Dispositif pour Pétude des cellules vivantes La présente invention a pour objet un dispositif des tiné à être utilisé pour l'étude des cellules vivantes, telles que bactéries, protozoaires, algues, champignons micro- scopiques, cellules en culture, etc.
Le dispositif suivant l'invention est caractérisé en ce qu'il est constitué par l'assemblage de deux pièces découpées dans une matière absorbante et contenant localement une substance chimique déterminée et un réactif indicateur approprié,
l'une de ces pièces étant recouverte d'une couche de matière étanche en vue de réaliser des conditions de fermentation anaérobie tandis que l'autre est destinée à être mise en contact avec les cellules vivantes à étudier de façon à former support pour la migration -du réactif indicateur précité après réaction avec les produits de dégradation provenant éventuellement de l'action des cellules sur la substance chimique.
Le dessin annexé montre à titre d'exemples plusieurs formes de réalisation du dispositif suivant l'invention: La fig. 1 est une vue en plan d'un dispositif réalisé conformément à un premier mode de mise en oeuvre de l'invention.
La fig. 2 est un-, coupe suivant II-II (fig. 1).
La fig. 3 est une vue en plan d'une autre forme de réalisation.
La fig. 4 est la coupe correspondante suivant IV-IV (fig. 3).
La fig. 5 et 6 montrent respectivement en coupe une variante de la fig. 2 et .de 1a fig. 4.
La fig. 7 est une vue en plan d'un dispositif suivant un autre mode de mise en oeuve .de l'invention.
La fig. 8 en est une coupe suivant VIII-VIII (fig. 7). La fig. 9 montre en plan la disposition d'une série de dispositifs suivant la fig. 7 sur le fond d'un récipient.
La fig. 10 est une vue en plan d'une variante de la fig. 7.
La fig. 11 en est la coupe correspondante suivant XI-XI (Fig. 10).
La fig. 12 est une vue analogue à celle de la fig. 9, mais correspondant -au dispositif représenté à la fig. 10. La fig. 13 est une vue en plan d'une autre forme de réalisation du dispositif suivant la fig. 7.
Les fig. 14 et 15 montrent en plan deux variantes de la fig. 13.
Le dispositif représenté aux fig. 1 et 2 est constitué par l'assemblage de deux pièces 1 et 2 découpées dans une matière absorbante, (papier buvard,papier pour séparations électropho@rétiques, papier échangeur d'ions, tissu de fibres d e verre ou matières absorbantes analo gues).
Chaque pièce présente un profil substantiellement circulaire, étant noté que la pièce 1 est de diamètre légè rement plus petit que 1e disque 2. Les deux pièces sont assemblées en superposition au moyen d'une colle appropriée, prévue perméable, et l'ensemble est recou vert par une couche de matière étanche à l'air et à l'eau (paraffine ou substance analogue), laquelle couche laisse à découvert la face libre de la pièce 2.
Préalablement à l'assemblage, la pièce 1 a été imprégnée d'un réactif indicateur coloré (indicateur de pH par exemple), tandis que la pièce 2 a été imprégnée de la substance chimique à essayer, utilisée à forte con centration; les deux pièces ont été ensuite séchées, le dispositif obtenu après assemblage pouvant ainsi être conservé aussi longtemps qu'on le désire.
Au moment de l'utilisation le .dispositif l-2-3 est placé dans un récipient sur le fond transparent 4 (fig. 2) duquel repose un support hydratant et nutritif 5 (gel d'a- gar-,agar ou .analogue); préalablement à 1a mise -en place du dispositif on a étalé sur la surface du support 5 une couche 6 de la suspension cellulaire à étudier. Le récipient est ensuite fermé et introduit à l'intérieur d'une étuve, le fond 4 étant tourné vers le haut.
On comprend que les produits provenant de la dégradation de la substance chimique contenue .dans la pièce 2 au contact de la suspension cellulaire 6, diffusent dans cette pièce 2, en même temps que le réactif indica teur dont est imprégnée la pièce 1.
On conçoit par ail leurs que les conditions d'anaérobiose déterminées par la couche 3 favorisent l'apparition rapide de résultats nets et précis, lesquels peuvent être facilement examinés sur la face libre de la pièce 2 par le lecteur à travers le fond transparent 4 du récipient. E va de soi qu'on peut disposer à l'intérieur d'un même récipient plusieurs dis- positifs 1-2-3, convenablement répartis.
