CA2166197A1

CA2166197A1 - Sterilisation indicator device

Info

Publication number: CA2166197A1
Application number: CA 2166197
Authority: CA
Inventors: Mongi Mahwachi
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1993-07-01
Filing date: 1994-06-29
Publication date: 1995-01-12
Also published as: EP0706579A1; WO1995001451A1; FR2708287B1; JPH08511946A; FR2708287A1

Abstract

A device for estimating the effect of a fluid on a microorganism strain or an enzyme, comprising a compartment (1) for contacting the fluid with said strain or enzyme and a compartment (2) for highlighting said strain or enzyme after the contacting step by means of a highlighting medium (15). The device is characterised in that it consists of a movable assembly having at least two configurations (8, 11). The first configuration includes a channel for circulating the fluid within the assembly and contacting it with the strain or enzyme attached to a support (9), while the second configuration includes a member for contacting the highlighting medium with the support to which the strain or enzyme is attached, and optionally a means for isolating the highligting medium containing the support from the atmosphere, as well as a means for viewing any changes in the highlighting medium (18).

Description

2~61~'1 ~ ~ o 95/01451 PCT/FR94/00789 DISPOSITIF INDICATEUR DE STERILISATION
La présente invention concerne un dispositif destiné à évaluer l'action d'un fluide sur une souche de microorganisme ou une enzyme, plus particulièrement un dispositif indicateur de stéAlisation.
La stérilisation et la désinfection sont des procédés extrêmement utilisés dans des domaines très divers.
La stérilisation est notamment mise en oeuvre dans des établissements de soin tels que les hôpitaux, les cliniques, de fa~on à
disposer d'instruments médicaux, de verreAe, de linge, de façon générale de tout matériel, totalement exempts de microorganisme afin de stopper la propagation des maladies infectieuses.
Mais, la stérilisation est également utilisée dans l'industrie pharmaceutique pour le matériel médico-chirurgical tel que les sutures ou de facon générale un grand nombre d'objets à usage unique et également pour les médicaments pour lesquels une absence totale de microorganisme est nécessaire.
La stérilisation est mise en oeuvre également de plus en plus souvent dans les industries agro-alimentaires afin de maîtriser la biocont~min~tion de l'environnement, c'est le cas notamment des industries laitières.
Il est également, dans ces mêmes domaines, d'usage courant d'utiliser la désinfection, mais il s'agit dans le cas d'établissements de soin par exemple, du traitement des surfaces, des linges, ceci pour diminuer la proportion des germes pathogènes afin de limiter l'incidence des infections. Dans l'industAe pharmaceutique et l'industrie agro-alimentaire on pratique également la désinfection afin de respecter les bonnes pratiques de fabAcation; ce procédé tendant d'ailleurs à se répandre dans d'autres domaines comme par exemple les locaux des collectivités, les cabinets dentaires, les coiffeurs, etc.
Les objets soumis à la stéAlisation et à la désinfection peuvent être de nature excessivement vaAée, il peut s'agir aussi bien de verre, que de métaux ou de matières synthétiques, de mêmes les configurations géométAques peuvent être très vaAées, forme plate, creuse, lisse ou non.
Actuellement, pour juger de l'efficacité d'une stérilisation, par exemple pour la chaleur humide, on utilise des moyens externes, il s'agit WO 9S/01451 ~ 6 I 9 ~ PCT/FR94/00789 essentiellement de l'enregistrement de la température et de la pression ainsi que des durées de stérilisation. En fonction d'abaque on peut déterminer le couple temps/température permettant d'obtenir une stérilisation dans des conditions données.
S Toutefois, ce moyen peut se révéler insuffisant, c'est pourquoi dans la plupart des cas on prévoit également un dispositif interne permettant la mise en évidence de la stérilisation.
Sous sa forme la plus simple, il s'agit d'un dispositif qui comporte des microorganismes sous une forme végétative ou de résistance, en particulier sous une forme sporulée, dont on contrôlera à la fin de la stérilisation qu'effectivement il ne reste plus de microorganismes ou de spores viables, ou du moins que le taux de microorg~ni.cmes ou de spores viables restant est en dessous d'un certain seuil. On peut également utiliser une enzyme pour révéler l'efficacité de la stérilisation.
Suivant le type de stérilisation appliqué, on utilisera des microorganismes connus pour leur résistance sous forme sporulée, par exemple pour la stérilisation par la chaleur humide on utilisera Bacillus stearothermophilus. pour la stérilisation par la chaleur sèche ou les gaz on utilisera Bacillus subtilis et pour la stérilisation par les rayonnements ionisants on utilisera Bacillus pumilus.
Pour ce qui concerne les procédés de désinfection, seule cette seconde méthode est utilisable, en effet il n'existe pas d'abaques permettant de déterminer des conditions désinfectantes.
La présente invention concerne plus particulièrement les dispositifs indicateurs comportant des microorganismes sous forme végétative ou sporulée ou d'enzymes, destinés à tester, de facon générale, l'action d'un fluide sur ledit microorg~nisme ou l'enzyme, en général afin de tester la stérilisation ou la désinfection d'une enceinte.
Les dispositifs indicateurs de stérilisation comportent en général, d'une part un support sur lequel se trouvent placées les spores de la souche résistante qui pourront être amenées au contact du fluide de stérilisation et, d'autre part, un compartiment dans lequel se trouve un milieu permettant la culture du microorganisme sporulé et un agent de révélation qui se change de couleur en présence du microorganisme en culture.

2 ~ L ~ 7 --'O 9S/01451 PCT/FR94/00789 Le procédé de contrôle consiste donc à introduire le dispositif dans l'enceinte de stérilisation, les spores sont alors mises en contact avec lefluide de stérilisation, puis, à la fin de la stérilisation on introduit, en cassant une ampoule, le milieu de culture et l'agent de révélation au contact 5 avec les spores, et au bout d'un temps déterminé on visualise une couleur dans le milieu si parmi les spores certaines d'entre elles étaient encore viables.
Ce type d'appareillage est décrit par exemple dans le brevet Fran$ais 2 045 855.
La plupart des dispositifs de la technique antérieure présentent un certain nombre d'inconvénients:
- tout d'abord le support des spores est la plupart du temps en papier, or les matériaux à stériliser dans la pratique ne sont pratiquement jamais en papier mais en plastique, métal, caoutchouc, verre, etc.;
15 - en général les supports ont une forme plate qui est sans rapport avec les conformations géométriques de la plupart des matériels à
stériliser qui sont généralement de forme extrêmement variée;
- enfin, le support absorbe, dans certains cas, facilement les agents stérilisants, ce qui entraîne une destruction plus facile des spores alors qu'en réalité les microorg~nismes contaminants le matériel à
stériliser sont portés sur des surfaces non-absorbantes.
Ainsi, certains des dispositifs suivant la faSon dont ils sont mis en oeuvre peuvent conduire à des résultats faussement sécurisants.
En outre, la plupart des dispositifs indicateurs biologiques actuellement proposés comportent le bris d'une ampoule en verre, ce qui n'est en général pas souhaitable, notamment car les petits morceaux de verre peuvent créer des microfissures du contenant extérieur, il y a donc un risque de cont~min~tion.
Enfin, dans certains cas il peut être intéressant de pouvoir contrôler la stérilisation en cours d'opération sans avoir à intervenir directement dans l'enceinte de stérilisation, ceci n'est en général pas possible avec les dispositifs existant actuellement.
C'est pourquoi la présente invention concerne un dispositif destiné à évaluer l'action d'un fluide sur une souche de microorganisme ou sur une enzyme, du type comportant:

