特点的功能，这样虽然也能选出优良单株，但并不知道也不可能知道怎样去生产原种，才能确保种子纯度，这是三系配套提纯法提纯育性败育不彻底不育系遭遇失败的根本原因；其次是固定不变的原种生产程序不符合不育系育性要求，三系配套提纯法无论提纯什么品种，它的不育系原种生产程序一律采用“四圃法”即选种圃、株行圃、株系圃和原种圃，而育性败育不彻底的不育系，因其育性恢复速度比较快，一般只能用“三圃法”，甚至“两圃法”生产原种，所以不知底细，盲目套用“四圃法”是三系配套提纯法遭遇失败的第二个原因。二是对恢复系选株存在隐患：三系配套提纯法对不育系、保持系、恢复系都要选株，交叉测配，看起来似乎很完美，其实隐藏着隐患，众所周知，三系中数恢复系血缘最复杂，遗传稳定性最差，在正常生产过程中发生分离、变异频率也最高，因此，对恢复系选株容易引发恢复基因丢失和光温反应临介点发生遗传漂移现象，国内因对恢复系选株不当，出现多起恢复系变为保持系或半恢半保；遇到气候变化，杂交稻早造不抽穗或结实率大幅降低的理赔事件，造成巨大经济损失，教训极为深刻，三系配套提纯法本身无法鉴别恢复系选株后带来的光温敏感性变化，因此，恢复系选株后存在光温敏感性负效应隐患。

【发明内容】

为了克服现有技术的上述缺点，本发明提供一种从纵横两个方向研究杂交稻三系不育系育性恢复渐进性与差异性，既从横向差异中优中选优，建立优良株系，又从纵向渐进性中，测定不育系育性恢复步长，能为确定原种生产程序和生产技术提供依据的通用提纯法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种通用提纯法，其实施过程分为两个阶段，从不育系与保持系(A×B)配对到原原种产生为第一阶段，原种生产为第二阶段，第一阶段进行一次，第二阶段则是反复利用优良株系的循环阶段。

所述原原种产生的第一步是采用均数法、众数法、典型性法和择优法进行选种；第二步是制备不育系与保持系(A×B)配对种子；第三步是测定不育系育性恢复步长；第四步是筛选优良单株。

所述原种生产的第一步是确定原种生产的圃数；第二步是根据不育系种性特点与原种生产圃数来制订原种生产技术措施；第三步是原原种循环利用。

所述原种生产的圃数的确定是采用：圃数(P)＝不育系育性恢复步长(N)减去2的公式来确定；在原种生产中一个圃就是一个世代，如测得不育系育性恢复步长为6，则P＝6-2，P＝4，原种生产采用四个圃，即选种圃、株行圃、株系圃和原种圃；若测得不育系育性恢复步长为5，P＝5-2，P＝3，原种生产采用3个圃，就是选种圃、株行圃和原种圃，以此类推，但原种生产至少有2个圃。

所述原原种循环利用是将选种圃产生的B级种子通过株行圃、株系圃和原种圃逐级扩大繁殖后用于制种；A级种子供下季选种圃用种，周而复始，定期更新；为了减少生产环节，预防机械混杂和生物学混杂，扩大选种圃规模，增加A级种子数量并进行冷藏，每隔一段时间取出一份A级种子，更新选种圃种源。

在选种圃中所述不育系花粉镜检的主要技术指标与要求中的全片扫描：记录为主花粉类型及比例(目测)，记录染败、可育花粉数量，花粉≤5粒者记实数，花粉在6～10粒记“多”，花粉≥11粒记“众”，典败、园败、染败和可育4种花粉分别以“△”、“○”、“⊙”、“●”表示。

在选种圃中所述保持系选种：采用众数法选生育期，用均数法选株高及可育花粉率。

本发明的有益效果是：本发明从纵横两个方向研究杂交稻三系不育系育性恢复渐进性与差异性，既从横向差异中优中选优，建立优良株系，又从纵向渐进性中，测定不育系育性恢复步长，为确定原种生产程序和生产技术提供依据；通过对育性败育不彻底不育系湘香2号A、香5A研究，提出了不育系提纯新理论、新方法、新模式和新标准；用本发明生产的湘香2号A、香5A原种配制的杂交种，纯度稳定在98％左右，基本达到国标一级纯度标准，本发明技术路线正确，可操作性强。

