CN100448354C - 对植物病害防治有用的假霉素 - Google Patents

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Abstract

通过最初从丁香假单胞菌分离到的假霉素组合物的应用来保护或治疗易于受真菌相关疾病侵害的植物和作物。

Description

对植物病害防治有用的假霉素
本发明是2001年8月17日提交的发明名称为“对植物病害防治有用的假霉素”的发明专利申请01814299.0的分案申请。
发明领域
本发明涉及假霉素(Pseudomycin)作为防治植物和作物病害有效杀真菌剂的应用，并且更具体地涉及假霉素防治引起植物和作物病害的具体真菌种类的应用。
发明背景
一类新的抗真菌剂，假霉素，显示有很大希望用于治疗各种患者的真菌感染。(参见，也就是，Harrison，L.，等，“假霉素，来自丁香假单胞菌具有广谱抗真菌活性的新颖肽家族”(Pseudomycins，a family ofnovel peptides from Pseudomonas syringae possessing broad-spectrumantifungal activity)，普通微生物学杂志(J.Gen.Microbiology)，137(12)，2857-65(1991)和美国专利Nos.5,576,298和5,837,685)。假霉素是来自丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)分离物的天然产物。丁香假单胞菌是一个大的植物伴生细菌群，其已经是几个生物活性物质的来源，例如杆菌肽和丁香霉素。丁香假单胞菌的天然菌株和转座子致突变体都产生具有抗真菌活性的化合物。丁香假单胞菌MSU 174野生型菌株的转座子致调节突变体，以MSU 16H(ATCC 67028)知名，产生几种假霉素。假霉素A、B、C和C’已经被分离，其化学特征已经被描述，并显示具有广谱的抗真菌活性，包括抗人类和植物中的重要真菌病原体的活性。假霉素与丁香霉素和其他来自丁香假单胞菌分离物的抗真菌素在结构上相关但又明显不同。假霉素A、B、C和C’的肽部分与带有末端羧基的L-Ser-D-Dab-L-Asp-L-Lys-L-Dab-L-aThr-Z-Dhb-L-Asp(3-OH)-L-Thr(4-Cl)一致，该末端羧基与N-末端丝氨酸上OH环合成大环。通过N-酰基侧链来区分结构类似物，也就是，假霉素A由3，4-二羟基十四烷酸酯而N-酰化，假霉素B由3-羟基十四烷酸酯而N-酰化，假霉素C由3，4-二羟基十六烷酸酯而N-酰化，和假霉素C’由3-羟基十六烷酸酯而N-酰化。(参见，也就是，Bollio，A.，等，“来自丁香假单胞菌的新颖生物活性脂缩肽：假霉素”(Novel bioactive lipodepsipeptides fromPseudomonas syringae：the pseudomycins)，欧洲生化学会联合会快报 (FEBS Letters)，355(1)，96-100，(1994)和Coiro，V.M.，等，“由对NMR数据进行距离几何学和分子动力学的计算机模拟确定的丁香假单胞菌MSU 16H的植物毒性脂缩肽假霉素A的溶液构象”(Solutionconformation of the Pseudomonas syringae MSU 16H phytotoxiclipodepsipeptide Pseudomycin A determined by computer simulationsusing distance geometry and molecular dynamics from NMR date)，欧洲 生物化学杂志(Eur.J.Biochem.)，257(2)，499-456(1998).)
