CH520709A - Antibacterial cephalosporin C derivs - Google Patents

Antibacterial cephalosporin C derivs

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CH520709A
CH520709A CH590962A CH590962A CH520709A CH 520709 A CH520709 A CH 520709A CH 590962 A CH590962 A CH 590962A CH 590962 A CH590962 A CH 590962A CH 520709 A CH520709 A CH 520709A
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CH590962A
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Gordon Cox James Stuart
Fazackerley Harry
Derek Cocker John
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Glaxo Lab Ltd
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Abstract

(I) Cephalosporin C derivs of the general formula R2, R3 = H, acyl or R2 = H and R3 = triaryl-subst. alkyl or R2 and R3 = divalent acyl Z = residue of strong nucleophile from:- (a) thiourea, opt. subst. (b) aromatic and aliphatic thioamides (c) thiophenol, opt. substd. (d) p- and s-aromatic amines, opt. substd. but free from heterocyclic N substs. (e) thiols, opt. substd. (f) metal salts of azide, hydrogenphosphate and thiosulphate ions (g) pyrroles, opt. substd. (II) Salts of I Antibacterial agents or intermediates Stable to degradation in vivo E.g. cpd. (A) active against Staph. aureus and B. subtilis; also active against resistant Staph. aureus and resistant to Staphylococcal penicillinase. Cpds. solubilised in water for therapeutic use by amides, pref. urea or nicotinamide.

Description

       

  
 



  Verfahren zur Herstellung von   C ephalosp orinderivaten   
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Cephalosporinderivaten, insbesondere von neuen Derivaten des Cephalosporins C und verwandter Verbindungen.



   Die Konstitution des Cephalosporins C kann durch folgende Struktur wiedergegeben werden:
EMI1.1     
 worin R die Gruppe   -(CH2)3.CH(NH2)CoOH    bedeutet und in derselben Weise wird die Struktur der neuen nachfolgend aufgeführten Derivate bezeichnet.



   Cephalosporin C und verwandte Verbindungen reagieren mit bestimmten Verbindungen von hochnucleophiler Natur wie nachfolgend beschrieben, indem die Acyloxygruppe des Cephalosporinmoleküls unter Bildung neuer Derivate ersetzt wird. Diese Derivate besitzen antibakterielle Aktivität, welche in vielen Fällen derjenigen des Stamm-Cephalosporins überlegen ist.



   Diese neuen Verbindungen besitzen im allgemeinen den bedeutenden Vorteil, einer verbesserten Stabilität gegenüber Abbau in vivo, was sich z. B. durch Tierversuche ergibt, im Vergleich mit den entsprechenden Acetoxyverbindungen. Da die letzteren eine Aktivität gegenüber penicillinresistenten Organismen besitzen, ist dies sehr wichtig. Die Verbindungen besitzen ebenfalls Bedeutung als Zwischenprodukte zur Umwandlung in andere Cephalosporinderivate.



   Die Erfindung betrifft nun einVerfahren zur Herstellung von   Gephalosporin-C-Derivaten    der Formel
EMI1.2     
 worin A den über das S-Atom gebundenen Rest eines stark nucleophilen S-haltigen Mittels, und zwar eines a) Thioharnstoffes oder substituierten Thioharnstoffes, b) aromatischen oder aliphatischen Thioamides oder c) eines Thiols, z. B. eines Thiophenols oder substituierten Thiophenols, R2 und   R3    jeweils Wasserstoffatome oder R2 ein Was   serstoffatom    und   R8    eine Acylgruppe oder eine mit Triaryl substituierte Alkylgruppe bedeuten, oder worin R2 und   Ra    zusammen einen zweiwertigen Acylrest bilden.



   Das erfindungsgemässe Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung der Formel  
EMI2.1     
 worin   Rt    ein Acylrest ist, in einem inerten polaren Medium bei pH 5 bis 8 mit einem den Rest A abgebenden Mittel umsetzt.



   Da die Gruppe R auch die Gruppe    HOOC-CH(NH2) . (cH2)3-CO    und die Gruppe   Rt    eine Acetylgruppe darstellen kann, ist ersichtlich, dass unter die Formel I auch Cephalosporin C als auch dessen Derivate fallen.



     R3    kann ganz allgemein eine Acylgruppe darstellen, zum Beispiel eine Alkanoyl-, Alkenoyl-, substituierte Alkanoylgruppe, wie z. B. Aralkanoyl-, Aryloxyalkanoyl-S-Arylthioalkanoyl- und S-Arylthioalkanoylgruppen. Als Acylgruppen kommen vorzugsweise die folgenden Reste in Betracht:
1.)   R'(CH2)nCO,    worin R' einen Aryl-, Cycloalkyl-, substituierten Aryl- oder substituierten Cycloalkylrest und n eine ganze Zahl zwischen 1 und 4 bedeuten. Als Beispiele dieser Gruppe seien Phenylacetyl, Nitrophenylacetyl und Phenylpropionyl aufgezählt.



   2.)   CnH2ff+l    CO, worin n eine ganze Zahl von   L7    bedeutet. Die Alkylgruppe kann geradkettig oder verzweigtkettig und kann gewünschtenfalls durch ein Sauerstoff- oder ein Schwefelatom unterbrochen sein.



  Beispiele derartiger Gruppen sind Hexanoyl-, Heptanoyl-, Octanoyl- und Butylthioacetylreste.



   3.)   CnH2n tCO,    worin n eine ganze Zahl   zwi-    schen 2 und 7 ist. Die Alkenylgruppe kann geradkettig oder verzweigt sein und gegebenenfalls kann sie durch ein Sauerstoffatom oder Schwefelatom unterbrochen sein. Als Beispiele derartiger Gruppen seien Acrylyl-, Crotonyl- und Allylthioacetylgruppen aufgeführt.



   4.) R'O CR"R"'.CO,   worin R'    die unter 1.) angegebene Bedeutung besitzt und R" und R"', die gleich oder verschieden sein können, Wasserstoffatome oder Alkylgruppen bedeuten. Ein Beispiel einer derartigen Gruppe stellt die Phenoxyacetylgruppe dar.



   5.) R'SCR"R"'.CO, worin R', R" und R"' die vorstehend angegebene Bedeutung besitzen. Beispiele derartiger   Thiogruppen    sind S-Phenylthioacetyl-, S-Chlorphenylthioacetyl- und S-Bromphenylthioacetylgruppen.



   6.)   R'(CH2)rnS(CH2)nCR"R"'.CO,    worin R', R" und R"' die vorstehend angegebene Bedeutung besitzen, m eine ganze Zahl zwischen 1 und 4 und n die Zahl 0 oder eine ganze Zahl zwischen 1 und 4 bedeuten. Beispiele derartiger Gruppen sind S-Benzylthioacetyl-, Benzylthiopropionyl- und   ,B-Phenäthylthioacetyl-    gruppen.



   7.) R'CO, worin R' die vorstehend angegebene Bedeutung besitzt. Als Beispiel derartiger Gruppen seien Benzoyl-, substituierte Benzoyl- und Cyclopentanoylgruppen aufgeführt. Falls die Benzoylgruppe substituiert ist, können die Substituenten auch Alkyl- oder Alkoxygruppen sein und die Substituenten können in den 2- oder 2- und 6-Stellungen stehen. Eine geeignete 2,6-disubstituierte Benzoylgruppe stellt z.B. das 2,6 Dimethoxybenzoyl dar.



   Die Umsetzung kann bequemerweise bewirkt werden, indem die Reaktionsteilnehmer in Lösung umgesetzt werden, d. h. die Reaktionsteilnehmer werden in der Lösung bei mässiger Temperatur, z. B.   15-700    C, vorzugsweise   37-500    C, während eines Zeitraums von einigen Stunden oder auch Tagen gehalten, bis das gewünschte Derivat in optimalen Ausbeuten erhalten ist.



  Die Reaktion verläuft besonders gut, wenn sie bei einer Temperatur von etwa   37     C während   eines eit-    raums zwischen 48 und 72 Stunden durchgeführt wird.



  Die Reaktionsteilnehmer werden vorteilhafterweise in ein Verhältnis von etwa 1 molaren Äquivalent der Verbindung der allgemeinen Formel II auf 1-10 molare Äquivalente des nucleophilen Reagenses angewandt.



  Der ph-Wert der Reaktionslösung wird vorteilhafterweise innerhalb der Grenzen 5,0-8, bevorzugt 6-7, gehalten. Erforderlichenfalls sollte der pH-Wert der Lösung auf den gewünschten Wert durch Zugabe eines Puffermittels, z. B. Natriumacetat oder bei Verwendung eines Alkalisalzes des Cephalosporins der allgemeinen Formel II durch Zugabe von z. B. Essigsäure eingestellt werden.



   Da die Reaktion nach einem polaren oder ionischen Mechanismus abzulaufen scheint, ist es notwendig, ein stark polares Medium anzuwenden, damit die Reaktion bei messbarer Geschwindigkeit abläuft. Das am allgemeinsten geeignete Lösungsmittel besteht aus Wasser, jedoch kann in den Fällen, bei welchen das nucleophile Mittel in Wasser nicht sehr löslich ist, ein Gemisch aus Wasser und einer mit Wasser mischbaren organischen Flüssigkeit, z. B. Dimethylformamid, Aceton oder   Äthanol    angewandt werden; geeignete Verhältnisse für derartige Lösungsmittelmischungen sind 50:50 (v/v) oder 30:70   (v/v).    Nichtwässrige polare Lösungsmittel, wie z. B. Aceton, können ebenfalls angewandt werden.

 

   Das Reaktionsprodukt kann aus dem Reaktionsgemisch, welches z. B. unverändertes Cephalosporin oder andere Substanzen enthalten kann, durch eine Vielzahl von Methoden, z. B. Kristallisation, Ionophorese,   Papierchromatographie oder Chromatographie auf Ionenaustauschharzen abgetrennt werden.



   Gegebenenfalls kann in einigen Fällen die erhaltene Verbindung dann mit einem weiteren nucleophilen Mittel behandelt werden, um einen Ersatz des ersten nucleophilen Mittels zu bewirken. Dies kann bei bestimmten nucleophilen Mitteln von Vorteil sein.



   Bevorzugte Cephalosporin-Verbindungen der allgemeinen Formel II sind Cephalosporin C und sein Benzylanaloges (R3 = Phenylacetyl), insbesondere in Form ihrer Alkalisalze, beispielsweise des Natriumsalzes. Wie sich jedoch aus den nachfolgenden Beispielen ergibt, ergaben sich auch bei anderen derartigen analogen Verbindungen mit einer vorteilhaften Aktivität.



   Zu geeigneten nucleophilen Mitteln der Gruppe (a), den Thioharnstoffen, gehören Verbindungen der Formel
EMI3.1     
 worin R4, R5,   R6    und R7, die gleich oder verschieden sein können, Wasserstoffatome oder Alkyl-, Cycloalkyl-, Alkenyl-, Aryl-, oder Aralkylgruppen, sowie substituierte Gruppen von diesen Typen bedeuten oder worin R4 und   R6    zusammen eine Alkylengruppe, z. B.



  eine   Äthylengruppe    bilden. Beispiele derartiger Thioharnstoffe sind Thioharnstoff selbst, N-Phenylthioharnstoff, N,N'-Diphenylthioharnstoff und   Sithylenthioharn-    stoff.



   Besonders bevorzugt wird es, Thiole zu verwenden, einschliesslich von Aminothiolen und substituierten Aminothiolen als nucleophile Mittel der Gruppe (c).



  Beispiele derartiger nucleophiler Mittel sind 2-Aminoäthanthiol,   2-Amino-2-methylpropan- 1 -thiol,    3 Dimethylaminopropan-l-thiol und 2-Piperidinoäthan1-thiol.



   Die als nucleophile Mittel in Form ihrer Metallsalze verwendeten Anionen liegen vorzugsweise in Form ihrer Alkalisalze, z. B. der Natriumsalze vor.



   Wie vorstehend aufgeführt, sind die nach dem erfindungsgemässen Verfahren erhältlichen Verbindungen neu. Die neuen Verbindungen können in die folgenden allgemeinen Klassen eingeteilt werden, die den vorstehend aufgeführten Klassen der nucleophilen Mittel entsprechen: (a) Solche mit der allgemeinen Formel:
EMI3.2     
 worin R2,   R3,    R4,   R5,    R6 und R7 die vorstehend angegebenen Bedeutungen besitzen: (b)solche mit der allgemeinen Formel:
EMI3.3     
 worin R2,   RS,    R4 und R5 die vorstehend angegebenen Bedeutungen besitzen und   R8    einen aliphatischen oder aromatischen Rest bedeutet; (c) solche mit der allgemeinen Formel:

  :
EMI3.4     
  worin R2 und   R3    die vorstehend angegebenen Bedeutungen besitzen und   R9    einen aromatischen oder substituierten aromatischen Rest bedeuten, sowie deren Alkalimetallsalze.



   Zu dieser Unterklasse gehören Verbindungen, die sich von in dem Kern mit einer Amino- oder einer substituierten Aminogruppe, z. B. einer Alkylamino- oder Dialkylaminogruppe, substituierten Thiophenolen ableiten. Einfache Beispiele derartiger Thiophenole sind o- und p-Aminothiophenol. Dazu gehören auch Verbindungen, die sich von Thiophenolen ableiten, welche eine konjugierte Elektronen-anziehende Gruppe, d. h.



  eine derartige Gruppe in o- oder p-Stellung oder gegebenenfalls in mehr als einer derartigen Stellung enthalten. Beispiele dieser Art nucleophiler Mittel sind die verschiedenen Nitrothiophenole, z. B. o-Nitrothiophe   nol    und   o,p-Dinitrothiophenol.   



   Unter dem Ausdruck  Elektronen-anziehende
Gruppe , der in der organischen Chemie bekannt ist, wird ein Substituent verstanden, welcher Elektronen stärker als Wasserstoff anzieht, (siehe z. B. A. M.



   Remick  Electronic Interpretatione of Organic Chemi stry , John Wiley  & Sons Inc., New York, 1943).



   Beispiele für Elektronen-anziehende Gruppen, die in den bei dem erfindungsgemässen Verfahren verwende ten nucleophilen Mitteln vorhanden sein können, sind
Nitrogruppen, Nitrosogruppen, Carbonylgruppen,
Carboxylgruppen, Cyanogruppen und Trifluormethyl gruppen.



  (d) (1) solche mit der Formel
EMI4.1     
 worin R2 und   R3    die vorstehend angegebenen Bedeutungen besitzen und R11 eine aliphatische oder vorzugsweise substituierte aliphatische Gruppe bedeutet, sowie deren Alkalimetallsalze;  (2) solche mit der Formel
EMI4.2     
 worin R12 einen heterocyclischen Ring bedeuten, sowie deren Salze. Wichtige Mitglieder der Unterklasse sind Verbindungen, die von heterocyclischen Verbindungen mit geeigneten Substituenten herstammen und die aus 5- oder 6-gliedrigen Ringen und aus heterocyclischen Verbindungen dieser Art, welche an 6-gliedrige carbocyclische Ringe, z. B. Benzolringe, gebunden sind, sich ableiten. Heteroatome, die in dem Ring vorhanden sein können, sind Stickstoff, Schwefel und Sauerstoff, wobei mindestens einer davon Stickstoff sein muss.



  Üblicherweise ist die Mercaptogruppe an ein Kohlenstoffatom des heterocyclischen Rings gebunden und ein heterocyclisches Stickstoffatom steht anstossend an dieses Kohlenstoffatom, Der heterocyclische Ring kann andere Substituenten, z. B. N-Alkylgruppen, ketonischen Sauerstoff und dergleichen enthalten. In diese Unterklasse fallen deshalb Derivate des Thiazolins, Hydantoins, Imidazols, Thiazols, Oxazols und dergleichen, jedoch enthält es keine cyclischen Thioharnstoffe.



