CH625125A5

CH625125A5 - Method for manufacturing a stable injectable solution of immunoglobulins and organic iron, and product obtained by this method

Info

Publication number: CH625125A5
Application number: CH1256375A
Authority: CH
Inventors: Edmond Dr Leresche
Original assignee: Biokema Sa
Priority date: 1975-09-26
Filing date: 1975-09-26
Publication date: 1981-09-15
Also published as: FR2325384B1; DE2642395A1; BE846537A; DE2642395C2; FR2325384A1

Description

La présente invention concerne un procédé de fabrication d'une solution injectable stable d'immunoglobulines et de fer organique, destinée à prévenir et combattre l'anémie ferriprive et à accroître la résistance aux maladies infectieuses des jeunes mammifères, humains y compris. L'invention concerne également le produit obtenu par ce procédé. The present invention relates to a method for manufacturing a stable injectable solution of immunoglobulins and organic iron, intended to prevent and combat iron deficiency anemia and to increase resistance to infectious diseases of young mammals, including humans. The invention also relates to the product obtained by this process.

Certains jeunes mammifères, et en particulier le porcelet nouveau-né vivant en milieu fermé, sont normalement menacés par deux risques majeurs: l'anémie ferriprive et les atteintes infectieuses. Si le premier risque est actuellement prévenu avec satisfaction, Certain young mammals, and in particular the newborn piglet living in a closed environment, are normally threatened by two major risks: iron deficiency anemia and infectious diseases. If the first risk is currently prevented with satisfaction,

quasi systématiquement, par des apports de fer (injectable de préférence), il n'en est pas de même du second, notamment de la colibacillose du jeune porcelet: les difficultés de la chimioprophy-laxie, liées aux résistances de plus en plus fréquentes d '£. coli à l'égard des antibiotiques et au passage généralement insuffisant des anti-infectieux dans le lait de la mère, ce qui nécessite des traitements individuels répétés du jeune pendant toute la période dangereuse, comme les difficultés de l'immunoprophylaxie, vu l'hétérogénéité des méthodes préconisées, en sont responsables. L'injection d'immunoglobulines (Ig) entraîne normalement une hausse des gammaglobulines plasmatiques et avec elle une augmentation de la résistance du jeune pendant environ trois semaines. almost systematically, with iron (preferably injectable), it is not the same for the second, in particular colibacillosis of young piglets: the difficulties of chemoprophy-laxia, linked to the increasingly frequent resistance of '£. coli with regard to antibiotics and the generally insufficient passage of anti-infectives in the mother's milk, which requires repeated individual treatments of the young throughout the dangerous period, such as the difficulties of immunoprophylaxis, given the heterogeneity recommended methods are responsible for it. The injection of immunoglobulins (Ig) normally causes an increase in plasma gamma globulin and with it an increase in the resistance of the youngster for approximately three weeks.

Pour reprendre le cas du porcelet, disons qu'on se contentait jusqu'à ce jour de lui administrer du fer et on ne réservait des traitements complémentaires, par voie parentérale ou orale avec des produits appropriés, que dans les exploitations infectées, à titre préventif, ou à l'apparition d'une maladie infectieuse, à titre thérapeutique. To take up the case of the piglet, let us say that until now it was content with administering iron to it and we reserved additional treatments, parenterally or orally with appropriate products, only in infected holdings, as a preventive measure , or at the onset of an infectious disease, for therapeutic purposes.

L'injection systématique au jeune animal, en lieu et place de la seule injection de fer, d'une préparation assurant simultanément une prévention de l'anémie et une augmentation de la résistance aux maladies infectieuses, constituerait un élargissement et une simplification de la prophylaxie de base. The systematic injection into the young animal, instead of the only iron injection, of a preparation ensuring simultaneously anemia prevention and an increase in resistance to infectious diseases, would constitute an enlargement and a simplification of prophylaxis basic.