本发明提供对植物和作物防治真菌病害特别有用的假霉素类化合物。
发明概述
本发明的一个目的是提供治疗或预防植物和作物病害的方法。
本发明的另外一个目的是提供应用某些假霉素治疗或预防植物和作物病害的方法。
本发明还有另外一个目的是应用某些假霉素以预防或治疗由真菌引起的植物和作物病害。
本发明的其他目的和优势将随着本发明描述的进行变明显。
作为上述目的和优势的补充，本发明提供预防或治疗与真菌相关的植物和作物病害的方法，其包括将有效量的一种和多种假霉素产品应用于所述植物或作物。
优选实施方式描述
本公开涉及发现统称为假霉素的一类脂肽化合物新的、以前未知的作为杀真菌剂或抗真菌剂的应用。在优选的实施方式，个别的和作为一组的假霉素对于治疗或保护受到与球腔菌(Mycosphaerella sp.)(真菌的有性阶段或性阶段)相关并且实际上与包括壳针孢(Septoriasp.)和尾孢霉菌(Cercospora sp.)这些所知真菌的所有各种无性阶段相关的子囊真菌类侵害的植物特别有用。另外，许多其他非常重要经济植物的致病真菌可被假霉素杀灭，包括Tapesia yallundae、玉蜀黍黑粉菌(Ustilago maydis)、娄地青霉(Penicillum roqueforti)、链核盘菌(Monilinia sp.)、白地霉(Geotrichum candidum)。所以，假霉素，独自地或个别地，用于治疗植物以预防它们受到这些真菌引起的侵害。
由这些生物引起病害类型的变化从贮藏的植物(水果和蔬菜)到非常严重的野外病害例如香蕉黑叶斑病(Black Sigatoka)以及断茎病和小麦斑病。
本发现涉及以前未知的一批非常重要的植物致病真菌，这些真菌似乎生物学上相关并对一种或多种假霉素敏感，并且可以被这些假霉素抑制和杀灭。这些真菌和一些以前未被发现的其他真菌，产生地球上一些最严重的植物病害。目前这些真菌导致的疾病用人工合成杀真菌剂的一个或多个的复杂混合物来控制，这些杀真菌剂引起环境损害并且对人类健康可能有未知的危险。另一方面，对于控制某些植物病害的人工合成化学药物的使用，假霉素提供了一个安全、有效的替代。另外，使用假霉素控制植物病害有一些好处，因为使用天然产物控制病害使得生产者能够宣告作物在对产品有更多益处的生物/有机条件下生长。这是值得注意的，因为目前世界上还没有任何主要作物使用天然杀真菌剂来控制植物病害。假霉素无疑地为农业生产者和消费者都提供了许多好处。
作为说明假霉素如何及为什么会对世界农业有益的例子，几种假霉素例如假霉素A、B、B’、C和C’的最小抑制浓度(MIC)范围为1mg/ml或更小。对于农业状况的有效应用，这是非常理想的浓度。当进行抗斐济球腔菌(Mycosphaerella fijiensis)分离物8088/88试验时，这些化合物产生甚至更大的效应(小于1.0mg)。斐济球腔菌是香蕉和大蕉(plantain)黑叶斑病的致病生物。目前，在世界范围内，这些作物的生产者为了香蕉收成必须以30次/年的速度喷雾三种杀真菌剂(人工合成)的混合物。单是这一种病害呈现了整个世界每一种作物的杀真菌剂最大消耗。这些合成杀真菌剂使用的缺点有很多，包括：1.它们的费用非常高(数百万美元)；2.由于施用了杀真菌剂，生产者不能出售有机地生长的产品；和3.经过几十年杀真菌剂连续使用产生对人类和环境健康风险的不确定性。种植园里香蕉树冠下的土壤出现动物生命的贫乏并且显示杀真菌剂残余物的增加。另一方面，天然产生的假霉素看来对于控制香蕉叶斑病更有效，而同时对环境和人类健康提供益处。
另外，假霉素对许多其他引起植物病害的真菌有效，包括破坏贮藏时植物产品的真菌例如青霉(Penicillium sp.)、链核盘菌、地霉(Geotrichum sp.)。将假霉素用于收获的水果能阻止真菌感染和贮藏腐烂。
还有其他可能的假霉素应用，包括在小麦上施用以控制由壳针孢，具体来说，S.nodurum和小麦壳针孢(S.triticii)引起的病害，并且，基于这些分子的生物活性，实际上是控制世界上引起任何植物病害的任何壳针孢引起的疾病。同样地，与球腔菌相关的其他真菌受到影响，它们包括由尾孢霉菌引起的植物病害，尾孢霉菌造成甜菜和许多其他作物的叶斑病。其他致病生物体也受到假霉素的影响，它们包括Dreschslera portulaceae。