【附图说明】

图1是本发明的生产流程方框图；

图2是本发明所述原原种循环利用流程方框图。

【具体实施方式】

下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。

参见图1，不育系和保持系是两个相对的品系，它们有着共同的细胞核。不育系的雄性不育性是通过细胞核与细胞质相互作用实现的。不过不育系不是绝对的不育，它的雄性可育性只是暂时处于极低水平而已，这种极低水平的可育性，会随着时间的推移，慢慢地得到自主恢复。若干代后自交结实就能达到正常水平。不过不育系雄性可育性的恢复并非整体齐头并进，个体间存在着明显的差异性，通用提纯法所依据的理论就是不育系育性恢复的渐进性与差异性。不育系育性恢复渐进性与差异性理论是本发明人在1995年2月总结优1A提纯的《自交子代育性筛选提纯法研究及开发应用总结报告》中首先提出来的。

不育系育性恢复渐进性

不育系育性恢复渐进性是指从纵的方向考察一个不育系群体，在严格隔离、不选株、不除杂(异品种例外)情况下，连续加代繁殖，其育性就会发生由不育向可育方向呈渐进式变化。可育因子经年累月迭加积累，若干代后就会变成自交结实达到正常水平的保持系。至于恢复速度的快慢，不同品种差别很大，一般是育性败育彻底的不育系恢复比较慢，育性败育不彻底的不育系育性恢复比较快，其中有些不育系育性恢复速度特别快，湘香2号A就是一个典型案例。研究不育系育性恢复渐进性之目的，在于弄清不育系育性恢复步长和育性特点，为设计不育系原种生产程序和生产技术提供科学依据。

不育系育性恢复差异性

不育系育性恢复差异性是指从横的方向考察不育系个体间育性恢复的差异状况。通过深入观察就会发现，不育系个体间在花粉结构、花粉质量、不育株率、不育度、育性恢复速度等方面都有明显差别。不育系育性恢复差异性，因不育系固有特点和繁殖过程防杂保纯等因素联系密切。研究不育系育性恢复差异性，就是要找出个体间的具体差异，为优中选株，选择优良单株提供依据。

本发明的操作技术方案

本发明的实施过程分为两个阶段，从A×B配对到原原种产生为第一阶段，原种生产为第二阶段；第一阶段一般只进行一次，第二阶段则是反复利用优良株系的循环阶段。

选种技术

不育系提纯过程就是持续的选种过程。不同性状有不同的选择方法和标准，有的要符合该品种典型性，有的要优中选优。因此，要综合运用各种选种方法，才能使提纯结果锦上添花。

均数法：以平均数正负一个标准差(X±1S)作为选择范围进行选株。株高、保持系可育花粉率等多用此法选择。

众数法：主要用于物候期选择，如抽穗期等，先确定众多个体的抽穗期，在这之前和之后1-2天抽穗的选上，过迟过早抽穗的个体予以淘汰。

典型性法：此法在选择优良单株中用得最多，所选个体株型、叶型、穗型、粒型、颜色(茎基、柱头、稃端、粒)等都要符合该品种典型性，一般不选变异株。

择优法：择优法就是优中选优，在分蘖力、生长势、抗病性、抗逆性、柱头外露率、花粉结构、开花习性等方面用此法选择。

制备A×B配对种子

首先要建立选种圃，不育系、保持系各插1500～2000株，单株稀植，重肥攻分蘖，彻底除杂去劣。抽穗前父母本各选300～500株，挂牌编号，镜检后父母本各选50～100株配对，将父本移至母本附近，每株母本选2～3个穗子剪颖套袋授粉，隔天授粉一次，连续授粉3次。父母本种子以对为单位一分为三，各自单收单藏，其中一份作为原始样本冷藏备用，另两份供下季不育系育性恢复渐进性和差异性测定之用。