   Beispiele heterocyclischer nucleophiler Mittel, welche verwendet werden können, sind somit 2-Mercaptothiazolin, 2-Mercaptohydantoin,   1-Methyl-2-merc apto    imidazol,   2-Mercapto-imidazol,      2=Mercapto-benzimid-    azol,   2-Mercapto-beIlzthiazol,      2-Mercapto-benzoxazol    und 2-Mercapto-pyridin.



   Als Beispiele für die Gruppe   R12    seien aufgeführt:
EMI4.3     
  
EMI5.1     

EMI5.2     
 Selbstverständlich können, obwohl diese heterocyclischen Verbindungen als Thiole (Mercaptoverbindungen) oder Thionverbindungen aufgeführt sind, diese als Thion-, Mercaptozwitteriontautomere vorliegen und es werden auch derartige tautomere Formen umfasst. Es sei bemerkt, dass die heterocyclischen Verbindungen als Mercapto- oder Thionverbindungen aus Gründen der Herkömmlichkeit beschrieben sind.



   Die vorstehend aufgeführten Verbindungen besitzen im allgemeinen antibakterielle Aktivität, wenn mindestens eine Acylgruppe an der Aminogruppe in der 7-Stellung vorhanden ist und einige dieser Verbindungen zeigen eine überlegene antibakterielle Aktivität gegenüber bestimmten Organismen, als es das Stamm Cephalosporinderivat selbst tut. Verbindungen von besonderer Bedeutung sind die gegebenenfalls substituierten Thiouronium- und   Azidderivate.    Verbindungen, deren 7-Stellung durch eine unsubstituierte Aminogruppe besetzt ist, sind besonders wertvoll als Zwischenprodukte zur Herstellung von Cephalosporinanalogen.



   Ein Verfahrensprodukt von besonderer Bedeutung ist z. B. das   Thiouroniumderivat    des Benzylcephalosporins und kann durch folgende Formel wiedergegeben werden:
EMI5.3     
 Das Ultraviolettspektrum dieser Verbindung zeigt folgende Werte:    10 260(ru, E01' 189.   



  Es zeigt markante biologische Aktivität gegenüber Staph.aureus und V.subtilis. Die Aktivität dieses Derivates gegenüber Staph. aureus war gegenüber derjenigen des Stamm-Cephalosporin C, Benzylcephalosporin und dem Thiouroniumsalz des Cephalosporin C überlegen.

 

  Es zeigte sich, dass es nicht nur eine signifikante Aktivität gegen penicillinsensitive Stämme von Staph.



  aureus besass, sondern auch eine markante Aktivität gegen wichtige Stämme von penicillinresistenten Stämmen von Staph- aureus. Weiterhin erwies es sich höchst resistent gegenüber Staphylokokken-Penicillinase ebenso wie natürlich Cephalosporin C und Benzylcephalosporin. Eine andere Verbindung, die ebenfalls wichtig ist, stellt das Thiouroniumsalz des Cephalosporins C dar, welches sich gegenüber Staph. aureus und B. subtilis aktiver erwies als Cephalosporin C.



   Andere wichtige Verfahrensprodukte, welche eine etwas ähnliche Aktivität wie die Verbindung der Formel XI aufweisen sind:  1)   7-Benzylthioacetamidocephalosporin-thiouronium salz   
EMI6.1     
 2) 7-Allylthioacetamidocephalosporin-thiouroniumsalz
EMI6.2     
 3)   7-A-Benzylthiopropionamidocephalosporin-thiouroniumsalz   
EMI6.3     
 4)   7-ss-Phenylpropionamidocephalosporin-thiouroniurnsalz   
EMI6.4     
 5) 7-Pentancarboxamidocephalosporin-thiouroniumsalz
EMI6.5     
  6) 7-n-Butylthioacetamidocephalosporin-thiouroniumsalz
EMI7.1     
 7) 7-p-Chlorphenylthioacetamidocephalosporin-thiouroniumsalz
EMI7.2     
 8)   7-ss-Phenäthylthioacetamidocephalosporin-thiouroniumsalz   
EMI7.3     
 9) 7-Phenylacetamidocephalosporin-mercaptopyridinderivat
EMI7.4     
 10)  <RTI  

    ID=7.2> 7-Phenylacetamidocephalosporin-N-äthyl-thiouroniumsalz   
EMI7.5     
  11) 7-Phenylacetamidocephalosporin-mercaptobenz oxazolderivat
EMI8.1     

Die erfindungsgemäss erhaltenen Verbindungen können hydrolysiert werden, insbesondere diejenigen, die direkt aus Cephalosporin C erhalten wurden, wobei die entsprechenden   7-Aminocephalosporansäurederivate    erhalten werden, die die folgende Formel besitzen
EMI8.2     
 worin Z den Rest eines starken nucleophilen Mittels, wie sie oben definiert wurden, bedeutet. Diese Derivate stellen wichtige Zwischenprodukte zur Herstellung von Acylderivaten dar, z. B. von Phenylacetylderivaten.



   Die erfindungsgemäss hergestellten Verbindungen können auf irgendeine übliche Weise, gegebenenfalls zusammen mit anderen antibiotisch wirksamen Substanzen, zur Herstellung von pharmazeutischen Präparaten verwendet werden.



   So können die Verbindungen zu injizierbaren Präparaten in Lösung oder Suspension in einem   geeignete    ten Medium, z. B. sterilem, pyrogen-freien Wasser verarbeitet werden. Andererseits können sie mit festen Trägerstoffen vermischt und dann gegebenenfalls zu Tabletten gepresst oder in Kapseln abgefüllt werden.



  Sie können auch mit geeigneten Grundlagen zur Herstellung von Suppositorien vermischt werden.



   Einige der erfindungsgemäss erhältlichen Verbindungen besitzen eine niedrige Löslichkeit und es wurde gefunden, dass die Löslichkeit dieser Verbindungen verbessert werden kann, wenn ein physiologisch verträgliches, wasserlösliches Amid als Löslichkeitsaktivator zugesetzt wird.



   Das wasserlösliche, verwendbare Amid muss physiologisch verträglich sein und darf infolgedessen keine unzulässigen toxischen Effekte bei den angewandten Verhältnissen hervorrufen.



   Bevorzugt werden Harnstoff oder Nicotinamid verwendet, da diese Substanzen physiologische Substanzen darstellen und im Fall von Harnstoff der Körper mit einem genügenden Entfernungsmechanismus für dasselbe versehen ist, während   Nicoünamid    ein Glied des B-Komplexes der Vitamine ist. Jedoch können andere wasserlösliche Amide, z. B. Acetamid ebenfalls verwendet werden, welche keine unzulässigen toxischen Effekte hervorrufen. Es sei bemerkt, dass die Verabreichung eines wasserlöslichen Amides, insbesondere parenteral, Anlass zu einigen Nebeneffekten, wie z. B.



  Verminderung des Blutdruckes geben kann, jedoch können derartige kleine Nebeneffekte in vielen Fällen hingenommen werden. Im allgemeinen wird die Verwendung von Amiden, welche Feststoffe bei 200 C sind, bevorzugt.



   Die erfindungsgemäss erhältlichen Verbindungen eignen sich sowohl für die orale als auch für die parenterale Applikation, sie sind von besonderer Bedeutung zur Herstellung von injizierbaren Präparaten für die intramuskuläre oder subcutane Injektion. Die Präparate können auch als trockene Gemische des antibiotischen Materials zusammen mit dem Amid hergestellt werden, wobei diese Gemische zur Auflösung oder Dispersion in pyrogen-freiem Wasser vor der Injektion geeignet sind. Die für die orale Applikation bestimmten Präparate können Trägerstoffe, wie z. B. Geruchsmittel und Süssungsmittel, enthalten.



   Lösungen und Suspensionen der aktiven Substanzen können auch weitere löslichmachende Substanzen enthalten, insbesondere physiologisch verträgliche wasser-mischbare organische Lösungsmittel für das aktive Material, z. B. Alkohol, Propylenglycol, Dimethylformamid, Dimethylacetamid und dergleichen. Es sei bemerkt, dass einige dieser Substanzen zur parenteralen Verabreichung nicht geeignet sind, während sie für orale Verabreichung geeignet sind und umgekehrt.



   Die Verfahrensprodukte können zusammen mit anderen antibakteriellen Antibiotika, insbesondere den Penicillinen, z. B. Penicillin G und/oder den Tetracyclinen als Komponenten in den pharmazeutischen Präparaten enthalten sein.



   In den nachfolgenden Beispielen wurden die folgenden Tests und Versuchs anordnungen angewandt.  



   Papierchromatographie
Phosphat-gepufferte Papiere
Wasserfreies Dinatriumhydrogenphosphat (7,05 g) in 2,5 Liter Wasser (0,02 Mol) wurde mit Phosphorsäure auf pH 6 eingestellt; Whatman-Papiere No. 1( 30 X 50 cm) wurden in die vorstehende Lösung eingetaucht und bei   37     C über Nacht getrocknet.



   Natriumacetat-gepufferte Papiere
Hydratisiertes Natriumacetat (13,6 g) in 1 Liter Wasser (0,1 M) wurde mit Essigsäure auf pH 5 eingestellt; Whatman-Papiere No. 1 (30 x 30 cm) wurden in die vorstehende Lösung eingetaucht und getrocknet.



   Die Papierchromatogramme wurden auf den phosphat-gepufferten Papieren in (A)   Butan-1-ol-.2ithanol-    Wasser (4:1:5; Volumen) und (B) Propan-l-ol-Wasser (7:3; Volumen) laufen gelassen. Ebenso wurden die Natriumacetat-gepufferten Papiere in Essigsäureäthylester-Natriumacetat-System (Essigsäureäthylester gesättigt mit Natriumacetat-Puffer pH 5,0) laufen gelassen.



   Elektrophorese
Die Elektrophorese wurde auf Whatman 3MM Papier bei 17 v/cm (während   2,54    Stunden, falls nichts anderes angegeben ist) in wässriger Collidinacetatlösung (0,05 M bezüglich Acetat) pH 7,0 und Pyridinacetatlösung (0,05 M bezüglich Acetat) pH 4,0 laufen gelassen.



   Die Ergebnisse der Elektrophorese sind ausgedrückt als der von den Derivaten erzielte Abstand in Beziehung zu dem Abstand von Cephalosporin C oder gegebenenfalls Benzylcephalosporin C unter denselben Bedingungen. Ein positiver (+) Wert bedeutet Wanderung der Anode, d. h. das Molekül ist negativ geladen, während ein negativer (-) Wert eine Wanderung gegen über der Kathode bedeutet, d. h. positive Ladung.



   Die Glieder der Benzylcephalosporinreihe sind als dunkle Flecken zu sehen, wenn das Papier vor eine Quelle für Ultraviolettlicht   (R    230-300 m) gebracht wird (Benzylcephalosporinderivate geben natürlich keine Färbung mit Ninhydrin). Sie liessen sich auch mittels Bioautographen auf Agarplatten, die mit S.



  aureus C864 (Oxford H-Stamm), B. subtilis ATCC 6633 oder V. cholerae C833 (abgeschwächter Laboratoriumsstamm) inoculiert waren, feststellen.



   Die Glieder der Cephalosporin-C-Reihe liessen sich als dunkle Flecken sehen, wenn das Papier von einer Quelle für Ultraviolettlicht   (230-300 m,u)    gebracht wurde und erscheinen als dunkle Flecken, wenn das Papier mit Ninhydrin besprüht wird. Sie lassen sich auch mittels Bioautographen auf Agarplatten, die mit S. aureus C864 (Oxford H-Stamm) oder B. subtilis ATCC 6633 inoculiert sind, feststellen.



   Beispiel 1  (a) Herstellung des Thiouroniumsalzes von Cephalosporin C
5 g des Natriumsalzes von Cephalosporin C wurden zusammen mit 8 g Thioharnstoff in 200 ccm destilliertem Wasser gelöst und im Dunkeln bei   37     einige Tage stehen gelassen. Der Verlauf der Reaktion wurde durch Papierchromatographie verfolgt. Nach 4-5 Tagen zeigte sich, dass wenig Cephalosporin C übrig war. Die erhaltene Lösung wurde mit 1000 ccm Aceton behandelt und auf   0     C abgekühlt. Der ölige, sich bildende Niederschlag wurde durch Zentrifugation abgetrennt und es ergab sich bei weiterer Behandlung mit Aceton ein blassbrauner fester Stoff (3,7 g). Unter denselben Bedingungen blieb eine Lösung von Thioharnstoff (Konzentration 4 g/1000 ccm) klar.

  Der blassbraune Feststoff, der das gesamte biologisch aktive Material enthielt, wurde in 50 ccm Wasser gelöst und durch eine Säule (26,0 X 2,5 cm) von Dowex1 (X 8) im Acetatzustand gegeben. Das Thiouroniumsalz wurde rasch aus der Kolonne gelöst und erscheint meist mit der Lösungsmittelfront. Die Kolonne wurde mit Wasser eluiert und 25   ccm-Fraktionen    gesammelt.



   Die Untersuchung dieser Fraktionen durch Papierchromatographie zeigte, dass nur Spuren von Thioharnstoff in den Lösungen des Thiouroniumsalzes vorhanden waren und dass das gesamte unumgesetzte Cephalosporin C entfernt war. Die wässrigen Lösungen, die die Thiouroniumverbindung enthielten, wurden gefriergetrocknet, wobei sich ein cremefarbiger fester Stoff (2,58 g) ergab. Dieses Material wurde weiterhin durch Extraktion mit absolutem Methanol zur Entfernung des vorhandenen Natriumacetates gereinigt, wobei die Thiouroniumverbindung als flockiger, fester Stoff (2,18 g) erhalten wurde.



   Ultraviolett-Absorption (in H2O)     # max. sehr breit 2590-2640 A E 1% 161.



   1cm   
Das Thiouroniumsalz wurde als weisser mikrokristalliner Feststoff durch vorsichtige Ausfällung aus einer wässrigen Lösung mittels Methanol erhalten.



   Ultraviolett-Absorption (in   H2O)       2 marx.    sehr breit 2590-2640 A   EI1C01m0    189.



  Bei der Elektrophorese auf Papier zeigte das Produkt, wie zu erwarten, keine Änderung bei pH 7,0 oder pH 4,0.



   Bei Papierchromatographie in Butan-1-ol-äthanol Wasser war der Rf-Wert   ( > 0,02)    des Salzes niedriger als derjenige des Cephalosporins C (0,03). In gleicher Weise war der Rf-Wert in Propanol-Wasser niedriger (0,11) im Vergleich zu Cephalosporin C (0,22). Durch Papierchromatographie wurde festgestellt, dass sich bei saurer Hydrolyse sowohl a-Aminoadipinsäure als auch Thioharnstoff ergibt.

 

   Aus diesen Eigenschaften ergibt sich, dass die Acetoxygruppe in dem Cephalosporin C durch den Thiouroniumrest ersetzt wurde.



   (b) Saure Hydrolyse des
Cephalosporin-thiouroniumsalzes
50 mg Cephalosporin-thiouroniumsalz wurden in 2 ccm Salzsäure von verschiedenen Stärken (a) n/10, (b)   ln,    (c) 2n, (d) 3n, (e) 4n, (f) 5n gelöst und 1. bei Raumtemperatur von ca.   250 C    und 2. bei   37  C    einige Tage stehen gelassen. Aliquote Teile von   10,ul    wurden in geeigneten Zwischenräumen entnommen.



