La préparation de composés oméga-hydroxyliques ou oméga-carboxyliques dérivés de terpènes acycliques à partir des hydrocarbures correspondants, préparation qui s'effectue par exemple à l'aide d'une oxydation au moyen d'oxygène singulet ou de bioxyde de sélénium, conduit sous les conditions ordinaires de réaction à des mélanges de réaction et présente des problèmes en ce qui concerne la séparation des produits formés des réactifs toxiques utilisés. D'autre part, les terpènes à structure butadiénique sont, de par leur nature, particulièrement sensibles à l'oxydation et fournissent les produits désirés avec de bas rendements, notamment à cause de réactions de polymérisation et de décomposition. L'application de transformations microbiennes à un tel type de réaction appliquée à des substrats hydroxylés a été mise en pratique et a été décrite par exemple par H.-A.
Arfmann et al., Biocatalysis 1988, 2, 59-67.
De telles biotransformations se heurtent cependant à un problème majeur lorsqu'on désire généraliser le procédé. Les hydrocarbures employés comme substrats sont pour la plupart insolubles dans le milieu réactionnel et leur biotransformation s'accomplit avec des rendements particulièrement bas, voire la réaction n'a pas lieu.
La présente invention apporte une solution pratique et économiquement intéressante à ce problème. Elle a en effet pour objet un procédé qui consiste en la transformation microbienne de terpènes possédant une structure thiophénique, en particulier 2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophénique. De tels composés peuvent être aisément obtenus à partir des hydrocarbures terpéniques correspondants par réaction avec du dioxyde de soufre. Les composés oméga-hydroxyliques ou oméga-carboxyliques obtenus grâce au procédé de l'invention peuvent être utilisés en tant que produits de départ pour la préparation de composés constituant des matières premières utiles pour l'industrie de la parfumerie ou des arômes.
La présente invention consiste en un procédé pour la préparation de composés terpéniques oméga-hydroxy-2-méthyl-allyliques et/ou oméga-carboxy-2-méthyl-allyliques, lequel procédé est caractérisé en ce qu'on soumet à fermentation des bactéries ou des champignons en présence de substrats constitués par des composés comportant un groupe terminal isoprényle relié, soit directement, soit à travers une chaîne hydrocarbonée à l'atome de carbone en position 2- ou 3- d'un cycle 2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophénique ou 2,5-dihydro-3-méthyl-1,1-dioxothiophénique et qu'on isole les produits désirés du milieu de fermentation.
La présente invention a plus particulièrement pour objet un procédé pour la préparation de composés terpéniques de formule
EMI2.1
dans laquelle le symbole X désigne un reste -CH2OH ou un radical -COOH, Z représente un radical bivalent de structure
EMI2.2
n représente un indice de valeur 1 ou 2 et m est un nombre entier égal à zéro ou 1, et dans laquelle la ligne ondulée représente une liaison C-C de configuration cis ou trans par rapport au groupe X et dans laquelle enfin le radical Z peut être relié au carbone du cycle thiophénique à la position 2 (p = 1) ou, lorsque l'indice p vaut 0, à la position 3, lequel procédé est caractérisé en ce qu'on cultive une bactérie ou un champignon susceptible de promouvoir, dans un milieu nutritionnel approprié, une hydroxylation en position terminale ou, le cas échéant, une oxydation de la chaîne aliphatique d'un dérivé terpénique de formule
EMI2.3
dans laquelle le symbole Z et les indices m, n et p ont le sens indiqué pour la formule (I).
A titre de produits préférentiels définis à l'aide de la formule (II) figurent les composés suivants:
3-(4 min -méthyl-3 min -pentényl)-2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophène,
3-(3 min Z-4 min -8 min -diméthyl-nona-3 min ,7 min -diényl)-2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophène,
3-(3 min E-4 min ,8-diméthyl-nona-3 min ,7 min -diényl)-2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophène,
2-(3 min -méthyl-2 min -butényl)-3-méthyl-2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophène.
Selon le procédé de l'invention tel que défini plus haut, l'on obtient à partir des produits précités les composés oméga-hydroxylés suivants:
3-(3 min Z-4 min -méthyl-5 min -hydroxy-3 min -pentényl)-2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophène,
3-(3 min E-4 min -méthyl-5 min -hydroxy-3 min -pentényl)-2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophène,
2-(3 min -hydroxyméthyl-2 min Z-butényl)-3-méthyl-2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophène,
2-(3 min -hydroxyméthyl-2 min E-butényl)-3-méthyl-2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophène,
3-(3 min Z,7 min E-4 min ,8 min -diméthyl-9 min -hydroxy-nona-3 min ,7 min -diényl)-2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophène,
3-(3 min Z,7 min E-8 min -carboxy-4 min -méthyl-nona-3 min ,7 min -diényl)-2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophène,
3-(3 min E,7 min E,4 min ,8 min -diméthyl-9 min -hydroxy-nona-3 min ,7 min -diényl)-2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophène,
3-(3 min E,7 min E-8 min -carboxy-4 min -méthyl-nona-3 min ,7
min -diényl)-2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophène.
Lesdits composés représentent des produits de départ pour la préparation de produits utiles dans l'industrie de la parfumerie et celle des arômes. Par exemple, l'oxydation du 3-(3 min E,7 min E-4 min ,8 min -diméthyl-9 min -hydroxy-nona-3 min ,7 min -diényl)-2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophène en l'aldéhyde correspondant, suivie d'une décomposition thermique conduit à la formation d'alpha-sinensal, ingrédient intéressant l'industrie des arômes. Il en est de même avec le 3-(3 min E,7 min E-8 min -carboxy-4 min -méthyl-nona-3 min ,7 min -diényl)-2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophène. Dans ce cas, on réduit le groupe carboxylique en groupe aldéhydique selon les méthodes usuelles et l'on effectue une décomposition thermique.