Le but de la présente invention est la mise au point d'un procédé de fabrication d'une solution injectable stable contenant un composé de fer organique, sous une forme facilement résorbable, The aim of the present invention is to develop a process for manufacturing a stable injectable solution containing an organic iron compound, in an easily absorbable form,

associé à des immunoglobulines. La solution doit être stable et contenir ses composants dans un rapport approprié, de façon à fournir le dosage nécessaire dans un volume adapté à l'espèce. associated with immunoglobulins. The solution must be stable and contain its components in an appropriate ratio, so as to provide the necessary dosage in a volume suitable for the species.

Il a, d'autre part, été constaté que la préparation associant du fer dextran et des immunoglobulines bénéficie d'un effet retard de 15 à 20 j, ce qui permet de faire franchir la période critique des jeunes animaux avec une seule injection. Malheureusement, la fabrication d'une telle solution stable n'apparaissait pas comme possible jusqu'à ce jour, car comme il est connu, les solutions concentrées de métaux lourds précipitent et/ou dénaturent les immunoglobulines. Certains sels de métaux lourds sont d'ailleurs utilisés pour la précipitation et la séparation des immunoglobulines et leurs fractions. On the other hand, it has been observed that the preparation combining iron dextran and immunoglobulins benefits from a delay effect of 15 to 20 days, which makes it possible to overcome the critical period of young animals with a single injection. Unfortunately, the manufacture of such a stable solution has not appeared as possible until now, because as it is known, concentrated solutions of heavy metals precipitate and / or denature the immunoglobulins. Certain heavy metal salts are also used for the precipitation and separation of immunoglobulins and their fractions.

Le procédé selon la présente invention évite cet écueil et se caractérise par le fait que l'on mélange, dans des concentrations, des proportions et des conditions de pH adéquates, une solution stérile d'immunoglobulines de mammifères et une solution stérile de fer dextran, de façon à obtenir la concentration maximale de fer en fin d'opération. On part, en particulier, d'une solution de 5 à 16% en poids d'immunoglobulines, dans laquelle on verse lentement et en agitant une solution contenant 4 à 12% en poids de fer sous forme de fer dextran, les deux solutions de départ étant amenées à un pH de 6, et durant l'opération on maintient le pH du mélange entre 6 et 6,25. The method according to the present invention avoids this pitfall and is characterized in that a sterile solution of mammalian immunoglobulin and a sterile solution of iron dextran is mixed, in concentrations, proportions and conditions of suitable pH. so as to obtain the maximum concentration of iron at the end of the operation. We start, in particular, from a solution of 5 to 16% by weight of immunoglobulins, into which is slowly poured and with stirring a solution containing 4 to 12% by weight of iron in the form of iron dextran, the two solutions of initially being brought to a pH of 6, and during the operation the pH of the mixture is maintained between 6 and 6.25.

La solution obtenue par ce procédé est une combinaison stable d'un métal lourd, sous forme de fer organique, et d'une substance biologique sous forme d'immunoglobulines, qui jusqu'à ce jour n'apparaissait pas comme réalisable dans les concentrations requises. The solution obtained by this process is a stable combination of a heavy metal, in the form of organic iron, and a biological substance in the form of immunoglobulins, which until now has not appeared to be feasible in the required concentrations. .

Afin d'assurer la conservation de la solution, il est utile d'ajouter un conservateur dans chacune des solutions de départ, tel que 2,8 à6%o en poids de phénol ou 2 à 5%o en poids de formol ou 0,1 à 0,2%o en poids de thimérosal. In order to ensure the preservation of the solution, it is useful to add a preservative in each of the starting solutions, such as 2.8 to 6% by weight of phenol or 2 to 5% by weight of formalin or 0, 1 to 0.2% o by weight of thimerosal.