  Die Reaktionen wurden durch Papierchromatographie und Elektrophorese verfolgt. In allen Fällen wurde die Thiouroniumverbindung (Rf 0,11) in ein schneller  wanderndes Material (Rf 0,20) verwandelt, welches sehr schwach biologisch aktiv sowohl gegenüber S.



  aureus und B. subtilis war und leicht unter U. V. Licht als dunkle Zone (wie sämtliche Cephalosporinderivate) sich feststellen liess. Beim Besprühen der Chromatogramme mit (a) wässrigem Pyridin und anschliessend (b) mit einer Acetonlösung von Phenylacetylchlorid ergab dieses rascher wandernde Material   (Rf    0,20) ein sehr biologisch aktives Material. Ähnliche Verfahren wurden angewandt, um dieses Material nach der Elektrophorese festzustellen, bei welcher es sich schneller zu der Kathode bei pH 4,0 bewegte als das Cephalosporinthiouroniumsalz.



   Aufgrund direkter Analogie mit Cephalosporin ist dieses Material das 7-Aminocephalosporan-thiouroniumsalz. Aus diesen Vorversuchen ergab es sich, dass geeignete Bedingungen für die Herstellung von 7-Ami   nocephalosporan-thiouroniums alz    (d. h. des Thiouroniumkernes) vorliegen, wenn das Thiouroniumsalz mit 2 bis 3 n Salzsäure   34    Tage lang behandelt wird.



   (c) Abtrennung des Thiouroniumkernes aus der sauren
Hydrolyse des Cephalosporin-C-thiouroniumsalzes
Die Säule und die Puffer wurden entsprechend dem Verfahren von Hirs, Moore und Stein, J. Biol.



  Chem. 1952, 195, 669 hergestellt.



   500 mg   Cephalosporin-C-thiouroniumsalz    wurden in 20 ccm 2n Salzsäure gelöst und 3 Tage stehen gelassen. Der pH-Wert der Lösung wurde dann auf pH 4,0 mit Natriumhydrogencarbonat eingestellt. Die Lösung wurde dann biologisch bei diesem Punkt untersucht und es zeigte sich, dass etwa 30    /o    der ursprünglichen biologischen Aktivität noch vorhanden waren.



  Diese Lösung wurde durch eine Kolonne (2,5 30 cm) von Dowex -50 (NH4-Zustand) gegeben und mit einem Ammonium-Formiat-Puffer (pH 4,05, 0,2 M) eluiert.



  Fraktionen von 10 ccm wurden gesammelt und entsprechend ihrer Ultraviolettabsorption analysiert. Es wurden 60 Fraktionen gesammelt, von denen die Fraktionen 8-28 die Gipfelfraktion enthielten. Die Untersuchung dieses Materials nach der Gefriertrocknung zeigte, dass es unverändertes Cephalosporin-C-thiouroniumsalz zusammen mit anderen Hydrolyseprodukten enthielt. Es war kein Thiouroniumkern in irgendeiner dieser Fraktionen vorhanden.



   Fortgesetzte Eluierung der Säule mit Ammonium acetatpuffer (pH 6,8, 0,2 M) ergaben den Kern als breiten Gipfel (Fraktionen 70-90). Diese Lösung, welche den   Tniouroniumkern    enthielt, was durch Papierchro   matographie    und Bioversuch nach der Besprühung mit Pyridin und Phenylacetylchlorid gezeigt wurde, wurde unter Verwendung eines grossen Überschusses von Phenylacetylchlorid phenylacetyliert, wobei der pH-Wert der Lösung bei 7 durch Zugabe von Natriumhydrogencarbonat gehalten wurde. Die erhaltene Lösung enthielt   Benzylcephalosporin-thiouroniumsalz    als einzig aktives Material. Direkte Isolierung des Kerns war nicht möglich in diesem Fall, da nicht der gesamte Ammoniumacetatpuffer entfernt werden konnte.



   Bei den Beispielen 6-8 wurde das folgende Versuchsverfahren angewandt.



   250 mg (0,5 mMol) des Natriumsalzes von Cephalosporin C wurden in 10 ccm einer wässrigen Lösung des in einer Menge von 5 mMol verwendeten nucleophilen Reagenses gelöst. Der pH-Wert der Lösung lag zwischen 5,0 und 7,5 und wurde erforderlichenfalls auf einen Wert innerhalb dieses Bereiches durch Zugabe von Essigsäure eingestellt. In bestimmten Fällen, wo die Löslichkeit in Wasser niedrig war, z. B. bei Diphenylthioharnstoff, wurde die Reaktion in   50 6/obigem    (v/v) Dimethylformamid durchgeführt. Das Gemisch wurde bei 370 C gehalten und nach entsprechenden Zwischenräumen, z. B. 24, 48 und 72 Stunden wurden 5 oder   10,ul-Proben    auf Papier aufgetragen zur Analyse sowohl durch Elektrophorese als auch durch Chromatographie.

  Durch Bioautographien ergaben sich die neuen Substitutionsprodukte und das restliche Cephalosporin C. Ähnliche Ergebnisse wurden nach der Besprühung mit Ninhydrin erhalten.



   Die Elektrophoreseergebnisse sind als Wanderungsabstand des Derivates in Beziehung zu der Stamm Cephalosporin-Verbindung unter denselben   Bedingun-    gen angegeben. Ein positiver   (+)    Wert bedeutet Wanderung zu der Anode, d. h. das Molekül ist negativ geladen, während ein negativer (-) Wert Wanderung zur Kathode bedeutet, d. h. das Molekül ist positiv geladen. Die Ergebnisse dieser Beispiele sind in Tabellenform nachfolgend wiedergegeben.



   Tabelle I Beispiel Nucleophiles Reaktions- Rf-Wert Elektrophorese Formel d. Derivates
Mittel medium auf Ceph. pH 4,0 pH 7,0 (in allen Fällen
Cbezogen R2   =H,R5    =
HOOGCH(NH2)    (CH2)S-CO-)    2 Thioharnstoff   H2O    0,53   - 0,19    - 0,26 Formel III
R4,   R5,    R6 und R7 = H 3 Phenylthio-   H20    1,39 - - Formel III harnstoff Reaktion R4 = Phenyl durchgeführt   Rs,      R6    und    bei500    C R7 = H  
Tabelle   l    (Fortsetzung) Beispiel Nucleophiles Reaktions- Rf-Wert Elektrophorese Formel d.

  Derivates
Mittel medium auf Ceph. pH 4,0 pH 7,0 (in allen Fällen
C bezogen   R    = H, R3 =    HOO & H(NH2)-     (CH2)a-CO-) 4 Diphenylthio- Dimethyl-   2,43**    - - Formel III harnstoff   formamid/H2     R4 = Phenyl  (70: 30 v/v) R6 = Phenyl
R5 und R7 = H 5   Athylenthio-    Dimethyl- 0,64 - - Formel III harnstoff formamid/H20   R4 und R6     (70: 30 v/v) zusammen =  Äthylen
R5 und R7 = H 6   Thioacetamid    H2O 1,41** - - Formel IV
R4 und R5 = H    Rs = Methyl    7 Thiophenol AetOH/H2O 2,17 - - Formel V  (50:

   50 v/v)   R6    = Phenyl 8 2-Amino- H2O 0,42 +0,33 +0,35 Formel VII  äthanthiol   Rtt=       -C2H4-NH    ** Reaktionslösung enthält auch weitere biologisch aktive Verbindungen.



   Beispiel 9  (a) 72 mg des Natriumsalzes des Benzylcephalosporins wurden zusammen mit 128 mg Thioharnstoff in 3 cbm destilliertem Wasser gelöst und im Dunkeln bei 370 C einige Tage stehen gelassen. Nach 3 Tagen wurde der gebildete weisse Niederschlag durch Zentrifugieren entfernt.



   Dieses Material wurde mit Aceton und Äther gewaschen und ergab einen weissen, festen Stoff (28,9 mg).



  Eine weitere Menge (etwa 5 mg) dieses Materials wurde aus der Mutterlaugen erhalten. Dieser Feststoff ergab einen einzigen biologisch aktiven Flecken bei der Chromatographie im Propanol/Wasser-System (7:3; Volumen). Rf-Wert = 0,74. R-Wert Benzyl ceph. = 0,91.



   Die Untersuchung der Mutterlauge durch Chromatographie zeigte das Vorhandensein von unverändertem Natriumsalz des Benzylcephalosporins (Rf 0,81), von Thioharnstoff (Rf 0,50) und geringer Mengen des Benzylcephalosporin-thiouroniumsalzes   (Rf.    0,74). Das auf diese Weise erhaltene Benzylcephalosporin-thiouroniumsalz war in Wasser sehr spärlich löslich ( < 5   mg/ccm).   



   Bei der Papierelektrophorese ergab sich, dass es keine Ladungsänderung bei pH 7,0 erhält.



   Ultraviolettspektrum (in   H2O)       A max.      2600 A      E 1%    189.

 

   1 cm  (b) Bei der Phenylacetylierung eines entsprechend Beispiel 1 (b) erhaltenen Gemisches in wässrigem Aceton (50 v/v) unter Verwendung eines grossen   Über-    schusses von Phenylacetylchlorid, d. h. den Bedingungen, die zur Umsetzung mit dem Cephalosporinkern verwendet wurden, ergab sich eine Lösung, die das Benzylcephalosporin-thiouroniumsalz, das durch seinen Rf-Wert im Vergleich mit einer authentischen Probe identifiziert wurde, zusammen mit anderem biologisch aktiven Material, z. B. dem Cephalosporin-C-thiouroniumsalz und N-Phenylacetyl-cephalosporin-C-thiouroniumsalz enthielt. Die Gesamtausbeute der Umwandlung von Cephalosporin-C-thiouroniumsalz in das Benzylcephalosporin-thiouroniumsalz liegt in der Grösenordnung von   4 o/o.     



   Beispiele 10-23
Herstellung der
Glieder der Cephalosporin-C-Reihe
250 mg (0,5 mMole) des Natriumsalzes von Cephalosporin C wurden in einer wässrigen Acetonlösung (50 v/v; 10 ccm) des nucleophilen Mittels (1,5 mMol, d. h. 3 molare Äquivalente) gelöst. Der pH-Wert der Lösung betrug zwischen 5,0 und 7,5 und wurde erforderlichenfalls auf einen Wert innerhalb dieses Bereiches durch Zugabe von Essigsäure oder Natriumbicarbonat eingestellt. Das Gemisch wurde bei 37 oder   500 C    gehalten und nach entsprechenden Zwischenräumen, z. B. 24, 48 und 72 Stunden usw, wurden 5 oder   10,ul-Proben    zur Analyse sowohl durch Elektrophorese als auch durch Chromatographie entnommen. Bei Bioautographien ergab sich das neue Substitutionsprodukt und restliches Cephalosporin C.



     Ähnliche    Ergebnisse wurden nach Besprühen mit Ninhydrin erhalten.



   Beispiele 24-41
Herstellung der Glieder der Benzylcephalosporin-C-Reihe
Aufgrund der durchschnittlich grösseren mikrobiologischen Aktivität der Benzylcephalosporin-C-Reihe und auch der bequemeren Untersuchung wegen wurden verdünntere Lösungen als im Vorstehenden angewandt, z. B. wurde 7-Phenylacetamido-cephalosporansäure (Benzylcephalosporin C) als Natriumsalz in einer Menge von 10 mg in einer wässrigen Acetonlösung (50 v/v; 2 ccm) des nucleophilen Mittels (3 molare Aquivalente) gelöst. Die Reaktion wurde wie bei den vorstehenden Beispielen durchgeführt mit der Ausnahme, dass aliquote Teile von etwa   l,ul    zur Chromatographie und Elektrophorese verwendet wurden.



   Die Ergebnisse sind in tabellarischer Form in den nachfolgenden Tabellen II und III wiedergegeben. In den Tabellen bedeutet P. W. das System Propanol/ Wasser und B. E. W das System   Butanol/Sithanol/Was-    ser.



   Tabelle II
Nucleophile Substitution von Cephalosporin C
R Ceph.-C-Wert Elektrophorese Beispiel Nucleophiles Mittel P. W. B. E. W. pH 4,0 pH 7,0 10 Athylenthioharnstoff 0,63 von Ceph.   -0,27      -0,67   
C nicht trennbar 11 2-Mercaptothiazolin 1,55 4,11 - 12 2-Mercaptohydantoin 1,64 5,35   - 0,77    -   0,20    13 1-Methyl-2-mercaptoimidazol 0,75 von Ceph.   -0,15    +0,52
C nicht trennbar 14   2-Mercapto-imidazol    0,79 von Ceph.

   -0,16 +0,39
C nicht trennbar 15 2-Mercaptobenzimidazol 2,0 4,6 -0,39 +0,22 16 2-Mercaptobenzothiazol 2,0 8,0   + 0,65      + 0,54    17 2-Mercaptobenzoxazol 1,9 8,0 +0,79 +0,50 18 2-Aminothiophenol 2,4 10,0 +0,80 +0,74 19   4-Aminothiophenol    2,25 10,0   + 0,04    +0,53 20 4-Nitrothiophenol 1,75 8,0 +0,93 +0,69 21 2,4-Dinitrothiophenol 2,0 4,0 +0,63 +0,55 22 2-Aminoäthanthiol 0,44 0,2   +0,22      + 0,25    23 3-Dimethylaminopropanthiol 0,55 0,4   -0,50      -0,08     
Tabelle III
Nucleophile Substitution von  Benzylcephalosporin C  Beispiel Nucleophiles Mittel   R-Benzyl-Ceph.-C-Wert    Elektrophorese
B. E. W.   Ät.

  Ac.    *   pH 4,0      pH 7,0    24   Athylenthioharnstoff    von Benzyl- 0,08   - 0,17    0,58
Ceph.-C nicht trennbar 25 2-Mercaptothiazolin 1,15 3,06 - 0,20   -1,20    26 2-Mercaptohydantoin 1,17 0,09 -   01,20    -   01,56    27 1-Methyl-2-mercaptoimidazol von Benzyl- 0,41 -0,14 +0,31
Ceph.-C nicht trennbar 28 2-Mercapto-imidazol 1,15 0,25 --0,22   - 0,19    29 2-Mercaptobenzimidazol 1,25 1,9   -0,17    +0,18 30 2-Mercaptobenzothiazol 1,25 3,5 +0,45 +0,29 31 2-Mercaptobenzoxazol 1,25 3,3 +0,66 +0,48 32   2-Aminothiophenol    1,20 3,35 +0,27 +0,54 33   4-Aminothiophenol    1,25 3,4 +0,0 +0,0 34 4-Nitrothiophenol 1,20 3,35 +0,65 +0,73 35  <RTI  

    ID=13.14> 2-Aminoäthanthiol    0,80 0,05   -0,27      -0,25    36 3-Dimethylaminopropanthiol 0,75 0,05 - 0,27 -   0,25    37 2-Mercapto-4-methylpyrimidin 1,1 3,0 +0,73 +0,55 38   2,-Amino-5-mercapto-1,3,4-thiadiazol    1 0,3 +0,72 +0,52 39 2-Mercaptopyridin 1,15 3,6 - +0,3 40   Athylthioharnstoff    1,0 0 0 41 Isopropylthioharnstoff 1,0 0 0   * Ät. Ac. = Essigsäureäthylester
Beispiel 42
Herstellung des 2-Mercaptobenzoxazolderivates von Cephalosporin    5 G    Cephalosporin C in 75 ccm Wasser wurden unter Rühren zu einer Lösung von 5 g 2-Mercaptobenzoxazol in 215 ccm Aceton und 60 ccm Wasser zugegeben und der pH-Wert von 5 mit n-Natriumhydrogencarbonat auf 6,6 gestellt.

  Das Gemisch (ca. 60 v/v Aceton) wurde bei   37  C    vier Tage gehalten, wobei sich bei Papierchromatographie das Vorhandensein nur noch geringer Mengen Cephalosporin C ergab. Das Reaktionsgemisch wurde dann bei   0     auf 2 Liter mit Aceton verdünnt.



