BRPI1103387B1

BRPI1103387B1 - PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR THE TREATMENT OF ARTERIAL HYPERTENSION BASED ON THE CO-ADMINISTRATION OF ANTI-HYPERSTENSIVES AND ANGIOTENSIN (1-7) OR OTHER MAS RECEPTOR AGONIST

Info

Publication number: BRPI1103387B1
Application number: BRPI1103387-8A
Authority: BR
Inventors: Robson Augusto Souza Dos Santos; Rubén Dario Sinisterra Millán; Frédéric Jean Georges Frézard; Maria José Campagnole Dos Santos; Cynthia Fernandes Ferreira Santos; Rodrigo Araújo Fraga da Silva; Daniel CAMPOS VILLELA
Original assignee: Universidade Federal De Minas Gerais
Priority date: 2011-07-21
Filing date: 2011-07-21
Publication date: 2022-04-19
Also published as: WO2013010241A1; BRPI1103387A2

Abstract

Composição Farmacêutica para tratamento de hipertensão arterial baseada na co-administração de anti- hipertensivos e angiotensina (1-7) ou outro agonista do receptor Mas A presente invenção descreve uma composição capaz de aumentar ou prolongar a atividade de fármacos anti-hipertensivos em mamíferos, particularmente em humanos, pela co- administração do heptapeptídeo angiotensina (1-7) ou outro agonista do receptor Mas.Pharmaceutical Composition for the treatment of arterial hypertension based on the co-administration of antihypertensive drugs and angiotensin (1-7) or another Mas receptor agonist The present invention describes a composition capable of increasing or prolonging the activity of antihypertensive drugs in mammals, particularly in humans, by co-administration of the heptapeptide angiotensin (1-7) or another Mas receptor agonist.

Description

A presente invenção descreve uma composição capaz de aumentar ou prolongar a atividade de fármacos anti-hipertensivos em mamíferos, particularmente em humanos, pela co-administração do heptapeptídeo angiotensina (1-7) ou outro agonista do receptor Mas.The present invention describes a composition capable of increasing or prolonging the activity of antihypertensive drugs in mammals, particularly in humans, by co-administration of the heptapeptide angiotensin (1-7) or another Mas receptor agonist.

A hipertensão, popularmente denominada “pressão arterial alta” ou HTN, é um condição médica onde a pressão sanguínea está cronicamente elevada. A hipertensão pode ser classificada como essencial (primária) ou secundária. A hipertensão essencial indica que não há nenhuma causa médica específica que explique a condição do paciente. A hipertensão secundária indica que a pressão arterial alta é resultante de (ou seja, secundária a) uma outra condição, como doença renal ou certos tumores (especialmente da glândula adrenal). A hipertensão essencial geralmente associa-se a outros fatores de risco cardiovascular, como o envelhecimento, excesso de peso, resistência a insulina, diabetes e hiperlipidemia.Hypertension, popularly called “high blood pressure” or HTN, is a medical condition where blood pressure is chronically high. Hypertension can be classified as essential (primary) or secondary. Essential hypertension indicates that there is no specific medical cause that explains the patient's condition. Secondary hypertension indicates that high blood pressure is the result of (that is, secondary to) another condition, such as kidney disease or certain tumors (especially of the adrenal gland). Essential hypertension is usually associated with other cardiovascular risk factors, such as aging, overweight, insulin resistance, diabetes and hyperlipidemia.

A hipertensão persistente aumenta o risco de eventos cerebrais, cardíacos e renais. Em países industrializados, o risco de se tornar hipertensivo (pressão sanguínea > 140/90 mm Hg) ao longo da vida excede 90%. Danos súbitos ao órgão alvo, como hipertorfia do ventrículo esquerdo, microalbuminúria e disfunção cognitiva, acontecem cedo no curso da hipertensão cardiovascular. Porém, eventos catastróficos, como derrame cerebral, infarto agudo do miocárdio, falha renal e demência, geralmente só acontecem após longos períodos de hipertensão não-controlada (Messerli FH et al., Lancet 370 (2007) 591-603).Persistent hypertension increases the risk of brain, cardiac, and renal events. In industrialized countries, the lifetime risk of becoming hypertensive (blood pressure > 140/90 mm Hg) exceeds 90%. Sudden target organ damage, such as left ventricular hypertorphy, microalbuminuria, and cognitive dysfunction, occur early in the course of cardiovascular hypertension. However, catastrophic events such as stroke, acute myocardial infarction, renal failure, and dementia usually only occur after long periods of uncontrolled hypertension (Messerli FH et al., Lancet 370 (2007) 591-603).

O sistema renina-angiotensina (RAS) é um dos principais sistemas de regulação da função cardiovascular e renal. O RAS gera uma família de peptídeos bioativos com atividades biológicas variadas. Na via clássica, o decapeptídeo angiotensina (1-10) (Ang I) é gerado a partir do precursor angiotensinogênio pela atividade da enzima renina. A Ang I é então convertida a angiotensina (1-8) (Ang II) pela remoção de dois aminoácidos carboxi- terminais pela enzima conversora de angiotensina (ECA). Porém, com a identificação de enzimas (como ECA2) e peptídeos adicionais, torna-se claro que RAS é muito mais complexo e ainda não é completamente conhecido (Ferreira AJ et al., Hypertension. 2010 Feb;55(2):207-13).The renin-angiotensin system (RAS) is one of the main regulatory systems of cardiovascular and renal function. RAS generates a family of bioactive peptides with varied biological activities. In the classical pathway, the angiotensin (1-10) decapeptide (Ang I) is generated from the angiotensinogen precursor by the activity of the renin enzyme. Ang I is then converted to angiotensin (1-8) (Ang II) by the removal of two carboxy-terminal amino acids by the angiotensin converting enzyme (ACE). However, with the identification of enzymes (such as ACE2) and additional peptides, it becomes clear that RAS is much more complex and not yet fully understood (Ferreira AJ et al., Hypertension. 2010 Feb;55(2):207- 13).

