CN101014339A - 用于在动物和人中诱导抗焦虑和镇静效应的方法 - Google Patents

Abstract

酚类化合物，带有与含氧基团、含氮或含另一个氧的基团、和至少一个C₁－C₄烷氧基共价连接的酚类分子，或它们的前体化合物，可得自单子叶植物或经由化学合成，发现它们在人和动物中有镇静作用和/或减轻焦虑和相关行为及状态。本发明的其它化合物可以包括苯并嗪酮类－环异羟肟酸、内酰胺和相应的葡糖苷，其可以作为酚类化合物的前体。处于适于人和动物治疗应用的浓度的本发明的酚类化合物和酚类化合物前体，可以得自单子叶植物如生长早期的玉米，其被及时收获得到最佳产量。

Description

用于在动物和人中诱导抗焦虑和镇静效应的方法

背景

1.发明领域

[0001]本申请涉及在人和动物中用于镇静和减轻焦虑的组分，更具体地，涉及可以以适于动物和人类应用的浓度和量得到的新颖的酚类和吲哚胺类似化合物的组分，其衍生自、分离自和/或提取自一些植物或来自化学合成，也涉及应用、产生和收获这些组分的方法，在患有焦虑症和相关行为或在应激、疾病或损伤期间的人类和动物中用于镇静和减轻焦虑。

2.背景技术

[0002]估计3千5百万至4千万生存的美国人会遭受重性抑郁发作(major depressive episodes)、更多的人会经历较轻的发作。在约1750万患有发展中的抑郁(ongoing depressions)的美国人中，约920万处于临床衰弱水平。临床上的抑郁的特征在于长期持续的一系列症状。如本领域技术人员所理解，抑郁是一种一般由外界应激物引发或引起的严重问题。随着压力的增强或持续，常常引起机体的化学失衡。

[0003]临床上的抑郁可以使身体和心理上非常衰弱，甚至引起自杀方式造成的死亡。失去生产力及人际关系问题是轻度抑郁的后果。目前，抗抑郁药物是治疗抑郁的基石，特别是对至少中度严重的抑郁。虽然应用抗抑郁药治疗后，抑郁个体和动物倾向于改善，但许多个体和动物对所开处方的第一抗抑郁药不起反应。这样的个体或动物可以最终得益于不同的抗抑郁药，或者，如果足够有效，其得益于合适抗抑郁药的联合。

[0004]性功能障碍是另一普遍的病症。在人群总体中，据认为，在18-59岁之间，女性中的百分之四十三(43％)和男性中的百分之三十一(31％)经历性功能障碍，一些人重复经历性功能障碍。应该理解，性功能障碍可以包括，例如，对性的兴趣缺乏、唤醒问题、不能享受性和与性表现有关的焦虑。确实，一般地，发现心情良好对性功能有显著的影响。就此而言，那些不快乐或抑郁的人更有可能经历与性功能障碍相关的困难。唤醒问题影响超过2千万美国男性(即，在10个成年男性中约有2个)，这种困难通常与一些类型的抑郁或情绪紊乱相关或者相伴。同时，发现处方抗抑郁药事实上恶化了这种情况，因为应用它们的频繁副作用是性功能障碍。实际上，在高达百分之七十五(75％)的应用相同处方抗抑郁药的使用者中，性反应实际上可以被降低。为此，存在着对下述治疗形式的需求：其减轻抑郁或否则使情绪更好，伴有性反应、唤醒或欲望的增强；或者可选地，对人或动物的性功能没有负面影响。

[0005]与本发明化合物有关的领域的技术人员的现有工作主要着眼于6-甲氧基-2，3-苯并唑啉酮(6-methoxy-2，3-benzoxazolinone(6-MBOA))。例如，已经大量研究了6-MBOA在加强单子叶植物对宽范围昆虫害虫的抵抗性中的作用。已经进一步证明，6-MBOA及其化学母体也可以有抑制竞争物种的根和芽生长的异种克生性质。而且，已发现，6-MBOA可以具有抗微生物特性，其中6-MBOA在生长早期似乎是组成型的，位于暴露于微生物和昆虫攻击最多的那些组织中。

[0006]长期以来，怀疑植物中的化合物影响野生啮齿动物的季节性繁殖量。在1981年，6-MBOA成为植物中第一个被证实为影响季节性繁殖循环的天然发生化合物。容易知道的是，6-MBOA在单子叶植物中以不同浓度被发现。随后，工作的主要部分着重于将6-MBOA作为许多啮齿动物和少数鸟类的季节性繁殖的抑制剂和群体大小的效应物。就此而言，与6-MBAO相关的化合物和可能与6-MBAO共同发生的化合物通常尚未研究。

[0007]6-MBOA可以在妊娠和哺乳期间从成年雌性传给后代，这典型地使年轻接受者的生长增加和性腺较大。幼体依靠母亲的光周期史和6-MBOA的相互作用来确定生长和青春期开始的时间。已经发现，喂养含6-MBOA食物的成年动物产生更多的雌性后代。相似地，向怀孕的雌性喂给6-MBOA时，雄性后代的性腺发育通常增强。

[0008]在啮齿动物中，已经发现，褪黑激素(melatonin)对生长和繁殖的抑制效应被6-MBOA部分阻断(Gower et al.，″Reproductiveresponses of male Microtus montanus to photo period，melatonin，and6-MBOA″，Journal of Pineal Research，8：297-312，1990)。如本领域的技术人员进一步显示，6-MBOA可以在褪黑激素受体处阻断褪黑激素或独立作用以抑制褪黑激素的作用(Sweat et al.，″Uterotropic6-methoxybenzoxazolinone is an adrenergic agonist and melatonin analog，″Molecular and Cellular Endocrinology，57：131-138，1988)。

[0009]6-MBOA诱导的高褪黑激素水平也可以引起褪黑激素受体脱敏(Daya et al.,′Effect of 6-methoxy-2-benzoxazolinone on the activitiesof rat pineal N-acetyltransferase and hydroxyindole-O-methyltransferaseand on melatonin production，″Journal of Pineal Research，8：57-66，1990)，但是不是针对所有的啮齿动物(Anderson et al.，″Effects of melatonin and6-methoxybenzoxazolinone on photoperiodic control of testis size in adultmale golden hamsters，″Journal of Pineal Research，5：351-65，1988)。

[0010]本领域技术人员的进一步发现表明，6-MBOA刺激而不是抑制褪黑激素生物合成并且不妨碍去甲肾上腺素对褪黑激素合成的刺激(Yuwiler et al.，″Effects of 6-methoxy-2-benzoxazolinone on the pinealmelatonin generating system，″J.Pharmacol.Exp.Ther.233：45-50，1985)。而且，6-MBOA可以作用于alpha-(α)和beta-(β)肾上腺素受体(Daya et al.，″Effect of 6-methoxy-2-benzoxazolinone on the activities of rat pinealN-acetyltransferase and hydroxyindole-O-rnethyltransferase and onmelatonin production，″Journal of Pineal Research，8：57-66，1990)，并且可以刺激松果体、下丘脑和垂体腺中的腺苷酸环化酶(adenylcyclase)(即，腺苷酸环化酶(adenylate cyclase))活性(Sweat et al.，″Uterotropic6-methoxy-benzoxazolinone is an adrenergic agonist and melatoninanalog，″Molecular and Cellular Endocrinology，57：131-138，1988)。

[0011]如所理解，对6-MBOA的一些反应，类似子宫肥大，可以用雌激素重复，但是6-MBOA不是雌激素化合物(Gower，″Endocrineeffects of the naturally occurring reproductive stimulant，6-methoxy-benzoxazolinone，″ Ph.D.Thesis，University of Utah，Salt Lake City，Utah，1990)。同时，6-MBOA可以增加卵泡刺激素(Butterstein et al.，″The plantmetabolite 6-methoxybenzoxazolinone interacts with follicle-stimulatinghormone to enhance ovarian growth，″Biology of Reproduction，39：465-71，1988)和垂体催乳素的合成速度(Vaughan et al.，″Hormonal consequencesof subcutaneous 6-methoxy-2-benzoxazolinone pellets or injections inprepubertal male and female rats，″Journal of Reproduction and Fertility，83：859-66，1988)。此外，对于植入了含有6MBOA的胶囊的至少一种啮齿类动物，下丘脑的促黄体生成激素释放激素量和垂体腺重量更大(Urbanski et al.，″Influence of photoperiod and 6-methoxybenzoxazolinoneon the reproductive axis of inbred LSH/Ss Lak male hamsters.″Journal ofReproduction and Fertility，90：157-163，1990)。

[0012]本发明的发明人认识到，6-MBOA和吲哚胺、褪黑激素，具有结构相似性。然而，褪黑激素恶化抑郁人群的焦虑症状。6-MBOA作为褪黑激素激动剂，能够在这方面证明是相反的并实际上改善情绪。然而，本发明人没有注意到任何现有技术研究或建议出将6-MBOA或相关化合物用作在人类中具有作用于精神的效应，特别是针对抑郁或使情绪更好。本发明的一个目标是开发针对抑郁和性功能障碍的疗法，需要应用属于相关化学家族的化合物，6-MBOA是所述家族的一个成员。据此，进一步的目标是开发出以适于人类治疗用途的量从植物和动物来源提取、衍生和/或分离所述化合物的方法。

[0013]除了应激(stress)对抑郁和情绪紊乱以及性的表现(即，欲望、唤醒和表现)的影响，如上所概括描述，本领域技术人员也可以理解应激对动物和人类的免疫系统和焦虑水平的多重效应。例如，动物可以处于与应激相关的免疫功能障碍的风险中，其随着与运送应激、手术、断奶、行为或训练、拥挤和/或与不熟悉的动物混合有关的感染、发病率和死亡率的增加而表现出来。这种免疫损害对家畜和其它食用动物工业的损失可以是明显的，估计仅在美国每年超过十亿美元。

[0014]动物和人类的应激可以归因于物理、化学或电磁激发(challenge)；疾病；损伤；和/或心理因素。典型地，这些因素在应激动物或人类机体中诱导生理适应。适应在多个反应中表现出来。应激诱导的激素产生变化可以包括较高水平的免疫抑制激素—皮质酮。应激和焦虑诱导的神经内分泌反应可能与免疫系统功能的变化有关，包括促炎性细胞因子水平的变化。因此，这些应激诱导反应可以使得对病毒和细菌感染的易感性增加，和与细胞因子异常以及炎症过程相关的并发症的可能性增加。

[0015]人可以表现出免疫异常，这可以增加多种应激性刺激后的感染和自身免疫反应风险，所述刺激包括损伤、手术、感染、心理应激、精神疾病(例如抑郁)和物理激发如剧烈的主力运动员训练。由于人的免疫损害形成的并发症可以促使医疗护理的费用明显增加和浪费工作日。

[0016]本领域技术人员，包括人种植物学家、生药学家、医学化学家和一些精神健康护理实践者持续研究衍生自或分离自具有抗焦虑性质的植物材料的新颖的化合物。例如，抗焦虑活性与卡法椒(kava kava)广泛相关，含有卡法椒并具有抗焦虑作用的商业产品广泛已知。

[0017]本发明的一个目标是开发在动物和人类中用于镇静和减轻焦虑的组分和方法，需要应用属于相关化学家族的化合物，6-MBOA是所述家族的一个成员。据此，进一步的目标是开发出以适于人类治疗用途的量从植物和动物来源提取、衍生和/或分离所述化合物的方法。

[0018]虽然本领域技术人员过去的研究试图分离、鉴定和表征具有抗焦虑性质的新的植物化合物，但迄今为止，未曾鉴定或评价6-MBOA的镇静和抗焦虑性质。因此，衍生自、分离自、提取自、产生自和/或收集自单子叶植物的新化合物或通过化学合成得到的新化合物和应用这些化合物减轻动物和人的焦虑和相关病理的方法将是本领域中的显著进步。本文公开和教导了这类新的组分和方法。

本发明的简述和目标

[0019]本发明的一个主要目标是提供衍生自、分离自、和/或提取自单子叶植物或通过化学合成得到的新的化学组分，和应用所述组分帮助经历应激期间或由于焦虑状态造成的焦虑的人类和动物镇静的方法。

[0020]本发明的又一个目标是，提供衍生自、分离自、和/或提取自单子叶植物或通过化学合成得到的新的化学组分，和应用所述组分增加人类和动物中的吲哚胺例如5-羟色胺和褪黑激素的水平的方法。

[0021]本发明的又一个目标是，提供衍生自、分离自、和/或提取自单子叶植物或通过化学合成得到的新的化学组分，其在哺乳动物中起到5-羟色胺和/或褪黑激素类似物和/或激动剂的作用。

[0022]本发明的又一个目标是，提供使单子叶植物生长的新方法，所述方法引起6-MBOA或其它酚类和吲哚胺化合物的产量增加。

[0023]此外，本发明的一个目标是，提供收获单子叶植物的新方法，所述方法有效产生6-MBOA或其它酚类和吲哚胺化合物。

[0024]而且，本发明的一个目标是，提供衍生自、分离自、和/或提取自单子叶植物或通过化学合成得到的新的化学组分，和应用所述组分抑制下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalanic-pituitary-adrenal(HPA))轴的焦虑引发效应的方法。

[0025]本发明的又一个目标是，提供衍生自、分离自、和/或提取自单子叶植物的化合物或通过化学合成得到的新的化学组分，和应用所述组分抵消与焦虑有关的有害行为的方法。

[0026]此外，本发明的一个目标是，提供衍生自、分离自、和/或提取自单子叶植物或通过化学合成得到的新的化学组分，和应用所述组分降低由于焦虑而增加的儿茶酚胺化合物(例如，肾上腺素和去甲肾上腺素)水平的方法。

[0027]本发明的又一个目标是，提供衍生自、分离自、和/或提取自单子叶植物或通过化学合成得到的新的化学组分，和应用所述组分，以与焦虑的减轻或消除有关的方式影响γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid(GABA))水平的方法。

[0028]本发明的又一个目标是，提供衍生自、分离自、和/或提取自单子叶植物或通过化学合成得到的新的化学组分，和应用所述组分影响γ-氨基丁酸(GABA)受体(例如，对受体进行变构修饰，以便增加离子通道开放的时间和/或频率)的方法。

[0029]本发明的又一个目标是，提供衍生自、分离自、和/或提取自单子叶植物或通过化学合成得到的新的化学组分，和应用所述组分减轻与焦虑有关的共病(comorbid)症状的方法。

[0030]本发明的又一个目标是，提供培养和收获单子叶植物，获得酚类化合物的新方法，所述酚类化合物带有与含氧基团、含氮或含第二个氧的基团、和至少一个C₁-C₄烷氧基共价连接的酚类分子。

[0031]此外，本发明的一个目标是，提供通过给予酚类化合物、在人类和动物中保持和增强先天免疫防御的新方法，所述酚类化合物带有与含氧基团、含氮或含第二个氧的基团、和至少一个C₁-C₄烷氧基共价连接的酚类分子。

[0032]本发明的另一个目标是，提供通过给予酚类化合物、在人类和动物中镇静和/或减轻焦虑的新方法，所述酚类化合物带有与含氧基团、含氮或含第二个氧的基团、和至少一个C₁-C₄共价连接的酚类分子。

[0033]本发明的一个目标是，提供培养和收获单子叶植物，获得酚类化合物前体的新方法，所述酚类化合物前体包括苯并嗪酮类-环异羟肟酸(benzoxazinoids-cyclic hydroxamic acid)、内酰胺和它们相应的葡糖苷。

[0034]此外，本发明的一个目标是，提供通过给予酚类化合物前体、在人类和动物中保持和增强先天免疫防御的新方法，所述酚类化合物前体包括苯并嗪酮类-环异羟肟酸、内酰胺和它们相应的葡糖苷。

[0035]与前述的目标一致，和根据本文所体现和广泛描述的本发明，已经发现，一些酚类化合物和酚类化合物前体——它们通过共有的结构相似性并且与5-羟色胺和/或褪黑激素具有结构相似性而彼此相关——对于减轻人类和动物的焦虑症状有效。如所理解，本发明的新的化合物可以在单子叶植物的早期生长中作为植物次生代谢物而存在，由于它们在一些动物的器官中的消化而浓缩，或者可以通过化学方法合成。本发明考虑衍生自、分离自、和/或提取自单子叶植物的化合物或通过化学合成得到的新的化合物的治疗应用，用于在人类和动物中减轻焦虑。