测定不育系育性恢复步长

运用不育系育性恢复渐进性原理测定。取各株系配对种子一份，父母本各自混合，在严格隔离、不选株、不除杂(异品种例外)条件下，连续加代繁殖。要求每代种植群体300～500株，种子混种混收。每季种子一分为三，一份作原始样本冷藏备用，一份供下季繁殖，一份供育性鉴定圃用种。从繁殖第二代起设立育性鉴定圃，同步测定上一代种子育性，直至不育系自交结实明显上升为止。如果测试超过6代，自交结实仍然很低，该不育系被视为育性败育彻底的不育系，不必继续测试。若测试少于6代即出现自交结实明显上升的，该不育系被认定为育性败育不彻底的不育系，也应停止测试，并计算出其育性恢复步长。不育系育性恢复步长从镜检选株当代(含当代)，起至自交结实明显上升代(含明显上升代)止，不育系育性恢复步长单位为世代。

如果被测试的是育性败育不彻底的不育系，还要做好相关项目测定，如自交结实与温度关系、自交结实种子期苗死亡率、自交子代育性恢复趋势等。

筛选优良单株

运用不育系育性恢复差异性原理筛选。取各株系配对种子一份，分别播种，每个株系的父母本相邻各插一行，30～40株，行距30cm，株距17cm，株系间留工作行40cm。认真除杂去劣，记录各株系生育期及主要特征特性等。选株时既要注意株、叶、穗、粒、色等方面的典型性，更要找出抗病性、生长势、分蘖力、抗逆性、花粉结构、开花习性等方面的差异性，并进行差异比较，从差异中优中选优。每个株系母本镜检20～30株，选择花粉败育彻底的“双零株”(染败、可育花粉均为零)2～3株，每株选2～3个穗子剪颖套袋授粉(方法同上)。如此回交4-5代，每代种子以株系为单位一分为二单收单藏，一份供下季用种，一份供小穗不育株率、不育度测定。此项工作与不育系育性鉴定一起进行。从回交第二代起注意去劣留良，逐步淘汰育性败好的株系，最后综合决选10～15个优良株系混合作为混系原原种，也可择其最好的一个株系作为单系原原种。

原种生产：

原原种产生标志着提纯第一阶段结束，接下来进入第二阶段，即原种生产阶段，也就是原原种循环利用阶段。

确定原种生产的圃数

原种生产程序中用多少个圃，因品种不同可能有所不同，见图2，要用下面公式进行简单计算：P(圃)＝N-2

式中P代表原种生产中的圃数，N代表不育系育性恢复步长，2是常数，表示不育系自交结实明显上升代和用于制种代的和。

在原种生产中一个圃就是一个世代。如测得不育系育性恢复步长为6，则P＝6-2，P＝4，原种生产可用四个圃，即选种圃、株行圃、株系圃和原种圃。若测得不育系育性恢复步长为5，P＝5-2，P＝3，原种生产只能用3个圃，就是选种圃、株行圃和原种圃，以此类推，但原种生产不能少于2个圃，否则就没有实际意义。

制订原种生产技术措施：

不育系原种生产技术与原种生产圃数密切相关，育性败育彻底的不育系，原种生产可用四个圃，用常规生产技术就可以了，育性败育不彻底的不育系，原种生产只能用三个圃，甚至两个圃，为了用较少的代数生产较多的原种，必须围绕扩大选种圃规模，加大镜检群体，增加入选量和单株稀植，重肥攻分蘖等提高繁殖系数来制订特殊的原种生产技术措施。

原原种循环利用

原种生产阶段一般都采用循环方式来反复利用原原种，即从选种圃产生的B级种子通过株行圃、株系圃和原种圃逐级扩大繁殖后用于制种。A级种子供下季选种圃用种，周而复始，定期更新。为了减少生产环节，预防机械混杂和生物学混杂，可扩大选种圃规模，增加A级种子数量并进行冷藏，每隔一段时间取出一份A级种子，更新选种圃种源，做到一次提纯，多年利用。