Os peptídeos bioativos de angiotensina incluem a Ang II mencionada anteriormente, a angiotensina (2-8) (Ang III), a angiotensina (3-8) (Ang IV), e a angiotensina (1-7) (Ang (1-7)), havendo uma diversidade correspondente de receptores para estes peptídeos. Existem dois receptores principais para Ang II, os receptores tipo 1 (AT1) e tipo 2 (AT2). Ambos são receptores com sete hélices transmembrana, embora apresentem uma farmacologia bastante diferente. O receptor AT1 medeia as principais atividades patofisiológicas da Ang II, que incluem vasoconstrição, disfunção endotelial, proliferação de fibroblastos cardíacos e células musculares lisas, hipertrofia de cardiomiócitos, fibrose, aterosclerose, arritmogênese e trombose (Ferrario CM. Curr Opin Nephrol Hypertens. 2011 Jan;20(1):1-6). O heptapeptídeo Ang (1-7) (Asp-Arg- Val-Tyr-lle-His-Pro) é gerado de maneira independente de ECA, pelo processamento de Ang I por endopeptidases ou de Ang II por prolilpeptidases ou carboxipeptidases (ECA2). Os efeitos da Ang (1-7) são opostos aos da Ang II. Enquanto o estímulo do receptor AT1 por Ang II produz remodelagem cardíaca através de um mecanismo complexo que resulta na redução da atividade cardíaca e aumento da suscetibilidade a eventos cardíacos, Ang (1-7) parece ser capaz de reduzir a remodelagem cardíaca através da diminuição da hipertrofia e da fibrose (Santos RAS, Ferreira AJ, Curr Opin Nephrol Hypertens. 16 (2007) 122-128). Além deste efeito na remodelagem cardíaca, a Ang (1-7) apresenta efeitos antiarritmogênicos (Santos RAS et al., Physiol Genomics 17 (2004) 292-299; Ferreira AJ et al., Hypertension 38 (2001) 665-668) e atua como um vasodilatador. Os efeitos de Ang (1-7) não são mediados pelos receptores AT1 e AT2, mas via seu próprio receptor, Mas (Santos RAS et al., Proc. Natl. Acad. Sei USA 100 (2003) 8258-8263). Outros agonistas sintéticos para o receptor Mas, como AVE-0991 e o CGEN-856S, foram capazes de mimetizar os efeitos cardiovasculares benéficos da angiotensina (1-7) (Savergnini SQ et al., Hypertension. 2010;56(1):112-20; Santos RA, Ferreira AJ. Cardiovasc Drug Rev. 2006; 24(3-4):239-46).Bioactive angiotensin peptides include the aforementioned Ang II, angiotensin (2-8) (Ang III), angiotensin (3-8) (Ang IV), and angiotensin (1-7) (Ang (1-7) )), with a corresponding diversity of receptors for these peptides. There are two main receptors for Ang II, the type 1 (AT1) and type 2 (AT2) receptors. Both are receptors with seven transmembrane helices, although they have very different pharmacology. The AT1 receptor mediates the main pathophysiological activities of Ang II, which include vasoconstriction, endothelial dysfunction, proliferation of cardiac fibroblasts and smooth muscle cells, cardiomyocyte hypertrophy, fibrosis, atherosclerosis, arrhythmogenesis and thrombosis (Ferrario CM. Curr Opin Nephrol Hypertens. 2011 Jan. ;20(1):1-6). The Ang (1-7) heptapeptide (Asp-Arg-Val-Tyr-lle-His-Pro) is generated independently of ACE, by processing Ang I by endopeptidases or Ang II by prolylpeptidases or carboxypeptidases (ACE2). The effects of Ang (1-7) are opposite to those of Ang II. While stimulation of the AT1 receptor by Ang II produces cardiac remodeling through a complex mechanism that results in reduced cardiac activity and increased susceptibility to cardiac events, Ang (1-7) appears to be able to reduce cardiac remodeling by decreasing cardiac output. hypertrophy and fibrosis (Santos RAS, Ferreira AJ, Curr Opin Nephrol Hypertens. 16 (2007) 122-128). In addition to this effect on cardiac remodeling, Ang (1-7) has antiarrhythmogenic effects (Santos RAS et al., Physiol Genomics 17 (2004) 292-299; Ferreira AJ et al., Hypertension 38 (2001) 665-668) and acts as a vasodilator. The effects of Ang(1-7) are not mediated by AT1 and AT2 receptors, but via its own receptor, Mas ( Santos RAS et al., Proc. Natl. Acad. Sei USA 100 (2003) 8258-8263 ). Other synthetic agonists for the Mas receptor, such as AVE-0991 and CGEN-856S, were able to mimic the beneficial cardiovascular effects of angiotensin (1-7) (Savergnini SQ et al., Hypertension. 2010;56(1):112 -20; Santos RA, Ferreira AJ. Cardiovasc Drug Rev. 2006; 24(3-4):239-46 ).