Dans la variante montré aux fig. 3 et 4, les deux piè ces référencées 11 et 12, sont assemblées l'une à l'autre ,en juxtaposition suivant une sécante commune ,a, l'en semble, de ces pièces étant recouvert par une couche de matière étanche 13.
On comprend que dans l'une et l'autre variantes la couche de matière étanche 23 (fig. 5) ou 33 (fig. 6) peut n'intéresser que la seule surface de la pièce 1, respacti- vement 11, qui renferme 1e réactif indicateur.
Dans le mode ide mise en oeuvre id'e l'invention il lus- tré aux fig. 7 et 8, les deux pièces 1011 et 102 sont assemblées en juxtaposition suivant la sécante a, comme dans le cas des fig. 3 et 4.
Toutefois, la plus petite de ces pièces, à savoir la pièce 101, -est simultanément impré gnée de la substance chimique à essayer et du réactif in dicateur coloré;
il suffit à cet effet de plonger cette pièce 101, avant assemblage .avec la pièce 102, dans un mélange liquide contenant la substance chimique à haute concentration et le réactif indicateur, ladite pièce étant ensuite séchée.
La couche de matière étanche 103 est constituée par une bande souple ou pellicule en acétate de cellulose, chlorure de, polyvinyle ou matière analogue, étant noté que cette bande recouvre entièrement la pièce 101 et laisse à .découvert une partie de la surface <B>de,</B> 1a pièce 102.
On comprend que si la matière absorbante qui ,cons- titue la pièce 102 est telle qu'elle retient par capillarité une quantité d'eau suffisante, il n'est plus nécessaire, pour maintenir le dispositif à l'état humide, de, le dispo ser à la surface d'un gel d'agar-agar ou autre support hydratant.
A cet effet il suffit que la pièce 102 soit réa lisée en une matière hautement absorbante, telle qu'un papier recouvert par flockage d'un tapis de fibres de verre perpendiculaires au plan dudit papier, ou une trame fibreuse, par exemple une étoffe non tissée de fibranne-viscose, imprégnée de carboxy-méthyl-cellu- lose, d'une hemi-cellulose ou d'une substance analogue.
En pareil cas, lorsqu'on désire utiliser le dispositif suivant l'invention, on dispose celui-ci sur un support quelconque à fond transparent, par exemple sur le fond 104 d'une boîte de, Pétri. On ensemmence le dispositif en déposant :sur la partie de la pièce 102 qui n'est pas recouverte par la bande 103 un nombre de gouttes de suspension cellulaire suffisant pour imbiber complète ment l'ensemble 101-102 par capillarité.
Après une période d'incubation à une température convenable, on peut étudier l'action des cellules vivantes ;sur la sub stance chimique dont est imprégnée la pièce 101 par examen de, la coloration de la pièce 102.
On conçoit en effet que le réactif indicateur diffuse de la pièce 101 vers la pièce 102 en même temps que les produits de dégra dation de la substance chimique considérée;
cette diffu- sion s'effectue à travers la sécante a et le virage de l'in- dictateur ,apparaît de manière particulièrement nette et rapide au niveau de la frange ou frontière de -diffusion.
Comme montré à la fig. 9, on peut disposer sur le fond 104 d'un même récipient une série de dispositifs suivant les fig. 7 et 8, chacun de ceux-ci étant fixé par une même bande 103 prévue suffisamment longue à cet effet.
On comprend que si les pièces 101 de ces disposi tifs ont été imprégnées de substances chimiques diffé- rentes, on peut ainsi procéder simultanément à une série d'études séparées concernant un même type de cellules vivantes.
Dans la variante de réalisation représentée aux fi-. 10 et 11, le dispositif comprend une przmiere pièce 111 en matière absorbante, découpée de manière à pré senter un profil ovale.
Cette pièce 111 est disposée sur une seconde pièce 112, de même profil mais de dimen sions nettement plus grandes, fortement désaxée par rapport à la premiere. La pièce 111 est, avant séchage, imprégnée avec la substance chimique à essayer et avec le réactif convenable.
L'ensemble est recouvert par une couche de matière étanche, par exemple par une bande d'acétate de cellulose 113, qui n'intéresse qu'une partie seulement de la surface de la pièce inférieure 112.