A titre de bactérie ou de champignon capable de promouvoir le procédé de l'invention on utilise ceux appartenant aux familles des Absidia, Bacillus, Corynespora, Cunninghamella, Mucor, Mycobacterium, Nocardia, Pseudomonas, Rhizopus, Rhodococcus et Spreptomyces. A titre préférentiel on utilise les souches suivantes:
Absidia coerulea (particulièrement IFO 4011)
Bacillus cereus (particulièrement DSM 626)
Corynespora cassiicola (particulièrement DSM 62475)
Cunninghamella blakesleeana (particulièrement DSM 1906)
Cunninghamella elegans (particulièrement DSM 63299)
Mucor indicus (particulièrement CBS 22629)
Mycobacterium fortuitum (particulièrement DSM 43074)
Mycobacterium smegmatis (particulièrement DSM 43277)
Nocardia gardneri (particulièrement DSM 43020)
Nocardia orientalis (particulièrement DSM 40040
Nocardia sp. (particulièrement DSM 43130 ou DSM 40350)
Pseudomonas lapsa (particulièrement DSM 50274)
Rhizopus arrhizus (particulièrement ATCC 10260)
Streptomyces albus (particulièrement DSM 40763)
Streptomyces anandii (particulièrement DSM 40535)
Streptomyces chrestomyceticus (particulièrement DSM 40545)
Streptomyces lavendulae (particulièrement DSM 40708)
Streptomyces sp.
(particulièrement DSM 40475)
ou toute souche analogue ou dérivée de celles-ci.
DSM: Deutsche Sammlung von Mikroorganismen
ATCC: American Type Culture Collection
CBS: Centraalbureau voor Schimmelkultur
IFO: Institute for Fermentation, Osaka
Le milieu de culture ainsi que l'ensemencement s'effectuent selon des méthodes courantes, par exemple suivant la méthode décrite par H.-A. Arfmann et al., Biocatalysis 1988, 2, 59-67. Il en est de même en ce qui concerne les conditions de fermentation.
L'extraction et la purification des produits désirés ont lieu par filtration du milieu de culture et du mycélium suivie d'une extraction du milieu de culture à l'aide d'un solvant organique, par exemple l'acétate d'éthyle. Après évaporation et concentration, les résidus sont chromatographiés sur une colonne de silice par élution à l'aide de n-hexane/acétate d'éthyle ou de tout mélange analogue.
C'est ainsi qu'on a préparé une préculture par fermentation (48-72 h à 27 DEG C; 140 t.p.m.) du microorganisme choisi après ensemencement à l'aide d'un gélose d'un milieu stérile constitué par une composition de 10 g de glucose, 20 g d'extrait de malt, 10 g de peptone, 3 g d'extrait de levure dans 1000 ml d'eau. Le pH de la composition est ajusté à 5,6.
Cette préculture a été ensuite versée dans des conditions stériles dans une fiole de 1 I contenant 200 ml de milieu nutritionnel composé comme indiqué plus haut. La fermentation a lieu sur la culture résultante par agitation pendant 24-48 h à température ambiante. Le substrat constitué par le dérivé terpénique de formule (Il) choisi est ensuite versé dans le milieu de fermentation en solution dans un solvant organique inerte approprié, par exemple dans le diméthylformamide. Les exemples suivants décriront le procédé de l'invention de manière plus détaillée.
La fermentation peut être effectuée en fiole agitée ou dans un fermenteur ou bioréacteur.
Les composés thiophéniques de formules (II) peuvent être préparés par traitement avec de l'anhydride sulfureux d'hydrocarbures terpéniques tel l'ocimène, le myrcène ou le farnesène.
L'exemple suivant illustre l'invention de manière plus détaillée. Les températures sont indiquées en degrés centigrades et les abréviations ont le sens usuel dans l'art.
Exemple
Fermentation en fiole
On a préparé une préculture du microorganisme choisi suivant la méthode décrite plus haut. Le substrat a été dissous dans du diméthylformamide à raison de 50 mg/ml, et il a été versé dans le milieu de culture dans une proportion de 0,5 g/l.
Le déroulement de la transformation a été suivi par chromatographie sur couche mince. A cet effet 1 ml d'un échantillon stérile a été traité avec 0,2 ml d'acétate d'éthyle, agité 2 mn, puis centrifugé pendant 2 mn également. 20 mu I de la partie surnageante ont été déposés sur des plaques de HPTLC [SiO2; Si-60; Merck] et développés avec un mélange 95:5 de dichlorométhane et acétone, traités avec un réactif à l'anisaldéhyde (0,6 ml d'anisaldéhyde, 1 ml de H2SO4 et 50 ml d'acide acétique) et chauffés 2 mn à 100 DEG . Les produits d'oxydation ont été ainsi rendus visibles par l'apparition de tâches colorées.
Le traitement suivant d'isolation des produits obtenus a été effectué par séparation du mycélium, extraction du liquide surnageant avec de l'acétate d'éthyle (3 fois), et concentration sous vide des extraits réunis. Ces opérations sont suivies d'une séparation par chromatographie sur colonne remplie (SiO2; Si-60; 40-63 mu m; Merck) et élution avec un mélange de n-hexane et acétate d'éthyle (95:5) dont le rapport final est de 6:4.
Fermentation dans un bioréacteur
Un milieu constitué par 10 I d'un mélange contenant 0,1% de glucose, 0,2% de peptone, 0,5% d'extrait de malt et 0,1% d'extrait de levure a été inoculé avec une culture de Nocardia sp. DSM 43130 dans un bioréacteur équipé d'un système d'agitation efficace (BIO, Giovanola).
La fermentation a lieu pendant 24 h à 27 DEG , avec une agitation de 100 t.p.m. et 0,1 vvm d'aération.
Le substrat, constitué par l'un des composés de formule (II) [5 ml] a été ajouté au milieu de fermentation en solution dans 20 ml d'éthanol.
Après conversion complète, le contenu du fermenteur a été extrait avec 3 fractions de 10 l chacune d'acétate d'éthyle et la phase organique a été réduite à environ 10 l par évaporation, séchée sur Na2SO4 et concentrée. Le résidu obtenu a été fractionné par chromatographie sur colonne.
Suivant l'une des méthodes générales indiquées plus haut, on a effectué la biotransformation d'une série de composés terpéniques thiophéniques obéissant à la formule (II). Les résultats obtenus sont résumés dans le tableau ci-dessous.
<tb><TABLE> Columns=5
<tb>Head Col 02 AL=L: Substrat (II)
(quantité)
<tb>Head Col 03 AL=L: Produit (I)
(quantité)
<tb>Head Col 04 AL=L: Microorganisme
<tb>Head Col 05 AL=L: Temps de
fermentation [h]
<tb> <SEP>1. <SEP>n=2; m=p=0
200 mg <SEP>X=CH2OH; n=2; m=p=0
(Z)-isomère 70 mg
(E)-isomère 5,0 mg <SEP>Nocardia sp.