   Filtrierung nach 3 Stunden ergab einen ziemlich weissen festen Stoff (4 g Ausbeute,   80 6/0    Gewicht/ Gewicht Cephalosporin C), der durch Papierchromatographie einen Gehalt einer kleinen Menge (ca.   5 0/5)    Cephalosporin C ergab. Das rohe Substitutionsprodukt zeigte die chromatographischen und elektrophoretischen Eigenschaften, die in Tabelle II (Beispiel 17) aufgeführt sind. Es war in Wasser stark löslich.  



   Beispiel 43
Herstellung des 2-Mercaptobenzthiazolderivates von Benzylcephalosporin C
435 mg des Natriumsalzes von Benzylcephalosporin C in 4 ccm Wasser wurden zu einer Lösung von 496 mg 2-Mercapto-benzothiazol in 6 ccm Aceton gegeben und der auftretende pH-Wert auf 7,0 mit n Natriumhydrogencarbonat eingestellt. Das Gemisch wurde bei   500 C    während 65 Stunden gehalten, wo praktisch das gesamte Ausgangsmaterial umgesetzt war (Papierchromatographie). Das Aceton wurde dann im Vakuum entfernt und die hinterbleibende wässrige Suspension mit 10 ccm Wasser behandelt und mit Essigsäureäthylester bei pH 6 in Gegenwart von gesättigtem Natriumchlorid (5ccm) extrahiert. Ein ziemlich weisser, fester Stoff (A) wurde während der Extraktion abgetrennt.

  Die hinterbleibende wässrige Lösung nach dieser Extraktion wurde auf pH 2 eingestellt und weiterhin mit Essigsäureäthylester extrahiert. Der Extrakt bei pH 6 (486 mg) enthielt unverändertes nucleophiles Mittel und das gewünschte Substitutionsprodukt. Der Extrakt bei pH 2 (65 mg) enthielt Spuren von unver ändertem Benzylcephalosporin.



   Der Feststoff (A) (unlöslich in Aceton; 136 mg) bestand aus dem gewünschten Substitutionsprodukt mit den in Tabelle III (Beispiel 30) aufgeführten chromatographischen und elektrophoretischen Eigenschaften und war chromatographisch homogen.



   Beispiel 44
Herstellung des 1-Methyl-2-mercapto imidazolderivates von Benzylcephalosporin C    100mg    des Natriumsalzes von Benzylcephalosporin C wurden in 1 ccm Wasser gelöst und mit einer Lösung von 85 mg (3 molare Äquivalente) von 1 Methyl-2-mercaptoimidazol in 1 ccm Aceton behandelt. Die erhaltene Lösung wurde bei 370 C einige Tage stehen gelassen, wobei die Reaktion durch Papierchromatographie verfolgt wurde. Nach 4 Tagen wurde der   Überschuss    des nucleophilen Mittels aus dem Reaktionsgemisch durch Extraktion mit Chloroform (2
X 1 ccm) entfernt und der pH-Wert der hinterbleibenden wässrigen Lösung auf ca. 2,5 entweder mit Phosphorsäure oder mit   Amberlite    IR.120 (H+) eingestellt, Durch Extraktion mit Essigsäureäthylester (3 X 2 ccm) wurde das restliche unveränderte Benzylcephalosporin C entfernt.

  Die hinterbleibende wässrige Lösung, die das neue Substitutionsprodukt enthielt, wurde auf pH 7 mit Natriumhydrogencarbonat oder Deacidite G(CO3") eingestellt und gefriergetrocknet.



   Durch Untersuchung mittels Papierchromatographie und Elektrophorese ergab sich nur ein biologisch aktives Material, d. h. das   Benzylcephalosporin-thio-    imidazoliniumsalz, obwohl unterschiedliche Mengen anorganischer Salze vorhanden waren, je nachdem, ob Ionenaustauschharze zur Einregelung des pH-Wertes verwendet wurden. Das   Benzylcephalosporin-thloimid-       azoliniumsalz    war sowohl gegenüber S. aureus als auch
V. cholerae aktiv.



   Beispiel 45  (a) Herstellung von Phenoxymethylcephalosporin
500 mgm   7-Aminocephalosporans äure    (7ACA)    (E te/m    = 260   marx.    = 300   m,    gelöst in 25   ml    3   0/obiger      NaHCO3    (5 molare Äquivalente) wurden mit   16 mol    Aceton behandelt. Die Lösung wurde auf unterhalb   5  C    abgekühlt und mit einem Magnetrührer gerührt, während   376 mg    Phenoxyacetylchlorid, gelöst in 10 ml Aceton tropfenweise im Verlauf von 30 Minuten zugegeben wurden. Die Lösung wurde im Verlauf einer Stunde auf Raumtemperatur gebracht.

  Das Aceton wurde im Vakuum entfernt und die wässrige Schicht mit 2 X 25   ml      ather    extrahiert. Nach Einstellung des pH-Wertes auf 4,0 mit 3n H2SO4 wurde der   Überschuss    an Phenoxyessigsäure extrahiert mit 1 X 50   ml    Benzol. Schliesslich wurde der pH-Wert der wässrigen Schicht auf 2,0 eingestellt und dann mit 3 X 50 mm Essigsäureäthylester extrahiert.



  Diese Extrakte wurden zusammengegeben, 10 Minuten über Na2SO4 getrocknet und das Volumen im Vakuum eingeengt, wobei sich 724 mg eines Öls ergaben. Dieses wurde in einem minimalen Volumen Aceton (etwa 3 ml) aufgenommen und dazu   326 mg    Natrium   2-äthylhexoat    (1,1 molares Äquivalent) in wässrigem Aceton zugegeben. Die Lösung wurde 1 1/2 Stunden kalt gehalten und das Produkt durch Filtration abgetrennt, mit trockenem Aceton gewaschen und getrocknet.



  Ausbeute: 470 mg.



     
1. U.V. Amjn zu = 235
Elol, -126
1 cm    max. = 263    E 1%    = 190
1cm
2. Chromatographie:    Propanol/Wasser    (7: 3) RF = 0,73
Essigsäureäthylester/pH 5 Puffer RF = 0,33
3. Elektrophorese: bei pH 4,0 und 7,0   Rceph.c    = 1,0  (b) Herstellung der Phenoxymethylcephalosporin    thiouronium-Verbindung       200mg    des Natriumsalzes von Phenoxymethylcephalosporin und 240 mg Thioharnstoff wurden in 2 ml H2O gelöst und im Dunkeln 3 Tage bei 370 C gehalten. Beim Abkühlen der Lösung auf   0     C wurde ein Niederschlag erhalten, der bei   0     C filtriert und mit wenig eiskaltem Wasser gewaschen wurde. 

  Der Fest stoff wurde in einem Vakuum-Exsiccator über Nacht getrocknet, wobei sich 67,2 mg Feststoff ergaben.



   1. U.V.: Schulter bei 258-265   mjt       #max. = 237 m        A      min    =   230 r9u   
2. Chromatographie:
Propanol/H2O 0,665
Essigsäureäthylester/Puffer   0   
3. Elektrophorese:
Keine Bewegung bei pH 4,0 und 7,0  
Beispiel 46  (a) Herstellung von n-Heptylcephalosporin    500mg    von 7ACA in 25 ml   3 0/oigem      NaHCO3    und 16 ml Aceton gelöst. Die Lösung wurde auf unterhalb   5     C abgekühlt und 0,73 ml (2,5 molare Äquivalente) Caprylylchlorid in 10 ml trockenem Aceton tropfenweise im Verlauf von 30 Minuten zugegeben.



  Die Lösung wurde dann im Verlaufe einer Stunde auf Raumtemperatur gebracht, das Aceton wurde im Vakuum entfernt und die hinterbleibende Lösung 2 X mit 25   ml    Äther extrahiert. Der pH-Wert wurde auf 3,0 vor der Benzolextraktion ( 1 X 50 ml) eingestellt und danach weiterhin auf 2,0 vor der Extraktion mit Essigsäureäthylester (3 X 50 ml) gebracht. Die Essigsäure äthylesterschichten wurden dann zusammengegossen, über Na2SO4 getrocknet und im Vakuum eingeengt, wobei sich 391 mg eines kristallinen Feststoffes ergaben. Dieser wurde in wenig Aceton gelöst und 170 mg (1,1 molares Aquivalent) Natrium-2-äthylhexoat in wässrigem Aceton zugegeben. Die Lösung wurde eine Stunde in den Eisschrank gestellt und das Produkt durch Filtrieren gesammelt, mit trockenem Aceton gewaschen und getrocknet.



   1.   U.V.:       min.    = 220    X max    = 263
2. Chromatographie:    Butanol/ÄtOH/H20    RF 0,75
Propanol/H20   RF    0,84    Essigsäureäthylester/Puffer    R 0,70
3. Elektrophorese: pH 7,0 RCeph.c   =1,0    pH 4,0 Rceph.c = 1,04  (b) Herstellung der n-Heptylcephalosporin thiouroniumverbindung
150 mg des Natriumsalzes von n-Heptylcephalosporin und 70 mg Thioharnstoff wurden in 5   ml      H2O    in der Dunkelheit bei 370 C während 3 Tagen incubiert. Diese Lösung hatte sich am Ende dieser Zeit völlig verfestigt und wurde mit H2O verrieben und das gallertige Material abfiltriert, mit H2O gewaschen und im Vakuum-Exsiccator getrocknet, wobei sich 124 mg eines amorphen Pulvers ergaben.



   1. U.V.: Schulter bei 258-265   my,    jedoch ist die Probe nicht rein
2. Chromatographie:    Propanol/H,O    RF = 0,770
Essigsäureäthylacetat/Puffer RF = 0,102
3. Elektrophorese: bei pH 4,0 und 7,0 keine Bewegung
In gleicher Weise wurden verschiedene andere Acylderivate des Cephalosporin-thiouroniumderivates hergestellt. Die Ergebnisse sind in den nachfolgenden Tabellen IV und IVa aufgeführt.



   Tabelle IV Beispiel Acylgruppe R-Benzyl-Ceph.Wert Elektrophorese
B. E. W. At. Ac. pH 4,0 pH 7,0 47 S-Phenyl-thioacetyl 0,88 0,16     C,H,-S-CH,CO-    48 S-Benzyl-thioacetyl 0,92 0,29 -0,11 -0,14    CssH5-CH2-S . CH2CO-    49 Benzoyl 0,80 0,09 50 2,6-Dimethoxybenzoyl 0,88 - -0,17   (Propanol
Wasser
System)  
Tabelle IVa Beispiel Acylgruppe   U.V.-Werte       max. (m E1iO0!m    51 p-Bromphenylthioacetyl 256-257 290 nicht voll gelöst 52 p-tert.-Butylphenylthioacetyl 245 380    p-(CH3)8. C. C6H4 S. CH2CO- Ebene    53 ss-Benzylthiopropionyl 261-262 200
C6H5CH2.S.CH2.CH2.CO- 54 Phenäthylthioacetyl 260 163    C6H5CH2.CH2.S.CH2.CO-    55 n-Butylthioacetyl 260 207 56 Propargylthioacetyl 260 208
CH=C. CH2. S . CH2.

  CO- 57 p-Chlorphenylthioacetyl 254-256 326
Beispiele 58-66  (a) Herstellung des Natriumsalzes von
7-Allylthioacetamido-cephalosporansäure
1,9 g 7-Aminocephalosporansäure (7mMol) wurden in 100 ml Essigsäureäthylester suspendiert und mit 2 g (13,3 mMol) Allylthioacetylchlorid behandelt.



  Nach 1,25 stündigem Kochen unter Rückfluss wurde die Lösung von einer geringen Menge unlöslichen Materials abfiltriert und das Filtrat im Vakuum zur Trockne gebracht. Die hinterbleibende gummiartige Masse wurde in einem Gemisch aus 20 ml Aceton und   20ml    Äther gelöst, filtriert und mit einer 10% oigen Lösung von   Natriumäthylhexanoat    in n-Butanol (15ml) und anschliessend mit Äther (150 ml) behandelt. Der erhaltene cremefarbene Niederschlag wurde abfiltriert und getrocknet (2,34 g). Die Kristallisation aus wässrigem Aceton ergab das Produkt in Form eines weissen kristallinen festen Stoffes   (1,13    g),   Ämax    (Phosphatpuffer bei pH 6) 260   rqu    (e = 9080).

  Eine weitere Kristallisation ergab ein Material von   AmaX    (wie oben (260   m,      (e    = 9300) [a]D +   1170    (c = 0,87;   H2O).   



   Diese Verfahrensweise wurde auch erfolgreich für Acylierungen von 7-Aminocephalosporansäure mit Cyclopentanoylchlorid,   p-Bromphenylthio acetylchlorid,    n-Butanoylchlorid, p-Nitrophenylacetylchlorid, n Butancarboxychlorid, n-Pentancarboxychlorid, trans Cinnamoylchlorid und ss-Phenylpropionylchlorid verwendet.



   b) Die erhaltenen Natriumsalze wurden dann mit Thioharnstoff entsprechend den vorstehenden Beispielen umgesetzt. Die erhaltenen Thiouroniumsalze hatten die folgenden Eigenschaften:
Tabelle V Beispiel Acylgruppe U.V. Daten
H2O E1%    # max (m ) 1.cm    58 Cyclopentanoyl 262,5 224 9 000 59 p-Bromphenylthioacetyl 258 283 60 n-Butanoyl 263 207 61 Allylthioacetyl 261 208 8 730 62 p-Nitrophenylacetyl 270 376 17 000  
Tabelle V (Fortsetzung) Beispiel Acylgruppe U.V. Daten   µ/m      e   
H2O   1 cm       #max. (m )    63 n-Butancarboxy 263 233 64 n-Pentancarboxy 263 240 65 trans-Cinnamoyl 278 862    CssH5. CH=CH. CO-    66 ss-Phenylpropionyl 259-262 224 Die Elementaranalysen einiger der vorstehenden Verbindungen sind in Tabelle VI aufgeführt.



   Tabelle Vl Beispiel Gefunden Berechnet
C H Br Cl N S C H Br   C1    N S 47 C17H18N4O4S3H2O 44,3 4,3 - - 12,3 21,8 44,7 4,4 - - 12,3 21,07 48 C18H2ON4O4S3.H2O 45,5 4,7 - - 12,2 20,9 45,9 4,7 - - 11,9 20,4 49 C17H21CIN406S3 . 2H2O 39,8 4,09 - 6,5 10,8 19,4 40,1 4,2 - 7,0 11,0 18,9 50 C15H2ON4O4S2 . H2O 44,1 5,5 - - 14,2 16,1 44,8 5,5 -   -    13,9 15,9 51   Ct7H,7Br . N404S3    39,0 3,6 15,6 - 10,9 18,5 39,5 3,4 15,4 - 10,8 18,6 52 C14H20N4O5S3 . H2O 40,4 4,9 - - 13,2 23,1 40,0 4,8 -   -    13,3 22,9 53 C15H22N4O4S2 . ¸H2O 45,8 5,9   -      -    13,8 15,1 45,6 5,9 -   -    14,2 16,2 54 C18H20N4O4S2 . 

  H2O 49,4 5,5 - - 12,7 14,4 49,3 5,1 - - 12,8 14,6 55   C19H52N4O4S3 .1/21110    48,0 5,0 - - 11,8 20,7 48,0 4,9 - - 11,8 20,23 56 C,4Ht6N404S3 - H2O 39,9 4,4 - - 13,1 22,9 40,2 4,3 - - 13,4 23,0
Die Aktivität von   verschiedenen    in den vorstehenden Beispielen hergestellten Verbindungen gegenüber unterschiedlichen Stämmen von S. aureus wurde mit dem Rohrverdünnungsversuch festgestellt und mit verwandten Cephalosporinverbindungen verglichen. Die Ergebnisse sind in den Tabellen VII, VIII und IX zusammengefasst.  