Le dispositif ainsi constitué est alors disposé contre le fond d'un récipient transparent. Les extrémités dépas- santes de 1a bande 113 assurent la fixation du dispositif sur le fond -de ce récipient.
On conçoit que l'utilisation .d'un tel dispositif est identique à celle décrite en référence aux fig. 7 et 8. La suspension cellulaire à étudier est disposée sur la partie dépassante de la pièce inférieure 112, en quantité suffi sante pour humecter l'ensemble du dispositif. Les vira ges ou autres réactions apparaissent rapidement sur la pièce 112 au niveau de la frange de diffusion du réactif indicateur et peuvent être lus à travers le fond transpa rent du récipient.
Comme montré à la fia. 12, il va de soi que la bande 113 peut, comme dans le cas de la fig. 9, être prévue suffisamment longue pour assurer la fixation simultanée de plusieurs dispositifs sur le fond 114 d'un même réci- pient, lequel peut présenter en plan tout profil .désiré.
Dans la forme -de réalisation représentée à la fig. 13, lie @dispositif -est @directem!ent obtenu en découpant une ébauche unique 120 dans une feuille de matière absor bante appropriée.
Cette ébauche 120 présente une partie ou pièce 121 et une partie ou pièce 122, toutes -eux à profil circulaire mais de diamètres .différents. Préalable- ment au découpage de, cette ébauche :on ,a :
appliqué ,sur la feuille de matière absorbante une bande 123 d'acétate de celluloses .ou .matière analogue, cette btrsde étant dimensionnée de façon à laisser à découvert sur l'ébau- chz découpée une petite surface 121 a sur la pièce 121 et une surface plus grande 122a sur la pièce 122.
Une fois l'ébauche ainsi réalisée on imprègne la pièce 121 d'un mélange composé de la substance chimi que à étudier et du réactif indicateur; cette imprégnation peut se faire soit en déposantRTI ID="0002.0209"WI="13" HE="4" LX="1682" LY="1970"> quelques gouttes du mélange liquide précité sur la surface découverte 121a, soit en amenant cette dernière :au contact dudit mélange.
Lors de l'utilis-ation du dispositif, il suffit -de déposer sur la surface découverte 122a la suspension cellulaire en quantité suffisante pour imbiber l'ensemble .du dispositif, lequel est placé sur le fond d'un .récipient approprié.
iOn .comprend que l'ébauche peut présenter tout pro- fil désiré approprié. A la fig. 14 on :a représenté une ébauche 130 comprenant une partie ou pièce 131 à pro fil substantiellement circulaire, à laquelle fait suite une partie ou pièce 132 à profil rectangulaire allongé;
la couche 133 de matière étanche laisse à découvert une lunule 131a pour l'imprégnation, ainsi qu'une surface 132a pour le dépôt de la suspension cellulaire envisagée.
Dans la variante de la fig. 15, l'ébauche 140,est décou pée de manière à présenter .deux parties ou pièces 141 et 142 à profil rectangulaire;
ici encore la couche 143 de matière étanche laisse à découvert deux zones 141 a et 142a pour l'imprégnation, respectivement peur le dépot de la suspension cellulaire. Il va de soi que dans les deux variantes des fig. 14 et 15, la pièce 132, respectivement 142, peut comporter un prolongement présentant en plan tout profil approprié,
ledit prolongement pouvant notamment être conformé de façon à faciliter 1a mani pulation du dispositif.
On notera d'ailleurs que le terme pièce doit être pris dans un sens très large pour désigner toute surface découpée dans une feuille et présentant en plan un profil quelconque.
Dans tous les cas ,on comprend. que le dispositif sui vant l'invention peut être réalisé de manière simple et économique. De plus et surtout son utilisation est parti- culièrement pratique puisqu'elle permet l'obtention rapide de résultats nets et précis.
Device for the Study of Living Cells The present invention relates to a device for the study of living cells, such as bacteria, protozoa, algae, microscopic fungi, cells in culture, etc.
The device according to the invention is characterized in that it consists of the assembly of two pieces cut from an absorbent material and locally containing a determined chemical substance and an appropriate indicator reagent,
one of these parts being covered with a layer of waterproof material in order to achieve anaerobic fermentation conditions while the other is intended to be brought into contact with the living cells to be studied so as to form a support for migration the aforementioned indicator reagent after reaction with the degradation products possibly resulting from the action of cells on the chemical substance.