[0036]目前，本发明治疗方法的一个优选的实施方案包括：通过人或动物在一定时期上消化本发明的新的化合物，或通过其它方式使本发明化合物进入机体。雄性和雌性都从本发明化合物的消化中受益，其中是在所述化合物仍然被包含在带有这种化合物的单子叶植物的干燥叶子中的情况下；或所述化合物以纯化和/或合成制备物的形式被摄取。根据本发明人的发现，看来本发明的新化合物起到吲哚胺类似物和/或激动剂的作用，并且有助于减轻与应激有关的焦虑。

[0037]如下文更详细论述，目前，本发明的一个当前优选实施方式包括给予属于相关化学家族的酚类化合物，6-甲氧基-2，3-苯并唑啉酮(6-MBOA)是所述家族的一个成员。这些酚类化合物与褪黑激素和吲哚胺化合物具有结构相似性。基于与褪黑激素的结构相似性，研究本发明的化合物对焦虑相关症状的效应。在本发明方法目前的一个优选实施方式中，特别强调通过给予治疗有效量的6-MBOA组分或其药学上可接受的盐，在人类和动物中镇静和减轻焦虑和相关行为。

[0038]用于在人类和动物中减轻焦虑的本发明化合物的一个来源可见于一些单子叶植物的早期生长期。为了从这些单子叶植物中获得适于人类治疗用途的本发明化合物，在较早的生命历史阶段收获这些植物，并应用明确的参数干燥，以及应用特定分析标准来确定适宜性。然而，也可能从动物部分得到适于人类治疗用途浓度的本发明化合物，包括但不必限于，鹿和麋鹿(Cervidae(鹿科动物))的茸角尖端；在所述动物消化萌发中或者不成熟的草之后，它们在该处浓缩。此外，本发明的化合物也可以通过化学合成得到。

附图简述

[0039]从下面的描述和所附的权利要求书，结合所附的附图，本发明的前述目标及特征和其它目标及特征将更加完全明显。理解这些附图仅描述了本发明的典型实施方式，并且从而不认为这些附图限制本发明的范围，本发明将通过应用伴随的附图以附加的具体性和细节而描述，其中：

[0040]图1是柱状图，阐述了针对二硝基氟苯(dinitrofluorobenzene(DNFB))的细胞免疫应答，从检测暴露于本发明化合物的一个目前优选的实施方式的应激和非应激小鼠和相应的应激和非应激对照小鼠的耳肿胀的研究得到；

[0041]图2是柱状图，阐述了本发明化合物的一个目前优选的实施方式对细胞介导免疫(cell-mediated immunity，CMI)的保留的效应的评价，所述细胞介导免疫响应于二硝基氟苯(DNFB)而出现，从检测暴露于本发明化合物的一个目前优选的实施方式的应激和非应激小鼠(即，以浓度40mg/kg、25mg/kg和5mg/kg)和相应的应激和非应激对照小鼠的耳肿胀的研究得到；

[0042]图3是柱状图，阐述了本发明方法的一个目前优选的实施方式，示出了对二硝基氟苯(DNFB)的细胞免疫应答，从检测暴露于本发明化合物的一个目前优选的实施方式的两个(2)不同剂量的应激牛和相应的应激和非应激对照牛的耳肿胀的研究得到；和

[0043]图4是柱状图，阐述了本发明方法的一个目前优选的实施方式，示出了对二硝基氟苯(DNFB)的细胞免疫应答，从检测暴露于本发明化合物的一个目前优选的实施方式的两个(2)不同剂量的应激牛和相应的应激和非应激对照牛的颈部肿胀的研究得到。

优选实施方式详述

[0044]容易理解的是，如本文的图、式子和表中一般性地描述和阐述，本发明的组分能够以宽范围的不同构型被排列和设计。当然，本领域普通技术人员会理解，可以对本文的细节进行多种修改，而不背离如所述的本发明的基本特性。因此，下面对本发明组分和方法的实施方式的更详细描述，如图1至图4所示，不意图于限制如要求的本发明的范围，而是仅仅代表本发明的目前优选的实施方式的代表。

[0045]参照下面的式I-IV，本发明化合物共同具有酚类分子，其与含氧基团、含氮或含另一个氧的基团、和至少一个C₁-C₄烷氧基共价连接。应用描述化学结构的标准惯例，式I-III公开了限定本发明化合物的化学结构和具体参数。式IV是描述本发明组分的所有目前优选的实施方式的统一式子。

[0046] 式I-根据下式的化学组分

其中“R”表示C₁-C₄烷氧基，条件是R位于环中的4位或5位；

其中“n”表示整数0、1或2中的一个；

其中“A”表示-OH、-NH₂或NHCR′，其中R′表示C₁-C₄烷基；

或其药学上可接受的盐。

[0047] 式II-根据下式的化学组分

其中“R”表示C₁-C₄烷氧基，条件是R位于环中的5位或6位；

其中“n”表示整数0、1或2中的一个；

或其药学上可接受的盐。

[0048] 式III-根据下式的化学组分

其中“R”表示C₁-C₄烷氧基，条件是R位于环中的6位或7位；

其中“n”表示整数0、1或2中的一个；

或其药学上可接受的盐。

[0049] 式IV-根据下式的化学组分

其中“R”表示C₁-C₄烷氧基，条件是R位于环中的4位或5位；

其中“n”表示整数0、1或2中的一个；

其中“B”表示H，并且“A”表示-OH、-NH₂或NHCR′，其中R′意为C₁-C₄烷基；和“BA”表示

或

或其药学上可接受的盐。

[0050]已经发现，本发明的化合物，当被消化或引入人类或动物机体中时，有效作为：(1)抗抑郁药，原因是其使情绪改善和减轻或缓解抑郁症状；(2)在性治疗中，原因是其改善性欲望和性表现(例如，欲望、唤醒和表现)；(3)对体重减轻的有效的附加疗法；(4)作为对物质滥用和成瘾的附加治疗；(5)在人类和动物中保持和增强先天免疫防御；和(6)减轻与焦虑有关的症状和共病行为。所述化合物可以以它们在其中天然发生的植物地上部分的形式给予，如，通过举例而不是限制的方式，未成熟玉米的地上叶子，或者以药学上可接受载体中的纯的或化学合成的化合物给予。

[0051]本发明化合物可以以片剂、胶囊、悬浮液、溶液形式经口给予，或适于这种摄取的其它方式给予，可能是作为与其它化合物的混合物，以便增强吸收进入血流或协助实现所需的效应。同样，考虑口服给予包括舌下(即，在舌下)剂量形式。本发明的化合物也可以通过鼻内(即，通过鼻腔结构)或经粘膜(即，穿过粘膜)传递。

[0052]此外，本发明的化合物也可以肠外给予，以皮下、肌肉内或静脉内注射，或者通过植入的方式持续释放。当肠道外给予时，本发明的化合物将被溶解在生理上可接受的液体介质中和/或根据已知的药学技术被化合。给予本发明化合物的另一方式可以是透皮贴剂，其中本发明化合物向机体的进入通过可接受和适合的载体分子得以促进。

[0053]如果没有特别限定，本文应用的技术、科学和医学术语具有与本发明所属领域技术人员理解的意义相同的意义。然而，为了对本申请中应用的各个术语建立支持，提供下面的技术注释、定义和叙述作为参考。

[0054]“应激(Stress)”可以定义为，动物或人类不能适应刺激或因素(例如，物理的、化学的或情绪的(如，分别是创伤、组胺或恐惧))，这引起生理上的紧张，使得动物或人易于发生疾病或损害正常的生理机能。

[0055]“细胞因子(Cytokines)”可以定义为细胞分泌的一类免疫调节蛋白(例如，白细胞介素、肿瘤坏死因子或干扰素)。细胞因子主要由与免疫有关的细胞分泌。

[0056]“激素(Hormone)”可以定义为，活细胞分泌进入体液的化学产品(通常是有机化学物)，所述产品可以在体液中被运输到机体的其它部位并对细胞的活性产生特定效应。

[0057]“免疫系统(Immune system)”可以定义为，负责保护动物或人的机体免遭外来物质、细胞和组织损害的系统。免疫系统包括胸腺、脾、淋巴结、淋巴组织的特定沉积物(例如，在胃肠道和骨髓中)、抗体和淋巴细胞(例如，B细胞和T细胞)。

[0058]“T细胞”可以定义为，在胸腺中经历分化的几种淋巴细胞中的任意淋巴细胞。T细胞可以具有高度特异的细胞表面抗原受体，并且可以参与控制细胞介导免疫和体液免疫的起始或者抑制它们。T细胞也可以具有裂解抗原携带细胞(antigen-bearing cell)的受体。

[0059]“细胞介导免疫(cell mediated immunity，CMI)”可以定义为，涉及主要由T细胞、特别是细胞毒性T细胞而不是B细胞分泌的抗体所介导的免疫应答。

[0060]“儿茶酚胺(Catecholamines)”可以定义为，含有带有两个相邻羟基和乙胺侧链的苯环的多种化合物中的任意化合物(例如，肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺和类似物)。儿茶酚胺可以起到激素或神经递质的作用，或者可选地，可以起到这两者的作用。

[0061]“肾上腺皮质激素(Corticoid)”可以定义为，从肾上腺皮质提取的多种有机化合物中的任意。肾上腺皮质激素一般是指类固醇或皮质类固醇，它们中的几种是激素(例如，皮质酮、可的松和醛固酮)。

[0062]“糖皮质激素(Glucocorticoid)”是指主要作用于糖代谢的肾上腺皮质激素(例如，可的松、氢化可的松、强的松、强的松龙、氟羟强的松龙、甲基强的松龙、地塞米松、倍他米松和类似物)。

[0063]“先天的(Innate)”可以定义为，从出生时就存在于或属于人、动物或其它活的生物。先天的可以与天然或自然的同义使用。

[0064]“免疫性(Immunity)”指抵抗特定疾病的能力，特别是通过预防病原微生物的发展或通过抵消病原微生物毒素和细胞产物的作用。

[0065]“天然免疫(Natural immunity)”是指一个群体(即，种族、品系或种)所具有并且在个体中作为其遗传和/或生物学组成而发生的免疫性。

[0066]“巨噬细胞(Macrophage)”可以定义为大的吞噬细胞。其中吞噬细胞，典型地是白细胞或网状内皮细胞，可以是特征性吞入外来物质的任何细胞。吞噬细胞在机体中的作用是去除和消灭碎片和外来物体(例如，降解组织或细菌)。

[0067]“补体(Complement)”是指通常见于血清和血浆中的任何不耐热(即，过度加热而失活)的物质。补体可以和抗体联合起作用，破坏细菌、外来血块和其它抗原。

[0068]“抗体(Antibody)”是指多种机体球蛋白中的任意，其可以响应于感染或给予合适抗原或半抗原(即，非抗原物质或弱抗原物质)由特定免疫系统的细胞产生，并且与抗原(例如细菌、毒素或外来红细胞)结合，以便中和它们和/或中和它们的毒素。

[0069]许多动物和所有人类具有提供针对外来颗粒的细胞和/或生理防御机制的免疫系统，例如而不是限制，针对侵入的微生物(microbes)和微生物(microorganisms)(例如，细菌、病毒、阿米巴、寄生虫和类似物)，外来蛋白和糖类和其它抗原(即，抗体和/或补体反应的刺激)物质。术语“免疫性”通常与免疫系统及其在机体中的作用交换使用。

[0070]术语“炎症(inflammation)”一般是指免疫系统在识别外来颗粒、抗原或受损组织、迁移细胞和分子，以便攻击外来颗粒、抗原或受损组织和破坏和/或损坏外来颗粒或抗原或消除受损组织的过程。炎症的特征通常是毛细血管扩张、白细胞(即，白血球)渗透、局部和/或整体的体温增加、和疾病和/或整体的疼痛。毛细血管扩张和白细胞渗透进一步被表征为，感染和/或受损组织部位周围的水肿(即，肿胀)。炎症可以是动物和人破坏、损坏和/或消除毒性颗粒或受损组织的重要机制。

[0071]本领域技术人员应该理解，免疫系统是遍布机体的高度复杂的细胞和器官的组织。而且，对免疫的两个一般的划分是本领域技术人员普遍了解的。自然(即，先天或天然)免疫在很大程度上依赖于补体系统、吞噬细胞和细胞因子，保护机体免遭感染。动物和人类从出生时就带有天然免疫，其被编码在基因中。

[0072]补体可以是协助天然免疫细胞和抗体识别(即，识别阶段)抗原或外来颗粒的一组相关蛋白质。补体蛋白可以和抗原或外来颗粒的表面结合(即，活化阶段)。通过补体蛋白的活化可以增加抗原或外来颗粒的膜多孔性，这又可以引起抗原或外来颗粒丧失功能或者，可选地，可以作为“标记(tagging)”机制以增强其它天然免疫细胞(例如吞噬细胞)和/或抗体对抗原或外来颗粒的识别。天然免疫细胞和/或抗体随后可以使抗原或外来颗粒失去功能和/或消除抗原或外来颗粒(即，效应阶段)。

[0073]吞噬细胞属于通过通常称为吞噬作用的过程吞入和破坏其它细胞或颗粒的一组细胞。此外，吞噬细胞(例如，巨噬细胞、中性粒细胞、天然杀伤细胞)可以分泌通常称为细胞因子的可溶性介质，所述介质在使抗原或外来颗粒失去功能和/或消除抗原或外来颗粒中具有活性。细胞因子可以包括，例如而不是限制，干扰素(例如，α-干扰素和β-干扰素)、肿瘤坏死因子(TNF)和白细胞介素。

[0074]特异性(即，获得性)免疫可以保持应用天然免疫细胞和分子，并且可以加入两个附加的免疫防御特征。特异性免疫可以提供给宿主(即，动物或人)“记忆(remember)”特定抗原或外来颗粒的能力。这种记忆特性可以使宿主在随后每一次遇到该特定抗原或外来颗粒时，具有更有效的防御。疫苗接种可以基于特异性免疫记忆特定抗原或外来颗粒的性质。

[0075]特异性免疫也可以使宿主“增强(amplify)”对抗原或外来颗粒的天然免疫防御应答的能力。而且，增强过程也可以涉及天然免疫对抗原或外来颗粒的进入部位的更精确的靶向作用。

[0076]此外，特异性免疫可以利用识别特定抗原或外来颗粒的识别阶段；标记特定抗原或外来颗粒的活化阶段；和抗体、淋巴细胞或淋巴细胞衍生的细胞因子作用于特定抗原或外来颗粒，以便有效使抗原或外来颗粒失去功能和/或破坏抗原或外来颗粒的效应阶段。

[0077]天然免疫和特异性免疫可以不同，不同之处在于，补体和吞噬细胞不能区分不同的抗原，并且在宿主暴露于抗原或外来颗粒之后数目不增加。而抗体和淋巴细胞能够识别特定抗原或外来颗粒，并且可以在宿主暴露于抗原或外来颗粒之后经历数目的增加。

[0078]根据所利用的是免疫系统的何种成分，可以识别两类特定免疫应答。体液免疫是指抗体和其它分子消除抗原和/或中和抗原的作用。细胞介导免疫(CMI)，有时称作细胞免疫，是指淋巴细胞(例如B淋巴细胞(“B细胞”)和T淋巴细胞(“T细胞”))在消除和/或中和抗原或外来颗粒中的作用。

[0079]本领域技术人员会理解，免疫系统的内分泌和激素调节涉及复杂的过程。多种激素和激素通路可能涉及免疫系统调节。免疫调节中的重要的内分泌腺可以包括，例如而不是限制，松果体、下丘脑、垂体腺和肾上腺。松果体可能负责从5-羟色胺合成褪黑激素。褪黑激素可以对机体有多重效应，其可以包括刺激和/或增强白细胞和/或淋巴细胞响应于抗原或外来颗粒的功能。5-羟色胺也可以通过刺激T细胞增殖对免疫系统产生积极效应，并且可以增强一些吞噬细胞(例如，巨噬细胞)的功能。

[0080]下丘脑、垂体和肾上腺形成重要的激素反馈通路，下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴，用于调节机体对应激的反应。下丘脑可以分泌可以作用于垂体腺的激素，使垂体释放其激素。垂体腺的激素可以作用于机体的内分泌器官或其它器官。肾上腺可以负责产生多种类固醇激素，包括糖皮质激素、盐皮质激素和雄激素。肾上腺也可以负责产生儿茶酚胺激素(例如，肾上腺素、去甲肾上腺素和类似激素)。

