CN100478018C - 一种治疗肝癌的药物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种治疗H22肝癌药物,它是以斑蝥、陈皮、谷芽为原料。本发明还公开了该药物的制备方法,它包括以下步骤:(1)取斑蝥、陈皮、谷芽,加水,浸泡、煮沸,过滤:(2)药渣加水继续煮沸,过滤;(3)合并两次滤液,浓缩,药液冷却装入灭菌药瓶。本发明具有中药复方药学最大化,毒性最小化,作用部位多靶点的优点。经实验初步验证,本药具有抑制肿瘤生长和调节机体免疫功能的双重效应,为临床治疗肿瘤提供了依据。同时,本药毒副作用较小,适于长期服用,是一种安全有效的药物。
Description
技术领域
本发明关于一种治疗H22肝癌药物。具体地说是以中草药为原料制备的中成药,本发明还关于该药物的制备方法。
背景技术
中药斑蝥早在十三世纪的《仁斋直指方》中就有记载,可用治于乳癌及腹部癌。古人还常用“斑蝥煮鸡蛋,弃斑蝥食蛋”的偏方治疗肝癌及其它消化系统癌症,至今仍在民间沿用。中医学认为斑蝥性寒味辛,有大毒。据《神农本草经》记载,斑蝥可以治疗痈疽、溃疡、癣疮等病症,具有攻毒蚀疽、破血散结的作用。临床发现其还有多种新用途,治疗一些疑难杂症具有独特的疗效,如治疗风湿痛、神经痛、梅核气、斑秃、乳腺增生、鼻炎、传染疣、肝炎、癌肿等,尤其对原发性肝癌有肯定的治疗效果。
原发性肝癌(PHC,以下简称肝癌)为常见的消化道恶性肿瘤,东亚地区是世界肝癌高发区,其发病率在恶性肿瘤中居第三位,男性肝癌发病率约是女性的3倍,新病例中73%是男性。肝癌病死率高(死亡率/发病率=0.95),2000年死亡病例39.6万,在恶性肿瘤死因中排列第二。如何有效地防治本病是医药界面临的一个重要课题。目前,特别对H22肝癌治疗还没有特效的药物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗H22肝癌,且安全有效,适于长期服用的药物。
本发明的另一目的在于提供治疗H22肝癌药物的制备方法。
本发明的目的是通过以下技术方法来实现的:
本发明发明了由斑蝥为主要成分的药物,然后选择移植性肝癌H22小鼠为模型,观察该药物的抑瘤作用,检测T淋巴细胞增殖功能、NK细胞杀伤功能、T淋巴细胞表型变化及IL-12、IL-4含量。
本发明药物是由下列组分制成的(用量为重量份)
斑蝥10-20份。
本发明药物也可是由下列组分制成的(用量为重量份)
斑蝥10-20份、陈皮5-10份、谷芽5-10份。
本发明药物的配方优选重量(份)配比范围是:
斑蝥12-18份、陈皮6-8份、谷芽6-8份。
本发明药物的最佳重量(份)配比是:
斑蝥15份、陈皮7份、谷芽7份。
本发明药物的制备方法(一)
(1)取斑蝥,加水,浸泡、煮沸,过滤:
(2)药渣加水继续煮沸,过滤;
(3)合并两次滤液,浓缩,药液冷却装入灭菌药瓶。
本发明药物的制备方法(二)
(1)斑蝥、陈皮、谷芽,加水,浸泡、煮沸,过滤:
(2)药渣加水继续煮沸,过滤;
(3)合并两次滤液,浓缩,药液冷却装入灭菌药瓶。
药效学研究:
1材料和方法
1.1实验材料
1.1.1治疗H22肝癌药物的制备:取中药斑蝥置煎煮容器内,加相当于药材量5-7倍的冷水浸泡1-2h,煮沸30min,过滤。药渣加3-5倍量水继续煎煮,煮沸20min,过滤。合并两次滤液,于水浴上浓缩成相当于原生药材0.01g/ml的药液,冷却装入灭菌药瓶,置4℃冰箱备用。
1.1.2动物:C57BL/6小鼠,雄性,10周龄,购自上海中科院动物中心。
1.1.3瘤株:肝癌H22瘤株,由上海市免疫学研究所提供。
1.1.4试剂:ConA(Sigma公司),CD3、CD4、CD8单抗(eBioScience公司),NK细胞杀伤试剂(上海市免疫研究所自配),3H-TdR(上海原子能研究所),IFN-γ和IL-4检测试剂盒(晶美公司)。
1.2实验方法
1.2.1造模方法:无菌条件下取生长7-9d传代接种的H22细胞株,将细胞5×106接种于每只小鼠右侧腋窝皮下。
1.2.3动物分组及给药方法:小鼠30只,10只作为正常组,其余均按上法造模。小鼠接种肿瘤5天后,随机分成生理盐水组和实验组,每组10只,生理盐水组予以生理盐水处理,实验组给予治疗H22肝癌药物水煎液0.01g/ml,均灌胃0.2ml/只,连续给药15天。
1.2.4标本采集:停药次日,断颈处死小鼠,剥离肿瘤组织并无菌取脾。
1.3检测指标
1.3.1小鼠体重、瘤重及抑瘤率:胃饲15天后,称取两组小鼠体重;处死小鼠后完整剥离肿瘤,用电子天平称取瘤重,计算抑瘤率。
