CA1340731C

CA1340731C - Heteropolysaccharide bm07, process for preparing the same and use thereof in different industries

Info

Publication number: CA1340731C
Application number: CA000605480A
Authority: CA
Inventors: Gabriel Ullmann; Alain Jarry
Original assignee: Rhone Poulenc Chimie SA
Current assignee: Rhodia Chimie SAS
Priority date: 1989-07-12
Filing date: 1989-07-12
Publication date: 1999-09-07
Anticipated expiration: 2016-09-07

Abstract

Les hétéropolysaccharides employés dans des domaines industriels présentent de nombreuses insuffisances parmi lesquelles on peut citer une manque de stabilité à la température. Maintenant le hétéropolysaccharide BM07 obvie aux inconvénients précités. Il est susceptible d'être obtenu par fermentation d'un milieu comportant au moins une source de carbone assimilable, par une souche Agrobacterium tumefaciens I-736, un de ses recombinants, ou un de ses mutants. L'hétéropolysaccharide BM07 peut être employé dans des domaines industriels aussi varies que, notamment l'agrochimie, l'agro-alimentaire, l'industrie pétrolière et les cosmétiques.The heteropolysaccharides used in industrial fields have numerous shortcomings, among which there may be mentioned a lack of temperature stability. Now the heteropolysaccharide BM07 overcomes the aforementioned drawbacks. It is capable of being obtained by fermentation of a medium comprising at least one assimilable carbon source, by a strain Agrobacterium tumefaciens I-736, one of its recombinants, or one of its mutants. The heteropolysaccharide BM07 can be used in industrial fields as varied as, in particular agrochemistry, food industry, petroleum industry and cosmetics.

Description

-tJOUVEL 1-IETEROPOLYSACCHARIDE BM07, l'ROCEDE PERMETTANT SON OBTENTION
ET SON APPLICAT:(ON DANS DIVERS TYPES D'INDUSTRIES
La présente in«ention concerne un nouvel hétéropolysaccharide, un procédé permettant son obtention par fermentation par un microorganisme, ainsi que son application dans divers types d'industries.
Les hétéropol5~saccharides sont des molécules de haut poids moléculaire contenant: au mopns deux types de monosaccharides formant un motif de base polymérisé.
L'un des hétéropolysac:charides les plus employés dans des domaines industriels aussi variés que, notamment l'agrochimie, l'agro-alimentaire, l'industrie pétrolière, les cosmétiques, etc, est la gomme Xanthane.
Cependant, malgré ses potentialités la gomme Xanthane présente de nombreuses insuffisances parmi lesquelles on peut citer un manque de stabilité à la température, aux pH acide et alcalin ainsi que dans Ies milieux fortement salins.
D'autres hétéropolysac:charides ont par la suite été mis sur le marché. Parmi ces derniers on peut citer l'hétéropolysaccharide développé par la société SHE:LL sous la marque SHELL-FLO S ~ . Après des analyses effectuées par la demanderesse, il a pu être mis en évidence que cet hétéropolysaccharide comportait des motifs dérivés du glucose, du galactose, et de soels des acides pyruvique, succinique et acétique.
Mais cet hétéropolysaccharide a montré lui aussi des insuffisances en particulier lorsçlu'il est soumis à des températures élevées, de l'ordre de 80°C. Afin d'obvier aux inconvénients précités, la demanderesse a mis au point un nouvel hétéropolysaccharide qui non seulement est stable à la température, dans des solutions salines, basiques ou acides, mais qui de plus présente de fortes propriétés rhéologiques aux fait~les concentrations, un pouvoir de suspension élevé, une dissolution rapicle dans l'eau de ville comme dans l'eau distillée.
Un premier objet de l'invention est donc un tel hétéropolysaccharide.

~~~o~~~ -tJOUVEL 1-IETEROPOLYSACCHARIDE BM07, THE PROCEDURE FOR ALLOWING IT
AND ITS APPLICAT: (IN VARIOUS TYPES OF INDUSTRIES
The present invention relates to a new heteropolysaccharide, a process for obtaining it by fermentation by a microorganism, as well as its application in various types of industries.
Heteropol5 ~ saccharides are high-weight molecules molecular containing: at the mopns two types of monosaccharides forming a polymerized base pattern.
One of the heteropolysac: charides the most used in fields industrial companies as varied as, in particular agrochemistry, agro-food, the petroleum industry, cosmetics, etc., is Xanthan gum.
However, despite its potential, Xanthan gum has many shortcomings among which we can cite a lack of stability at temperature, at acid and alkaline pH as well as in Ies highly saline environments.
Other heteropolysac: charides were subsequently placed on the market.
market. Among the latter, mention may be made of the heteropolysaccharide developed by SHE: LL under the brand SHELL-FLO S ~. After analyzes carried out by the plaintiff, it could be highlighted that this heteropolysaccharide had units derived from glucose, galactose, and soels of pyruvic, succinic and acetic acids.
But this heteropolysaccharide also showed insufficiencies especially when it is subjected to high temperatures, around 80 ° C. In order to overcome the aforementioned drawbacks, the Applicant has developed a new heteropolysaccharide which does not only is temperature stable, in saline solutions, basic or acidic, but which also has strong properties rheological to the facts ~ the concentrations, a high suspension power, dissolution dissipates in tap water as well as in distilled water.
A first object of the invention is therefore such heteropolysaccharide.

~~~ o ~~~

- 2 -Un deuxième objet de l'invention est un procédé de préparation de cei: hété:ropolysaccharide.
Un troisième objet de l'invention est l'applica tion dudit hétéropolysaccharide dans divers types d'industries.
La présente invention concerne donc un nouvel hétéropolysaccharide BM07, caractérisé en ce qu'il est susceptible d'être obtenu par fermentation d'un milieu comportant au moins unes source de carbone assimilable, par une souche Agrobacterium tumefaciens I-736, un de ses recombinants ou un de ses mutants.
Ladite souche Agrobactérium tumefaciens a été
déposée conformément au Traité de Budapest auprès tie 'l'a Collection Nation~sle de Culture des Microorganismes (CN CM) le ler mars 1988, oû elle est publiquement accessible sous le No. I - 736. Cettf; souche provient de la Collection Nationale de Baci=éries Phytopathogène et est répertoriée sous le numéro CNBP 291 dans le catalogue 1974 de l'organisme curateur.
La culture pure d'Agrobacterium tumefaciens I-736 peut être effectu~~e en tube gélose incliné (slant) incubé à
une température: comprise entre 26 et 32oC, et plus généralement entrE~ 28 et 32oC.
A ces t~~mpéra.tures et notamment sur des milieux à
base de MY agar ~~t de Bennett agar, dont les compositions sont indiquées ci-des:~ous, on a pu observer la formation d'un tapis mucoide bactérien recouvrant la totalité du slant dès 20 heures.
Les milieu; d'entretien suivants ont été
considérés comme :particulièrement avantageux pour la culture d'Agrobacterium tumefaciens I-736:

.~~~073I
- 2a -Milieu MY Agar ( en g/:L j Soya-Peptones 5 Extrait de levure 3 Extrait de malt 3 Glucose 10 Agar 20 13~0'~~1 - 2 -A second object of the invention is a method of preparation of cei: hété: ropolysaccharide.
A third object of the invention is the applica tion of said heteropolysaccharide in various types of industries.
The present invention therefore relates to a new heteropolysaccharide BM07, characterized in that it is likely to be obtained by fermentation of a medium comprising at least one assimilable carbon source, for an Agrobacterium tumefaciens I-736 strain, one of its recombinants or one of its mutants.
Said Agrobacterium tumefaciens strain was deposited in accordance with the Budapest Treaty with the Nation ~ sle Collection of Culture of Microorganisms (CN CM) March 1, 1988, where it is publicly available under No. I - 736. Cettf; strain comes from the Collection Nationale de Baci = Phytopathogenic and is listed under number CNBP 291 in the 1974 catalog of the curative organism.
The pure culture of Agrobacterium tumefaciens I-736 can be performed ~~ e in an inclined agar tube (slant) incubated at a temperature: between 26 and 32oC, and more generally between ~ 28 and 32oC.
At these t ~~ mpéra.tures and especially on environments with base of MY agar ~~ t by Bennett agar, whose compositions are indicated below: ~ ou, we could observe the training a bacterial mucoid mat covering the entire slant from 8 p.m.
The middle; following interview have been considered to be: particularly advantageous for culture of Agrobacterium tumefaciens I-736:

. ~~~ 073I
- 2a -MY Agar medium (in g /: L j Soy-Peptones 5 Yeast extract 3 Malt extract 3 Glucose 10 Agar 20 13 ~ 0 '~~ 1

3.
- Milieu T G Y Agar (produit par l'institut Pasteur) (en g/1) Peptones 5 Extrait de levures 2,5 Glucose 1 Agar 20 - Milieu Bennett Agar (en g/1) Peptones 1 Extrait de viandes 1 NZ Amine A 0 2 (Produit par la Sté Sheffield Chemical) Glucose 10 Agar 20 Milieu T.S Agar (produit par la Sté Bio-Mërieux) (en g/1) Bio trypcase 17 Bio soyase 3 KzHPO, 2,5 NaCl 5 Glucose 2,5 Agar 20 La souche Ac~robacterium tumefaciens I-736 peut également étre cultivée en boîte de Petri, par exemple sur milieu MY agar ou TGY agar.
Dans ces conditions les colonies sont visibles dès 24 à 30 heures, et présentent les caractéristiques suivantes, à 48 heures - taille : 2 à 3 mm de diamètre - aspect lisse et peu bombé
- couleur brun-jaune très clair - colonies à bord net et moins mucoïde sur boîte de Petri que sur slant.
La souche Agrobacterium tumefaciens I-736 peut utiliser les sucres suivants - glucose - saccharose - hydrolysats d'amidon l ~.34073:~ 3.
- TGY Agar medium (produced by the Pasteur Institute) (in g / 1) Peptones 5 Yeast extract 2.5 Glucose 1 Agar 20 - Middle Bennett Agar (in g / 1) Peptones 1 Meat extract 1 NZ Amine A 0 2 (Produced by Sheffield Chemical Co.) Glucose 10 Agar 20 TS Agar medium (produced by Sté Bio-Mërieux) (in g / 1) Bio trypcase 17 Bio soyase 3 KzHPO, 2.5 NaCl 5 Glucose 2.5 Agar 20 The strain Ac ~ robacterium tumefaciens I-736 can also be cultivated in a Petri dish, for example on MY agar or TGY agar medium.
Under these conditions, the colonies are visible from 24 to 30 hours, and have the following characteristics at 48 hours - size: 2 to 3 mm in diameter - smooth appearance and slightly curved - very light brown-yellow color - colonies with a clear edge and less mucoid on a Petri dish than on a slant.
Agrobacterium tumefaciens I-736 can use sugars following - glucose - sucrose - starch hydrolysates l ~ .34073: ~