Devido ao seu papel central na regulação da função renal e cardiovascular, o RAS representa um alvo proeminente para o desenvolvimento de fármacos anti-hipertensivos. Os inibidores deste sistema, como os inibidores de ECA, os bloqueadores do receptor de Ang II (ARBs) e os inibidores de renina, são atualmente tratamentos de primeira linha para danos do órgão hipertensivo alvo e doença renal progressiva.Due to its central role in the regulation of renal and cardiovascular function, RAS represents a prominent target for the development of antihypertensive drugs. Inhibitors of this system, such as ACE inhibitors, Ang II receptor blockers (ARBs), and renin inhibitors, are currently first-line treatments for hypertensive target organ damage and progressive kidney disease.

Os inibidores de ECA minimizam os efeitos vasoconstritores de Ang II pela inibição da conversão de Ang I em Ang II. Os inibidores de ECA podem ser divididos em três grupos, baseados em sua estrutura molecular: inibidores de ECA contendo sulfidrila (por exemplo, Captopril), inibidores de ECA contendo dicarboxilatos (por exemplo, Enalapril, Ramipril, Quinapril, Perindopril, Lisinopril, Benazepril, Trandolapril) e inibidores de ECA contendo fosfonatos (por exemplo, Fosinopril). Os inibidores de ECA são geralmente bem tolerados, com efeitos colaterais raros, como angioedema, erupções cutâneas e tosse seca (8 a 10%). Os ARBs são antagonistas do receptor AT1, ou seja, bloqueiam a ativação dos receptores AT1 pela Ang II. O bloqueio dos receptores AT1 causa diretamente a vasodilatação, redução da secreção de vasopressina, redução da produção e secreção de aldosterona, entre outros efeitos, sendo o efeito combinado destes a redução da pressão sanguínea. Exemplos incluem Candesartan, Eprosartan, Irbesartan, Losartan, Olmesartan, Telmisartan, e Valsartan.ACE inhibitors minimize the vasoconstrictive effects of Ang II by inhibiting the conversion of Ang I to Ang II. ACE inhibitors can be divided into three groups based on their molecular structure: sulfhydryl-containing ACE inhibitors (e.g. Captopril), dicarboxylate-containing ACE inhibitors (e.g. Enalapril, Ramipril, Quinapril, Perindopril, Lisinopril, Benazepril, Trandolapril) and phosphonate-containing ACE inhibitors (eg Fosinopril). ACE inhibitors are generally well tolerated, with rare side effects such as angioedema, rash, and dry cough (8 to 10%). ARBs are AT1 receptor antagonists, that is, they block the activation of AT1 receptors by Ang II. Blockade of AT1 receptors directly causes vasodilation, reduced vasopressin secretion, reduced production and secretion of aldosterone, among other effects, the combined effect of which is to reduce blood pressure. Examples include Candesartan, Eprosartan, Irbesartan, Losartan, Olmesartan, Telmisartan, and Valsartan.

Os inibidores de renina minimizam os efeitos da Ang II pela inibição da conversão do angiotensinogênio em Ang I. Portanto, a geração de Ang I requerida para a formação de Ang II por ação da ECA é inibida e, consequentemente, Ang II, que é o peptídeo ativo responsável pela maioria dos efeitos de vasoconstrição neste sistema, se torna indisponível. Desta forma, os inibidores de renina diminuem a atividade da renina no plasma, e em consequência, a resistência vascular sistêmica e a pressão sanguínea sistêmica.Renin inhibitors minimize the effects of Ang II by inhibiting the conversion of angiotensinogen to Ang I. Therefore, the generation of Ang I required for the formation of Ang II by the action of ACE is inhibited and, consequently, Ang II, which is the active peptide responsible for most of the vasoconstriction effects in this system becomes unavailable. In this way, renin inhibitors decrease plasma renin activity, and consequently, systemic vascular resistance and systemic blood pressure.

Quatro classes de compostos estão envolvidos no desenvolvimento dos inibidores de renina: os anticorpos de renina, direcionados contra a enzima; a segunda classe do fármaco inibidor de renina é um derivado sintético do prosseguimento do precursor de renina; a terceira classe de fármacos foi modelada sobre a atividade da pepstatina, um pentapeptídeo natural isolado de cultura de actinomicetos que universalmente inibe enzimas aspartilproteases; e a quarta classe de inibidores de renina é formada pelos análogos de angiotensinogênio (substrato).Four classes of compounds are involved in the development of renin inhibitors: renin antibodies, directed against the enzyme; the second class of renin-inhibiting drug is a synthetic derivative of the renin precursor follow-up; the third class of drugs was modeled on the activity of pepstatin, a natural pentapeptide isolated from actinomycete cultures that universally inhibits aspartyl protease enzymes; and the fourth class of renin inhibitors is formed by angiotensinogen analogues (substrate).