[0081]遭受应激情况的人和动物中的感染性疾病的较高发病率是在激发期间发生的神经内分泌和免疫改变的结果。这些改变可以是对应激条件适应的结果。对应激的此适应过程的被广泛研究的生理和解剖组成是HPA轴。HPA轴的活化通常引起与应激、疾病和损伤相关的糖皮质激素水平增加。糖皮质激素对免疫功能可以有抑制作用，并且可以在应激相关免疫抑制中起作用。因此，糖皮质激素的免疫抑制效应可以包括免疫系统细胞的产生减少和/或对免疫系统细胞的破坏，以及抑制免疫系统形成的炎症。此外，肾上腺儿茶酚胺(例如，肾上腺素和去甲肾上腺素)可以响应于应激而升高，并且可以在应激相关的情感状态中具有重要作用，包括焦虑。

[0082]虽然与褪黑激素有结构相似性，但6-MBOA和相关化合物可以独立地起到褪黑激素激动剂的作用和位于α和β肾上腺素能细胞受体处。尽管褪黑激素加重抑郁人群的烦躁症状，但作为褪黑激素激动剂的本发明的6-MBOA和相关化合物，以相反的方式起作用，并且实际上激发了更好的情绪。

[0083]作为褪黑激素激动剂，本发明的新的化合物可以刺激褪黑激素产生或者可以增强褪黑激素对免疫系统的作用。例如而不是限制，本发明的6-MBOA和相关化合物可以刺激免疫系统细胞产生淋巴细胞和细胞因子。

[0084]以前没有建议提示，给予6-MBOA和本发明的相关新化合物来保留和/或增强免疫系统功能和/或减轻焦虑和除抑郁之外的相关共病。为此，本发明的发明人发现了，通过应用本发明的新的化合物刺激5-羟色胺诱导和褪黑激素诱导对免疫系统的效应和/或降低应激诱导的神经内分泌产物，可以实现镇静和减轻焦虑症状。

[0085]此外，5-羟色胺和褪黑激素都可以有免疫调节性质。5-羟色胺可以增强细胞增殖和巨噬细胞抗原呈递。褪黑激素在许多应激诱导的免疫功能障碍模型中可以有增强的活性，包括但不限于束缚应激、损伤和给予氢化可的松。而且，如本领域技术人员理解，本发明的6-MBOA或相关化合物可以分别在结构上和/或功能上与褪黑激素和儿茶酚胺类似(例如，肾上腺素，α肾上腺素能化合物和β肾上腺素能化合物，和类似物)。

[0086]本发明的6-MBOA或相关化合物在中枢神经系统中和中枢神经系统周围可以有抑制效应和刺激效应。作为褪黑激素类似物，6-MBOA可以作为褪黑激素拮抗剂在褪黑激素受体处起作用，从而阻断褪黑激素对性成熟和/或性功能的负效应。此外，6-MBOA的β肾上腺素能受体效应有助于使褪黑激素受体脱敏，并且因而最小化褪黑激素对性成熟和/或性功能的负效应。因此，发明人的工作证明，本发明化合物目前优选的实施方式具有褪黑激素功能的一些正效应(例如，镇静和/或抗焦虑作用和维持和/或增强免疫功能)而不激发褪黑激素作用的负效应(例如，抑制性成熟、烦躁和类似效应)。

[0087]本发明用于预防或治疗焦虑症和相关行为和状态的新方法的一个目前优选的实施方式包括，给予需要这种治疗的动物或人有效量的本申请所述化合物。存在几种不同的焦虑症和相关行为和状态，包括例如而不是限制：

恐惧症(Panic Disorder)

广场恐怖症(Agoraphobia)

广泛性焦虑症(Generalized Anxiety Disorder，GAD)

特定恐怖症(Specific Phobia)

社交恐怖症(Social Phobia)

强迫症(Obsessive-Compulsive Disorder，OCD)

创伤后应激障碍(Post-Traumatic Stress Disorder，PTSD)

急性应激障碍

注意力缺陷多动症(Attention-Deficit Hyperactivity Disorder，ADHD)

上述疾病以及其它焦虑症在American Psychiatric Association(DSM-IV)出版的Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders，第四版中被分类。然而，考虑本发明的精神和范围包括所有焦虑状态和共病状态。

[0088]在美国，焦虑症是最普遍类型的人精神疾病。焦虑症可以包括，例如但不是限制，恐惧症、强迫症、创伤后应激障碍、特定恐怖症、社交恐怖症和广泛性焦虑症。焦虑症的特征在于，不安、恐惧和痛苦，有时经历焦虑症而并没有真正威胁(real threats)的明显证据。在应激状态下，人和动物可以产生反应，其行为和自主功能和激素功能及分泌有改变。这些反应可以引起应激状态期间焦虑症状的恶化，影响心理和生理健康及行为。焦虑期间的唤醒增加可以引起过度警觉(hypervigilance)、惊吓反应增加、注意力和学习受损、失眠、易激惹(irritability)，所有这些可以导致人和动物在各种环境下的行动减弱。美国数百万人(即，被诊断的2300万人以上)可能经历这些状态，对个体行为和健康的花费明显、明显丧失生产力、并且治疗花费明显。

[0089]动物的行为和健康常常受到焦虑行为的挑战和不利影响。引起焦虑的情况：新环境、航行和运输、疾病或损伤、断奶、拥挤、阉割、疫苗接种、浸洗(dipping)、驱虫、加标签(tagging)、烙印、装防护物(shoeing)和包括训练和表演的其它过程对健康、生长和行为具有不利影响。训练个体动物减轻焦虑的广泛努力花费大并且通常是不实际的。类似地，由于焦虑相关应激状态引起的体重丢失可以引起动物工业的严重财政损失。

[0090]目前可利用的治疗焦虑症的方法包括，例如而不是限制，心理治疗，包括行为、认知和情感的，以及放松方法，或者对动物的训练。这些方法可以包括，实现焦虑减轻和行为增强的明显时间和花费。在人和动物中也可以应用药物来减轻焦虑，包括，例如而不是限制，5-羟色胺再摄取抑制剂(即，氟西汀(fluoxetine)、帕罗西汀(paroxetine)、舍曲林(sertraline)、西酞普兰(citalopram)、草酸西酞普兰(escitalopram)、氟伏沙明(fluvoxamine)、维拉法辛(venlafaxine)等)，苯二氮类(例如，阿普唑仑(alprazolam)、甲氨二氮、氯氮、地西泮(diazepam)、哈拉西泮(halazepam)、劳拉西泮(lorazepam)、奥沙西泮(oxazepam)等)，β-受体阻断剂(β-blocker)(即，β-肾上腺素能受体拮抗剂(例如，普萘洛尔等)，单胺氧化酶抑制剂(例如，苯嗪(phenylzine)、反苯环丙胺(tranylcypromine)等)，氮杂螺酮(azapirone)(例如，丁螺环酮(buspirone))，二苯甲烷(例如，苯海拉明(diphenhydramine)、羟嗪(hydroxyzine)等)和三环类抗抑郁药(例如，阿米替林(amitryptyline)，氯米帕明(clormipramine)、多虑平(doxepin)、丙咪嗪(imipramine)、三甲丙咪嗪(trimipramine)、地昔帕明(desipramine)、去甲替林(nortriptyline)、普罗替林(protriptyline)等)。这些药物可以有严重的副作用，不容易得到用于治疗动物，和不适于食品生产物种。因此，需要用于治疗人和动物的焦虑症的新方法。

[0091]本发明提供了预防或治疗焦虑症的新的组分和方法，包括给予需要这种治疗的动物或人有效量的本申请所述化合物。此外，动物中的有关焦虑的行为和阴性结果可以包括，例如而不是限制：(1)反复的、强制性的和刻板动作(例如，舔皮肤至溃疡、咬槽(cribbing)、吮吸空气、踱步和其它病理行为)；(2)与操纵有关的恐惧和恐怖(例如，放入车中、被触摸、训练、行动)；(3)断奶应激；(4)社交应激/混合新的动物；(5)运输；(6)被限制和拥挤，带有相关的体重减轻和负面健康效应；和(7)在食品生产动物中(即，由于应激反应引起的肉的质量差)。任何这些疾病都可以通过本发明的方法和化合物得到治疗或预防。进一步地，能够使个体人处于新的激发或危险情况的应激情况也可以引起焦虑症状和相关行为，而本发明可以最小化这些焦虑产生情况的不利效应和促进恢复，也可以防止或最小化长期焦虑症的形成。对焦虑的人和动物的有效治疗可以帮助学习、训练和行为，并且可以最小化或预防应激和焦虑的有害的身体后果。

[0092]虽然本领域技术人员以前的研究试图分离、鉴定和表征具有刺激免疫系统、抗焦虑和刺激情绪性质的植物化合物，但迄今为止，没有对本发明的6-MBOA和相关化合物保持和/或增强先天免疫防御和/或刺激情绪进行鉴定或评价。因此，本领域技术人员容易了解，衍生自、分离自、提取自、产生自和/或收获自单子叶植物的新的化合物和应用所述化合物保持和/或增强人和动物的先天免疫防御的方法，在本领域中将是显著的进步。本文公开和教导了这类新的组分和方法。

[0093]虽然本领域技术人员以前的研究试图分离、鉴定和表征具有镇静和/或抗焦虑性质的植物化合物，但迄今为止，没有对6-MBOA的镇静和/或抗焦虑进行鉴定或评价。因此，衍生自、分离自、提取自、产生自和/或收获自单子叶植物，或可选地，通过化学合成的新的化合物，和应用所述化合物在动物和人中用于镇静和/或减轻焦虑和相关共病行为和状态的方法，如本发明所考虑的，在本领域中将是显著的进步。

[0094]下面的实施例将进一步详细阐明本发明的实施。本领域技术人员容易理解，如本文实施例一般性描述和示出的，下面本发明的方法、配制物和新化合物的组合物，被视为本发明的示例性原则，而不是作为对实施这些原则的具体构成或过程的限制。因此，如实施例1-17所示，下文对本方法、本发明技术、配制物和组合物的目前优选实施方式的更详细描述，其意图不是限制如所要求的本发明的范围，而仅仅是代表了本发明目前优选的实施方式。

实施例1

本发明化合物的相似生理作用

[0095]式I、II、III的代表性化合物如下表示为化合物1-7。式I、II、III的化合物具有类似的生理性质，因此可以被考虑为，对治疗目的是相似或等价的，并且通过啮齿动物模型被检测。

1.2-氨基-5-甲氧基苯酚[式I的成员]

2.6-甲氧基-2-苯并唑啉酮[式II的成员]

3.2，4-二羟基-7-甲氧基-1，4-(2H)-苯并嗪-3-酮[式III的成员]

4.2-羟基-4-甲氧基乙酰苯胺[式I的成员]

5.2-羟基-4-乙氧基乙酰苯胺[式I的成员]

6.5-甲氧基-2-苯并唑啉酮[式III的成员]

7.2-羟基-5-甲氧基乙酰苯胺[式I的成员]

[0096]雌性山区野鼠山地田鼠(Microtis montanus)接受式I、II和III的代表性化合物的腹膜内注射，连续3日，末次注射后24小时处死，测定子宫重量反应。为了评价每一代表性化合物的性质，为本试验特异制备通过化学方法得到的纯化合物(University of Utah Department ofChemistry，Salt Lake City，Utah)。所有化合物的注射剂量水平是5mcg/日，溶解在百分之五(5％)的丙二醇中，注射总体积是0.5ml。对照动物仅接受0.5ml的百分之五(5％)丙二醇。所有的野鼠都是4-5周龄，体重是25-29g。

[0097]如下面的表1所示，属于式I、II和III的所有化合物引起子宫重量在统计学上的显著增加。

表1.注射本发明化合物——式I、II和III的成员——对山区野鼠 山地 田鼠子宫重量的影响

注射的化合物	式子编号	动物数目	子宫平均重量(mg)
				对照(丙二醇)	---	8	15.2±2.4
6-甲氧基-2-苯并唑啉酮	II	11	27.7±5.6*
				6-甲氧基-2-苯并唑啉酮	III	8	20.0±4.7**
2-羟基-4-甲氧基乙酰苯胺	I	8	23.1±2.7*
				2-羟基-4-乙氧基乙酰苯胺	I	8	22.2±3.9*
2-氨基-5-甲氧基苯酚	I	8	21.8±3.5*
				2-羟基-5-甲氧基乙酰苯胺	I	8	21.1±4.4***
2-氨基-4-甲氧基苯酚	I	8	22.2±3.2**

^*与对照有显著差异，P＜0.001

^**与对照有显著差异，P＜0.015

^***与对照有显著差异，P＝0.004

[0098]平均而言，接受这些物质的野鼠的子宫重量是22.8g，比对照组高百分之五十(50％)。在给予6-甲氧基-2-苯并唑啉酮的雌性中，平均重量增加最多，比对照野鼠子宫重量多百分之八十二(82％)，但是甚至属于式I、II或III的化合物的最小效应，其对于5-甲氧基-2-苯并唑啉酮而言，子宫重量也增加了百分之三十二(32％)。这些结果表明，本发明化合物具有共同的生理效应或作用方式。

实施例2

本发明化合物在人类男性中作为抗抑郁剂和壮阳剂

[0099]本发明的这个部分涉及减轻抑郁和改善情绪或幸福感(feelings of well-being)的方法，所述方法包括，给予人类男性有效量的本文定义的本发明的一种或多种化合物。本发明的这个部分也涉及治疗性功能障碍或增强性欲望和性表现的方法，包括但不必限于性兴趣缺乏、唤醒问题、不能享受性和与性表现有关的焦虑，所述方法包括，给予有效量的本发明的一种或多种活性化合物。

[0100]对人类男性进行双盲交叉试验，检测本发明化合物作为治疗抑郁或改进情绪以及改善性功能的治疗剂。试验有三个阶段，每一阶段是两周，其间参与者接受本发明化合物一个阶段或两个阶段。日剂量从天然包含在30-45cm高的不成熟玉米植物的地上叶子中的本发明化合物制成，用合成的6-甲氧基-2-苯并唑啉酮标准化，总共为15mg6-甲氧基-2-苯并唑啉酮。选择15毫克(15mg)剂量，原因是从对啮齿动物、兔和其它动物的现有研究推测，认为此剂量可能是对人的最低有效日剂量。发明人对人进行的以前的轶事式试验(anecdotaltrials)表明，15mg的日剂量具有所需效果，对健康没有不利后果。通常，发现本发明化合物的治疗有效量可以为约5微克(micrograms(mcg))至约60mg之间的日剂量范围。

[0101]通过业已广泛接受的指标，对抑郁或心理健康和性功能每周进行评价：对抑郁和广泛性焦虑症进行量化，应用医院用焦虑和抑郁量表(Hospital Anxiety and Depression Scale，HAD)；和针对性欲望、心理唤醒和总体的性观念(sexual outlook)，应用亚利桑那性体验指数(Arizona Sexual Experience Index(SEX))。

[0102]阶段1持续14天，其间参与者服用本发明日剂量或安慰剂。本发明化合物或安慰剂向男性参与者的分配是随机进行的。在包括于第一阶段的14天之前之近前，进行最初的身体检查和血液分析。在此时，使每一男性填HAD和SEX表，评价心理健康和性功能，检测他们就座时和站立时的血压和脉搏，得到血液药品进行生物化学分析。

[0103]阶段2由紧接阶段1之后的一个为期7日的时期构成，其间既没有服用本发明化合物也没有服用安慰剂。在阶段2期间，再次进行身体检查和实验室检测。在持续14天的阶段3中，参与者再次服用本发明化合物或安慰剂。本发明化合物或安慰剂的分配是根据阶段1服用的胶囊的类型进行的。如果参与者在阶段1服用本发明化合物，则在阶段3给予安慰剂，反之亦然。阶段3结束后即刻，再次进行身体检查和实验室分析。完成阶段3之后，向每一参与者提出准备好的问题以及请每一参与者提出有关本发明应用的任何评论和感受。