4.
et plus difficilement l'am:idon natif et le lactose.
Le glucose et le saccharose sont des sucres préférés.
I1 a pu ëtre mis en évidence que, d'une manière générale l'hétéropolysacchar;Lde BMO'1 comporte des motifs dérivés du glucose, du galactose et des acides pyruvique, succinique et ~.cétique ou des sels de ces acides, généralement selon des proportions molaires respectivement de 5-8/1-2/0,5-2/O,fi-2/0,05-2 de préférence de 6 -7,5 / 1 - 1,5/ 0,5 -1/ 0,5 - 1/0,05-0,2 et plu: préférentiellement encore de 7 / 1 / 0,5 -1 / 0, 5 - 1 / 0, 05 -- 0, 1.
Lesdits acide=s pyru«ique, succinique et acétique se présentent généralement sous forme de sels tels que des sels de sodium, de potassium, de calcium ou d'ammonium.
Les méthodes d'analyse de l'hétéropolysaccharide BM07 qui ont permis de déterminer' sa formule brute telle que spécifiée ci-dessus, ont pour principe la dètermination des éléments constitutifs (sucres et acides) après hydrolyse dudit hétéropolysaccharide BM07 et dosages chromatographiques par étalonnage interne ou externe.
Ainsi, le dosage des sucres a été réalisé de la manière suivante 100 mg d'hétéropoly_>acchari.de BM07 sont hydrolysés en tubes hermétiques par 5 ml d'acide tri.fluoroacétique molaire à 105°C pendant trois à six heures.
Cette opération est suivie d'une évaporation à sec et d'une reprise du résidu se>.c dans 5 ml de pyridine contenant 15 mg de sorbitol en tant qu'étalon interne ; puis d'une silylation sur 1 ml de solution pyridinique par 0,9 ml d'hexamethyldisilazane. La silylation est catalysée par 0,1 ml. d'acide trifluoroacétique.
Le dosage des sucres est ensuite effectué par chromatographie en phase gazeuse à détection F'.I.D, sur colonne capillaire en verre de 25 m de longueur et de 0,25 mm de diamètre, chargée de phase méthylsilicone présentant une épai~;seur de' film de 0,14 u. Le gaz vecteur utilisé est l'hydrogène, avec ur~ débit de 2 ml/minute.
Le dosage de L'acide pyruvique est réalisé à partir d'une solution mère obtenue par hydrolyse de 80 mg d'hétéropolysaccharide BM07 au moyen de 5 ml d'acide chlorhydridue 4N pendant 1 heure à 105°C, puis ajout de 2 mg d'acide cétoglutarique (constituant l'étalon interne) et ajustement à 25 ml par de L'eau distillée.

el 4.
and more difficultly the native idon and lactose.
Glucose and sucrose are preferred sugars.
It has been shown that, in general heteropolysacchar; Lde BMO'1 comprises units derived from glucose, galactose and pyruvic, succinic and ~ .cetic acids or salts of these acids, generally in molar proportions respectively from 5-8 / 1-2 / 0.5-2 / O, fi-2 / 0.05-2 preferably from 6 -7.5 / 1 - 1.5 / 0.5 -1 / 0.5 - 1 / 0.05-0.2 and greater: preferably still 7/1 / 0.5 -1/0, 5 - 1 / 0.05 - 0, 1.
Said pyru, ic and succinic and acetic acids are present generally in the form of salts such as sodium salts, potassium, calcium or ammonium.
The methods of analysis of the heteropolysaccharide BM07 which have allowed to determine 'its gross formula as specified above, have as a principle the determination of the constituent elements (sugars and acids) after hydrolysis of said heteropolysaccharide BM07 and assays chromatography by internal or external calibration.
Thus, the dosage of the sugars was carried out in the following manner 100 mg of heteropoly_> acchari.de BM07 are hydrolyzed in hermetic tubes per 5 ml of molar tri.fluoroacetic acid at 105 ° C for three to six hours.
This is followed by dry evaporation and a resumption of the residue se>. c in 5 ml of pyridine containing 15 mg of sorbitol as an internal standard; then silylation on 1 ml of solution pyridine with 0.9 ml of hexamethyldisilazane. Silylation is catalyzed by 0.1 ml. trifluoroacetic acid.
The sugar dosage is then carried out by chromatography in gas phase with F'.ID detection, on a 25 m glass capillary column 0.25 mm in length and diameter, charged with the methylsilicone phase having a thick film of 0.14 u. The carrier gas used is hydrogen, with ur ~ flow rate of 2 ml / minute.
The dosage of pyruvic acid is carried out from a solution mother obtained by hydrolysis of 80 mg of heteropolysaccharide BM07 using 5 ml of 4N hydrochloric acid for 1 hour at 105 ° C, then addition of 2 mg of ketoglutaric acid (constituting the internal standard) and adjustment to 25 ml with distilled water.

el

5.
Le dosage est alors effectué par Chromatographie Liquide Haute Performance (HPLC) au moyen d'une colonne chargée de silice greffée C,b de 5 u de diamètre, dont la; longueur est de 250 mm et le diamètre de 4,6 mm. L'éluant utilisé est un mélange 50/50 en volume d'acide phosphorique 0,02 M ert d'acÉ~tonitrile. Le débit est de 1,5 ml/minute.
La détection de l'aci.de pyruvique se fait par Ultra-violets à
375 nm.
Le dosage de l'acides succinique se fait après hydrolyse de l'hétéropolysaccharide BM07 dans les mémes conditions que celles utilisées pour le do~>age de l'acide pyruvique. Le dosage est direct, par étalonnage externe. La solution étalon d'acide succinique utilisée contient 8 mg d'acide succinique dans 25 ml d'eau.
On utilise à nouveau la technique de la CLHP sur des colonnes Aminex HPX87H O de BIORAD CJ . L'éluant est l'acide sulfurique 0,01 N, et le débit est de 0,,8 ml/m:Lnute. La détection de l'acide succinique est réfractométrique.
Le dosage de :L'acide acétique se fait après hydrolyse de 300 à
350 mg d'hétéropolysaccharide BM07 par 5 ml d'acide trifluoroacétique 4 N à 120°C pendant troi:~ heures. Puis on ajoute 30 mg d'acide propionique en tant qu'étalon interne et on dose par Chromatographie en phase gazeuse à déte~~tion F.I.D.
Pour le dosage, on utilise une colonne en verre de 2 m de long et de 3 mm de diamètre remplie de phase FFAP à 5 ~ et d'acide phosphorique à 1 ~ absorbés sur chromosorb G O {AW DMCS) de 80 à 100 mesh. Le gaz vecteur est 1'hé?-:~:,~ avec un débit de 30 ml/minute.
L'hétéropolysaccharide BM07, provenant de différents échantillons, présente généralement les propriétés suivantes 1. Sa viscosité intrinsëque est comprise entre 30 et 250 dl/g et plus particulièrement comprise entre 140 et 250 dl/g et préférentiE:llement comprise entre 150 et 240 dl/g.
La viscosité intrinsèque (n) telle que spécifiée est déterminée par ex:trapo7_ation à concentration nulle de la viscosité réduite n-nc-,formule dans laquelle:
rl o t~ 5.
The assay is then carried out by High Liquid Chromatography Performance (HPLC) using a column loaded with grafted silica C, b 5 u in diameter, including the; length is 250 mm and the diameter of 4.6 mm. The eluent used is a 50/50 mixture by volume of acid.
phosphoric 0.02 M ert of acé ~ tonitrile. The flow rate is 1.5 ml / minute.
The detection of pyruvic ac is done by Ultra-violet at 375 nm.
The determination of succinic acids is done after hydrolysis of the heteropolysaccharide BM07 under the same conditions as those used for the do ~> age of pyruvic acid. The dosage is direct, by external calibration. The standard succinic acid solution used contains 8 mg of succinic acid in 25 ml of water.
We again use the HPLC technique on columns Aminex HPX87H O from BIORAD CJ. The eluent is 0.01 N sulfuric acid, and the flow rate is 0.8 ml / m: Lnute. Detection of succinic acid is refractometric.
The dosage of: Acetic acid is done after hydrolysis from 300 to 350 mg of heteropolysaccharide BM07 per 5 ml of trifluoroacetic acid 4 N at 120 ° C for three hours: ~ hours. Then add 30 mg of acid propionic acid as an internal standard and assayed by chromatography in gas phase with detection FID ~~ tion For the assay, a 2 m long glass column is used and 3 mm diameter filled with 5 ~ FFAP phase and phosphoric acid at 1 ~ absorbed on chromosorb GO (AW DMCS) from 80 to 100 mesh. The gas vector is 1h? -: ~:, ~ with a flow rate of 30 ml / minute.
The heteropolysaccharide BM07, from different samples, usually has the following properties 1. Its intrinsic viscosity is between 30 and 250 dl / g and more particularly between 140 and 250 dl / g and preferential: llement between 150 and 240 dl / g.
The intrinsic viscosity (n) as specified is determined for example: zero concentration trapo7_ation of the reduced viscosity n-nc-, formula in which:
rl ot ~

- 6 -- 0 est la viscosité de la solution - r~o est la viscosité du solvant - C est la concentration en hétéropolysaccharide BM07, en utilisant l'équation de Huggins:
n - I10 --_.__ _ C.n~ + k' (n)2 . C
rl o (~
k' étant la constante d.e Huggins au ler plateau Newtonien La viscosité spécifique r~ -no est mesurée de la no façon suivante:
On prépare une solution mère à 0,2 g/1 de l'hété-ropolysaccharide BM07 dans une solution aqueuse 0,1 M NaCl.
On prépare ensuite une gamme de solutions comportant l'hétéropolysaccharide BM07 à des concentrations comprises entre 0,03 et 0,1 g/1 par dilution de la solution mère avec la solution aqueuse 0,1 M NaCl.
Les mesures sont ensuite effectuées à 23°C au moyen d'un viscosimètre LOW SHEAR.
On trace la courbe de viscosité spécifique en fonction de la concentration et l'on extrapole à
concentration nulle.
2. La masse moléculaire de l'hétéropolysaccharide BM07 mesurée par diffusion de la lumière est généralement comprise entre 6f106 et. 10X106, de préférence comprise entre 6,5X106 et 9,5X106.
II. L'hétéropolysaccharide BM07 présente de très bonnes propriétés rhéologiques en solution dans l'eau distillée et ceci notamment aux faibles concentrations.
Mais de plus ces propriétés se maintiennent fort bien quand v ,~340f~~~
- 6a -l'hétéropolysaccharide est soumis à l'influence de conditions sévère~~, en ~>articulier aux pH fortement acide et basique, en milieu fortement ionique et à la température.
Ainsi on a pu constater que:
1. Des solutions à 0,1~ en poids de l'hétéropolysacch.aride BM07 dans l'eau distillée à 250 présentent des v.iscosi.tés à 24 heures supérieures à 350 mPa.s et plus particulièrement comprises entre 400 et 700 mPa.s; les viscosités étant mesurées à un gradient de vitesse de 1 s 1 au moyen. d'un viscosimètre LOW SHEAR*
* (marque de commerce) A

~~~o~~~ - 6 -- 0 is the viscosity of the solution - r ~ o is the viscosity of the solvent - C is the concentration of heteropolysaccharide BM07, using Huggins' equation:
n - I10 --_.__ _ Cn ~ + k '(n) 2. VS
rl o (~
k 'being Huggins' constant at the 1st Newtonian plateau The specific viscosity r ~ -no is measured from the no as follows:
A mother solution is prepared at 0.2 g / l of the heter-ropolysaccharide BM07 in 0.1 M NaCl aqueous solution.
We then prepare a range of solutions comprising the heteropolysaccharide BM07 at concentrations between 0.03 and 0.1 g / 1 by diluting the solution mother with 0.1 M NaCl aqueous solution.
The measurements are then carried out at 23 ° C at using a LOW SHEAR viscometer.
We draw the specific viscosity curve in function of the concentration and we extrapolate to zero concentration.
2. The molecular mass of the heteropolysaccharide BM07 measured by light scattering is generally between 6f106 and. 10X106, preferably between 6.5X106 and 9.5X106.
II. The heteropolysaccharide BM07 has very good rheological properties in solution in water distilled, especially at low concentrations.
But moreover these properties are maintained very well when v , ~ 340f ~~~
- 6a -the heteropolysaccharide is subject to the influence of severe conditions ~~, in ~> particular with strongly acidic pH and basic, in strongly ionic medium and at temperature.
So we could see that:
1. Solutions at 0.1 ~ by weight of the arid BM07 heteropolysacch in distilled water at 250 have v.iscosi.ts at 24 hours greater than 350 mPa.s and more particularly between 400 and 700 mPa.s; the viscosities being measured at a gradient of speed of 1 s 1 by means. a LOW SHEAR * viscometer * (trademark) AT