Comme les essais pratiques l'ont démontré, l'utilisation de la solution obtenue, selon la présente invention, provoque une teneur du sang en hémoglobine qui est pour le moins aussi élevée à posologie de fer égale que lors d'une injection d'une préparation de As practical tests have demonstrated, the use of the solution obtained, according to the present invention, causes a hemoglobin content of the blood which is at least as high at the same iron dosage as during an injection of a preparation of

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fer seul, et qui de plus semble agir plus longtemps. En outre, le taux des immunoglobulines circulantes est incontestablement augmenté. iron alone, and which moreover seems to act longer. In addition, the level of circulating immunoglobulins is undoubtedly increased.

L'utilisation pratique de la solution s'est révélée très simple, du fait qu'elle peut être aussi bien injectée par voie intramusculaire dans la cuisse que par voie sous-cutanée derrière l'oreille des jeunes 5 The practical use of the solution has proven to be very simple, since it can be injected intramuscularly into the thigh as well as subcutaneously behind the ear of young people 5

animaux, sans que l'on puisse remarquer de différence appréciable dans sa résorption et dans sa tolérance qui est bonne. animals, without being able to notice any appreciable difference in its absorption and in its tolerance which is good.

Dans un but de prophylaxie ou de traitement d'autres carences, auxquelles sont sujets les jeunes mammifères, il peut être avantageux d'ajouter, lors de la fabrication de la solution selon le procédé io de la présente invention, des vitamines du groupe B, par exemple en mélangeant dans la solution de fer dextran de départ environ 7500gammas de vitamines B12 pour 100 ml. For the purpose of prophylaxis or treatment of other deficiencies to which young mammals are subject, it may be advantageous to add, during the manufacture of the solution according to the method io of the present invention, group B vitamins, for example by mixing in the starting iron dextran solution about 7500 gammas of vitamins B12 per 100 ml.

Dans le complexe de fer dextran, le fer est lié de façon relativement lâche, alors que sa liaison avec la transferrine et la 15 lactoferrine, qui possèdent une plus grande affinité pour le fer, est plus forte. Lors d'une administration de fer seul, ces dernières substances se chargent de transporter le fer dans le corps. Dans l'utilisation de la solution obtenue selon le procédé de la présente invention, le transport du fer dans le corps peut encore être accéléré 20 et intensifié si, dans la solution de départ d'immunoglobulines, on laisse substituer ou l'on ajoute une certaine quantité de lactoferrine et/ou de transferrine. In the iron dextran complex, iron is relatively loosely bound, while its bond with transferrin and lactoferrin, which have a higher affinity for iron, is stronger. When iron is administered alone, these latter substances take care of transporting iron in the body. In the use of the solution obtained according to the method of the present invention, the transport of iron in the body can be further accelerated and intensified if, in the starting immunoglobulin solution, a substitution is made or a solution is added. certain amount of lactoferrin and / or transferrin.

Selon la présente invention, une forme d'exécution du procédé de fabrication d'une solution injectable stable d'immunoglobulines et 25 de fer organique destinée au traitement des jeunes porcelets est la suivante: on prépare une solution d'immunoglobulines de départ, According to the present invention, an embodiment of the process for manufacturing a stable injectable solution of immunoglobulins and organic iron intended for the treatment of young piglets is as follows: a starting immunoglobulin solution is prepared,