[0104]表2是可以在实施例2中观察的结果的目前优选实施方式的列表总结。

表2.向成年男性给予本发明化合物的HAD和ASEX总结

参与者	应用本发明化合物		应用安慰剂
					最初值	2周后	最初值	2周后
	1	9.0，12.0	8.0，11.0	8.0，10.0					8.0，13.0
2					16.0，13.0	14.0，12.0	16.0，13.0	16.0，15.0
	3	15.0，10.0	9.0，11.0	15.0，14.0					17.0，14.0
4					12.0，9.0	7.0，10.0	9.0，10.0	9.0，12.0
	5	14.0，10.0	10.0，10.0	12.0，10.0					14.0，10.0
6					参与者不可靠—数据不完整，从研究中删除
	7	12.0，9.0	7.0，9.0	9.0，10.0					8.0，9.0
8					12.0，11.0	8.0，11.0	12.0，1 1.0	12.0，10.0
	9	12.0，15.0	12.0，10.0	7.0，10.0					7.0，10.0
10					4.0，15.0	0.0，13.0	9.0，12.0	12.0，12.0
	11	21.0，10.0	6.0，10.0	9.0，12.0					12.0，12.0
12					13.0，9.0	2.0，9.0	13.0，9.0	13.0，9.0
	13	14.0，12.0	13.0，10.0	12.0，10.0					12.0，10.0
14					12.0，10.0	13.0，10.0	18.0，7.0	16.0，7.0
	15	23.0，8.0	18.0，9.0	16.0，9.0					16.0，8.0
平均					13.5，10.9	9.1，10.4	11.8，10.5	12.3，10.8

HAD值在ASEX值之前，两者通过逗号彼此隔开。

两样本配对符号检验(Two-Sample Paired Sign Test)-这是检测显著性时较强或更可靠的统计学试验之一。问题是发明是否影响幸福感或性功能。应用符号检验(Sign-Test)统计学询问“本发明化合物影响幸福感和/和性功能的频率如何”。结果如下：

HAD(本发明)，p＜0.003，非常显著

ASEX(本发明)，p＜0.727，不显著

HAD(安慰剂)，p＜0.688，不显著

ASEX(安慰剂)，p＜1.310，不显著

[0105]这些数据表明，本发明化合物对抑郁或情绪有显著的正效应。十五个(15个)参与者中的十四个(14个)完全完成本试验，仅将这些个体的数据进行分析。HAD分数超过20.0表明临床抑郁，但是较低值也可以与沮丧情绪有关。仅有两个男性进入试验，HAD值超过临床最小值(21.0和23.0)。此外，在服用了本发明化合物之后，十四名(14名)对象中的十二名(12名)表现出改善的情绪、改善的幸福感或抑郁减轻。两周时期内HAD分数降低多达15，平均5.2。两个临床抑郁对象表现出HAD值降低5.0和15.0。平均HAD分数从试验开始的13.5达到服用本发明化合物后的9.1，在统计学上非常有意义。而服用安慰剂，参与者没有表现出统计学上可检测的改变。

[0106]服用本发明化合物两周后，十四名(14名)参与者中的五名(5名)ASEX值降低，这表明性反应改进或性焦虑减轻，而服用安慰剂两周后，十四名(14名)男性中的仅两名(2名)表现出相同的结果。ASEX变化没有发现统计学意义，但这可能归因于样品数目少。在本试验中，本发明化合物的性益处也通过给予所有参与者的退出会见(exit interviews)权利而受到掩蔽(obviated)。虽然考虑到这些，大多数男性报告，比不服用化合物时通常所经历的相比，清晨的阴茎勃起尺寸更大、持续时间更长或频率更高。同样，大多数人的评论集中于，精力、性和其它方面感觉“象十几岁的青少年”(直接引用)。应该指出，由于不愿意或缺少性伙伴，个体情况被复杂化。十五名(15名)参与者中的十二名(12名)也表达了继续应用本发明化合物的主动需求。他们表示了证实本发明化合物在性方面对他们有用的信心。

实施例3

本发明化合物作为人类女性的抗抑郁剂

[0107]本实施例进一步涉及减轻抑郁和改善情绪或幸福感的方法，所述方法包括，给予人类女性或女人(human females)有效量的本发明化合物，如上所定义。应用本发明化合物治疗8名患有临床抑郁的女性，其中3名女性经历了至少一年。参与者服用与实施例2相同剂量的本发明化合物，每日15-mg。在开始日剂量之前，给予参与者HAD。每两周会见每一参与者，检测不利的副作用和对应用本发明化合物的评价。六周试验结束之后，再次给出HAD Index(HAD指数)。

[0108]参照表3，本试验结果的一个目前优选实施方式被列出。

表3.对服用本发明化合物6周的临床抑郁女性的HAD总结

参与者1	起始值	6周后
			1	23.0	18.0
2	21.0	8.0
			3	21.0	21.0
4	24.0	14.0
			5	22.0	12.0
6	21.0	13.0
			7	23.0	7.0
8	20.0	22.0
			平均	21.9	14.4

¹参与者1-4起初[1-2周]被给予本发明化合物，是以该化合物是维生素/矿物质混合物之名义下。

两样本配对符号检验(Two-Sample Paired Sign Test)-这是检测显著性时较强或更可靠的统计学试验之一。问题是本发明化合物是否影响抑郁或幸福感。应用符号检验(Sign-Test)统计学询问“本发明化合物影响抑郁或幸福感的 频率如何”。结果如下：

HAD，p＜0.0313，显著

[0109]这些数据表明，本发明化合物显著减轻抑郁。所有对象的起始HAD分数超过20。所有女性是临床抑郁的，她们的HAD平均分是21.9。八名(8名)参与者中的六名(6名)对本发明化合物表现出反应，其中在六周时间内，HAD分数降低5-16分，平均降低10.5。总平均HAD分数从试验开始的21.9(临床抑郁)降低到应用6周后的14.4(非临床抑郁)，两名参与者最后的HAD值是八(8)和七(7)。试验中仅有8名女性，但是HAD分数降低仍然是统计学上显著的(p＜0.031)。本发明化合物的抗抑郁性质受到掩蔽(obviated)。

[0110]超重和物质滥用的特征都是原发或继发的抑郁。由于为了使治疗长期有效，影响超重和物质滥用的这些心理因素必需连同生理因素共同治疗，所以本发明化合物包括辅助治疗，用于在具有药物滥用或成瘾问题的人中实现体重减轻或降低复发风险。

实施例4

适于人类治疗的浓度的本发明化合物，

得自以独特方式收获和处理的植物

[0111]实施例4涉及从生长至不成熟生长阶段的植物获得适于人类治疗的浓度的本发明化合物的方法。“适于人类治疗的浓度(Concentrations suitable for human therapies)”是指，十克(10克)或更少的干燥植物材料中的本发明化合物制成日剂量(例如，十五毫克(15毫克)本发明化合物，6-甲氧基-2-苯并唑啉酮；然而，本发明化合物的一般治疗有效日剂量是约五mcg(5mcg)至约六十毫克(60mg)之间)。所述剂量可以包括天然发生或合成的新的化合物，或者天然发生和合成的本发明新化合物的组合。

[0112]本文指明了特定的收获和干燥条件，如指明了确定收获质量的分析参数。“特定的收获和干燥条件(specific harvesting and dryingconditions)”是指，通过不同于通常方式的环境从植物得到本发明化合物，其中植物被处理得到终产品。

[0113]作为例子，玉米(corn)，玉米(Zea mays)，典型地生长至成年或成熟状态，装满了种子的穗轴。在产生本发明化合物的不成熟阶段，玉米植物含有生物材料，其预报收获实质量的叶材料，所述材料含有适于人类治疗的浓度的本发明化合物。因此，来自不成熟植物的干燥玉米叶适于本文说明的人类治疗，或者干燥的叶子是浓缩、提取和纯化本发明化合物的来源。存在能够天然产生适于人类治疗的浓度的本发明化合物的其它单子叶植物。

[0114]单子叶植物是开花植物，其胚芽只有一个子叶(cotyledon)或子叶(seed leaf)。单子叶植物是单源群(即，来自一个祖先系)，包括但不限于下列植物家族：禾本科(Poaceae)(真禾本科植物(truegrasses)，也称作禾本科(Gramineae))、菖蒲科(Acoraceae)(白菖蒲sweet flag)、龙舌兰科(Agavaceae)(丝兰yuccas)、泽泻科(Alismataceae)(泽泻(water plantains))、知母科(Anemarrhenaceae)(知母zhi mu)、吊兰科(Anthericaceae)(slender grass lily)、天南星科(Araceae)(马蹄莲arum lilies)、天门冬科(Asparagaceae)(天门冬属asparagus)、Behniaceae(古热带藤本植物(paleotropical lianas))、凤梨科(Bromeliaceae)(凤梨bromeliads，菠萝pineapple)、花蔺科(Butomaceae)(flowering rushes)、省藤亚科(Calamoideae)(棕榈或棕榈树)、秋水仙科(Colchicaceae)(milkmaids)、鸭跖草科(Commelinaceae)(蓝姜blue gingers)、丝粉藻科(Cymodoceaceae)(shoalweed，拍岸浪草surfgrass，widgeonweed)、莎草科(Cyperaceae)(cotton grasses，spike rushes，莎草sedges)、薯蓣科(Dioscoreaceae)(薯蓣yams)、壳精草科(Eriocaulaceae)(hat pins，谷精草pipewort)、须叶藤科(Flagellariaceae)(false rattan)、水鳖科(Hydrocharitaceae)(水蕴草waterweed)、鸢尾科(Iridaceae)(鸢尾iris)、灯心草科(Juncaceae)(灯心草rushes，地杨梅wood-rush)、水麦冬科(Juncaginaceae)(arrow-weeds，arrow-grasses)、毛石蒜科(Lanariaceae)(石碱草soapwort，latherwort，scourwort)、浮萍科(Lemnaceae)(浮萍duckweeds)、百合科(Liliaceae)(百合lilies，洋葱onions，野风信子blubells)、兰花蕉科(Lowiaceae)(兰花蕉orchidantha)、竹芋科(Marantaceae)(竹芋arrowroot，竹芋maranta，prayer-plant)、苔草科(Mayacaceae)(泥炭藓bog-moss，mayaca)、芭蕉科(Musaceac)(香蕉)、玲花蕉科(Nolinaceae)(熊叶草beargrass)、兰科(Orchidaceae)(兰花orchids)、田葱科(Philydraceae)(frogsmouth)、Phormaiaceae(flax lily)、波喜荡草科(Posidoniaceae)(posidonias)、眼子菜科(Potamogetonaceae)(眼子菜pondweeds)、偏穗草科(Rapateaceae)(rapatea)、帚灯草科(Restionaceae)(olifantsriet，rekoala grass，sprucecones)、川蔓藻科(Ruppiaceae)(large-fruit tassel，川蔓藻widgeongrass)、黑三棱科(Sparganiaceae)(bur-reeds)、紫灯花科(Themidaceae)(ookow，Bridges′triteleia)、梭子草科(Thurniaceae)(prionium，thurnia)、香蒲科(Typhaceae)(香蒲bulrushes)、黄眼草科(Xyridaceae)(黄眼草yellow-eyed grass)、姜科(Zingiberaceae)(姜ginger)和大叶藻科(Zosteraceae)(大叶藻eel grass)。考虑本发明化合物可以衍生自、分离自、收获自和/或提取自选自上述确定的任意植物或其它单子叶植物科或植物目的植物。

[0115]本发明化合物的优选实施方式可以选自莎草科和禾本科(也称为禾本科)家族。其中的种包括禾谷植物(例如，高粱、玉米(corn)或玉米(maize)、小麦、黑麦、稻子、大麦和燕麦)；与禾谷植物有关的种如摩擦禾(摩擦草种Tripsacum species)，野生稻(水生菰Zizaniaaquatica，，得克萨斯菰Z.texana)和玉米草(teosinte)(二倍体多年生玉米种Zea diploperennis、繁茂玉米种Z.luxurians、野生玉米种wild Z.mays、Z.nicaraguensis、多年生玉米种Z.perennis)；甘蔗(甘蔗种Saccharum species)；竹子(包括但不限于簕竹属Bambusa、巴山木竹属Bashania、空竹属Cephalostachyum、牡竹属Dendrocalamus、藤竹属Dinochloa、箭竹属Fargesia、巨竹属Gigantochloa、Kinabaluchloa、梨藤竹属Melocalamus、Nastus、毛竹Phyllostchys、Schizostacyum、箭竹Sinarundinaria、泰竹Thyrsostachys、Vietnamosasa和玉山竹Yushania的各种)；和牧草(pasture grasses)(包括但不限于一年生黑麦草、剪股颖草bent grass、狗牙根Bermudagrass、蓝草bluegrass、kleingrass、果园草orchard grass、长叶车前草ribgrass、苏丹草Sudangrass、猫尾草timothy grass和牛毛草fescue)；和野草(包括但不限于碱茅草alkaligrass、须芒草bluestem grass、野牛草buffalograss、毛花雀稗dallisgrass、发草hairgrass、假高梁属Indiangrass、画眉草lovegrass、草地草meadow grass、狼尾草napiergrass、茫草pampas grass、盘固草pangolagrass、黍稷一类草本植物panicgrass、兔脚草rabbitsfoot grass、纤细的野生燕麦slender wild oats、柳枝稷switchgrass、牙刷草toothbrushgrass、小麦草wheatgrass)；黍(millet)(包括但不限于黍属Panicum、狗尾草属Setaria、稗属Echinochloa、狼尾草属Pennesetum和穇属Eleusine的植物)；薏仁(Job′s tears)(薏苡仁Coix lachryma-jobi；水生薏苡Coix aquatica)；和类似大麦的草(包括但不必限于大麦属Hordeum、狗尾草属Setaria、Astrebla、Isolepis、地杨梅属Luzula和苞茅属Hyparrhenia的种)。

[0116]培养玉米获得本发明化合物最初以传统方式进行，但是种子比传统种植情况下更密种植，原因是收获时的植物体积较小。收获时间在植物不成熟时进行。对于玉米，此不成熟植物收获可以在植物高度不超过约三十(30)至约四十五(45)厘米时发生，在种植后约5周。优选地，本发明实施方式也可以利用收获高度在约四十五(45)厘米至约122厘米之间的不成熟玉米植物，和种植后约5周至约8周，优选地在10周以内收获。作为一般性参考，成熟玉米植物典型地高度在180厘米以上，并且在种植后生长约四个月(4个月)至约五个月(5个月)。对于玉米，收获优选地通过在地上3-4厘米处切割植物而进行。可以集中几种植物，并且在约40摄氏度(℃)至约45℃的温度下干燥。经验性研究表明，这一温度范围有利于本发明化合物的前体向活性分子的最大转化。

[0117]在南伊利诺斯州的试验方案中，约38,000个玉米植物产生137千克(300磅)的干燥(干重96％)玉米叶子，其带有合适水平的本发明化合物。质谱分析显示，在5周生产时间之后，本发明化合物的实质量在干燥的玉米叶中。获得5个干燥玉米叶随机样本进行分析。对于每一干燥的玉米叶样品，将1克份在10ml蒸馏水中匀浆，在25℃温育1小时，煮沸30分钟，随后以3600rpm离心10分钟。对得到的上清液萃取3次，每次萃取利用10ml试剂级二氯甲烷。将三次提取物合并并使其风干，其后将干燥的残余物保存在紧密塞住的玻璃管中。

[0118]通过气相色谱质谱分析干燥残余物中的6-MBOA。应用带有积分仪和200℃等温的SP2250 GC柱的Dupont Model DP 102设备(Dupont，Wilmington，Del.)。注射0.06-、0.60-和1.20-.mu.g溶于甲醇溶液的纯的合成的6-MBOA(Sigma，Saint Louis，Mo.)，得到6-MBOA标准曲线，所述曲线在5％水平可以重复。

[0119]干燥玉米叶中存在适于人类应用水平的6-MBOA。样品中平均为10mg/g的6-MBOA，个别样本测定如下：分别是8、9、10、10、和12mg/g的6-MBOA。以这种浓度，为了制备人类日剂量，需要2克以下的干燥玉米叶。这使得如本文中独特生长、收获和干燥的玉米叶，是本发明化合物的合适来源。为了比较目的，对生长8周以上的植物的叶子进行分析，分析6-MBOA。实质上根本不存在6-MBOA。