DSM 43130 <SEP>143
<tb> <SEP>2. <SEP>n=2; m=p=0
5,0 g <SEP>X=CH2OH; n=2; m=p=0
(Z)-isomère 1972 mg
(E)-isomère 246 mg <SEP>Nocardia sp.
DSM 43130 <SEP>96
<tb> <SEP>3. <SEP>n=2; m=p=0
150 mg <SEP>X=CH2OH; n=2; m=p=0
(E)-isomère 89 mg <SEP>Absidia coeruleaI
FO 4011
<tb> <SEP>4.
<SEP>n=2; m=p=0
200 mg <SEP>X=CH2OH; n=2; m=p=0
(Z)-isomère 10 mg <SEP>Cunninghamella blakesleeana DSM 1906 <SEP>118
<tb> <SEP>5. <SEP>n=2; m=p=0
200 mg <SEP>X=CH2OH; n=2; m=p=0
(Z)-isomère 52 mg
(E)-isomère 43 mg <SEP>Spreptomyces albus
DSM 40763 <SEP>95
<tb> <SEP>6. <SEP>n=2; m=p=0
200 mg <SEP>X=CH2OH; n=2; m=p=0
(Z)-isomère 3 mg
(E)-isomère 20 mg <SEP>Nocardia sp.
DSM 40350 <SEP>175
<tb> <SEP>7. <SEP>n=2; m=p=0
140 mg <SEP>X=CH2OH; n=2; m=p=0
(Z)-isomère 15 mg
(E)-isomère 45 mg <SEP>Mucor indicus
CBS 22629 <SEP>50
<tb> <SEP>8. <SEP>m=0; n=p=1
200 mg <SEP>X=CH2OH; n=p=1; m=0
(Z)-isomère 24 mg
(E)-isomère 48 mg <SEP>Spreptomyces anandii
DSM 40535
<tb> <SEP>9. <SEP>m=0; n=p=1
200 mg <SEP>X=CH2OH; n=p=1; m=0
(Z)-isomère 11 mg
(E)-isomère 61 mg <SEP>Corynespora cassiicola
DSM 62475
<tb> <SEP>10.
<SEP>m=1; n=2; p=0
mélange (E)+(Z)
isomères 200 mg <SEP>X=CH2OH; m=1; n=2; p=0
(3 min Z,7 min E) isomère 10 mg <SEP>Mycobacterium smegmatis
DSM 43277 <SEP>23
<tb> <SEP>11. <SEP>m=1; n=2; p=0
mélange (E)+(Z)
isomères 200 mg <SEP>X=COOH; m=1; n=2; p=0
(3 min Z,7 min E) isomère 17 mg <SEP>Cunninghamella elegans
DSM 63299 <SEP>67
<tb> <SEP>12. <SEP>m=1; n=2; p=0
mélange (E)+(Z)
isomères 200 mg <SEP>X=CH2OH; m=1; n=2; p=0
(3 min Z,7 min E) isomère 25 mg
(3 min E,7 min E) isomère 25 mg <SEP>Nocardia sp.
DSM 43130 <SEP>161
<tb> <SEP>13. <SEP>m=1; n=2; p=0
mélange (E)+(Z)
isomères 200 mg <SEP>X=COOH; m=1; n=2; p=0
(3 min E,7 min E) isomère
+(3 min Z,7 min E) isomère 45 mg
X=CH2OH; m=1; n=2; p=0
(3 min E,7 min E) isomère
+(3 min Z,7 min E) isomère 45 mg <SEP>Pseudomonas lapsa
DSM 50274 <SEP>63
<tb></TABLE>
Les caractéristiques analytiques des produits obtenus étaient les suivantes.
Produit de formule (I)
X=CH2OH; n=2; m=p=0
isomère (Z):
<1>H RMN (CDCl3): 5,72(1H, s(br), 4-H), 5,23(1H, m, 3 min -H), 4,09(2H, s, 6 min -H), 3,81(2H, s(br), 2-H), 3,71(2H, s(br), 5-H), 2,26(4H, m, 4-H, 2 min -H), 1,79(3H, s, 5 min -H). <1><3>C RMN (CDCl3): s 138,0(C-3), s 136,1(c-4 min ), d 125,5(C-3 min ), d 117,4(C-4), t 60,6(C-6 min ), t 57,5(C-2), t 56,8(C-5), t 32,9(C-1 min ), t 24,4(C-2 min ), q 21,0(C-5 min ).
isomère (E):
<1>H RMN (CDCl3): 5,72(1H, s(br), 4-H), 5,36(1H, m, 3 min -H), 3,98(2H, s, 5 min -H), 3,81(2H, s(br), 2-H), 3,71(2H, s(br), 5-H), 2,26(4H, m, 4-H, 2 min -H), 1,66(3H, s, 6 min -H). <1><3>C RMN (CDCl3): s 138,2(C-3), s 136,5(C-4 min ), d 123,4(C-3 min ), d 117,4(C-4), t 68,4(C-5 min ), t 57,7(C-2), t 57,0(C-5), t 32,6(C-1 min ), t 24,9(C-2 min ), q 13,7(C-6 min ).
Par traitement thermique de ce composé on a obtenu le 8-hydroxy-myrcène qui peut être employé pour la préparation de zoapatanol, composé présentant une activité biologique (voir brevets US 4 177 194 et 4 237 054). Ce composé est par ailleurs une phéromone du Dendroctonus ponderosae (voir J. Am. Chem. Soc. 1969, 91, 3281-89).
X=CH2OH; n=p=1; m=0
isomère (Z):
[alpha]D=-8,3 DEG (c=1,00; CHCl3);
<1>H RMN (CDCl3): 5,72(1H, m, 4-H), 5,25(1H, t, J=7 Hz, 2 min -H), 4,17(1H, d, J=16 Hz, 5 min a-H), 4,07(1H, d, J=16 Hz, 5 min b-H), 3,74(1H, d(br), J=12 Hz, 5a-H), 3,62(1H, d(br), J=12 Hz, 5b-H), 3,59(1H, m, 2-H), 2,68(2H, m, 1 min -H), 1,88(3H, s, 1 min min -H), 1,84(3H, s, 4 min -H). <1><3>C RMN (CDCl3): s 139,3(C-3 min ), s 137,8(C-3), d 120,9(C-2 min ), d 117,6(C-4), d 67,5(C-2), t 61,5(C-5 min ), t 56,1(C-5), t 25,6(C-1 min ), q 21,9(C-4 min ), q 18,0(C-1 min min ).