依照本发明，发现本文所描述的假霉素对以前未知的和密切相关的植物致病真菌族有巨大的抗真菌活性。本主族由有性阶段真菌球腔菌和其无性阶段的每一个段代表例如壳针孢和尾孢霉菌代表。通常，假霉素可以单独使用或作为制剂混合物用于预防植物真菌感染。这些化合物对田间或贮藏作物的潜在应用是可以设想的。
于是，本发明的目的是展示许多非常重要经济植物的致病真菌易受一种或多种假霉素作用的影响，假霉素最初从植物伴生细菌丁香假单胞菌分离得到。
对本发明方法有用的假霉素优选丁香假单胞菌产生的假霉素，包括鉴定为假霉素A、A’、B、B’、C和C’的假霉素及其衍生物例如假霉素A-PO4，其为磷酸盐衍生物，和假霉素A-FB，二者都是已知的。
这些假霉素被用于多种易于感染真菌引起的寄生性病害的植物和作物。与此相关，本发明的假霉素组合物主要用于预防真菌引起的寄生性病害的发病，所以优选在病害发作前治疗植物和作物。然而，假霉素组合物对于治疗已感染植物也是有用的。
本发明的假霉素组合物在非常低的浓度即1至100微克级假霉素/毫升水溶液也有效。在这方面，本发明假霉素组合物应用的优选方法是治疗时将指示浓度的假霉素组合物直接喷洒到需要治疗的植物或作物。本发明的假霉素组合物可能是溶液、悬浮液或乳浊液形式，或者任何其他适于喷洒到植物和作物的形式。
本发明采用的优选假霉素和它们的制备方法是已知的或在下面申请中被完全公开和描述，即共同未决的于2000年4月14日提出申请的PCT/US00/08728和于2000年4月14日提出申请的PCT/US00/08727，这两个申请都指定美国。这两个申请的全部内容都是作为参考而引入本文。
正如本文所用，术语“假霉素”指具有下式I的化合物：
Figure C20061015405800091
其中R是亲脂部分。假霉素化合物A、A’、B、B’、C、C’用上式I代表，其中R如下定义。
假霉素化合物A      R＝3，4-二羟基十四烷酰基
假霉素化合物A’    R＝3，4-二羟基十五烷酸酯
假霉素化合物B      R＝3-羟基十四烷酰基
假霉素化合物B’    R＝3-羟基十二烷酸酯
假霉素化合物C      R＝3，4-二羟基十六烷酰基
假霉素化合物C’    R＝3-羟基十六烷酰基
正如本文所用，假霉素指已经从细菌丁香假单胞菌分离到的抗真菌剂家族的一个或多个成员。假霉素是脂缩肽(lipodepsipeptide)，并且是一个包括一个或多个非普通氨基酸和具有一个或多个附加疏水性或脂肪酸侧链的环肽。具体说来，假霉素是脂缩九肽，其环肽部位由内酯键环合并包括非普通氨基酸4-氯苏氨酸、3-羟基天冬氨酸、去氢-2-氨基丁酸和2，4-二氨基丁酸。认为这些非普通氨基酸跟假霉素的生物特征相关，例如血清中的稳定性和它们的杀灭活性。假霉素包括假霉素A、假霉素A’、假霉素B、假霉素B’、假霉素C和假霉素C’。这些假霉素的每一个具有相同的环肽核，但是它们的不同在于连在这个核上的疏水性侧链。
假霉素A、A’、B、B’、C、C’的每一个已经被分离和纯化并且它们的结构特征已经通过包括氨基酸序列分析、NMR和质谱的方法描述。假霉素A、B、C和C’在1996年11月19日授予G.Strobel等的美国专利No.5,576,298；Harrison等，“假霉素，来自丁香假单胞菌具有广谱抗真菌活性的新颖肽家族”，普通微生物学杂志(J.Gen.Microbiology)，137，2857-2865(1991)；和Bollio等，“来自丁香假单胞菌的新颖生物活性脂缩肽：假霉素”，欧洲生化学会联合会快报(FEBS letters)，355，96-100，(1994)中被讨论。假霉素A’和B’由Palaniappan Kulanthaivel等在美国专利申请系列No.PCT/US00/08727中描述，标题为“假霉素天然产物”，申请日与本申请相同，并且在实施例中举例说明，其全文作为参考而引入本文。几个假霉素的抗真菌活性与具有以Tn 903命名的转座子的丁香假单胞菌相关，其编码的因子包括卡那霉素耐药性。转座子Tn 903的序列和操纵方法是已知的。Oka等，“卡那霉素耐药性转座子Tn 903的核苷酸排列顺序”(Nucleotide sequence of thekanamycin resistance transposon Tn 903)分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)147，217-226(1981)。本段落引用的每一个参考文献都具体引入本文作为参考。
