CH674365A5

CH674365A5 - Gingko biloba L leaves extraction - using organic solvent to extract chlorophyll, diatomaceous earth purificn. and aq. extract purificn. to give prod. of high quercetin content

Info

Publication number: CH674365A5
Application number: CH316487A
Authority: CH
Inventors: Giovanni Dr Benardelli
Original assignee: Arysearch Arylan Ag
Priority date: 1987-08-18
Filing date: 1987-08-18
Publication date: 1990-05-31

Abstract

New fresh, dried leaves of ginkgo bipola L are extracted at above 100 deg.C with a mixt. of ketone alcohol and aq. -aliphatic base, the extract is filtered under pressure and chlorophyll and other undesirable materials are eliminated by conc. of 80 deg.C. Thus organic solvents are eliminated and residual impurities are removed by using diatomaceous earth, subsequent filtration gives aq. extract of high quercetion content. USE/ADVANTAGE - Extract of high quercetion content is obtd. In pharmacology, because of high conc. of quercetion.

Description

DESCRIZIONE DESCRIPTION

L'albero Ginkgo biloba L., che appartiene alle specie arboree più antiche tuttora esistenti, ha spiccata resistenza ai parassiti ed alle malattie per il fatto che le sue foglie operano un'azione difensiva grazie all'elevato tenore di acidi. Sono anche presenti, fra gli altri, i composti flavonoidi (vedi Kolji Nakani-shi, The Chemistry of naturai Products, Butterworths, Londra, Voi. 4, 1967, pag. 89). Fra i composti flavonoidi Ginkgo biloba contiene gallocatechina, galloepicatechina, glicosidi flavonici e biflavoni. The Ginkgo biloba L. tree, which belongs to the oldest tree species still in existence, has a strong resistance to pests and diseases due to the fact that its leaves operate a defensive action thanks to the high acid content. Flavonoid compounds are also present, among others (see Kolji Nakani-shi, The Chemistry of naturai Products, Butterworths, London, Vol. 4, 1967, p. 89). Among the flavonoid compounds Ginkgo biloba contains gallocatechin, galloepicatechin, flavonic glycosides and biflavones.

Il brevetto tedesco no. 1 767 098 descrive un procedimento per ricavare dalle foglie di Ginkgo biloba L. un farmaco contenente flavonoidi e adatto alla cura di alterazioni nella circolazione arteriosa periferica e cerebrale. Secondo tale procedimento le foglie anzidette vengono assoggettate ad estrazione mediante un solvente cioè con un alcool, o chetone, alifatico basso acquoso ad una temperatura inferiore a 100°C e poi il relativo estratto viene trattato con un idrocarburo alifatico basso clorurato, in particolare con il tetracloruro di carbonio. Il prodotto secco derivato da tali operazioni contiene glicosidi prevalentemente di natura fenolica, fra l'altro i glicosidi della quercetina, che sono principi farmacologicamente attivi. The German patent no. 1 767 098 describes a process for obtaining from the leaves of Ginkgo biloba L. a drug containing flavonoids and suitable for the treatment of alterations in the peripheral and cerebral arterial circulation. According to this process, the aforementioned leaves are subjected to extraction by means of a solvent, i.e. with an alcohol, or ketone, low aqueous aliphatic at a temperature below 100 ° C and then the relative extract is treated with a low chlorinated aliphatic hydrocarbon, in particular with the carbon tetrachloride. The dry product derived from these operations contains mainly phenolic glycosides, inter alia the glycosides of quercetin, which are pharmacologically active principles.

s L'impiego di un idrocarburo alifatico bassoo clorurato come secondo solvente estrattivo operante sul primo estratto può dare luogo ad inconvenienti soprattutto in caso di applicazione del procedimento su scala industriale, risultando tale tipo di idrocarburo piuttosto tossico, quando viene impiegato in grandi io quantitativi. Questo inconveniente rappresenta attualmente un notevole ostacolo alle applicazioni industriali del procedimento. s The use of a low or chlorinated aliphatic hydrocarbon as a second extractive solvent operating on the first extract can give rise to drawbacks especially in the case of application of the process on an industrial scale, resulting in this type of hydrocarbon being rather toxic when used in large quantities. This drawback currently represents a significant obstacle to the industrial applications of the process.