~~~ o ~~~

7.
2. L'hétéropolysaccharide BM07 montre de bonnes propriétés rhéologiques en milieu salir, et notamment dans des solutions salines à
base de CaCl~, de Na~SO, et de NaCl.
Plus particulièrement, on a constaté que des solutions à 0,3 % en poids dudit hétéropol.ysaccharide BM07 dans une solution saline (dont la composition figure ci.-dessous), présentaient généralement des viscosités à 2 heures comprises entre x:000 et 3500 mPa.s, et plus particulièrement comprises entre 2500 et 3000 mPa.s, les viscosités étant mesurées avec un rhéomètre Carrimed ~ à un gradient de vitesse de 1 s-' ; la solution saline ayant la composition suivante NaCl 91,71 g CaC12,2H~C 10,41 <~

Mg C1~, 10,12 q 6H~0 BaCl~, ZH~C0,113 g NaHCo~ 0,195 g Eau distilleqsF> 1 D'autre part des solui:ions à 0,2 % en poids d'hétéropolysaccharide BM07 dans des solui:ions aqueuses à 20 % de NaCl présentent des viscosités à 24 heures comprises entre 1600 et 2400 mPa.s et de préférence comprises entre 1700 et 2100 mPa.s, les viscosités étant mesurées au moyen d'un viscosimètre LOW SHEAR à un gradient de vitesse de 1 s-'.
3. Des solutions aqueuses à 0,2 % en poids d'hétéropolysaccharide BM07, à pH 1,7 et à ~'.5°C, présentent une viscosité à 24 heures comprise entre 1000 et 2500 mPa.s, plus particulièrement comprise entre 1400 et 2000 mPa.s, les viscosités étant mesurées au moyen d'un viscosimètre LOW
SHEAR, à un gradient de vitrasse de 1 s-'.
4. Des solutions aqueuses à 0,2 % en poids d'hétéropolysaccharide BM07, à pH 11,8 et à 25°C, présentent une viscosité à 24_ heures comprise entre 1000 et 2500 ml~a.s, ;plus particulièrement comprise entre 1400 et 2000 mPa.s, les viscosités étant mesurées au moyen d'un viscosimètre LOW
SHEAR, à un gradient de vitesse de 1 s-'.

~.r3~~'~3:I
-5. Des solutions d'hétéropolysaccharide BM07 à 0,2 % en poids dans l'eau distillée, soumises à une température de 80°C durant 24 heures, présentent gênéralemc~nt des viscosités comprises entre 500 et 2500 mPa s et plus particuliêrement comprises entre 1000 et 2000 mPa s, les viscosités étant mesurées au moyen d'un viscosimètre LOW SHEAR, à un gradient de vitesse de 1 s-'.
6. Avantageusement, des solutions aqueuses â 0,2~ en poids dudit hétéropolys.accharide à pH 7 et 25oC, présentent une viscosité à 24 heures comprises entre 1000 et 2500 mPa.s, et plus particulièrement comprises entre 1400 et 2000 mPa.s, les viscosités étant mesurêes au moyen d'un viscosimètre LOW
SHEAR, à un gradient de vitesse de 1 s 1.
On a également constaté que l'hétéropolysaccharide BM07 présente un bon pouvoir de suspension. Le poûvoir de suspension des solutions d'hétéropoiysaccharide BM07 peut étre apprécié au moyen du test suivant:
une éprouvette MEGAL * de 100 ml est remplie dans sa totalité
(volume occupé de 130 ml.; par une solution à C,1 % en poids d'hétéropolysaccharide EM07 dans de l'eau distillée. La densité de la solution est alors voisine de 1.
Une bille de polyamides 6,6, d'un diamètre de 3 mm et d'une densité
de l,î?5 est posée à. la surface du liquide, sans ~aitesse initiale. Le temps de chute de la bille est mesuré jusqu'à ce qu'elle parvienne au fond de l'éprouvette, soit après ûn parcours de chute de 23,5 cm. Afin d'obtenir un temps moyen, ce test est répété plusieurs fois. Le temps m~rn d2 chute est généralement supérieur à 2000 secondes, et plus particulièrement est compris entre 3000 et 15000 secondes.
à titre comparatif, une solution à O,1 % en poids de gomme hanthane présente, dans les mêmes conditions, un temps de chute compris entre environ 60 et 350 secondes.
La présente i:wention a également trait â un procédé de préparation de l'hétéropolysaccharide BM07 tel que décrit ci-dessus.
* (marque de earmerce) 1340'31 - 8a -Ce procédé de préparation dudit hétéropolysaccharide consiste en la fermentation d'un milieu comportant au moins une source de carbone assimilable, par une souche Agrobacterium tumefaciens T-736 un de ses recombinants ou un de ses mutants.
Outre ladite =source de carbone assimilable, 'e milieu de ferme.~tation pe~~t aurai renfermer au moins une source d'azote, de préférence une source d'aa:ote organigue et éventuellement un ou plusieurs sels minéraur_.

. ~3~0,~~1 9.
Le milieu est innoculé de manière classique par la souche Agrobacterium tumefaciens I-736.
Lorsque le volume du milieu de fermentation est important, on peut avantageusement l'irmoculer au moyen d'un milieu innoculum, ensemencé
par un milieu de préculture liquide ; ce dernier étant préalablement ensemencé lui-méme par une culture pure d'Agrobacterium tumefaciens I-736.
Selon le procédé de l'invention on peut utiliser en va~lL yu~
milieu innoculum, tout mi7~ieu employé classiquement à cet effet, et avantageusement un milieu de nature minérale. En tant que milieu de préculture on peut citer par exemple le milieu YM bioth DIFCO Ref.
07101 et de préférence un milieu préparé à partir des composés suivants - Soya - peptones 5 g/1 - Extrait de malt 3 g/1 - Extrait de levure 3 g/1 - Glucose ou saccharose 10 g/1 Le pH naturel de ce milieu est de 7 à 7,2 et n'est pas ajusté.
A titre de source organique de carbone constitutive du milieu de fermentation on peut citer des sucres tels que le glucose, le saccharose, les hydrolysats d'amidon, et éventuellement le lactose ou l'amidon natif, ainsi que les mélanges de ces sucres. Le glucose et le saccharose sont des sucres préférës. La concentration en source organique de carbone dans le milieu de fermentation peut être comprise entre 1 et 100 g/1 et de préférence entre 15 et 60 g/1.
A titre de source organique d'azote on peut citer la caséine et les caséinates, les hydrol.ysats de poisson, les farines de blé, de maïs ou de soja, les e~xtrait~~ de levure (levure de boulanger, levure de bière, levures lact:iques...) Les dry distillers solubles, les protéines de pomme de terre, le corn steap liquor (CSL) et les solubles de CSL qui sont obtenus par dilut~~on du CSL, suivie d'une élimination des particules solides par centrifugation, débourbage ou décantation. Le CSL, et tout spéc.~alemen~t les solubles de CSL, ont été jugés comme particulièrement avantageux dans le cadre de la présente invention.
La concentrav~ion en source organique azotée dans le milieu de fermentation peut <âtre comprise entre 3 et 80 g/1 et de préférence entre et 50 g/1.

i0. i3~0'~31 On peut citer à i:itre de sels minéraux que l'on peut éventuellement introduire dans le milieu de fermentation, les sulfates tels que les sulfate; de magnésium, de manganèse, de zinc, de fer, les carbonates tels que le c<rrbonate de calcium, les sels de calcium solubles, les phosphates tels que les phosphates de potassium, de sodium.
La concentration de chacun de ces sels minéraux dans le milieu de fermentation peut varier eni:re 0,01 et 5 g/1 et de préférence entre 0,05 et 2 g/1.
Le milieu dea fermentation peut également renfermer des oligoéléments tels que des i:races de sels de cobalt et/ou de molybdène, ainsi que des vitamines et des nucléotides.
La fermentation peut É~tre réalisée à des pressions comprises entre 1 et 4, bar à une température comprise entre 25 et 35°C, de préférence entre 28 et 32°C, dans des conditions aérobies submergées.
Le pH du milieu de fermentation peut étre compris entre 5 et 9 et de préférence entre fi et 8. Le pH peut être ajusté, selon le cas, avec une base telle que l.a soucie ou la potasse ou avec un acide tel que l'acide sulfurique, l'acide phosphorique, l'acide chlorhydrique ou l'acide nitrique. Le milieu de fermentation, placé par exemple, dans une cuve ou un récipient de fermentation, peut être avantageusement soumis à
une agitation.
Cette agitation peut être exercée par exemple au moyen d'un secoueur réciproque, d'un sfacoueur giratoire, d'un mobile d'agitation ou d'une colonne à bul:Les. Le temps de fermentation est habituellement supérieur à 30 heures, mai: est généralement compris entre 40 et 90 heures.
Les rendements de fermentation sont généralement supérieurs à 40 plus particulièrement compris entre 55-75 % et tout particulièrement compris entre 60 et 75 % en poids d'hétéropolysaccharide BM07 produit par rapport à la source de carbone mise en oeuvre.
L'hétéropolysaccharide BM07 peut être séparé du milieu de fermentation.
Pour ce f<üre le mo~ît de fermentation renfermant I'hét.éropolysacchari~~e BM07 peut être avantageusement chauffé à des températures comprises entre 80 et 120°C, pendant 10 à 60 minutes et de préférence entre 15 ~et 45 minutes.