1.3.2T淋巴细胞增殖功能:采用3H-TdR掺入法。在96孔平底培养板中,每孔加入小鼠脾细胞悬液100μl,浓度为5×106/ml,三复孔培养。同时,分别加入ConA 10μl。于37℃、5%CO2条件下培养72h。终止培养前16h,每孔加入3H-TdR 1μCi。用细胞收集仪将细胞收集于玻璃纤维滤纸上,β-液闪仪测定cpm值,并计算刺激指数。
1.3.3NK杀伤功能:用1640培养液分别调整小鼠脾细胞(效应细胞)和体外培养的K562细胞(靶细胞)浓度为5×106/ml和1×105/ml。按效∶靶=50∶1比例,各取100μl加入96孔平底培养板,37℃、5%CO2条件下共同培养4h。并设自然释放和最大释放组作为实验阴阳性对照。然后1000rpm,离心5min。吸取上清100μl,加入底物液100μl,静置3min显色。再加入1N HCL终止反应,490nm波长读取OD值。计算NK细胞的杀伤百分率。
1.3.4T淋巴细胞表型:采用直接免疫荧光及流式细胞仪分析。取小鼠脾细胞1×106,加入适量PE-Cy5-CD3、FITC-CD4和PE-CD8混合单抗,室温避光孵育20min。1000rpm,离心5min,洗涤2次后,加入300μl固定液,上机检测。
1.3.5细胞因子:采用ELISA法。收集小鼠脾细胞经ConA刺激24h后的培养上清,按照细胞因子检测试剂盒操作说明分别测定IFN-γ和IL-4的含量。
1.4统计学处理:采用Statpal团体T检验统计分析各组别数据的差异显著性。
2结果
2.1治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠体重、瘤重及抑瘤率的影响:结果如图1所示。与正常组比较,两组发生肿瘤的小鼠体重均减轻,而实验组小鼠体重下降明显(P=0.001),但实验组小鼠肿瘤重量显著小于生理盐水组小鼠瘤重(P=0.0015),抑瘤率达65.76%。表明治疗H22肝癌药物能有效抑制小鼠肝癌细胞的生长。
2.2治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠T淋巴细胞增殖的影响:两组T淋巴细胞转化功能均较正常小鼠有显著降低。实验组小鼠T淋巴细胞转化刺激指数增加显著(SI=4.34>3,P=0.00129),具有较强的增殖能力,结果见图2。说明治疗H22肝癌药物能显著上调小鼠的T淋巴细胞增殖功能。
2.3治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠NK细胞杀伤功能的影响:与正常组比较,单纯胃饲生理盐水组NK细胞杀伤活性无显著性差异,说明罹患肝癌后,并不能有效地刺激小鼠NK细胞产生针对肿瘤的免疫应答。实验组小鼠NK细胞杀伤活性显著增高,为生理盐水组的5倍(P<0.005),结果见图3。说明治疗H22肝癌药物能增强患瘤小鼠NK细胞的杀伤功能。
2.4治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠T细胞亚群变化的影响:如图4所示,与正常组比较,两肿瘤小鼠组T细胞数量均有明显下降(P<0.05),说明其免疫功能低下。同时,两组小鼠外周T细胞亚群比例发生明显变化:
CD4+/CD8+比例倒置,这可能是因为发生肿瘤后,小鼠体内肿瘤特异性CD8+T细胞克隆增殖的结果。而生理盐水组与实验组相比,后者更能改变T淋巴细胞亚群比例。
2.5治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠分泌细胞因子能力的影响:IFN-γ测定显示见图5,实验组小鼠T细胞分泌IFN-γ能力有显著升高(P<0.05),说明治疗H22肝癌药物能显著上调CD4+Th1细胞的分泌能力,并进而上调小鼠细胞免疫功能,促进CD8+细胞毒性T细胞的抗肿瘤作用。IL-4检测结果显示见图6,实验组小鼠T细胞分泌IL-4的能力有显著升高(P<0.001),说明治疗H22肝癌药物能显著上调CD4+Th2细胞的分泌能力,并进而上调小鼠体液免疫功能。综合以上两种情况,实验组既能上调小鼠细胞免疫功能,又能有效刺激小鼠的体液免疫功能,因此能有效抑制小鼠肿瘤的生长。
本发明所公开一种治疗H22肝癌药物及其制备方法,其优点表现在:该药物属于中药复方制剂,其配伍符合中药“君臣佐使”原则,具有中药复方药学最大化,毒性最小化,作用部位多靶点的优点。经实验初步验证,本药具有抑制肿瘤生长和调节机体免疫功能的双重效应,为临床治疗肿瘤提供了依据。同时,本药毒副作用较小,适于长期服用,是一种安全有效的药物。
附图说明
图1显示治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠体重及瘤重的影响。
图2显示治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠T淋巴细胞增殖的影响