Scopo principale della presente invenzione è quella di proporre un procedimento per ricavare un estratto secco dalle foglie verdi di Ginkgo biloba L. il quale procedimento non preis senti il suddetto inconveniente. The main object of the present invention is to propose a process for obtaining a dry extract from the green leaves of Ginkgo biloba L. which process does not have the aforementioned drawback.

Altro scopo è quello di conseguire un migliorato tenore in quercetina nell'estratto secco rispetto a quanto conseguito finora. Another object is to achieve an improved quercetin content in the dry extract compared to what has been achieved so far.

L'invenzione consiste nel fatto che dopo l'estrazione me-20 diante il chetone, o l'alcool, acquoso l'estratto filtrato, anche a mezzo di pressione, viene depurato dalla clorofilla e da altri componenti inerti mediante concentrazione a temperatura inferiore a 80° per alcune ore e sotto vuoto allo scopo di eliminare soltanto il chetone, o l'alcool, fino ad ottenere un residuo ac-25 quoso e mediante successiva addizione, a tale residuo, di terra di diatomee che facilita la precipitazione totale della clorofilla e di altri componenti inerti, dopo di che si filtra e si porta a secco il filtrato acquoso depurato. The invention consists in the fact that after the extraction by means of the aqueous ketone, or alcohol, the filtered extract, also by means of pressure, is purified from chlorophyll and other inert components by concentration at a temperature lower than 80 ° for a few hours and under vacuum in order to eliminate only the ketone, or the alcohol, until an aqueous residue is obtained and by subsequent addition, to this residue, of diatomaceous earth which facilitates the total precipitation of the chlorophyll and other inert components, after which the purified aqueous filtrate is filtered and dried.

È preferibile impiegare un chetone, quale l'acetone, come 30 solvente estrattivo. It is preferable to use a ketone, such as acetone, as an extractive solvent.

Le foglie verdi, fresche o secche possono venire impiegate tale e quali oppure in balle precompresse. Si possono anche impiegare foglie macinate in modo grossolano. The green, fresh or dried leaves can be used as such or in pre-compressed bales. Coarsely ground leaves can also be used.

Se lo si ritiene necessario, si sottopone il suddetto filtrato 35 acquoso ad una ulteriore depurazione. A tale scopo si addiziona al suddetto filtrato acquoso solfato di ammonio e metil-etil-chetone, ottenendo dopo agitazione la dissoluzione del primo composto nella fase acquosa e per diversità di densità la sovrapposizione del secondo composto come fase organica quale 40 estratto, dopo di che si distaccano queste due fasi. Si esaurisce poi la suddetta fase acquosa mediante altro metil-etilchetone in più riprese e si riuniscono i relativi estratti insieme con il suddetto estratto organico precedentemente distaccato. Il tutto viene quindi disidratato su solfato di sodio e filtrato. Infine si por-45 ta a secco il filtrato. If deemed necessary, the aforementioned aqueous filtrate 35 is subjected to further purification. To this end, the aqueous ammonium and methyl-ethyl-ketone sulphate is added to the aforesaid filtration, obtaining after stirring the dissolution of the first compound in the aqueous phase and by diversity of density the overlap of the second compound as an organic phase such as extracted, after these two phases are detached. The above aqueous phase is then exhausted by means of other methyl ethyl ketone in several stages and the relative extracts are combined together with the above organic extract previously detached. The whole is then dehydrated on sodium sulphate and filtered. Finally the filtrate is dried.

Qualora da un'analisi si riscontrino piccole impurità nell'estratto secco che rimangono insolute, se tale estratto viene sciolto in una miscela di etanolo puro ed acqua avente il rapporto di 9:1, si procede nel modo qui di seguito indicato. L'e-50 stratto secco viene sciolto in una miscela di etanolo puro ed acqua, nel rapporto anzidetto, e questa soluzione viene tenuta sotto agitazione per meno di un'ora a temperatura ambiente, dopo di che si filtra su un pannello di terra di diatomee ed il filtrato privo delle impurità viene concentrato sotto vuoto fino ad 55 ottenere una massa pastosa piuttosto fluida. Tale massa pastosa, addizionata con una quantità di acqua pressoché di pari peso dell'estratto secco di partenza, viene riconcentrata sotto vuoto ed a temperatura interna inferiore a 70°C, eliminando così ogni traccia di etanolo impiegato, dopo di che la massa medesi-6o ma viene portata a secco in stufa a temperatura inferiore a 70°C e sotto vuoto. If, from an analysis, small impurities are found in the dry extract which remain unsolved, if this extract is dissolved in a mixture of pure ethanol and water having the ratio of 9: 1, proceed as follows. The dry extract e-50 is dissolved in a mixture of pure ethanol and water, in the aforementioned ratio, and this solution is kept under stirring for less than an hour at room temperature, after which it is filtered on a panel of earth of diatoms and the impurities free filtrate is concentrated under vacuum to obtain a rather fluid pasty mass. This pasty mass, added with an amount of water of almost equal weight of the starting dry extract, is reconcentrated under vacuum and at an internal temperature below 70 ° C, thus eliminating any trace of ethanol used, after which the mass 6o but is dried in an oven at a temperature below 70 ° C and under vacuum.