Outros fármacos anti-hipertensivos incluem diuréticos, beta- bloqueadores e bloqueadores de canais de cálcio. Os diuréticos, ou seja, fármacos que elevam a taxa de excreção de urina pelo organismo (diurese), podem ser divididos em três categorias: tiazidas, diuréticos da alça e diuréticos poupadores de potássio. As tiazidas e seus análogos incluem as clorotiazidas e as hidroclorotiazidas, como Clorotalidona, Eptizida, Indapamida e Metolazona. Elas induzem, nos primeiros dias de tratamento, uma diminuição em 10-15% da pressão arterial, principalmente devido a uma diminuição do volume extracelular e um aumento da diurese e natriurese. Após seis meses, o volume sanguíneo e o rendimento cardíaco retornam aos níveis basais e a diminuição da pressão arterial é mantida por uma diminuição da resistência vascular periférica (Frolich ED, Current Approaches in the Treatment of Hypertension, 405-469, 1994). Dentre os efeitos colaterais, pode-se citar: aumento da resistência periférica à insulina, aumento dos níveis de triglicérides, aumento de LDL, hipocalcemia e hiperuricemia. Exemplos de diuréticos da alça incluem Furosemida, Bumetanida, Torsemida e ácido etacrínico, e eles são muito mais potentes que as tiazidas. Eles atuam predominantemente nas porções medular e cortical da alça de Henle e exibem os mesmos efeitos colaterais das tiazidas. Os diuréticos poupadores de potássio, que incluem a Amilorida, Trianterena e Espironolactona, são fármacos com um efeito diurético mais fraco e são raramente utilizados isoladamente.Other antihypertensive drugs include diuretics, beta-blockers and calcium channel blockers. Diuretics, that is, drugs that increase the rate of urine excretion by the body (diuresis), can be divided into three categories: thiazides, loop diuretics, and potassium-sparing diuretics. Thiazides and their analogues include chlorothiazides and hydrochlorothiazides such as Chlorthalidone, Eptizide, Indapamide and Metolazone. They induce, in the first days of treatment, a 10-15% decrease in blood pressure, mainly due to a decrease in extracellular volume and an increase in diuresis and natriuresis. After six months, blood volume and cardiac output return to baseline levels and the decrease in blood pressure is maintained by a decrease in peripheral vascular resistance (Frolich ED, Current Approaches in the Treatment of Hypertension, 405-469, 1994). Among the side effects, we can mention: increase in peripheral insulin resistance, increase in triglyceride levels, increase in LDL, hypocalcemia and hyperuricemia. Examples of loop diuretics include Furosemide, Bumetanide, Torsemide, and ethacrynic acid, and they are much more potent than thiazides. They act predominantly on the medullary and cortical portions of the loop of Henle and exhibit the same side effects as thiazides. Potassium-sparing diuretics, which include Amiloride, Triamterene, and Spironolactone, are drugs with a weaker diuretic effect and are rarely used alone.

Apesar de terem constituído tratamento de primeira linha para hipertensão, os beta-bloqueadores decaíram, em Junho de 2006, no Reino Unido, para a quarta linha, pelo fato de não atuarem tão bem quanto as outras drogas, particularmente em idosos. Além disto, existe uma crescente evidência de que os beta-bloqueadores mais frequentemente utilizados, especialmente em combinação com diuréticos do tipo tiazida, levam a um risco inaceitável de provocar diabetes do tipo 2 (Elliott J. and Meyer P., The Lancet, Jan 20, 2007). Os beta-bloqueadores bloqueiam a ação de catecolaminas endógenas (particularmente a epinefrina (adrenalina) e norepinefrina (noradrenalina)) sobre os receptores p-adrenérgicos. Existem três tipos conhecidos de beta- receptores, designados β1, β2 e β3. Os receptores pi-adrenérgicos estão localizados principalmente no coração e rins. Os receptores p2-adrenérgicos estão localizados principalmente nos pulmões, no trato gastrintestinal, fígado, útero, músculo vascular liso e músculo esquelético. Os receptores β3 estão localizados em células adiposas. O estímulo dos receptores β1 pela epinefrina induz a um efeito cronotrópico e ionotrópico positivo no coração e aumenta a automaticidade e a velocidade de condução cardíaca. O estímulo dos receptores β1 nos rins causa a liberação de renina. O estímulo de receptores β2 induz ao relaxamento do músculo liso (resultando em vasodilatação e broncodilatação, entre outros efeitos), induz ao tremor em músculo esquelético e aumenta a gliconeogênese no fígado e no músculo esquelético. O estímulo dos receptores β3 induz a lipólise. Os bloqueadores beta inibem as ações simpáticas normais mediadas por epinefrina. O mecanismo anti-hipetensivo parece envolver: redução do rendimento cardíaco (devido aos efeitos cronotrópicos e ionotrópicos negativos), redução da liberação de renina pelos rins e um efeito no sistema nervoso central que reduz a atividade simpática. Exemplos de agentes não-seletivos incluem Alprenolol, Carteolol, Levobunolol, Mepindolol, Metipranolol, Nadolol, Oxprenolol, Penbutolol, Pindolol, Propranolol, Sotalol e Timolol. Exemplos de agentes seletivos para β1 incluem Acebutolol, Atenolol, Betaxolol, Bisoprolol, Esmolol, Metoprolol e Nebivolol. Exemplos de antagonistas mistos α1/β-adren0rgicos são Carvedilol, Celiprolol e Labetalol. Um exemplo de agente β2-seletivo é a Butaxamina. Os efeitos colaterais dos beta-bloqueadores incluem alterações na resposta à insulina, aumentos dos níveis de triacilglicerídeos, facilitação de hipoglicemia, depressão, fadiga e disfunção sexual.Despite being a first-line treatment for hypertension, beta-blockers dropped, in June 2006, in the United Kingdom, to the fourth line, due to the fact that they do not work as well as other drugs, particularly in the elderly. In addition, there is growing evidence that the most frequently used beta-blockers, especially in combination with thiazide-type diuretics, carry an unacceptable risk of causing type 2 diabetes (Elliott J. and Meyer P., The Lancet, Jan. 20, 2007). Beta-blockers block the action of endogenous catecholamines (particularly epinephrine (adrenaline) and norepinephrine (noradrenaline)) on β-adrenergic receptors. There are three known types of beta-receptors, designated β1, β2 and β3. Pi-adrenergic receptors are mainly located in the heart and kidneys. β2-adrenergic receptors are located primarily in the lungs, gastrointestinal tract, liver, uterus, vascular smooth muscle, and skeletal muscle. β3 receptors are located on fat cells. Stimulation of β1 receptors by epinephrine induces a positive chronotropic and ionotropic effect on the heart and increases automaticity and cardiac conduction velocity. Stimulation of β1 receptors in the kidneys causes the release of renin. Stimulation of β2 receptors induces smooth muscle relaxation (resulting in vasodilation and bronchodilation, among other effects), induces skeletal muscle tremor, and increases gluconeogenesis in liver and skeletal muscle. Stimulation of β3 receptors induces lipolysis. Beta blockers inhibit normal epinephrine-mediated sympathetic actions. The antihypertensive mechanism appears to involve: reduced cardiac output (due to negative chronotropic and ionotropic effects), reduced renal renin release, and an effect on the central nervous system that reduces sympathetic activity. Examples of non-selective agents include Alprenolol, Carteolol, Levobunolol, Mepindolol, Metipranolol, Nadolol, Oxprenolol, Penbutolol, Pindolol, Propranolol, Sotalol and Timolol. Examples of β1 selective agents include Acebutolol, Atenolol, Betaxolol, Bisoprolol, Esmolol, Metoprolol and Nebivolol. Examples of mixed α1/β-adrenergic antagonists are Carvedilol, Celiprolol and Labetalol. An example of a β2-selective agent is Butaxamine. Side effects of beta blockers include changes in insulin response, increases in triacylglyceride levels, facilitation of hypoglycemia, depression, fatigue, and sexual dysfunction.