WO 95/01451 21 ~ 6 ~ 9 7 PCT/FR94/0078"

- un compartiment (1) permettant la mise en contact du fluide et de ladite souche ou l'enzyme et - un compartiment (2) permettant la mise en évidence de ladite souche ou de l'enzyme après mise en contact avec le fluide, à l'aide d'un milieu de révélation ( 15), caractérisé en ce qu'il est constitué d'un ensemble mobile pouvant présenter au moins deux configurations (8, 11) présentant, - dans une première configuration, un passage permettant la circulation du fluide à l'intérieur de l'ensemble et sa mise en contact avec la souche ou l'enzyme fixée sur un support (9) et - dans une seconde configuration, un moyen permettant la mise en contact du milieu de révélation avec le support sur lequel est fixée la souche ou l'enzyme et, éventuellement, des moyens permettant d'isoler le milieu de révélation contenant le support de l'atmosphère extérieure, et des moyens permettant l'observation des modifications éventuelles du milieu de révélation (18).
De façon préférentielle, ce dispositif est un indicateur biologique de stérilisation et/ou de désinfection.
Dans ces conditions, le fluide en cause est la vapeur d'eau, un 20 gaz ou un liquide, mais également de facon très générale la chaleur sèche ou un rayonnement ionisant, même s'il ne s'agit pas à proprement parler d'un fluide.
Pour ce qui concerne le milieu de révélation, il s'agit la plupart du temps d'un milieu permettant la culture de la souche à partir des 25 spores ou de forme végétative comportant un révélateur mettant en évidence la présence de microorg~ni.~mes viables.
Enfin, les microorganismes seront la plupart du temps sous forme de spores.
De façon préférée, le dispositif selon la présente invention 30 comportera également des moyens permettant l'observation des modifications éventuelles du liquide de révélation.
De facon générale, le dispositif selon l'invention sera constitué
de deux compartiments mobiles l'un par rapport à l'autre, l'un des compartiments comportant le support (9) ainsi qu'au moins un orifice (14) - -'O 95/01451 PCTtFR94/00789 S