选种圃主要技术指标与要求

隔离：空间隔离200米以上，时间隔离20天以上，插秧前沤田15～20天，并拾净原生秧苗。

插植方式：父母本行比2∶2，畦幅1.3米，中间插2行母本，两边各插1行父本(含2～3期秧苗)，单株稀植，行距30cm，株距17cm，畦与畦之间留工作行40cm。

田间管理：重肥攻分蘖，以湿润灌溉为主，做好病虫害防治工作。

除杂去劣：抽穗前把杂株、劣株、变异株彻底除掉，留下的母本全部镜检。

挂牌与取样：镜检前1～2天，对母本逐畦挂牌编畦号，逐株挂牌编株号，见穗时取样，每株选一个穗子从抽出部分的上、中、下部各取2朵颖花，用编了株号的小纸块包好，放入塑料袋内保湿。每畦的样本只装一个袋，并编畦号，不要弄乱。

制片：取载玻片一块，滴上一滴碘一碘化钾染色液，将6朵颖花36枚雄蕊取出放于染色液上，用摄子压碎去渣，将载玻片放于包样纸上。

镜检：全片扫描，记录为主花粉类型及比例(目测)，记录染败、可育花粉数量，花粉≤5粒者记实数，6～10粒记“多”，≥11粒记“众”，典败、园败、染败和可育4种花粉分别以“△”、“○”、“⊙”、“●”表示。

取舍标准：A级种：无染败、可育花粉(即“双零株”)。B级种“允许有5粒染败花粉存在。

剔除淘汰株：镜检一般分为两次进行，每次把当天的样检完，第二天上午开花前把镜检不合格的淘汰株割掉，第二次镜检的淘汰株剔除后才进行人工辅助授粉。

保纯措施：先割父本，经专人验收合格后再割母本，种子凉晒及风选等工序，父母本分别固定专用场地和工具，防止机械混杂。

保持系选种：用众数法选生育期，用均数法选株高及可育花粉率，种子混收。

本发明与三系配套提纯法不同的技术特征

理论依据不同：三系配套提纯法以亲本混杂退化，自然变异作为提纯理论依据，而通用提纯法则以不育系育性恢复渐进性与差异为理论依据。二者的区别不仅表现在文字表达上，更重要是表现在对不育系雄性不育性的认识上。前者认为不育系雄性不育性是绝对彻底的，只要通过提纯把混杂退化，自然变异因素排除掉，不育系就能达到不育株率100％、不育度100％。后者认为混杂退化是影响不育系育性变化的外部原因，内因是不育系育性败育本身是相对的，不彻底的。即使混杂退化，自然变异都不存在，不育系的不育株率、不育度也不可能达到100％。这是因为不育系育性恢复渐进性是客观存在，不以人的意志为转移。我们所能做的就是通过提纯过程及早排除有可育征兆的个体，并限制原种繁殖代数，尽可能降低自交结实率。否则，不育系中极少部分个体的可育性会随着时间的推移，慢慢得到自主恢复，若干代后就会变成保持系。后来经过长期从事实践工作的育种家和提纯工作者论证，才将不育系的不育度从原来的100％改为≥99.6％，允许有≤0.4％的自交结实粒存在。这一事实表明我们的看法已得到认同。

测试不育系渠道不同

三系配套提纯法对不育系只作单向测试，即从横向测试不育系育性恢复的差异性，并从差异中选出优良单株。而通用提纯法对不育系育性进行双向测试，即既从横向测试选择亿良单株，又从纵向测试不育系育性恢复渐进性，搞清楚育性恢复步长和育性特点，为设计不育系原种生产程序和生产技术提供科学依据。

