Cette invention concerne la préparation de composés de quinoxaline-dioxydes substitués, en particulier des di-N-oxydes de 3-méthyl-quinoxaline substitués en 2 par un groupement hétérocyclique et des esters alcoyliques d'acides 3-mé thyl-quinoxaline-di-N-oxyde-2-carboxyliques, substitués sur la partie alcoyle de l'ester par des groupements amine, ou amine mono ou di-substitué, ainsi que leurs sels d'addition, possédant une activité antibactérienne sur les micro-organismes pathogènes, ainsi que des méthodes pour favoriser le gain de poids et la consommation alimentaire des animaux.
Les efforts entrepris pour découvrir des agents antibactériens plus utiles ont conduit au développement d'une grande variété de composés organiques comprenant de nombreux di
N-oxydes de quinoxaline. Landquist et al, J. Chem. Soc. 2052 (1956) à la recherche de composés à activité antibactérienne ou antiprotozoaires ont rendu compte de la préparation de di-N-oxydes de 2-méthyl- et de 2,3-diméthyl-quinoxaline dans lesquels les groupements méthyle étaient transformés en groupements tels que bromométhyl-, acétoxyméthyl- et hydroxyméthyl-, y compris le di-N-oxyde de 3-méthyl-2-carbéthoxy-quinoxaline. Cependant, aucune utilité n'est attribuée à aucun de ces composés.
Le brevet français No M3717, délivré le 3 janvier 1966, révèle des di-N-oxydes de 2-quinoxaline carboxamide dans lesquels le groupement carboxamide peut être substitué par un groupement alcoyle, alcoyle substitué, aryle, aralcoyle, ou cycloalcoyle. Les esters substitués d'acides 2-quinoxalinecarboxyliques correspondants sont également révélés, mais leur structure n'est pas indiquée. Il est fait état de leur utilité en thérapeutique humaine comme agents antituberculeux, antibactériens, anticancéreux, antiviraux et antiprotozoaires.
Le brevet belge No 697976, délivré le 3 novembre 1967, décrit divers dérivés N-substitués de di-N-oxyde de 3-méthyl2-quinoxaline-carboxamide dans lesquels le substituant de l'azote est un radical phényle, phényle substitué, dodécyle ou éthyle, ainsi que le di-N-oxyde de 3-méthyl-2-carbéthoxyquinoxaline correspondant. Il leur est attribué un intérêt comme intermédiaires pour la préparation d'agents protecteurs de la végétation et d'agents pharmaceutiques.
Les brevets belges Nos 721724, 721725, 721726, 721727 et 721728, publiés le 2 avril 1969, décrivent divers dérivés N-substitués de di -N-oxyde de 3 -méthyl-2-quinoxaline-carboxamide dans lesquels le substituant de l'azote est un groupement hydroxyalcoyle, alcoxyalcoyle inférieur, carbalcoxyalcoyle, mon o- alcoyaminoalcoyle, ou di(alcoyl)aminoalcoyle, comme agents antibactériens.
On a maintenant découvert que les 1,4-dioxydes de quinoxaline substitués en 2 par un groupement hétérocyclique et leurs intermédiaires, ayant les formules respectives (I) et (IIA):
EMI1.1
et dans lesquelles X est un substituant en position 6 ou en position 7 et est l'hydrogène, le chlore, le brome, le fluor ou un
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groupement méthyle, méthoxy ou trifluorométhyle; Y est O,
S, ou NRo où R,3 est l'hydrogène ou un radical alcoyle inférieur;
A est un radical alcoylène de 2 à 5 atomes de carbone qui place au moins 2 atomes de carbone entre les atomes N et Y auxquels il est relié; ainsi que les sels d'addition d'acides non toxiques des composés dans lesquels Y est NRo, ou bien des composés de formule (IIA) qui sont in vitro des agents antibactériens efficaces à large spectre. De plus, tous les composés décrits ici sont in vivo des agents antibactériens valables à large spectre, et/ou sont des promoteurs efficaces de la croissance des animaux notamment des porcs. Une telle activité antibactérienne à large spectre est en contradiction avec l'activité Gram-négative manifestée par la plupart des 1,4dioxydes de quinoxaline qui sont couramment disponibles.
Plus encore, les composés de formule (II) sont utiles comme intermédiaires pour la synthèse d'autres agents antibactériens, ce qui sera décrit ci-dessous.
Par le terme alcoyle inférieur , tel qu'il est utilisé ici, on entend les groupements alcoyle qui contiennent de un à quatre atomes de carbone, car les composés qui portent de tels groupements sont commodément préparés à partir de produits de départ qu'il est facile de se procurer.
Les substituants de la fraction benzène soudée des composés ci-dessus, peuvent varier dans une large mesure. Par exemple, au moins l'un des substituants suivants peut être présent: hydrogène, alcoyle inférieur, alcoxy inférieur, chlore, brome, fluor, trifluorométhyle, di(alcoyle inférieur)amine, amine, carboxy, carbamyle, carbo(alcoxy inférieur), (alcoyle inférieur)mercapto, (alcoyle inférieur)-sulfoxy, (alcoyle inférieur)sulfonyle, sulfonamide et N,N-di(alcoyle inférieur)sulfonamide. Les positions préférentielles sur le cycle benzénique soudé sont les positions 6 et 7. Un dérivé à substituant unique, c'est-à-dire à substituant en 6 ou en 7, est habituellement considéré comme plus intéressant qu'un dérivé 6.7-di- substitué pour des raisons d'économie quant aux produits de départ utilisés.
Les substituants préférés. pour des raisons d'économie et/ou en raison de leur effet favorable sur l'ac activité, sont l'hydrogène, le chlore et le fluor.
Sont uniques parmi les composés préparés selon l'invention, en raison de leur activité remarquable à large spectre et/ou de leur activité appréciable pour favoriser la croissance chez les porcs, les composés de formule (I) dans laquelle Y est O. NH ou N(alcoyle inférieur); X est l'hydrogène ou le chlore; et A est le groupement éthylène ou triméthylène; ainsi que les composés de formule (IIA) dans laquelle X est l'hydrogène ou le chlore, et A est un radical alcoylène ayant 2 ou 3 atomes de carbone.
A signaler que les groupements alcoylène ayant plus de cinq atomes de carbone et qui placent de deux à cinq atomes de carbone dans le noyau hétérocyclique entre les deux hétéro-atomes auxquels ils sont reliés, sont également efficaces.
On prépare les composés de formule (I) dans laquelle Y est NR1 ou S, en faisant réagir un 1,4-dioxyde de quinoxaline substitué par un groupement X et substitué en 2 par un grou pement cyano-3 -CH8, avec une thioalcoylamine (H2N-A-SH), selon des méthodes connues. Sinon, on transforme le 1,4dioxyde de quinoxaline substitué par un groupement X et substitué en 2- par un groupement 2-cyano-3-CH.l, en un chlorhydrate d'imido-éther que l'on fait ensuite réagir avec l'alcoylènediamine ou la thioalcoylamine appropriée de façon à obtenir le composé cyclique correspondant de formule (I).
Ainsi que s'en rendra compte l'homme de l'art, les réactions susmentionnées de préparation des composés de formule (I) dans laquelle Y est NR1, conduisent à la formation du chlorhydrate du produit cyclisé.
Cette méthode donne l'isomère 6 et l'isomère 7 des composés dans lesquels X est autre que l'hydrogène du fait de l'existence d'un équilibre dynamique et tautomère dans le benzofuroxane X substitué de départ. On récupère les isomères, qui forment en fait un mélange d'isomères, par des méthodes connues de l'homme de l'art. Dans nombre des préparations décrites ici un produit solide, souvent cristallin, se sépare du mélange réactionnel. Le solide semble se composer surtout de l'un des isomères, lequel isomère peut être purifié par recristallisation répétée dans un solvant approprié jusqu'à avoir un point de fusion constant.
L'autre isomère, celui qui se trouve en quantité la plus faible dans la substance solide, constitue le produit prédominant dans la liqueur mère. On peut l'en récupérer par des méthodes connues de l'homme de l'art, comme par exemple par évaporation de la liqueur mère et cristallisation répétée du résidu jusqu'à obtenir un produit à point de fusion constant. Sinon. on peut extraire le mélange réactionnel à l'aide d'un solvant approprié, soit avant soit après évaportion à sec, et purifier encore la substance extraite, qui contient les deux isomères, par recristallisation.
L'identification des isomères n'a pas été terminée. Les deux isomères d'un composé donné présentent cependant le même type d'activité, par exemple comme promoteurs de la croissance des animaux ou comme agents antibactériens, à un degré appréciable.
On prépare les sels d'addition d'acides des composés de formule (I) dans lesquels Y est -NR1, par des méthodes bien connues de l'homme de l'art. Une méthode commode consiste à dissoudre la base libre dans un solvant approprié. par exemple acétone, eau, alcool aliphatique inférieur (éthanol, isopropanol) contenant l'acide voulu. ou bien auquel on ajoute par la suite l'acide voulu. On récupère les sels par filtration, précipitation à l'aide d'un non-solvant. par évaporation du solvant ou bien, dans le cas de solutions aqueuses, par lyophilisation. De cette manière. on peut préparer le sulfate. le chlorhydrate, le bromhydrate, le nitrate. le phosphate, l'acétate, le propionate. le butyrate. le citrate. le gluconate.
le benzoate. le pamoate, I'amsonate, le tartrate, le 3-hydroxy2-naphtoate. le sulfosalicylate. et autres sels.