permettant d'amener un fluide extérieur à l'intérieur au contact du support, et l'autre compartiment comportant le milieu de révélation, ledit compartiment étant agencé pour que le déplacement de l'un par rapport à
l'autre amène le support de la souche (9) en contact avec le milieu de S révélation et éventuellement en ce qu'un autre déplacement conduise à
isoler le milieu de révélation contenant le support du milieu extérieur.
Le déplacement des deux compartiments mobiles peut se faire aussi bien par translation que par rotation autour d'un axe.
En général, le support de la souche est un élément mobile qui 10 peut avoir une configuration quelconque destiné en particulier à permettre de représenter au mieux les surfaces qui devront être stérilisées au décontaminées à l'extérieur.
Il peut s'agir notamment d'un support plan ou bien d'un support comportant des évidements ou des ondulations, mais dans la plupart 15 des cas il s'agira plutôt d'un dispositif de forme tubulaire, de préférence ayant la forme d'un petit tube et ce support sera mobile entre une première position en contact avec le fluide et une seconde position en contact avec le milieu de révélation.
Dans le mode préféré de r~lis~tion, le dispositif est constitué
2~) de deux conl~ ents mobiles en rotation l'un par rapport à l'autre autour d'un axe et ayant deux surfaces en vis à vis perpendiculaires audit axe, le compartiment supérieur comporte un conduit tubulaire (6) sensiblement parallèle à l'axe de rotation débouchant à l'extérieur du compartiment par deux orifices, un support est placé dans ledit conduit tubulaire et le support 25 repose sur la surface située en vis-à-vis du compartiment inférieur à la surface duquel débouche un conduit tubulaire en vis-à-vis du précédent et dont l'autre extrémité débouche à l'extérieur, on créé ainsi un canal qui traverse l'ensemble du dispositif parallèlement à l'axe et dont une partie est constituée par le support de la souche, le compartiment inférieur comporte, 30 en outre, sur sa surface en vis-à-vis un orifice, la dimension de l'orifice étant telle que, par rotation des deux compartiments, le conduit tubulaire du compartiment supérieur soit amené en coïncidence de l'orifice et que le support tombe par cet orifice dans le milieu de révélation situé dans le compartiment inférieur, ainsi qu'en ramenant l'ensemble à sa position WO 9S/01451 ~ ~ ~ 6 ~ ~ 7 PCT/FR94/00789 initiale, on isole le milieu contenant le support du milieu extérieur, le compartiment inférieur comportant, en outre, une ou deux fenêtres transparentes ou étant complètement transparent, permettant de voir la couleur du milieu de révélation.
En plus, le compartiment inférieur peut comporter en plus du milieu de culture, dans la partie inférieure du conduit du fluide, un indicateur physico-chimique (permettant de voir l'effet d'une stérilisation en profondeur ou à distance sur un indicateur physico-chimique).
De faSon générale, le support du microorganisme sera constitué par une surface qui pourra être identique aux surfaces à stériliser et/ou à décontaminer, en pratique, notamment il pourra s'agir de surfaces métalliques, de surfaces en papier si cela est nécessaire, de surfaces en matière plastique, mais de préférence les surfaces seront en verre, en effet comme on le constatera dans les exemples qui suivent, l'utilisation d'un support en verre permet d'avoir des résultats qui sont les plus fiables.
Les microorg~nismes sont de préférence présents sous leur forme la plus résistante, c'est-à-dire sous la forme de spores qui sont fixées sur le support de microorganisme par des techniques qui sont connues . Il est également possible d'utiliser des souches non-résistantes, par exemple une flore réelle ou même une enzyme ayant la même résistance que les spores de référence.
Comme cela a été indiqué précédemment, dans sa forme préférée le support est constitué par un tube en verre à l'intérieur duquel ont été déposées des spores de microorganismes selon des méthodes qui seront décrites dans les exemples et le fluide sera amené à circuler à travers ce tube.
Le milieu de révélation est de préférence constitué par un milieu de culture permettant la croissance des spores lorsque celles-ci sont encore viables, ledit milieu de culture comportant un indicateur, la plupart du temps coloré, dont la coloration change ou apparâît lors de la croissance des microorganismes, par exemple par modification du pH avec des produits du type du rouge de phénol ou des produits qui réagissent à l'oxydoréduction -'TO g5/01451 PCT/FR94/00789 tels que par exemple le bleu de méthylène, il peut s'agir également de produits qui se colorent par mise en évidence d'une enzyme spécifique de la souche en cause, il s'agira dans la plupart des cas d'un substrat coloré de l'enzyme spécifique.
Dans le mode préféré de l'invention, le support, après avoir été
mis en contact avec le fluide à tester, va être amené à tomber dans le milieu de révélation et donc incuber en sa présence, toutefois il est nécessaire de pouvoir décrocher les spores fixées sur le support, pour ce faire on peut procéder de facon mécanique, notamment en ajoutant un élément d'agitation dans le milieu et/ou dans le tube, notamment une petite bille métallique qui va permettre par agitation de racler les spores, il est possible également de procéder à un passage aux ultrasons mais, comme cela apparaîtra dans les exemples, la solution la plus rationnelle est d'introduire dans le milieu de révélation un agent tensioactif, tel que le Tween 80 par exemple, qui va permettre de décrocher facilement et complètement les microorganismes sous forme de spores, mais n'a aucune influence sur la viabilité des cellules.
De préférence la lecture du résultat pourra se faire à travers une ou deux fenêtres en plastique transparent ou un compartiment inférieur totalement transparent, ou en tout autre matériau transparent, dans ce cas il est intéressant d'utiliser le verre comme support, ce qui permet d'avoir une plus grande épaisseur visible, alors qu'un support métallique sera au moins de ce point de vue moins efficace.
L'un des intérêts du dispositif de l'invention est que, compte tenu du fait que le fluide à tester peut circuler dans une c~n~lis~tion dans laquelle il est mis en contact avec le support portant les spores ou les microorgani.smes sous forme végétative ou une enzyme, on peut prévoir aux extrémités de cette canalisation deux ajutages sur lesquels on pourra venir fixer des tubes en matière appropriée, non poreuse, afin de pouvoir tester la stérilisation en profondeur ou la stérilisation à distance, c'est-à-dire que l'on peut tester l'état de la stérilisation d'un endroit dans lequel l'indicateur ne se trouve pas directement en plongeant les deux tubulures à l'endroit à
tester et en placant le dispositif à l'extérieur, il est d'ailleurs possible de WO 95/01451 2 1 6 ~ ~ ~7 PCT/FR9410078g tester la stérilisation d'une enceinte en maintenant le dispositif selon l'invention à l'extérieur pour peu que l'on ait ajusté deux tubulures dans lesquelles circule l'atmosphère que l'on doit stériliser.
Parmi les différents dispositifs permettant de tester la stérilité
5 d'une atmosphère, le dispositif selon la présente invention est le seul à
permettre, de façon simple, de tester la stérilité en profondeur grâce à
l'utilisation de tubulures plongeant en profondeur dans le produit ou l'atmosphère à tester et reliées au dispositif par le ou les ajutages, ledit dispositif n'étant pas lui-même placé en profondeur.
La présente invention concerne donc également un dispositif tel que décrit précédemment auquel sont fixés par les ajutages des tuyaux permettant notamment de tester la stérilité en profondeur, par exemple dans un récipient de grande dimension de type allongé ou dans un endroit difficilement accessible, en plaçant l'une des extrémités du tuyau à l'endroit à tester. On peut d'ailleurs prévoir également d'aspirer l'atmosphère à l'une des extrémités par l'intermédiaire d'une pompe reliée à l'autre ajutage.
Les exemples suivants sont plus particulièrement destinés à
mettre en évidence d'autres caractéristiques et avantages de la présente invention .
Les exemples sont mis en oeuvre en utilisant un dispositif du type de celui représe-lté aux figures annexées sur lesquelles:
- la figure 1 re~résente une coupe selon un plan passant par l'axe de rotation d'un dispositif selon l'invention en position de passage du fluide;
- la figure 2 représente le même dispositif mais dans une autre position où le support de microorganisme est placé dans le milieu;
- la figure 3 représente le dispositif après retour à la position initiale;
- la figure 4 est une vue cavalière du dispositif des figures là3.
La figure 1 représente un dispositif selon la présente invention selon une section par un plan passant par l'axe de rotation des deux compartiments l'un par rapport à l'autre.

~16~197 Ce dispositif est constitué de deux compartiments mobiles (1 et 2 ) reliés par une pièce de liaison ( 5 ), chacun des compartiments est constitué de carters identiques ou pas (3 et 4) dans lequel est placé un élément d'insertion qui, pour le compartiment supérieur, comporte un S conduit tubulaire (6) sensiblement parallèle à l'axe de rotation, débouchant à l'extérieur par un orifice (7) et par un orifice ( 8) en vis-à-vis du compartiment inférieur. Le support (9) qui est sensiblement cylindrique et appliqué dans le conduit tubulaire (6) est revêtu sur sa partie intérieure de spores (10).
Le support (9) repose sur la surface située en vis-à-vis du compartiment inférieur (12) à la surface de laquelle débouche un conduit tubulaire en vis-à-vis du précédent (11) et dont l'extrémité (13) débouche à
l'extérieur. Le conduit tubulaire (11) peut contenir un indicateur physico-chimique Dans cette configuration on a ainsi constitué un canal qui traverse l'ensemble du dispositif parallèlement à l'axe et dont une partie est constituée par le support de la souche.
Le compartiment inférieur comporte, en outre, un orifice (14) dont la dimension est telle qu'après rotation de 180 des deux compartiments ( 1 et 2 ) l'un par rapport à l'autre pour arriver à la configuration représentée à la figure 4, le conduit tubulaire (6) est amené en coïncidence avec ledit orifice et le support (9) tombe dans le milieu de révélation (15) situé dans un réservoir (20) du compartiment inférieur.
Après une seconde rotation de 180, on ramène les deux compartiments dans la position initiale représentée à la figure 3, mais le support (9) est alors placé dans le milieu de révélation (15) mais isolé de l'extérieur et peut alors être agité.
Il convient de remarquer qu'afin d'éviter des contaminations extérieures, les orifices débouchant (7 et 13) comportent chacun un filtre (21 et 22).
En outre, le canal tubulaire (11) est plus étroit à sa partie supérieure afin de permettre le blocage du support (9).
Enfin, les extrémités du canal ( 7 et 13 ) sont pourvues d'ajutages tels que 16 et 17 afin de permettre l'adaptation de tubulures si cela est nécessaire afin de tester des stérilisations profondes ou afin de W0 95/01451 ~ 7 lo PCT/FRg4/0078~