titrée à 10% en poids, à partir d'immunoglobulines hétérologues bovines, composée des trois classes: IgG, IgM et IgA, qui contiennent les gammaglobulines anticorps spécifiques aux séroty- 30 pes à'Escherichia coli pathogènes du porcelet 0149 K 91 (B) 88 (L); 08 K 87 (B) 88 (L); 0147 K 89 (B) 88 (L); 0 (ZH 832) K (ZH 832) (B) 88 (L); 0141 K 85 ab (B); 0141 K 85 ab (B) 88 (L); 0141 K 85 ac (B); 0139 K 82 (B); 0138 K 81 (B). Ces immunoglobulines proviennent d'une combinaison d'immunoglobulines sériques récoltées sur des 35 bovins hyperimmunisés avec les antigènes des sérotypes d'£. coli choisis, ainsi que d'immunoglobulines colostrales provenant de bovins immunisés en période de gestation avec les mêmes antigènes. titrated at 10% by weight, from heterologous bovine immunoglobulins, composed of the three classes: IgG, IgM and IgA, which contain the gamma-globulin specific antibodies against Escherichia coli pathogens of piglets 0149 K 91 (B) 88 (L); 08 K 87 (B) 88 (L); 0147 K 89 (B) 88 (L); 0 (ZH 832) K (ZH 832) (B) 88 (L); 0141 K 85 ab (B); 0141 K 85 ab (B) 88 (L); 0141 K 85 ac (B); 0139 K 82 (B); 0138 K 81 (B). These immunoglobulins come from a combination of serum immunoglobulins harvested from cattle hyperimmunized with antigens of the £ serotypes. selected coli, as well as colostral immunoglobulins from cattle immunized during gestation with the same antigens.

A part les immunoglobulines, cette solution peut encore contenir de la transferrine et/ou de la lactoferrine. Besides immunoglobulins, this solution may also contain transferrin and / or lactoferrin.

On prépare la deuxième solution de départ à partir d'une solution stérile de fer dextran, tel qu'il est connu dans le commerce sous les noms de Ferran 100, Ferrofax, Imferon, et Fervatol. A la solution de fer dextran choisie, que l'on a ajustée à environ 10% en poids de fer, on ajoute encore 7500 gammas de vitamines B12 par 100 ml. Il est avantageux d'utiliser du fer dextran hydrogéné au lieu de fer dextran ordinaire. The second starting solution is prepared from a sterile iron dextran solution, as it is known commercially under the names of Ferran 100, Ferrofax, Imferon, and Fervatol. To the chosen iron dextran solution, which has been adjusted to approximately 10% by weight of iron, an additional 7,500 gamma vitamins B12 are added per 100 ml. It is advantageous to use hydrogenated dextran iron instead of ordinary dextran iron.

On amène ces deux solutions à la température normale du laboratoire, soit environ 20°C, et on y ajoute un conservateur, par exemple 0,4% en poids de phénol, ainsi qu'un tampon tris-(hydroxyméthyl)aminométhane, des phosphates, ou autres modificateurs de pH tels que HCl et NaOH. These two solutions are brought to normal laboratory temperature, approximately 20 ° C., and a preservative, for example 0.4% by weight of phenol, is added thereto, as well as a tris- (hydroxymethyl) aminomethane buffer, phosphates. , or other pH modifiers such as HCl and NaOH.

On mesure ensuite deux volumes de la solution d'immunoglobulines et on y introduit stérilement, lentement et sous légère agitation, tout en contrôlant le pH, un volume de la solution de fer dextran. Il est important d'ajouter le fer aux immunoglobulines, et non l'inverse, et d'ajuster si nécessaire le pH au fur et à mesure, de telle sorte qu'il reste dans une fourchette de 6 à 6,25, ce qui est également valable pour le pH final de la solution. Two volumes of the immunoglobulin solution are then measured and a volume of the iron dextran solution is introduced into it sterile, slowly and with gentle stirring, while controlling the pH. It is important to add iron to the immunoglobulins, not the other way around, and if necessary adjust the pH as you go, so that it stays in the range of 6 to 6.25, which also applies to the final pH of the solution.

La solution finale que l'on obtient par le procédé selon l'invention contient environ 6% en poids d'immunoglobulines et environ 3,3% en poids de fer sur dextran, 2500 gammas de vitamines B12 par 100 ml et, enfin, 4% en poids de phénol. The final solution which is obtained by the process according to the invention contains approximately 6% by weight of immunoglobulins and approximately 3.3% by weight of iron on dextran, 2500 gammas of vitamins B12 per 100 ml and, finally, 4 % by weight of phenol.

