CN101118239A - 一种利用微流体技术检测血型的试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种微流体技术检测血型的试剂盒的制备方法及其制得的血型检测试剂盒。该制备方法包括：a.基板的制备：选择一透明材料作为基板，基板上设有4～7个大小10～500μl的反应槽并于基板上对各反应槽设置有标示，还设有对应的微流体管或毛细管，微流体管或毛细管的一端分别与一反应槽接通；b.预填充抗体：血型A、B、D抗体，或血型A、B、D抗原，分别固定于反应槽中并设置一反应槽为对比反应槽；c.封口：用封口膜密封各反应槽的表面槽口和每支微流体管或毛细管未与反应槽接通的另一端的开口。本发明采用微流体技术检测血型，检测时间短，检测结果准确且成本比微柱凝胶法检测血型低。
Description
技术领域
本发明涉及一种新型血型及输血配型快速检测试剂盒。
背景技术
红细胞血型是根据血液中的红细胞表面抗原来划分的，根据抗原种类的不同，常见的有20多个分类系统，ABO血型系统只是其中的一个。ABO血型分类原则为：红细胞上无A和B血型抗原，而血清中有抗A及抗B抗体者，称为O型；红细胞上有A抗原，而血清中有抗B抗体者，称为A型；红细胞上有B抗原，而血清中有抗A抗体者，称为B型；红细胞上有A和B抗原，而血清中无抗A及抗B抗体者，称为AB型。H抗原的生物合成先于A和B抗原，所以除变异体外，A型、B型、AB型和O型红细胞均存在H抗原。A型、B型和H抗原不仅存在于红细胞，而且也存在于组织细胞，特别是在各种体液里含量丰富，例如血清、唾液、胃液、卵巢囊肿液、精液、羊水、汗液、尿液、泪液、胆汁、乳汁等。通过检测体液中的血型抗原也能确定血型。
目前ABO血型定型试剂主要采用凝集法和微柱凝胶法，采用凝集法的凝集试剂盒不带对照，结果判定不能标准化，需要分开检测A、B血型，灵敏度比较差且不能检测D血型；采用微柱凝胶法试剂生产需要凝胶和塑料卡，凝胶成本高，卡需要专用模具也使生产成本偏高，且该方法操作时间长，一般需要30～40分钟。重要的是微柱凝胶法试剂使用需要配制特定的离心机和对样本洗涤处理，该方法操作繁杂、最不容易普及，且检测试验成本高。而微流体技术检测血型的技术克服了上述缺点，在试验室中可以不洗涤血球，直接用全血样本，在1-5分钟内借助微流体技术完成血型检测，结果观察直观、明显，此技术目前未见报到。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种微流体技术检测血型的试剂盒的制备方法及其制得的血型检测试剂盒。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：一种微流体技术检测血型的试剂盒的制备方法，包括下述步骤：a、基板的制备：选择一透明材料作为基板，基板上设有3～7个大小10～500ul的反应槽并于基板上对各反应槽设置有标示，还设有与反应槽个数对应支数的微流体管或毛细管，微流体管或毛细管的一端分别与一反应槽接通；b、预填充抗体：在步骤a设置的反应槽中至少包括3个下述反应槽：一反应槽为空白对比反应槽，一反应槽内设置有与能血型抗原A发生凝集反应的抗体或凝集素，一反应槽内设置有与能血型抗原B发生凝集反应的抗体或凝集素；c、当反应槽数目为4～7个时，经步骤b后剩余反应槽内设置试剂方式至少为下述方式之一：一反应槽内设置有与能血型抗原D发生凝集反应的抗体或凝集素，一反应槽内设置有与血型抗体A发生凝集反应的抗原或血球，或设置为空反应槽；一反应槽内设置有与血型抗体B发生凝集反应的抗原或血球，或设置为空反应槽；一反应槽内设置有与血型抗体D能发生凝集反应的抗原或血球，或设置为空反应槽；d、封口：用封口膜密封各反应槽的表面槽口和每支微流体管或毛细管未与反应槽接通的一端的开口。
所述步骤b为其中任意三个反应槽分别为血型抗体A、B、D和一空白对比反应槽的组合之一，预填充抗体为处理好的1～200ul。
所述微流体管或毛细管直径为0.01～5mm。
所述基板为高分子合成塑料板或玻璃材料。
一种按照上述微流体技术检测血型的试剂盒的制备方法制得的血型检测试剂盒。
综上，本发明的有益效果是：采用本发明方法制备的血型检测试剂盒检测血型，检测时间短，检测结果准确，且与微柱凝胶法检测血型比较，无需离心过程，并且可以通过设置多个反应槽，将特异性的血型A、B、D抗体，或血型A、B、D抗原分别预置于反应槽中，通过任意组合，开发ABO血型正定型试剂盒、ABO血型反定型试剂盒，ABO血型正反定型试剂盒，ABO血型和D血型正定型试剂盒，ABO血型和D血型反定型试剂盒，ABO血型和D血型正反定型试剂盒，做到一次完成血型的正反定型，可检测多项血型指标的目的。
附图说明
图1是本发明实施例的结构示意图；
图2是图1的A-A线剖视图。
具体实施方式
