CH659947A5

CH659947A5 - PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS WITH ANTIBIOTIC EFFECTIVENESS.

Info

Publication number: CH659947A5
Application number: CH4511/84A
Authority: CH
Inventors: Paolo Colombo; Ubaldo Conte; Giorgio Zagnoli
Original assignee: Lisapharma Spa
Priority date: 1983-10-07
Filing date: 1984-09-20
Publication date: 1987-03-13
Also published as: IT1207982B; DE3434708A1; IT8323206A0; BE900604A

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue Cephradin und Clavulansäure enthaltende Zusammensetzungen, in welchen die Clavulansäure einen starken synergistischen Effekt auf Cephradin ausübt, dessen antibiotische Stärke nahezu verdoppelt wird. The present invention relates to novel compositions containing cephradine and clavulanic acid, in which the clavulanic acid has a strong synergistic effect on cephradine, the antibiotic strength of which is almost doubled.

Es ist bekannt, dass Cephradin ein Breitband-Antibioti-kum ist, welches weitverbreitet in der Humantherapie Anwendung findet, während die Clavulansäure nur eine schwache antibiotische Aktivität besitzt. Es war daher nicht voraussehbar, dass die Kombination von Clavulansäure mit Cephradin zu einer derartigen Verstärkung der Aktivität des letzteren führen würde, wie sie in der Praxis festgestellt wurde. It is known that cephradine is a broad spectrum antibiotic which is widely used in human therapy, while the clavulanic acid has only a weak antibiotic activity. It was therefore not foreseeable that the combination of clavulanic acid with cephradine would lead to such an increase in the activity of the latter as has been found in practice.

Zur Bestimmung der antibakteriellen Aktivität der neuen Kombination wurden zwei Untersuchungen durchgeführt: Two tests were carried out to determine the antibacterial activity of the new combination:

A - Bestimmung der geringsten wachstumshemmenden Konzentration (MIC) an Gram-positiven und Gramnegativen Bakterien; A - Determination of the lowest growth-inhibiting concentration (MIC) of Gram-positive and Gram-negative bacteria;

B - Bestimmung der Empfindlichkeit von Gram-positiven und Gram-negativen Bakterien in Agar. B - Determination of the sensitivity of Gram-positive and Gram-negative bacteria in agar.

A - Die Aktivität von Cephradin und Cephradin plus Clavulansäure (2:1) wurde an einigen Bakterienstämmen unersucht, die vom Institut Universitaire de Microbiologie - Centre de Collection de type microbien CH -1011 - Lausanne, erhalten wurden: A - The activity of cephradin and cephradin plus clavulanic acid (2: 1) was investigated on some bacterial strains obtained from the Institut Universitaire de Microbiologie - Center de Collection de type microbien CH -1011 - Lausanne:

Staphilococcus aureus La 663 Staphilococcus aureus La 663

Bacillus cereus La 2866 Bacillus cereus La 2866

Klebsiella pneumoniae La 1202 Klebsiella pneumoniae La 1202

Proteus vulgaris La 451 Proteus vulgaris La 451

Escherichia coli La 402 Escherichia coli La 402

Die obgenannten Bakterien wurden vor ihrer Verwendung sowohl vom morphologischen Gesichtspunkt aus als auch hinsichtlich ihrer biochemischen Charakteristika untersucht. The above-mentioned bacteria were examined both from the morphological point of view and in terms of their biochemical characteristics before they were used.

Das verwendete Nährmedium war Nährbrühe (Difco), während für die Erhaltung der Stämme das Nährmedium Agar vorgezogen wurde. The nutrient medium used was broth (Difco), while agar was preferred to preserve the strains.

Die verschiedenen Konzentrationen sowohl von Cephradin als auch der Kombination von Cephradin + Clavulansäure (2:1), wurden dadurch erhalten, dass man eine Mutterlösung herstellte, mit der jeweils doppelte Verdünnungen in 5 ml des Nährmediums hergestellt wurden; von diesen Serien wurde jede für einen anderen Bakterienstamm benützt. The various concentrations of both cephradin and the combination of cephradin + clavulanic acid (2: 1) were obtained by preparing a mother liquor, each of which was made double dilutions in 5 ml of the nutrient medium; each of these series was used for a different bacterial strain.