13~0'~31 11.
Le moût soums.s au traitement thermique ci-dessus présente avantageusement un pH compris entre 6 et 8.
Cependant ce pH peut ~~tre ajusté si nécessaire, avec selon le cas, une base ou un acide..
Ces derniers peuvent É~tre choisis parmi les bases et les acides mentionnés ci-dessus utili:~és pour l'ajustement du pH du milieu de fermentation.
La récupération de l'hétéropolysaccharide BM07 du moût de fin de fermentation peut alors être réalisée par précipitation dudit hétéropolysaccharide au moyE~n d'un liquide organique miscible avec l'eau et dans lequel l'hétéropo:lysaccharide est insoluble ou pratiquement insoluble.
A titre de liquides organiques convenables selon la présente invention on peut cii=er l'acétone, les alcools tels que l'éthanol, le propanol, l'isopropanol, le butanol, le tertio-butanol.
L'isopropanol est plu: particulièrement préféré dans le cadre de la présente invention.
Le volume de l.Lquide organique utilisé est généralement 2 à 3 fois celui du volume de moût à tn~aiter.
La précipitation de :1'hétéropolysaccharide BM07 par un liquide organique peut également être réalisée en présence de sels tels que les sulfates, chlorures ou phosphates de sodium, de potassium, ou de calcium.
L'hétéropolysaccharide BM07 une fois précipité, peut ensuite être séparé du liquide or~~anique par filtration, centrifugation ou essorage.
Les fibres obtenues peuvent être déshydratées par exemple au moyen d'acétone ou d'un alcool te:l que l'éthanol, le propanol, l'isopropanol ou le tertio-butanol.
Le poids d'al<~ool nécessaire pour effectuer cette opération de déshydratation est ~~énèral~ement de 1 à 10 fois celui des fibres à
traiter.
Les fibres déshydratées peuvent subir de nouvelles opérations de filtration de centrifugation ou d'essorage.
Les fibres peuvent ensuite ëtre séchées, broyées et tamisées de façon à obtenir une ,.poudre d'hétéropolysaccharide BM07. Cette poudre est habituellement de co~,~leur crème-beige.

e~

Afin d'obtenir_ une poudre encore plus pure, il est possible de traiter soit le moût des fermentation, soit une solution aqueuse reccnstituée à partir de la poudre obtenue selon le procédé dé~:it ci-dessus, au .woyen d'une ou plusieurs enzymes.
A titre d'enzymes pouvant convenir à cet effet, on peut citer les protéases, les mutanases, les lipoprotéases, les cellulases et les cr~itinases.
La purification enzymatique peut étre associée ou remplacée par Ces p:océdés physiques de purification tels que les divers modes de lO filtration, de dialyse, ou par les différentes techniques de chromatographie.
Les raoùts de f~~rmenta~ion et les solutions aqueuses reconstit~~ées d'hétérogollsacchari~~e BMO"', ayant subi ou .ucn un .:aitement de pur_fication peuver:v étre concentrés. Lâ concentration peut ?tre avantageuse dans certains c~3s rotammPnt dans la !r~esu_-e où les coùts de 'ransport peuvent éW-e ainsi réduits_ ne plus, les solut_c..;~s cor_centrées peuvent ~tr~ t.lu~ rapidement mises en oeuvre que les poudres d'hétérooolysacchari<ie BM07.. La concentration peut Ftr? ~-éalisée par des t~chniq~.:2~ telles que ''évaporation, l'ultrafiltration, ou par diafiltration.
L'hétéropolysaccharide BM07 peut ètre appliqué avantageusement dans de nombreux: domaines :industriels où sont déjà utilisés d'autres polymères hydrosolub~.es_ Dans ces applicatiorls, l'hétéropolysaccharide BM07 est principalement employé en tant qu'adent épaississant, agent de suspension ou en tant qu'agent stabilisant de disE.~.ersions et ceci dans une large gamme de PH, en présence ou non der sels, de tensioactifs non-ioniques ou anioniques ou d'autres additif~_ Dans ce:~ applications on utilise généralement de 0,001 à 2% en poids, de préférence entre 0,1 et 1% en poids d'hétéropolysacclzarise BM07 par rapport au poids de la com-position qui le :renfer:me_ Ainsi, :L'hétéropolysaccharide 8M07 peut être employé:

1340'31 - 12a -dans l'industrie pétrolière par exemple dans les fluides de forage, en récupération assistëe du pétrole, dans les compositions ui;ilisé~ss pour la fracturation des forma-tions souterraines et: dans celles destinées au traitement des puits, - dans les compo:~itions céramiques, - dans l'industri.e alimentaire, notamment en tant qu'agent de suspension ou épaississant, - dans les peintures, .Les colles, les encres, - dans les cosmétig;ues, en particulier dans les shampooings, Les crèmes, les lotions et les pâtes dentifrices, - dans les compositions. destinées â l'agrochimie, notamment dans les "flowables" en tant qu'agent de suspension, - dans l'industrie papetière, notamment pour le couchage du papier, - dans les compo~>ition:~ lubrifiantes, - dans les nettoyants industriels destinés au traitement des surfaces mÉ~talliques, - en tant qu'agent stabilisant de dispersions aqueuses diverses comme les dispersions de charbon micronisé, - dans l'industrie textile, notamment dans les compositions pâteuses destinées à l'impression des motifs, - dans l'industrie des explosifs, - pour la préparation des bétons et des plâtres, notamment en vue de leur color<~tion, - dans les nettoyants ménagers ou industriels, notamment en tant qu'agent épaississant et en tant qu'agent stabilisant des particules abrasives. Tout particulièrement l'hétéropolysacharide BM07 peut être utilisé comme épaississant dans des compositions aqueuses acides contenant en solution aqueuse un acide organique ou minéral.

A titre d'acide organique, on peut citer des acides monvcarboxyliques tels l'acide formique, l'acide acétique, l'acide chloroacétique, l'acide lactique, l'acide ascorbique, l'acide tannique, des acides dicarboxyliques tels l'acide fumarique, l'acide malonique, l'acide succinique, l'acide glut:arique, l'acide itaconique, l'acide tartrique, des acides. tricarboxyliques comme l'acide citrique.
De préférence, on utilise l'hétérosacharide BM07 en tant qu'agent épaississant dans des compositions aqueuses acides contenant en solut:ion aqueuse un acide organique ayant une constante de dissociation pK â 25°C supérieure ou égale à 2 et/ou au moins un sel d''un acide organique ou minéral de pK
supérieur ou égal à 2 et: d'une base forte.
A titre d'acide minéral, on peut citer l'acide chlorhydrique, l'acide phosphorique, l'acide nitrique ou l'acide sulfurique.
Tous ces acides peuvent être utilisés seuls ou en mélange entre eux. Les proportions relatives d'acide et d'hétéro-polysaccharide peuvent varier dans une large mesure en fonction de facteurs tels que la nature propre de chacun de ces composés, la vii>cosité désirée et l'application spécifique choisie.
Généralement on utilise entre 1 et 4og d'acide, entre o,ool et 2~ d'hétéropolysaccharide BM07 et entre 55 et 98,99 d'eau.
Des quantités d'hétéropolysaccharide BM07 comprise entre 0,1 et 1~ sont toutefois préfërées.
...~;

1340'~3I
- 13a -Ces compositions peuvent être prêparées de toute manière souhaitable par mélange des différents composés dans l'eau.
I1 est préférable de dissoudre initialement l'hétéropolysaccharide EM07 dans l'eau puis d'ajouter le ou les acides.
,t 14.
Lesdites composition: peuvent éventuellement contenir divers autres ingrédients utilisés dans les formulations acides tels que des agents tension-actifs, des colorants, des détergents, des parfums, des bactéricides et des abrasif:5.
Lesdites compositions peuvent étre plus spécifiquement destinées au nettoyage des surîaces, a~u détartrage des surfaces en porcelaine et métallique et au décapage des surfaces métalliques.
D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaitront à la lecture des exemples et des figures 1 et 2 ci-aprés qui représentent l'évolution de la viscosité en fonction du gradient de vitesse, de solutions dans l'eau distillée, à respectivement, 0,1 et 0,2 % en poids d'hét~~ropolyaaccharide 8M07 et de gomme xanthane.
Exemple 1 : Procédé ~9e prép~3ration de l'hétéropolysaccharide BM07 sur un milieu minéral de production_ On fait fermenter par une souche Agrobacterium tumefaciens I-736 un milieu renfermant (en g/1) .
CSL (corn steap liqu~~r) 11 K ~ HP0 . 4 MgSO,; , "H~ 0 O, 5 Saccharose 25 Eau potable qsp 1 1 Ce milieu est fermenté par ladite souche à une température de 28°C, dans les conditions suivantes - Fermentation dans un erlenmeyer de 500 ml, contenant un volume utile de 100 ml.
Ce milieu est soumis à une agitation de 220 tours/mn au moyen d'un seceucur giratoire sous une amplitude de 5 cm.
- Fermentation en cuve de 10 1 contenant un volume utile de 6 1.
Le milieu est soumis à une agitation de 270 tours/mn obtenue au moyen de pales à carré évidé.
Le milieu est aéré sous un débit d'air de 500 1/h.
- Fermentation en cuve de 20 litres BIOLAFFITE ~ contenant un volume utile de 15 litres.
Le milieu est soumis à un.e agitation de 400 tours/mn obtenue au moyen de mobiles de type RUSHTON ~ .
Le milieu est aéré sous ~r. débit d'air de 825 1/h.

_ 1~44'~31 15.
Les résultats obtenus figurent dans le tableau I suivant TABLEAU I
Fin de fermentation Rendement Viscosit erlenmeyer 80 h 72 ~ 6 400 mPa.s cuve de 10 1 100 h 67 % 9 000 mPa.s cuve de 20 1 90 h 66 % 6 800 mPa.s Dans ce tableau I , la fin d~ fermentation correspond à la consommation totale ou quasi totale du saccharose et le rendement correspond au rapport en ~ entre ie poids d'hétéropolysaccharide BM07 obtenu sur le poids ce saccharose mis en oeuvre.
La viscosité es;t celles du moût de fin de fermentation, mesurée au moyen d'un viscosimètre Brookfield LVT ~ avec une aiguille cylindrique 4, â 30 touYS;~mir~.
Exemple 2 : Récupérat.ion de l'hétéropolysaccharide BM07 du moût de fermenta t: ion.
La récupération de l'hétéropolysaccharide a été effectuée à partir de 2 kg de moût obtenu par fermentation d'un milieu organique de production, contenu clans une cuve de 20 1, selon l'exemple 1.
Le moût est traité thermiquement à 90°C pendant 30 mn.
Au moât ainsi traité ~>ont ajoutés 2300 ml d'alcool isopropylique (IPA). La précipitatz.~~~ est effectuée en préserlce de 150 g de sulfate de sodium.
Les fibres issues de ~.a précipitation sont ensuite déshydratées 2 fois en présence de .200 ml d'IPA.
Les fibres sont: alor;> essorées, dilacérées et séchées dans une étuve â 85°C.
La matiëre sèche récoltée est broyée et tamisée.
Gr! obtient alors une poudre d'hétéropolysaccharide BM07 de couleur creme.