[0120]发明人以前的工作表明，本发明化合物的较高水平与表明本发明化合物作物质量或适合性的多个生物化学参数相关。在含有适于人类应用浓度的本发明化合物的那些植物中，酚类的总浓度是17.0mg/gm(干重)以上，但4-羟基肉桂酸和4-羟基-3-甲氧基肉桂酸的组合量总共不超过1.5mg/gm(干重)，如通过色谱所测定。对于发明，上述总酚和4-羟基肉桂酸和4-羟基-3-甲氧基肉桂酸的组合量的参数在此设置为本发明的要素，因为其属于植物。对于实施例2中的玉米叶样品，总酚平均为19.1mg/gm，累积的总肉桂酸平均为0.9mg/gm。

实施例5

来自动物器官的本发明化合物

[0121]大多数年龄的鹿和麋鹿(鹿科动物)的主要食物是嫩叶嫩枝(browse)，是低生长的木本植物的生长中的顶端。然而，前一年的硬角的脱落与天然牧草的春季茂盛生长和伴随的向草类食物的转变相一致，所述草主要是萌发中的和不成熟的草。这些草处于发育阶段，其中6-MBOA和相关化合物最多。

[0122]脱落之后，新的角开始发育。这些生长中的鹿角通过来自称作鹿茸的皮肤覆盖物的血管得到滋养。鹿角从顶端生长，随着顶端向前生长，并伴有组织沉积(tissue laid down)。与具有已骨化软骨和几乎没有脂肪的鹿角的其它部分相比，茸角顶端具有柔软的软骨内部结构和高脂肪含量。

[0123]空气干燥和冷冻干燥的茸角样品被得到。这些来自商业上养殖的加拿大马鹿(Canadian Wapiti)和新西兰赤鹿(New Zealand reddeer)，这两者都是麋鹿的亚种——马鹿(Cervus elaphus)。所有动物保持草放牧。样品来自生长五十五天(55天)至六十五天(65天)的茸角，包括两个顶端，限定为从顶点起始长度五厘米(5厘米)或更短的区域，以及鹿角的其它更成熟部分。

[0124]对于每一干燥鹿角样本，在十毫升(10-ml)蒸馏水中匀浆1克的部分，在25℃温育一个小时(1小时)，煮沸三十分钟(30分钟)，随后以3600rpm离心十分钟(10分钟)。对得到的上清液萃取三次(3次)，每次萃取利用十毫升(10ml)试剂级二氯甲烷。将三次(3次)提取物合并并使其在空气中干燥，其后将干燥的残余物保存在紧密塞住的玻璃管中。

[0125]通过气相色谱质谱分析干燥残余物中的6-MBOA。应用带有积分仪和200℃等温的SP2250 GC柱的Dupont Model DP 102设备(Dupont，Wilmington，Del.)。注射0.06-、0.60-和1.20-.mcg溶于甲醇溶液的纯的合成的6-MBOA(Sigma，Saint Louis，Mo.)得到6-MBOA标准曲线，所述曲线在百分之五(5％)水平可以重复。

参照表4，实施例5的结果总结如下：

表4.麋鹿、 马鹿(Cervus elaphus)的干燥茸角中的6-MBOA

动物	来源	顶端或其它	干燥方法	6-MBOA(mg/g干重)
					马鹿(Wapiti)	加拿大	顶端	空气	2.5
马鹿(Wapiti)	加拿大	顶端	空气	2.8
					马鹿(Wapiti)	加拿大	其它	空气	0.3
赤鹿	新西兰	顶端	冷冻	1.9
					赤鹿	新西兰	其它	冷冻	0.5

[0126]这些数据表明，6-MBOA存在于所有顶端样本中，在鹿角的更成熟部分的样本中几乎不存在或不存在。值得注意的是，茸角顶端的6-MBOA量超过了一般在草中所见的量，所述的草在萌发后1周以下，该生长阶段是带有最多6-MBOA的阶段。这些结果表明，经历消化的6-MBOA被累积或浓缩在茸角顶端，如此，代表了得到适于人类应用的浓度的本发明化合物的手段。

[0127]许多动物吃草和其它单子叶植物。这些动物也可以在机体部分中积累本发明的化合物，最有可能在特征为高脂肪含量的那些部分累积。从不同于麋鹿和鹿的角的机体部分以及从不同于麋鹿或鹿的动物获得本发明化合物不排除在本发明之外。

实施例6

新化合物的可选实施方式

[0128]本发明酚类化合物前体的任何数目的可选实施方式都可以考虑为落入本发明的精神和范围内。特别地，下面的式V是一般化学式，其一般性描述了本发明酚类化合物前体的选择性优选实施方式。

式V-根据下式的化合物：

其中“R¹”选自H和OCH₃；

其中“R²”选自H和葡萄糖(以葡糖苷形式)

其中“R³”选自H、OH和OCH₃；

或其药学上可接受的盐。

[0129]如所示，本发明的新化合物的这种实施方式可以包括苯并嗪酮类-环异羟肟酸、内酰胺和相应的葡糖苷。如本文所考虑，在“R¹”位置的取代可以用选自H和OCH₃的成员实现。在“R²”位置的取代可以用选自H和葡萄糖(以葡糖苷形式)的成员实现。在“R³”位置的取代可以用选自H、OH和OCH₃的成员实现。

[0130]现在参照下面的化合物8-17，根据式V表示的一般表示的一系列化学式，举例说明本发明的新化合物的进一步实施方式的代表性化合物的化学式。

8.2，4-二羟基-1，4-苯并嗪-3-酮(DIBOA)

9.2，4-二羟基-1，4-苯并嗪-3-酮-葡糖苷(DIBOA-Glc)

10.2，4-二羟基-7-甲氧基-1，4-苯并嗪-3-酮(DIMBOA)

11.2，4-二羟基-7-甲氧基-1，4-苯并嗪-3-酮-葡糖苷(DIMBOA-Glc)

12.2-羟基-1，4-苯并嗪-3-酮(HBOA)

13.2-羟基-1，4-苯并嗪-3-酮-葡糖苷(HBOA-Glc)

14.2-羟基-7-甲氧基-1，4-苯并嗪-3-酮(HMBOA)

15.2-羟基-7-甲氧基-1，4-苯并嗪-3-酮-葡糖苷(HMBOA-Glc)

16.2-羟基-4，7-二甲氧基-1，4-苯并嗪-3-酮(HDMBOA)

17.2-羟基-4，7-二甲氧基-1，4-苯并嗪-3-酮-葡糖苷(HDMBOA-Glc)

[0131]特别地，化合物8示例了2，4-二羟基-1，4-苯并嗪-3-酮(DIBOA)的化学式。DIBOA也可以有葡萄糖分子形成葡糖苷(也称作糖苷)DIBOA-Glc，其表示为化合物9。如所示，化合物10描述了2，4-二羟基-7-甲氧基-1，4-苯并嗪-3-酮(DIMBOA)的化学式。DIMBOA也可以与葡萄糖分子联合存在，形成糖苷化合物(DIMBOA-Glc)，其表示为化合物11。

[0132]化合物12示出了2-羟基-1，4-苯并嗪-3-酮(HBOA)的化学式。糖苷也可以在HBOA和葡萄糖分子之间形成(HBOA-Glc)，显示为化合物13。化合物14描述了2-羟基-7-甲氧基-1，4-苯并嗪-3-酮(HMBOA)的化学式。HMBOA也可以含有葡萄糖分子形成HMBOA-Glc，其描述为化合物15。此外，化合物16示出了2-羟基-4，7-二甲氧基-1，4-苯并嗪-3-酮(HDMBOA)的化学式。其中，化合物17示出了在HDMBOA和葡萄糖之间形成的糖苷(HDMBOA-Glc)。在前述例子中，葡萄糖分子可以与分别的糖苷配基(即，非糖)化合物(例如，DIBOA、DIMBOA、HBOA、HDMBOA、6-MBOA)结合，形成糖苷。

[0133]如所理解，葡萄糖分子典型地是吡喃糖(即，环状6碳环)的形式，其可以称为吡喃型葡萄糖。吡喃型葡萄糖化合物通常以半缩醛与糖苷配基部分结合。在本发明其它目前优选实施方式中，糖苷化合物的构型可以以(2R)-构型出现。然而，意图在于，其它形式的葡萄糖和糖苷配基的构型被认为落入本发明新化合物的精神和范围内。本发明化合物目前优选的实施方式，如实施例6所示，因而意图视为本发明原则的示范，并且不限于任何特定式子、结构或实施和/或实践本发明的方法。

实施例7

本发明新化合物保持和/或增强大熊猫的先天免疫防御

[0134]濒临灭绝的大熊猫(大熊猫Ailuropoda melanoleuca)是类似于熊的哺乳动物，先天食用中国中部的高竹(high bamboo)和松林(pineforests)。野生大熊猫的总数现在是约1,500只，另有140只动物饲养在动物园中和研究中心。这些数目使得大熊猫处于世界上最濒危的物种之一。大熊猫群体处于濒危水平的一个原因是由于婴儿期死亡率高。在捕获的熊猫群体中出生的幼崽在断奶时有百分之五十(50％)以下的存活几率。在1980至1997年间，圈养产生的四十二只(42只)大熊猫中，仅有二十三只(23只)存活。已经证明，大熊猫幼崽通常由于感染性疾病和/或不成熟的免疫系统而死亡。

[0135]野生大熊猫主要食用竹子。竹子可以被归类为单子叶植物。而且，大熊猫有时食用花、蔓生植物(vines)、草、松树皮、蜜、昆虫和啮齿动物。一些竹子种类在熊猫如今居住的高海拔处分布广泛。竹子的种类可以包括，例如不是限制，华中神农架箭竹(Fargesiaspathacea)、大箭竹(Sinarundinaria chungii)、华西箭竹(S.nitida)和冷箭竹(S.fangiana)。所有这些在芽和幼年的叶中不变地含有根据本发明目前优选实施方式的化合物。然而，这些竹子植物的较年长的生长期，实质上不存在本发明化合物。

[0136]特别地，在紧接繁殖季节之前和期间，在竹子中发现的根据本发明目前优选实施方式的化合物相当明显。在这些时间中，竹子芽和年幼的叶子—该状态下本发明化合物特别丰富—优先地被大熊猫食用。同时，在其它时期如此普遍的成熟的或较老的竹叶几乎没有或没有本发明目前优选实施方式所预期的化合物。

[0137]当以成熟的或较老的竹叶和茎为食时，成年大熊猫每日可以消耗约十二千克(12千克)至约十五千克(15千克)的食物。然而，当在自然中以含有根据本发明目前优选实施方式的化合物的竹芽为食时，大熊猫每日可以消耗多达三十八千克(38千克)。这可以占它们平均体重的约百分之四十(40％)。

[0138]历史上，在喂给大熊猫的动物园食物中，几乎总是缺乏本发明化合物。与野生熊猫的食物不同，圈养动物一般仅喂给较老的竹子，其仅含有极小量的本发明活性化合物。圈养熊猫也可以喂给米粥、胡萝卜、苹果、地面玉米(ground corn)和甘薯。

[0139]以前已经证明，根据本发明目前优选实施方式的化合物可以在妊娠和/或哺乳期间从大熊猫母亲传给后代(Nelson，″Maternal dietinfluences reproductive development in male prairie vole offspring，″Physiology of Behavior 50：1063-1066)。因此，从预先断奶的熊猫幼崽的存活，可以检测喂给本发明活性化合物的雌性大熊猫。

[0140]在本实施例中，含有相对丰富的本发明化合物的竹子被喂给中国四川省卧龙自然保护区的大熊猫饲养中心的动物。该中心有多于四十只(40只)成年熊猫，占世界上圈养熊猫总数的百分之三十(30％)。

[0141]可以对华中神农架箭竹的芽、从芽发出的幼年叶子和成熟的老叶子测定本发明活性化合物的水平，华中神农架箭竹是卧龙大熊猫饲养中心喂养的最普通的竹子种类。取得竹子的每一发育阶段的三个(3个)样本，于40-45℃干燥。对每一干燥竹叶或竹芽样本，在十毫升(10ml)蒸馏水中匀浆约1克的部分，在25℃温育约一个小时(1小时)，煮沸约三十分钟(30分钟)，随后以约3600rpm离心约十分钟(10分钟)。对得到的上清液萃取三次(3次)，每次萃取利用十毫升(10ml)试剂级二氯甲烷。然后，将三次(3次)提取物合并，并使其在空气中干燥，其后将干燥的残余物保存在紧密塞住的玻璃管中。

[0142]通过气相色谱质谱分析干燥残余物中的6-甲氧基-2-苯并唑啉酮(6-MBOA)。应用带有积分仪和200℃等温的SP2250 GC柱的DupontModel DP 102设备(Dupont，Wilmington，Del.)。注射0.06-、0.60-和1.20-.μg溶于甲醇溶液的纯的合成的6-MBOA(Sigma，Saint Louis，MO)得到6-MBOA标准曲线，所述曲线在百分之五(5％)水平可以重复。

[0143]九个(9个)华中神农架箭竹样本的6-MBOA含量(以每百万中的份数表示)是，如下：(1)芽＝56，88，91；(2)幼年叶子＝23，27，38；(3)成熟的老叶＝3，3，5。

[0144]在2003饲养季期间——约三月至五月——在三月至五月繁殖期之前和之间，圈养熊猫经口接受主要由竹芽和幼叶组成的食物。在此时间段内，平均消费范围是每日约二十八千克(28千克)竹子。也可以喂给熊猫米粥和菜粥。与较老的竹叶组成大部分食物的过去的饲养季相比，较老的竹叶优选地被尽可能排除。

[0145]在一直努力喂给发育状态的竹子——所述竹子的特征是显著量的本发明化合物——之前，饲养中心的圈养雄性熊猫中的仅百分之十(10％)以自然方式繁殖，雌性中的百分之三十(30％)以下生产，并且熊猫幼崽中的百分之五十(50％)以上在断奶之前死亡。在以前的繁殖季节喂养的竹子主要由成熟的较老植物组成。确实，较老的植物材料可以容易地和便宜地大量得到，如此少或几乎没有年幼材料被单独大量地共同供给。

[0146]基于大熊猫饲养中心的发现和研究，其中含有根据本发明目前优选实施方式的化合物构成食物的大部分，出生率增加约三倍(3倍，3X)，几乎所有圈养雌性实现怀孕。幼崽在断奶后存活，断奶在以前使得感染性疾病造成的死亡率高，现在几乎全部存活。确实，在本实施例中，在大熊猫饲养中心2003饲养季中，产生了幼体数目记录——十九个(19个)后代。在这些后代中，两个(2个)出生时已经死亡，一个(1个)在出生后不久死亡。对这三个(3个)动物验尸表明，没有感染性或致病性质的任何问题。存活的后代持续生长到2004年1月。总之，相对于根据以前繁殖季节的结果得到的通常预期超过50％的幼崽死亡率，在给予本发明化合物后，观察到无先例的大熊猫存活。

实施例8

本发明新化合物保持和/或增强小鼠的先天免疫防御

试验设计

[0147]检测动物中的应激诱导变化的模型可以包括，使动物遭受应激环境，时间是足以抑制先天免疫反应的所需时间段，随后使动物接受已知促进免疫应答的试剂(即，免疫原性试剂或抗原试剂)。典型地，免疫应答可以通过局部肿胀(即，炎症)量来测定，所述肿胀可以在免疫原性试剂给予位点附近发生。通过比较对照组动物和试验组动物的肿胀程度，可以检测特定免疫原性试剂对动物免疫系统的效应。

[0148]在本示例性试验中，应用约8周龄的雄性白化近交品系小鼠Balb/c(Charles River，Inc.)。本领域技术人员将理解，Balb/c小鼠通常用在应激/损伤试验中，因为相比于其它动物品系，它们对应激和损伤更加易感，并且，重要的是，在这些动物中可以更加容易地观察免疫系统改变。

[0149]预期应激的、但也暴露于含行本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶的小鼠(即，应激/6-MBOA小鼠)，可以具有对已知免疫原性试剂产生免疫应答的能力。与之对照，应激的、但末暴露于含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶的小鼠(即，应激/无6-MBOA小鼠)，几乎不具有或不具有对已知免疫原性试剂产生免疫应答的能力。同样，另外的对照组可以利用非应激并且未暴露于含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶的小鼠(即，非应激/无6-MBOA小鼠)，和应激的、但未暴露于含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶的小鼠(即，应激/无6-MBOA小鼠)。