   Tabelle VII
Minimale
Hemmungskonzentration  (g/ml)    5. aureus   
C864
Oxford- S. aureus Untersuchte Verbindung Stamm 663 Cephalosporin C 62 62 Cephalosporin-Cthiouroniumsalz 8  Verbindung von Beispiel 10 20  Verbindung von Beispiel 15 - 62 Verbindung von Beispiel 16 - 0,5 Verbindung von Beispiel 17 - 31 Verbindung von Beispiel 18 - 62 Verbindung von Beispiel 19 - 31
Tabelle VIII
Minimale
Hemmungskonzentration  (g/ml)
S. aureus
C864
Oxford- S. aureus Untersuchte Verbindung Stamm 663 Benzylcephalosporin 0,16 0,16   Benzficephalosporin-    thiouroniumsalz 0,06 0,06 Verbindung von Beispiel 29 0,08 01,04 Verbindung von Beispiel   30 -    0,01 Verbindung von Beispiel 31 0,04 0,04 Verbindung von Beispiel 32 - 0,02 Verbindung von Beispiel 33 - 0,01
Tabelle IX
Minimale
Hemmungskonzentration    (glml)   
S.

   aureus
C864
Oxford- S. aureus Untersuchte Verbindungen Stamm 604 Verbindung von Beispiel 47 0,01 0,08 Verbindung von Beispiel 48 0,02 0,04
Tabelle IX   (Fortsetzung)   
Minimale
Hemmungskonzentration    (ginal)   
S. aureus  -C864
Oxford- S. aureus Untersuchte Verbindungen Stamm 604 Verbindung von Beispiel 58 31 2,5 Verbindung von Beispiel 59  <  0,01 0,31 Verbindung von Beispiel 60 0,08 0,31 Verbindung von Beispiel 61 0,04 0,15 Verbindung von Beispiel 62 0,01 0,15 Verbindung von Beispiel 63 0,16 0,62 Verbindung von Beispiel 64 0,04 0,16 Verbindung von Beispiel 65 0,5 2,0 Verbindung von Beispiel 66 0,08 0,16 Verbindung von Beispiel 52 0,05 0,62 Verbindung von Beispiel 53 0,01 0,16 Verbindung von Beispiel 54 0,08 0,62 Verbindung von Beispiel 55 0,02 0,16 Verbindung von Beispiel 56 0,04 0,08 Verbindung von Beispiel 57 0,02 0,08 Verbindung von  

   Beispiel 9 0,06 0,30 Verbindung von Beispiel 39 0,04 0,31 Verbindung von Beispiel 40 0,31 2,5 Verbindung von Beispiel 31 0,04 0,31 



  
 



  Process for the preparation of C ephalosp orinderivaten
The invention relates to a process for the preparation of cephalosporin derivatives, in particular of new derivatives of cephalosporin C and related compounds.



   The constitution of cephalosporin C can be represented by the following structure:
EMI1.1
 where R is the group - (CH2) 3.CH (NH2) CoOH and in the same way the structure of the new derivatives listed below is designated.



   Cephalosporin C and related compounds react with certain compounds of a highly nucleophilic nature as described below by replacing the acyloxy group of the cephalosporin molecule to form new derivatives. These derivatives have antibacterial activity which in many cases is superior to that of the parent cephalosporin.



   These new compounds generally have the significant advantage of being an improved stability against degradation in vivo, which is e.g. B. by animal experiments, in comparison with the corresponding acetoxy compounds. Since the latter have activity against penicillin-resistant organisms, this is very important. The compounds are also important as intermediates for conversion into other cephalosporin derivatives.



   The invention now relates to a process for the preparation of gephalosporin C derivatives of the formula
EMI1.2
 wherein A is the radical of a strongly nucleophilic S-containing agent bonded via the S atom, namely a) thiourea or substituted thiourea, b) aromatic or aliphatic thioamides or c) a thiol, e.g. B. a thiophenol or substituted thiophenol, R2 and R3 are each hydrogen atoms or R2 is a hydrogen atom and R8 is an acyl group or an alkyl group substituted by triaryl, or where R2 and Ra together form a divalent acyl radical.



   The inventive method is characterized in that a compound of the formula
EMI2.1
 where Rt is an acyl radical, is reacted with an agent releasing the radical A in an inert polar medium at pH 5 to 8.



   Since the group R is also the group HOOC-CH (NH2). (cH2) 3-CO and the group Rt can represent an acetyl group, it can be seen that the formula I also includes cephalosporin C and its derivatives.



     R3 can very generally represent an acyl group, for example an alkanoyl, alkenoyl, substituted alkanoyl group, such as e.g. B. aralkanoyl, aryloxyalkanoyl-S-arylthioalkanoyl and S-arylthioalkanoyl groups. The following radicals are preferably considered as acyl groups:
1.) R '(CH2) nCO, where R' is an aryl, cycloalkyl, substituted aryl or substituted cycloalkyl radical and n is an integer between 1 and 4. Examples of this group include phenylacetyl, nitrophenylacetyl and phenylpropionyl.



   2.) CnH2ff + 1 CO, where n is an integer of L7. The alkyl group can be straight-chain or branched and, if desired, can be interrupted by an oxygen or a sulfur atom.



  Examples of such groups are hexanoyl, heptanoyl, octanoyl and butylthioacetyl radicals.



   3.) CnH2n tCO, where n is an integer between 2 and 7. The alkenyl group can be straight-chain or branched and, if appropriate, it can be interrupted by an oxygen atom or a sulfur atom. Examples of such groups are acrylyl, crotonyl and allylthioacetyl groups.



   4.) R'O CR "R" '. CO, where R' has the meaning given under 1.) and R "and R" ', which can be identical or different, denote hydrogen atoms or alkyl groups. An example of such a group is the phenoxyacetyl group.



   5.) R'SCR "R" '. CO, where R', R "and R" 'have the meaning given above. Examples of such thio groups are S-phenylthioacetyl, S-chlorophenylthioacetyl and S-bromophenylthioacetyl groups.



   6.) R '(CH2) rnS (CH2) nCR "R"'. CO, where R ', R "and R"' are as defined above, m is an integer between 1 and 4 and n is the number 0 or mean an integer between 1 and 4. Examples of such groups are S-benzylthioacetyl, benzylthiopropionyl and B-phenethylthioacetyl groups.



   7.) R'CO, where R 'has the meaning given above. Benzoyl, substituted benzoyl and cyclopentanoyl groups may be mentioned as examples of such groups. If the benzoyl group is substituted, the substituents can also be alkyl or alkoxy groups and the substituents can be in the 2- or 2- and 6-positions. A suitable 2,6-disubstituted benzoyl group is e.g. which represents 2,6 dimethoxybenzoyl.



   The reaction can conveniently be effected by reacting the reactants in solution; H. the reactants are in the solution at a moderate temperature, e.g. B. 15-700 C, preferably 37-500 C, held for a period of a few hours or even days until the desired derivative is obtained in optimal yields.



  The reaction proceeds particularly well if it is carried out at a temperature of about 37 C for a period of between 48 and 72 hours.



  The reactants are advantageously used in a ratio of about 1 molar equivalent of the compound of general formula II to 1-10 molar equivalents of the nucleophilic reagent.



  The pH of the reaction solution is advantageously kept within the limits 5.0-8, preferably 6-7. If necessary, the pH of the solution should be adjusted to the desired value by adding a buffering agent, e.g. B. sodium acetate or when using an alkali salt of cephalosporin of the general formula II by adding z. B. acetic acid can be adjusted.



   Since the reaction appears to proceed by a polar or ionic mechanism, it is necessary to use a strongly polar medium in order for the reaction to proceed at a measurable rate. The most generally suitable solvent consists of water, but in those cases where the nucleophilic agent is not very soluble in water, a mixture of water and a water-miscible organic liquid, e.g. B. dimethylformamide, acetone or ethanol can be used; suitable ratios for such solvent mixtures are 50:50 (v / v) or 30:70 (v / v). Non-aqueous polar solvents, e.g. B. acetone can also be used.

 

   The reaction product can be obtained from the reaction mixture which, for. B. may contain unchanged cephalosporin or other substances by a variety of methods, e.g. B. crystallization, ionophoresis, paper chromatography or chromatography on ion exchange resins can be separated.



   Optionally, in some cases, the resulting compound can then be treated with a further nucleophilic agent to effect replacement of the first nucleophilic agent. This can be beneficial with certain nucleophilic agents.



   Preferred cephalosporin compounds of the general formula II are cephalosporin C and its benzyl analog (R3 = phenylacetyl), in particular in the form of their alkali metal salts, for example the sodium salt. However, as can be seen from the examples below, other analogous compounds of this type with advantageous activity were also found.



   Suitable nucleophilic agents of group (a), the thioureas, include compounds of the formula
EMI3.1
 wherein R4, R5, R6 and R7, which may be the same or different, represent hydrogen atoms or alkyl, cycloalkyl, alkenyl, aryl, or aralkyl groups, and substituted groups of these types, or wherein R4 and R6 together represent an alkylene group, e.g. . B.



  form an ethylene group. Examples of such thioureas are thiourea itself, N-phenylthiourea, N, N'-diphenylthiourea and sithylenethiourea.



   It is particularly preferred to use thiols including aminothiols and substituted aminothiols as group (c) nucleophilic agents.



  Examples of such nucleophilic agents are 2-aminoethane thiol, 2-amino-2-methylpropane-1-thiol, 3-dimethylaminopropane-1-thiol and 2-piperidinoethane-1-thiol.



   The anions used as nucleophilic agents in the form of their metal salts are preferably in the form of their alkali salts, e.g. B. the sodium salts.



   As stated above, the compounds obtainable by the process according to the invention are new. The new compounds can be divided into the following general classes corresponding to the classes of nucleophilic agents listed above: (a) Those having the general formula:
EMI3.2
 wherein R2, R3, R4, R5, R6 and R7 have the meanings given above: (b) those with the general formula:
EMI3.3
 in which R2, RS, R4 and R5 have the meanings given above and R8 is an aliphatic or aromatic radical; (c) those with the general formula:

  :
EMI3.4
  where R2 and R3 have the meanings given above and R9 is an aromatic or substituted aromatic radical, as well as their alkali metal salts.



   This subclass includes compounds which differ from in the nucleus with an amino or a substituted amino group, e.g. B. an alkylamino or dialkylamino group, derived substituted thiophenols. Simple examples of such thiophenols are o- and p-aminothiophenol. This also includes compounds derived from thiophenols which have a conjugated electron-attracting group, i.e. H.



  contain such a group in the o- or p-position or optionally in more than one such position. Examples of this type of nucleophilic agent are the various nitrothiophenols, e.g. B. o-Nitrothiophe nol and o, p-Dinitrothiophenol.



   Under the term electron-attracting
Group, which is known in organic chemistry, is understood to be a substituent which attracts electrons more strongly than hydrogen, (see e.g. A. M.



   Remick Electronic Interpretations of Organic Chemistry, John Wiley & Sons Inc., New York, 1943).



   Examples of electron-withdrawing groups which may be present in the nucleophilic agents used in the process according to the invention are
Nitro groups, nitroso groups, carbonyl groups,
Carboxyl groups, cyano groups and trifluoromethyl groups.



  (d) (1) those with the formula
EMI4.1
 in which R2 and R3 have the meanings given above and R11 denotes an aliphatic or, preferably, substituted aliphatic group, as well as their alkali metal salts; (2) those with the formula
EMI4.2
 wherein R12 is a heterocyclic ring, as well as their salts. Important members of the subclass are compounds derived from heterocyclic compounds with suitable substituents and consisting of 5- or 6-membered rings and from heterocyclic compounds of this type which are attached to 6-membered carbocyclic rings, e.g. B. benzene rings, are bound, derived. Heteroatoms that may be present in the ring are nitrogen, sulfur and oxygen, at least one of which must be nitrogen.



  Usually the mercapto group is bonded to a carbon atom of the heterocyclic ring and a heterocyclic nitrogen atom is adjacent to this carbon atom. The heterocyclic ring can have other substituents, e.g. B. N-alkyl groups, ketonic oxygen and the like. This subclass therefore includes derivatives of thiazoline, hydantoin, imidazole, thiazole, oxazole and the like, but it does not contain cyclic thioureas.



   Examples of heterocyclic nucleophilic agents that can be used are thus 2-mercaptothiazoline, 2-mercaptohydantoin, 1-methyl-2-merc apto imidazole, 2-mercapto-imidazole, 2 = mercapto-benzimid-azole, 2-mercapto-beIlzthiazole, 2-mercapto-benzoxazole and 2-mercapto-pyridine.



   Examples of the group R12 include:
EMI4.3
  
EMI5.1

EMI5.2
 Of course, although these heterocyclic compounds are listed as thiols (mercapto compounds) or thione compounds, these may exist as thione, mercaptozwitterion tautomers, and such tautomeric forms are also included. It should be noted that the heterocyclic compounds are described as mercapto or thione compounds for convenience.



   The compounds listed above generally have antibacterial activity when there is at least one acyl group on the amino group at the 7-position, and some of these compounds show superior antibacterial activity against certain organisms than does the cephalosporin derivative strain itself. Compounds of particular importance are the optionally substituted thiouronium and azide derivatives. Compounds whose 7-position is occupied by an unsubstituted amino group are particularly valuable as intermediates for the preparation of cephalosporin analogs.



   A process product of particular importance is z. B. the thiouronium derivative of benzylcephalosporin and can be represented by the following formula:
EMI5.3
 The ultraviolet spectrum of this compound shows the following values: 10 260 (ru, E01 '189.



  It shows marked biological activity against Staph.aureus and V.subtilis. The activity of this derivative against Staph. aureus was superior to that of the parent cephalosporin C, benzylcephalosporin and the thiouronium salt of cephalosporin C.

 

  It was found that there was not only significant activity against penicillin-sensitive strains of Staph.



  aureus, but also had marked activity against important strains of penicillin-resistant strains of Staphaureus. It also proved to be highly resistant to staphylococcal penicillinase as well as, of course, cephalosporin C and benzylcephalosporin. Another compound, which is also important, is the thiouronium salt of cephalosporin C, which is opposite to Staph. aureus and B. subtilis proved more active than cephalosporin C.



   Other important products of the process which have somewhat similar activity to the compound of formula XI are: 1) 7-Benzylthioacetamidocephalosporin thiouronium salt
EMI6.1
 2) 7-allylthioacetamidocephalosporin thiouronium salt
EMI6.2
 3) 7-A-Benzylthiopropionamidocephalosporin thiouronium salt
EMI6.3
 4) 7-ß-phenylpropionamidocephalosporin thiouronium salt
EMI6.4
 5) 7-pentane carboxamidocephalosporin thiouronium salt
EMI6.5
  6) 7-n-Butylthioacetamidocephalosporin thiouronium salt
EMI7.1
 7) 7-p-chlorophenylthioacetamidocephalosporin thiouronium salt
EMI7.2
 8) 7-ß-phenethylthioacetamidocephalosporin thiouronium salt
EMI7.3
 9) 7-phenylacetamidocephalosporin-mercaptopyridine derivative
EMI7.4
 10) <RTI

    ID = 7.2> 7-phenylacetamidocephalosporin-N-ethyl-thiouronium salt
EMI7.5
  11) 7-phenylacetamidocephalosporin-mercaptobenz oxazole derivative
EMI8.1

The compounds obtained according to the invention can be hydrolyzed, in particular those obtained directly from cephalosporin C to give the corresponding 7-aminocephalosporanic acid derivatives which have the following formula
EMI8.2
 wherein Z is the residue of a strong nucleophilic agent as defined above. These derivatives are important intermediates for the preparation of acyl derivatives, e.g. B. of phenylacetyl derivatives.



   The compounds prepared according to the invention can be used in any customary manner, if appropriate together with other antibiotic substances, for the preparation of pharmaceutical preparations.



   Thus, the compounds to injectable preparations in solution or suspension in a suitable medium, z. B. sterile, pyrogen-free water can be processed. On the other hand, they can be mixed with solid carriers and then optionally pressed into tablets or filled into capsules.