La décomposition thermique de ce composé conduit par élimination de SO2 au 9-hydroxy-ocimène, composé intéressant l'industrie des arômes (voir J. Agric. Food Chem. 1988, 36(3), 569-73).
isomère (E):
[alpha]D=-3,0 DEG (c=1,00; CHCl3);
<1>H RMN (CDCl3): 5,70(1H, m, 4-H), 5,51(1H, t, J=6,5 Hz, 2 min -H), 4,07(1H, d, J=11 Hz, 4 min a-H), 3,99(1H, d, J=11 Hz, 4 min b-H), 3,75(1H, m, 5a-H), 3,66(1H, m, 5b-H), 3,58(1H, t, J=6,5 Hz, 2-H), 2,62(2H, t, J=6,5 Hz, 1 min -H), 1,87(3H, s, 1 min min -H), 1,72(3H, s, 5 min -H). <1><3>C RMN (CDCl3): s 138,7(C-3), s 138,4(C-3 min ), d 119,2(C-2 min ), d 117,4(C-4), t 68,2(C- 4 min ), d 67,1(C-2), t 55,8(C-5), t 25,9(C-1 min ), q 18,2(C-1 min min ), q 14,0(C-5 min ).
La décomposition thermique de ce composé conduit à la formation du 8-hydroxy-ocimène, une substance aromatisante du raisin Riesling (J. Agric. Food Chem. 1988, 36(3), 569-73).
X=CH2OH; m=1; n=2; p=0
isomère (3 min Z,7 min E):
<1>H RMN (CDCl3): 5,71(1H, m, 4-H), 5,42 (1H, t, J=7 Hz, 7 min -H), 5,11(1H, t, J=7 Hz, 3 min -H), 4,01(2H, s, 9 min -H), 3,82(2H, m, 5-H), 3,70(2H, s, 2-H), 2,12(4H, m, 1 min -H, 2 min -H), 2,1(4H, m, 5 min -H, 6 min -H), 1,71(3H, s, 10 min -H), 1,69(3H, s, 11 min -H).
<1><3>C RMN (CDCl3): s 138,4(C-3), s135,0(C-8 min ), d 125,2(C-7 min ), d 123,4(C-3 min ), d 117,1(C-4), t 68,7(C-9 min ), t 57,8(C-2), t 57,0 (C-5), t 33,3(C-1 min ), t 31,6(C-5 min ), t 25,2(C-2 min , C-6 min ), q 23,3(C-11 min ), q 13,7(C-10 min ).
isomère (3 min E,7 min E):
<1>H RMN (CDCl3): 5,69(1H, m, 4-H), 5,40(1H, m, 7 min -H), 5,14(1H, m, 3 min -H), 4,00(2H, s, 9 min -H), 3,81(2H, m, 5-H), 3,72(2H, s, 2-H), 2,2-2,0(8H, m, 1 min -H, 2 min -H, 5 min -H, 6 min -H), 1,71(3H, s, 10 min -H), 1,62(3H, s, 11 min -H).
L'oxydation de ce composé en aldéhyde suivant les méthodes usuelles d'oxydation d'un alcool primaire, suivie de décomposition thermique, conduit à la formation d'alpha-sinensal.
X=COOH; m=1; n=2; p=0
isomère (3 min Z,7 min E):
<1>H RMN (CDCl3): 6,76(1H, t, J=7 Hz, 7 min -H), 5,70(1H, m, 4-H), 5,13(1H, t, J=7 Hz, 3 min -H), 3,81(2H, m, 5-H), 3,70(2H, s, 2-H), 2,28(2H, dt, J=7,7 Hz, 6 min -H), 2,19(2H, t, J=7 Hz, 5 min -H), 2,19(4H, m, 1 min -H, 2 min -H), 1,83(3H, s, 10 min -H), 1,72(3H, s, 11 min -H).
<1><3>C RMN (CDCl3): s 172,4(C-9 min ), d 144,2(C-7 min ), s 138,3(C-3), s 135,4(C-4 min ), s127,3(C-8 min ), d 124,4(C-3 min ), d 117,2(C-4), t 57,9(C-2), t 57,1(C-5), t 33,1(C-1 min ), t 30,4(C-5 min ), t 27,0(C-6 min ), q 23,1(C-11 min ), t 22,7(C-2 min ), l 12,1(C-10 min ).
isomère (3 min E,7 min E):
<1>H RMN (CDCl3): 6,86(1H, t, J=7 Hz, 7 min -H), 5,68(1H, m, 4-H), 5,23(1H, m, 3 min -H), 3,80(2H, m, 5-H), 3,68(2H, s, 2-H), 2,31(2H, dt, J=7,7 Hz, 6 min -H), 2,2-2,0(6H, m, 1 min -H, 2 min -H, 5 min -H), 1,85(3H, s, 10 min -H), 1,63(3H, s, 11 min -H).
La réduction de cet acide au moyen de techniques usuelles de réduction d'un groupe carboxylique en aldéhyde, suivie de décomposition thermique, conduit à la formation d'alpha-sinensal.
Les composés thiophéniques de formule (II) utilisés comme produits de départ dans le procédé de l'invention peuvent être préparés comme indiqué ci-après.
Composé de formule (II)
n=2; m=p=0:
Ce composé a été obtenu comme décrit dans la demande de brevet allemande DE-AS 1 117 563.
Eb. 110 DEG /0,01 Torr.
m=0; n=p=1:
Un mélange de 82 g d'ocimène, essentiellement sous sa forme cis, 1 g d'hydroquinone et 109 g de SO2 a été chauffé dans un tube fermé à 70 DEG pendant 2h. Après dégagement de l'anhydride sulfureux en excès le mélange de réaction a été distillé pour fournir le produit désiré ayant Eb. 120 DEG /0,1 Torr.
m=1; n=2; p=0:
A. Un mélange de (Z)-nérolidol (40 g) et 80 ml de pyridine a été chauffé à 70 DEG et traité avec 20 ml de POCl3, lequel a été ajouté goutte à goutte sous agitation. Une fois l'addition terminée, on a laissé le mélange réagir pendant 5 mn à 70 DEG , puis on a refroidi et on a ajouté 40 ml de pyridine et 1 l d'éther de pétrole 30-50.