L'identification des isomères n'a pas été terminée. Les deux isomères d'un composé donné présentent cependant le même type d'activité, par exemple comme promoteurs de la croissance des animaux ou comme agents antibactériens.
On synthétise les composés de formule (IIA) à partir des composés de formule (I) dans lesquels Y est O, selon le sché
EMI2.1
<tb> ma <SEP> suivant: <SEP> O
<tb> <SEP> f\ <SEP> /20X
<tb> X <SEP> -e
<tb> <SEP> H0+
<tb> <SEP> 'I,'
<tb> <SEP> o
<tb>
EMI2.2
L'hydrolyse de la fraction oxacyclique susmentionnée, en position 2 du 1,4-di-N-oxyde de 3-alcoylquinoxaline, s'effectue à l'aide d'un acide approprié, tel que l'acide bromhydrique, chlorhydrique, phosphorique ou sulfurique dans un système eau-solvant miscible à l'eau tel que le système méthanol-eau ou éthanol-eau. En général, on utilise un excès double à quintuple dudit acide pour faciliter la réaction. On réalise l'hydrolyse à des températures de 0 à 500 C, I'intervalle préféré étant de 25 à 350 C, et pendant une durée de réaction de 15 minutes à 2 heures.
Le processus d'élaboration consiste à éliminer l'excès d'eau, de solvant et d'acide sous pression réduite, puis à triturer le sel résultant avec un solvant approprié, tel que l'acétate d'éthyle ou l'isopropanol. On a intérêt à utiliser pour l'hydrolyse le même acide que celui que l'on désire retrouver dans le sel du produit final. Par exemple, si on désire obtenir le chlorhydrate, on emploie l'acide chlorhydrique, si l'on désire le sulfate on emploie l'acide sulfurique, etc.
Les exemples d'acides qui donnent des anions pharmaceutiquement acceptables sont les acides chlorhydrique. bromhydrique, iodhydrique, nitrique, sulfurique ou sulfureux.
phosphorique, acétique. lactique, citrique, tartrique, succinique, maléique et gluconique.
Comme déjà indiqué. les di-N-oxydes de quinoxaline préparés selon la présente invention sont tous aisément adaptés à l'utilisation thérapeutique comme agents antibactériens et comme promoteurs de croissance. Un composé type intéressant de cette série comprend: le 1,4-dioxyde d'ester 2-aminoéthylène d'acide.
Pour l'utilisation in vitro, pour l'application topique par exemple, il sera souvent commode de formuler le produit choisi avec un porteur pharmaceutiquement acceptable tel qu'une huile végétale ou minérale ou une crème émolliente.
De même. on peut le dissoudre ou le disperser dans des porteurs ou des solvants liquides tels que l'eau, un alcool, un glycol ou un mélange de ces derniers, ou bien dans d'autres milieux inertes et pharmaceutiquement acceptables c'est-à-dire dans les milieux qui n'ont pas d'effet nocif sur l'ingrédient actif. A cette fin, il sera généralement acceptable d'utiliser des concentrations en ingrédients actifs d'environ 0.01 pour cent à environ 10 pour cent en poids de la composition totale.
Pour déterminer l'activité in vitro d'un antibiotique, on détermine la sensibilité des différents micro-organismes à un antibiotique selon la technique communément reconnue de dilution en série au demi. Les concentrations finales de composé vont de 100 ug par ml dans le premier tube à 0.19 ,"g par ml dans le deuxième tube. L'inoculum se compose de 0,5 ml d'une dilution 1 X 10-s d'une culture
normalisée. Le volume final dans chaque tube ou coupelle dans la capsule DisPoso est de 1,0 ml. On fait incuber
les tubes à 37" C pendant approximativement 24 heures.
Le
milieu utilisé est le milieu synthétique de Witkins ou une
Infusion de Codeur et de Cervelle (lac). La sensibilité (Con
centration inhibitrice minimale ou (CIM) de l'organisme
d'essai est considérée comme mise en évidence par l'absence
de turbidité macroscopique.
De plus, les composés décrits ici manifestent une activité à large spectre utile, c'est-à-dire une activité aussi bien contre les bactéries Gram-négatives que Gram-positives. en opposition à l'activité Gram-négative habituelle des di-N-oxydes de quinoxaline. De plus, les composés de la présente invention sont actifs in vivo et sont notamment utiles comme promoteurs de la croissance des animaux, en particulier pour les porcs et la volaille.
Lorsqu'on les utilise in vivo à cette fin, on peut administrer ces composés nouveaux par voie orale ou parentérale, par exemple par injection sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse, à une dose d'environ 1 mg/kg à environ 100 mg/kg de poids corporel. Les véhicules appropriés pour l'injection parentérale peuvent être soit aqueux comme l'eau, une solution saline isotonique, une solution dextrose isotonique, une solution de Ringer. soit non aqueux comme les huiles grasses d'origine végétale (graine de coton, cacahuètes, maïs, sésame), le diméthylsulfoxyde, et autres véhicules non aqueux qui ne nuisent pas à l'efficacité thérapeutique de la préparation et qui ne sont pas toxiques au volume ou à la proportion utilisé (glycérol, propylène glycol, sorbitol et diméthylacétamide).
On détermine l'efficacité in vivo des composés de la présente invention d'après leur activité antibactérienne sur les infections aiguës chez les souris. On produit les infections expérimentales aiguës par inoculation intrapéritonéale d'une culture normalisée en suspension soit dans de la mucine gastrique de porc soit dans un bouillon. Une brève discussion des mots culture normalisée semblerait bénéfique. Afin d'obtenir des résultats reproductibles avec un composé d'essai il est nécessaire de déterminer dans la mesure du possible les différentes variables qui peuvent intervenir dans ce type d'essai. Un organisme de grande virulence, utilisé en quantité assez grande, peut faire paraître inactif presque n'importe quel médicament. D'autre part, un inoculum ne pouvant produire une différence mesurable entre des groupes traités et non traités est tout aussi insatisfaisant.
On entretient normalement les cultures de réserve d'organismes d'essai sous forme de cultures en tubes inclinés ou bien dans des milieux liquides. Quand on ne les utilise pas de façon routinière on les maintient à la température du réfrigérateur ou bien dans un état lyophilisé. Quand il devient nécessaire d'utiliser une culture dans des essais de protection des animaux on met la culture en suspension dans un volume de solution saline ou de bouillon, et on mesure la densité de la suspension à l'aide d'un colorimètre photo-électrique. A partir de cette culture de réserve, on prépare des dilutions au dixième. On inocule chaque dilution à une série de souris afin de déterminer la Dol100, la DLIoo étant la concentration minimale d'organismes nécessaire pour produire une mortalité de 100 pour cent.
Par exemple, si l'on constatait qu'une dilution de 10-1 constitue la concentration minimale d'organismes qui produit une mortalité de 100 pour cent, on utiliserait probablement un inoculum de 10-8 pour les expériences d'évaluation du médicament. Ceci signifie que l'on utilise une dose égale à environ dix fois la DL100, ou à dix fois la dose minimale nécessaire pour tuer les souris. Un tel essai comporterait également l'utilisation d'animaux témoins qui reçoivent un inoculum de 10-1, 10-, et éventuellement 10-c.
Ces dilutions sont prévues à titre de contrôle au cas où une variation de virulence se produirait. Ayant au préalable déterminé, par le titrage de virulence, que 10-1 constituait la dilution maximale à effet mortel, on s'attend naturellement à ce que ces animaux meurent, habituellement dans les 24 heures.
Chaque organisme possède sa propre concentration d'inoculum normalisé. Certains, comme le Staphylococcus. peuvent être utilisés à 10-1, tandis que d'autres, comme le Streptococcus, nécessitent un passage hebdomadaire sur animaux pour conserver leur virulence.
Quand on évalue l'efficacité d'un antibiotique d'après une seule dose, on administre habituellement cette dose 0,5 heure après avoir inoculé aux souris la concentration léthale d'organismes. Dans un plan de traitement de ce type, on maintient habituellement les souris sourvivantes pendant quatre jours après le traitement et on calcule le pourcentage de souris vivantes.
Les autres méthodes d'administration des produits utiles de cette invention aux animaux comprennent le mélange aux aliments des animaux, la préparation de concentrés et de suppléments alimentaires et de solutions ou de suspensions diluées, par exemple une solution à 0,1 pour cent, destinée à être bue.
Il est surprenant que l'addition de faibles proportions des di-N-oxydes de quinoxaline qui sont décrits ici, au régime d'animaux sains, qu'il s'agisse de ruminants ou de non-ruminants, de telle sorte que ces animaux reçoivent le produit en une période de temps prolongée. à une dose d'environ 0,1 mg/kg à environ 100 mg/kg de poids corporel par jour, en particulier au cours d'une partie prépondérante de leur période de croissance active, conduise à une accélération du rythme de croissance et améliore le rendement des aliments (nombre de kg d'aliments nécessaires pour produire un gain de poids de 1 kg). Sont inclus dans ces deux catégories d'animaux la volaille (poulets, canards, dindes), le bétail, les moutons, les chiens, les chats, les porcs, les rats, les souris, les chevaux. les chèvres, les mules. les lapins, les visons, etc.
Les effets bénéfiques sur le rythme de croissance et le rendement des aliments sont supérieurs à ceux que l'on obtient normalement avec des régimes nutritifs complets contenant tous les éléments nutritifs. vitamines, minéraux, et autres facteurs réputés nécessaires à la croissance saine maximale de tels animaux. Les animaux atteignent ainsi une taille commercialisable plus rapidement et avec moins d'aliments.