  They can also be mixed with suitable bases for making suppositories.



   Some of the compounds obtainable according to the invention have a low solubility and it has been found that the solubility of these compounds can be improved if a physiologically compatible, water-soluble amide is added as a solubility activator.



   The water-soluble, usable amide must be physiologically compatible and, consequently, must not cause any inadmissible toxic effects under the conditions used.



   Urea or nicotinamide are preferably used, since these substances are physiological substances and in the case of urea the body is provided with a sufficient removal mechanism for the same, while nicounamide is a member of the B complex of vitamins. However, other water soluble amides, e.g. B. Acetamide can also be used, which do not cause any inadmissible toxic effects. It should be noted that the administration of a water-soluble amide, particularly parenterally, gives rise to some side effects such as e.g. B.



  There can be a decrease in blood pressure, but such small side effects can in many cases be accepted. In general, the use of amides which are solids at 200 ° C. is preferred.



   The compounds obtainable according to the invention are suitable both for oral and for parenteral administration; they are of particular importance for the production of injectable preparations for intramuscular or subcutaneous injection. The preparations can also be produced as dry mixtures of the antibiotic material together with the amide, these mixtures being suitable for dissolution or dispersion in pyrogen-free water before injection. The preparations intended for oral administration can contain carriers, such as. B. odorants and sweeteners.



   Solutions and suspensions of the active substances can also contain other solubilizing substances, in particular physiologically compatible water-miscible organic solvents for the active material, e.g. B. alcohol, propylene glycol, dimethylformamide, dimethylacetamide and the like. It should be noted that some of these substances are not suitable for parenteral administration while they are suitable for oral administration and vice versa.



   The products of the process can be used together with other antibacterial antibiotics, in particular the penicillins, e.g. B. Penicillin G and / or the tetracyclines may be included as components in the pharmaceutical preparations.



   In the examples below, the following tests and experimental arrangements were used.



   Paper chromatography
Phosphate buffered papers
Anhydrous disodium hydrogen phosphate (7.05 g) in 2.5 liters of water (0.02 mol) was adjusted to pH 6 with phosphoric acid; Whatman Papers No. 1 (30 X 50 cm) were immersed in the above solution and dried at 37 C overnight.



   Sodium Acetate Buffered Papers
Hydrated sodium acetate (13.6 g) in 1 liter of water (0.1 M) was adjusted to pH 5 with acetic acid; Whatman Papers No. 1 (30 x 30 cm) was immersed in the above solution and dried.



   The paper chromatograms were recorded on the phosphate-buffered papers in (A) butan-1-ol-.2ithanol-water (4: 1: 5; volume) and (B) propan-l-ol-water (7: 3; volume) run. Likewise, the sodium acetate-buffered papers were run in an ethyl acetate-sodium acetate system (ethyl acetate saturated with sodium acetate buffer pH 5.0).



   Electrophoresis
Electrophoresis was performed on Whatman 3MM paper at 17 v / cm (for 2.54 hours, unless otherwise specified) in aqueous collidine acetate solution (0.05 M with respect to acetate) pH 7.0 and pyridine acetate solution (0.05 M with respect to acetate) pH 4.0 run.



   The results of the electrophoresis are expressed as the distance achieved by the derivatives in relation to the distance from cephalosporin C or optionally benzylcephalosporin C under the same conditions. A positive (+) value means migration of the anode, i.e. H. the molecule is negatively charged, while a negative (-) value means migration towards the cathode, i.e. H. positive charge.



   The links of the benzylcephalosporin series can be seen as dark spots when the paper is brought in front of a source of ultraviolet light (R 230-300 m) (benzylcephalosporin derivatives do not, of course, color with ninhydrin). They could also be read using bioautographs on agar plates labeled with S.



  aureus C864 (Oxford H strain), B. subtilis ATCC 6633 or V. cholerae C833 (attenuated laboratory strain) were inoculated.



   The links of the Cephalosporin-C series were seen as dark spots when the paper was brought from a source of ultraviolet light (230-300 m, u) and appear as dark spots when the paper is sprayed with ninhydrin. They can also be determined using bioautographs on agar plates inoculated with S. aureus C864 (Oxford H strain) or B. subtilis ATCC 6633.



   Example 1 (a) Preparation of the thiouronium salt of Cephalosporin C
5 g of the sodium salt of cephalosporin C were dissolved together with 8 g of thiourea in 200 cc of distilled water and left to stand in the dark at 37 for a few days. The course of the reaction was followed by paper chromatography. After 4-5 days it was found that little cephalosporin C was left. The solution obtained was treated with 1000 cc of acetone and cooled to 0.degree. The oily precipitate which formed was separated off by centrifugation, and further treatment with acetone gave a pale brown solid (3.7 g). A solution of thiourea (concentration 4 g / 1000 ccm) remained clear under the same conditions.

  The pale brown solid, which contained all of the biologically active material, was dissolved in 50 cc of water and passed through a column (26.0 X 2.5 cm) of Dowex1 (X 8) in the acetate state. The thiouronium salt was quickly released from the column and usually appears with the solvent front. The column was eluted with water and 25 cc fractions collected.



   Examination of these fractions by paper chromatography showed that only traces of thiourea were present in the solutions of the thiouronium salt and that all of the unreacted cephalosporin C had been removed. The aqueous solutions containing the thiouronium compound were freeze-dried to give an off-white solid (2.58 g). This material was further purified by extraction with absolute methanol to remove the sodium acetate present to give the thiouronium compound as a fluffy solid (2.18 g).



   Ultraviolet absorption (in H2O) # max. very wide 2590-2640 A E 1% 161.



   1 cm
The thiouronium salt was obtained as a white microcrystalline solid by careful precipitation from an aqueous solution using methanol.



   Ultraviolet absorption (in H2O) 2 marx. very wide 2590-2640 A EI1C01m0 189.



  When electrophoresed on paper, as expected, the product showed no change at pH 7.0 or pH 4.0.



   In paper chromatography in butan-1-ol-ethanol-water, the Rf value (> 0.02) of the salt was lower than that of cephalosporin C (0.03). Likewise, the Rf value in propanol-water was lower (0.11) compared to cephalosporin C (0.22). It was found by paper chromatography that acid hydrolysis gives both α-aminoadipic acid and thiourea.

 

   It follows from these properties that the acetoxy group in the cephalosporin C has been replaced by the thiouronium residue.



   (b) Acid hydrolysis of the
Cephalosporin thiouronium salt
50 mg of cephalosporin thiouronium salt were dissolved in 2 cc hydrochloric acid of various strengths (a) n / 10, (b) ln, (c) 2n, (d) 3n, (e) 4n, (f) 5n and 1. at room temperature from approx. 250 C and 2. at 37 C for a few days. 10 µl aliquots were removed from appropriate spaces.



  The reactions were followed by paper chromatography and electrophoresis. In all cases the thiouronium compound (Rf 0.11) was transformed into a faster migrating material (Rf 0.20) which was very weakly biologically active against both S.



  aureus and B. subtilis and could easily be identified as a dark zone under UV light (like all cephalosporin derivatives). When the chromatograms were sprayed with (a) aqueous pyridine and then (b) with an acetone solution of phenylacetyl chloride, this more rapidly migrating material (Rf 0.20) gave a very biologically active material. Similar procedures were used to determine this material after electrophoresis, in which it moved faster to the cathode at pH 4.0 than the cephalosporin thiouronium salt.



   Based on a direct analogy with cephalosporin, this material is the 7-aminocephalosporan thiouronium salt. From these preliminary tests it was found that suitable conditions for the production of 7-aminocephalosporan thiouronium salt (i.e. the thiouronium nucleus) exist when the thiouronium salt is treated with 2-3N hydrochloric acid for 34 days.



   (c) Separation of the thiouronium nucleus from the acidic one
Hydrolysis of the cephalosporin C thiouronium salt
The column and buffers were prepared according to the method of Hirs, Moore and Stein, J. Biol.



  Chem. 1952, 195, 669.



   500 mg of cephalosporin C thiouronium salt were dissolved in 20 cc of 2N hydrochloric acid and left to stand for 3 days. The pH of the solution was then adjusted to pH 4.0 with sodium hydrogen carbonate. The solution was then biologically examined at this point and it was found that about 30% of the original biological activity was still present.



  This solution was passed through a column (2.5-30 cm) of Dowex -50 (NH4 state) and eluted with an ammonium formate buffer (pH 4.05, 0.2 M).



  Fractions of 10 cc were collected and analyzed for their ultraviolet absorption. 60 fractions were collected, of which fractions 8-28 contained the peak fraction. Examination of this material after freeze-drying showed that it contained unchanged cephalosporin C thiouronium salt along with other hydrolysis products. There was no thiouronium nucleus in any of these fractions.



   Continued elution of the column with ammonium acetate buffer (pH 6.8, 0.2 M) gave the core as a broad peak (fractions 70-90). This solution, which contained the Tiouronium nucleus, as shown by paper chromatography and bioassay after spraying with pyridine and phenylacetyl chloride, was phenylacetylated using a large excess of phenylacetyl chloride, the pH of the solution being kept at 7 by the addition of sodium hydrogen carbonate. The resulting solution contained benzylcephalosporin thiouronium salt as the only active material. Direct isolation of the core was not possible in this case because not all of the ammonium acetate buffer could be removed.



   The following experimental procedure was used in Examples 6-8.



   250 mg (0.5 mmol) of the sodium salt of Cephalosporin C was dissolved in 10 cc of an aqueous solution of the nucleophilic reagent used in an amount of 5 mmol. The pH of the solution was between 5.0 and 7.5 and, if necessary, was adjusted to a value within this range by adding acetic acid. In certain cases where the solubility in water has been low, e.g. B. with diphenylthiourea, the reaction was carried out in 50 6 / above (v / v) dimethylformamide. The mixture was kept at 370 ° C. and after appropriate intervals, e.g. B. 24, 48 and 72 hours, 5 or 10 µl samples were applied to paper for analysis by both electrophoresis and chromatography.

  Bioautographs revealed the new substitution products and the remaining cephalosporin C. Similar results were obtained after spraying with ninhydrin.



   The electrophoresis results are given as the migration distance of the derivative in relation to the strain cephalosporin compound under the same conditions. A positive (+) value means migration to the anode; H. the molecule is negatively charged, while a negative (-) value means migration to the cathode, i.e. H. the molecule is positively charged. The results of these examples are given below in tabular form.



   Table I Example Nucleophilic Reaction Rf Value Electrophoresis Formula d. Derivatives
Medium medium on Ceph. pH 4.0 pH 7.0 (in all cases
C related R2 = H, R5 =
HOOGCH (NH2) (CH2) S-CO-) 2 thiourea H2O 0.53 - 0.19 - 0.26 Formula III
R4, R5, R6 and R7 = H 3 phenylthio- H20 1.39 - - Formula III urea reaction R4 = phenyl carried out Rs, R6 and at 500 C R7 = H
Table 1 (continued) Example Nucleophilic Reaction Rf Value Electrophoresis Formula d.

  Derivatives
Medium medium on Ceph. pH 4.0 pH 7.0 (in all cases
C related R = H, R3 = HOO & H (NH2) - (CH2) a-CO-) 4 Diphenylthio- Dimethyl- 2.43 ** - - Formula III urea formamide / H2 R4 = phenyl (70: 30 v / v) R6 = phenyl
R5 and R7 = H 5 Ethylenethio- Dimethyl- 0.64 - - Formula III urea formamide / H20 R4 and R6 (70:30 v / v) together = ethylene
R5 and R7 = H 6 thioacetamide H2O 1.41 ** - - Formula IV
R4 and R5 = H Rs = Methyl 7 Thiophenol AetOH / H2O 2.17 - - Formula V (50:

   50 v / v) R6 = Phenyl 8 2-Amino- H2O 0.42 +0.33 +0.35 Formula VII ethanethiol Rtt = -C2H4-NH ** The reaction solution also contains other biologically active compounds.



   Example 9 (a) 72 mg of the sodium salt of benzylcephalosporin were dissolved together with 128 mg of thiourea in 3 cbm of distilled water and left to stand in the dark at 370 ° C. for a few days. After 3 days, the white precipitate formed was removed by centrifugation.



   This material was washed with acetone and ether to give a white solid (28.9 mg).



  Another amount (about 5 mg) of this material was obtained from the mother liquors. This solid gave a single biologically active spot on chromatography in a propanol / water system (7: 3; volume). Rf value = 0.74. R value benzyl ceph. = 0.91.



   Examination of the mother liquor by chromatography showed the presence of unchanged sodium salt of benzylcephalosporin (Rf 0.81), of thiourea (Rf 0.50) and small amounts of the benzylcephalosporin thiouronium salt (Rf. 0.74). The benzylcephalosporin thiouronium salt obtained in this way was very sparingly soluble in water (<5 mg / ccm).



   Upon paper electrophoresis, it was found that it does not receive any change in charge at pH 7.0.



   Ultraviolet spectrum (in H2O) A max. 2600 A E 1% 189.

 

   1 cm (b) In the phenylacetylation of a mixture obtained according to Example 1 (b) in aqueous acetone (50 v / v) using a large excess of phenylacetyl chloride, i. H. the conditions used to react with the cephalosporin core resulted in a solution containing the benzylcephalosporin thiouronium salt, identified by its Rf value compared to an authentic sample, along with other biologically active material, e.g. B. the cephalosporin-C-thiouronium salt and N-phenylacetyl-cephalosporin-C-thiouronium salt. The overall yield of the conversion of cephalosporin C thiouronium salt into the benzylcephalosporin thiouronium salt is of the order of magnitude of 4 o / o.



   Examples 10-23
Making the
Members of the cephalosporin C series
250 mg (0.5 mmoles) of the sodium salt of cephalosporin C was dissolved in an aqueous acetone solution (50 v / v; 10 cc) of the nucleophilic agent (1.5 mmoles, i.e. 3 molar equivalents). The pH of the solution was between 5.0 and 7.5 and, if necessary, was adjusted to a value within this range by adding acetic acid or sodium bicarbonate. The mixture was kept at 37 or 500 C and after appropriate intervals, e.g. 24, 48 and 72 hours, etc., 5 or 10 µl samples were taken for analysis by both electrophoresis and chromatography. Bioautographs revealed the new substitution product and the remaining cephalosporin C.



     Similar results were obtained after spraying with ninhydrin.



   Examples 24-41
Manufacture of the Benzylcephalosporin-C series members
Because of the higher average microbiological activity of the Benzylcephalosporin-C series and also because of the more convenient investigation, more dilute solutions than in the above were used, e.g. B. 7-phenylacetamido-cephalosporanic acid (benzylcephalosporin C) was dissolved as the sodium salt in an amount of 10 mg in an aqueous acetone solution (50 v / v; 2 ccm) of the nucleophilic agent (3 molar equivalents). The reaction was carried out as in the previous examples except that approximately 1.1 µl aliquots were used for chromatography and electrophoresis.



   The results are shown in tabular form in Tables II and III below. In the tables, P. W. denotes the propanol / water system and B. E. W the butanol / sithanol / water system.



   Table II
Nucleophilic substitution of cephalosporin C
R Ceph. C value electrophoresis Example Nucleophilic agent P. W. B. E. W. pH 4.0 pH 7.0 10 Ethylenethiourea 0.63 from Ceph. -0.27 -0.67
C inseparable 11 2-mercaptothiazoline 1.55 4.11 - 12 2-mercaptohydantoin 1.64 5.35 - 0.77 - 0.20 13 1-methyl-2-mercaptoimidazole 0.75 from Ceph. -0.15 +0.52
C inseparable 14 2-mercapto-imidazole 0.79 from Ceph.