Die Animpfungen der Bakterienstämme wurden aus den vorerwähnten Kulturen der einzelnen Stämme 12 bis 14 The inoculations of the bacterial strains were made from the cultures of the individual strains 12 to 14 mentioned above

Tabelle 1 Table 1

Mittels der minimalen Hemmkonzentration (MIC) bestimmte antibakterielle Wirksamkeit Antibacterial activity determined using the minimal inhibitory concentration (MIC)

Bakterienstämme minimale Hemmkonzentration, Bacterial strains minimal inhibitory concentration,

ausgedrückt als ng/ml Nährmittel Cephradin Cephradin + Clavulansäure (2:1) expressed as ng / ml nutrient cephradin cephradin + clavulanic acid (2: 1)

Bacillus cereus 2,6 1,3 Bacillus cereus 2.6 1.3

Staphilococcus aureus 0,8 0,1 Staphilococcus aureus 0.8 0.1

30 Klebsiella pneumoniae 3,8 0,4 30 Klebsiella pneumoniae 3.8 0.4

Proteus vulgaris 3,0 0,6 Proteus vulgaris 3.0 0.6

Escherichia coli 1,8 0,6 Escherichia coli 1.8 0.6

35 Aus den obenangeführten Daten geht eindeutig hervor, dass die MIC von Cephradin stark von der Kombination mit Clavulansäure abhängig ist und sich je nach dem Stamm um 10 bis 50% des Anfangswertes vermindert. 35 It is clear from the data above that the MIC of cephradine is heavily dependent on the combination with clavulanic acid and decreases by 10 to 50% of the initial value depending on the strain.

B - Die Bestimmung der Empfindlichkeit der Bakterien-40 Stämme in Agar erfolgte zum Zwecke der Bewertung der Aktivität von Cephradin im Vergleich mit der Kombination Cephradin -1- Clavulansäure (2:1) auf verschiedene Bakterienstämme in vitro in einem festen Medium und auch zum Zwecke der Festellung der Dif-45 fusionsfahigkeit des Antibiotikums in Agar. B - The sensitivity of the bacterial 40 strains in agar was determined for the purpose of evaluating the activity of cephradin in comparison with the combination cephradin -1-clavulanic acid (2: 1) on different bacterial strains in vitro in a solid medium and also for the purpose the determination of the Dif-45 fusion ability of the antibiotic in agar.

Es wurden Konzentrationen verwendet, welche sich bei den Proben im flüssigen Mittel als proportional besser geeignet erwiesen hatten. Concentrations were used which had proven to be proportionally more suitable for the samples in the liquid medium.

Der verwendete Nährboden war der von Müller-Hinton so (20 ml pro Petrischale mit einem Durchmesser von 9 cm), dem noch im geschmolzenen Zustand 1 ml einer, wie vorher beschrieben, hergestellten Suspension jedes des zu untersuchenden Keimes hinzugefügt wurde. Nach entsprechendem Mischen in der Petrischale lässt man die Masse sich auf einer ss horizontalen Ebene verfestigen; dann werden in die Schicht des verfestigten Nährbodens Grübchen mit einem Durchmesser von 8 mm gemacht; in jedes einzelne derselben werden je 0,05 ml einer 0,9%igen Natriumchloridlösung des Antibiotikums in verschiedenen Konzentrationen eingebracht. 6o Die Ablesung der Proben erfolgt 12 Stunden nach Inkubation bei 37 °C und ermöglichte die Messung der Wachstumshemmungszonen in Abhängigkeit von der Sensibilität des verwendeten Keimes und der Konzentration des Antibiotikums. The nutrient medium used was that of Müller-Hinton so (20 ml per Petri dish with a diameter of 9 cm), to which 1 ml of a suspension of each of the germs to be examined, prepared as described above, was added while still molten. After appropriate mixing in the Petri dish, the mass is allowed to solidify on a horizontal plane; then dimples with a diameter of 8 mm are made in the layer of the solidified nutrient medium; 0.05 ml of a 0.9% sodium chloride solution of the antibiotic in different concentrations are introduced into each of them. 6o The samples were read 12 hours after incubation at 37 ° C and made it possible to measure the growth inhibition zones depending on the sensitivity of the germ used and the concentration of the antibiotic.

65 Die in mm angegebenen Hemmungszonen ermöglichen es, die wachstumshemmende Fähigkeit der untersuchten Bakterien quantitativ zu schätzen. Die erhaltenen Ergebnisse sind aus Tabelle 2 ersichtlich. 65 The inhibition zones given in mm make it possible to quantitatively estimate the growth-inhibiting ability of the bacteria examined. The results obtained are shown in Table 2.