[0150]在本研究中，将二十(20)只Balb/c小鼠平均分为四(4)组。这些组包括下列特征：组1包括非应激/无6-MBOA小鼠对照组；组2包括应激/无6-MBOA小鼠组；组3包括非应激/6-MBOA小鼠组，和组4包括应激/6-MBOA小鼠组。

[0151]从暴露于应激过程前的第三天(第-3日)开始，将含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶通过喂养经口给予组3和组4的小鼠。将小鼠食物切成小块，随后加入含有适当浓度(例如，40mg/kg/小鼠/日)本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶。小鼠食物和含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶与一些蜂蜜和水重新混合，然后干燥。组1和组2的小鼠食用以相同方式制备、但不加入含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶的食物。在暴露于应激过程前的第2日(第-2日)和第1日(第-1日)，所有组均以相同方式喂养。

[0152]在第零日(第0日)，用冷束缚应激使组2和组4中的小鼠应激。如本领域技术人员理解，冷束缚应激过程是被充分描述的模型，其可以引起免疫应答降低和对感染的易感性增加。在冷束缚应激过程中，将小鼠置于通气的50ml离心管中，它们在该处可以前移和后移，但是不能转动。随后将小鼠置于4℃冰箱约1小时，随后放回其笼子中。冷束缚应激过程没有组织损伤，并类推起来，最密切类似于人心理应激和/或多种动物种类可能经历的航运应激或类似其它应激(例如，限制、缺少食物、缺少水、心理不良应激、环境改变、光的存在或不存在、和类似因素)。

[0153]选择的免疫测定指标是对免疫原性试剂二硝基氟苯(DNFB)的迟发性超敏感性应答。DNFB有时可以被称作1-氟-2，4-二硝基苯、2，4-二硝基-1-氟苯、或Sanger试剂。通过在第+1日和第+2日给予耳部皮肤，使小鼠暴露于DNFB。在正常的动物中 ，激发区域应答于DNFB的给予而肿胀，这可能反映了对此抗原的特异致敏。这样的肿胀典型地表示炎症和对DNFB的T细胞介导免疫应答的测定。应激或损伤或以某种方式应激的动物已经弱化应答，反映了免疫抑制。这种应答也和对微生物感染的抗性有关。

[0154]在应激过程后的第1日(第+1日)和第2日(第+2日)，通过给予右耳翼皮肤(即，耳部皮肤)，使组1-4中的所有小鼠暴露于DNFB。在第+4日，用测径器测定每只小鼠暴露耳的耳部皮肤的厚度，和对侧耳部皮肤的厚度(即，未暴露于DNFB的对侧耳)。用暴露于DNFB的耳部的皮肤厚度值减去未暴露皮肤的耳部皮肤厚度值，定量对DNFB的免疫应答水平。

[0155]如上述的研究方案总结在下面的表5中：

天	行为
		-3	开始新的小鼠食物，含有/不含有6-MBOA
-2	持续新的小鼠食物，含有/不含有6-MBOA
		-1	持续新的小鼠食物，含有/不含有6-MBOA
0	第2组和第4组暴露于冷应激过程
		+1	所有小鼠的右耳皮肤暴露于DNFB
+2	所有小鼠的右耳皮肤暴露于DNFB
		+4	用测径器测量所有小鼠耳部

统计学分析

[0156]用方差分析(ANOVA)和Fisher′s Protected Least SquareDifference(PLSD)检验分析耳部皮肤肿胀结果。

结果

[0157]现在一般参照图1，与非应激小鼠相比，应激小鼠表现出降低的免疫应答。而且，喂给含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶的应激小鼠表现出对免疫原性试剂的正常水平的免疫反应。更具体地，对DNFB的细胞免疫应答通过局部应用DNFB敏化小鼠而确定。如图1所示例，纵(垂直)轴表示右耳翼和对侧耳翼之间的厚度差(即，肿胀)，以毫米(mm)为单位测定。横(水平)轴表示相应于本研究中鉴定的四组小鼠中的每一组的柱状图。

[0158]在本发明一个目前优选实施方式中，在4∶1浓度的丙酮-矿物油混合物中制备0.25％DNFB(Sigma)溶液，并在第+1日和第+2日将10微升(μL)施用在右耳翼的背部。在第+4日，用测径器测量耳部为10-3mm。耳部肿胀(较高的测定值)表明对DNFB的免疫应答，而肿胀越严重，应答强度越高。

[0159]研究结果显示出，与所有其它组相比，对照应激小鼠中的免疫应答降低。暴露于含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶的应激小鼠对DNFB有正常的应答，表明含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶保持束缚应激小鼠的细胞免疫应答。

实施例9

在小鼠剂量范围研究中，

本发明新化合物保持和/或增强小鼠的先天免疫防御

[0160] 试验设计

[0161]可以进行另一研究来评价以多种浓度给予应激小鼠的含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶对细胞介导免疫应答的效应。研究方案与实施例8所实施的相似，小鼠暴露于含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶，剂量范围是40mg/kg、25mg/kg和5mg/kg 6-MBOA(分别是6-MBOA剂量#1、2和3)。在第+4日测定DNFB激发耳部的厚度。

[0162]本实施例中应用约8周龄的雄性白化近交品系小鼠Balb/c(Charles River，Inc.)。Balb/c小鼠通常可以用在应激/损伤动物中，因为相比于其它动物品系，它们对应激和损伤更加易感。本领域技术人员将理解，在这些动物中可以更加容易地观察到免疫系统改变。

[0163]预期应激的、但也暴露于含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶的小鼠(即，应激/6-MBOA小鼠)，可以具有对已知免疫原性试剂产生免疫应答的能力。与之对照，应激的、但末暴露于含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶的小鼠(即，应激/无6-MBOA小鼠)，几乎不具有或不具有对已知免疫原性试剂产生免疫应答的能力。同样，另外的对照组可以利用非应激并且未暴露于含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶的小鼠(即，非应激/无6-MBOA小鼠)，和应激的、但末暴露于含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶的小鼠(即，应激/无6-MBOA小鼠)。

[0164]将三十五(35)只Balb/c小鼠分为六(6)组。这些组包括下列特征：组1包括非应激/无6-MBOA小鼠对照组；组2包括应激/无6-MBOA小鼠对照组；组3包括非应激/6-MBOA小鼠组，组4包括应激/6-MBOA剂量#1小鼠组；组5包括应激/6-MBOA剂量#2小鼠组；组6包括应激/6-MBOA剂量#3小鼠组。

[0165]从暴露于应激过程前的第三天(第-3日)开始，将含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶通过喂养经口给予组3-6的小鼠。将小鼠食物切成小块，随后加入适当浓度6-MBOA(例如，40mg/kg/小鼠/日)的含本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶。小鼠食物和含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶与一些蜂蜜和水重新混合，随后干燥。组1和组2的小鼠食用以相同方式制备、但不加入含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶的食物。在暴露于应激过程前的第-2日和第-1日，所有组均以相同方式喂养。

[0166]在第零日(第0日)，用冷束缚应激过程使组2和组4中的小鼠应激。如本领域技术人员理解，冷束缚应激过程是被充分描述的模型，其典型地引起免疫应答降低和对感染的易感性增加。在冷束缚应激过程中，将小鼠置于通气的50ml离心管中，它们在该处可以前移和后移，但是不能转动。随后将小鼠置于4℃冰箱约1小时，随后放回其笼子中。冷束缚应激过程没有组织损伤，并类推起来最密切类似于人心理应激和/或多种动物种类可能经历的航运应激或类似其它应激(例如，限制、缺少食物、缺少水、心理不良应激、环境改变、光的存在或不存在、和类似因素)。

[0167]选择的免疫测定指标是对二硝暴氟苯(DNFB)的迟发性超敏感性应答。通过在第+1日和第+2日给予耳部皮肤，使小鼠暴露于DNFB。在正常的动物中，激发区域应答于DNFB的给予而肿胀，这反映了对此抗原的特异致敏。这样的肿胀典型地表示炎症和对应答于DNFB的T细胞介导免疫应答的测定。应激或损伤或以某种方式应激的动物已经弱化应答，反映了免疫抑制。这种应答也和对微生物感染的抗性有关。

[0168]在应激过程后的第1日(第+1日)和第2日(第+2日)，通过给予右耳翼皮肤(即，耳部皮肤)，使组1-6中的所有小鼠暴露于DNFB。在第+4日，用测径器测定每只小鼠暴露耳的耳部皮肤的厚度，和对侧耳部皮肤的厚度(即，未暴露于DNFB的对侧耳)。用暴露于DNFB的耳部皮肤厚度值减去末暴露皮肤的耳部皮肤厚度值，定量对DNFB的免疫应答水平。

[0169]如上述的研究方案总结在下面的表6中：

天	行为
		-3	开始新的小鼠食物，含有/不含有6-MBOA
-2	持续新的小鼠食物，含有/不含有6-MBOA
		-1	持续新的小鼠食物，含有/不含有6-MBOA
0	第2组和第4-6组暴露于冷应激过程
		+1	所有小鼠的右耳皮肤暴露于DNFB
+2	所有小鼠的石耳皮肤暴露于DNFB
		+4	用测径器测量所有小鼠耳部

统计学分析

[0170]用方差分析(ANOVA)和Fisher′s Protected Least SquareDifference(PLSD)检验分析耳部皮肤肿胀和脚垫肿胀(footpad swelling)结果。

结果

[0171]现在参照图2，与非应激小鼠相比，应激小鼠表现出降低的免疫应答。而且，与给予浓度为5mg/kg 6-MBOA或无6-MBOA的含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶的动物相比，接受浓度为40mg/kg和25mg/kg 6-MBOA的含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶的应激小鼠具有明显更强的免疫应答。

实施例10

本发明新化合物保持和/或增强牛的先天免疫防御

试验设计

[0172]检测动物的应激诱导变化的模型可以包括，使动物接受应激环境，时间是足以抑制先天免疫应答所需的一段时间，随后使动物接受已知促进免疫应答的试剂。典型地，免疫应答可以通过在试剂给予部位附近所出现的局部肿胀(即，炎症)的量来测定。特定试剂对动物免疫系统的影响可以通过比较对照组和试验组动物的肿胀程度来确定。

[0173]在本研究中，含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶与谷物混合并喂给断奶的牛，所述牛可以接受应激激发(例如，缰绳断裂)。补充含有本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶的生物学效应的证据可以被观察，这表明发生了本发明的6-MBOA或相关化合物的代谢，并且表明在应激牛中免疫应答的保持和/或增强。

[0174]在本发明一个目前优选实施方式中，研究设备包括带围栏的畜舍、牢靠架(squeeze chute)、称重仪(scale)和集合牛以进行程序的场地(arena)。也用教室作为实验室。

[0175]将三十二(32)头牛平均划分为四(4)组，每组含有八(8)只动物。这四(4)组包括下列特征：组1包括非应激/无6-MBOA牛对照组；组2包括应激/无6-MBOA牛组；组3包括应激/6-MBOA剂量#1牛组；组4包括应激/6-MBOA剂量#2牛组。

[0176]牛大部分是雌性(n＝29)，也包括阉牛(n＝1)和公牛(n＝2)。使牛断奶至少2周时期。通过捆(roping)促使牛应激。牛经历过癣菌病感染，但是没有牛表现出急促呼吸或其它感染。所有的牛都似乎有良好的食欲并且容易地消耗配给谷物(grain ration)。

[0177]牛在四个分开的畜栏中户外圈养，可以自由得到水和干草。喂给牛甜混合谷物(sweet mix grain)，补充有和不补充有含本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶。从暴露于应激过程前的第1日(第-1日)开始，在第-1日和第0日早晨(早8时)，通过在浅的喂养槽中散布配给谷物，喂养牛1次。起始于第+1日并持续直至试验结束，在早8时和下午5时每日两次喂给牛谷物。使牛在槽处排成一队，观察其食用大约相等量的配给量。对照组(即，组1和组2)和补充有含本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶的组(即，组3和组4)都每日两次接受约十磅(10lbs)的甜的混合谷物。所有的配给量典型地在约五(5)分钟内被消耗。

[0178]本试验的应激过程包括缰绳断裂。缰绳断裂包括在场地的围栏处绑(tie up)1.5小时(即，捆绑(roping))。在此捆绑过程中，防止牛得到食物或水。捆绑发生于第0日，随后即刻用DNFB每日两次敏化牛颈。

[0179]在实验室称重仪上对含本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶称重，将对于每组8个动物合适的量加入七磅(7lbs)的甜混合谷物中并手工充分混合。甜的混合谷物有些粘，含本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶被充分混合。牛食用完补给性配给食物之后，给予它们另外的三磅(3lbs)谷物。

重量测定

[0180]在第-3日、第+4日和第+11日得到牛的重量。牛之间的重量不同，但是每组之间的起始重量没有显著差异。在任意时间点，组间没有差异，而补充含本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶不抑制牛的重量增加。

免疫应答试验

[0181]应用DNFB致敏，在所有牛中评价细胞介导免疫应答。在第0日将牛置于牢靠架中，它们左颈的一部分被修剪，100ul丙酮和矿物油中的4％DNFB施用到修剪过的部位。在第+1日，重复此行为，应用400ul DNFB在相同的颈部部位实施。在第+3日，修剪牛右耳，向修剪过的部位施用60ul DNFB。用测径器测量颈部的致敏区和正常颈部皮肤。二十四(24)小时后，测量激发的耳部和对侧耳部，重新测量颈部皮肤，记录数据。数据表示为正常皮肤和致敏或激发皮肤之间的差异。

[0182]含本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶被成功地与谷物混合并喂给容易消耗配给食物的牛。

结果

[0183]如上面提及的小鼠试验中所观察，与应激对照相比，暴露于含本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶的牛对接触抗原(contact antigen)的免疫应答更强。现在参照图3，与应激对照相比，暴露于含本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶的牛的免疫应答更强，所述免疫应答被测定为致敏部位和激发耳部的肿胀程度。应用测径器测量设备，可以以毫米差异测定免疫应答。如所阐述，组3和组4能够在暴露于DNFB之后引起免疫应答。

[0184]参照图4，与应激对照相比，暴露于含本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶的牛的免疫应答更强，所述免疫应答被测定为颈部致敏部位和激发部位的肿胀程度。如所阐述，组3和组4能够在暴露于DNFB之后引起免疫应答。

讨论和结论

[0185]总之，看来补充含本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶对接受应激激发的牛具有正效应。鉴于牛的遗传可变性和大小，以及试验开始时对象的相对差的状态，这是一个有力的观察结果。

实施例11

本发明新化合物保持和/或增强鱼的先天免疫防御

[0186]一种水产业形式，鱼类养殖，在过去的十年间每年增长约百分之十一(11％)。鱼类养殖可以是世界食品经济的最快增长点。在1990年，产生了1千3百万公吨的鱼。与之对照，1998年，产生了3千1百万公吨的鱼。为此，鱼类养殖实际上超过作为世界上主要的食物来源的牧牛场的经营。约百分之八十五(85％)的鱼类养殖发生在发展中国家。例如，在1998年，中国占有世界上水产业产量的约2千1百万吨，印度远远居于第二，为二(2)百万吨。

[0187]在工业国家中，美国、加拿大、挪威和日本是鱼类生产的领先者。在北美和欧洲，鲶鱼、鳟鱼(trout)和鲑鱼(salmon)占有鳍鱼类产量的百分之八十(80％)以上。目前美国的450,000公吨年产量主要是鲶鱼(斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus)，而挪威生产的400,000吨主要是大西洋鲑(大西洋鲑Salmo Salar)。美国养殖的大西洋鲑收成已经从1990年的12,000公吨增加到2003年的50,000公吨以上。

[0188]由于鱼类养殖典型的拥挤和应激环境，疾病可能是成功进行鱼类养殖的频繁和灾难性的制约。因此，可以增强和/或增加鱼和/或水生动物免疫系统功能的本发明新化合物的优选实施方式，可以对水产工业中大量和高质量生产中有重要影响。例如，在有鳍鱼类水产业的初步实践中，不论国家，都在食物中预防性地和阶段性地加入抗生素。仅在1999年，美国鱼类食物中就应用了超过三十(30)公吨的抗生素活性成分和约6.5至14.3公吨的四环素。该实践的批评家指出，水产业中抗生素试剂的这种广泛应用，可以产生重要的负面公众健康影响和经济影响。