tester des atmosphères dans lesquelles on ne souhaite pas introduire le dispositif.
La figure 4 représente une vue cavalière du dispositif selon la présente invention sur laquelle on distingue les deux compartiments (1 et 2) 5 reliés par la pièce de liaison (5), l'un des conduits tubulaires débouchant avec son ajutage (16) ainsi que la fenêtre de lecture (18) transparente qui permet de voir les variations de couleurs du milieu de révélation ( 15).
E~EMPLE 1 Les essais n'ont été réalisés qu'avec les spores de Bacillus stearothermophilus CIP 5281 = ATCC 7953 dans le cas de la stérilisation à la vapeur d'eau.
1) Préparation de la sus~ension de spores, concentration de la suspension et dénombrement microbien 1.1 Matériel - Bouillon pour la congélation de la souche ( 1 ) . Extrait de viande de boeuf 3 g . Peptone trypsique de caséine 5 g . Glycérol 150 g . Eau distillée Q~iP 1000 1 - Bouillon de première mise en culture (2) . Extrait de levure 2,5 g . Tryptone 5,0 g . Glucose 1,0 g . Eau distillée Q~P 1 000 1 25 - Gélose de sporuation répartie en fioles de Roux (3) . Extrait de viande 10,0 g . Extrait de levure 2,0 g . MnSO4, H20 . Agar 23,0g . Eau distillée Q~iP 1000 ml 1.2 Préparation de la suspension de spores Ensemencement du bouillon (2) avec environ 106 spores provenant d'un bouillon congélation à- 20C (1) dans lequel est conservé la souche de Bacillus stearothermophilus CIP 5281 - Incubation à 56C pendant 35 24 heures.

- "o 95/01451 PCT/FR94/00789 Transfert de 3 ml environ de cette culture dans une fiole de Roux contenant la gélose de sporulation. Faire subir à la fiole de Roux diverses inclinaisons de facon à ce que l'inoculum vienne en contact avec la totalité de la surface de la gélose ; rej eter ltinoculum en excès Incubation de la fiole à 56C pendant 20 jours.
Observation de l'état de la culture au microscope: observer les spores à la fuschine dilué ou au microscope à contraste de phase. Les cellules végétatives doivent être lysées et les spores sont colorées en rose très pâle.
Si la sporulation n'a pas débuté, recommencer l'essai.
Dans le cas où la sporulation a commencé, poursuivre l'incubation jusqu'à ce que les cellules végétatives soient lysées.
Récupérer la culture solide avec de l'eau distillée stérile, en grattant au besoin la surface de la gélose.
1.3 Concentration de la sus~ension Répartir le liquide de récupération (coloré en jaune-brun) dans des tubes à centrifuger. Réaliser trois lavages successifs de 15 minutes chacun par centrifugation à 2 700 tours/minute: à chaque lavage, rejeter le surnageant et reprendre le culot dans 5 ou 10 ml d'eau distillée stérile.
Transférer la dernière suspension (qui ne doit plus être colorée en jaune-brun) dans un flacon Pyrex à bouchon vissé. Chauffer 30 minutes à 100C pour éliminer les formes végétatives restant éventuelles.
Conserver à + 4C.
Bien agiter la suspension avant chaque prélèvement, car les spores sédimentent au fond du flacon.
1.4 Dénombrement de la suspension de s~ores Dénombrement des spores après dilution convenable dans de l'eau distillée stérile, inclusion en gélose Mueller Hinton Agar (Diagnostic Pasteur, réf. 64884), 35 g/l, ~réparee extemporanément; incubation à 56C.
La suspension de spores doit titrer au minimum 107 spores/ml.
Vérifier l'absence d'amas de spores ou de débris organiques volumineux par coloration à la fuschine diluée.
2) fixation des spores sur le support On a testé différents supports:

WO 95tO1451 216 ~ 7 12 PCT/FRg4/00789 - de configuration plane, le verre, l'acier inoxydable, le caoutchouc et le tissu, - de configuration cylindrique, le verre, l'acier inoxydable et le caoutchouc.
S Les dépôts ont été 100 ~11 de la suspension de spores à la surfacedes supports plans et dans la lumière des supports cylindriques et les spores sont séchées à 37C . 2 ~ 61 ~ '1 ~ ~ o 95/01451 PCT / FR94 / 00789 STERILIZATION INDICATOR DEVICE
The present invention relates to a device for evaluating the action of a fluid on a microorganism or enzyme strain, plus particularly a device indicating stallization.
Sterilization and disinfection are processes widely used in a wide variety of fields.
Sterilization is notably carried out in care establishments such as hospitals, clinics, so have medical instruments, glass Ae, linen, generally any material, completely free from microorganisms in order to stop the spread of infectious diseases.
But, sterilization is also used in industry pharmaceutical for medical and surgical equipment such as sutures or generally a large number of disposable items and also for medicines for which a total absence of microorganism is necessary.
Sterilization is also being implemented more and more often in the food industry in order to control the biocont ~ min ~ tion of the environment, this is particularly the case for industries dairy.
It is also, in these same areas, in common use to use disinfection, but in the case of care facilities for example, surface treatment, cloths, this to decrease the proportion of pathogenic germs in order to limit the incidence of infections. In the pharmaceutical industry and the food industry we also practice disinfection in order to respect good manufacturing practices; this process tending, moreover, to spread in other areas such as local authorities, dental offices, hairdressers, etc.
Objects subject to sterilization and disinfection can be of an excessively variable nature, it can be either glass or of metals or plastics, similar configurations Geometric shapes can be very wide, flat, hollow, smooth or not.
Currently, to judge the effectiveness of sterilization, by example for moist heat, we use external means, it is WO 9S / 01451 ~ 6 I 9 ~ PCT / FR94 / 00789 basically recording temperature and pressure as well as sterilization times. Depending on the chart you can determine the time / temperature pair to obtain a sterilization under given conditions.
S However, this means may prove to be insufficient, which is why in most cases an internal device is also provided allowing the demonstration of sterilization.
In its simplest form, it is a device that contains microorganisms in a vegetative or resistance form, especially in a spore form, which will be checked at the end of the sterilization that effectively there are no more microorganisms or viable spores, or at least the rate of microorg ~ ni.cmes or spores remaining viable is below a certain threshold. We can also use an enzyme to reveal the effectiveness of sterilization.
Depending on the type of sterilization applied, we will use microorganisms known for their resistance in sporulated form, by example for sterilization by moist heat we will use Bacillus stearothermophilus. for sterilization by dry heat or gases on will use Bacillus subtilis and for sterilization by radiation ionizing we will use Bacillus pumilus.
With regard to disinfection processes, only this second method is usable, in fact there are no charts allowing to determine disinfectant conditions.
The present invention relates more particularly to indicating devices comprising microorganisms in the form vegetative or spore-forming or enzymes, intended to test, in general, the action of a fluid on said microorganism or the enzyme, in general so to test the sterilization or disinfection of an enclosure.
The sterilization indicator devices include general, on the one hand a support on which are placed the spores of the resistant strain which may be brought into contact with the sterilization and, on the other hand, a compartment in which there is a medium allowing the culture of the spore-forming microorganism and an agent revelation which changes color in the presence of the microorganism in culture.