Le mélange de réaction a été versé précautionneusement sur de la glace et a été lavé avec 3 fractions d'eau. Après séparation et concentration on a distillé dans un appareil de distillation comportant une tête courte.
On a obtenu une fraction ayant Eb. env. 55 DEG /0,3 Torr.
B. 30 g de (E)-nérolidol ont été traités comme indiqué ci-dessus pour l'isomère (Z). L'isomère (E) du farnesène obtenu avait Eb. env. 65 DEG /0,4 Torr.
C. Les deux composés ainsi préparés ont été traités séparément avec un excès de SO2 pendant 2 h à 70 DEG dans un tube fermé comme indiqué plus haut pour la préparation du myrcène-sulfone. Les deux échantillons de farnésyl-sulfone obtenus avaient Eb. 140 DEG /0,1 Torr.
The preparation of omega-hydroxyl or omega-carboxylic compounds derived from acyclic terpenes from the corresponding hydrocarbons, preparation which is carried out for example using an oxidation by means of singlet oxygen or selenium dioxide, carried out under ordinary reaction conditions to reaction mixtures and presents problems with regard to the separation of the formed products from the toxic reagents used. On the other hand, terpenes with butadienic structure are, by their nature, particularly sensitive to oxidation and provide the desired products with low yields, in particular because of polymerization and decomposition reactions. The application of microbial transformations to such a type of reaction applied to hydroxylated substrates has been put into practice and has been described for example by H.-A.
Arfmann et al., Biocatalysis 1988, 2, 59-67.
However, such biotransformations come up against a major problem when it is desired to generalize the process. The hydrocarbons used as substrates are for the most part insoluble in the reaction medium and their biotransformation is carried out with particularly low yields, or even the reaction does not take place.
The present invention provides a practical and economically advantageous solution to this problem. It indeed relates to a process which consists in the microbial transformation of terpenes having a thiophenic structure, in particular 2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophenic. Such compounds can be readily obtained from the corresponding terpene hydrocarbons by reaction with sulfur dioxide. The omega-hydroxyl or omega-carboxylic compounds obtained by the process of the invention can be used as starting materials for the preparation of compounds constituting raw materials useful for the perfume or flavoring industry.
The present invention consists of a process for the preparation of omega-hydroxy-2-methyl-allylic and / or omega-carboxy-2-methyl-allylic terpene compounds, which process is characterized in that bacteria or fungi in the presence of substrates consisting of compounds comprising an isoprenyl terminal group linked, either directly or through a hydrocarbon chain to the carbon atom in position 2- or 3- of a 2,5-dihydro-1 ring , 1-dioxo-thiophenic or 2,5-dihydro-3-methyl-1,1-dioxothiophenic and that the desired products are isolated from the fermentation medium.
The present invention more particularly relates to a process for the preparation of terpene compounds of formula
EMI2.1
in which the symbol X denotes a residue -CH2OH or a radical -COOH, Z represents a bivalent radical of structure
EMI2.2
n represents an index of value 1 or 2 and m is an integer equal to zero or 1, and in which the wavy line represents a CC bond of cis or trans configuration with respect to group X and in which finally the radical Z can be linked to the carbon of the thiophenic cycle at position 2 (p = 1) or, when the index p is 0, at position 3, which process is characterized in that a bacterium or a fungus capable of promoting is cultivated in an appropriate nutritional medium, hydroxylation in the terminal position or, where appropriate, oxidation of the aliphatic chain of a terpene derivative of formula
EMI2.3
in which the symbol Z and the indices m, n and p have the meaning indicated for the formula (I).
As preferred products defined using formula (II) appear the following compounds:
3- (4 min -methyl-3 min -pentenyl) -2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophene,
3- (3 min Z-4 min -8 min -dimethyl-nona-3 min, 7 min -dienyl) -2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophene,
3- (3 min E-4 min, 8-dimethyl-nona-3 min, 7 min-dienyl) -2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophene,
2- (3 min -methyl-2 min -butenyl) -3-methyl-2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophene.
According to the process of the invention as defined above, the following omega-hydroxylated compounds are obtained from the abovementioned products:
3- (3 min Z-4 min -methyl-5 min -hydroxy-3 min -pentenyl) -2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophene,
3- (3 min E-4 min -methyl-5 min -hydroxy-3 min -pentenyl) -2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophene,
2- (3 min -hydroxymethyl-2 min Z-butenyl) -3-methyl-2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophene,
2- (3 min -hydroxymethyl-2 min E-butenyl) -3-methyl-2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophene,
3- (3 min Z, 7 min E-4 min, 8 min -dimethyl-9 min -hydroxy-nona-3 min, 7 min -dienyl) -2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophene,
3- (3 min Z, 7 min E-8 min -carboxy-4 min -methyl-nona-3 min, 7 min -dienyl) -2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophene,
3- (3 min E, 7 min E, 4 min, 8 min -dimethyl-9 min -hydroxy-nona-3 min, 7 min -dienyl) -2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophene,
3- (3 min E, 7 min E-8 min -carboxy-4 min -methyl-nona-3 min, 7
min -dienyl) -2,5-dihydro-1,1-dioxo-thiophene.
Said compounds represent starting materials for the preparation of products useful in the perfume and flavoring industries. For example, the oxidation of 3- (3 min E, 7 min E-4 min, 8 min -dimethyl-9 min -hydroxy-nona-3 min, 7 min -dienyl) -2,5-dihydro-1, 1-dioxo-thiophene to the corresponding aldehyde, followed by thermal decomposition leads to the formation of alpha-sinensal, an ingredient of interest to the flavor industry. It is the same with 3- (3 min E, 7 min E-8 min -carboxy-4 min -methyl-nona-3 min, 7 min -dienyl) -2,5-dihydro-1,1-dioxo -thiophene. In this case, the carboxylic group is reduced to an aldehyde group according to the usual methods and thermal decomposition is carried out.