Os bloqueadores de canais de cálcio (CCBs) atuam bloqueando os canais de cálcio dependentes de voltagem (VGCCs) do tipo L nas células musculares do coração e dos vasos sanguíneos. Desta maneira, os CCBs inibem os efeitos dos mediadores de pressão, como os da Ang II e da endotelina-1 (ET-1), a nível de músculo vascular liso, por redução do influxo de Ca2+ (Ruschitzka FT et. al. J Cardiovasc Pharmacol., 31 Suppl 2:S5-16, 1998). No coração, uma diminuição da disponibilidade de cálcio por cada batimento resulta em uma diminuição da contratilidade cardíaca. Nos vasos sanguíneos, uma diminuição do cálcio resulta em menor contração do músculo vascular liso e, portanto, vasodilatação. Diferentes classes de CCBs incluem dihidropiridinas (por exemplo, Amlodipina, Felodipina, Nicardipina, Nifedipina, Nimodipina, Nisoldipina, Nitrendipina, Lacidipina e Lercanidipina, Isradipina, lercanidipina), fenialquilaminas (por exemplo, Verepamil e Galopamil) e benzotiazepina (por exemplo, Diltiazem). Os efeitos colaterais dos CCBs podem incluir, de forma não limitante: vertigem, dor de cabeça, vermelhidão da face, edemas de extremidades baixas, taquicardia, bradicardia e constipação.Calcium channel blockers (CCBs) work by blocking L-type voltage-gated calcium channels (VGCCs) in the muscle cells of the heart and blood vessels. In this way, CCBs inhibit the effects of pressure mediators, such as Ang II and endothelin-1 (ET-1), at the vascular smooth muscle level, by reducing the influx of Ca2+ (Ruschitzka FT et. al. J Cardiovasc Pharmacol., 31 Suppl 2:S5-16, 1998). In the heart, a decrease in calcium availability per beat results in a decrease in cardiac contractility. In blood vessels, a decrease in calcium results in less contraction of vascular smooth muscle and therefore vasodilation. Different classes of CCBs include dihydropyridines (e.g. Amlodipine, Felodipine, Nicardipine, Nifedipine, Nimodipine, Nisoldipine, Nitrendipine, Lacidipine and Lercanidipine, Isradipine, lercanidipine), phenylalkylamines (e.g. Verepamil and Galopamil) and benzothiazepine (e.g. Diltiazem) . Side effects of CCBs may include, but are not limited to: vertigo, headache, redness of the face, edema of the lower extremities, tachycardia, bradycardia and constipation.

A pepstatina é um pentapeptídeo natural, isolado de culturas de actinomicetos, que inibe universalmente enzimas aspartilproteases com alta potência inibitória para pepsina e uma atividade inibitória baixa para renina. A pepstatina contém dois resíduos de estatina, dos quais o central determina a afinidade de ligação da renina por pepstatina atuando como mimetizador do estado de transição da ligação peptídica com a renina. Com base em medidas de pressão sanguínea em rato, sugere-se que a pepstatina afeta a reação da renina endógena e exógena com substrato plasmático. Além deste efeito, a pepstatina apresenta uma leve ação hipotensiva não-específica, como demonstrado em rato nefrectomizado (Lazar J et al Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 1972;275(1):114-8; Oldham AA et al, J Hypertens. 1984 Apr;2(2): 157-61).Pepstatin is a naturally occurring pentapeptide, isolated from actinomycete cultures, that universally inhibits aspartyl protease enzymes with high inhibitory potency for pepsin and low inhibitory activity for renin. Pepstatin contains two statin residues, the central one of which determines the binding affinity of renin for pepstatin, acting as a mimic of the transition state of the peptide bond with renin. Based on blood pressure measurements in rats, it is suggested that pepstatin affects the reaction of endogenous and exogenous renin with plasma substrate. In addition to this effect, pepstatin has a mild nonspecific hypotensive action, as demonstrated in nephrectomized rats (Lazar J et al Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 1972;275(1):114-8; Oldham AA et al, J Hypertens. 1984 Apr;2(2): 157-61).