假霉素的结构和性质都不同。优选的假霉素A、B、C和C’显示具有抗多种真菌的活性并且也显示通常可接受的毒性。与其他优选的假霉素相比，假霉素B具有更大的抗某些真菌的潜力和更低的毒性水平。因此，对于目前的方法，更优选假霉素B。每个假霉素具有环形九肽环，其具有序列为Ser-Dab-Asp-Lys-Dab-aThr-Dhb-HOAsp-ClThr(丝氨酸；2，4-二氨基丁酸；天冬氨酸；赖氨酸；2，4-二氨基丁酸；别苏氨酸；去氢-2-氨基丁酸；3-羟基天冬氨酸；4-氯苏氨酸)，更具体来说，L-Ser-D-Dab-L-Asp-L-Lys-L-Dab-L-aThr-Z-Dhb-L-Asp(3-OH)-L-Thr(4-Cl)，其ClThr的羧基和丝氨酸的羟基以内酯键成环。假霉素的不同之处在于与N-末端丝氨酸氨基相连的亲脂部分的种类。丝氨酸的氨基在假霉素A中与3，4-二羟基十四烷酰部分的羧基形成酰胺键，在假霉素化合物B中是与3-单羟基十四烷酰部分形成酰胺键，在假霉素化合物C中是与3，4-二羟基十六烷酰部分形成酰胺键，在假霉素化合物C’中是与3-单羟基十六烷酰部分形成酰胺键。丝氨酸的羧基与环的Dab形成酰胺键。
本发明采用的假霉素可能以它们可接受的盐的形式使用。术语“可接受的”，正如本文所用，指上面所述对活有机体基本上没有毒性化合物的盐类。通常可接受的盐包括那些通过本发明的化合物与无机酸或有机酸或无机碱的反应来制备的盐类。这样的盐称为酸加成盐和碱加成盐。
通常用以形成酸加成盐的酸是无机酸例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸和磷酸，和有机酸例如对甲苯磺酸、甲基磺酸、草酸、对溴苯磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸和乙酸。这些药学可接受的盐的实例是硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、单氢磷酸盐、二氢磷酸盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、醋酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、延胡索酸盐、马来酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔-2，6-二酸盐、安息香酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、羟乙酸盐、酒石酸盐、甲基磺酸盐、丙基磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐和扁桃酸盐。优选的药学可接受的加成盐是那些由无机酸例如盐酸和氢溴酸形成的盐，和那些由有机酸例如马来酸和甲基磺酸形成的盐。
碱加成盐包括那些来自无机碱的盐，例如铵、碱金属、碱土金属氢氧化物、碳酸盐和碳酸氢盐。于是对于制备本发明盐有用的这类碱包括氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钙和碳酸钙。尤其优选钾和钠的盐形式。
应该认识到，形成本发明任何盐的一部分的具体带相反电荷离子不是关键本质，只要盐总体上是药学可接受的盐并且只要带相反电荷离子总体上使盐不出现非理想性质。
在参考下列例子情况下本发明可能会更好的被理解。这些例子是为了代表本发明的具体实施方式，并不是为了限制本发明的范围。
保藏的生物材料
公众可由美国典型培养物保藏中心，Parklawn Drive，Rockville，MD，USA获得丁香假单胞菌MSU 16H，编号ATCC 67028。丁香假单胞菌菌株25-B1、7H9-1和67 H1在2000年3月23日被存放于美国典型培养物保藏中心并指定下列编号：
25-B1    编号PTA-1622
7H9-1    编号PTA-1623
67 H1    编号PTA-1621
假霉素从丁香假单胞菌的液体培养物中分离得到。丁香假单胞菌为植物伴生微生物，能产生多种毒植物素和其他复合肽1-3。在二十世纪八十年代后期，显示丁香假单胞菌能产生抗真菌剂。基本上，有这样的观念即生长在植物上的内共生体产生抗真菌剂以预防植物的真菌病害。假霉素被鉴定为有生物活性的抗真菌剂。野生型丁香假单胞菌的转座子致突变体显示能高度表达这些天然产物。蒙大拿州大学(Montana State University)研制的这些转座子致突变体菌株4被成功地用于接种榆树以控制荷兰榆病5-6。另外，这些天然产物已经显示对大田作物、水果和其他植物(表1-3)病害具有选择性的抗真菌活性。例如，假霉素显示令人满意的抗斐济球腔菌活性(引起香蕉黑叶斑病的斐济球腔菌比当今世界任何其他植物病害需要更多的杀真菌剂和杀真菌剂施用。假霉素也显示能预防芒果的早熟腐烂。