._ ~.340T~31 16.
Exem le 3 : Propriétés rhéologiques de l'hétéropolysaccharide BM07 dans l'eau distillée à pH7.
La viscosité et le seuil d'écoulement de solutions dans l'eau distillée à pH7, de l'hétéropolysaccharide BM07 à différentes concentrations, ont été testés.
Les essais ont été réalisés à partir d'une poudre d'hétéropolysaccharide BM07 telle qu'obtenue à l'exemple 2.
Des solutions à. 0,2 % et à 0,3 %, en poids d'hétéropolysaccharide BM07 sont préparées par addition dans l'eau distillée de ladite poudre d'hétéropolysaccharicle, suivie d'une agitation au moyen d'un agitateur type RAYNERI ~ à une vitessEe de 1 000 à 1 200 tours/mn, pendant 15 mn.
La mise en solution est c:emplète au bout de ces 15 mn ~3ans l'eau distillée.
Des solutions à 0,1 ~ en poids d'hëtéropolysaccharide sont obtenues par simple dilution àans l'eau distil_lëe des solutions à 0,2 précédentes.
Les essais sont réalisés à une température de 25°C, 24 heures après la préparation des solutions.
Des essais com~~aratif;s ont été réalisés dans les mémes conditions avec du RHODOPOL 23 ~ (gomme xanthane produits par la Société RHONE
POULENC).
Les mesures des valeurs des seuils d'écoulement et des viscosités des essais 1 à 4 ont été effectuées au moyen d'un viscosimètre L0W SHEAR
et au moyen d'un RHEOMAT 30 pour les mesures des essais 5 et 6.
Les résultats obtenus figurent dans le tableau II suivant ~.34t~~3I
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.. , Ce tableau montrE~ clairement que l'hétéropolysaccharide BM07 en solution dans l'eau distil7.ée est plus pseudoplastique que la gomme xanthane placée dans les mérnes conditions.
Une solution à 0,1 % en poids d'hétéropolysaccharide présente les mènes caractéristiques qu'une solution de gomme xanthane à 0,2 %.
Les figures 1 et ~) ci-après, illustrent l'évolution de 1a viscosité en fonction du gradient de vitesse, de solutions dans l'eau distillée à, re~~pective~ment, 0,1 et 0,2 % en poids d'hét~ropolysaccharicie BM07 et de gomme xanthane (RHODOPOL 23 O ). Les mesures des viscositÉ~s ont été effectuées dans les mêmes conditions que celïas décrites ci-dessus.
Exemple 4 : Propriétés rhéo:Logiques de l'hétéropolysaccharide BM07 dans l'eau de ville <3 pH 7 à ~2° HT.
Les essais ont été réalisés sur des solutions à v,l et 0,2 ~ en poids d'hétéropolysaccharide BM07 dans de l'eau de ville à pH 7, ceci dans les mêmes condiJ~ions que dans l'exemple 3.
On note cependant que la mise en solution de l'hétéropolysaccharic9e BM07 est encore plus facile dans l'eau distillëe que dans l'eau de vi.Lle.
Les résultats ~jes esaais ainsi que ceux des essais comparatifs réalisés dans les mènes conditions avec du RHODOPOL 23 O , figurent dans ie Tableau III suivant.
Les viscosités et les seuils d'écoulement ont été mesurés au moyen d'un viscosimètre LO'~7 SHEAR dans les essais 7 et 9 et avec un RHEOMAT 30 pour l'essai 8.

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w 13~0'~31 Exemple 5 : Influence du pH, de la température et du cisaillement sur les propriétés rhéologiques de l'hétéropolysaccharide BM07 L'influence du pH sur les propriëtês rhéologiques de 1 ' h~t.éropol;rsacc:harids~ BM07 a été eaarni.né sur des scl utiens à 0, 2 %
en poids dudit hétéropol;rsaccha;~ide BM07 telles que décrites dans l'exemple 3, mais; où le pH est sort de 1,7 (après addition d'une quantité
suffisante d'acide formique) soit de 11,8 (après addition d'une quantité
_.~ffisan'~e d~_ .~~~n~,~) .
Les essais ont été I'éa.:l.sés à une température ds ''?°~, 24 heures, 7 jours et 1 mn;s ~ipr~~s lc? I.n°~LVarati.on des ~~~olutions.
L'influence de l.a température a été examinée sur des solutions à
0,2 ~ en poids d'hét:éropolysaccharide BM07 telles que décrites dans l'exemple 3.
Les mesures ont été réalisées sur de telles solutions, soumises à
l!ne tettlp~?rature de 80"C pendent 1 heure et 24 heures.
Afin d'apprécier l'effet du cisaillement sur des solutions à 0,2 ô
en poids d'hét~ropolyç~acchari.de BM07 telles que décrites à l'exemple 4, *
on soumet ces solutions s. un cisaillement par un ULTRA TURRAY, 1ANKE-KUNKEL TP 18-20 à une vitesse maximale d'envi.ron ?,0000 tot:rs/mn pendant 5 minutes, ce~~i. juste après la préparation des solutions. Les mesures sont effectu é s 24 heures après cette opération.
na.~ ~.oS~lS COmj7~3Yatif°= sont donnés pour des solutions à 0,2 ~ en RI-IODOPOL 23 P (Société Rhône-Poulenr_), traitées dan, les mémes conditions.
Les mesut~es sont effectuées au moyen d'un viscosimètre LOW SHEAR.
Les _~~ésvlt.at> d~>s e4s~äis figurent au Tableau IV ci-dessous On pe~it constater à la lA~=ture de ce Tableau que la tenue des F~ropriétés rhéologiques de l'hétérepolysaccharide BM07, soumis notamment à l'influence d'un pH acide ou basique, est très bonne, et est tout à
fait comparable à la tenue dans l'eau distillée, ceci notamment sur une p~~riode de 1 mois.
* ( moque de catmmene ) 13~0'~31 - c:
c r, i o 0 o m o 0 0 0 0 0 0 0 0 ~ ~ o m o o c, o 0 0 ~r o 0 o c- o ~ ~ a) tW n ~ ~~ m ao c~ ~-, m r- ~r !n c~o o c-~ ~ ~ a:
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O ~ O O O E I E ~ ~ .c E O ~ O E .c a) 'a) +~ ~~ ur u~ w , m a. ua c>~ m ~ a co w x U
.: 'a t ' ~Q. I !r ~ c u~ E u~ ~ ~ ca 3' C7 ~ O <-s ~ N c~ V~ W ~ c~
:.y ~~ ~ 1s~ 1 -~ ~-, ; --i ~r-~ ~ --s .-i ,--s .-i i j !
L1 ~-i !
- ) P y~ __ _ .. 1'~40'l~1 Exemple 6 . Influence d'un milieu fortement ionique sur les propriétés rhéologiques de l'hétéropolysaccharide BM07 Les essais 18 à 23 ont été réalisés sur des solutions à 0,2 % en poids d'hétêropolysaccharide BM07 comportant 20 ~ de NaCl_ Ces solutions sent préparées à partir d'une solution mère à base d'eau distillée de l'hétéropolysaccharide BM07 tel qu'obtenu dans l'exemple 2 ; la solution mère est diluée par une solution NaCl jusqu'à
obtention des cancentrations en hétéropolysacrharide BM07 et en NaCi désirées.
Les essais ont été effectués 24 heures, 7 jours et 1 mois après la préparation des solutions, maintenues à 22°C.
Des essais comparatifs ont êté réalisés dans les mëmes conditions sur des solutions à 0,2 % en RHODOPOL 23O obtenues selon le même procédé. Les mesures des viscosités et des seuils d'écoulement ont été
effectuées avec un viscosimètre LOW SHEAR .
Les résultats des essais figurent dans le tableau V ci-dessous.

_ 1340'31 I r-i O O O O O O
1 0 0 0 IS~ O tn (n 00 O O tT (31Ol a) N c7 2i C

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In _ 13~0~31 -2ç-Les essais 24 ~~ 26 et 27 à 29 ont été réalisés sur des solutions à
0,3 % en poids d'héte~ropoly:~accharide BM07 préparées également dans les conditions données à l'exemple 3, par addition dudit hétéropolysaccharide dans dc~ l'eau distillée contenant 10 ~ en poids de 2,~de Na2S0, ou de NaCl. Lea essais ont été effectués 4 heures, 7 jours et 1 mois après la préparation des solutions, maintenues dans le cas des essais 24 à 26 à 22"C et dans le cas des essais 27 à 29 à 40°C. Les mesures des viscosii:és oni= été réalisées au moyen d'un rhéomètre BROOKFIELD L.V.T. à 60 tours/minute.
Les résultats des essais 24 à 26 et 27 à 29 figurent respectivement dans l.es tableaux VI et VII ci-dessous.
Propriétés rhéologiques de l'hétéropolysaccharide BM07 dans des solutions salines à 10 % et à 22°C
Viscosit (en Essai Nature du sel mPa.s) aprs 4 heures 7 jours 1 mois 24 CaCl~ 530 650 640 25 Naz 50., 560 680 640 26 NaCl 500 620 580 1~~0731 -25 "
Tableau VII
Propriétés rhéologiques de l'hétéropolysaccharide BM07 dans cies solutions salines à 10 % et à 40°C
Viscosit i el (en mPa.s) d aprs :
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t Essa ure 4 heures 7 jours 1 mois u g a 27 CaCl., 550 610 630 28 Na~ Sc)4 620 510 450 29 NaCl 590 460 -Exemple 7 Les essais 30 .st 31 montrent la bonne tenue â la température des solutions d'hétéropolysacch~aride BM07 comparativement à des solutions de SHELL-FLO S O .
Le SHELL-FLO S ~ est un hétéropolysaccharide developpé par la société SHELL et qui comporte des motifs dérivés du glucose, du galactose et des sels des acides pyruvique, acétique et succinique.

1340'31 Des solutions dans l'eau distillée à 0,3 % en poids en hétéropolysaccharide BM07 sont préparées dans les conditions décrites à
l'exemple 3.
De la mëme façon, on prépare des solutions à 0,3 % en SHELL-FLO S O.
Ces solutions :ont soumises à une température de 80°C pendant 30 minutes. Après 2 Heures de repos, les viscosités et les seuils d'écoulement des so7.utions traitées sont mesurés avec un rhéomètre Carrimed CS 50.
Les résultats figurent: dans le tableau VIII suivant Tableau VIII
Essai Solution 0,3 % en : Seuil Viscosit d'coulement (en mPa.s) (en mPa) 1 s -' 30 Htropolyaaccharude BM07 1080 2415 31 SHELL FLO :~ ~ 66 323 ~~~~,~~1 Exemple B
Utilisation de l''.étéropalysccharide BM07 dans des compositions détar t_rantes ;
on réalise une compo=~ition détartrante en introduisant dans un flacon - hétéropolysaccharic.e BM07 0,25 - eau 87,70 - acide formique i0 - nonylphénoiéthox~~? _ ( 12 OE: ) 2 - parfum et colorant CS,05 Le pH de cette compo=;ition est de 1,4.
La stabilité de cette composition est èvaluée en fonction de la température et du temps de ~>tockage, par mesure de sa viscosité au moyen d'un Rhéomat 30 dans une large gamme de gradient de vitesse (O,ls-1 à
100s-1) et d'un viscosimètre Brookfield LVT à 20 t/
Les mesures sont eff~ectuée~> à 20°C et les résultats obtenus figurent dans le Tableau IX suivant ~.340'~31 ro a~ ~

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2. The heteropolysaccharide BM07 shows good properties rheological in soil environment, and in particular in saline solutions base of CaCl ~, Na ~ SO, and NaCl.
More particularly, it has been found that solutions at 0.3% in weight of said heteropol.saccharide BM07 in a saline solution (the composition figure below), generally had viscosities at 2 hours between x: 000 and 3500 mPa.s, and more particularly between 2500 and 3000 mPa.s, the viscosities being measured with a Carrimed ~ rheometer at a speed gradient of 1 s- '; the solution saline with the following composition NaCl 91.71 g CaC12.2H ~ C 10.41 <~

Mg C1 ~, 10.12 q 6H ~ 0 BaCl ~, ZH ~ C0,113 g NaHCo ~ 0.195 g Distilled water> 1 On the other hand solui: ions at 0.2% by weight of heteropolysaccharide BM07 in solui: aqueous ions containing 20% NaCl present 24 hour viscosities between 1600 and 2400 mPa.s and preferably between 1700 and 2100 mPa.s, the viscosities being measured using a LOW SHEAR viscometer at a speed gradient 1 s- '.
3. 0.2% by weight aqueous solutions of heteropolysaccharide BM07, at pH 1.7 and at ~ '.5 ° C, have a viscosity at 24 hours understood between 1000 and 2500 mPa.s, more particularly between 1400 and 2000 mPa.s, the viscosities being measured using a LOW viscometer SHEAR, at a glass gradient of 1 s- '.
4. 0.2% by weight aqueous solutions of heteropolysaccharide BM07, at pH 11.8 and at 25 ° C, have a viscosity at 24 hours understood between 1000 and 2500 ml ~ as, more particularly between 1400 and 2000 mPa.s, the viscosities being measured using a LOW viscometer SHEAR, at a speed gradient of 1 s- '.