原种生产程序和生产技术不同

三系配套提纯法规定，无论提纯什么不育系，原种生产程序一律采用“四圃法”即选种圃、株行圃、株系圃和原种圃。原种生产技术也相对固定。通用提纯法则不同，它的原种生产程序没有事先预设好的固定模式，一切都按测定的不育系育性恢复步长来安排，有的品种可能是“四圃法”，有的品种也可能是“三圃法”甚至“两圃法”，做到不育系原种生产模式多样化、个性化，走出了三系配套提纯法原种生产只有“四圃法”固定不变的误区。同时，原种生产技术也要根据不育系不同的育性特点，围绕扩大选种群体，提高繁殖数等来制订一整套特殊的原种生产技术措施。

保持系可育花粉率选择标准不同

三系配套提纯法对保持系可育花粉的选择标准是：镜检可育花粉率达99％，无败育花粉粒。通用提纯法则以平均数正负一个标准差(X±1S)作为保持系可育花粉率选择标准。两者之间有天壤之别。我们认为要求保持系可育花粉率达到99％，无败育花粉粒存在是严重脱离实际，根本行不通的。我们曾对儿个保持花粉作过研究，它们的可育花粉的实际情况是：V20B49.15％、珍汕97B65.65％、优IB70.46％、湘香2号B70.58％和香5B80.75％；而且不育系所有的4种花粉，即典败、园败、染败、可育花粉、保持系中都有，只不过是比例不同罢了；还有同一个品种，随着保持系可育花粉率的升高，不育系可育株率和自交结实率也相应提高。因此，试图拔高保持系可育花粉率的做法对不育系提纯有百弊而无一利。

提纯效果不同

三系配套提纯法对提纯育性败育彻底的不育系是可行的，但对提纯育性败育不彻底的不育系就无能为力了。用该法生产的育性败育不彻底不育系原种去配制杂交稻，种子纯度偏低，往往连二级种子纯度(≥96％)标准都达不到。而通用提纯法生产的同一不育系原种去配杂交稻种子纯度稳定在98％左右，基本达到一级种子纯度标准。

本发明操作技术方案的验证

实验品种：

既然通用提纯法对提纯育性败育不彻底不育系十分有效，我们就选用极具挑战性的育性败育不彻底不育系湘香2号A、香5A作为实验品种。

湘香2号A是湖南杂交水稻研究中心在上世纪八十年代末选育的优质香型早秈不育系，野败型质源。首先引进由湘香2号A为母本，明恢63作父本配制的香优63。该组合曾被袁隆平誉为“既能高产又能优质”的新组合，米质极佳，其食味品质超过泰国香米和本地王牌品种马坝油粘，它以米饭清香、软滑可口、软而不粘、冷而硬的上乘表现，成为食味品质的新霸主。因此，香优63很快就被列为我市重点开发项目，并建起了优质米加工厂和生产基地。然而就在香优63热不断升温之际，种子纯度问题逐渐暴露出来了。原来香优63的母本湘香2号A，自身携带了微效恢复基因，育性败育不彻底，自交结实现象越来越严重，致使用其配制的香优63种子纯度迅速下滑，严重时种子纯度仅75～80％，比国家最低纯度标准≥96％(二级种)相差甚远。与此同时，原育种单位也早已发现问题，并委托该省某原种场用经典的三系配套提纯法对湘香2号A进行提纯，但没有取得成功。用提纯后的湘香2号A原种配制的香优63，种子纯度82.08～88.68％之间，种子纯度虽有所提高，但仍未达到国家标准。

湘香2号A提纯经过及实验结果

首先建立父母本选种圃，母本经选株、镜检50株，父本生育期经众数法、株高及可育花粉率经均数法选株后，父母本各决选15株进行配对测交，种子单收单藏备用。

然后进入株系鉴定圃，株、叶、穗、粒、色经典型法鉴定和花粉镜检，优中选优，选出10对株系成对回交，淘汰了5对育性败育不好的株系。同年晚造，进行育性恢复渐进性与差异性测定，又淘汰了4对育性败育不理想的株系。

