Utilisation de variants bactériens pour la préparation de réactifs pour sérodiagnostics Il est connu, selon le brevet No 523321 (demande No 4239/70) de préparer, à partir de bactéries suscepti- bles d'être pathogènes, des variants bactériens stables reproductibles par un cycle évolutif hétéromorphe.
Le procédé de préparation desdits variants bactériens, dé crit dans le brevet précité, est caractérisé en ce que l'on soumet en milieu salin aqueux, lors de la scissiparité, lesdites bactéries à l'action d'un agent inducteur apte à éliminer la paroi bactérienne par voie chimique, bio chimique ou physicochimique,
et en ce que les variants ainsi obtenus sont cultivés et repiqués à une température comprise entre 22 et 370 C sur un milieu nutritif liquide apte à favoriser la multiplication dudit variant et osmo- tiquement équilibré par des éléments régularisant la perméabilité cellulaire dudit variant, la pression osmoti que -de l'ensemble desdits éléments régularisateurs étant comprise entre 20 et 30 atm.
En plus du procédé d'obtention des variants bac- tériens, le brevet précité a également pour objet l'utili sation de ces variants pour la préparation de vaccins stables.
Du fait de la facilité de mise en ouvre de ce procédé d'obtention de variants, on a obtenu des souches pures de variants bactériens doués de pouvoir pathogène et des extraits antigéniques, exempts de cellules.
L'invention a pour objet l'utilisation des variants bactériens ainsi obtenus, pour la préparation de réactifs pour sérodiagnostics des germes infectieux des maladies atypiques. Cette utilisation est caractérisée en ce qu'on prépare par voie chimique un extrait antigénique des- dits variants et qu'on isole de cet exrait un polysac charide responsable des réactions sérologiques.
L'extraction des principes antigéniques est effectuée en faisant agir sur une suspension de germes lavés pré alablement une solution aqueuse d'acide trichloracétique demi-normale, à un pH de 1 à 2 à une température de 0o C. L'extrait antigénique se présente sous la forme d'une solution opalescente absolument non dialysable. Des séché, il est thermostable ; par contre, il est thermo- labile en milieux aqueux.
Injecté à l'animal, il provoque l'apparition d'anti corps -spécifiques ; ainsi ses fortes dilutions sont préci pitées spécifiquement par un antisérum correspondant antigénique. Enfin, il se comporte comme une endo toxine active; injecté à l'animal, il déclenche en effet l'apparition d'antitoxine.
Ce composé acidosoluble antigénique isolé apparaît fortement polydispersé en solution aqueuse.
Très soluble dans l'eau, sous l'action de la chaleur ou d'une diastase, il se clive; la fraction polysaccharide se détache du reste du complexe antigénique, rompant ainsi un lien moins fort que celui qui emprisonnait les antigènes. du corps bactérien.
On peut ainsi isoler les constituants de l'extrait anti génique des variants de Proteus : un polysaccharide spé cifique des variants obtenus, qui est responsable des ré actions sérologiques typiques de la souche. Ce poly saccharide libéré peut être précipité par adjonction de plusieurs volumes d'alcool ou d'acétone.
Le polysaccharide donne à l'élément protéique anti- génique sa spécificité et est responsable des réactions sérologiques typiques de la souche.
On utilise ces variants stables obtenus par le pro cédé selon <B>le</B> brevet No 523321 (demande No 4239/70) pour la fabrication de réactifs pour sérodiagnostics et identification des agents infectieux de maladies aty piques.
Ces réactifs sérologiques permettent la recherche d'un traitement spécifique (sensibilité aux antibiotiques ou à d'autres thérapeutiques).
Ils ont aussi un intérêt certain dans la recherche de l'étiologie des mycoplasmes isolés en pathologie infec tieuse. Il est évident que la mosaïque d'antigènes telle qu'elle existe dans la cellule des variants stables intacts contient des substances autres que les composants phos pholipides, polysaccharides et protéines,
mais on peut penser que seuls les composants polysaccharides et pro téiques sont les éléments essentiels de la manifestation antigénique.
Use of bacterial variants for the preparation of reagents for serodiagnostics It is known, according to patent No. 523321 (application No. 4239/70) to prepare, from bacteria likely to be pathogenic, stable bacterial variants reproducible by one cycle. evolutionary heteromorphic.
The process for preparing said bacterial variants, described in the aforementioned patent, is characterized in that, in an aqueous saline medium, during fissiparity, said bacteria are subjected to the action of an inducing agent capable of eliminating the wall. bacterial by chemical, biochemical or physicochemical means,
and in that the variants thus obtained are cultured and subcultured at a temperature between 22 and 370 ° C. on a liquid nutrient medium capable of promoting the multiplication of said variant and osmotically balanced by elements regulating the cell permeability of said variant, the pressure osmoti that -de all of said regulating elements being between 20 and 30 atm.
In addition to the process for obtaining bacterial variants, the aforementioned patent also relates to the use of these variants for the preparation of stable vaccines.
Owing to the ease of implementation of this method for obtaining variants, pure strains of bacterial variants endowed with pathogenicity and antigenic extracts, free of cells, have been obtained.
The subject of the invention is the use of the bacterial variants thus obtained, for the preparation of reagents for serodiagnosis of infectious germs of atypical diseases. This use is characterized in that an antigenic extract of said variants is prepared chemically and a polysaccharide responsible for the serological reactions is isolated from this extract.
The extraction of the antigenic principles is carried out by making act on a suspension of germs washed beforehand an aqueous solution of semi-normal trichloroacetic acid, at a pH of 1 to 2 at a temperature of 0 ° C. The antigenic extract is present in the form of an absolutely non-dialyzable opalescent solution. When dried, it is thermostable; on the other hand, it is heat labile in aqueous media.
Injected into the animal, it causes the appearance of specific anti-bodies; thus its high dilutions are specifically precipitated by a corresponding antigenic antiserum. Finally, it behaves like an active endotoxin; injected into the animal, it triggers the appearance of antitoxin.
This isolated antigenic acid-soluble compound appears to be highly polydispersed in aqueous solution.
Very soluble in water, under the action of heat or a diastase, it cleaves; the polysaccharide fraction is detached from the rest of the antigenic complex, thus breaking a weaker bond than that which trapped the antigens. of the bacterial body.
It is thus possible to isolate the constituents of the anti-gene extract of the Proteus variants: a polysaccharide specific to the variants obtained, which is responsible for the serological reactions typical of the strain. This released poly saccharide can be precipitated by adding several volumes of alcohol or acetone.
The polysaccharide gives the antigenic protein element its specificity and is responsible for the serological reactions typical of the strain.
These stable variants obtained by the process according to <B> the </B> patent No. 523321 (application No. 4239/70) are used for the manufacture of reagents for serodiagnosis and identification of infectious agents of atypical diseases.
These serological reagents allow the search for a specific treatment (sensitivity to antibiotics or other therapies).
They also have a definite interest in the search for the etiology of isolated mycoplasmas in infectious pathology. It is evident that the mosaic of antigens as it exists in the cell of intact stable variants contains substances other than the components phos pholipids, polysaccharides and proteins,
but it can be thought that only the polysaccharide and protein components are the essential elements of the antigenic manifestation.