659 947 659 947

Täbelle 2 ' Tables 2 '

Empfindlichkeit der Gram-positiven und Gram-negativen Keime in festem Medium Sensitivity of Gram-positive and Gram-negative germs in a solid medium

Bakterienstämme Bacterial strains

Hemmungszonen ausgedrückt in mm Inhibition zones expressed in mm

Cephradin Kombination 5 |ig 10 (ig 5 Hg 10 Hg Cephradin combination 5 | ig 10 (ig 5 Hg 10 Hg

Bacillus cereus Bacillus cereus

18 18th

23 23

21 21st

25 25th

Staphilococcus aureus Staphilococcus aureus

12 12

16 16

25 25th

29 29

Klebsiella pneumoniae Klebsiella pneumoniae

19 19th

23 23

28 28

Escherichia coli Escherichia coli

18 18th

22 22

21 21st

26 26

Proteus vulgaris Proteus vulgaris

15 15

20 20th

27 27th

Aus den Daten der Tabelle 2 geht klar hervor, dass 5 pg Zusammensetzung mit einem Gehalt von nur 2/3 Cephradin eine hemmende Wirkung gleich oder stärker als jene von 10 (ig reinem Cephradin haben. It is clear from the data in Table 2 that 5 pg of composition containing only 2/3 cephradine have an inhibitory effect equal to or greater than that of 10% pure cephradine.

Aus den erhaltenen mikrobiologischen Daten geht daher klar hervor, dass der synergistische Effekt der Clavulansäure auf Cephradin — ein Effekt, der bei Mischungen auftritt, in welchen die beiden Wirkstoffe im Gewichtsverhältnis von 3:1 bis 1:1 vorhanden sind, wobei aber die besseren Ergebnisse mit Zusammensetzungen erhalten werden, in welchen Cephradin und Clavulansäure in einem Gewichtsverhältnis von 2:1 enthalten sind — die Verwendung von Cephradin in weit geringeren Dosen als bisher ermöglicht und somit für den Patienten ohne jedes Risiko von Nebenwirkungen angewendet werden kann, auch bei langandauernder Behandlung. It is therefore clear from the microbiological data obtained that the synergistic effect of clavulanic acid on cephradine - an effect which occurs in mixtures in which the two active compounds are present in a weight ratio of 3: 1 to 1: 1, but the better results are obtained with compositions in which cephradine and clavulanic acid are contained in a weight ratio of 2: 1 - the use of cephradine is possible in much lower doses than before and can therefore be used for the patient without any risk of side effects, even with long-term treatment.

5 Die folgenden Beispiele erläutern pharmazeutische Formulierungen, die nach der vorliegenden Erfindung erhalten wurden, sind aber in keiner Weise einschränkend: 5 The following examples illustrate pharmaceutical formulations obtained according to the present invention, but are in no way limiting:

a) Spritzen mg mg io Jede Ampulle enthält: a) Syringes mg mg io Each ampoule contains:

- Cephradin 1000 500 - cephradine 1000 500

- Clavulansäure 500 250 - clavulanic acid 500 250

b) Tabletten b) tablets

Jede Tablette enthält: Each tablet contains:

15 - Cephradin 1000 500 15 - cephradin 1000 500

- Clavulansäure 500 250 - clavulanic acid 500 250

- Exzipienten für eine Tablette c) Sirup, trocken - excipients for one tablet c) syrup, dry

20 Alle 5 ml enthalten: 20 All 5 ml contain:

- Cephradin 500 - cephradine 500

- Clavulansäure 250 - clavulanic acid 250

- Exzipienten ad 5 ml - Excipients ad 5 ml

25 Die Indikationen gelten für alle Infektionen, die von gegen Antibiotikum empfindlichen Keimen hervorgerufen werden. Die Dosierung variiert von 1 bis 4 g pro Tag, verteilt auf gleiche Dosen. 25 The indications apply to all infections caused by germs sensitive to antibiotics. The dosage varies from 1 to 4 g per day, divided into equal doses.

30 30th

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

60 60

65 65

Claims

659 947

PATENT CLAIMS 1. Pharmaceutical compositions with antibiotic activity, characterized in that they contain Ce-phradin as an antibacterial agent and clavulanic acid as a synergistic agent.

■ 2. Pharmaceutical compositions according to claim 1, characterized in that they contain cephradine and clavulanic acid in a weight ratio of 3: 1 to 1: 1.

3. Compositions according to claim 2, characterized in that the weight ratio of cephradine to clavulanic acid is 2: 1.

Hours previously prepared from a dry culture medium. The individual suspensions in nutrient broth were added in an amount of 0.05 ml per experiment.

The cult broths were tested after 12 hours of incubation at 37 ° C. to determine the growth-inhibiting effect and to determine the minimum inhibitory concentration of the composition and of cephradine alone.

The reading was carried out photometrically using a filter with a wavelength of 460 m yes. The nutrient was used as a blank sample and the value read at the beginning of the incubation period was taken as reference for the inoculum.

The minimum inhibitory concentration values (MIC values) of the individual strains investigated, obtained both with cephradin alone and with the combination cephradin + clavulanic acid (2: 1), are shown in Table 1.