实施例1
这些天然产物的可再现大规模生产(千克)已经被成功地证实了。游离碱和替代盐形式的纯化样品被制备。近似地，34种植物致病真菌被用来评价假霉素A、B、B’、C、C’的抗真菌特性。在第2天和第5天两个时间点测定抑制浓度。
表1：用感兴趣的致病菌测试抗真菌活性
a.向日葵链格孢(Alternaria helianthi)＝向日葵叶斑病
b.丝囊霉(Aphanomyces sp.)＝许多植物的根腐、幼苗枯萎，包括甜菜
c.麦根腐平脐蠕孢(Bipolaris sorokiniana)＝大麦粒枯病
d.葱腐葡萄孢(Botrytis alli)＝洋葱灰霉颈腐病
e.炭色旋孢霉(Cochliobolis carbonum)＝玉米叶枯病
f.蒂腐色二孢(Diplodia natalensis)＝葡萄果腐病
g.Dreschslera portulacae＝马齿苋属植物的叶斑病√
h.D.teres＝大麦网斑病
i.D.tritici-repentis小麦叶斑病
j.燕麦镰孢(Fusarium avenaceum)＝几种大田作物的根腐病
k.大刀镰孢(F.culmorum)＝镰孢菌赤霉病
l.尖孢镰孢(F.oxysporum)＝镰孢菌维管枯萎病
m.茄病镰孢(F.solani)＝根腐
n.白地霉＝番茄田间腐烂√
o.果生链核盘菌(Monilinia fructicola)＝核果的褐腐病
p.斐济球腔菌＝香蕉黑叶斑病√(图3)
q.娄地青霉＝贮藏水果的绿霉病√
r.玉蜀黍叶点霉(Phyllosticta maydis)＝玉米黄色叶斑病
s.疫霉(Phytophthoras)引起枯萎病、腐烂
t.茄属丝核菌(Rhizoctonia solani)＝丝核菌根腐
u.油菜核盘菌(Sclerotina sclerotiorum)＝许多植物品种的颈腐病
v.小麦壳针孢＝小麦叶斑枯病和颖斑枯病√(图5)
w.Tapesia acuformis＝造成小麦的所有病害
x.玉蜀黍黑粉菌＝玉米黑穗病√
y.大丽花轮枝孢(Verticillium dahliae)＝许多作物和树种的黄萎病
＝对假霉素非常敏感
材料和方法
在室温下将被测试真菌培养于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)板上。假霉素和缩肽的原液以5mg/ml浓度悬浮于二甲基亚砜(DMSO)并在-20℃下贮藏。化合物的连续稀释在试验的当天完成。所有连续稀释在DMSO中完成。注意：对一些真菌进行甲醇中假霉素B和B’的初步试验，几个真菌显示在甲醇存在下生长被抑制。在原始数据部分注意到这些。
在24-孔细胞培养器(Costar 3524)中完成检验分析，并且每孔有990ul马铃薯葡萄糖培养液(PDB，Difco)和10ul被测试化合物。初步测试浓度为50-1.56ug/ml(假霉素的最终浓度)。被测试假霉素的实际浓度为50、25、12.5、6.25、3.12和1.56ug/ml。每个孔接种适当的真菌。除非特别提到，真菌接种物由～4mm2 PDA块和真菌菌丝体组成。例外如下。玉蜀黍黑粉菌：该真菌在PAD上生长很像酵母，将细胞从PAD原种盘刮出，重新悬浮于PDB并且向每个孔加入10ul接种物。链核盘菌：该真菌的菌丝体在PDA上长成非常松散的薄片并且不粘附琼脂块。用金属棒将真菌菌丝体磨碎于500ul PDB中并且向每个孔加入10ul接种物。斐济球腔菌、大麦壳针孢(Septoria passerinii)、小麦壳针孢：这些真菌生长都很慢，所以如果将带有真菌菌丝体的一小块琼脂作为接种物，则很难评价结果。对于这些真菌，用金属棒将菌丝体磨碎于500ul PDB中并且向每个孔加入10ul接种物。
在2天和5天评价孔中真菌的生长。对一些生长缓慢真菌的生长在稍后日子评价，因为在2或5天进行评价是不可能的。通过由接种于990ul马铃薯葡萄糖培养液和10ul二甲基亚砜(DMSO)的真菌组成的对照比较来评价生长。使用另一个只由接种子PDB真菌组成的对照以确保DMSO不抑制真菌的生长。DMSO不影响任何所测试真菌，除Dreschslera portulacae注意到一些抑制之外。