L'estratto secco è farmacologicamente attivo per la presenza di quercetina. The dry extract is pharmacologically active due to the presence of quercetin.

Viene ora descritto il procedimento con riferimento ad un 65 esempio. The method is now described with reference to an example.

Esempio Example

250 g di foglie macinate di Ginkgo biloba vengono sottopo 250 g of ground Ginkgo biloba leaves are subjected

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ste ad estrazione mediante 1,5 litri di acetone acquoso al 60% a temperatura di 55°C per circa 5 ore sotto agitazione. L'estratto viene passato al filtro. Allo scopo di eliminare da esso la clorofilla ed altri componenti inerti, il filtrato viene concentrato fino a ridursi ad un residuo acquoso di circa 400 mi per eliminazione dell'acetone; a tale residuo acquoso si addiziona sotto agitazione 2,5 g di terra di diatomee, che facilita la precipitazione dalla stessa di clorofilla e di altri componenti inerti: il precipitato viene separato per filtrazione ed eliminato. A questo punto il residuo acquoso viene riportato al volume primitivo di 400 mi. Ora si addizionano a questo residuo acquoso 100 mi di metil-etilche-tone e 50 g di solfato di ammonio e si agita bene per ottenere la soluzione del sale nell'acqua e la sovrapposizione del metil-etil-chetone sopra la fase acquosa come fase organica, quale estratto. Le due fasi vengono distaccate. La fase acquosa viene quindi esaurita impiegando in tre riprese metil-etilchetone in un quantitativo di 50 mi per volta. Si riuniscono quindi questi tre estratti di metil-etilchetone insieme con l'estratto precedentemente distaccato (250 mi). Si disidrata il tutto su 5 g di solfato di sodio, si filtra e si porta a secco il filtrato. extracted by 1.5 liters of 60% aqueous acetone at a temperature of 55 ° C for about 5 hours under stirring. The extract is passed to the filter. In order to eliminate chlorophyll and other inert components therefrom, the filtrate is concentrated until it is reduced to an aqueous residue of about 400 ml by elimination of the acetone; 2,5 g of diatomaceous earth is added under stirring to this aqueous residue, which facilitates the precipitation from it of chlorophyll and other inert components: the precipitate is separated by filtration and eliminated. At this point the aqueous residue is brought back to the primitive volume of 400 ml. Now 100 ml of methyl-ethyl-tone and 50 g of ammonium sulphate are added to this aqueous residue and the mixture is stirred well to obtain the solution of the salt in the water and the superimposition of the methyl-ethyl-ketone over the aqueous phase as phase organic, which extract. The two phases are detached. The aqueous phase is then exhausted by using methyl ethyl ketone in three steps in a quantity of 50 ml at a time. These three methyl ethyl ketone extracts are then combined together with the previously detached extract (250 ml). The whole is dehydrated on 5 g of sodium sulphate, filtered and the filtrate is dried.

Si ottiene una resa del 2% rispetto al quantitativo di foglie, con un tenore standardizzato di quercetina dell'8-10%. Pertanto l'estratto secco è farmacologicamente molto attivo. A yield of 2% is obtained compared to the quantity of leaves, with a standardized quercetin content of 8-10%. Therefore the dry extract is pharmacologically very active.

Il tenore in quercetina esprime la quantità di aglicone flavo-nico risultante dall'idrolisi acida dei glicosidi fenolici calcolati come grammi di quercetina/100 gr. The quercetin content expresses the amount of flavo-aglicone resulting from the acid hydrolysis of the phenolic glycosides calculated as grams of quercetin / 100 gr.