2 ~ L ~ 7 - 'O 9S / 01451 PCT / FR94 / 00789 The control process therefore consists in introducing the device in the sterilization chamber, the spores are then brought into contact with the sterilization fluid, then, at the end of sterilization, breaking a vial, the culture medium and the developing agent on contact 5 with the spores, and after a determined time we visualize a color in the middle if among the spores some of them were still viable.
This type of apparatus is described for example in the patent French 2,045,855.
Most prior art devices have a number of drawbacks:
- first of all the spore support is mostly paper, gold the materials to be sterilized in practice are practically never in paper but in plastic, metal, rubber, glass, etc .;
15 - in general the supports have a flat shape which is not related to the geometric conformations of most materials to sterilize which are generally of extremely varied form;
- finally, the support absorbs, in some cases, easily the agents sterilants, resulting in easier destruction of spores when in reality microorganisms contaminating the material to sterilize are worn on non-absorbent surfaces.
So some of the devices depending on how they are put can lead to falsely reassuring results.
In addition, most biological indicator devices currently offered involve the breaking of a glass bulb, which is generally not desirable, especially since small pieces of glass can create microcracks in the outer container, so there are a risk of contamination.
Finally, in certain cases it can be interesting to be able control sterilization during operation without having to intervene directly in the sterilization chamber, this is generally not possible with existing devices.
This is why the present invention relates to a device intended to evaluate the action of a fluid on a strain of microorganism or on an enzyme, of the type comprising:

WO 95/01451 21 ~ 6 ~ 9 7 PCT / FR94 / 0078 "

- a compartment (1) allowing the contact of the fluid and said strain or enzyme and - a compartment (2) allowing the identification of said strain or the enzyme after contact with the fluid, using a revelation medium (15), characterized in that it consists of a mobile assembly which can present at least two configurations (8, 11) presenting, - in a first configuration, a passage allowing the circulation of the fluid inside the assembly and its contacting with the strain or the enzyme fixed on a support (9) and - in a second configuration, a means allowing the setting in contact of the development medium with the support on which the strain or enzyme and possibly means for to isolate the revelation medium containing the support from the atmosphere external, and means allowing the observation of modifications any revelation medium (18).
Preferably, this device is an indicator biological sterilization and / or disinfection.
Under these conditions, the fluid in question is water vapor, a 20 gas or liquid, but also very generally dry heat or ionizing radiation, even if it is not strictly speaking of a fluid.
Regarding the medium of revelation, it is the mostly of a medium allowing the culture of the strain from 25 spores or of vegetative form comprising a developer highlighting evidence of microorg ~ ni. ~ my viable.
Finally, microorganisms will mostly be under form of spores.
Preferably, the device according to the present invention 30 will also include means allowing the observation of possible modifications of the developer liquid.
In general, the device according to the invention will consist two compartments movable relative to each other, one of the compartments comprising the support (9) and at least one orifice (14) - -'O 95/01451 PCTtFR94 / 00789 S