O uso de fármacos anti-hipertensivos é indicado quando os pacientes não respondem a alterações no estilo de vida (por exemplo, exercício e dieta pobre em sal) por um período de três ou seis meses, e na presença de danos a órgãos alvo (hipertrofia do ventrículo esquerdo, isquemia miocardial, apoplexia ou retinopatia hipertensiva). Todos os pacientes com pressão arterial sistólica acima de 180 mmHg ou pressão arterial diastólica acima de 110 mmHg devem ser submetidos ao tratamento farmacológico (Report of the Canadian Hypertension Society. Consensus Conference. 3. Pharmacological treatment of essential hypertension. Xan. Med. Assoc. J. 149 (3): 575-584, 1993).The use of antihypertensive drugs is indicated when patients do not respond to lifestyle changes (e.g., exercise and a low-salt diet) for a period of three or six months, and in the presence of target organ damage (hypertrophy). ventricular failure, myocardial ischemia, stroke, or hypertensive retinopathy). All patients with systolic blood pressure above 180 mmHg or diastolic blood pressure above 110 mmHg should undergo pharmacological treatment (Report of the Canadian Hypertension Society. Consensus Conference. 3. Pharmacological treatment of essential hypertension. Xan. Med. Assoc. J. 149 (3): 575-584, 1993).

Foi objeto da presente invenção aumentar a habilidade dos fármacos anti-hipertensivos comumente utilizados em diminuir a pressão sanguínea de mamíferos, em particular humanos. Outro objetivo da presente invenção foi produzir um método que permite a administração de doses de anti- hipertensivos mais baixas que o padrão, sem comprometer sua eficiência. Foi também um objetivo estender o efeito de fármacos anti-hipertensivos, sem aumentar sua dose.It was an object of the present invention to enhance the ability of commonly used antihypertensive drugs to lower the blood pressure of mammals, in particular humans. Another objective of the present invention was to produce a method that allows the administration of lower than standard doses of antihypertensives, without compromising their efficiency. It was also an objective to extend the effect of antihypertensive drugs without increasing their dose.

Os objetivos da presente invenção são alcançados por um método de tratamento da hipertensão arterial em mamíferos, em particular humanos, compreendendo a co-administração de um anti-hipertensivo e angiotensina (1- 7).The objects of the present invention are achieved by a method of treating arterial hypertension in mammals, in particular humans, comprising the co-administration of an antihypertensive and angiotensin (1-7).

O anti-hipertensivo é selecionado de um grupo que compreende beta- bloqueadores, bloqueadores de canais de cálcio, bloqueadores do receptor de angiotensina II, inibidores da ECA, diuréticos e inibidores de renina.The antihypertensive is selected from a group comprising beta-blockers, calcium channel blockers, angiotensin II receptor blockers, ACE inhibitors, diuretics and renin inhibitors.

Os beta-bloqueadores são selecionados de um grupo que compreende Alprenolol, Carteolol, Levobunolol, Mepindolol, Metipranolol, Nadolol, Oxprenolol, Penbutolol, Pindolol, Propranolol, Sotalol, Timolol, Acebutolol, Atenolol, Betaxolol, Bisoprolol, Esmolol, Metoprolol, Nebivolol, Carvedilol, Celiprolol, Labetalol e Butaxamina.Beta-blockers are selected from a group comprising Alprenolol, Carteolol, Levobunolol, Mepindolol, Metipranolol, Nadolol, Oxprenolol, Penbutolol, Pindolol, Propranolol, Sotalol, Timolol, Acebutolol, Atenolol, Betaxolol, Bisoprolol, Esmolol, Metoprolol, Nebivolol, Carvedilol , Celiprolol, Labetalol and Butaxamine.

Os bloqueadores de canais de cálcio são selecionados de um grupo que compreende Amlodipina, Felodipina, Nicardipina, Nifedipina, Nimodipina, Nisoldipina, Nitrendipina, Lacidipina, Lercanidipina, Isradipina, lercanidipina, Verapamil, Gallopamil e Diltiazem.Calcium channel blockers are selected from a group comprising Amlodipine, Felodipine, Nicardipine, Nifedipine, Nimodipine, Nisoldipine, Nitrendipine, Lacidipine, Lercanidipine, Isradipine, lercanidipine, Verapamil, Gallopamil and Diltiazem.

Os bloqueadores do receptor de angiotensina II são selecionados de um grupo que compreende Candesartan, Eprosartan, Irbesartan, Losartan, Olmesartan, Telmisartan e Valsartan.Angiotensin II receptor blockers are selected from a group comprising Candesartan, Eprosartan, Irbesartan, Losartan, Olmesartan, Telmisartan and Valsartan.

Os inibidores de ECA são selecionados de um grupo que compreende Captopril, Enalapril, Ramipril, Quinapril, Perindopril, Lisinopril, Benazepril, Trandolapril e Fosinopril.ACE inhibitors are selected from a group comprising Captopril, Enalapril, Ramipril, Quinapril, Perindopril, Lisinopril, Benazepril, Trandolapril and Fosinopril.

Os diuréticos são selecionados de um grupo que compreende clorotiazidas e hidroclorotiazidas, Furosemida, ácido Etacrínico, Torsemida, Bumetanida, Clortalidona, Epitizida, Indapamida, Metolazona, Triamterena, Amilorida, Spironolactona.Diuretics are selected from a group comprising chlorothiazides and hydrochlorothiazides, Furosemide, Ethacrynic acid, Torsemide, Bumetanide, Chlorthalidone, Epitizide, Indapamide, Metolazone, Triamterene, Amiloride, Spironolactone.