显示抑制作用的任何真菌被再次测试。对于被重复的试验，新的原液用另一批次假霉素制成。注意假霉素B’和缩肽原液用第一次批材料再次制成，因为这些不包括在第二批次中。即使在添加最低水平假霉素情况下，这些真菌中的几个显示无生长，并在第三次用更低水平假霉素(2-0.0625ug/ml最终浓度假霉素)进行再测试。所测试的实际假霉素浓度为2、1、0.5、0.25、0.125和0.0625ug/ml。A-PO4和A-FB分别为假霉素A的磷酸盐和游离碱。
表2：2天结果-指示浓度是导致无生长的化合物最低水平(ug/ml)。NI，无抑制作用；p(部分的)，至少50％抑制；-，没有测出。如果试验的次数大于1，那么对真菌进行的试验次数在圆括号里注明。对于几个生长缓慢的真菌，在观察前过去的天数(如果与2天不同)被注明。
 假霉素-   A-PO<sub>4</sub>   A-FB   B   B’   C   C’
 向日葵链格孢(2x)   25   25   NI   25   p在50   p在50
 丝囊霉(2x)   50   NI   p在50   25   25   25
 麦根腐平脐蠕孢   NI   NI   NI   NI   NI   NI
 葱腐葡萄孢(2x)   50   NI   NI   NI   NI   NI
 炭色旋孢霉   NI   NI   NI   NI   NI   NI
 蒂腐色二孢   NI   NI   NI   NI   NI   NI
 Drechslera portulacae(3x)   0.06   0.25   0.06   0.12   0.06   0.05
 Drechslera teres   NI   NI   NI   NI   NI   NI
 Drechslera tritici-repentis(2x)   50   25   50   50   50   50
 燕麦镰孢   NI   NI   NI   NI   NI   NI
 大刀镰孢   NI   NI   NI   NI   NI   NI
 古巴尖孢镰孢(Fusariumoxysporum cubense)   NI   NI   NI   NI   NI   NI
 茄病镰孢   NI   p在50   p在50   NI   p在50   NI
 白地霉(3x)   12.5   3.12   1.56   25   3.12   1.56
 链核盘菌(2x)   12.5   6.25   3.13   25   6.25   3.12
 斐济球腔菌(番蕉叶斑病)(7天，3x)   1   0.5   0.5   0.5   1.56   1.56
 斐济球腔菌(8088/88)(7天，3x)   0.12   0.25   0.06   0.5   0.125   0.125
 娄地青霉(3x)   0.5   1   0.5   1.56   1.56   1.56
 微孢拟盘孢(Pestalotiopsismicrospora)NE-32   p在50   p在50   p在50   NI   NI   NI
 Phoma chrysamthecola   -   -   -   -   -   -
 玉蜀黍叶点霉   p在50   p在50   50   p在50   p在50   p在50
 仙人掌疫霉(Phytophthoracactorum)   NI   NI   NI   NI   NI   NI
 肉桂疫霉(Phytophthoracinnemani)   NI   NI   NI   NI   NI   NI
 寄生疫霉(Phytophthora parasitica)   NI   NI   NI   NI   NI   NI
 终极疫霉(Phytophthora ultimum)   NI   NI   NI   NI   NI   NI
 茄属丝核菌(2x)   6.25   6.25   6.25   6.25   25   p在50
 油菜核盘菌(2x)   NI   NI   p在50   NI   NI   50
 大麦壳针孢(3x)   0.125   0.06   0.06   0.5   0.06   0.06