注1.正常组T淋巴细胞转化刺激指数为42.01;
注2.与生理盐水组比较,*P<0.01。
图3显示治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠NK细胞杀伤功能的影响
注:与生理盐水组比较,*P<0.01。
图4显示治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠T细胞亚群变化的影响。
图5显示治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠分泌IFN-γ能力的影响
注:与生理盐水组比较,*P<0.01。
图6显示治疗H22肝癌药物对荷瘤小鼠分泌IL-4能力的影响
注:与生理盐水组比较,*P<0.01。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述。
实施例1
治疗H22肝癌药物的制备(一)
取中药斑蝥150g置煎煮容器内,加入750g的冷水浸泡1h,煮沸30min,过滤。药渣加入450g水继续煎煮,煮沸20min,过滤。合并两次滤液,于水浴上浓缩成相当于原生药材0.01g/ml的药液,冷却装入灭菌药瓶,置4℃冰箱备用。
治疗H22肝癌药物的制备(二)
取中药斑蝥200g置煎煮容器内,加入1400g的冷水浸泡2h,煮沸30min,过滤。药渣加入800g量水继续煎煮,煮沸20min,过滤。合并两次滤液,于水浴上浓缩成相当于原生药材0.01g/ml的药液,冷却装入灭菌药瓶,置4℃冰箱备用。
治疗H22肝癌药物的制备(三)
取中药斑蝥100g置煎煮容器内,加入600g的冷水浸泡1.5h,煮沸30min,过滤。药渣加入400g水继续煎煮,煮沸20min,过滤。合并两次滤液,于水浴上浓缩成相当于原生药材0.01g/ml的药液,冷却装入灭菌药瓶,置4℃冰箱备用。
治疗H22肝癌药物的制备(四)
取中药斑蝥50g、陈皮25g、谷芽25g置煎煮容器内,加入600g的冷水浸泡1.5h,煮沸30mi n,过滤。药渣加入400g水继续煎煮,煮沸20min,过滤。合并两次滤液,于水浴上浓缩成相当于原生药材0.01g/ml的药液,冷却装入灭菌药瓶,置4℃冰箱备用。
治疗H22肝癌药物的制备(五)
取中药斑蝥100g、陈皮50g、谷芽50g置煎煮容器内,加入1400g的冷水浸泡2h,煮沸30mi n,过滤。药渣加入800g量水继续煎煮,煮沸20min,过滤。合并两次滤液,于水浴上浓缩成相当于原生药材0.01g/ml的药液,冷却装入灭菌药瓶,置4℃冰箱备用。
治疗H22肝癌药物的制备(六)
取中药斑蝥60g、陈皮40g、谷芽35g置煎煮容器内,加入750g的冷水浸泡1h,煮沸30min,过滤。药渣加入450g水继续煎煮,煮沸20min,过滤。合并两次滤液,于水浴上浓缩成相当于原生药材0.01g/ml的药液,冷却装入灭菌药瓶,置4℃冰箱备用。
Claims (9)
1、一种治疗H22肝癌药物,其特征在于:该药物是由原料药斑蝥、陈皮、谷芽制成,各原料药的重量份比为:斑蝥10-20份、陈皮5-10份、谷芽5-10份。
2、根据权利要求1所述的药物,其特征在于它是由下列重量份的原料药制成:斑蝥12-18份、陈皮6-8份、谷芽6-8份。
3、根据权利要求2所述的药物,其特征在于它是由下列重量份的原料药制成:斑蝥15份、陈皮7份、谷芽7份。
4、根据权利要求1所述的药物制备方法,其特征在于它包括以下步骤:
(1)取斑蝥,加水,浸泡、煮沸,过滤:
(2)药渣加水继续煮沸,过滤;
(3)合并两次滤液,浓缩,药液冷却装入灭菌药瓶。
5、根据权利要求4所述的药物制备方法,其特征在于:步骤(1)中加水量为药材量5-7倍,浸泡时间为1-2h,煮沸30min。
6、根据权利要求4所述的药物制备方法,其特征在于:步骤(2)中加水量为药材量3-5倍,煮沸20min。
7、根据权利要求4所述的药物制备方法,其特征在于:步骤(3)中药液浓缩为相当于原生药材0.01g/ml。
8、根据权利要求3所述的药物制备方法,其特征在于它包括以下步骤:
(1)取斑蝥、陈皮、谷芽,加水,浸泡、煮沸,过滤;
(2)药渣加水继续煮沸,过滤;
(3)合并两次滤液,浓缩,药液冷却装入灭菌药瓶。
9、根据权利要求8所述的药物制备方法,其特征在于:步骤(1)中加水量为药材量5-7倍,浸泡时间为1-2h,煮沸30min。
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中药大辞典(下册). 江苏新医学院,第2280-2281页,世纪出版集团上海科学技术出版社. 1986 |
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