In caso di presenza di piccole impurità nell'estratto, messa 5 in evidenza con apposita analisi, nel corso della quale l'estratto secco viene sciolto in una miscela di etanolo puro ed acqua nel rapporto 9:1 e tali impurità restano invece insolute in detta miscela di soluzione, si procede secondo quanto indicato in appresso. In appropriato reattore vengono caricati kg 5 di estratto io secco che vengono sciolti in 125 1 di miscela di etanolo puro ed acqua nel rapporto 9:1. Si lascia agitare per mezz'ora a temperatura ambiente. Si filtra su pannello di terra di diatomee. La soluzione filtrata viene concentrata sotto vuoto fino ad ottenere una massa pastosa piuttosto fluida. Tale massa viene poi ripre-15 sa con 5 1 di acqua e successivamente il tutto viene riconcentrato sotto vuoto ed a temperatura interna massima di 60°C fino a riottenere una massa pastosa piuttosto fluida, dalla quale è stata così eliminata ogni traccia di etanolo. Tale massa finale viene essiccata in stufa sotto vuoto a 60°C. In the presence of small impurities in the extract, highlighted 5 with a specific analysis, during which the dry extract is dissolved in a mixture of pure ethanol and water in the 9: 1 ratio and these impurities remain unsolved in said mixture of solution, proceed as indicated below. 5 kg of dry extract are loaded into an appropriate reactor and dissolved in 125 1 of a mixture of pure ethanol and water in the 9: 1 ratio. The mixture is left to stir for half an hour at room temperature. It is filtered on a diatomaceous earth panel. The filtered solution is concentrated in vacuo to obtain a rather fluid pasty mass. This mass is then added again with 5 1 of water and subsequently the whole is reconcentrated under vacuum and at a maximum internal temperature of 60 ° C until a rather fluid pasty mass is obtained, from which all traces of ethanol have thus been eliminated. This final mass is dried in an oven under vacuum at 60 ° C.

20 Se viene fatta, questa ultima operazione di depurazione, data l'esiguità quantitativa dell'impurità, non altera praticamente il valore di resa del procedimento nè il titolo in quercetina, sopra indicati. 20 If this last purification operation is carried out, given the small quantity of the impurity, it practically does not alter the yield value of the procedure or the quercetin title, indicated above.

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Claims

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1. Procedure for obtaining from Ginkgo biloba L. green leaves, fresh or dried, a dry extract with an improved quercetin content by extraction with a solvent consisting of a ketone, or a low aqueous aliphatic alcohol at a temperature not exceeding 100 ° C and by at least a subsequent purification operation, characterized in that after extraction with the ketone, or the aqueous alcohol, the filtered extract, also by means of pressure, is purified from chlorophyll and other inert components by concentration at a temperature below 80 ° for a few hours and under vacuum in order to remove only the ketone, or alcohol, until an aqueous residue is obtained and by subsequent addition, to this residue, of diatomaceous earth which facilitates total precipitation chlorophyll and other inert components, after which the purified aqueous filtrate is filtered and dried.

2. Process as in claim 1 characterized in that for further purification of the aforementioned aqueous filtrate, ammonium sulfate and methyl ethyl ketone are added thereto, obtaining after stirring the dissolution of the first compound in the aqueous phase and for density diversity the superposition of the second compound as organic phase as extract, after which these two phases detach, and from the fact that the aqueous phase is exhausted by other methyl ethyl ketone in several stages, the relative organic extracts are then joined together with the above extract organic previously detached, everything is dehydrated on sodium sulphate, filtered and finally the filtrate is dried.

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3. Process as in claim 1 or 2 characterized in that for a purification, if necessary, of the dry extract, this is dissolved in a mixture of pure ethanol and water, in the ratio of 9: 1, and this solution is kept under stirring for less than an hour at room temperature, after which it is filtered on a diatomaceous earth panel and the filtrate free of impurities is concentrated in vacuo to obtain a rather fluid pasty mass and from the fact that this pasty mass added with a quantity of water of almost equal weight of the starting dry extract is reconcentrated under vacuum and at an internal temperature lower than 70 ° C, thus eliminating any trace of ethanol used, after which the mass is dried in an oven at a lower temperature at 70 ° C and under vacuum.

4. Process as in claim 1 characterized in that the leaves of Ginkgo biloba are used as such or from pre-compressed bales or in a roughly ground state.