 小麦壳针孢(3x)   0.25   0.25   0.06   0.5   0.125   0.125
 Stagonospora nodorum   NI   NI   NI   NI   NI   NI
 Tapesia acuformis(2x)   50   NI   NI   NI   NI   NI
 Tapesia yallundae(2x)   25   12.5   25   6.25   25   6.25
 玉蜀黍黑粉菌(3x)   0.5   1   0.5   1.56   0.25   0.25
 大丽花轮枝孢(2x)   p在50   50   25   NI   25   p在50
表3：5天结果-指示浓度是导致无生长的化合物最低水平(ug/ml)。
NI，无抑制作用；p(部分的)，至少50％抑制；-，没有测出(生长缓慢)。如果试验的次数大于1，那么对真菌进行的试验次数在圆括号里注明。对于几个生长缓慢的真菌，在观察前过去的天数(如果与5天不同)被注明。
  假霉素-   A-PO<sub>4</sub>   A-FB   B   B’   C   C’
  向日葵链格孢(2x)   25   25   50   25   NI   NI
  丝囊霉(2x)   p在50   NI   50   NI   50   p在50
  麦根腐平脐蠕孢   NI   NI   NI   NI   NI   NI
  葱腐葡萄孢(2x)   p在50   NI   NI   NI   NI   NI
  炭色旋孢霉   NI   NI   NI   NI   NI   NI
  蒂腐色二孢   NI   NI   NI   NI   NI   NI
  Drechslera portulacae(3x，9天)   0.06   0.25   0.06   0.25   0.06   0.5
  Drechslera teres   NI   NI   NI   NI   NI   NI
  Drechslera tritici-repentis   p在50   NI   p在50   p在50   NI   NI
  燕麦镰孢   NI   NI   NI   NI   NI   NI
  大刀镰孢   NI   NI   NI   NI   NI   NI
  古巴尖孢镰孢   NI   NI   NI   NI   NI   NI
  茄病镰孢   NI   NI   NI   NI   NI   NI
  白地霉(3x)   6.25   6.25   3.12   25   25   6.25
  链核盘菌(2x)   12.5   12.5   6.25   25   12.5   6.25
  斐济球腔菌(香蕉叶斑病)(3x，21天)   1   1   1   1   1.56   1.56
  斐济球腔菌(8088/88)(3x，21天)   0.25   0.25   0.12   1   0.25   0.25
  娄地青霉(3x)   3.12   3.12   6.25   1.56   12.5   p在50
  微孢拟盘孢NE-32   NI   NI   p在50   NI   NI   NI
  Phoma chrysamthecola   NI   p在50   p在50   p在50   NI   NI
  玉蜀黍叶点霉   NI   NI   50   NI   NI   NI
  寄生疫霉   NI   NI   NI   NI   NI   NI
  肉桂疫霉   NI   NI   NI   NI   NI   NI
  终级疫霉   NI   NI   NI   NI   NI   NI
  仙人掌疫霉   NI   NI   NI   NI   NI   NI
  茄属丝核菌(2x)   12.5   50   50   6.25   p在50   p在50
  油菜核盘菌(2x)   NI   NI   NI   NI   NI   p在50
  小麦壳针孢(3x)   0.25   0.25   0.06   0.5   0.25   0.25
  大麦壳针孢(3x)   0.12   0.06   0.06   0.5   0.06   0.06
  Stagonospora nodorum   NI   NI   NI   NI   NI   NI