Les procédés de dosage des immunoglobulines ainsi que du fer sont connus. On utilisera par exemple pour les immunoglobulines, la méthode quantitative d'immunoprécipitation radiale, dérivée de la technique de Fahy, et la méthode d'agglutination rapide pour les titres spécifiques. The methods for assaying immunoglobulins as well as iron are known. We will use for example for immunoglobulins, the quantitative method of radial immunoprecipitation, derived from the Fahy technique, and the rapid agglutination method for specific titers.

La fixation du fer sur les lactoferrines et les transferrines peut être contrôlée par électrophorèse, la coloration brune du fer apparaissant dans la zone gamma à la limite des globulines bêta. The binding of iron to lactoferrins and transferrins can be checked by electrophoresis, the brown coloration of iron appearing in the gamma zone at the limit of beta globulins.

L'utilisation pratique de la solution obtenue selon le procédé objet de la présente invention consiste par exemple en l'injection systématique de 3 ml de la solution par voie sous-cutanée derrière l'oreille ou par voie intramusculaire dans la cuisse des porcelets. The practical use of the solution obtained according to the process which is the subject of the present invention consists, for example, in the systematic injection of 3 ml of the solution by the subcutaneous route behind the ear or by the intramuscular route into the thigh of the piglets.

Cette injection unique aura lieu dans les sept premiers jours de vie, de préférence vers le 4e ou 5e j. This single injection will take place in the first seven days of life, preferably around the 4th or 5th day.

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Claims

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1. Method for manufacturing a stable injectable solution of im-munoglobulins and organic iron, intended to prevent and combat iron deficiency anemia and to increase resistance to infectious diseases of young mammals, including humans, characterized by the fact that a sterile solution of mammalian immunoglobulins and a sterile solution of dextran iron are mixed in suitable concentrations and proportions and pH conditions so as to obtain the maximum stable concentration of iron obtainable by aqueous medium, with the expected pH and immunoglobulin concentration.

2. Method according to claim 1, characterized in that one starts from a solution of 5 to 16% by weight of immunoglobulins, into which is poured slowly and with stirring a solution containing 4 to 12% by weight of iron in the form of dextran iron, the two starting solutions being brought to a pH of 6.

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3. Method according to claims 1 and 2, characterized in that the pH is maintained between 6 and 6.25 by means of HCl and / or NaOH.

4. Method according to claims 1 and 2, characterized in that to maintain the pH degree is added a buffer.

5. Method according to claims 1 and 2, characterized in that to maintain the pH level is added a tris- (hydroxymethyl) aminomethane buffer.

6. Method according to claims 1 and 2, characterized in that to maintain the pH level is added a phosphate buffer.

7. Method according to claims 1 and 2, characterized in that one adds in each of the two solutions a preservative.

8. Process according to claims 1 and 7, characterized in that 2.8 to 6% o by weight of phenol are added to each of the two solutions.

9. Method according to claims 1 and 7, characterized in that one adds in each of the two solutions 2 to 5%> by weight of formalin.

10. Method according to claims 1 and 7, characterized in that one adds in each of the two solutions thimerosal in concentration of 0.1 to 0.2% by weight.

11. Process according to claims 1 and 2, characterized in that hydrogenated dextran iron is used instead of ordinary dextran iron.

12. Method according to claims 1 and 2, characterized in that an immunoglobulin solution is used, in which the lactoferric fractions of lactic or colostral origin and / or transferrin of origin have been left serum.

13. Method according to claim 1, characterized in that one uses immunoglobulins of bovine, porcine, ovine or human origin, depending on the destination of the product.

14. Method according to claim 1, characterized in that a solution of group B vitamins is added during manufacture.

15. The method of claim 1, characterized in that one adds, during manufacture, traces of Zn, Cu and / or other trace elements.

16. injectable solution of immunoglobulins and organic iron obtained by the method according to claim 1.