再继续加代繁殖，从早造起增设育性鉴定圃，同步测定各株系自交结实情况，监测结果显示，6个株系的小穗不育度都很高，自交结实率只有0.01～0.08％，其中以12号株系表现最佳。晚造监测育性出现拐点，6个株系的自交结实率骤然上升到6.10～9.57％。可见湘香2号A是个典型的育性败育不彻底不育系，育性恢复速度特别快，从早造镜检选株回交开始至晚造自交结实突然上升，前后只有4代。选定12号株系，用两圃法(4-2＝2)生产原种。并根据湘香2号A育性恢复速度特别快和高温对其自交结实有明显促进作用等育性特点，从扩大选种圃面积，加大镜检群体，增加入选数量；小行比(2∶2或2∶3)单株稀植，重肥攻分蘖，千方百计提高繁殖系数以及合理安排繁殖季节及生态环境等方面，制订出一整套特殊的原种生产技术措施。

经调查用两圃法生产的湘香2号A12号株系的出圃原种不穗不育度达99.58％，符合秈型不育系育性败育标准，原种纯度为99％，达到良种纯度要求，用提纯后湘香2号A12号株系原种配制的香优63纯度为98.43％，达到国标一级种子纯度标准。提纯工作取得阶段性成果。

提纯后的香优63进入了大田检验阶段。当年由韶关市农科所申请，香优63参加市杂交晚稻区试，经过3年区域试验和生产试验，没有出现种子纯度问题。

香优63进入开发应用阶段，并获得可观经济效益。同时，纯度跟踪监测资料显示，香优63种子纯度一直稳定在98％左右，基本达到一级种子纯度水平。与此同时，我们还用本发明，对菲律宾国际水稻研究所选育的育性败育不彻底的不育系香5A(原编号IR58025A)进行了提纯，同样获得成功。用两圃法生产的香5A原种配制的香5优63，香5优318曾在始兴、乐昌等地种植3000多亩，从未出现过种子纯度问题，产量、米质都不错。

Claims (7)

1.一种通用提纯法，其特征是：其实施过程分为两个阶段，从不育系与保持系(A×B)配对到原原种产生为第一阶段，原种生产为第二阶段，第一阶段进行一次，第二阶段则是反复利用优良株系的循环阶段。

2.如权利要求1所述的通用提纯法，其特征是：所述原原种产生的第一步是采用均数法、众数法、典型性法和择优法进行选种；第二步是制备不育系与保持系(A×B)配对种子；第三步是测定不育系育性恢复步长；第四步是筛选优良单株。

3.如权利要求1所述的通用提纯法，其特征是：所述原种生产的第一步是确定原种生产的圃数；第二步是根据不育系种性特点与原种生产圃数来制订原种生产技术措施；第三步是原原种循环利用。

4.如权利要求3所述的通用提纯法，其特征是：所述原种生产的圃数的确定是采用：圃数(P)＝不育系育性恢复步长(N)减去2的公式来确定；在原种生产中一个圃就是一个世代，如测得不育系育性恢复步长为6，则P＝6-2，P＝4，原种生产采用四个圃，即选种圃、株行圃、株系圃和原种圃；若测得不育系育性恢复步长为5，P＝5-2，P＝3，原种生产采用3个圃，就是选种圃、株行圃和原种圃，以此类推，但原种生产至少有2个圃。

5.如权利要求3所述的通用提纯法，其特征是：所述原原种循环利用是将选种圃产生的B级种子通过株行圃、株系圃和原种圃逐级扩大繁殖后用于制种；A级种子供下季选种圃用种，周而复始，定期更新；为了减少生产环节，预防机械混杂和生物学混杂，扩大选种圃规模，增加A级种子数量并进行冷藏，每隔一段时间取出一份A级种子，更新选种圃种源。

6.如权利要求3所述的通用提纯法，其特征是：在选种圃中所述不育系花粉镜检的主要技术指标与要求是中的全片扫描：记录为主花粉类型及比例(目测)，记录染败、可育花粉数量，花粉≤5粒者记实数，花粉在6～10粒记“多”，花粉≥11粒记“众”，典败、园败、染败和可育4种花粉分别以“△”、“○”、“⊙”、“●”表示。

7.如权利要求3所述的通用提纯法，其特征是：在选种圃中所述保持系选种：采用众数法选生育期，用均数法选株高及可育花粉率。

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