Les compositions alimentaires ici décrites se sont avérées particulièrement intéressantes et remarquables dans le cas des porcs. Dans certains cas le degré de réaction peut varier en fonction du sexe des animaux. Les produits peuvent bien entendu être administrés dans un constituant des aliments ou bien être mélangés uniformément dans un aliment mixte; autrement, comme signalé ci-dessus, on peut les administrer dans une quantité équivalente via la ration d'eau de l'animal.
Il faut noter que divers constituants alimentaires peuvent être utiles dans les aliments équilibrés du point de vue nutritif.
On peut préparer une composition alimentaire pour animaux quelconque de façon à ce qu'elle comprenne l'équilibre nutritionnel habituel d'éléments énergétiques, de protéines, de mi néraux et de vitamines ainsi qu'un ou plusieurs des di-N-oxydes de quinoxaline décrits ci-dessus. Certains des différents constituants sont couramment des graines comme les graines moulues et les sous-produits de graines; des substances à base de protéines animales. telles que les sous-produits de la viande et du poisson; des mélanges vitaminés, par exemple des mélanges de vitamine A et de vitamine D, des suppléments à base de riboflavine et d'autres complexes de la vitamine B; et la farine d'os, la pierre à chaux et autres composés inorganiques qui apportent les minéraux.
Les proportions relatives des présents composés dans les aliments et les concentrés d'aliments peuvent varier quelque peu. suivant le composé. I'aliment avec lequel il est employé et l'animal qui le consomme. On a intérêt à combiner ces substances à des porteurs comestibles dans des proportions relatives telles qu'elles forment des prémélanges ou des concentrés que l'on peut aisément mélanger à des aliments courants. équilibrés du point de vue nutritif, ou bien que l'on peut utiliser en tant que tels comme additifs aux alimentations normales.
Pour la préparation des concentrés on peut utiliser une grande variété de porteurs, y compris les suivants: farine huileuse de soja, farine de gluten de maïs, farine huileuse de coton, farine de graines de tournesol. farine huileuse de lin, farine de mais. pierre à chaux et farine d'épis de maïs. Le porteur facilite la répartition uniforme des substances actives dans l'aliment fini auquel le concentré est mélangé. Le concentré peut être revêtu en surface, si on le désire, de diffé- rentes substances protéinées, ou bien de cires comestibles, telles que la zéine, la gélatine, la cire microcristalline et les matières similaires de façon à former une pellicule protectrice qui enveloppe les ingrédients actifs.
On se rendra compte que les proportions de la préparation médicamenteuse dans de tels concentrés peuvent varier largement car on peut ajuster la quantité de substances actives dans l'aliment fini en mélangeant la proportion appropriée de concentré à l'aliment de façon à obtenir le degré d'enrichissement voulu.
Dans la préparation des concentrés de grande puissance, c'est-à-dire des prémélanges, convenables pour le mélange par les fabricants d'aliments dans la production d'aliments ou de concentrés finis de puissance plus faible, la teneur en médicament peut aller d'environ 0,22 à 110 g par kg de concentrès. Les concentrés de grande puissance peuvent êtré mélangés par le fabricant d'aliments à des porteurs protéinés, tels que la farine huileuse de soja, de façon à donner des suppléments concentrés qui conviennent à l'alimentation directe des animaux. La proportion du médicament dans ces suppléments peu varier d'environ 0.22 à 22 g par kg de supplément. On obtient un concentré particulièrement utile en mélangeant 4.4 g de médicament à 1 kg de pierre à chaux ou à 1 kg de mélange 1/1 de pierre à chaux-farine huileuse de soja.
On peut ajouter aux concentrés d'autres suppléments diététiques, tels que vitamines, minéraux, etc., dans les cas appropriés.
On peut également ajouter aux aliments pour animaux les concentrés décrits de façon à produire un aliment fini, équilibré du point de vue nutritif, contenant d'environ 5,5 à environ 140 g des composés décrits ici par tonne d'aliment fini.
Dans les cas des ruminants, I'aliment fini doit contenir des protéines, des matières grasses, des fibres, des glucides, des vitamines et des minéraux, tous en quantité suffisante pour satisfaire aux besoins nutritionnels de l'animal auquel l'aliment est destiné. La plupart de ces substances se trouvent dans les denrées alimentaires d'origine naturelle. telle que la luzerne séchée ou la farine de luzerne, le mais cassé, I'avoine entière, la farine huileuse de soja, I'ensilage de mais, les épis de mais broyés, le son de blé et la mélasse sèche. On ajoute souvent la farine d'os, de la pierre à chaux, du sel iodé et des traces de minéraux de façon à introduire les minéraux nécessaires et l'urée qui apportent un complément d'azote.
Comme le sait l'homme de l'art, les types de régime sont extrêmement variables suivant le but visé, le type d'opération d'alimentation, I'espèce considérée, etc. De régimes spécifiques pour différents objectifs sont énumérés par Morrison en appendice de Feeds and Feeding , The Morrison Publishing Company, Clinton, Iowa, USA.
Dans le cas d'animaux non ruminants, tels que les cochons, un aliment approprié peut contenir d'environ 50 à 80 pour cent de graines, de 3 à 10 pour cent de protéines animales, de 5 à 30 pour cent de protéines végétales, de 2 it 4 pour cent de minéraux ainsi que des sources vitaminées supplémentaires.
En pratique, on détermine l'effet promoteur de la croissance chez les porcs, par exemple, selon la méthode dans laquelle de jeunes cochons âgés de 5 à 6 semaines et pesant au départ environ 9,75 kg en moyenne, sont entretenus avec une consommation ad libitum d'eau et de formulation alimentaire composée de maïs jaune broyé (58,1 /o), de farine de soja (19.6 O/o), de farine de luzerne (2.0 O/o), de lait écrémé sec (5,0 /o), de petit lait sec (10.0 solo), de matières grasses ani- males stabilisées (2,5 O/o), de pierre à chaux (0,6 O/o), de phosphate bicalcique (1.1 O/o),
de sel iodé (0,5 /o), de prémélange de vitamines PPM No 5 (0,5 O/o), de Delamix quadruple (0,05 /o), et de carbonate de zinc (173 g/tonne de mélange).
On divise les cochons en groupes de 32 cochons chacun et on les garde pendant une période pré-expérimentale de trois jours avant de commencer l'expérience. On ajoute les di-Noxydes de quinoxaline de la présente invention aux aliments à raison de 55 g de composé par tonne d'aliment. Au bout de 28 jours on mesure l'efficacité desdits composés ajoutés sur la stimulation de la croissance. par comparaison de la croissance des animaux traités, exprimée en gain de poids, à celle du groupe témoin non traité, auquel on attribue arbitrairement un indice de 100 pour le gain de poids. Par exemple, si un composé provoque une croissance supérieure de 23 O/o à celle du groupe témoin, qui a un indice de 100, on lui attribue une valeur de 123, etc.
L'effet d'un régime complémenté sur la stimulation de la croissance chez d'autres espèces d'animaux, à l'aide de doses et de formulations alimentaires appropriées, est évalué d'une manière analogue.
Exemple I:
Chlorhydrate
de l'acide 3-méthyl-2-quinoxalinecarboxylique,
ester 2-aminoéthylique, I,4-dioxyde
A une solution de 2 ml d'eau et de 8 mi d'éthanol on ajoute 0.98 ml d'acide chlorhydrique 12 N (10 mmoles), puis 1.25 g (5 mmoles) de 1,4-dioxyde de 2-(2-oxazolin-2-yl)-3méthyl-quinoxaline. On laisse la solution jaune résultante sous agitation à la température ambiante pendant 30 minutes, au bout desquelles on la concentre à sec sous pression réduite. On met le solide résultant en suspension dans l'acétate d'éthyle et on filtre, 1,26 g, p.f. 186-1880 C.
Analyse :
Calculé pour Cl 404NsCl: C 48,8 H 4,7 N 14,0
Trouvé: C 47,8 H 4,8 N 13,9
Exemple ll:
On répète le mode opératoire de l'exemple I, en utilisant les matières premières substituées de manière appropriée, pour obtenir les composés suivants:
EMI4.1
X A
H -(CH,) -
EMI4.2
H CH. - (CH5)3 -
CH. - CH ,CH -
EMI4.3
CH3 -(CH2)3 OCH - (C)4 -
OCH3 -CH2CH2
OCH3 -CH2C(CH3)2CH2
EMI5.1
F -CH2CH2
EMI5.2
Cl -CH2CH2 C1 - (CH)4 -
EMI5.3
Br -CH2CH2 CE, - CH2CH2 -
EMI5.4
Exemple Il (exemple de référence):
:
En utilisant la technique de dilution en série (dilution par deux) précitée, on présente l'activité in vitro de quelquesuns des produits de la présente invention vis-à-vis de Staphy- lococcus aureus et de Escheria coli. La benzylpénicilline (sel de K) a donné dans les essais pour la CIM (concentration inhibitrice minimale) des valeurs de 0,156 et > 100 vis-à-vis de S. aureus et de E. coli, respectivement.