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-5. Solutions of heteropolysaccharide BM07 at 0.2% by weight in distilled water, subjected to a temperature of 80 ° C for 24 hours, generally have viscosities between 500 and 2500 mPa s and more particularly between 1000 and 2000 mPa s, the viscosities being measured using a LOW SHEAR viscometer, at a 1 s speed gradient.
6. Advantageously, aqueous solutions at 0.2 ~ in weight of said heteropolys.accharide at pH 7 and 25oC, have a viscosity at 24 hours of between 1000 and 2500 mPa.s, and more particularly between 1400 and 2000 mPa.s, the viscosities being measured using a LOW viscometer SHEAR, at a speed gradient of 1 s 1.
It was also found that the heteropolysaccharide BM07 has good suspension power. The power of suspension of the solutions of heteropoiysaccharide BM07 can be assessed by means of the following test:
a 100 ml MEGAL * test tube is completely filled (occupied volume of 130 ml .; by a solution at C, 1% by weight of heteropolysaccharide EM07 in distilled water. The density of the solution is then close to 1.
A polyamide 6,6 ball, with a diameter of 3 mm and a density from l? 5 is asked. the surface of the liquid, without ~ initial speed. The falling time of the ball is measured until it reaches the bottom of the test-tube, that is to say after a fall course of 23.5 cm. To to obtain an average time, this test is repeated several times. The weather m ~ rn d2 fall is generally greater than 2000 seconds, and more particularly is between 3000 and 15000 seconds.
for comparison, a solution of 0.1% by weight of gum hanthane presents, under the same conditions, a fall time included between about 60 and 350 seconds.
The present i: wention also relates to a method of preparation of the heteropolysaccharide BM07 as described above.
* (earmerce brand) 1340'31 - 8a -This process for the preparation of said heteropolysaccharide consists of the fermentation of a medium comprising at least one carbon source assimilated by one of its Agrobacterium tumefaciens T-736 strains recombinants or one of its mutants.
Besides said = assimilable carbon source, the middle of close. ~ tation pe ~~ t will contain at least one source of nitrogen, preferably a source of AA: ote organized and possibly one or several mineral salts.

. ~ 3 ~ 0, ~~ 1 9.
The medium is conventionally innoculated by the strain Agrobacterium tumefaciens I-736.
When the volume of the fermentation medium is large, it is possible to advantageously to erase it by means of an innoculum medium, seeded with a liquid preculture medium; the latter being previously seeded itself with a pure culture of Agrobacterium tumefaciens I-736.
According to the method of the invention can be used in va ~ lL yu ~
middle innoculum, all mi7 ~ ieu used conventionally for this purpose, and advantageously a medium of a mineral nature. As a medium of preculture, for example, the YM bioth DIFCO medium Ref.
07101 and preferably a medium prepared from the compounds following - Soy - peptones 5 g / 1 - Malt extract 3 g / 1 - Yeast extract 3 g / 1 - Glucose or sucrose 10 g / 1 The natural pH of this medium is from 7 to 7.2 and is not adjusted.
As an organic source of carbon constituting the medium of fermentation, sugars such as glucose, sucrose, starch hydrolysates, and optionally lactose or native starch, as well as mixtures of these sugars. Glucose and sucrose are preferred sugars. Source concentration organic carbon in the fermentation medium can be understood between 1 and 100 g / 1 and preferably between 15 and 60 g / 1.
Mention may be made, as organic source of nitrogen, of casein and caseinates, fish hydrolysates, wheat, corn flours or soy, the yeast extracts (baker's yeast, beer, lactic yeasts ...) Soluble dry distillers, proteins potato, corn steap liquor (CSL) and CSL solubles which are obtained by dilution ~~ on CSL, followed by elimination of solid particles by centrifugation, settling or decantation. The CSL, and all specs ~ alemen ~ solubles from CSL, have been found to be particularly advantageous in the context of the present invention.
The organic nitrogen source concentrav ~ ion in the medium of fermentation can <hearth between 3 and 80 g / 1 and preferably between and 50 g / 1.

i0. i3 ~ 0 '~ 31 Mention may be made of i: itre of mineral salts which may be optionally introduce sulfates into the fermentation medium such as sulphates; magnesium, manganese, zinc, iron, carbonates such as c <calcium carbonate, calcium salts soluble, phosphates such as potassium phosphates, sodium.
The concentration of each of these mineral salts in the medium of fermentation can vary between 0.01 and 5 g / 1 and preferably between 0.05 and 2 g / 1.
The fermentation medium may also contain trace elements such as i: races of cobalt and / or molybdenum salts, as well as vitamins and nucleotides.
Fermentation can be carried out at pressures between 1 and 4, bar at a temperature between 25 and 35 ° C, preferably between 28 and 32 ° C, under submerged aerobic conditions.
The pH of the fermentation medium can be between 5 and 9 and preferably between fi and 8. The pH can be adjusted, as appropriate, with a base such as marigold or potash or with an acid such as sulfuric acid, phosphoric acid, hydrochloric acid or nitric acid. The fermentation medium, for example placed in a fermentation tank or container, can advantageously be subjected to agitation.
This agitation can be exercised for example by means of a reciprocal shaker, gyratory shaker, stirring mobile or of a bulb column: The. Fermentation time is usually more than 30 hours, May: is generally between 40 and 90 hours.
Fermentation yields are generally over 40 more particularly between 55-75% and very particularly between 60 and 75% by weight of heteropolysaccharide BM07 produced with respect to the carbon source used.
The heteropolysaccharide BM07 can be separated from the fermentation.
For this f <üre the fermentation process containing I'hét.éropolysacchari ~~ e BM07 can be advantageously heated to temperatures between 80 and 120 ° C, for 10 to 60 minutes and from preferably between 15 ~ and 45 minutes.

13 ~ 0 '~ 31 11.
The must subjected to the heat treatment above presents advantageously a pH of between 6 and 8.
However this pH can ~~ be adjusted if necessary, with depending on the case, a base or an acid ..
The latter can be chosen from bases and acids mentioned above useful for adjusting the pH of the fermentation.
The recovery of the heteropolysaccharide BM07 from the end of must fermentation can then be carried out by precipitation of said heteropolysaccharide by means of an organic liquid miscible with water and in which the heteropo: lysaccharide is insoluble or practically insoluble.
As suitable organic liquids according to the present invention we can cii = er acetone, alcohols such as ethanol, propanol, isopropanol, butanol, tert-butanol.
Isopropanol is higher: particularly preferred in the context of the present invention.
The volume of the organic liquid used is generally 2 to 3 times that of the volume of must to tn ~ aiter.
Precipitation of: the heteropolysaccharide BM07 by a liquid organic can also be carried out in the presence of salts such as sulfates, chlorides or phosphates of sodium, potassium, or calcium.
The heteropolysaccharide BM07 once precipitated, can then be separated from the liquid gold ~~ anique by filtration, centrifugation or spinning.
The fibers obtained can be dehydrated for example by means of acetone or an alcohol te: l as ethanol, propanol, isopropanol or tertiary butanol.
The weight of al <~ ool necessary to perform this operation dehydration is ~~ enèral ~ ement from 1 to 10 times that of fibers to treat.
Dehydrated fibers may undergo further processing centrifugation or spin filtration.
The fibers can then be dried, crushed and sieved so as to obtain a BM07 heteropolysaccharide powder. This powder is usually co ~, ~ their cream-beige.

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In order to obtain an even purer powder, it is possible to treat either the fermentation must or an aqueous solution reconstituted from the powder obtained according to the dice process: it above, using one or more enzymes.
As enzymes which may be suitable for this purpose, mention may be made of proteases, mutanases, lipoproteases, cellulases and cr ~ itinases.
Enzyme purification can be combined or replaced by These physical purification processes such as the various modes of lO filtration, dialysis, or by different techniques of chromatography.
Fermentation rations and reconstituted aqueous solutions of heterogollsacchari ~~ e BMO "', having undergone or.
pur_fication peuver: v be concentrated. Concentration can be advantageous in some c ~ 3s rotammPnt in the! r ~ esu_-e where the costs of 'ransport can éW-e thus reduced_ no longer, the solut_c ..; ~ s cor_centrées can ~ very ~ t.lu ~ quickly implemented as powders heterooolysacchari <ie BM07 .. The concentration can Ftr? ~ - produced by t ~ chniq ~.: 2 ~ such as '' evaporation, ultrafiltration, or by diafiltration.
The heteropolysaccharide BM07 can be applied advantageously in many: fields: industrial where others are already used hydrosolub polymers ~ .es_ In these applications, the heteropolysaccharide BM07 is mainly used as a thickening agent, suspending agent or as as a stabilizing agent for disE. ~ .ersions and this in a wide range of PH, in the presence or absence of salts, of nonionic or anionic surfactants or other additive ~ _ In this: ~ applications we generally use 0.001 to 2% by weight, preferably between 0.1 and 1% by weight BM07 heteropolysacclzarise relative to the weight of the compound position which: contain: me_ Thus: The heteropolysaccharide 8M07 can be used:

1340'31 - 12a -in the petroleum industry for example in fluids drilling, in enhanced oil recovery, in compositions ui; ilisé ~ ss for the fracturing of forma-underground and: in those intended for treatment Wells, - in the compositions: ~ ceramic itions, - in the food industry, in particular as an agent suspension or thickener, - in paints, glues, inks, - in cosmetics, in particular in shampoos, creams, lotions and pastes toothpaste, - in the compositions. intended for agrochemicals, in particular in the flowables as a suspending agent, - in the paper industry, in particular for the coating of paper, - in the compositions ~> ition: ~ lubricants, - in industrial cleaners intended for treatment metal surfaces, - as stabilizing agent for aqueous dispersions various such as micronized carbon dispersions, - in the textile industry, especially in compositions pastes intended for printing patterns, - in the explosives industry, - for the preparation of concrete and plaster, in particular in view of their color <~ tion, - in household or industrial cleaners, in particular in as a thickening agent and as an agent stabilizing abrasive particles. All particularly the heteropolysacharide BM07 can be used as a thickener in aqueous compositions acids containing an organic acid in aqueous solution or mineral.