As bacteria or fungus capable of promoting the process of the invention, those belonging to the families of Absidia, Bacillus, Corynespora, Cunninghamella, Mucor, Mycobacterium, Nocardia, Pseudomonas, Rhizopus, Rhodococcus and Spreptomyces are used. The following strains are preferably used:
Absidia coerulea (particularly IFO 4011)
Bacillus cereus (particularly DSM 626)
Corynespora cassiicola (particularly DSM 62475)
Cunninghamella blakesleeana (particularly DSM 1906)
Cunninghamella elegans (particularly DSM 63299)
Mucor indicus (especially CBS 22629)
Mycobacterium fortuitum (particularly DSM 43074)
Mycobacterium smegmatis (particularly DSM 43277)
Nocardia gardneri (particularly DSM 43020)
Nocardia orientalis (particularly DSM 40040
Nocardia sp. (particularly DSM 43130 or DSM 40350)
Pseudomonas lapsa (particularly DSM 50274)
Rhizopus arrhizus (particularly ATCC 10260)
Streptomyces albus (particularly DSM 40763)
Streptomyces anandii (particularly DSM 40535)
Streptomyces chrestomyceticus (particularly DSM 40545)
Streptomyces lavendulae (particularly DSM 40708)
Streptomyces sp.
(particularly DSM 40475)
or any analogous strain or derived therefrom.
DSM: Deutsche Sammlung von Mikroorganismen
ATCC: American Type Culture Collection
CBS: Centraalbureau voor Schimmelkultur
IFO: Institute for Fermentation, Osaka
The culture medium and the seeding are carried out according to current methods, for example according to the method described by H.-A. Arfmann et al., Biocatalysis 1988, 2, 59-67. The same applies to the fermentation conditions.
The extraction and purification of the desired products take place by filtration of the culture medium and the mycelium followed by an extraction of the culture medium using an organic solvent, for example ethyl acetate. After evaporation and concentration, the residues are chromatographed on a silica column by elution using n-hexane / ethyl acetate or any similar mixture.
Thus, a preculture was prepared by fermentation (48-72 h at 27 DEG C; 140 rpm) of the microorganism chosen after inoculation using an agar of a sterile medium constituted by a composition of 10 g of glucose, 20 g of malt extract, 10 g of peptone, 3 g of yeast extract in 1000 ml of water. The pH of the composition is adjusted to 5.6.
This preculture was then poured under sterile conditions into a 1 I flask containing 200 ml of nutritional medium composed as indicated above. Fermentation takes place on the resulting culture by shaking for 24-48 h at room temperature. The substrate constituted by the terpene derivative of formula (II) chosen is then poured into the fermentation medium in solution in a suitable inert organic solvent, for example in dimethylformamide. The following examples will describe the process of the invention in more detail.
Fermentation can be carried out in a stirred flask or in a fermenter or bioreactor.
The thiophenic compounds of formulas (II) can be prepared by treatment with sulfur dioxide of terpene hydrocarbons such as ocimene, myrcene or farnesene.
The following example illustrates the invention in more detail. The temperatures are indicated in degrees centigrade and the abbreviations have the usual meaning in art.
Example
Fermentation in vial
A preculture of the microorganism chosen was prepared according to the method described above. The substrate was dissolved in dimethylformamide at a rate of 50 mg / ml, and it was poured into the culture medium in a proportion of 0.5 g / l.
The progress of the transformation was followed by thin layer chromatography. For this purpose 1 ml of a sterile sample was treated with 0.2 ml of ethyl acetate, stirred for 2 min, then centrifuged for 2 min also. 20 mu I of the supernatant were deposited on HPTLC plates [SiO2; Si-60; Merck] and developed with a 95: 5 mixture of dichloromethane and acetone, treated with an anisaldehyde reagent (0.6 ml of anisaldehyde, 1 ml of H2SO4 and 50 ml of acetic acid) and heated for 2 min to 100 DEG. The oxidation products were thus made visible by the appearance of colored spots.
The following treatment for isolating the products obtained was carried out by separation of the mycelium, extraction of the supernatant liquid with ethyl acetate (3 times), and concentration in vacuo of the combined extracts. These operations are followed by separation by chromatography on a filled column (SiO2; Si-60; 40-63 μm; Merck) and elution with a mixture of n-hexane and ethyl acetate (95: 5) whose ratio final is 6: 4.
Fermentation in a bioreactor
A medium consisting of 10 I of a mixture containing 0.1% glucose, 0.2% peptone, 0.5% malt extract and 0.1% yeast extract was inoculated with a culture of Nocardia sp. DSM 43130 in a bioreactor equipped with an efficient agitation system (BIO, Giovanola).
Fermentation takes place for 24 hrs at 27 DEG, with stirring of 100 rpm. and 0.1 vvm of ventilation.
The substrate, consisting of one of the compounds of formula (II) [5 ml] was added to the fermentation medium in solution in 20 ml of ethanol.
After complete conversion, the content of the fermenter was extracted with 3 fractions of 10 l each of ethyl acetate and the organic phase was reduced to about 10 l by evaporation, dried over Na2SO4 and concentrated. The residue obtained was fractionated by column chromatography.
According to one of the general methods indicated above, the biotransformation of a series of thiophenic terpene compounds obeying formula (II) was carried out. The results obtained are summarized in the table below.
<tb> <TABLE> Columns = 5
<tb> Head Col 02 AL = L: Substrate (II)
(quantity)
<tb> Head Col 03 AL = L: Product (I)
(quantity)
<tb> Head Col 04 AL = L: Microorganism
<tb> Head Col 05 AL = L: Time of
fermentation [h]
<tb> <SEP> 1. <SEP> n = 2; m = p = 0
200 mg <SEP> X = CH2OH; n = 2; m = p = 0
(Z) -isomer 70 mg
(E) -isomer 5.0 mg <SEP> Nocardia sp.
DSM 43130 <SEP> 143
<tb> <SEP> 2. <SEP> n = 2; m = p = 0
5.0 g <SEP> X = CH2OH; n = 2; m = p = 0
(Z) -isomer 1972 mg
(E) -isomer 246 mg <SEP> Nocardia sp.
DSM 43130 <SEP> 96
<tb> <SEP> 3. <SEP> n = 2; m = p = 0
150 mg <SEP> X = CH2OH; n = 2; m = p = 0
(E) -isomer 89 mg <SEP> Absidia coeruleaI
FO 4011
<tb> <SEP> 4.