   -0.16 +0.39
C not separable 15 2-mercaptobenzimidazole 2.0 4.6 -0.39 +0.22 16 2-mercaptobenzothiazole 2.0 8.0 + 0.65 + 0.54 17 2-mercaptobenzoxazole 1.9 8.0 + 0.79 +0.50 18 2-aminothiophenol 2.4 10.0 +0.80 +0.74 19 4-aminothiophenol 2.25 10.0 + 0.04 +0.53 20 4-nitrothiophenol 1.75 8.0 +0.93 +0.69 21 2,4-dinitrothiophenol 2.0 4.0 +0.63 +0.55 22 2-aminoethanethiol 0.44 0.2 +0.22 + 0.25 23 3-dimethylaminopropanethiol 0.55 0.4 -0.50 -0.08
Table III
Nucleophilic Substitution of Benzylcephalosporin C Example Nucleophilic Agent R-Benzyl-Ceph. C-Value Electrophoresis
B. E. W. Et.

  Ac. * pH 4.0 pH 7.0 24 ethylene thiourea of benzyl 0.08-0.17 0.58
Ceph.-C not separable 25 2-mercaptothiazoline 1.15 3.06 - 0.20 -1.20 26 2-mercaptohydantoin 1.17 0.09 - 01.20 - 01.56 27 1-methyl-2-mercaptoimidazole from benzyl-0.41 -0.14 +0.31
Ceph.-C cannot be separated 28 2-mercapto-imidazole 1.15 0.25 --0.22 - 0.19 29 2-mercaptobenzimidazole 1.25 1.9 -0.17 +0.18 30 2-mercaptobenzothiazole 1 .25 3.5 +0.45 +0.29 31 2-mercaptobenzoxazole 1.25 3.3 +0.66 +0.48 32 2-aminothiophenol 1.20 3.35 +0.27 +0.54 33 4-aminothiophenol 1.25 3.4 +0.0 +0.0 34 4-nitrothiophenol 1.20 3.35 +0.65 +0.73 35 <RTI

    ID = 13.14> 2-aminoethanethiol 0.80 0.05-0.27-0.25 36 3-dimethylaminopropanethiol 0.75 0.05-0.27-0.25 37 2-mercapto-4-methylpyrimidine 1.1 3.0 +0.73 +0.55 38 2, -amino-5-mercapto-1,3,4-thiadiazole 1 0.3 +0.72 +0.52 39 2-mercaptopyridine 1.15 3.6 - +0.3 40 Ethylthiourea 1.0 0 0 41 Isopropylthiourea 1.0 0 0 * Ät. Ac. = Ethyl acetate
Example 42
Preparation of the 2-mercaptobenzoxazole derivative of cephalosporin 5 g of cephalosporin C in 75 cc of water were added with stirring to a solution of 5 g of 2-mercaptobenzoxazole in 215 cc of acetone and 60 cc of water and the pH value of 5 with n-sodium hydrogen carbonate to 6, 6 posed.

  The mixture (approx. 60 v / v acetone) was kept at 37 ° C. for four days, with paper chromatography only showing the presence of small amounts of cephalosporin C. The reaction mixture was then diluted at 0 to 2 liters with acetone.



   Filtration after 3 hours gave a fairly white solid (4 g yield, 80 6/0 w / w cephalosporin C) which, by paper chromatography, showed a small amount (approx. 50/5) of cephalosporin C content. The crude substitution product exhibited the chromatographic and electrophoretic properties listed in Table II (Example 17). It was highly soluble in water.



   Example 43
Preparation of the 2-mercaptobenzothiazole derivative of benzylcephalosporin C
435 mg of the sodium salt of benzylcephalosporin C in 4 cc of water were added to a solution of 496 mg of 2-mercapto-benzothiazole in 6 cc of acetone and the resulting pH was adjusted to 7.0 with sodium hydrogen carbonate. The mixture was held at 500 ° C. for 65 hours, where practically all of the starting material had reacted (paper chromatography). The acetone was then removed in vacuo and the aqueous suspension that remained was treated with 10 cc of water and extracted with ethyl acetate at pH 6 in the presence of saturated sodium chloride (5 cc). A fairly white solid (A) was separated during the extraction.

  The remaining aqueous solution after this extraction was adjusted to pH 2 and further extracted with ethyl acetate. The extract at pH 6 (486 mg) contained unchanged nucleophilic agent and the desired substitution product. The extract at pH 2 (65 mg) contained traces of unchanged benzylcephalosporin.



   The solid (A) (insoluble in acetone; 136 mg) consisted of the desired substitution product with the chromatographic and electrophoretic properties listed in Table III (Example 30) and was chromatographically homogeneous.



   Example 44
Preparation of the 1-methyl-2-mercaptoimidazole derivative of benzylcephalosporin C 100 mg of the sodium salt of benzylcephalosporin C were dissolved in 1 cc of water and treated with a solution of 85 mg (3 molar equivalents) of 1 methyl-2-mercaptoimidazole in 1 cc of acetone. The resulting solution was left to stand at 370 ° C. for a few days, the reaction being followed by paper chromatography. After 4 days, the excess nucleophilic agent was removed from the reaction mixture by extraction with chloroform (2
X 1 ccm) and the pH of the remaining aqueous solution was adjusted to approx. 2.5 either with phosphoric acid or with Amberlite IR.120 (H +). The remaining unchanged benzylcephalosporin C was obtained by extraction with ethyl acetate (3 X 2 ccm) away.

  The remaining aqueous solution, which contained the new substitution product, was adjusted to pH 7 with sodium hydrogen carbonate or Deacidite G (CO3 ") and freeze-dried.



   Examination by paper chromatography and electrophoresis revealed only one biologically active material; H. the benzylcephalosporin thioimidazolinium salt, although different amounts of inorganic salts were present depending on whether ion exchange resins were used to regulate the pH. The benzylcephalosporin thloimidazolinium salt was against both S. aureus and
V. cholerae active.



   Example 45 (a) Preparation of Phenoxymethylcephalosporin
500 mg of 7-aminocephalosporic acid (7ACA) (E te / m = 260 marx. = 300 m, dissolved in 25 ml of 30 / above NaHCO3 (5 molar equivalents) were treated with 16 mol of acetone cooled and stirred with a magnetic stirrer while 376 mg of phenoxyacetyl chloride dissolved in 10 ml of acetone was added dropwise over 30 minutes, and the solution was brought to room temperature over one hour.

  The acetone was removed in vacuo and the aqueous layer extracted with 2 X 25 ml of ether. After adjusting the pH to 4.0 with 3N H2SO4, the excess phenoxyacetic acid was extracted with 1 × 50 ml of benzene. Finally, the pH of the aqueous layer was adjusted to 2.0 and then extracted with 3 × 50 mm ethyl acetate.



  These extracts were combined, dried over Na2SO4 for 10 minutes, and the volume was reduced in vacuo to give 724 mg of an oil. This was taken up in a minimal volume of acetone (about 3 ml) and 326 mg of sodium 2-ethylhexoate (1.1 molar equivalent) in aqueous acetone were added. The solution was kept cold for 11/2 hours and the product separated by filtration, washed with dry acetone and dried.



  Yield: 470 mg.



     
1. U.V. Amjn to = 235
Elol, -126
1 cm max. = 263 E 1% = 190
1 cm
2. Chromatography: propanol / water (7: 3) RF = 0.73
Ethyl acetate / pH 5 buffer RF = 0.33
3. Electrophoresis: at pH 4.0 and 7.0 Rceph.c = 1.0 (b) preparation of the phenoxymethylcephalosporin thiouronium compound 200mg of the sodium salt of phenoxymethylcephalosporin and 240 mg thiourea were dissolved in 2 ml H2O and in the dark for 3 days 370 C held. When the solution was cooled to 0 C, a precipitate was obtained, which was filtered at 0 C and washed with a little ice-cold water.

  The solid was dried in a vacuum desiccator overnight to give 67.2 mg of solid.



   1st U.V .: shoulder at 258-265 mjt #max. = 237 mA min = 230 r9u
2. Chromatography:
Propanol / H2O 0.665
Ethyl acetate / buffer 0
3. Electrophoresis:
No movement at pH 4.0 and 7.0
Example 46 (a) Production of n-heptylcephalosporin 500 mg of 7ACA dissolved in 25 ml of 30% NaHCO3 and 16 ml of acetone. The solution was cooled to below 5 ° C and 0.73 ml (2.5 molar equivalents) of caprylyl chloride in 10 ml of dry acetone was added dropwise over 30 minutes.



  The solution was then brought to room temperature over the course of one hour, the acetone was removed in vacuo and the solution that remained was extracted twice with 25 ml of ether. The pH was adjusted to 3.0 before the benzene extraction (1 × 50 ml) and then further brought to 2.0 before the extraction with ethyl acetate (3 × 50 ml). The ethyl acetate layers were then poured together, dried over Na2SO4 and concentrated in vacuo, 391 mg of a crystalline solid being obtained. This was dissolved in a little acetone and 170 mg (1.1 molar equivalent) of sodium 2-ethylhexoate in aqueous acetone were added. The solution was placed in the refrigerator for one hour and the product collected by filtration, washed with dry acetone and dried.



   1st U.V .: min. = 220 X max = 263
2. Chromatography: butanol / EtOH / H20 RF 0.75
Propanol / H20 RF 0.84 ethyl acetate / buffer R 0.70
3. Electrophoresis: pH 7.0 RCeph.c = 1.0 pH 4.0 Rceph.c = 1.04 (b) Preparation of the n-heptylcephalosporin thiouronium compound
150 mg of the sodium salt of n-heptylcephalosporin and 70 mg of thiourea were incubated in 5 ml of H2O in the dark at 370 ° C. for 3 days. At the end of this time this solution had completely solidified and was triturated with H2O and the gelatinous material filtered off, washed with H2O and dried in a vacuum desiccator, 124 mg of an amorphous powder being obtained.



   1st U.V .: shoulder at 258-265 my, but the sample is not pure
2. Chromatography: propanol / H, O RF = 0.770
Acetic acid ethyl acetate / buffer RF = 0.102
3. Electrophoresis: no movement at pH 4.0 and 7.0
Various other acyl derivatives of the cephalosporin thiouronium derivative were prepared in the same manner. The results are shown in Tables IV and IVa below.



   Table IV Example Acyl Group R-Benzyl-Ceph. Value Electrophoresis
B. E. W. At. Ac. pH 4.0 pH 7.0 47 S-phenyl-thioacetyl 0.88 0.16 C, H, -S-CH, CO- 48 S-benzyl-thioacetyl 0.92 0.29 -0.11 -0, 14 CssH5-CH2-S. CH2CO- 49 benzoyl 0.80 0.09 50 2,6-dimethoxybenzoyl 0.88 - -0.17 (propanol
water
System)
Table IVa Example acyl group U.V. values max. (m E1iO0! m 51 p-bromophenylthioacetyl 256-257 290 not fully dissolved 52 p-tert-butylphenylthioacetyl 245 380 p- (CH3) 8. C. C6H4 S. CH2CO- level 53 s-benzylthiopropionyl 261-262 200
C6H5CH2.S.CH2.CH2.CO- 54 phenethylthioacetyl 260 163 C6H5CH2.CH2.S.CH2.CO- 55 n-butylthioacetyl 260 207 56 propargylthioacetyl 260 208
CH = C. CH2. S. CH2.

  CO-57 p-Chlorophenylthioacetyl 254-256 326
Examples 58-66 (a) Preparation of the sodium salt of
7-allylthioacetamido-cephalosporanic acid
1.9 g of 7-aminocephalosporanic acid (7 mmol) were suspended in 100 ml of ethyl acetate and treated with 2 g (13.3 mmol) of allylthioacetyl chloride.



  After refluxing for 1.25 hours, the solution was filtered off from a small amount of insoluble material and the filtrate was brought to dryness in vacuo. The remaining gummy mass was dissolved in a mixture of 20 ml of acetone and 20 ml of ether, filtered and treated with a 10% solution of sodium ethyl hexanoate in n-butanol (15 ml) and then with ether (150 ml). The cream-colored precipitate obtained was filtered off and dried (2.34 g). Crystallization from aqueous acetone gave the product in the form of a white crystalline solid (1.13 g), λ max (phosphate buffer at pH 6) 260 rqu (e = 9080).

  Further crystallization gave a material of AmaX (as above (260 m, (e = 9300) [a] D + 1170 (c = 0.87; H2O)).



   This procedure has also been used successfully for acylations of 7-aminocephalosporanic acid with cyclopentanoyl chloride, p-bromophenylthio acetyl chloride, n-butanoyl chloride, p-nitrophenylacetyl chloride, n-butanecarboxychloride, n-pentanecarboxychloride, trans-cinnamoyl chloride and ss-phenylpropionyl chloride.



   b) The sodium salts obtained were then reacted with thiourea in accordance with the preceding examples. The thiouronium salts obtained had the following properties:
Table V Example Acyl Group U.V. Data
H2O E1% # max (m) 1.cm 58 cyclopentanoyl 262.5 224 9,000 59 p-bromophenylthioacetyl 258 283 60 n-butanoyl 263 207 61 allylthioacetyl 261 208 8 730 62 p-nitrophenylacetyl 270 376 17,000
Table V (continued) Example Acyl Group U.V. Data µ / m e
H2O 1 cm #max. (m) 63 n-butane carboxy 263 233 64 n-pentane carboxy 263 240 65 trans -cinnamoyl 278 862 CssH5. CH = CH. CO-66 ß-phenylpropionyl 259-262 224 The elemental analyzes of some of the above compounds are listed in Table VI.



   Table VI Example Found Calculated
CH Br Cl NSCH Br C1 NS 47 C17H18N4O4S3H2O 44.3 4.3 - - 12.3 21.8 44.7 4.4 - - 12.3 21.07 48 C18H2ON4O4S3.H2O 45.5 4.7 - - 12 , 2 20.9 45.9 4.7 - - 11.9 20.4 49 C17H21CIN406S3. 2H2O 39.8 4.09 - 6.5 10.8 19.4 40.1 4.2 - 7.0 11.0 18.9 50 C15H2ON4O4S2. H2O 44.1 5.5 - - 14.2 16.1 44.8 5.5 - - 13.9 15.9 51 Ct7H, 7Br. N404S3 39.0 3.6 15.6 - 10.9 18.5 39.5 3.4 15.4 - 10.8 18.6 52 C14H20N4O5S3. H2O 40.4 4.9 - - 13.2 23.1 40.0 4.8 - - 13.3 22.9 53 C15H22N4O4S2. ¸H2O 45.8 5.9 - - 13.8 15.1 45.6 5.9 - - 14.2 16.2 54 C18H20N4O4S2.

  H2O 49.4 5.5 - - 12.7 14.4 49.3 5.1 - - 12.8 14.6 55 C19H52N4O4S3 .1 / 21110 48.0 5.0 - - 11.8 20.7 48 , 0 4.9 - - 11.8 20.23 56 C, 4Ht6N404S3 - H2O 39.9 4.4 - - 13.1 22.9 40.2 4.3 - - 13.4 23.0
The activity of various compounds prepared in the above examples against different strains of S. aureus was determined by the tube dilution test and compared with related cephalosporin compounds. The results are summarized in Tables VII, VIII and IX.