Os inibidores de renina são anticorpos de renina, derivados sintéticos de prosseguimentos do precursor de renina, pepstatina e análogos de angiotensinogênio (substrato).Renin inhibitors are renin antibodies, synthetic derivatives of renin precursor follow-ups, pepstatin and angiotensinogen analogues (substrate).

O anti-hipertensivo e a angiotensina (1-7) são administrados por via oral, inalação, injeção intramuscular, intravenosa, subcutânea ou tópica ou como um dispositivo que pode ser implantado.The antihypertensive and angiotensin (1-7) are administered orally, inhalation, intramuscular, intravenous, subcutaneous or topical injection or as an implantable device.

A angiotensina (1-7) é administrada em uma formulação que compreende ciclodextrinas, derivados de ciclodextrinas, lipossomos, polímeros biodegradáveis, derivados de polímeros biodegradáveis ou misturas destes sistemas.Angiotensin (1-7) is administered in a formulation comprising cyclodextrins, cyclodextrin derivatives, liposomes, biodegradable polymers, derivatives of biodegradable polymers or mixtures of these systems.

Os objetivos da presente invenção são também alcançados por um kit que compreende uma composição farmacêutica contendo, em combinação ou separadamente, angiotensina (1-7) e um anti-hipertensivo, que pode ser selecionado de um grupo que compreende beta-bloqueadores, bloqueadores de canais de cálcio, bloqueadores do receptor de angiotensina II, inibidores de ECA e diuréticos.The objects of the present invention are also achieved by a kit comprising a pharmaceutical composition containing, in combination or separately, angiotensin (1-7) and an antihypertensive, which can be selected from a group comprising beta-blockers, calcium channels, angiotensin II receptor blockers, ACE inhibitors and diuretics.

Os objetivos da presente invenção são também alcançados pelo uso de um anti-hipertensivo e angiotensina (1-7) para diminuir a pressão sanguínea em mamíferos, preferencialmente humanos.The objects of the present invention are also achieved by the use of an antihypertensive and angiotensin (1-7) to lower blood pressure in mammals, preferably humans.

O termo “co-administração” refere-se à administração combinada de um anti-hipertensivo e angiotensina (1-7) em mamíferos, preferencialmente humanos, onde ambos são aplicados simultaneamente ou dentro de um intervalo de 10 minutos entre um e outro. A aplicação pode ser por via oral, inalação, injeção intramuscular, intravenosa, subcutânea, ou tópica, ou por um dispositivo que possa ser implantado, onde o anti-hipertensivo e a angiotensina (1-7) podem ser administrados usando a mesma forma ou formas diferentes de aplicação.The term "co-administration" refers to the combined administration of an antihypertensive and angiotensin (1-7) in mammals, preferably humans, where both are applied simultaneously or within 10 minutes of each other. Application can be by oral, inhalation, intramuscular, intravenous, subcutaneous, or topical injection, or by an implantable device, where the antihypertensive and angiotensin (1-7) can be administered using the same form or different forms of application.

O termo “anti-hipertensivo” refere-se à classe de fármacos usada em medicina e farmacologia para tratar hipertensão (alta pressão arterial). Existem muitas classes de hipertensivos, que - por vários meios - atuam na diminuição da pressão arterial.The term "antihypertensive" refers to the class of drugs used in medicine and pharmacology to treat hypertension (high blood pressure). There are many classes of hypertensives, which - by various means - act to lower blood pressure.

O termo “pressão arterial média (MAP)” refere-se à média nocional da pressão sanguínea de um indivíduo. Ela é definida como a média da pressão arterial durante um único ciclo cardíaco.The term “mean arterial pressure (MAP)” refers to the notional mean of an individual's blood pressure. It is defined as the average blood pressure during a single cardiac cycle.

O termo “diminuição da pressão arterial” refere-se à redução da pressão arterial sistólica e/ou diastólica, resultando em uma redução da pressão arterial média.The term “blood pressure decrease” refers to the reduction in systolic and/or diastolic blood pressure, resulting in a reduction in mean arterial pressure.

Os inventores descobriram de maneira surpreendente que a co- administração de um fármaco anti-hipertensivo e o heptapeptídeo angiotensina (1-7) proporciona um efeito sinérgico que aumenta a habilidade dos fármacos anti-hipertensivos convencionais em diminuir a pressão arterial de mamíferos. Os inventores também mostraram que a Ang (1-7) é compatível com todas as classes de anti-hipertensivos comumente utilizados, incluindo beta- bloqueadores, bloqueadores de canais de cálcio, bloqueadores do receptor de angiotensina II, inibidores de ECA e inibidores de renina.The inventors have surprisingly found that the co-administration of an antihypertensive drug and the heptapeptide angiotensin (1-7) provides a synergistic effect that enhances the ability of conventional antihypertensive drugs to lower blood pressure in mammals. The inventors have also shown that Ang(1-7) is compatible with all classes of commonly used antihypertensives, including beta-blockers, calcium channel blockers, angiotensin II receptor blockers, ACE inhibitors, and renin inhibitors. .

Surpreendentemente, a co-administração de, por exemplo, Atenolol com Ang (1-7) estendeu o efeito deste beta-bloqueador de aproximadamente 12h para 24h, sem aumentar sua dose.Surprisingly, co-administration of, for example, Atenolol with Ang (1-7) extended the effect of this beta-blocker from approximately 12h to 24h, without increasing its dose.