<SEP> n = 2; m = p = 0
200 mg <SEP> X = CH2OH; n = 2; m = p = 0
(Z) -isomer 10 mg <SEP> Cunninghamella blakesleeana DSM 1906 <SEP> 118
<tb> <SEP> 5. <SEP> n = 2; m = p = 0
200 mg <SEP> X = CH2OH; n = 2; m = p = 0
(Z) -isomer 52 mg
(E) -isomer 43 mg <SEP> Spreptomyces albus
DSM 40763 <SEP> 95
<tb> <SEP> 6. <SEP> n = 2; m = p = 0
200 mg <SEP> X = CH2OH; n = 2; m = p = 0
(Z) -isomer 3 mg
(E) -isomer 20 mg <SEP> Nocardia sp.
DSM 40350 <SEP> 175
<tb> <SEP> 7. <SEP> n = 2; m = p = 0
140 mg <SEP> X = CH2OH; n = 2; m = p = 0
(Z) -isomer 15 mg
(E) -isomer 45 mg <SEP> Mucor indicus
CBS 22629 <SEP> 50
<tb> <SEP> 8. <SEP> m = 0; n = p = 1
200 mg <SEP> X = CH2OH; n = p = 1; m = 0
(Z) -isomer 24 mg
(E) -isomer 48 mg <SEP> Spreptomyces anandii
DSM 40535
<tb> <SEP> 9. <SEP> m = 0; n = p = 1
200 mg <SEP> X = CH2OH; n = p = 1; m = 0
(Z) -isomer 11 mg
(E) -isomer 61 mg <SEP> Corynespora cassiicola
DSM 62475
<tb> <SEP> 10.
<SEP> m = 1; n = 2; p = 0
mixture (E) + (Z)
isomers 200 mg <SEP> X = CH2OH; m = 1; n = 2; p = 0
(3 min Z, 7 min E) isomer 10 mg <SEP> Mycobacterium smegmatis
DSM 43277 <SEP> 23
<tb> <SEP> 11. <SEP> m = 1; n = 2; p = 0
mixture (E) + (Z)
isomers 200 mg <SEP> X = COOH; m = 1; n = 2; p = 0
(3 min Z, 7 min E) isomer 17 mg <SEP> Cunninghamella elegans
DSM 63299 <SEP> 67
<tb> <SEP> 12. <SEP> m = 1; n = 2; p = 0
mixture (E) + (Z)
isomers 200 mg <SEP> X = CH2OH; m = 1; n = 2; p = 0
(3 min Z, 7 min E) isomer 25 mg
(3 min E, 7 min E) isomer 25 mg <SEP> Nocardia sp.
DSM 43130 <SEP> 161
<tb> <SEP> 13. <SEP> m = 1; n = 2; p = 0
mixture (E) + (Z)
isomers 200 mg <SEP> X = COOH; m = 1; n = 2; p = 0
(3 min E, 7 min E) isomer
+ (3 min Z, 7 min E) isomer 45 mg
X = CH2OH; m = 1; n = 2; p = 0
(3 min E, 7 min E) isomer
+ (3 min Z, 7 min E) isomer 45 mg <SEP> Pseudomonas lapsa
DSM 50274 <SEP> 63
<tb> </TABLE>
The analytical characteristics of the products obtained were as follows.
Product of formula (I)
X = CH2OH; n = 2; m = p = 0
isomer (Z):
<1> H NMR (CDCl3): 5.72 (1H, s (br), 4-H), 5.23 (1H, m, 3 min -H), 4.09 (2H, s, 6 min - H), 3.81 (2H, s (br), 2-H), 3.71 (2H, s (br), 5-H), 2.26 (4H, m, 4-H, 2 min - H), 1.79 (3H, s, 5 min -H). <1> <3> C NMR (CDCl3): s 138.0 (C-3), s 136.1 (c-4 min), d 125.5 (C-3 min), d 117.4 (C -4), t 60.6 (C-6 min), t 57.5 (C-2), t 56.8 (C-5), t 32.9 (C-1 min), t 24.4 (C-2 min), q 21.0 (C-5 min).
isomer (E):
<1> H NMR (CDCl3): 5.72 (1H, s (br), 4-H), 5.36 (1H, m, 3 min -H), 3.98 (2H, s, 5 min - H), 3.81 (2H, s (br), 2-H), 3.71 (2H, s (br), 5-H), 2.26 (4H, m, 4-H, 2 min - H), 1.66 (3H, s, 6 min -H). <1> <3> C NMR (CDCl3): s 138.2 (C-3), s 136.5 (C-4 min), d 123.4 (C-3 min), d 117.4 (C -4), t 68.4 (C-5 min), t 57.7 (C-2), t 57.0 (C-5), t 32.6 (C-1 min), t 24.9 (C-2 min), q 13.7 (C-6 min).
By heat treatment of this compound, 8-hydroxy-myrcene was obtained which can be used for the preparation of zoapatanol, a compound exhibiting biological activity (see US Pat. This compound is also a pheromone of Dendroctonus ponderosae (see J. Am. Chem. Soc. 1969, 91, 3281-89).
X = CH2OH; n = p = 1; m = 0
isomer (Z):
[alpha] D = -8.3 DEG (c = 1.00; CHCl3);
<1> H NMR (CDCl3): 5.72 (1H, m, 4-H), 5.25 (1H, t, J = 7 Hz, 2 min -H), 4.17 (1H, d, J = 16 Hz, 5 min aH), 4.07 (1H, d, J = 16 Hz, 5 min bH), 3.74 (1H, d (br), J = 12 Hz, 5a-H), 3, 62 (1H, d (br), J = 12 Hz, 5b-H), 3.59 (1H, m, 2-H), 2.68 (2H, m, 1 min -H), 1.88 ( 3H, s, 1 min min -H), 1.84 (3H, s, 4 min -H). <1> <3> C NMR (CDCl3): s 139.3 (C-3 min), s 137.8 (C-3), d 120.9 (C-2 min), d 117.6 (C -4), d 67.5 (C-2), t 61.5 (C-5 min), t 56.1 (C-5), t 25.6 (C-1 min), q 21.9 (C-4 min), q 18.0 (C-1 min min).