allowing an external fluid to be brought inside on contact with the support, and the other compartment comprising the revealing medium, said compartment being arranged so that the displacement of one relative to the other brings the support of the strain (9) into contact with the medium of Revelation and possibly that another displacement leads to isolating the development medium containing the support from the external medium.
The two mobile compartments can be moved both by translation and by rotation about an axis.
In general, the support of the strain is a mobile element which 10 can have any configuration intended in particular to allow to best represent the surfaces that will have to be sterilized decontaminated outside.
It can in particular be a flat support or else a support with recesses or undulations, but in most 15 of the cases it will rather be a tubular device, preferably having the shape of a small tube and this support will be movable between a first position in contact with the fluid and a second position in contact with the revelation medium.
In the preferred mode of r ~ lis ~ tion, the device is constituted 2 ~) of two conl ~ ents mobile in rotation relative to each other around of an axis and having two facing surfaces perpendicular to said axis, the upper compartment comprises a tubular conduit (6) substantially parallel to the axis of rotation opening out of the compartment by two orifices, a support is placed in said tubular conduit and the support 25 rests on the surface facing the compartment below the surface of which opens a tubular conduit opposite the previous one and the other end of which opens to the outside, a channel is created which crosses the entire device parallel to the axis and part of which is constituted by the support of the strain, the lower compartment comprises, 30 furthermore, on its surface facing an orifice, the dimension of the orifice being such that, by rotation of the two compartments, the tubular conduit of the upper compartment is brought into coincidence with the orifice and that the support falls through this orifice into the revelation medium located in the lower compartment, as well as by bringing the assembly back to its position WO 9S / 01451 ~ ~ ~ 6 ~ ~ 7 PCT / FR94 / 00789 initial, the medium containing the support of the external medium is isolated, the lower compartment further comprising one or two windows transparent or being completely transparent, allowing you to see the color of the developing medium.
In addition, the lower compartment can have in addition to the middle culture, in the lower part of the fluid conduit, an indicator physico-chemical (allowing to see the effect of sterilization in depth or at a distance on a physico-chemical indicator).
Generally, the support of the microorganism will be consisting of a surface which may be identical to the surfaces to be sterilized and / or to decontaminate, in practice, in particular it may be surfaces metal, paper surfaces if necessary, metal surfaces plastic, but preferably the surfaces will be glass, in fact as will be seen in the examples which follow, the use of a glass support allows to have results that are the most reliable.
Microorganisms are preferably present under their most resistant form, i.e. in the form of spores which are fixed on the microorganism support by techniques which are known. he it is also possible to use non-resistant strains, for example real flora or even an enzyme with the same resistance as reference spores.
As previously stated, in its form preferred the support consists of a glass tube inside which spores of microorganisms have been deposited using methods which will be described in the examples and the fluid will be caused to flow through this tube.
The development medium is preferably constituted by a culture medium allowing the growth of spores when these are still viable, said culture medium comprising an indicator, most of colored time, the coloration of which changes or appears during growth microorganisms, for example by changing the pH with products such as phenol red or products that react to redox -'TO g5 / 01451 PCT / FR94 / 00789 such as for example methylene blue, it can also be products which are colored by highlighting a specific enzyme of the strain in question, it will in most cases be a colored substrate of the specific enzyme.
In the preferred embodiment of the invention, the support, after having been brought into contact with the fluid to be tested, will be caused to fall into the medium of revelation and therefore incubate in his presence, however it is necessary to ability to unhook the spores fixed on the support, to do this we can proceed mechanically, in particular by adding an element of agitation in the medium and / or in the tube, in particular a small ball metallic which will allow by agitation to scrape the spores, it is possible also to go through ultrasound, but like that will appear in the examples, the most rational solution is to introduce in the development medium a surfactant, such as Tween 80 by example, which will allow you to easily and completely pick up the microorganisms in the form of spores, but has no influence on the cell viability.
Preferably the reading of the result can be done through one or two transparent plastic windows or a compartment completely transparent lower, or any other transparent material, in this case it is interesting to use glass as a support, which allows a greater visible thickness, while a support metallic will be at least from this point of view less effective.
One of the advantages of the device of the invention is that, account given the fact that the fluid to be tested can circulate in a c ~ n ~ read ~ tion in which it is brought into contact with the support carrying the spores or microorganisms in vegetative form or an enzyme, we can provide ends of this pipe two nozzles on which we can come fix tubes of suitable, non-porous material, in order to be able to test the deep sterilization or remote sterilization, i.e.
you can test the state of sterilization from a place where the indicator is not located directly by immersing the two tubes at the place at test and by placing the device outside, it is also possible to WO 95/01451 2 1 6 ~ ~ ~ 7 PCT / FR9410078g test the sterilization of an enclosure while maintaining the device according to the invention outside as long as two pipes have been adjusted in which circulate the atmosphere that must be sterilized.
Among the different devices for testing sterility 5 of an atmosphere, the device according to the present invention is the only one to allow, in a simple way, to test sterility in depth thanks to the use of tubing plunging deep into the product or the atmosphere to be tested and connected to the device by the nozzle (s), said device not itself placed in depth.
The present invention therefore also relates to a device as previously described to which are fixed by the nozzles of the pipes allowing in particular to test sterility in depth, for example in a large container of elongated type or in a place difficult to access, by placing one end of the pipe at the place to test. We can also plan to draw the atmosphere to one ends via a pump connected to the other nozzle.
The following examples are more particularly intended for highlight other features and benefits of this invention.
The examples are implemented using a device of the type of that represented in the appended figures in which:
- Figure 1 re ~ resents a section along a plane passing through the axis of rotation of a device according to the invention in the passage position of the fluid;
- Figure 2 shows the same device but in another position where the microorganism support is placed in the medium;
- Figure 3 shows the device after returning to the position initial;
- Figure 4 is a view of the device of the figures there 3.
Figure 1 shows a device according to this invention according to a section through a plane passing through the axis of rotation of two compartments relative to each other.

~ 16 ~ 197 This device consists of two mobile compartments (1 and 2) connected by a connecting piece (5), each of the compartments is consisting of identical or different casings (3 and 4) in which is placed a insert which, for the upper compartment, has a S tubular conduit (6) substantially parallel to the axis of rotation, opening outside by an orifice (7) and by an orifice (8) opposite the lower compartment. The support (9) which is substantially cylindrical and applied in the tubular conduit (6) is coated on its inner part with spores (10).
The support (9) rests on the surface located opposite the lower compartment (12) on the surface of which a conduit opens tubular opposite the previous one (11) and the end (13) of which opens out outside. The tubular conduit (11) may contain a physical indicator chemical In this configuration, a channel was thus formed which crosses the entire device parallel to the axis and part of which is formed by the support of the strain.
The lower compartment also has an orifice (14) whose dimension is such that after 180 rotation of the two compartments (1 and 2) relative to each other to arrive at the configuration shown in Figure 4, the tubular conduit (6) is brought into coincidence with said orifice and the support (9) falls into the revelation medium (15) located in a tank (20) in the lower compartment.
After a second rotation of 180, we bring the two compartments in the initial position shown in Figure 3, but the support (9) is then placed in the development medium (15) but isolated from outside and can then be agitated.
It should be noted that in order to avoid contamination external, the openings (7 and 13) each have a filter (21 and 22).
In addition, the tubular channel (11) is narrower at its part upper to allow blocking of the support (9).
Finally, the ends of the channel (7 and 13) are provided nozzles such as 16 and 17 to allow the adaptation of tubing if this is necessary in order to test deep sterilizations or in order to W0 95/01451 ~ 7 lo PCT / FRg4 / 0078 ~

test atmospheres in which we do not wish to introduce the device.
FIG. 4 represents a view of the device according to the present invention in which there are two compartments (1 and 2) 5 connected by the connecting piece (5), one of the tubular conduits emerging with its nozzle (16) as well as the transparent reading window (18) which allows to see the variations of colors of the medium of revelation (15).
E ~ EMPLE 1 The tests were only carried out with Bacillus spores stearothermophilus CIP 5281 = ATCC 7953 in the case of sterilization with water vapour.
1) Preparation of the sus ~ ension of spores, concentration of the suspension and microbial count 1.1 Hardware - Broth for freezing the strain (1) . Beef extract 3 g . Tryptic casein peptone 5 g . Glycerol 150 g . Distilled water Q ~ iP 1000 1 - First culture broth (2) . Yeast extract 2.5 g . Tryptone 5.0 g . Glucose 1.0 g . Distilled water Q ~ P 1 000 1 25 - Sporuation agar distributed in Roux vials (3) . Meat extract 10.0 g . Yeast extract 2.0 g . MnSO4, H20 . Agar 23.0g . Distilled water Q ~ iP 1000 ml 1.2 Preparation of the spore suspension Inoculation of the broth (2) with approximately 106 spores from a freezing broth at- 20C (1) in which the Bacillus stearothermophilus strain CIP 5281 - incubation at 56C for 35 24 hours.