As organic acid, mention may be made of acids monvcarboxyliques such as formic acid, acetic acid, chloroacetic acid, lactic acid, acid ascorbic, tannic acid, dicarboxylic acids such as fumaric acid, malonic acid, acid succinic, glut acid: aric, itaconic acid, acid tartaric, acids. tricarboxylic like acid citric.
Preferably, the heterosacharide BM07 is used as as a thickening agent in acidic aqueous compositions containing in solut: aqueous ion an organic acid having a dissociation constant pK at 25 ° C greater than or equal to 2 and / or at least one salt of an organic or inorganic acid of pK
greater than or equal to 2 and: of a strong base.
Mention may be made, as mineral acid, of acid hydrochloric acid, phosphoric acid, nitric acid or sulfuric acid.
All these acids can be used alone or as a mixture between them. The relative proportions of acid and hetero-polysaccharide can vary to a large extent in depending on factors such as the specific nature of each of these compounds, the desired viability and the application specific chosen.
Generally one uses between 1 and 4og of acid, between o, ool and 2 ~ of heteropolysaccharide BM07 and between 55 and 98.99 of water.
Amounts of heteropolysaccharide BM07 between 0.1 and 1 ~ are however preferred.
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1340 '~ 3I
- 13a -These compositions can be prepared anyway desirable by mixing the various compounds in water.
It is best to dissolve initially the heteropolysaccharide EM07 in water then add the or acids.
, t 14.
Said composition: may optionally contain various other ingredients used in acid formulations such as agents tension-active, dyes, detergents, perfumes, bactericides and abrasives: 5.
Said compositions can be more specifically intended for cleaning of surfaces, a ~ u descaling of porcelain surfaces and metal and pickling metal surfaces.
Other characteristics and advantages of the invention will appear on reading the examples and Figures 1 and 2 below which represent the change in viscosity as a function of the gradient speed, of solutions in distilled water, at respectively 0.1 and 0.2% by weight of hetero ~~ ropolyaaccharide 8M07 and xanthan gum.
Example 1: Process ~ 9th prep ~ 3ration of the heteropolysaccharide BM07 on a mineral production environment_ We ferment with an Agrobacterium tumefaciens I-736 strain a medium containing (in g / 1).
CSL (corn steap liqu ~~ r) 11 K ~ HP0. 4 MgSO ,; , "H ~ 0 O, 5 Sucrose 25 Drinking water qs 1 1 This medium is fermented by said strain at a temperature of 28 ° C, under the following conditions - Fermentation in a 500 ml Erlenmeyer flask, containing a useful volume 100 ml.
This medium is subjected to agitation of 220 revolutions / min by means of a seceucur gyratory under an amplitude of 5 cm.
- Fermentation in tanks of 10 1 containing a useful volume of 6 1.
The medium is subjected to agitation of 270 revolutions / min obtained by means of hollow square blades.
The medium is aerated under an air flow of 500 l / h.
- Fermentation in 20 liter BIOLAFFITE vats containing a volume useful capacity of 15 liters.
The medium is subjected to a stirring of 400 rpm obtained by means RUSHTON ~ type mobiles.
The medium is aerated under ~ r. air flow of 825 1 / h.

_ 1 ~ 44 '~ 31 15.
The results obtained are shown in Table I below TABLE I
End of fermentation Yield Viscosit Erlenmeyer 80 h 72 ~ 6,400 mPa.s tank of 10 1 100 h 67% 9000 mPa.s tank of 20 1 90 h 66% 6,800 mPa.s In this table I, the end of fermentation corresponds to the total or almost total consumption of sucrose and yield corresponds to the ratio in ~ between the weight of heteropolysaccharide BM07 obtained by weight, this sucrose used.
The viscosity is that of the wort at the end of fermentation, measured at using a Brookfield LVT ~ viscometer with a cylindrical needle 4, â 30 touYS; ~ mir ~.
Example 2: Recovery of the heteropolysaccharide BM07 from the must fermented: ion.
The recovery of the heteropolysaccharide was carried out from of 2 kg of must obtained by fermentation of an organic medium of production, content in a 20-liter tank, according to Example 1.
The must is heat treated at 90 ° C for 30 min.
To the moât thus treated ~> added 2300 ml of isopropyl alcohol (IPA). The precipitatz. ~~~ is carried out as a pre-rinse of 150 g of sodium.
The fibers from ~ .a precipitation are then dehydrated 2 times in the presence of .200 ml of IPA.
The fibers are: alor;> wrung, shredded and dried in a oven at 85 ° C.
The dry matter collected is crushed and sieved.
Gr! then obtains a powder of heteropolysaccharide BM07 of color cream.

._ ~ .340T ~ 31 16.
Example 3: Rheological properties of the heteropolysaccharide BM07 in distilled water at pH7.
The viscosity and the flow threshold of solutions in water distilled at pH7, from heteropolysaccharide BM07 to different concentrations, have been tested.
The tests were carried out using a powder of heteropolysaccharide BM07 as obtained in Example 2.
Solutions to. 0.2% and 0.3%, by weight of heteropolysaccharide BM07 are prepared by adding distilled water to said powder heteropolysaccharicle, followed by agitation with an agitator RAYNERI type ~ at a speed of 1,000 to 1,200 rpm, for 15 minutes.
The solution is c: filled after these 15 min ~ 3 years with water distilled.
Solutions containing 0.1 ~ by weight of heteropolysaccharide are obtained by simple dilution with distil_lëe water solutions to 0.2 previous.
The tests are carried out at a temperature of 25 ° C, 24 hours after preparing the solutions.
Com ~~ arative tests; s were carried out under the same conditions with RHODOPOL 23 ~ (xanthan gum produced by the company RHONE
POULENC).
Measurements of values of flow thresholds and viscosities tests 1 to 4 were carried out using an L0W SHEAR viscometer and by means of a RHEOMAT 30 for the measurements of tests 5 and 6.
The results obtained are shown in Table II below ~ .34t ~~ 3I
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.., This table clearly shows that the heteropolysaccharide BM07 in solution in distilled water is more pseudoplastic than gum xanthan placed in the same conditions.
A 0.1% by weight solution of heteropolysaccharide exhibits the same characteristics as a 0.2% xanthan gum solution.
Figures 1 and ~) below, illustrate the evolution of 1a viscosity as a function of the speed gradient, of solutions in water distilled at, re ~~ pective ~ ment, 0.1 and 0.2% by weight of heteropolysaccharicia BM07 and of xanthan gum (RHODOPOL 23 O). The viscosity measurements were carried out under the same conditions as those described above.
EXAMPLE 4 Rheo Properties: Logics of the Heteropolysaccharide BM07 in city water <3 pH 7 at ~ 2 ° HT.
The tests were carried out on solutions at v, l and 0.2 ~ in weight of heteropolysaccharide BM07 in tap water at pH 7, this in the same condiJ ~ ions as in Example 3.
However, it should be noted that the dissolution of the heteropolysaccharic9e BM07 is even easier in distilled water only in the water of life.
The results ~ esaais as well as those of the comparative tests carried out under the same conditions with RHODOPOL 23 O, appear in ie Table III below.
Viscosities and flow thresholds were measured using of a LO '~ 7 SHEAR viscometer in tests 7 and 9 and with a RHEOMAT 30 for test 8.

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w 13 ~ 0 '~ 31 Example 5: Influence of pH, temperature and shear on the rheological properties of the heteropolysaccharide BM07 The influence of pH on the rheological properties of 1 'h ~ t.éropol; rsacc: harids ~ BM07 was eaarni.né on scl utiens at 0, 2%
in weight of said heteropol; rsaccha; ~ ide BM07 as described in the example 3, but; where the pH is out of 1.7 (after adding a quantity sufficient formic acid) or 11.8 (after adding a quantity _. ~ ffisan '~ ed ~ _. ~~~ n ~, ~).
The tests were carried out at a temperature of ``? ° ~, 24 hours, 7 days and 1 min; s ~ ipr ~~ s lc? In ° ~ LVarati.on of ~~~ olutions.
The influence of temperature was examined on solutions to 0.2 ~ by weight of heter: eropolysaccharide BM07 as described in Example 3.
The measurements were carried out on such solutions, subject to The 80 "C temperature does not exceed 1 hour and 24 hours.
In order to appreciate the effect of shearing on solutions at 0.2 ô
by weight of heter ~ ropolyç ~ acchari.de BM07 as described in Example 4, *
we submit these solutions s. shearing by an ULTRA TURRAY, 1ANKE-KUNKEL TP 18-20 at a maximum speed of approx. Brown?, 0000 tot: rs / mn for 5 minutes, this ~~ i. just after preparing the solutions. The measurements are made 24 hours after this operation.
na. ~ ~ .oS ~ lS COmj7 ~ 3Yatif ° = are given for solutions at 0.2 ~ in RI-IODOPOL 23 P (Société Rhône-Poulenr_), treated in the same conditions.
Measurements are made using a LOW SHEAR viscometer.
The _ ~~ ésvlt.at> d ~> s e4s ~ äis appear in Table IV below We pe ~ it to note at lA ~ = ture of this Table that the holding of F ~ rheological properties of the heteropolysaccharide BM07, subject in particular to the influence of an acidic or basic pH, is very good, and is quite comparable to resistance in distilled water, especially on a 1 month period.
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-) P y ~ __ _ .. 1 '~ 40'l ~ 1 Example 6. Influence of a strongly ionic medium on the properties rheological of the heteropolysaccharide BM07 Tests 18 to 23 were carried out on 0.2% solutions in weight of heteropolysaccharide BM07 comprising 20 ~ NaCl_ These solutions are prepared from a mother-based solution distilled water of the heteropolysaccharide BM07 as obtained in Example 2; the stock solution is diluted with NaCl solution until obtaining of the carcentrations in heteropolysacrharide BM07 and in NaCi desired.
The tests were carried out 24 hours, 7 days and 1 month after the preparation of the solutions, maintained at 22 ° C.
Comparative tests were carried out under the same conditions on 0.2% RHODOPOL 23O solutions obtained according to the same process. The viscosity and flow threshold measurements were performed with a LOW SHEAR viscometer.
The results of the tests are shown in Table V below.

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In _ 13 ~ 0 ~ 31 -2ç-Tests 24 ~~ 26 and 27 to 29 were carried out on solutions with 0.3% by weight of host ~ ropoly: ~ accharide BM07 also prepared in conditions given in Example 3, by adding said heteropolysaccharide in dc ~ distilled water containing 10 ~ by weight of 2, ~ Na2SO, or NaCl. The tests were carried out 4 hours, 7 days and 1 month after the preparation of the solutions, maintained in the case of tests 24 to 26 to 22 "C and in the case of tests 27 to 29 to 40 ° C.
viscosii measurements: és oni = were performed using a rheometer BROOKFIELD LVT at 60 rpm.
The results of tests 24 to 26 and 27 to 29 are shown respectively in Tables VI and VII below.
Rheological properties of the heteropolysaccharide BM07 in 10% saline solutions at 22 ° C
Viscosit (in Salt Nature Test mPa.s) after 4 hours 7 days 1 month 24 CaCl ~ 530 650 640 25 Naz 50., 560 680 640 26 NaCl 500 620 580 1 ~~ 0731 -25 "
Table VII
Rheological properties of the heteropolysaccharide BM07 in 10% saline solutions at 40 ° C
Viscosity i el (in mPa.s) from after :
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SHELL-FLO S ~ is a heteropolysaccharide developed by SHELL and which includes units derived from glucose, galactose and salts of pyruvic, acetic and succinic acids.

1340'31 0.3% by weight solutions in distilled water heteropolysaccharide BM07 are prepared under the conditions described in Example 3.
In the same way, 0.3% solutions are prepared in SHELL-FLO S O.
These solutions: subjected to a temperature of 80 ° C for 30 minutes. After 2 hours of rest, viscosities and thresholds of flow of treated solutions are measured with a rheometer Carrimed CS 50.
The results appear: in the following table VIII
Table VIII
0.3% Solution Test in: Viscosit Threshold flow (in mPa.s) (in mPa) 1 s - ' 30 Htropolyaaccharude BM07 1080 2415 31 SHELL FLO: ~ ~ 66,323 ~~~~, ~~ 1 Example B
Use of the etropalysccharide BM07 in compositions detar t_rantes;
we realize a compo = descaling ition by introducing into a bottle - heteropolysaccharic.e BM07 0.25 - water 87.70 - formic acid i0 - nonylphenoiethox ~~? _ (12 OE:) 2 - perfume and dye CS, 05 The pH of this composition is 1.4.
The stability of this composition is evaluated as a function of the temperature and time of ~> tockage, by measuring its viscosity by means of a Rheomat 30 in a wide range of speed gradient (O, ls-1 to 100s-1) and a Brookfield LVT viscometer at 20 t /
The measurements are carried out ~> at 20 ° C. and the results obtained appear in the following Table IX

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Claims

1. BM07 heteropolysaccharide characterized in that it is obtained by fermentation of a medium comprising at least one source of carbon assimilable by an Agrobacterium strain tumefaciens I-736, one of its recombinants, or one of its mutants.