EMI5.5
EMI5.6
<tb>
<SEP> X <SEP> A <SEP> Z' <SEP> S. <SEP> aureus <SEP> Ecoli
<tb> <SEP> O
<tb> <SEP> H <SEP> -(CH2)2- <SEP> O-CCH8 <SEP> 12,5 <SEP> 50
<tb> <SEP> O
<tb> C1 <SEP> -(CH2)2- <SEP> O-CCH5 <SEP> 3,1 <SEP> 100
<tb> H <SEP> - <SEP> (CH2)2 <SEP> - <SEP> N(CHs)2 <SEP> - <SEP> HCI <SEP> 100 <SEP> 6,25
<tb> Cl <SEP> -(CH2)2- <SEP> N(CH8)2.HCl <SEP> HCI <SEP> 12,5 <SEP> 12,5
<tb> H <SEP> - <SEP> (CH,)s <SEP> - <SEP> N(C2Hj)2' <SEP> HC1 <SEP> 100 <SEP> 12,5
<tb> C1 <SEP> -(CH2)2- <SEP> N(CsH5)2 <SEP> HC1 <SEP> 12,5 <SEP> 12,5
<tb> H <SEP> -(CHs)s-, <SEP> N(CHS)CSH5 <SEP> - <SEP> HCl <SEP> 100 <SEP> 12.5
<tb> H <SEP> -(CH)2- <SEP> N(CH,)2.HCl <SEP> HC1 <SEP> 200 <SEP> 12,5
<tb> H <SEP> -CH(CH8)CH2- <SEP> N(CH8)2.HCl <SEP> 200 <SEP> 100
<tb> Cl <SEP> - <SEP> CH(CH;3)CHa <SEP> - <SEP> N(CH5)2 <SEP> - <SEP> HCI <SEP> 25 <SEP> 200
<tb>
Exemple III:
:
En utilisant la méthode de détermination de l'activité in vivo décrite antérieurement, on a testé par voie orale le composé suivant vis-à-vis de Streptococcus pyogenes à 200 et 50 mg/kg et vis-à-vis de Escherichia coli à 100 et 25 mg/kg, les résultats étant donnés en pourcentage d'animaux qui ont survécu.
EMI5.7
Exemple IV (exemple de référence):
L'expérience suivante démontre quelle est l'efficacité des composés décrits ici pour protéger contre une infection systémique par Salmonella cholersuis var. Kunzendorf chez les porcs. On conditionne des jeunes porcs âgés de 6-8 semai nes, pendant 14 jours dans des locaux d'isolement et pendant toute la durée de l'étude on les entretient avec une ration basale constituée de mais jaune broyé (78,4%) de farine de
soja (15 %), de farine de luzerne (2%), de déchets d'os et de
viande (2,5 O/o), de calcaire (0,4 %), de phosphate bicalcique
(0a65 %), de sel iodé (0,5 O/o), de prémélange de vitamines
PPM No 5 (0,5 %), de Delamix quadruple (0,05 O/o), et de carbonate de zinc (mélange à 173 g/tonne).
A tous les porcs,
que l'on a divisés en groupe de 6, on fait une inoculation au jour 0 de 4 ml (approximativement 2,0 X 10,8 organismes) de la suspension d'inoculation de réserve. On effectue le traitement avec les quinoxaline-di-N-oxydes de la présente invention au jour 0 et au jour 1 en faisant une injection intramusculaire à des intervalles de 12 heures aux doses de 2,5 et 5 mg/kg. On calcule le pourcentage de mortalité dans chaque groupe au jour 10. On obtient les résultats suivants:
Médication O/o de mortalité
Infection, pas de traitement par le médi
cament (injection de placébo) . ...
. 83
Acide 3 -méthyl-2-quinoxal ine-carboxyli
que, ester 2-(acétyloxy)éthylique, 1,4
dioxyde, 2.5 mg/kg X 4.. 67
5,0 mg/kg X 4.. 17
Exemple V:
En utilisant le mode opératoire décrit précédemment pour déterminer l'accélération de la croissance chez les animaux on a essayé les quinoxaline-di-N-oxydes suivants à raison de 50 g/tonne d'aliment chez des porcs pendant une période de 28 jours et on a obtenu les résultats suivants:
EMI6.1
Indice de gain O/o de croissance
X A Z' de poids * de plus que le témoin
H -(CH2)2- NH2#HCl 139 39 * Témoin = 100.
Exemple VI (exemple de référence): 2-(2-Oxalin-2-yl)-3-méthylquinoxaline-1,4-dioxyde
On agite pendant 20 heures à la température ambiante une suspension de N-(2-chloroéthyl)-3-méthyl-2 quinoxalinecarboxamide-1,4-dioxyde (36.0 g) et de 500 ml d'une solution aqueuse de monométhylamine à 40 pour cent. Le réactif N (2-chloroéthyl) -3 -méthyl-2-quinoxalinecarboxamide- 1 ,4-di- oxyde se dissout lentement et le produit cyclisé cristallise dans le mélange. On filtre le mélange réactionnel, on le lave à l'eau, ensuite à l'acétone, et on le sèche pour obtenir 26,7 g de produit; p.f. 217-2180 C (rendement de 83 pour cent).
Exemple Vll (exemple de référence):
2-(5,6-D ihydro -411-1,3-oxazin-2 -yl) -méthylquinoxaline-
1,4-dioxyde
A une solution de dicétène (4,2 g) dans le chloroforme (75 ml) on ajoute du bromhydrate de 3-bromopylamine (10,4 g) dans l'eau (20 ml) à 0o C et on agite soigneusement le mélange. On ajoute alors une solution d'hydroxyde de sodium (2,0 g dans 10 ml d'eau) en 20 heures à 00 C et on agite le mélange pendant encore une heure à la température ambiante. On sépare la phase chioroformique, on la sèche sur sulfate de sodium anhydre et on l'évapore pour obtenir le N-(3 -bromopropyl)acétoacétamide sous forme d'un solide blanc.
On ajoute ensuite le N-(3-bromopropyl)acétoacétamide à une solution de benzofuroxane (6,8 g) dans l'éthanol (75 ml) et on fait passer un excès d'ammoniac gazeux dans la solution (jusqu'à ce que la solution soit saturée) tout en maintenant la température au-dessous de 300 C. On laisse le mélange réactionnel reposer pendant une nuit à la température ambiante, ensuite on le filtre pour obtenir le produit: 2,0 g (15,4 pour cent); p.f. 2180 C. lorsque le produit est recristallisé dans le méthanol.
Exemple Vlll:
Tosylate du 2-(2 -imidazolin-2-yl)-3-méthylquinoxaline-
1,4-dioxyde
On chauffe un mélange de 2-cyano-3-méthylquinoxaline- 1.4-dioxyde (10 g, 0,05 mole), d'éthylènediamine (3,3 g, 0,05 mole) et d'acide p-toluènesulfonique monohydraté (9,5 g, 0,05 mole) à 1600 C-1800 C pendant huit heures pendant lesquelles on note le dégagement d'ammoniac. On refroidit ensuite le mélange et on le recristallise dans le mélange méthanol-chloroforme.
On transforme le tosylate en base en traitant le sel dans l'eau par une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium (excès de 10 pour cent) et en extrayant l'amidine cyclique par l'acétate d'éthyle. On sèche les extraits faits à l'acétate d'éthyle (Na2SO4) et on évapore le solvant, pour obtenir la forme base libre du composé indiqué dans le titre.
Exemple IX:
Chlorhydrate du 2-2-(1 ,4,5,6-tétrahydropyrimidin-2 -yl)l-
3-méthylquinoxaline-1 ,4-dioxyde
On ajoute du chlorhydrate d'éthyl (3-méthyl-quinoxaline 2-formimidate)-1,4-dioxyde (14,7 g, 0,05 mole) à une solution de triméthylènediamine (3,7 g, 0,05 mole) dans l'éthanol (200 ml) à 00 C, on agite énergiquement le mélange, ensuite on le chauffe au reflux pendant une nuit. L'évaporation du mélange (sous pression réduite) à sec donne le produit désiré.
Le traitement du produit par un léger excès de solution aqueuse d'hydroxyde de sodium à 40 pour cent, à 50 C, donne la base libre que l'on extrait par l'éther. On sèche la solution éthérée et on l'évapore à sec pour récupérer la forme base libre du composé indiqué dans le titre.
En suivant les modes opératoires des exemples VIII et IX, on prépare les dérivés amidines cycliques énumérés ci-dessous en partant de l'alcoylènediamine et du 2-cyano-3-méthylquinoxaline-1,4-dioxyde substitué par X (exemple VIII), appropriés, ou du chlorhydrate de l'éthylimido-éther du 2-cyano 3-méthylquinoxaline-1,4-dioxyde substitué par X (exemple
IX).