The appended drawing shows by way of examples several embodiments of the device according to the invention: FIG. 1 is a plan view of a device produced in accordance with a first embodiment of the invention.
Fig. 2 is a-, section on II-II (fig. 1).
Fig. 3 is a plan view of another embodiment.
Fig. 4 is the corresponding section along IV-IV (fig. 3).
Fig. 5 and 6 respectively show in section a variant of FIG. 2 and .of 1a fig. 4.
Fig. 7 is a plan view of a device according to another embodiment of the invention.
Fig. 8 is a section along VIII-VIII (fig. 7). Fig. 9 shows in plan the arrangement of a series of devices according to FIG. 7 on the bottom of a container.
Fig. 10 is a plan view of a variant of FIG. 7.
Fig. 11 is the corresponding section along XI-XI (Fig. 10).
Fig. 12 is a view similar to that of FIG. 9, but corresponding to the device shown in FIG. 10. FIG. 13 is a plan view of another embodiment of the device according to FIG. 7.
Figs. 14 and 15 show in plan two variants of FIG. 13.
The device shown in FIGS. 1 and 2 consists of the assembly of two parts 1 and 2 cut from an absorbent material (blotting paper, paper for electropho @ retic separations, ion exchange paper, glass fiber cloth or similar absorbent materials).
Each part has a substantially circular profile, it being noted that the part 1 is slightly smaller in diameter than the disc 2. The two parts are assembled in superposition by means of a suitable adhesive, provided permeable, and the assembly is stitched together. green by a layer of material impervious to air and water (paraffin or similar substance), which layer leaves the free face of the part exposed 2.
Prior to assembly, part 1 was impregnated with a colored indicator reagent (pH indicator for example), while part 2 was impregnated with the chemical substance to be tested, used at high concentration; the two parts were then dried, the device obtained after assembly thus being able to be kept as long as desired.
At the time of use the .device l-2-3 is placed in a container on the transparent bottom 4 (fig. 2) of which rests a hydrating and nutritive support 5 (agar gel, agar or the like. ); prior to the installation of the device, a layer 6 of the cell suspension to be studied was spread on the surface of the support 5. The container is then closed and introduced into an oven, the bottom 4 being turned upwards.
It is understood that the products resulting from the degradation of the chemical substance contained in part 2 in contact with cell suspension 6, diffuse in this part 2, at the same time as the indicator reagent with which part 1 is impregnated.
It can also be understood that the anaerobic conditions determined by layer 3 favor the rapid appearance of clear and precise results, which can be easily examined on the free face of part 2 by the reader through the transparent bottom 4 of the container. It goes without saying that several devices 1-2-3, suitably distributed, can be placed inside the same container.
In the variant shown in FIGS. 3 and 4, the two pieces referenced 11 and 12, are assembled to each other, in juxtaposition along a common secant, a, as a whole, of these parts being covered by a layer of waterproof material 13.
It will be understood that in both variants the layer of waterproof material 23 (fig. 5) or 33 (fig. 6) may only concern the surface of the part 1, respectively 11, which contains 1st indicator reagent.
In the embodiment of the invention, it reads in FIGS. 7 and 8, the two parts 1011 and 102 are assembled in juxtaposition along the secant a, as in the case of FIGS. 3 and 4.
However, the smallest of these parts, namely part 101, is simultaneously impregnated with the chemical substance to be tested and with the colored indicator reagent;
for this purpose, it suffices to immerse this part 101, before assembly with the part 102, in a liquid mixture containing the chemical substance at high concentration and the indicator reagent, said part being then dried.
The waterproof material layer 103 consists of a flexible strip or film of cellulose acetate, polyvinyl chloride or the like, it being noted that this strip entirely covers the part 101 and leaves part of the surface <B> uncovered. of, </B> 1a exhibit 102.
It will be understood that if the absorbent material which constitutes the part 102 is such that it retains by capillarity a sufficient quantity of water, it is no longer necessary, in order to keep the device in the wet state, of available on the surface of an agar-agar gel or other moisturizing support.
For this purpose, it suffices that the part 102 is made of a highly absorbent material, such as a paper covered by flocking with a mat of glass fibers perpendicular to the plane of said paper, or a fibrous weft, for example a non-woven fabric. woven from fibranne-viscose, impregnated with carboxy-methyl-cellulose, hemi-cellulose or the like.