- "o 95/01451 PCT / FR94 / 00789 Transfer of approximately 3 ml of this culture to a vial of Ginger containing sporulation agar. Subject the vial of Roux various inclinations so that the inoculum comes into contact with the entire surface of the agar; re ect excess intoculum Incubation of the flask at 56C for 20 days.
Observation of the state of the culture under a microscope: observe the spores with diluted fuschine or phase contrast microscope. The vegetative cells should be lysed and spores are colored pink very pale.
If sporulation has not started, repeat the test.
If sporulation has started, continue incubation until the vegetative cells are lysed.
Recover the solid culture with sterile distilled water, scraping the agar surface if necessary.
1.3 Concentration of sus ~ ension Distribute the recovery liquid (colored yellow-brown) in centrifuge tubes. Perform three successive washes of 15 minutes each by centrifugation at 2,700 rpm: at each wash, discard the supernatant and take the pellet in 5 or 10 ml of sterile distilled water.
Transfer the last suspension (which should no longer be colored yellow-brown) in a Pyrex bottle with screw cap. Heat 30 minutes at 100C to eliminate any remaining vegetative forms.
Store at + 4C.
Shake the suspension well before each sample, as the spores sediment at the bottom of the bottle.
1.4 Enumeration of suspension of s ~ ores Enumeration of spores after proper dilution in sterile distilled water, inclusion in agar Mueller Hinton Agar (Diagnosis Pasteur, ref. 64884), 35 g / l, ~ repaired extemporaneously; incubation at 56C.
The spore suspension should titrate at least 107 spores / ml.
Check for clumps of spores or organic debris bulky by staining with diluted fuschine.
2) fixing of the spores on the support We tested different supports:

WO 95tO1451 216 ~ 7 12 PCT / FRg4 / 00789 - flat configuration, glass, stainless steel, rubber and the fabric, - of cylindrical configuration, glass, stainless steel and rubber.
S The deposits were 100 ~ 11 from the suspension of spores on the surface of planar supports and in the lumen of cylindrical supports and spores are dried at 37C.

3) RécuDération des spores fixées sur les supDorts Après le dépôt de 100 ~,~1 d'une suspension de spores calibrées 10 sur les différents supports et séchage comme indiqué précédemment, le support est mis dans un volume défini d'eau distillée stérile. La mise en oeuvre de différentes méthodes permet de constater que l'utilisation de Tween 80 à 0,5 % avec agitation est suffisante pour pouvoir décoller la plus grande partie des spores alors que les autres méthodes se révèlent soit lS difficiles à mettre en oeuvre soit insuffisantes dans leurs résultats.
La mise en oeuvre du dispositif tel que décrit précédemment avec différents types de support permet la détermination du temps de réduction décimale nommé DT à une température donnée. Cette réduction décimale est le temps nécessaire pour inactiver 90 % des microorg~ni~mes 20 présents avant stérilisation, c'est-à-dire également le temps nécessaire pourréduire de 10 fois la valeur de la population microbienne initiale. Dans le cadre d'une stérilisation on détermine la Dl2loc des supports en papier, en verre, en acier inoxydable, en caoutchouc et en tissu de géométrie plane par exposition des supports dans le dispositif selon la présente invention à
25 différents temps de stérilisation.
On trouve les résultats suivants:
Dl2loc papier = 1,9 min Dl2lC verre = 2,3 min Dl2lC acier inoxydable =2,4min Dl2lC tissu = 2,3 min Dl2lC caoutchouc =2,4min Lorsqu'à la place des supports plans on prend des supports de géométrie cylindrique, en verre, en acier inoxydable et en caoutchouc, on trouve les résultats suivants:

~ 6~1~7 ~~'0 95/01451 PCT/FR94/00789 Dl2lC verre = 2,5 min Dl2lC acier inoxydable =2,4min Dl2lC caoutchouc = 2,3 min En conclusion, on peut retenir dans le nouvel indicateur S biologique des supports dont la nature et la configuration sont représentatifs des objets réellement soumis à la stérilisation, supports creux en verre, acier ou caoutchouc, mais il paraît approprié d'utiliser de préférence des supports cylindriques en verre qui donnent les temps de réduction décimale les plus importants et donc la plus grande sécurité sur le 10 plan de la stérilisation. 3) Recovery of spores fixed on the supports After depositing 100 ~, ~ 1 of a suspension of calibrated spores 10 on the different supports and drying as indicated previously, the support is placed in a defined volume of sterile distilled water. Setting work of different methods shows that the use of Tween 80 at 0.5% with agitation is sufficient to be able to take off the most large part of the spores while the other methods are either lS difficult to implement or insufficient in their results.
The implementation of the device as described above with different types of support allows the determination of the decimal reduction named DT at a given temperature. This reduction decimal is the time required to inactivate 90% of microorg ~ ni ~ mes 20 present before sterilization, i.e. also the time necessary to reduce the value of the initial microbial population by 10 times. In the sterilization, the Dl2loc of the paper supports is determined, glass, stainless steel, rubber and fabric with flat geometry exposure of the supports in the device according to the present invention to 25 different sterilization times.
The following results are found:
Dl2loc paper = 1.9 min Dl2lC glass = 2.3 min Dl2lC stainless steel = 2,4min Dl2lC tissue = 2.3 min Dl2lC rubber = 2,4min When instead of the flat supports we take cylindrical geometry, glass, stainless steel and rubber, we finds the following results:

~ 6 ~ 1 ~ 7 ~~ '0 95/01451 PCT / FR94 / 00789 Dl2lC glass = 2.5 min Dl2lC stainless steel = 2,4min Dl2lC rubber = 2.3 min In conclusion, we can retain in the new indicator S biological of the supports whose nature and configuration are representative of the objects actually subjected to sterilization, hollow supports glass, steel or rubber, but it seems appropriate to use preferably cylindrical glass supports which give the times of decimal reduction the most important and therefore the greatest security on the 10 sterilization plan.