[0189]这些影响可以包括，例如而不是限制，不期望的环境后果和可能对特定抗生素或抗生素种类具有抗性的人病原体。确实，发现逃离的加拿大夏洛特皇后群岛海峡(Queen Charlotte Strait)布劳顿群岛(Broughton Archipelago)的鱼类带有已知引起几种人类疾病的细菌，而该病原体被检测为对10种不同抗生素具有抗性。

[0190]鱼类养殖中应用的带有抗生素的食物中的约百分之三十(30％)实际上可能没有被吃掉。这种带有抗生素的食物则可以直接进入野生或天然食物链，在该食物链中，已经证明其杀死天然海藻、其它植物和有益细菌，以及引起大比目鱼幼体畸形。抗生素超出养鱼场边界的另外证据表现为，附近捕获的野生鱼类中的百分之七十五(75％)或更多在其肉中带有抗生素。

[0191]抗生素抗性细菌的渐增出现也可以归因于增加的抗生素应用，从而出现更大的与水产业相关的环境和人类健康风险。优选地，如果养殖的鱼类的免疫系统能够以某种方式增强到改进疾病抗性的水平，则水产业中的抗生素应用可以最小化。而且，由于对环境和人类健康后果的担忧，欧盟已经开始要求更低的可允许的鱼类饲料抗生素水平。如所论述，在欧洲，对鱼类饲料抗生素有普遍的禁令，预期其在2006年1月或约2006年1月生效。同样，其它国家的政府严肃地考虑相似的立法。对鱼类食品中抗生素的担忧可能使水产业高度需要刺激免疫系统的饲料添加剂。如本文所预期，本发明化合物的目前优选实施方式可以存在为，被容易和广泛地承认为对动物饲料加工安全的制备物。

[0192]鱼类是脊椎动物的高度原始形式，但是它们具有对病原体攻击起反应并保护的典型的脊椎动物免疫系统。如同在其它脊椎动物中，通常的体液应答和细胞应答表征鱼类的免疫系统。确实，通过将鱼类作为研究脊椎动物免疫应答的试验模型的广泛应用，脊椎动物免疫系统的相似性被充分证明。如本领域技术人员理解，在脊椎动物目中，可以存在一定水平的免疫系统生理和功能等价性。通过给予本发明化合物的优选实施方式，不论在哺乳动物和鸟类或鱼类中，相似的生物化学和生理学反应都在逻辑上被预期。

[0193]术语“普遍认为安全(generally regarded as safe)”或GRAS是世界范围内用来描述被评价为饲料中可能组分的事项的概念，并被认为安全用于人类和食物链。GRAS概念通过从广泛和重复性的评价中排除GRAS组分，简化了安全性评价过程。如所理解，被归类为GRAS的物质包括单子叶植物的叶子，如本文所公开，其包括含有本发明的化合物。

[0194]由于本发明的酚类化合物和酚类化合物前体的新组分被配置，以保持和/或增强先天免疫防御，应该容易地了解，保持和/或增强先天免疫防御的方法包括上述的和相关附图中的酚类化合物，所述化合物属于其中6-MBOA是一个成员的化学家族。因此，意图在于，将本文提供的实施例视为本发明原则的示例，不是对实施这些原则的具体结构或方法的限制。

[0195]应该进一步理解，可以用本领域普通技术人员已知的任何方式给予酚类化合物和酚类化合物前体的新组分，所述化合物属于本文限定的和相关附图中的其中6-MBOA为其中一个成员的相关化学家族，所述方式包括但不限于，经口、肠道外、舌下、局部、经皮、肌肉内、或吸入，也可以包括根据所采用的剂量形式选择的赋形剂。而且，给予个体的提取组分的剂量可以基于几个考虑而变化，这不背离本发明的精神和范围，并且将因此取决于待处理的靶向个体的具体情况。

[0196]从上面的讨论中，本发明提供了保持和/或增强动物和人的先天免疫防御的新的组分和方法，其中应用属于其中6-MBOA为一个成员的相关化学家族的酚类化合物和酚类化合物前体。发明人考虑，用于保持和/或增强先天免疫系统防御的本发明目前优选实施方式可以施用于动物(例如，鱼类、鸟类、爬行动物和哺乳动物)和人。而且，哺乳动物可以包括熊(例如，北极熊、灰熊、黑熊、棕熊、熊猫和类似)、野牛(buffalo)、犬类(例如，狼、狐狸、狗、草原狼(coyote)和类似动物)、母牛、鹿(例如，鹿、驼鹿、麋鹿、羚羊、驯鹿和类似动物)、象、猫科动物(例如，猫、狮子、老虎、猎豹、美洲狮、美洲豹、美洲虎、猞猁和类似动物)、长颈鹿、山羊、海马、马、袋鼠、树袋熊、海牛、灵长类(例如，猴、大猩猩、黑猩猩、长臂猿、狒狒、猩猩、狐猴、绢毛猴和类似动物)、犀牛、啮齿动物(例如，小鼠、大鼠、鼹鼠和类似动物)、海豹、绵羊、母猪(sow)、海象、鼬鼠(例如，水獭、海狸、獾、貂和类似动物)、鲸、牦牛和斑马。

[0197]虽然在实施例中，根据绝对剂量范围(例如5mcg至60mg)或针对体重个体化的剂量范围(例如，5mg/kg至40mg/kg)应用具体的剂量水平，但是剂量仅仅示例了本发明一些目前优选实施方式，不意图于构成对其的限制。然而，有效剂量水平可以在很大程度上变化，优选的剂量水平可以随着被处理的情况和被处理的人的大小或性别而变化。为此，剂量水平似乎不是至关重要的，只要给予了有效量即可。

[0198]与现有技术或方法不类似，本发明提供了衍生自、分离自、和/或提取自单子叶植物或通过化学合成得到的新的化学组分，和应用所述组分的方法，所述方法用于(1)保持和增强人和动物的先天免疫防御；(2)增强人和动物的吲哚胺水平，例如，5-羟色胺和褪黑激素；(3)在哺乳动物中起5-羟色胺和/或褪黑激素类似物和/或激动剂的作用；(4)抑制下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴的免疫调节效应；(5)抵消糖皮质激素(例如，可的松)的免疫抑制效应；(6)抵消儿茶酚胺(例如，肾上腺素和去甲肾上腺素)的免疫抑制效应；(7)增强T细胞增殖和巨噬细胞抗原呈递和(8)减轻与免疫系统异常有关的并发症(例如，感染和自身免疫反应的风险增加)。

实施例12

处于应激条件下的牛的焦虑行为

[0199]得自单子叶植物的本发明化合物成功地与谷物混合并喂给重量范围是160-300lbs的牛。动物每天被喂给20mg/kg和70mg/kg之间的本发明化合物(例如，地面玉米叶(ground corn leaves))，并且牛容易消耗该配给量。在1个月期间，对照组和补充喂养的牛之间的体重增加没有差异。

[0200]在牢靠架中，所有的牛表现出焦虑行为(即，不愿进入牢靠架并从触摸中离开)，但第一次接受缰绳和引导其/将其拉进场地并绑好的附加激发似乎是明显的应激原。观察到补充处理的牛在应激激发期间更加平静。

[0201]被处理的起始两组牛是喂给本发明化合物(例如，地面玉米叶)的牛，随后是没有接受玉米叶、仅接受等量谷物的对照组牛。在操纵牢靠架期间，组间存在行为差异(对照组更加难于进入牢靠架，并且持续更多地发生跳跃和颠簸)，并且观察到，在被绑到围栏之后，经补充喂养的牛在几分钟后不到处颠簸或向相对于引线拉拽。与之对照，对照组从围栏向回拉拽，将自已抛在围栏上和地上，并且在大多数应激时间段中持续此行为。谷物中补充有本发明组分的牛在几分钟后平静下来，仅站在那里，看着颠簸的对照组牛。而且，在应激末期，经补充喂养的牛更容易松开并将其引出场地，而对照组牛难于接近并通常拒绝被松开和移动。

实施例13

烈性盛装舞步马(High Spirited Dressage Horse)的焦虑行为

[0202]表现出显著震惊和结果是侵略性行为的高性能的盛装舞步马被每日喂给混合在谷物中的40mg/kg本发明化合物(例如，地面玉米叶)，并且观察其行为变化。在补充3日内，马明显地更安静和易于操纵，同时保持能量和表演能力。所有者使马长期保持20mg/kg，报告持续镇静效应。

实施例14

与断奶的马有关的焦虑

[0203]蒙大拿马场主参与了一项研究，其中马场主具有真实的断奶马的激发经验，在2002年断奶季节，大多数马驹就在断奶后生病，通常有严重的后果，包括两例死亡。在2003年季，在断奶之前和之后，母马和马驹被喂给与谷物混合的20-40mg/kg当量的本发明化合物(例如，地面玉米叶)，持续几天。观察者注意到，在分开母马和马驹时，叫声较少，在断奶后，马驹中没有检测到疾病。

实施例15

小鼠焦虑试验中的本发明新化合物

[0204]检测小鼠焦虑的试验包括，强迫动物面对新环境和/和暴露于食肉动物的气味。通过比较对照组和试验组动物的行为反应，可以测定抗焦虑剂对动物的焦虑水平和情感反应的效应。

[0205]选择约12至14周龄的雌性白化近交品系小鼠Balb/c(CharlesRiver，Inc.)，用于本示范性研究。如本领域技术人员理解，Balb/c小鼠通常用在焦虑试验中，因为已知它们对焦虑环境特别敏感，并且在这些动物中可以更加容易观察行为反应。

[0206]预期接受焦虑诱导条件的Balb/c小鼠在喂给含本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶制备物之后(即，6-MBOA小鼠)，会表现出降低的与焦虑有关的行为反应。例如，预期它们会表现出降低程度的胆怯，更大胆地探察它们的环境，和表现出对潜在肉食动物的恐惧减轻。与之对照，预期没有喂给含本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶制备物的Balb/c小鼠(即，无6-MBOA小鼠)会表现出比6-MBOA小鼠程度更大程度的与焦虑有关的行为反应。

试验设计

[0207]在本研究中，将14只雌性Balb/c小鼠分为2组，每组七(7)只。这些组包括下列特征：(1)组1包括无6-MBOA小鼠对照组；和(2)组2包括给予6-MBOA小鼠组(例如，喂给含本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶制备物)。无6-MBOA小鼠没有给予或喂给6-MBOA。所有小鼠被放置在12/12小时明/暗循环中，每笼三至五(3-5)只动物。光在早晨6点进入，在晚上6点离开。温度保持在约21℃和约23℃之间(约70和约73)。商业上的啮齿动物食物块和水被自由给予组I和组II。

[0208]在暴露于焦虑试验过程之前的5天中的每一天，通过喂养经口给予组2小鼠含适当浓度(例如，40mg/kg/小鼠/日)本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶制备物。在暴露于焦虑试验过程之前的5天中的每一天，组1小鼠食用相同方式制备而不加入含本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶制备物的食物。

[0209]5天后，用开放地域试验设备(open field testing apparatus)进行焦虑试验，其中通常被放置在小的限制性笼子环境的小鼠被突然引到更大的塑料盒中，盒的侧部尺寸是约35cm和约76.2cm之间，垂直尺寸是约20cm。在盒上标记外部部分，每一个测量为约18cm。优选地，在引入每个试验动物之前，更换覆盖盒底部的纸垫料(papertoweling)，以便去除以前试验的气味残留。用100W的灯泡照亮盒子，除了一个角落之外，所述角落被指定为“安全角(safe corner)”，并且被纸巾遮盖。通过在盒子的第三象限的中心放置3岁驯养狗的新鲜的狗屎，将食肉动物气味引入盒子中的一部分。

[0210]在约下午7点至约下午10点的早黑暗期检测小鼠。检测包括将小鼠轻放在盒的安全角中。这起始了检测阶段，其中在五(5)分钟期间，记录小鼠的一些行为反应。在检测阶段期间，允许小鼠随意在盒中移动。

[0211]用于评价小鼠对新环境和食肉动物气味的反应的行为反应测定值是下列时间(以秒表示)：(1)小鼠试图探察开放地域，(2)小鼠进入开放地域外围部分的次数，(3)进入开放地域中央部分的次数，(4)直接接近食肉动物气味目标的次数，(5)伸展和/探测行为的次数，(6)表现出防御性的尾巴姿势的次数和(7)“僵化(frozen)”姿势期的次数。

[0212]除非另外指明，试验结果表示为平均值±平均标准误差，n＝7，如下面的表7所示：

行为反应测定	组1：无6-MBOA小鼠	组2：6-MBOA小鼠	显著性(配对t检验和ANOVA)
				开始试图探察开放地域的时间进入开放地域外围部分的次数-进入最近的外围部分-进入第二近的外围部分-进入第三近的外围部分-进入开放地域外围部分的次数进入开放地域中央部分的次数直接接近食肉动物气味目标的次数伸展和/探测行	40.67±8.93n＝62.83±0.262.0±0.220.83±0.400.33±0.281.17+0.340.67±0.283.17±0.70	19.33±9.00n＝63.2±0.262.83±0.262.0±0.491.17±0.461.68±0.281.33±0.288.67±0.94	p＜0.21；*NS*不显著p＜0.51；NSp＜0.05；显著p＜0.61；NSp＜0.05；显著p＜0.21；NSp＜0.01；显著p＜0.01；显著

为的次数防御性尾部姿势的次数“僵化”姿势期的次数

2.17±0.6395.83+22.58

1.17±0.4610.83±9.16

p＜0.21；NSp＜0.01；显著

统计学分析

[0213]用配对t检验和方差分析(ANOVA)分析行为反应差异的显著性，p＜0.05。

结果

[0214]现在一般参照表7，如预期，组2的6-MBOA小鼠表现出降低程度的胆怯，更大胆地探察开放地域环境，和表现出对潜在肉食动物的恐惧减轻。组1对照小鼠(无6MBOA小鼠)表现出更长的平均时间，如表7所示，以开始试图探察开放地域。虽然，相对大的可变性使得通过本文所用测定的结果没有显著差异，但是计算出的平均值的差异处于预期的趋势，这表明，与无-6MBOA相比，6-MBOA在探究新环境方面较少犹豫。

[0215]表7也表明，组2的6-MBOA小鼠对探究新开放地域环境的外围部分具有更大的倾向。具体而言，与无6-MBOA小鼠相比，记录到6-MBOA小鼠平均更多次进入各个外围象限。在第二象限和最远象限第四象限的情况下，平均值的差异是显著的。

[0216]表7进一步表明，与无6-MBOA组小鼠相比，组2的6-MBOA小鼠对探究开放区域的中央部分具有略微增加的趋势，虽然平均值的差异统计学上并不显著。与中央区域相比，看来两组都更优先选择开放区域的外周。

[0217]如表7所阐述，组2小鼠(6-MBOA小鼠)接近食肉动物气味目标的平均趋势更大，具有显著差异。这意味着6-MBOA小鼠比组1的对照小鼠较不恐惧。

[0218]与无6-MBOA小鼠相比，6-MBOA小鼠被观察到的伸展姿势的平均数更大，这也具有显著差异。如本领域技术人员所理解，伸展姿势通常是移动的预备阶段。这再次表明，与无6-MBOA小鼠相比，6-MBOA小鼠对新环境较不恐惧。

[0219]组1的无6-MBOA小鼠表现出比组2的6-MBOA小鼠更高的防御姿势均值，虽然统计学上并不显著，这可以再次表明6-MBOA小鼠的恐惧和焦虑较轻。

[0220]最后，组1的无6-MBOA小鼠开始僵化姿势的平均趋势比组2的6-MBOA小鼠明显高，所述僵化姿势被解释为对新刺激的防御性或恐惧反应。因此，6-MBOA小鼠的僵化姿势较少以及在附近移动和探究新环境和目标的趋势更强，与焦虑和恐惧减轻有关。

[0221]一般地，本示范性研究的结果表明，与无6-MBOA小鼠相比，在喂给含本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶制备物的小鼠(6-MBOA小鼠)中，与焦虑和恐惧相关的行为反应降低。所有行为反应测定值的均值差异与最初的预期一致。在10个反应类型中的5个中，均值差异在统计学上显著。暴露于含本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶的小鼠对新环境和诱导恐惧的目标具有较少的焦虑相关行为反应，这表明含本发明的6-MBOA或相关化合物的不成熟玉米叶在Balb/c小鼠中作为抗焦虑剂。