2. BM07 heteropolysaccharide according to claim 1, characterized in that its intrinsic viscosity is understood between 30 and 250 dl / g.

3. BM07 heteropolysaccharide according to claim 1, characterized in that its intrinsic viscosity is understood between 140 and 250 dl / g.

4. BM07 heteropolysaccharide according to claim 1, characterized in that its intrinsic viscosity is understood between 150 and 240 dl / g.

5. BM07 heteropolysaccharide according to claim 1, 2 or 3, characterized in that solutions at 0.1% by weight of said heteropolysaccharide BM07 in distilled water at 25 ° C
have viscosities at 24 hours greater than 350 mPa ~ s, the viscosities being measured by means of a LOW SHEAR viscometer with a speed gradient of 1 s-1.

6. BM07 heteropolysaccharide according to claim 4, characterized in that 0.1% by weight solutions of said heteropolysaccharide BM07 in distilled water at 25 ° C

have viscosities at 24 hours of between 400 and 700 mpa.s, the viscosities being measured using a viscometer of marks LOW SHEAR at a speed gradient of 1 s -1.

7. BM07 heteropolysaccharide according to claim 1, 2, 3 or 4, characterized in that 0.2% solutions in weight of said BM07 heteropolysaccharide in solutions aqueous at 20% by weight of NaCl, have viscosities at 24 hours between 1600 and 2400 mPa.s, the viscosities being measured using a viscometer of marks LOW SHEAR at a speed gradient of 1 s -1.

8. BM07 heteropolysaccharide according to claim 6, characterized in that 0.2% by weight solutions of said heteropolysaccharide BM07 in 20% aqueous solutions by weight of NaCl, have viscosities at 24 hours between 1700 and 2100 mPa.s, the viscosities being measured using a LOW SHEAR viscometer, a speed gradient of 1 s -1.

9. BM07 heteropolysaccharide according to claim 1, 2, 3, 4 or 6, characterized in that aqueous solutions at 0.2% by weight of said heteropolysaccharide at pH 7 and 25 ° C, have a viscosity at 24 hours of between 1000 and 2500 mPa.s, the viscosities being measured using a viscometer LOW SHEAR brand, at a speed gradient of 1 s -1.

10. BM07 heteropolysaccharide according to claim 8, characterized in that 0.2% by weight aqueous solutions said heteropolysaccharide at pH 7 and 25 ° C, have a viscosity at 24 hours between 1400 and 2000 mPa.s, the viscosities being measured using a viscometer of marks LOW SHEAR at a speed gradient of 1 s -1.

11. BM07 heteropolysaccharide according to claim 1, 2, 3, 4, 6 or 8, characterized in that solutions 0.2% by weight of said heteropolysaccharide, and of which the pH is 1.7 and the temperature 25 ° C, have a viscosity at 24 hours between 1000 and 2500 mPa.s, the viscosities being measured using a viscometer of mark LOW SHEAR, at a speed gradient of 1 s -1.

12. BM07 heteropolysaccharide according to claim 10, characterized in that 0.2% by weight aqueous solutions of said heteropolysaccharide, and whose pH is 1.7 and the temperature of 25 ° C, have a viscosity at 24 hours between 1400 and 2000 mPa.s, the viscosities being measured using a LOW SHEAR viscometer, a speed gradient of 1 s -1.

13. BM07 heteropolysaccharide according to claim 1, 2, 3, 4, 6, 8 or 10, characterized in that solutions 0.2% by weight of said heteropolysaccharide, and of which the pH is 11.8 and the temperature 25 ° C, have a viscosity at 24 hours between 1000 and 2500 mPa.s, the viscosities being measured using a viscometer of mark LOW SHEAR, at a speed gradient of 1 s -1.

14. BM07 heteropolysaccharide according to claim 12, characterized in that 0.2% by weight aqueous solutions of said heteropolysaccharide, and whose pH is 11.8 and the temperature of 2.5 ° C, have a viscosity at 24 hours between 1400 and 2000 mPa.s, the viscosities being measured using a LOW SHEAR viscometer, a speed gradient of 1 s-1.

15. BM07 heteropolysaccharide according to claim 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10 or 12, characterized in that solutions at 0.2% by weight of said heteropolysaccharide in water distilled, subjected to a temperature of 80 ° C for 24 hours, have viscosities at 24 hours inclusive between 500 and 2500 mPa.s, the viscosities being measured at using a LOW SHEAR viscometer, at a gradient speed 1 s-1.

16. BM07 heteropolysaccharide according to claim 14, characterized in that '0.2% by weight solutions of said heteropolysaccharide in distilled water, subjected to temperature of 80 ° C for 24 hours, have viscosities at 24 hours, between 1000 and 2000 mPa.s, the viscosities being measured using a viscometer of mark LOW SHEAR, at a speed gradient of 1 s-1.

17. BM07 heteropolysaccharide according to claim 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12 or 14, characterized in that it has a molecular mass of between 6 × 10 6 and 10X10 6.

18. The BM07 heteropolysaccharide according to claim 16, characterized in that it has a molecular weight between 6.5X10 6 and 9.5X10 6.

19. BM07 heteropolysaccharide according to claim 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12 or 16, characterized in that it contains motifs derived from glucose, galactose and pyruvic, succinic and acetic acids or salts of these acids.

20. Heteropolysaccharide BM07 according to claim 18, characterized in that it includes patterns derived from glucose, galactose and pyruvic, succinic and acetic acid or salts of these acids.

21. Heteropolysaccharide BM07 according to claim 19, characterized in that it includes patterns derived from glucose, galactose and pyruvic, succinic and acetic acid or salts of these acids in proportions molars, respectively of 5-8 / 1-2 / 0.5-2 / 0.5-2 / 0.05-2.

22. BM07 heteropolysaccharide according to claim 20, characterized in that it includes patterns derived from glucose, galactose and pyruvic, succinic and acetic acid or salts of these acids in proportions molars, respectively of 5-8 / 1-2 / 0.5-2 / 0.5-2 / 0.05-2.

23. BM07 heteropolysaccharide according to claim 22, characterized in that said molar proportions are respectively 6-7.5 / 1-1.5 / 0.5-1 / 0.5-1 / 0.05-0.2.

24. BM07 heteropolysaccharide according to claim 23, characterized in that said molar proportions are respectively 7/1 / 0.5-1 / 0.5-1 / 0.05-0.1.

25. BM07 heteropolysaccharide according to claim 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 18, 20, 21, 22 or 23, characterized in that said pyruvic, succinic and acetic acids are in the form of salts.

26. BM07 heteropolysaccharide according to claim 24, characterized in that said pyruvic, succinic acids and acetic are in the form of salts.

27. BM07 heteropolysaccharide according to claim 25, characterized in that said acids are present under form of sodium, potassium, calcium or ammonium.

28. The BM07 heteropolysaccharide according to claim 26, characterized in that said acids are present under form of sodium, potassium, calcium or ammonium.

29. Process for the preparation of a heteropolysaccharide BM07 as defined in claim 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 18, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 27 or 28, characterized in what one proceeds to the fermentation of a medium comprising at least one carbon source assimilable by a strain of Agrobacterium tumefaciens I-736, one of its mutants, or a of its recombinants.

30. Method according to claim 29, characterized in that that said assimilable carbon source is glucose, sucrose or a starch hydrolyzate.

31. Method according to claim 29, characterized in that that the concentration of assimilable carbon source present in the fermentation medium is between 1 and 100 g / l.

32. Method according to claim 30, characterized in that that the concentration of assimilable carbon source present in the fermentation medium is between 15 and 60 g / 1.

33. Method according to claim 29, characterized in that that the fermentation medium includes at least one source organic nitrogen.

34. Method according to claim 33, characterized in that that the source of organic nitrogen can be casein and caseinates, wheat, corn or soy flour, yeast extracts, soluble dry distillers, potato protein, corn steep liquor and soluble corn steep liquor.

35. Process according to claim, 34, characterized in that that the source of organic nitrogen is corn steep liquor or the solubles of the corn steep liquor.

36. Method according to claim 33, 34 or 35, characterized in that the nitrogen source concentration organic in the fermentation medium is between 3 and 80 g / 1.

37. Method according to claim 33, 34 or 35, characterized in that the fermentation medium comprises at minus a mineral salt.

38. Method according to claim 36, characterized in that that the fermentation medium comprises at least one salt mineral.

39. Method according to claim 37, characterized in that that the mineral salt is a sulfate or a carbonate.

40. Method according to claim 38, characterized in that that the mineral salt is a sulfate or a carbonate.

41. Method according to claim 39 or 40, characterized in that the mineral salt concentration is between 0.01 and 5 g / 1.

42. Method according to claim 29, characterized in that that it is produced at pressures between 1 and 4 bar, at temperatures between 25 and 35 ° C in submerged aerobic conditions.

43. Method according to claim 29, characterized in that that the pH of the fermentation medium is between 5 and 9.

44. Method according to claim 29, characterized in that that the pH of the fermentation medium is between 6 and 8.

45. Method according to claim 29, characterized in that that the fermentation yields are 40 to 75% by weight of heteropolysaccharide BM07 produced relative to the source of carbon implemented.

46. Method according to claim 29, characterized in that that the heteropolysaccharide BM07 is separated from a must obtained following fermentation in the following stages:

- the fermentation must is heated to between 80 and 120 ° C
for 10 to 60 minutes, - said heteropolysaccharide BM07 is precipitated by means of a organic liquid miscible with water, - the heteropolysaccharide BM07 is separated from the organic liquid by filtration, centrifugation or spinning.

47. The method of claim. 46, characterized in that said organic liquid is ethanol, propanol, isopropanol, butanol, tert-butanol.

48. Method according to claim 46 or 47, characterized in that once the heteropolysaccharide BM07 is separated from the must of fermentation, it is dehydrated, dried, crushed and sieved.

49. Application of a heteropolysaccharide BM07 such as defined in claim 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 18, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 27 or 28, as an agent thickening.

50. Application of a heteropolysaccharide BM07 such as defined in claim 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 18, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 27 or 28, as a suspension.

51. Application of a heteropolysaccharide BM07 such as defined in claim 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 18, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 27 or 28, in industries petroleum, agrochemical, food, cosmetic, paper, textiles, explosives as well as in ceramic and lubricating compositions, in paints, glues, inks, concretes, plasters, household or industrial cleaners and as an agent stabilizer of aqueous dispersions.

52. Application of a heteropolysaccharide BM07 such as defined in claim 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 18, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 27 or 28, as an agent thickener in acidic aqueous compositions containing in aqueous solution an organic acid having a constant dissociation pk at 25 ° C greater than or equal to 2 and / or minus a salt of an organic or mineral acid with a higher pk or equal to 2 and a strong base.

53. Application according to claim 52, characterized in that said acid is formic acid, acid acetic, citric acid or tannic acid.

54. Application according to claim 52, characterized in that said compositions are intended for cleaning surfaces, descaling porcelain surfaces and pickling of metal surfaces.

55. Application according to claim 53, characterized in that said compositions are intended for cleaning surfaces, descaling porcelain surfaces and pickling of metal surfaces.