The thermal decomposition of this compound leads to the elimination of SO2 at 9-hydroxy-ocimene, a compound of interest to the flavor industry (see J. Agric. Food Chem. 1988, 36 (3), 569-73).
isomer (E):
[alpha] D = -3.0 DEG (c = 1.00; CHCl3);
<1> H NMR (CDCl3): 5.70 (1H, m, 4-H), 5.51 (1H, t, J = 6.5 Hz, 2 min -H), 4.07 (1H, d , J = 11 Hz, 4 min aH), 3.99 (1H, d, J = 11 Hz, 4 min bH), 3.75 (1H, m, 5a-H), 3.66 (1H, m, 5b-H), 3.58 (1H, t, J = 6.5 Hz, 2-H), 2.62 (2H, t, J = 6.5 Hz, 1 min -H), 1.87 ( 3H, s, 1 min min -H), 1.72 (3H, s, 5 min -H). <1> <3> C NMR (CDCl3): s 138.7 (C-3), s 138.4 (C-3 min), d 119.2 (C-2 min), d 117.4 (C -4), t 68.2 (C- 4 min), d 67.1 (C-2), t 55.8 (C-5), t 25.9 (C-1 min), q 18.2 (C-1 min min), q 14.0 (C-5 min).
The thermal decomposition of this compound leads to the formation of 8-hydroxy-ocimene, a flavoring substance of the Riesling grape (J. Agric. Food Chem. 1988, 36 (3), 569-73).
X = CH2OH; m = 1; n = 2; p = 0
isomer (3 min Z, 7 min E):
<1> H NMR (CDCl3): 5.71 (1H, m, 4-H), 5.42 (1H, t, J = 7 Hz, 7 min -H), 5.11 (1H, t, J = 7 Hz, 3 min -H), 4.01 (2H, s, 9 min -H), 3.82 (2H, m, 5-H), 3.70 (2H, s, 2-H), 2.12 (4H, m, 1 min -H, 2 min -H), 2.1 (4H, m, 5 min -H, 6 min -H), 1.71 (3H, s, 10 min -H ), 1.69 (3H, s, 11 min -H).
<1> <3> C NMR (CDCl3): s 138.4 (C-3), s135.0 (C-8 min), d 125.2 (C-7 min), d 123.4 (C- 3 min), d 117.1 (C-4), t 68.7 (C-9 min), t 57.8 (C-2), t 57.0 (C-5), t 33.3 ( C-1 min), t 31.6 (C-5 min), t 25.2 (C-2 min, C-6 min), q 23.3 (C-11 min), q 13.7 (C -10 minutes ).
isomer (3 min E, 7 min E):
<1> 1 H NMR (CDCl3): 5.69 (1H, m, 4-H), 5.40 (1H, m, 7 min -H), 5.14 (1H, m, 3 min -H), 4.00 (2H, s, 9 min -H), 3.81 (2H, m, 5-H), 3.72 (2H, s, 2-H), 2.2-2.0 (8H, m, 1 min -H, 2 min -H, 5 min -H, 6 min -H), 1.71 (3H, s, 10 min -H), 1.62 (3H, s, 11 min -H) .
The oxidation of this compound to aldehyde according to the usual methods of oxidation of a primary alcohol, followed by thermal decomposition, leads to the formation of alpha-sinensal.
X = COOH; m = 1; n = 2; p = 0
isomer (3 min Z, 7 min E):
<1> H NMR (CDCl3): 6.76 (1H, t, J = 7 Hz, 7 min -H), 5.70 (1H, m, 4-H), 5.13 (1H, t, J = 7 Hz, 3 min -H), 3.81 (2H, m, 5-H), 3.70 (2H, s, 2-H), 2.28 (2H, dt, J = 7.7 Hz , 6 min -H), 2.19 (2H, t, J = 7 Hz, 5 min -H), 2.19 (4H, m, 1 min -H, 2 min -H), 1.83 (3H , s, 10 min -H), 1.72 (3H, s, 11 min -H).
<1> <3> C NMR (CDCl3): s 172.4 (C-9 min), d 144.2 (C-7 min), s 138.3 (C-3), s 135.4 (C -4 min), s127.3 (C-8 min), d 124.4 (C-3 min), d 117.2 (C-4), t 57.9 (C-2), t 57.1 (C-5), t 33.1 (C-1 min), t 30.4 (C-5 min), t 27.0 (C-6 min), q 23.1 (C-11 min), t 22.7 (C-2 min), l 12.1 (C-10 min).
isomer (3 min E, 7 min E):
<1> H NMR (CDCl3): 6.86 (1H, t, J = 7 Hz, 7 min -H), 5.68 (1H, m, 4-H), 5.23 (1H, m, 3 min -H), 3.80 (2H, m, 5-H), 3.68 (2H, s, 2-H), 2.31 (2H, dt, J = 7.7 Hz, 6 min -H ), 2.2-2.0 (6H, m, 1 min -H, 2 min -H, 5 min -H), 1.85 (3H, s, 10 min -H), 1.63 (3H, s, 11 min -H).
The reduction of this acid by means of usual techniques for reducing a carboxylic group to an aldehyde, followed by thermal decomposition, leads to the formation of alpha-sinensal.
The thiophenic compounds of formula (II) used as starting materials in the process of the invention can be prepared as indicated below.
Compound of formula (II)
n = 2; m = p = 0:
This compound was obtained as described in German patent application DE-AS 1 117 563.
Eb. 110 DEG / 0.01 Torr.
m = 0; n = p = 1:
A mixture of 82 g of ocimene, essentially in its cis form, 1 g of hydroquinone and 109 g of SO2 was heated in a closed tube at 70 DEG for 2 h. After liberation of the excess sulfur dioxide the reaction mixture was distilled to provide the desired product having Eb. 120 DEG / 0.1 Torr.
m = 1; n = 2; p = 0:
A. A mixture of (Z) -nérolidol (40 g) and 80 ml of pyridine was heated to 70 DEG and treated with 20 ml of POCl3, which was added dropwise with stirring. After the addition was complete, the mixture was allowed to react for 5 min at 70 DEG, then cooled and 40 ml of pyridine and 1 l of petroleum ether 30-50 were added.
The reaction mixture was poured carefully onto ice and was washed with 3 fractions of water. After separation and concentration, it was distilled in a distillation apparatus comprising a short head.
A fraction having Eb was obtained. approx. 55 DEG / 0.3 Torr.
B. 30 g of (E) -nérolidol were treated as indicated above for the (Z) isomer. The farnesene isomer (E) obtained had Eb. approx. 65 DEG / 0.4 Torr.
C. The two compounds thus prepared were treated separately with an excess of SO2 for 2 h at 70 DEG in a closed tube as indicated above for the preparation of myrcene sulfone. The two farnesyl sulfone samples obtained had Eb. 140 DEG / 0.1 Torr.