EMI7.1
X A Rt Méthode
de l'exemple
CH3 -(CH2)3- H VIII
CF3 -(CH2)3- H VIII
H - (CH2) - n - C8H7 VIII
OCH3 -(CH2)3- n-C3H7 VIII CF, -(CH2)3- n - C3H7 VIII
Cl - (CH2);3 - i - C4Hg VIII
H -(CH2)4- n-C3H7 VIII
Cl -(CH2)4- n-C3H7 VIII
OCH3 -(CH2)4- n-C3H7 VIII
H -(CH2)5- H VIII
F -(CH2)5 - H VIII
CH3 - (CH2)5 - H VIII
H -(CH2)5- C2H5 VIII
Cl -(CH2)5- C2H5 VIII
OCH3 -(CH2)5- C2H5 VIII
F - (CH2)5 - C,i.H5 VIII
H -CH2C(CH3)2- H VIII
Cl -CH2C(CH3)2- H VIII
F -CH2C(CH3)2- H VIII
CH3 -CH2C(CH3)2- H VIII
H -CH2CH(C2H5)- H VTII
OCH3 -CH2CH(C2H5)- H VIII
CF3 -CH2CH(C2H5)- H VIII
H -CH2CH(C2H5)- CH3 VIII
F -CH2CH(C2H5)- CH3 VIII
OCH3 -CH2CH(C2H5)- CH3 VIII
H -CH2CH(C2H5)- n-C3H7 VIII
Cl - CH2CH(C2H5)- <RTI
ID=7.9> n - C3H7 VIII
H - CH(CH8)CH(CH8) - H IX
Cl - CH(CH8)CH(CH8) - H IX
CH3 - CH(CH8)CH(CH8) - H IX
OCH3 -CH(CH3)CH(CH3)- H IX
H - CH2CH(CH3)CH2CH2 - H VIII
OCH3 -CH2CH(CH3)CH2CH2- H VIII
F - CH2CH(CH3)CH2CH2 - H VIII
CF3 -CH2CH(CH2)CH2CH2- H VIII
H -CH(CH3)CH2 - H VIII
Cl -CH(CH3)CH2- H VIII
CF3 -CH(CH3)CH2- H VIII
H - C(CH3)2CH2- H IX
Cl - C(CH3)2CH2 - H VIII
H -CH2C(CH3)(C2H3) H VIII
F -CH2C(CH3)(C2H5) H VIII
OCH3 -CH2C(CH3)(C2H5) H VIII
H -CH2C(CH3)2CH2 - H VIII
Cl -CH2C(CH3)2CH2- H VIII
Exemple X:
:
2-[2-(5,6-Dihydro-4H-1,3-thiazin-2-yl)]
3-méthylquinoxaline-1,4-dioxyde
On chauffe sous reflux jusqu'à cessation du dégagement d'ammoniac un mélange de 2-cyano-3-méthylquinoxaline-l ,4- dioxyde (10 g. 0,05 mole), de chlorhydrate de 3-mercaptopropylamine (8.76 g, 0,053 mole) et d'éthanol absolu (50 ml). On refroidit le mélange à la température ambiante, on le verse dans de l'eau froide (250 ml) et on l'alcalinise dans l'hydrooxyde de potassium (6N). On extrait l'huile qui se sépare
Far l'éther, on sèche l'extrait éthéré sur sulfate de sodium anhydre et on l'évapore à sec pour obtenir le produit.
Exemple XI:
2-(2-Thiazolin-2-yl)-3méthylquinoxaline-1,4-dioxyde
A une solution de 2-mercaptoéthylamine (2,27 g, 0.02 mole) dans l'éthanol (100 ml) à 0 C on ajoute de l'éthyl (3-méthylquinoxaline-2-formimidate)-1,4-dioxyde (4,9 g, 0,02 mole).
On agite le mélange, on le chauffe au reflux pendant une nuit, ensuite on l'évapore à sec sous pression réduite pour obtenir le produit.
Préparation A:
Chlorhydrate d'éthyl(3-méthylquinoxaline
2-formimidate)-1,4-dioxyde
On sature avec de l'acide chlorhydrique sec une solution de 2-cyano-3-méthylquinoxaline-1,4-dioxyde (0.1 mole) dans l'éthanol sec (5,3 g, 0,12 mole) et l'éther sec (50 ml) tout en maintenant la température au-dessous de 100 C. Ensuite on agite le mélange pendant une nuit à la température ambiante sous atmosphère d'azote sec. On recueille le solide par filtration (on ajoute de l'éther au mélange réactionnel, si nécessaire, avant la filtration), on le lave à l'éther et on le sèche.
On prépare ainsi les composés suivants:
EMI7.2
X X
Cl CH3
Br OCH3
F CF,
En répétant ce mode opératoire mais en remplaçant l'éthanol par le méthanol, le n-propanol ou le n-butanol on obtient les imido-éthers d'alcoyle inférieur correspondants.
On obtient les imido-éthers libres en ajoutant le chlorhydrate à un excès de solution aqueuse de carbonate de potassium à 33 % en refroidissant bien et en agitant vigoureusement. On extrait l'imido-éther par l'éther, on sèche la solution éthérée et on l'évapore à sec.
De la même manière, on transforme les 2-cyano-3-alcoyl inférieur quinoxaline-1,4-dioxydes de la préparation G en chlorhydrates d'imido-éther correspondants.
This invention relates to the preparation of substituted quinoxaline-dioxide compounds, in particular 3-methyl-quinoxaline di-N-oxides substituted in 2 by a heterocyclic group and alkyl esters of 3-methyl-quinoxaline-di-. N-oxide-2-carboxylic acids, substituted on the alkyl part of the ester by amine, or mono or di-substituted amine groups, as well as their addition salts, possessing antibacterial activity on pathogenic microorganisms, as well as as methods to promote weight gain and animal feed consumption.
Efforts to find more useful antibacterial agents have led to the development of a wide variety of organic compounds including many di
N-oxides of quinoxaline. Landquist et al, J. Chem. Soc. 2052 (1956) in search of compounds with antibacterial or antiprotozoal activity reported on the preparation of di-N-oxides of 2-methyl- and 2,3-dimethyl-quinoxaline in which the methyl groups were transformed into groups such as bromomethyl-, acetoxymethyl- and hydroxymethyl-, including 3-methyl-2-carbethoxy-quinoxaline di-N-oxide. However, no utility is attributed to any of these compounds.
French Patent No. M3717, issued January 3, 1966, discloses 2-quinoxaline carboxamide di-N-oxides in which the carboxamide group can be substituted by an alkyl, substituted alkyl, aryl, aralkyl, or cycloalkyl group. The corresponding substituted esters of 2-quinoxalinecarboxylic acids are also disclosed, but their structure is not shown. Their usefulness in human therapy as anti-tuberculosis, antibacterial, anti-cancer, antiviral and antiprotozoal agents is reported.
Belgian Patent No. 697976, issued November 3, 1967, describes various N-substituted derivatives of 3-methyl2-quinoxaline-carboxamide di-N-oxide in which the nitrogen substituent is a phenyl, substituted phenyl, dodecyl or ethyl, as well as the corresponding 3-methyl-2-carbethoxyquinoxaline di-N-oxide. They have been attributed an interest as intermediates for the preparation of vegetation protectants and pharmaceutical agents.
Belgian Patents Nos. 721724, 721725, 721726, 721727 and 721728, published April 2, 1969, describe various N-substituted derivatives of 3 -methyl-2-quinoxaline-carboxamide di-N-oxide in which the nitrogen substituent is hydroxyalkyl, lower alkoxyalkyl, carbalkoxyalkyl, my o-alkylaminoalkyl, or di (alkyl) aminoalkyl, as antibacterial agents.
It has now been discovered that quinoxaline 1,4-dioxides substituted in 2 by a heterocyclic group and their intermediates, having the respective formulas (I) and (IIA):
EMI1.1
and wherein X is a substituent at the 6-position or the 7-position and is hydrogen, chlorine, bromine, fluorine or a
EMI1.2
methyl, methoxy or trifluoromethyl group; Y is O,
S, or NRo where R, 3 is hydrogen or a lower alkyl radical;
A is an alkylene radical of 2 to 5 carbon atoms which places at least 2 carbon atoms between the N and Y atoms to which it is attached; as well as the non-toxic acid addition salts of compounds in which Y is NRo, or else of compounds of formula (IIA) which are effective broad spectrum antibacterial agents in vitro. In addition, all of the compounds described herein are valuable broad spectrum antibacterial agents in vivo, and / or are effective growth promoters in animals, especially pigs. Such broad spectrum antibacterial activity is at odds with the Gram-negative activity exhibited by most of the quinoxaline 1,4-dioxides which are commonly available.
Still further, the compounds of formula (II) are useful as intermediates for the synthesis of other antibacterial agents, which will be described below.
By the term lower alkyl, as used herein, is meant alkyl groups which contain from one to four carbon atoms, since compounds which carry such groups are conveniently prepared from starting materials which it is suitable for. easy to get hold of.
The substituents of the welded benzene moiety of the above compounds can vary widely. For example, at least one of the following substituents may be present: hydrogen, lower alkyl, lower alkoxy, chlorine, bromine, fluorine, trifluoromethyl, di (lower alkyl) amine, amine, carboxy, carbamyl, carbo (lower alkoxy), (lower alkyl) mercapto, (lower alkyl) -sulfoxy, (lower alkyl) sulfonyl, sulfonamide and N, N-di (lower alkyl) sulfonamide. Preferred positions on the welded benzene ring are the 6 and 7 positions. A single-substituted, i.e., 6- or 7-substituted, derivative is usually considered more valuable than a 6.7-di- derivative. substituted for reasons of economy as to the starting materials used.
Preferred substituents. for reasons of economy and / or because of their favorable effect on the ac activity, are hydrogen, chlorine and fluorine.
Unique among the compounds prepared according to the invention, owing to their remarkable broad spectrum activity and / or their appreciable activity in promoting growth in pigs, are the compounds of formula (I) in which Y is O. NH or N (lower alkyl); X is hydrogen or chlorine; and A is an ethylene or trimethylene group; as well as the compounds of formula (IIA) in which X is hydrogen or chlorine, and A is an alkylene radical having 2 or 3 carbon atoms.
It should be noted that the alkylene groups having more than five carbon atoms and which place from two to five carbon atoms in the heterocyclic ring between the two heteroatoms to which they are linked, are also effective.
The compounds of formula (I) in which Y is NR1 or S are prepared by reacting a 1,4-quinoxaline dioxide substituted with a group X and substituted at 2 with a cyano-3 -CH8 group, with a thioalkylamine (H2N-A-SH), according to known methods. Otherwise, the 1,4-quinoxaline dioxide substituted with an X group and substituted in 2- with a 2-cyano-3-CH.l group is converted into an imido-ether hydrochloride which is then reacted with l 'alkylenediamine or thioalkylamine appropriate so as to obtain the corresponding cyclic compound of formula (I).