实施例16

与运输和高声的噪音有关的焦虑

[0222]在每日食物配给中给予大的、12岁的混种狗本发明化合物(例如，地面玉米叶)。在接受本发明化合物之前，狗在多种环境下表现出明显的焦虑(即，当吸尘器接近时跑开，在车中运输或放在车中时发抖和破坏性行为)。接受本发明化合物(30-40mg/kg)几天之后，狗对应激原的反应显著降低，特别是与运输有关的激动。总体而言，狗在保持其正常能量水平时更加平静。

实施例17

对年幼雄性狗的镇静效应

[0223]年幼的、纯种雄性拉布拉多寻回犬(Labrador retriver)强迫性地在其主人的家中收集物品，如果主人不及时干涉，其破坏该物品。在狗粮中接受本发明化合物(例如，玉米叶)(30-40mg/kg)的几日内，此行为和频繁的吠叫以及追逐尾巴被停止。观察结果表明，年幼的狗更加镇静。

[0224]应该理解，本发明可以以其它具体形式实现，而不背离其精神或基本特征。在所有方面，所描述的实施方式和实施例被认为仅仅是例证性的，而非限制性。因此，本发明的范围由所附权利要求所表示，而不是由前述描述表示。在权利要求的等价意义和范围内的所有改变将被包含在其范围内。

[0225]本专利所要求和期望保护的是：

Claims (84)

1.用于在人和动物中进行镇静和减轻焦虑的方法，经由给予有效量的一种或多种如下定义的化学组分：

其中“R”表示C₁-C₄烷氧基，条件是R位于环中的4位或5位；

其中“n”表示整数0、1或2中的一个；

其中“B”表示H，并且“A”表示-OH、-NH₂或NHCR′，其中R′意为C₁-C₄烷基；和“BA”表示

或

或其药学上可接受的盐。

2.如权利要求1中所限定的方法，还包括给予有效量的一种或多种如下定义的化学组分：

其中“R¹”选自H和OCH₃；

其中“R²”选自H和葡萄糖(以葡糖苷形式)

其中“R³”选自H、OH和OCH₃；或

其药学上可接受的盐。

3.如权利要求1中所限定的方法，其中所述给予的化学组分包括约5mcg至约60mg之间的日剂量。

4.如权利要求1中所限定的方法，其中所述给予的化学组分包括15mg的日剂量。

5.如权利要求1中所限定的方法，其中所述给予的化学组分包括针对体重个体化的日剂量，在约5mg/kg和约40mg/kg之间。

6.如权利要求1所限定的方法，其中所述给予的化学组分包括针对体重个体化的日剂量25mg/kg。

7.如权利要求1中所限定的方法，其中所述动物选自鱼类、鸟类、爬行动物和哺乳动物。

8.如权利要求1中所限定的方法，其中所述化学组分中的至少一个得自一种或多种单子叶植物，所述植物选自玉米、小麦、大麦、黑麦、燕麦、稻、高粱、黍、竹子、薏米、类似大麦的草、和野生草，通过培养所述植物至不成熟生命期和收获所述植物得到。

9.如权利要求8中所限定的方法，其中所述收获的植物被干燥。

10.如权利要求9中所限定的方法，其中所述收获的植物在约40℃和约45℃之间的温度范围内被干燥。

11.如权利要求9中所限定的方法，其中所述被干燥的收获植物含有酚类，总量在17.0mg/gm(干重)以上。

12.如权利要求9中所限定的方法，其中所述被干燥的收获植物含有总计不超过1.5mg/gm(干重)的组合量的4-羟基肉桂酸和4-羟基-3-甲氧基肉桂酸。

13.如权利要求8中所限定的方法，其中所述被收获的植物是不成熟的玉米(immature corn)，玉米(Zea mays)。

14.如权利要求13中所限定的方法，其中所述不成熟的玉米生长到在约45厘米和约122厘米之间的高度。

15.如权利要求13中所限定的方法，其中所述不成熟的玉米生长到此等高度，该高度不超越约30厘米和约45厘米之间的界限。

16.如权利要求13中所限定的方法，其中所述不成熟的玉米在种植后生长不足10周。

17.如权利要求1中所限定的方法，其中所述化学组分以选自下列的方式给予：(1)经口，以片剂、胶囊、悬浮剂、溶液的形式和适于摄取的其它方式，包括舌下剂量形式；(2)鼻内给予；(3)经粘膜给予；(4)肠道外注射，形式为皮下、肌肉内、静脉内；(5)用于持续释放的植入物；和(6)透皮贴剂。

18.用于在人和动物中进行镇静和减轻焦虑的方法，经由给予有效量的一种或多种如下定义的化学组分：

其中“R”表示C₁-C₄烷氧基，约束是R位于环中的4位或5位；

其中“n”表示整数0、1或2中的一个；

或其药学上可接受的盐。

19.如权利要求18中所限定的方法，其中所述化学组分中的一个包括如下定义的6-甲氧基-2，3-苯并唑啉酮：

或其药学上可接受的盐。

20.如权利要求18中所限定的方法，其中所述化学组分中的一个包括如下定义的5-甲氧基-2，3-苯并唑啉酮：

或其药学上可接受的盐。

21.如权利要求20中所限定的方法，其中所述给予的化学组分包括约5mcg和约60mg之间的日剂量。

22.如权利要求19中所限定的方法，其中所述给予的化学组分包括日剂量15mg。

23.如权利要求18中所限定的方法，其中所述给予的化学组分包括针对体重个体化的日剂量，在约5mg/kg和约40mg/kg之间。

24.如权利要求18中所限定的方法，其中所述给予的化学组分包括针对体重个体化的日剂量25mg/kg。

25.如权利要求18中所限定的方法，其中所述动物选自鱼类、鸟类、爬行动物和哺乳动物。

26.如权利要求18中所限定的方法，其中所述化学组分中的至少一个得自一种或多种单子叶植物，所述植物选自玉米、小麦、大麦、黑麦、燕麦、稻、高粱、黍、竹子、薏米、类似大麦的草、和野生草，通过培养所述植物至不成熟生命期和收获所述植物得到。

27.如权利要求26中所限定的方法，其中所述收获的植物被干燥。

28.如权利要求27中所限定的方法，其中所述收获的植物在约40℃和约45℃之间的温度范围内被干燥。

29.如权利要求27中所限定的方法，其中所述被干燥的收获植物含有总量在17.0mg/gm(干重)以上的酚类。

30.如权利要求27中所限定的方法，其中所述被干燥的收获植物含有总计不超过1.5mg/gm(干重)的组合量的4-羟基肉桂酸和4-羟基-3-甲氧基肉桂酸。

31.如权利要求26中所限定的方法，其中所述被收获的植物是不成熟的玉米(immature corn)，玉米(Zea mays)。

32.如权利要求31中所限定的方法，其中所述不成熟的玉米生长到在约45厘米至约122厘米之间的高度。

33.如权利要求31中所限定的方法，其中所述不成熟的玉米生长到不超越约30厘米和约45厘米之间的高度。

34.如权利要求31中所限定的方法，其中所述不成熟的玉米在种植后生长不足10周。

35.如权利要求18中所限定的方法，其中所述化学组分以选自下列的方式给予：(1)经口，以片剂、胶囊、悬浮剂、溶液的形式和适于摄取的其它方式，包括舌下剂量形式；(2)鼻内给予；(3)经粘膜给予；(4)肠道外注射，形式为皮下、肌肉内、静脉内；(5)用于持续释放的植入物；和(6)透皮贴剂。

36.用于在人和动物中进行镇静和减轻焦虑的方法，通过给予有效量的一种或多种如下定义的化学组分实施：

其中“R¹”选自H和OCH₃；

其中“R²”选自H和葡萄糖(以葡糖苷形式)

其中“R³”选自H、OH和OCH₃；或

其药学上可接受的盐。

37.如权利要求36中所限定的方法，其中所述给予的化学组分包括约5mcg至约60mg之间的日剂量。

38.如权利要求36中所限定的方法，其中所述给予的化学组分包括针对体重个体化的日剂量，在约5mg/kg和约40mg/kg之间。

39.如权利要求36中所限定的方法，其中所述化学组分中的至少一个得自一种或多种单子叶植物，所述植物选自玉米、小麦、大麦、黑麦、燕麦、稻、高粱、黍、竹子、薏米、类似大麦的草、和野生草，通过培养所述植物至不成熟生命期和收获所述植物得到。

40.如权利要求39中所限定的方法，其中所述收获的植物被干燥。

41.如权利要求40中所限定的方法，其中所述收获的植物在约40℃和约45℃之间的温度范围内被干燥。

42.如权利要求40中所限定的方法，其中所述被干燥的收获植物含有酚类，总量在17.0mg/gm(干重)以上。

43.如权利要求40中所限定的方法，其中所述被干燥的收获植物含有组合量的4-羟基肉桂酸和4-羟基-3-甲氧基肉桂酸，所述组合量总共不超过1.5mg/gm(干重)。

44.如权利要求39中所限定的方法，其中所述被收获的植物是不成熟的玉米(immature corn)，玉米(Zea mays)。

45.如权利要求44中所限定的方法，其中所述不成熟的玉米被培养到高度约45厘米至约122厘米之间。

46.如权利要求44中所限定的方法，其中所述不成熟的玉米被培养到高度不超越约30厘米至约45厘米之间的界限。

47.如权利要求44中所限定的方法，其中所述不成熟的玉米在种植后被培养10周以下。

48.产生如下定义的一种或多种化学组分的方法：

其中“R”表示C₁-C₄烷氧基，条件是R位于环中的4位或5位；

其中“n”表示整数0、1或2中的一个；

其中“B”表示H，并且“A”表示-OH、-NH₂或NHCR′，其中R′意指C₁-C₄烷基；和“BA”表示

或

或其药学上可接受的盐，所述方法包括步骤：

鉴定所述化学组分的来源；和

从所述来源获得至少一种化学组分。

49.如权利要求48中所限定的方法，还包括产生如下定义的一种或多种化学组分：

其中“R¹”选自H和OCH₃；

其中“R²”选自H和葡萄糖(以葡糖苷形式)

其中“R³”选自H、OH和OCH₃；或

其药学上可接受的盐。

50.如权利要求48中所限定的方法，其中所述具有一种或多种所述化学组分的来源包括单子叶植物，所述植物选自玉米、小麦、大麦、黑麦、燕麦、稻、高粱、黍、竹子、薏米、类似大麦的草、和野生草。

51.如权利要求50中所限定的方法，其中所述获得至少一种化学组分的步骤还包括下列步骤：

培养所述单子叶植物；和

收获处于不成熟状态的所述植物。

52.如权利要求51中所限定的方法，其中所述单子叶植物是不成熟的玉米(immature corn)，玉米(Zea mays)。

53.如权利要求52中所限定的方法，其中所述不成熟的玉米被培养到高度约45厘米至约122厘米之间。

54.如权利要求52中所限定的方法，其中所述不成熟的玉米被培养到此高度，该高度不超越约30厘米至约45厘米之间的界限。

55.如权利要求52中所限定的方法，其中所述不成熟的玉米在种植后被培养10周以下。

56.如权利要求51中所限定的方法，还包括干燥所述单子叶植物的步骤。

57.如权利要求56中所限定的方法，其中所述干燥在约40℃和约45℃之间的温度范围内进行，以便产生经干燥的收获植物。

58.如权利要求57中所限定的方法，其中所述经干燥的收获植物含有酚类，总量在17.0mg/gm(干重)以上。

59.如权利要求57中所限定的方法，其中所述经干燥的收获植物含有组合量的4-羟基肉桂酸和4-羟基-3-甲氧基肉桂酸的，该组合量总共不超过1.5mg/gm(干重)。

60.产生如下定义的一种或多种化学组分的方法：

其中“R”表示C₁-C₄烷氧基，条件是R位于环中的4位或5位；

其中“n”表示整数0、1或2中的一个；

或其药学上可接受的盐，所述方法包括步骤：

鉴定所述一种或多种化学组分的来源；和

从所述来源获得所述化学组分中的至少一种。

61.如权利要求60中所限定的方法，其中所述化学组分之一包括如下定义的6-甲氧基-2，3-苯并唑啉酮：

或其药学上可接受的盐。

62.如权利要求60中所限定的方法，其中所述化学组分之一包括如下定义的5-甲氧基-2，3-苯并唑啉酮：

或其药学上可接受的盐。

63.如权利要求60中所限定的方法，其中所述具有一种或多种化学组分的来源包括单子叶植物，所述单子叶植物选自玉米、小麦、大麦、黑麦、燕麦、稻、高粱、黍、竹子、薏米、类似大麦的草、和野生草。

64.如权利要求60中所限定的方法，其中所述获得至少一种化学组分的步骤还包括下列步骤：

培养所述单子叶植物；和

收获处于不成熟状态的所述植物。

65.如权利要求64中所限定的方法，其中所述单子叶植物是不成熟的玉米(immature corn)，玉米(Zea mays)。

66.如权利要求65中所限定的方法，其中所述不成熟的玉米被培养到高度约45厘米至约122厘米之间。

67.如权利要求65中所限定的方法，其中所述不成熟的玉米被培养到高度不超越约30厘米至约45厘米之间之界限。

68.如权利要求65中所限定的方法，其中所述不成熟的玉米在种植后被培养10周以下。

69.如权利要求64中所限定的方法，还包括干燥所述单子叶植物的步骤。

70.如权利要求69中所限定的方法，其中所述干燥在约40℃和约45℃之间的温度范围内进行，以便产生经干燥的收获植物。

71.如权利要求70中所限定的方法，其中所述经干燥的收获植物含有酚类，总量在17.0mg/gm(干重)以上。

72.如权利要求70中所限定的方法，其中所述经干燥的收获植物含有总计不超过1.5mg/gm(干重)的组合量的4-羟基肉桂酸和4-羟基-3-甲氧基肉桂酸。

73.产生如下定义的一种或多种化学组分的方法：

其中“R¹”选自H和OCH₃；

其中“R²”选自H和葡萄糖(以葡糖苷形式)

其中“R³”选自H、OH和OCH₃；或

其药学上可接受的盐，所述方法包括步骤：

鉴定一种或多种所述化学组分的来源；和

从所述来源获得所述化学组分中的至少一种。

74.如权利要求73中所限定的方法，其中所述具有一种或多种所述化学组分的来源包括单子叶植物，所述单子叶植物选自玉米、小麦、大麦、黑麦、燕麦、稻、高粱、黍、竹子、薏米、类似大麦的草、和野生草。

75.如权利要求74中所限定的方法，其中所述获得至少一种化学组分的步骤还包括下列步骤：

培养所述单子叶植物；和

收获处于不成熟状态的所述植物。

76.如权利要求75中所限定的方法，其中所述被收获的植物是不成熟的玉米(immature corn)，玉米(Zea mays)。

77.如权利要求76中所限定的方法，其中所述不成熟的玉米被培养到高度约45厘米至约122厘米之间。

78.如权利要求76中所限定的方法，其中所述不成熟的玉米被培养到不超过约30厘米和约45厘米之间的高度。

79.如权利要求76中所限定的方法，其中所述不成熟的玉米在种植后被培养10周以下。

80.如权利要求75中所限定的方法，还包括干燥所述单子叶植物的步骤。

81.如权利要求80中所限定的方法，其中所述干燥是在约40℃和约45℃之间的温度范围内进行的，以便产生被干燥的收获植物。

82.如权利要求81中所限定的方法，其中所述经干燥的收获植物含有酚类，总量在17.0mg/gm(干重)以上。

83.如权利要求81中所限定的方法，其中所述被干燥的收获植物含有组合量的4-羟基肉桂酸和4-羟基-3-甲氧基肉桂酸，该组合量总共不超过1.5mg/gm(干重)。

84.产生如下定义的一种或多种化学组分的方法：

其中“R”表示C₁-C₄烷氧基，条件是R位于环中的4位或5位；

其中“n”表示整数0、1或2中的一个；

其中“B”表示H，并且“A”表示-OH、-NH₂或NHCR′，其中R′意指C₁-C₄烷基；和“BA”表示

或

或其药学上可接受的盐，所述方法包括步骤：

鉴定一种或多种所述化学组分的单子叶植物来源；

在种植后培养所述单子叶植物10周以下的一段时间和达到约45厘米和约122厘米之间的高度；

收获所述单子叶植物；

在约40℃和约45℃之间的温度范围内干燥所述单子叶植物，产生被干燥的收获植物。

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