   Table VII
Minimal
Inhibition concentration (g / ml) 5. aureus
C864
Oxford-S. aureus Compound studied Strain 663 Cephalosporin C 62 62 Cephalosporin Cthiouronium Salt 8 Compound of Example 10 20 Compound of Example 15-62 Compound of Example 16-0.5 Compound of Example 17-31 Compound of Example 18-62 Compound of Example 19-31
Table VIII
Minimal
Inhibition concentration (g / ml)
S. aureus
C864
Oxford-S. aureus Compound studied Strain 663 Benzylcephalosporin 0.16 0.16 Benzficephalosporin thiouronium salt 0.06 0.06 Compound of Example 29 0.08 01.04 Compound of Example 30 - 0.01 Compound of Example 31 0.04 0.04 compound of Example 32 - 0.02 compound of Example 33 - 0.01
Table IX
Minimal
Inhibition concentration (glml)
S.

   aureus
C864
Oxford- S. aureus Compounds studied Strain 604 Compound of Example 47 0.01 0.08 Compound of Example 48 0.02 0.04
Table IX (continued)
Minimal
Inhibition concentration (ginal)
S. aureus -C864
Oxford-S. aureus Compounds studied Strain 604 Compound of Example 58 31 2.5 Compound of Example 59 <0.01 0.31 Compound of Example 60 0.08 0.31 Compound of Example 61 0.04 0.15 Compound of Example 62 0.01 0.15 Compound of Example 63 0.16 0.62 Compound of Example 64 0.04 0.16 Compound of Example 65 0.5 2.0 Compound of Example 66 0.08 0.16 Compound of Example 52 0.05 0.62 Compound of Example 53 0.01 0.16 Compound of Example 54 0.08 0.62 Compound of Example 55 0.02 0.16 Compound of Example 56 0.04 0.08 Compound of Example 52 Example 57 0.02 0.08 compound of

   Example 9 0.06 0.30 Compound of Example 39 0.04 0.31 Compound of Example 40 0.31 2.5 Compound of Example 31 0.04 0.31

Claims (1)

PATENTANSPRUCH Verfahren zur Herstellung von neuen Cephalospoç rinderivaten der Formel EMI18.1 worin A einen über das S-Atorn gebundenen Rest eines a) Thioharnstoffs oder substituierten Thioharnstoffes, b) aromatischen oder aliphatischen Thioamides oder c) eines Thiols, R2 und R5 jeweils Wasserstoffatome oder R2 ein Wasserstoffatom und R3 eine Acylgruppe oder eine mit Triaryl substituierte Alkylgruppe bedeuten, oder worin R2 und R3 zusammen einen zweiwertigen Acylrest bilden, dadurch gekennzelchnet, das man eine Verbindung der Formel EMI19.1 worin R ein Acylrest ist, PATENT CLAIM Process for the preparation of new cephalospoç bovine derivatives of the formula EMI18.1 wherein A is a radical of a) thiourea or substituted thiourea, b) aromatic or aliphatic thioamide or c) a thiol, bonded via the S atom, R2 and R5 are each hydrogen atoms or R2 is a hydrogen atom and R3 is an acyl group or an alkyl group substituted by triaryl , or in which R2 and R3 together form a divalent acyl radical, characterized in that a compound of the formula EMI19.1 where R is an acyl radical, in einem inerten polaren Medium bei pH 5 bis 8 mit einem Rest A abgebenden Mittel umsetzt. in an inert polar medium at pH 5 to 8 with a remainder A releasing agent. UNTERANSPkÜCHE 1. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass eine Verbindung verwendet wird, welche die Formel EMI19.2 besitzt, worin R4, R5, R6 und R7 die gleich oder verschieden sein können, Wasserstoffatome oder gegebenenfalls substituierte Alkyl-, Cycloalkyl-, Alkenyl-, Aryl- oder Aralkylgruppen bedeuten, oder worin R und R6 zusammen eine Alkylengruppe bilden. SUB-KITCHEN 1. The method according to claim, characterized in that a compound is used which has the formula EMI19.2 in which R4, R5, R6 and R7, which can be identical or different, denote hydrogen atoms or optionally substituted alkyl, cycloalkyl, alkenyl, aryl or aralkyl groups, or in which R and R6 together form an alkylene group. 2. Verfahren nach Unteranspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass Äthylenthioharnstoff, Phenylthioharnstoff oder N,N'-Diphenylthiaharnstoff verwendet werden. 2. The method according to dependent claim 1, characterized in that ethylene thiourea, phenylthiourea or N, N'-diphenylthiourea are used. 3. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass als Mittel ein Thioacetamid oder ein Thiosemicarbazid verwendet wird. 3. The method according to claim, characterized in that a thioacetamide or a thiosemicarbazide is used as the agent. 4. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass als Mittel ein mit einem Amin substituiertes Thiol verwendet wird. 4. The method according to claim, characterized in that a thiol substituted with an amine is used as the agent. 5. Verfahren nach Unteranspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass 2-Aminoäthanthiol, 2-Anu.üo-2-methyipropan-1-thiol, -Dirnethylamino- propan-l-thiol oder 2-Piperidinoäthan-1 -thidi verwen- det wird. 5. The method according to dependent claim 4, characterized in that 2-aminoethane thiol, 2-anu.üo-2-methyipropane-1-thiol, -Dirnethylaminopropane-1-thiol or 2-piperidinoethane-1-thidi is used. 6. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass als Mittel aromatische, alicyclische oder stickstoffhaltige heterocyclische Verbindungen, die eine Thiol- oder Thiongruppe enthalten, und weiterhin im Fall von alicyclischen oder aromatischen Verbindungen eine Elektrónen-anziehende Gruppe oder eine basische Gruppe enthalten, verwendet werden. 6. The method according to claim, characterized in that aromatic, alicyclic or nitrogen-containing heterocyclic compounds which contain a thiol or thione group, and furthermore in the case of alicyclic or aromatic compounds contain an electron-attracting group or a basic group, are used as agents . 7. Verfahren nach Unteranspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass Verbindungen verwendet werden, die als elektronenanziehende Gruppe eine Nitro-, Nitroso-, Carbonyl-, Carboxyl-, Cyan- oder Trifinor- methylgruppe enthalten. 7. The method according to dependent claim 6, characterized in that compounds are used which contain a nitro, nitroso, carbonyl, carboxyl, cyano or trifinormethyl group as the electron-attracting group. 8. Verfahren nach Unteranspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass Verbindungen verwendet werden, welche als basische Gruppe eine Aminogruppe oder eine substituierte Aminogruppe enthalten. 8. The method according to dependent claim 6, characterized in that compounds are used which contain an amino group or a substituted amino group as the basic group. 9. Verfahren nach Unteranspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass eine aromatische Verbindung mit einer Thiolgruppe verwendet wird, wobei die Elektro- nen-anziehende Gruppe oder die basische Gruppe in Konjugation mit der Thiolgruppe steht. 9. The method according to dependent claim 6, characterized in that an aromatic compound with a thiol group is used, the electron-attracting group or the basic group being in conjugation with the thiol group. 10. Verfahren nach Unteranspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass als Thiol ein gegebenenfalls im Benzolkern substituiertes Thiophenol, z. B. o-Nitr & hiophenol, o,p-Dinitrothiophenol, o-Aminothiophenol oder p-Aminothiophenol, verwendet wird. 10. The method according to dependent claim 9, characterized in that a thiophenol optionally substituted in the benzene nucleus, z. B. o-nitride, o, p-dinitrothiophenol, o-aminothiophenol or p-aminothiophenol is used. 11. Verfahren nach Unteranspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass eine heterocyclische Verbindung mit einer Thiolgruppe, die an dem auf das heterocyclische Stickstoffatom anstossenden Kohlenstoffatom gebunden ist, verwendet wird. 11. The method according to dependent claim 6, characterized in that a heterocyclic compound having a thiol group which is bonded to the carbon atom adjoining the heterocyclic nitrogen atom is used. 12. Verfahren nach Unteranspruch 11, dadurch gekennzeichnet, dass 2-Mercaptothiazolin, 2-Mercaptohydantoin, 1-Methyl-2-mercapto-imidazol, 2-Mercaptoimidazol, 2-Mercaptohenzimidazoi, 2-Mercapto-benz- thiazol, 2-Mercapto-benzoxazol oder 2-Mercapto-pyridin verwendet wird. 12. The method according to dependent claim 11, characterized in that 2-mercaptothiazoline, 2-mercaptohydantoin, 1-methyl-2-mercapto-imidazole, 2-mercapto-imidazole, 2-mercaptohenzimidazole, 2-mercapto-benz-thiazole, 2-mercapto-benzoxazole or 2-mercapto-pyridine is used. 13. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass die Umsetzung der Reaktionsteilnehmer in einer Lösung bei einer Temperatur zwischen 15 und 700 C durchgeführt wird. 13. The method according to claim, characterized in that the reaction of the reactants in a solution at a temperature between 15 and 700 C is carried out. 14. Verfahren nach Unteranspruch 13, dadurch gekennzeichnet, dass die Umsetzung bei einer Temperatur zwischen 37 und 70" C durchgeführt wird. 14. The method according to dependent claim 13, characterized in that the reaction is carried out at a temperature between 37 and 70 "C. 15. Verfahren nach Unteranspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass die Umsetzung bei einer Temperatur von etwa 370 C während eines Zeitraumes zwischen 48 und 72 Stunden durchgeführt wird. 15. The method according to dependent claim 14, characterized in that the reaction is carried out at a temperature of about 370 C for a period between 48 and 72 hours. 16. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass die Reaktion unter Verwendung von 1-10 molaren Äquivalenten des den Rest A abge benden Mittels je molares Äquivalent der Verbindung der Formel II durchgeführt wird. 16. The method according to claim, characterized in that the reaction is carried out using 1-10 molar equivalents of the agent emitting the radical A per molar equivalent of the compound of the formula II. 17. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass die Reaktion bei einem pH-Wert zwischen 6 und 7 durchgeführt wird. 17. The method according to claim, characterized in that the reaction is carried out at a pH between 6 and 7. 18. Verfahren nach Patentanswtich, dadurch gekennzeichnet, dass der pH-Wert des Reaktionsgemisches durch Pufferung geregelt wird. 18. The method according to patent application, characterized in that the pH of the reaction mixture is regulated by buffering. 19. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass als polares Medium Wasser verwendet wird. 19. The method according to claim, characterized in that water is used as the polar medium. 20. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass als polares Medium ein Gemisch im Verhältnis von 30:70 (v/v) von Wasser-Dimethylformamid oder Wasser/Äthanol verwendet wird. 20. The method according to claim, characterized in that a mixture in the ratio of 30:70 (v / v) of water-dimethylformamide or water / ethanol is used as the polar medium. 21. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass als polares Medium ein Gemisch im Verhältnis 50:50 (v/v) von Wasser/Dimethylformamid oder Wasser/Aceton verwendet wird. 21. The method according to claim, characterized in that a mixture in the ratio 50:50 (v / v) of water / dimethylformamide or water / acetone is used as the polar medium. 22. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass das polare Medium aus einem nicht-wässrigen polaren Lösungsmittel besteht. 22. The method according to claim, characterized in that the polar medium consists of a non-aqueous polar solvent. 23. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass das Reaktionsprodukt aus dem Reaktionsgemisch durch Ionophorese, Papierchromatographie oder Chromatographie auf einem Ionenaustauschharz abgetrennt wird. 23. The method according to claim, characterized in that the reaction product is separated from the reaction mixture by ionophoresis, paper chromatography or chromatography on an ion exchange resin. 24. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass das Reaktionsprodukt aus dem Reaktionsgemisch durch fraktionierte Kristallisierung abgetrennt wird. 24. The method according to claim, characterized in that the reaction product is separated from the reaction mixture by fractional crystallization. 25. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass die Verbindung der Formel II in der Form eines Alkalisalzes verwendet wird. 25. The method according to claim, characterized in that the compound of formula II is used in the form of an alkali salt. 26. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass Verbindungen der Formel II verwendet werden, in denen Rt eine niedere Alkanoylgruppe bedeutet. 26. The method according to claim, characterized in that compounds of the formula II are used in which Rt is a lower alkanoyl group. 27. Verfahren nach Unteranspruch 26, dadurch gekennzeichnet, dass Verbindungen verwendet werden, in denen R eine Acetylgruppe bedeutet. 27. The method according to dependent claim 26, characterized in that compounds are used in which R is an acetyl group. 28. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass Verbindungen verwendet werden, in welchen R5 eine Acylgruppe der Formel R (CH2)n - bedeutet, worin R' einen Aryl-, Cycloalkyl-, substituierten Aryl- oder substituierten Cycloalkylrest und n eine ganze Zahl zwischen 1 und 4 bedeuten. 28. The method according to claim, characterized in that compounds are used in which R5 is an acyl group of the formula R (CH2) n -, where R 'is an aryl, cycloalkyl, substituted aryl or substituted cycloalkyl radical and n is an integer between 1 and 4 mean. 29. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass Verbindungen verwendet werden, in denen R3 eine Acylgruppe der Formel CnH2n+1C darstellt, worin n eine ganze Zahl zwischen 2 und 7 bedeutet und die Alkylgruppe geradkettig oder verzweigtkettig und gegebenenfalls durch ein Sauerstoffoder Schwefelatom unterbrochen sein kann. 29. The method according to claim, characterized in that compounds are used in which R3 is an acyl group of the formula CnH2n + 1C, where n is an integer between 2 and 7 and the alkyl group is straight-chain or branched and optionally interrupted by an oxygen or sulfur atom can. 30. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass Verbindungen verwendet werden, in welchen R eine Acylgruppe der Formel CnH2n-1CO - darstellt, worin n eine ganze Zahl zwischen 2 und 7 bedeutet, wobei die Alkenylgruppe geradkettig oder verzweigtkettig und gegebenenfalls durch ein Sauerstoff- oder Schwefelatom unterbrochen sein kann. 30. The method according to claim, characterized in that compounds are used in which R is an acyl group of the formula CnH2n-1CO -, where n is an integer between 2 and 7, the alkenyl group being straight-chain or branched and optionally by an oxygen or sulfur atom can be interrupted. 31. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass Verbindungen verwendet werden, worin R9 eine Acylgruppe der Formel Co darstellt, worin R' die in Anspruch 30 angegebene Bedeutung besitzt und R" und R"', die gleich oder verschieden sein können, Wasserstoffatome oder Alkylgruppen bedeuten. 31. The method according to claim, characterized in that compounds are used in which R9 represents an acyl group of the formula Co, in which R 'has the meaning given in claim 30 and R "and R"', which can be identical or different, hydrogen atoms or Mean alkyl groups. 32. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass Verbindungen verwendet werden, in welchen R eine Acylgruppe der Formel R'CR"R' "'. CO- darstellt. 32. The method according to claim, characterized in that compounds are used in which R is an acyl group of the formula R'CR "R '"'. CO- represents. 33. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass Verbindungen verwendet werden, in welchen R3 eine Acylgruppe der Formel R-'CO- darstellt. 33. The method according to claim, characterized in that compounds are used in which R3 represents an acyl group of the formula R-'CO-. 34. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass Verbindungen verwendet werden, in welchen R3 eine Acylgruppe der Formel RCfl2 )rnS(CH2)nCRR111 .C 0 , darstellt, worin m eine ganze Zahl zwischen 1 und 4 und n die Zahl 0 oder eine ganze Zahl zwischen 1 und 4 bedeuten. 34. The method according to claim, characterized in that compounds are used in which R3 is an acyl group of the formula RCfl2) rnS (CH2) nCRR111 .C 0, where m is an integer between 1 and 4 and n is the number 0 or a an integer between 1 and 4. 35. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass als Verbindung der Formel II Cephalosporin C verwendet wird. 35. The method according to claim, characterized in that cephalosporin C is used as the compound of formula II. 36. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass als Verbindung der Formel II Ben zylcephalosporin verwendet wird. 36. The method according to claim, characterized in that benzylcephalosporin is used as the compound of the formula II. 37. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass als Verbindung der Formel II die 7-Aminocephalosporansäure verwendet wird. 37. The method according to claim, characterized in that 7-aminocephalosporanic acid is used as the compound of formula II. 38. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass als Verbindung der Formel II Allylthioacetylcephalosporin verwendet wird. 38. The method according to claim, characterized in that allylthioacetylcephalosporin is used as the compound of formula II. 39. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass man im Reaktionsprodukt eine 7-Acylgruppe hydrolysiert oder umacyliert. 39. Process according to claim, characterized in that a 7-acyl group is hydrolyzed or transacylated in the reaction product.
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