As will be appreciated by those skilled in the art, the aforementioned reactions for preparing the compounds of formula (I) in which Y is NR1, lead to the formation of the hydrochloride of the cyclized product.
This method yields isomer 6 and isomer 7 of compounds in which X is other than hydrogen due to the existence of a dynamic and tautomeric equilibrium in the starting substituted benzofuroxane X. The isomers, which in fact form a mixture of isomers, are recovered by methods known to those skilled in the art. In many of the preparations described herein a solid, often crystalline product separates from the reaction mixture. The solid appears to consist mostly of one of the isomers, which isomer can be purified by repeated recrystallization from an appropriate solvent until it has a constant melting point.
The other isomer, the one found in the least amount in the solid substance, is the predominant product in the mother liquor. It can be recovered by methods known to those skilled in the art, such as for example by evaporation of the mother liquor and repeated crystallization of the residue until a product with a constant melting point is obtained. If not. the reaction mixture can be extracted with the aid of a suitable solvent, either before or after evaporation to dryness, and the extracted substance, which contains the two isomers, can be further purified by recrystallization.
Identification of isomers has not been completed. The two isomers of a given compound, however, exhibit the same type of activity, for example as promoters of animal growth or as antibacterial agents, to an appreciable degree.
The acid addition salts of the compounds of formula (I) in which Y is -NR1 are prepared by methods well known to those skilled in the art. A convenient method is to dissolve the free base in a suitable solvent. for example acetone, water, lower aliphatic alcohol (ethanol, isopropanol) containing the desired acid. or to which the desired acid is subsequently added. The salts are recovered by filtration, precipitation using a non-solvent. by evaporation of the solvent or, in the case of aqueous solutions, by lyophilization. In this way. the sulfate can be prepared. hydrochloride, hydrobromide, nitrate. phosphate, acetate, propionate. butyrate. citrate. gluconate.
benzoate. pamoate, amsonate, tartrate, 3-hydroxy2-naphthoate. sulfosalicylate. and other salts.
Identification of isomers has not been completed. However, the two isomers of a given compound show the same type of activity, for example as promoters of animal growth or as antibacterial agents.
The compounds of formula (IIA) are synthesized from compounds of formula (I) in which Y is O, according to the scheme
EMI2.1
<tb> my next <SEP>: <SEP> O
<tb> <SEP> f \ <SEP> / 20X
<tb> X <SEP> -e
<tb> <SEP> H0 +
<tb> <SEP> 'I,'
<tb> <SEP> o
<tb>
EMI2.2
The hydrolysis of the aforementioned oxacyclic fraction, in position 2 of the 1,4-di-N-oxide of 3-alkylquinoxaline, is carried out using an appropriate acid, such as hydrobromic, hydrochloric or phosphoric acid. or sulfuric acid in a water-miscible water-solvent system such as the methanol-water or ethanol-water system. In general, a double to quintuple excess of said acid is used to facilitate the reaction. The hydrolysis is carried out at temperatures of 0 to 500 ° C., the preferred range being 25 to 350 ° C., and for a reaction time of 15 minutes to 2 hours.
The elaboration process involves removing excess water, solvent and acid under reduced pressure and then triturating the resulting salt with a suitable solvent, such as ethyl acetate or isopropanol. It is advantageous to use for the hydrolysis the same acid as that which is desired to be found in the salt of the final product. For example, if it is desired to obtain hydrochloride, hydrochloric acid is used, if sulphate is desired, sulfuric acid is used, etc.
Examples of acids which give pharmaceutically acceptable anions are hydrochloric acids. hydrobromic, hydroiodic, nitric, sulfuric or sulphurous.
phosphoric, acetic. lactic, citric, tartaric, succinic, maleic and gluconic.
As already stated. the quinoxaline di-N-oxides prepared according to the present invention are all readily suited for therapeutic use as antibacterial agents and as growth promoters. A typical compound of interest in this series includes: 2-aminoethylene acid ester 1,4-dioxide.
For in vitro use, for topical application for example, it will often be convenient to formulate the product of choice with a pharmaceutically acceptable carrier such as a vegetable or mineral oil or an emollient cream.
The same. it can be dissolved or dispersed in carriers or liquid solvents such as water, an alcohol, a glycol or a mixture thereof, or else in other inert and pharmaceutically acceptable media, that is to say in media which do not adversely affect the active ingredient. For this purpose, it will generally be acceptable to use active ingredient concentrations of from about 0.01 percent to about 10 percent by weight of the total composition.
To determine the in vitro activity of an antibiotic, the sensitivity of the various microorganisms to an antibiotic is determined according to the commonly recognized technique of half serial dilution. Final compound concentrations range from 100 µg per ml in the first tube to 0.19 µg per ml in the second tube. The inoculum consists of 0.5 ml of a 1 X 10-s dilution of a culture.
standardized. The final volume in each tube or cup in the DisPoso capsule is 1.0 ml. We incubate
tubes at 37 ° C for approximately 24 hours.
The
medium used is Witkins synthetic medium or a
Infusion of Codeur and Brain (lake). Sensitivity (Con
minimum inhibitory concentration or (MIC) of the body
test is considered to be evidenced by the absence
macroscopic turbidity.
In addition, the compounds described herein exhibit useful broad spectrum activity, i.e. activity against both Gram-negative and Gram-positive bacteria. as opposed to the usual Gram-negative activity of quinoxaline di-N-oxides. In addition, the compounds of the present invention are active in vivo and are particularly useful as promoters of growth in animals, in particular for pigs and poultry.
When used in vivo for this purpose, these novel compounds can be administered orally or parenterally, for example by subcutaneous, intramuscular or intravenous injection, at a dose of from about 1 mg / kg to about 100 mg /. kg of body weight. Suitable vehicles for parenteral injection can be either aqueous such as water, isotonic saline, isotonic dextrose solution, Ringer's solution. either non-aqueous such as fatty oils of vegetable origin (cottonseed, peanuts, corn, sesame), dimethylsulfoxide, and other non-aqueous vehicles which do not adversely affect the therapeutic efficacy of the preparation and which are not toxic to the volume or proportion used (glycerol, propylene glycol, sorbitol and dimethylacetamide).
The in vivo efficacy of the compounds of the present invention is determined based on their antibacterial activity on acute infections in mice. Acute experimental infections are produced by intraperitoneal inoculation of a standard culture suspended in either pig gastric mucin or broth. A brief discussion of the words standardized culture would seem beneficial. In order to obtain reproducible results with a test compound, it is necessary to determine as far as possible the various variables which may intervene in this type of test. A very virulent organism, used in large enough quantities, can make almost any medicine appear inactive. On the other hand, an inoculum which cannot produce a measurable difference between treated and untreated groups is equally unsatisfactory.
Stock cultures of test organisms are normally maintained as slant tube cultures or in liquid media. When not in routine use they are kept at refrigerator temperature or in a freeze-dried state. When it becomes necessary to use a culture in animal protection trials the culture is suspended in a volume of saline or broth, and the density of the suspension is measured with a photo colorimeter. electric. From this reserve culture, tenth dilutions are prepared. Each dilution is inoculated into a series of mice to determine Dol100, DL100 being the minimum concentration of organisms necessary to produce 100 percent mortality.
For example, if a 10-1 dilution were found to be the minimum concentration of organisms that produced 100 percent mortality, a 10-8 inoculum would likely be used for drug evaluation experiments. This means that one uses a dose equal to about ten times the LD100, or ten times the minimum dose necessary to kill the mice. Such a test would also involve the use of control animals which receive an inoculum of 10-1, 10-, and possibly 10-c.
These dilutions are provided as a control in case a change in virulence occurs. Having previously determined by virulence titration that 10-1 is the maximum lethal dilution, these animals are naturally expected to die, usually within 24 hours.
Each organism has its own standardized inoculum concentration. Some, like Staphylococcus. can be used at 10-1, while others, such as Streptococcus, require weekly passage through animals to maintain virulence.
When evaluating the effectiveness of an antibiotic from a single dose, that dose is usually administered 0.5 hours after the mice have been inoculated with the lethal concentration of organisms. In such a treatment plan, the sourcing mice are usually kept alive for four days after treatment and the percentage of mice alive is calculated.
Other methods of administering the useful products of this invention to animals include mixing with animal feed, preparing food concentrates and supplements, and dilute solutions or suspensions, eg, 0.1 percent solution, intended for to be drunk.
It is surprising that the addition of small proportions of the quinoxaline di-N-oxides which are described here, to the diet of healthy animals, whether ruminants or non-ruminants, such that these animals receive the product over an extended period of time. at a dose of about 0.1 mg / kg to about 100 mg / kg of body weight per day, especially during a preponderant part of their period of active growth, leads to an acceleration of the rate of growth and improves feed yield (number of kg of feed required to produce a 1 kg weight gain). Included in these two categories of animals are poultry (chickens, ducks, turkeys), cattle, sheep, dogs, cats, pigs, rats, mice, horses. goats, mules. rabbits, mink, etc.
The beneficial effects on growth rate and food yield are greater than those normally obtained with complete nutritious diets containing all nutrients. vitamins, minerals, and other factors known to be necessary for the maximum healthy growth of such animals. The animals thus reach a marketable size faster and with less feed.
The food compositions described here have proved to be particularly advantageous and remarkable in the case of pigs. In some cases the degree of reaction may vary depending on the sex of the animals. The products can of course be administered in a food constituent or else be mixed uniformly in a mixed food; otherwise, as noted above, they can be administered in an equivalent amount via the animal's water ration.