  Tapesia acuformis(2x)   50   NI   NI   NI   NI   NI
  Tapesia yallundae(2x)   50   25   NI   50   NI   NI
  玉蜀黍黑粉菌(3x)   1   1   0.5   3.12   0.25   0.25
  大丽花轮枝孢(2x)   p在50   p在50   p在50   NI   p在50   p在50
以上试验的回顾显示一种或几种假霉素对所测试真菌抑制最好，而不是所有被测试化合物在相同试验方式都产生应答。即使初步试验的假霉素最低浓度1.56ug/ml，六个真菌显示无生长。这些真菌在甚至更低浓度假霉素情况下被再次测试。例如，即使在0.0625ug/ml假霉素A(PO4)、B和C(9天)情况下，Dreschslera portulacae显示无生长。斐济球腔菌的两个不同分离物对低剂量假霉素的应答不同。香蕉叶斑病分离物似乎被每个下至～1ug/ml假霉素抑制。然而，8088/88分离物被假霉素B最好地抑制，浓度为0.125ug/ml培养21天无生长。小麦壳针孢和大麦壳针孢被所有假霉素强烈地抑制，当假霉素B浓度为0.0625ug/ml培养5天，小麦壳针孢显示无生长，而当假霉素A(游离碱)、B、C和C’浓度为0.0625ug/ml培养5天，大麦壳针孢显示无生长。假霉素C或C’对玉蜀黍黑粉菌的抑制最好，浓度为0.25ug/ml培养5天无生长。在所测试假霉素最高水平情况下，这些真菌中的一些显示只有较小的生长抑制(例如，向日葵链格孢、丝囊霉、葱腐葡萄孢、油菜核盘菌、Tapesia acuformis、Tapesia yallundae和大丽花轮枝孢)。对于几种真菌，一种和几种假霉素显示很好抑制作用，但不是所有的。这些包括茄属丝核菌，B’对其抑制最好(6.25ug/ml 5天无生长)；链核盘菌，B和C’对其抑制最好(6.25ug/ml 5天无生长)；白地霉，B对其抑制最好(3.12ug/ml 5天无生长)；和娄地青霉，B’对其抑制最好(1.56ug/ml 5天无生长)。
从这个数据可以得到结论，假霉素是一组选择性“天然”杀真菌剂。一些对收获后作物和其他植物品种引起感染的真菌对假霉素敏感(例如，青霉和地霉)。假霉素显示对斐济球腔菌(香蕉)有给人深刻印象的活性。初步制备物和纯化的材料在植物病害控制方面具有潜在作用。假霉素的大规模生产是切实可行的并且生产相对便宜。天然产物或许具有环境相容性，并且可能是安全的。
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Claims (10)

1.预防或治疗植物或作物受一种或多种球腔菌(Mycosphaerellasp.)属的子囊类真菌或其无性阶段壳针孢(Septoria sp.)或尾孢(Cercospora sp.)感染的方法，其包括将有效量的一种或多种假霉素组合物施用于所述植物或作物。
2.权利要求1的方法，其中所述真菌为斐济球腔菌(Mycosphaerella fijiensis)。
3.权利要求1或2的方法，其中所述假霉素是从植物伴生细菌丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)分离得到。
4.权利要求3的方法，其中所述假霉素选自假霉素A、假霉素A’、假霉素B、假霉素B’、假霉素C和假霉素C’。
5.权利要求1的方法，其中所述假霉素以水悬浮液、溶液或乳化液形式在1至100微克每毫升浓度范围施用于所述植物或作物。
6.权利要求1的方法，其中所述植物和作物选自香蕉、大蕉、向日葵、甜菜、大麦、洋葱、葡萄、马齿苋、小麦、番茄和玉米。
7.一种或多种假霉素组合物用于预防或治疗植物和作物的香蕉黑叶斑病。
8.权利要求7的应用，其中所述假霉素组合物包括从植物伴生细菌丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)分离得到的假霉素。
9.权利要求8的应用，其中所述假霉素选自假霉素A、假霉素A’、假霉素B、假霉素B’、假霉素C和假霉素C’。
10.权利要求7-9任一项的应用，其中假霉素组合物以水悬浮液、溶液或乳化液形式在1至100微克每毫升浓度范围施用于所述植物或作物。
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