CA2330570A1 - Enzyme d'acide nucleique de coupure d'un arn - Google Patents

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Abstract

L'invention porte sur un procédé de coupure d'un substrat d'acide nucléique par une enzyme d'acide nucléique en un site de coupure consistant à mélanger le substrat à l'enzyme. Le substrat comporte au niveau du site de coupure une séquence d'au moins 7 nucléotides dont au moins 6 nucléotides 3', et un nucléotide 5' de formule 5'-H' &darr& GNNHNN-3', dans laquelle: chaque N est un nucléotide identique ou différent; H est un nucléotide choisi parmi A, U, C et T; &darr& est le site de coupure; H' est un ribonucléotide choisi parmi A, U et C, et au sujet de laquelle: (i) le premier nucléotide 3' du site de coupure peut former une paire flottante avec l'enzyme, (ii) les deuxième, troisième, cinquième et sixième nucléotides 3' du site de coupure peuvent former avec l'enzyme des paires de base de Watson-Crick conventionnelles, (iii) le quatrième nucléotide 3' du site de coupure peut former avec l'enzyme des paires de base de Watson-Crick non conventionnelles, et (iv) le premier nucléotide 5' du site de coupure ne peut former de paire de base avec l'enzyme; de plus, l'enzyme comporte une portion se fixant au substrat et capable de former une paire de base avec les six nucléotide 3' du site de coupure du substrat, ladite portion comportant la séquence 3'-UNNXNN-5' dans laquelle chaque N est un nucléotide identique ou différent; X est un nucléotide choisi parmi T, U, A et G et qui lorsque le substrat s'y fixe entraîne la coupure du substrat au site de coupure.
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