It should be noted that various food constituents can be useful in nutritionally balanced foods.
Any animal feed composition can be prepared so that it comprises the usual nutritional balance of energy elements, proteins, minerals and vitamins as well as one or more of the quinoxaline di-N-oxides. described above. Some of the different constituents are commonly seeds such as ground seeds and seed by-products; animal protein substances. such as meat and fish by-products; vitamin mixtures, for example vitamin A and vitamin D mixtures, riboflavin supplements and other vitamin B complexes; and bone meal, limestone and other inorganic compounds that provide minerals.
The relative proportions of the present compounds in feeds and feed concentrates can vary somewhat. depending on the compound. The food with which it is used and the animal which consumes it. It is advantageous to combine these substances with edible carriers in relative proportions such that they form premixes or concentrates which can easily be mixed with common foods. nutritionally balanced, or can be used as such as additives to normal diets.
A wide variety of carriers can be used for the preparation of the concentrates, including the following: oily soy flour, corn gluten meal, oily cottonseed flour, sunflower seed flour. oily flax flour, corn flour. lime stone and corn cob flour. The carrier facilitates the uniform distribution of the active substances in the finished feed to which the concentrate is mixed. The concentrate can be surface coated, if desired, with various proteinaceous substances, or edible waxes, such as zein, gelatin, microcrystalline wax and the like to form a protective film which envelops the concentrate. the active ingredients.
It will be appreciated that the proportions of the drug preparation in such concentrates can vary widely because the amount of active substances in the finished food can be adjusted by mixing the appropriate proportion of concentrate into the food so as to obtain the degree of desired enrichment.
In the preparation of high potency concentrates, i.e. premixes, suitable for mixing by feed manufacturers in the production of lower potency feeds or finished concentrates, the drug content can range from from about 0.22 to 110 g per kg of concentrate. High potency concentrates can be mixed by the feed manufacturer with protein carriers, such as oily soybean meal, to provide concentrated supplements suitable for direct feeding to animals. The proportion of the drug in these supplements can vary from about 0.22 to 22 g per kg of supplement. A particularly useful concentrate is obtained by mixing 4.4 g of medicament with 1 kg of limestone or with 1 kg of a 1/1 mixture of limestone-oily soybean flour.
Other dietary supplements, such as vitamins, minerals, etc., can be added to the concentrates in appropriate cases.
Concentrates described can also be added to feeds to produce a nutritionally balanced finished feed containing from about 5.5 to about 140 g of the compounds described herein per tonne of finished feed.
In the case of ruminants, the finished feed should contain protein, fat, fiber, carbohydrates, vitamins and minerals, all in sufficient quantity to meet the nutritional requirements of the animal for which the feed is intended. . Most of these substances are found in foods of natural origin. such as dried alfalfa or alfalfa meal, broken corn, whole oats, oily soybean meal, corn silage, ground corn cobs, wheat bran and dry molasses. Bone meal, limestone, iodized salt and traces of minerals are often added in order to introduce the necessary minerals and urea which provide additional nitrogen.
As is known to those skilled in the art, the types of diet are extremely variable depending on the aim, the type of feeding operation, the species considered, etc. Specific diets for different purposes are listed by Morrison in the appendix to Feeds and Feeding, The Morrison Publishing Company, Clinton, Iowa, USA.
In the case of non-ruminant animals, such as pigs, a suitable feed may contain about 50 to 80 percent seeds, 3 to 10 percent animal protein, 5 to 30 percent vegetable protein, from 2 to 4 percent of minerals as well as additional vitamin sources.
In practice, the growth promoting effect is determined in pigs, for example, by the method in which young pigs aged 5 to 6 weeks and initially weighing about 9.75 kg on average, are fed with a consumption ad libitum of water and food formulation composed of ground yellow corn (58.1 / o), soybean flour (19.6 O / o), alfalfa flour (2.0 O / o), dry skimmed milk (5 , 0 / o), dry whey (10.0 solo), stabilized animal fat (2.5 O / o), limestone (0.6 O / o), dicalcium phosphate (1.1 O / o),
iodized salt (0.5 / o), PPM No 5 vitamin premix (0.5 O / o), Delamix quadruple (0.05 / o), and zinc carbonate (173 g / tonne of mixture ).
The pigs are divided into groups of 32 pigs each and kept for a pre-experimental period of three days before starting the experiment. The quinoxaline di-noxides of the present invention are added to feeds at a rate of 55 g of compound per tonne of feed. After 28 days, the effectiveness of said added compounds on the stimulation of growth is measured. by comparison of the growth of the treated animals, expressed as weight gain, with that of the untreated control group, to which an index of 100 for weight gain is arbitrarily assigned. For example, if a compound causes 23% more growth than the control group, which has an index of 100, it is assigned a value of 123, etc.
The effect of a supplemented diet on the stimulation of growth in other species of animals, using appropriate doses and feed formulations, is evaluated in a similar manner.
Example I:
Hydrochloride
3-methyl-2-quinoxalinecarboxylic acid,
2-aminoethyl ester, I, 4-dioxide
To a solution of 2 ml of water and 8 ml of ethanol is added 0.98 ml of 12 N hydrochloric acid (10 mmol), then 1.25 g (5 mmol) of 2- (2-) 1,4-dioxide. oxazolin-2-yl) -3methyl-quinoxaline. The resulting yellow solution is left under stirring at room temperature for 30 minutes, after which it is concentrated to dryness under reduced pressure. The resulting solid was suspended in ethyl acetate and filtered, 1.26 g, m.p. 186-1880 C.
Analysis:
Calculated for Cl 404NsCl: C 48.8 H 4.7 N 14.0
Found: C 47.8 H 4.8 N 13.9
Example ll:
The procedure of Example I is repeated, using the appropriately substituted starting materials, to obtain the following compounds:
EMI4.1
X A
H - (CH,) -
EMI4.2
H CH. - (CH5) 3 -
CH. - CH, CH -
EMI4.3
CH3 - (CH2) 3 OCH - (C) 4 -
OCH3 -CH2CH2
OCH3 -CH2C (CH3) 2CH2
EMI5.1
F -CH2CH2
EMI5.2
Cl -CH2CH2 C1 - (CH) 4 -
EMI5.3
Br -CH2CH2 CE, - CH2CH2 -
EMI5.4
Example II (reference example):
:
Using the aforementioned serial dilution technique (two-fold dilution), the in vitro activity of some of the products of the present invention against Staphy-lococcus aureus and Escheria coli is shown. Benzylpenicillin (salt of K) gave in the tests for the MIC (minimum inhibitory concentration) values of 0.156 and> 100 against S. aureus and E. coli, respectively.
EMI5.5
EMI5.6
<tb>
<SEP> X <SEP> A <SEP> Z '<SEP> S. <SEP> aureus <SEP> Ecoli
<tb> <SEP> O
<tb> <SEP> H <SEP> - (CH2) 2- <SEP> O-CCH8 <SEP> 12.5 <SEP> 50
<tb> <SEP> O
<tb> C1 <SEP> - (CH2) 2- <SEP> O-CCH5 <SEP> 3.1 <SEP> 100
<tb> H <SEP> - <SEP> (CH2) 2 <SEP> - <SEP> N (CHs) 2 <SEP> - <SEP> HCI <SEP> 100 <SEP> 6.25
<tb> Cl <SEP> - (CH2) 2- <SEP> N (CH8) 2.HCl <SEP> HCI <SEP> 12.5 <SEP> 12.5
<tb> H <SEP> - <SEP> (CH,) s <SEP> - <SEP> N (C2Hj) 2 '<SEP> HC1 <SEP> 100 <SEP> 12.5
<tb> C1 <SEP> - (CH2) 2- <SEP> N (CsH5) 2 <SEP> HC1 <SEP> 12.5 <SEP> 12.5
<tb> H <SEP> - (CHs) s-, <SEP> N (CHS) CSH5 <SEP> - <SEP> HCl <SEP> 100 <SEP> 12.5
<tb> H <SEP> - (CH) 2- <SEP> N (CH,) 2.HCl <SEP> HC1 <SEP> 200 <SEP> 12.5
<tb> H <SEP> -CH (CH8) CH2- <SEP> N (CH8) 2.HCl <SEP> 200 <SEP> 100
<tb> Cl <SEP> - <SEP> CH (CH; 3) CHa <SEP> - <SEP> N (CH5) 2 <SEP> - <SEP> HCI <SEP> 25 <SEP> 200
<tb>
Example III:
:
Using the method for determining in vivo activity described previously, the following compound was orally tested against Streptococcus pyogenes at 200 and 50 mg / kg and against Escherichia coli at 100 and 25 mg / kg, the results being given as a percentage of animals which survived.
EMI5.7
Example IV (reference example):
The following experiment demonstrates the efficacy of the compounds described herein to protect against systemic infection with Salmonella cholersuis var. Kunzendorf in pigs. Young pigs aged 6-8 weeks are conditioned for 14 days in isolation rooms and throughout the study they are maintained with a basal ration consisting of ground yellow corn (78.4%) of flour
soybean (15%), alfalfa meal (2%), bone waste and
meat (2.5 O / o), limestone (0.4%), dicalcium phosphate
(0a65%), iodized salt (0.5 O / o), vitamin premix
PPM No 5 (0.5%), Delamix quadruple (0.05 O / o), and zinc carbonate (mixture at 173 g / tonne).