4) Etude de la sensibilité
La technique mise en oeuvre dans le dispositif selon la présente invention est une technique tout ou rienn. Pour tester la sensibilité du dispositif on utilise un milieu de culture constitué d'un 15 bouillon de trypto-caséine-soja modiflé par addition de Tween 80 à 0,5 %. On ajoute un rouge de phénol comme indicateur de pH. Cet indicateur de pH par acidification du milieu passe de la couleur rouge à la couleur jaune lorsque la culture est positive.
On effectue des essais avec un nombre très réduit de spores qui 20 ont conduit aux résultats suivants:
- pour 30 essais avec 2 + 1 spores, environ 80 % de cultures positives en 24 h d'incubation, - pour 30 essais avec 5 + 1 spores, 100 % de cultures positives en 24 h d'incubation.
Le seuil de sensibilité se situe donc à 5 + 1 spores.
Ainsi cette technique permet de mesurer une dimution en logarithmes base 10 du nombre de spores après stérilisation, ce qui a pu être vérifié par les essais en situation réelle.
Support cylindrique en verre portant 5.106 spores:
- temps d'exposition 3 min: 100 % de réponses positives - temps d'exposition 6 min: 100 % de réponses positives - temps d'exposition 9 min: 100 % de réponses positives - temps d'exposition 12 min: 90 % de réponses positives - temps d'exposition 15 min: 0 % de réponses positives WO95/01451 2L6~197 14 PCT/FR94/0078 Le dispositif selon la présente invention permet d'obtenir des résultats beaucoup plus satisfaisants que les indicateurs biologiques de la technique antérieure, notamment ceux décrits par exemple dans Technique Hospitalière n 493, Octobre 1986, p. 52-56. 4) Sensitivity study The technique used in the device according to the present invention is a whole or short technique. To test the sensitivity of the device, a culture medium consisting of a 15 trypto-casein-soy broth modified by adding 0.5% Tween 80. We add a phenol red as a pH indicator. This pH indicator by acidification of the medium changes from red to yellow when culture is positive.
Tests are carried out with a very small number of spores which 20 led to the following results:
- for 30 tests with 2 + 1 spores, approximately 80% of cultures positive in 24 h incubation, - for 30 tests with 5 + 1 spores, 100% positive cultures in 24 h incubation.
The sensitivity threshold is therefore 5 + 1 spores.
Thus this technique makes it possible to measure a reduction in base 10 logarithms of spore count after sterilization, which could be verified by field tests.
Cylindrical glass support carrying 5.106 spores:
- exposure time 3 min: 100% positive responses - exposure time 6 min: 100% positive responses - exposure time 9 min: 100% positive responses - exposure time 12 min: 90% of positive responses - exposure time 15 min: 0% of positive responses WO95 / 01451 2L6 ~ 197 14 PCT / FR94 / 0078 The device according to the present invention makes it possible to obtain much more satisfactory results than biological indicators of prior art, in particular those described for example in Technique Hospitalière n 493, October 1986, p. 52-56.

Claims

15

1) Device intended to evaluate the action of a fluid on a strain of microorganism or an enzyme, of the type comprising:
- a compartment (1) allowing contact between the fluid and the said strain or enzyme and - a compartment (2) allowing the detection of said strain or the enzyme after bringing into contact with the fluid, using a medium of revelation (15), characterized in that it consists of a mobile assembly which can present at least two configurations (8, 11) presenting, - in a first configuration, a passage allowing the circulation of the fluid inside the assembly and bringing it into contact with the strain or the enzyme fixed on a support (9) and - in a second configuration, a means allowing the setting contact of the development medium with the support on which the strain or the enzyme and, optionally, means allowing to isolate the development medium containing the support from the atmosphere outside, and means allowing the observation of the modifications possible from the revelation medium (18).

2) Device according to claim 1, characterized in that it is consisting of two compartments movable relative to each other, one of the compartments comprising the support (9) as well as at least one orifice (14) allowing an external fluid to be brought inside in contact with the support, and the other compartment comprising the development medium, said compartment being arranged so that the movement of one relative to the other brings the stump support (9) into contact with the medium of revelation and possibly in that another displacement leads to isolate the development medium containing the support from the external medium.

3) Device according to one of claims 1 and 2, characterized in that the two compartments are movable in translation or in spin.

4) Device according to one of claims 1 to 3, characterized in that the stump support is movable between a first position where it is in contact with the fluid and a second position in which it is in contact with the developing liquid.

5) Device according to one of claims 1 to 4, characterized in what the first and second compartments are likely to rotate or to be moved in translation relative to each other to bring, after the support has been brought into contact with the external fluid in a first position by rotation or translation, said support facing a opening in the second compartment containing the medium of revelation in order to be able to fall into said milieu of revelation.

6) Device according to one of claims 4 and 5, characterized in that, in the first configuration, the first compartment comprises two orifices bringing the interior of the compartment into contact with the outside, in that in the compartment is the support so as to be in contact with a fluid coming from outside through the orifices (7, 8) and in the second configuration the support is brought opposite an orifice formed in the second compartment (14) which contains the medium of revelation 15) and falls into said medium of revelation, and in that when we put the whole thing back in the first configuration, we isolate the development medium containing the support of the external atmosphere.

7) Device according to one of claims 1 to 6, characterized in that the microorganism support (9) is of shape substantially tubular and that each of the ends of said tube is in contact with the orifices of the first compartment in order to ensure the passage of the fluid outside inside said tube.

8) Device according to claim 7, characterized in that it is consisting of two movable compartments in rotation, one relative to the other about an axis and having two perpendicular facing surfaces at said axis, the upper compartment comprises a tubular duct (6) substantially parallel to the axis of rotation emerging outside the compartment through two orifices, a support is placed in said duct tubular and the support rests on the surface located opposite the lower compartment at the surface of which emerges a tubular conduit opposite the previous one and whose other end opens outside, a channel is thus created which crosses the whole of the device parallel to axis and part of which consists of the stump support, the lower compartment further comprises, on its facing surface, a orifice, the size of the orifice being such that, by rotation of the two compartments, the tubular conduit of the upper compartment is brought in coincidence with the orifice and that the support falls through this orifice into the development medium located in the lower compartment, as well as in bringing the assembly back to its initial position, the medium containing the support of the external environment, the lower compartment comprising, in Besides, a transparent window allowing to see the color of the middle of revelation.

9) Device according to claim 8, characterized in that that the development medium is contained in a tubular element substantially parallel to the axis.

10) Device according to one of claims 8 and 9, characterized in that the orifices opening out to the outside comprise a filter (21, 22).

11) Device according to one of claims 8 to 10, characterized in that the outer orifices have nozzles (16, 17).

12) Device according to one of claims 8 to 11, characterized in that the two compartments consist of a casing having the same structure.

13) Device according to one of claims 8 to 12, characterized in that there is arranged in the lower part of the fluid duct a physico-chemical indicator.

14) Device according to one of claims 11 to 13, characterized in that pipes are arranged on the nozzles in order to enable in-depth sterility testing.