In such a case, when it is desired to use the device according to the invention, the latter is placed on any support with a transparent bottom, for example on the bottom 104 of a Petri dish. The device is inoculated by depositing: on the part of the part 102 which is not covered by the strip 103, a number of drops of cell suspension sufficient to completely soak the assembly 101-102 by capillary action.
After a period of incubation at a suitable temperature, one can study the action of living cells on the chemical substance with which the part 101 is impregnated by examining the coloration of part 102.
It is in fact conceivable that the indicator reagent diffuses from the part 101 to the part 102 at the same time as the degradation products of the chemical substance considered;
this diffusion takes place through the secant a and the bend of the dictator appears in a particularly clear and rapid manner at the level of the fringe or boundary of -diffusion.
As shown in fig. 9, a series of devices can be placed on the bottom 104 of the same container according to FIGS. 7 and 8, each of these being fixed by the same strip 103 provided sufficiently long for this purpose.
It will be understood that if the parts 101 of these devices have been impregnated with different chemical substances, it is thus possible to carry out simultaneously a series of separate studies concerning the same type of living cells.
In the variant embodiment shown in fi-. 10 and 11, the device comprises a przmiere piece 111 of absorbent material, cut so as to present an oval profile.
This part 111 is arranged on a second part 112, of the same profile but of distinctly larger dimensions, strongly offset from the first. Part 111 is, before drying, impregnated with the chemical substance to be tested and with the suitable reagent.
The assembly is covered by a layer of waterproof material, for example by a strip of cellulose acetate 113, which concerns only a part of the surface of the lower part 112.
The device thus formed is then placed against the bottom of a transparent container. The projecting ends of the strip 113 secure the device to the bottom of this container.
It will be understood that the use of such a device is identical to that described with reference to FIGS. 7 and 8. The cell suspension to be studied is placed on the protruding part of the lower part 112, in an amount sufficient to moisten the entire device. Bends or other reactions appear quickly on part 112 at the indicator reagent diffusion fringe and can be read through the transparent bottom of the container.
As shown in fia. 12, it goes without saying that the strip 113 can, as in the case of FIG. 9, be provided long enough to ensure the simultaneous fixing of several devices on the bottom 114 of the same container, which can have any desired profile in plan.
In the embodiment shown in FIG. 13, the device is directly obtained by cutting a single blank 120 from a sheet of suitable absorbent material.
This blank 120 has a part or part 121 and a part or part 122, all of them with a circular profile but of different diameters. Before cutting this blank: we have:
applied to the sheet of absorbent material a strip 123 of cellulose acetate or the like, this btrsde being dimensioned so as to leave exposed on the cut blank a small surface 121a on the part 121 and a larger area 122a on part 122.
Once the blank thus produced, the part 121 is impregnated with a mixture composed of the chemical substance to be studied and the indicator reagent; this impregnation can be done either by depositing RTI ID = "0002.0209" WI = "13" HE = "4" LX = "1682" LY = "1970"> a few drops of the aforementioned liquid mixture on the uncovered surface 121a, or by bringing this last: in contact with said mixture.
When using the device, it suffices -de deposit on the uncovered surface 122a the cell suspension in sufficient quantity to soak the whole .du device, which is placed on the bottom of a suitable .recipient.
It is understood that the blank may have any suitable desired profile. In fig. 14 there is shown a blank 130 comprising a part or part 131 with a substantially circular profile, which follows a part or part 132 with an elongated rectangular profile;
the layer 133 of waterproof material leaves uncovered a lunula 131a for impregnation, as well as a surface 132a for the deposition of the cell suspension envisaged.
In the variant of FIG. 15, the blank 140, is cut so as to present two parts or parts 141 and 142 with a rectangular profile;
here again the layer 143 of waterproof material leaves two zones 141a and 142a uncovered for impregnation, respectively for the deposition of the cell suspension. It goes without saying that in the two variants of FIGS. 14 and 15, the part 132, respectively 142, may include an extension having in plan any suitable profile,
said extension may in particular be shaped so as to facilitate handling of the device.
It will also be noted that the term part must be taken in a very broad sense to denote any surface cut from a sheet and having any profile in plan.
In any case, we understand. that the device following the invention can be produced in a simple and economical manner. In addition and above all, its use is particularly practical since it allows the rapid obtaining of clear and precise results.