To all the pigs,
which were divided into groups of 6, inoculation on day 0 with 4 ml (approximately 2.0 X 10.8 organisms) of the stock inoculation suspension. Treatment with the quinoxaline-di-N-oxides of the present invention is carried out on day 0 and day 1 by injecting intramuscularly at 12 hour intervals at doses of 2.5 and 5 mg / kg. The percent mortality in each group is calculated on day 10. The following results are obtained:
Medication O / o mortality
Infection, no drug treatment
cament (placebo injection). ...
. 83
3-methyl-2-quinoxal ine-carboxyli acid
that, 2- (acetyloxy) ethyl ester, 1,4
dioxide, 2.5 mg / kg X 4 .. 67
5.0 mg / kg X 4 .. 17
Example V:
Using the procedure described above to determine growth acceleration in animals the following quinoxaline-di-N-oxides were tested at 50 g / tonne feed in pigs for a period of 28 days and the following results were obtained:
EMI6.1
Growth O / O Gain Index
X A Z 'of weight * more than the control
H - (CH2) 2- NH2 # HCl 139 39 * Control = 100.
Example VI (reference example): 2- (2-Oxalin-2-yl) -3-methylquinoxaline-1,4-dioxide
A suspension of N- (2-chloroethyl) -3-methyl-2 quinoxalinecarboxamide-1,4-dioxide (36.0 g) and 500 ml of an aqueous solution of monomethylamine at 40% is stirred for 20 hours at room temperature. hundred. The reactant N (2-chloroethyl) -3 -methyl-2-quinoxalinecarboxamide-1, 4-dioxide slowly dissolves and the cyclized product crystallizes from the mixture. The reaction mixture is filtered, washed with water, then with acetone, and dried to give 26.7 g of product; m.p. 217-2180 C (83 percent yield).
Example Vll (reference example):
2- (5,6-D ihydro -411-1,3-oxazin-2 -yl) -methylquinoxaline-
1,4-dioxide
To a solution of diketene (4.2 g) in chloroform (75 ml) is added 3-bromopylamine hydrobromide (10.4 g) in water (20 ml) at 0 ° C and the mixture is stirred well. Sodium hydroxide solution (2.0 g in 10 ml of water) is then added over 20 hours at 00 ° C. and the mixture is stirred for a further hour at room temperature. The chioroform phase is separated, dried over anhydrous sodium sulfate and evaporated to obtain N- (3 -bromopropyl) acetoacetamide in the form of a white solid.
N- (3-bromopropyl) acetoacetamide is then added to a solution of benzofuroxane (6.8 g) in ethanol (75 ml) and excess ammonia gas is passed through the solution (until solution is saturated) while maintaining the temperature below 300 C. The reaction mixture is allowed to stand overnight at room temperature, then filtered to obtain the product: 2.0 g (15.4 percent ); m.p. 2180 C. when the product is recrystallized from methanol.
Example Vlll:
2- (2 -imidazolin-2-yl) -3-methylquinoxaline- tosylate
1,4-dioxide
A mixture of 2-cyano-3-methylquinoxaline-1.4-dioxide (10 g, 0.05 mol), ethylenediamine (3.3 g, 0.05 mol) and p-toluenesulfonic acid monohydrate (9 , 5 g, 0.05 mol) at 1600 C-1800 C for eight hours during which the release of ammonia is noted. The mixture is then cooled and recrystallized from a methanol-chloroform mixture.
The tosylate is converted to the base by treating the salt in water with an aqueous solution of sodium hydroxide (excess of 10 percent) and extracting the cyclic amidine with ethyl acetate. The extracts made with ethyl acetate (Na2SO4) are dried and the solvent evaporated, to obtain the free base form of the compound indicated in the title.
Example IX:
2-2- (1, 4,5,6-tetrahydropyrimidin-2 -yl) 1- hydrochloride
3-methylquinoxaline-1, 4-dioxide
Ethyl (3-methyl-quinoxaline 2-formimidate) -1,4-dioxide (14.7 g, 0.05 mole) hydrochloride is added to a solution of trimethylenediamine (3.7 g, 0.05 mole) in ethanol (200 ml) at 00 ° C., the mixture is vigorously stirred, then it is refluxed overnight. Evaporation of the mixture (under reduced pressure) to dryness gives the desired product.
Treatment of the product with a slight excess of 40 percent aqueous sodium hydroxide solution at 50 ° C. gives the free base which is extracted with ether. The ethereal solution is dried and evaporated to dryness to recover the free base form of the title compound.
By following the procedures of Examples VIII and IX, the cyclic amidine derivatives listed below are prepared starting from alkylenediamine and 2-cyano-3-methylquinoxaline-1,4-dioxide substituted with X (example VIII), suitable, or 2-cyano-3-methylquinoxaline-1,4-dioxide ethylimido-ether hydrochloride substituted with X (example
IX).
EMI7.1
X A Rt Method
example
CH3 - (CH2) 3- H VIII
CF3 - (CH2) 3- H VIII
H - (CH2) - n - C8H7 VIII
OCH3 - (CH2) 3- n-C3H7 VIII CF, - (CH2) 3- n - C3H7 VIII
Cl - (CH2); 3 - i - C4Hg VIII
H - (CH2) 4- n-C3H7 VIII
Cl - (CH2) 4- n-C3H7 VIII
OCH3 - (CH2) 4- n-C3H7 VIII
H - (CH2) 5- H VIII
F - (CH2) 5 - H VIII
CH3 - (CH2) 5 - H VIII
H - (CH2) 5- C2H5 VIII
Cl - (CH2) 5- C2H5 VIII
OCH3 - (CH2) 5- C2H5 VIII
F - (CH2) 5 - C, i.H5 VIII
H -CH2C (CH3) 2- H VIII
Cl -CH2C (CH3) 2- H VIII
F -CH2C (CH3) 2- H VIII
CH3 -CH2C (CH3) 2- H VIII
H -CH2CH (C2H5) - H VTII
OCH3 -CH2CH (C2H5) - H VIII
CF3 -CH2CH (C2H5) - H VIII
H -CH2CH (C2H5) - CH3 VIII
F -CH2CH (C2H5) - CH3 VIII
OCH3 -CH2CH (C2H5) - CH3 VIII
H -CH2CH (C2H5) - n-C3H7 VIII
Cl - CH2CH (C2H5) - <RTI
ID = 7.9> n - C3H7 VIII
H - CH (CH8) CH (CH8) - H IX
Cl - CH (CH8) CH (CH8) - H IX
CH3 - CH (CH8) CH (CH8) - H IX
OCH3 -CH (CH3) CH (CH3) - H IX
H - CH2CH (CH3) CH2CH2 - H VIII
OCH3 -CH2CH (CH3) CH2CH2- H VIII
F - CH2CH (CH3) CH2CH2 - H VIII
CF3 -CH2CH (CH2) CH2CH2- H VIII
H -CH (CH3) CH2 - H VIII
Cl -CH (CH3) CH2- H VIII
CF3 -CH (CH3) CH2- H VIII
H - C (CH3) 2CH2- H IX
Cl - C (CH3) 2CH2 - H VIII
H -CH2C (CH3) (C2H3) H VIII
F -CH2C (CH3) (C2H5) H VIII
OCH3 -CH2C (CH3) (C2H5) H VIII
H -CH2C (CH3) 2CH2 - H VIII
Cl -CH2C (CH3) 2CH2- H VIII
Example X:
:
2- [2- (5,6-Dihydro-4H-1,3-thiazin-2-yl)]
3-methylquinoxaline-1,4-dioxide
A mixture of 2-cyano-3-methylquinoxaline-1,4-dioxide (10 g. 0.05 mol), 3-mercaptopropylamine hydrochloride (8.76 g, 0.053 mole) is heated under reflux until the evolution of ammonia ceases. mole) and absolute ethanol (50 ml). The mixture is cooled to room temperature, poured into cold water (250 ml) and made alkaline in potassium hydroxide (6N). We extract the oil that separates
Far from the ether, the ethereal extract is dried over anhydrous sodium sulfate and evaporated to dryness to obtain the product.
Example XI:
2- (2-Thiazolin-2-yl) -3methylquinoxaline-1,4-dioxide
To a solution of 2-mercaptoethylamine (2.27 g, 0.02 mol) in ethanol (100 ml) at 0 C is added ethyl (3-methylquinoxaline-2-formimidate) -1,4-dioxide (4 , 9 g, 0.02 mol).
The mixture is stirred, heated at reflux overnight, then evaporated to dryness under reduced pressure to obtain the product.
Preparation A:
Ethyl hydrochloride (3-methylquinoxaline
2-formimidate) -1,4-dioxide
A solution of 2-cyano-3-methylquinoxaline-1,4-dioxide (0.1 mol) in dry ethanol (5.3 g, 0.12 mol) and dry ether is saturated with dry hydrochloric acid. (50 ml) while maintaining the temperature below 100 ° C. Then the mixture is stirred overnight at room temperature under a dry nitrogen atmosphere. The solid is collected by filtration (ether is added to the reaction mixture, if necessary, before filtration), washed with ether and dried.
The following compounds are thus prepared:
EMI7.2
X X
Cl CH3
Br OCH3
F CF,
By repeating this procedure but replacing the ethanol with methanol, n-propanol or n-butanol, the corresponding lower alkyl imido-ethers are obtained.
The free imido-ethers are obtained by adding the hydrochloride to an excess of 33% aqueous potassium carbonate solution with cooling well and vigorous stirring. The imido-ether is extracted with ether, the ethereal solution is dried and evaporated to dryness.
Likewise, the 2-cyano-3-lower alkyl quinoxaline-1,4-dioxides of Preparation G are converted to the corresponding imido-ether hydrochlorides.