如图1、图2所示，本实用新型的新型血型及输血配型快速检测试剂盒包括透明塑料板15；设置于基板上的七个反应槽1、2、3、4、5、6、16，反应槽体积大小为10～500ul，槽口均设有反应槽封口膜13，其中第一反应槽1内设置有人血型A抗原的抗体，第二反应槽2内设置有抗人血型B抗原的抗体，第三反应槽3设置为对照反应槽，第四反应槽4设置有抗人血型D抗原的抗体，第五反应槽5设置有血型A抗原或待加已知A型血反应的空反应槽。第六反应槽6设置有血型B抗原或待加已知B型血反应的空反应槽。第七反应槽16内设置有与血型抗体D能发生凝集反应的抗原或血球，或设置为空反应槽；当第五反应槽为空反应槽时，在加入血清样品后再加入已知能与A型血发生凝集反应的试剂，当第六反应槽为空反应槽时，在加入血清样品后再加入已知能与B型血发生凝集反应的试剂。当第七反应槽为空反应槽时，在加入血清样品后再加入已知能与D型血发生凝集反应的试剂。每个反应槽对应一直径0.1mm的微流体管或毛细管，每支微流体管或毛细管一端分别与一反应槽接通，另一端由微流体管或毛细管封口膜密封，微流体管或毛细管固定于基板上。
本实用新型的工作原理是：将特异性的血型A、B、D抗体，或血型A、B、D抗原分别预置于反应槽中，检测前先将反应槽上的封口膜撕开。当待测样品(血液或血球或血清)加到反应槽上后，首先与预置在反应槽中的抗原或者抗体反应，反应1～5分钟后，将末端封口膜撕开，反应样品通过虹吸作用沿着微流体管或毛细管向前移动，发生反应的复合物通过流动过程中不断凝集，与对照反应微流体管或毛细管对比，在微流体管或毛细管中可看到明显的凝集效应。
结果判定原则：
微流体管或毛细管7发生凝集，则为A型血。
微流体管或毛细管8发生凝集，则为B型血。
微流体管或毛细管7、8都发生凝集，则为AB型血。
微流体管或毛细管7、8都不发生凝集，则为O型血。
微流体管或毛细管9不发生凝集，如果发生凝集则表明自凝集现象。
微流体管或毛细管10发生凝集，则为D型血。
微流体管或毛细管11发生凝集，则为B型血。
微流体管或毛细管12发生凝集，则为A型血。
微流体管或毛细管11、12都发生凝集，则为O型血。
微流体管或毛细管11、12都不发生凝集，则为AB型血。
微流体管或毛细管10不凝集17发生凝集，则为D抗原抗体阳性。
微流体管或毛细管10、17都发生凝集，则为D抗原的同种异型抗体。
本发明提供了一种利用微流体技术检测血型的试剂盒的制备方法，采用本方法制备的血型检测试剂盒检测血型，相对于现有检测血型的凝集法、胶体金层析法和微柱凝胶法，都具有更显著的进步。采用凝集法的凝集试剂盒不带对照，结果判定不能标准化，需要分开检测A、B血型，灵敏度比较差且不能检测D血型；采用胶体金层析法制备的血型检测试纸条检测血型，血液样品处理复杂，且血液样本在试纸条的扩散过程中易发生非特异凝聚现象，极大的影响检测结果的准确性和可靠性；采用微柱凝胶法试剂生产需要凝胶和塑料卡，凝胶成本高，卡需要专用模具也使生产成本偏高，且该方法操作时间长，一般需要30～40分钟，重要的是微柱凝胶法试剂使用需要配制特定的离心机，最不容易普及，检测试验成本高。而微流体技术检测血型的技术克服了上述缺点，能有效的解决上述问题，在试验室中可以不洗涤血球，直接用全血样本，在1～5分钟内借助微流体技术完成血型检测，结果观察直观、明显，此技术目前未见报到。
Claims (5)
1.一种微流体技术检测血型的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：
a、基板的制备：选择一透明材料作为基板，基板上设有3～7个大小10～500ul的反应槽并于基板上对各反应槽设置有标示，还设有与反应槽个数对应支数的微流体管或毛细管，微流体管或毛细管的一端分别与一反应槽接通；
b、预填充抗体：在步骤a设置的反应槽中至少包括3个下述反应槽：一反应槽为空白对比反应槽，一反应槽内设置有与能血型抗原A发生凝集反应的抗体或凝集素，一反应槽内设置有与能血型抗原B发生凝集反应的抗体或凝集素；
c、当反应槽数目为4～7个时，经步骤b后剩余反应槽内设置试剂方式至少为下述方式之一：一反应槽内设置有与能血型抗原D发生凝集反应的抗体或凝集素，一反应槽内设置有与血型抗体A发生凝集反应的抗原或血球，或设置为空反应槽；一反应槽内设置有与血型抗体B发生凝集反应的抗原或血球，或设置为空反应槽；一反应槽内设置有与血型抗体D能发生凝集反应的抗原或血球，或设置为空反应槽；
d、封口：用封口膜密封各反应槽的表面槽口和每支微流体管或毛细管未与反应槽接通的一端的开口。
2.根据权利要求1所述的微流体技术检测血型的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤b为其中任意三个反应槽内分别添加1～200ul处理好的血型抗体A、血型抗体B、血型抗体D，一反应槽为空白对比反应槽。
3.根据权利要求1所述的微流体技术检测血型的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述微流体管或毛细管直径为0.01～5mm。
4.根据权利要求1所述的微流体技术检测血型的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述基板为高分子合成塑料板或玻璃材料。
5.一种权利要求1所述微流体技术检测血型的试剂盒的制备方法制得的血型检测试剂盒。
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