Outra descoberta interessante foi o efeito estendido de Pepstatina após administração de Ang (1-7).Another interesting finding was the extended effect of Pepstatin after administration of Ang (1-7).

O método de acordo com a presente invenção permitirá diminuir significativamente a dose de todas as classes de anti-hipertensivos comumente utilizadas sem comprometer seu potencial de diminuir a pressão arterial. Em contrapartida, isto levaria a uma redução do risco dos efeitos colaterais comuns, às vezes severos, associados ao uso de anti-hipertensivos, como o risco de causar diabetes do tipo 2 pelo uso de beta-bloqueadores, especialmente em combinação com diuréticos do tipo tiazida.The method according to the present invention will allow to significantly decrease the dose of all commonly used antihypertensive classes without compromising their potential to lower blood pressure. In contrast, this would lead to a reduced risk of common, sometimes severe, side effects associated with antihypertensive use, such as the risk of causing type 2 diabetes from the use of beta-blockers, especially in combination with type diuretics. thiazide.

Encontram-se, no estado da técnica, vários documentos que tratam de associações de medicamentos para o tratamento de hipertensão. Por exemplo, o documento WO 2004087132 descreve composições e métodos para tratamento de hipertensão compreendendo uma combinação de três classes de fármacos anti-hipertensivos, incluindo antagonistas de canais de cálcio, inibidores de ECA e diuréticos. Porém, em nenhum documento desta natureza a angiotensina (1-7) foi associada a agentes anti-hipertensivos para o tratamento de hipertensão.In the prior art, there are several documents dealing with drug combinations for the treatment of hypertension. For example, WO 2004087132 describes compositions and methods for treating hypertension comprising a combination of three classes of antihypertensive drugs, including calcium channel antagonists, ACE inhibitors and diuretics. However, in no such document has angiotensin (1-7) been associated with antihypertensive agents for the treatment of hypertension.

BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES

FIGURA 1 - Efeitos de uma dose única do bloqueador do receptor de angiotensina II (ARB) Losartan, co-administrado com angiotensina-(1-7), sobre a pressão arterial média (MAP) de ratos espontaneamente hipertensivos (gráfico inferior). Os dois gráficos superiores representam experimentos controle, isto é, administração separada de doses únicas de angiotensina (1-7) ou Losartan. FIGURA 2 - Efeito de uma dose única do inibidor de ECA Enalapril, co- administrado com angiotensina (1-7), sobre a pressão arterial média (MAP) de ratos espontaneamente hipertensivos (gráfico inferior). Os dois gráficos superiores representam experimentos controle, isto é, administração separada de doses únicas de angiotensina (1-7) ou Enalapril. FIGURA 3 - Efeito de uma dose única do beta-bloqueador Atenolol, co- administrado com angiotensina (1-7), sobre a pressão arterial média (MAP) de ratos espontaneamente hipertensivos (gráfico inferior). Os dois gráficos superiores representam experimentos controle, isto é, administração separada de doses únicas de angiotensina (1-7) ou Atenolol. FIGURA 4 - Efeito de uma dose diária do beta-bloqueador Atenolol, co-administrado com angiotensina (1-7), sobre a pressão arterial média (MAP) de ratos espontaneamente hipertensivos, por uma semana (gráficos inferiores). Os dois pares de gráficos superiores representam experimentos controle, isto é, administração separada de doses diárias de angiotensina (1-7) ou Atenolol, por uma semana. Os valores diurnos são mostrados nos gráficos da esquerda, e os valores noturnos são mostrados nos gráficos da direita. FIGURA 5 - Efeito de uma dose diária do beta-bloqueador Atenolol, co-administrado com uma dose baixa de angiotensina (1-7), sobre a pressão arterial média (MAP) de ratos espontaneamente hipertensivos, por uma semana (gráficos inferiores). Os dois pares de gráficos superiores representam experimentos controle, isto é, administração separada de doses diárias baixas de angiotensina (1-7) ou doses diárias de Atenolol, por uma semana. Os valores diurnos são mostrados nos gráficos da esquerda, e os valores noturnos são mostrados nos gráficos da direita. FIGURA 6 - Efeito de uma dose diária do beta-bloqueador Atenolol, co-administrado com angiotensina (1-7), sobre a pressão arterial média (MAP) de ratos espontaneamente hipertensivos, por quatro semanas (gráficos inferiores). Os dois pares de gráficos superiores representam experimentos controle, isto é, administração separada de doses diárias de angiotensina (1-7) ou Atenolol, por quatro semanas. Os valores diurnos são mostrados nos gráficos da esquerda, e os valores noturnos são mostrados nos gráficos da direita. FIGURA 7 - Efeito de uma dose diária do beta-bloqueador Atenolol, co-administrado com angiotensina (1-7), sobre a pressão arterial diastólica (DAP) de ratos espontaneamente hipertensivos, por quatro semanas (gráficos inferiores). Os dois pares de gráficos superiores representam experimentos controle, isto é, administração separada de doses diárias de angiotensina (1-7) ou Atenolol, por quatro semanas. Os valores diurnos são mostrados nos gráficos da esquerda, e os valores noturnos são mostrados nos gráficos da direita. FIGURA 8 - Efeito de uma dose diária do beta-bloqueador Atenolol, co-administrado com angiotensina (1-7), sobre a frequência cardíaca (CF) de ratos espontaneamente hipertensivos por quatro semanas (gráficos inferiores). Os dois pares de gráficos superiores representam experimentos controle, isto é, administração separada de doses diárias de angiotensina (1-7) ou Atenolol, por quatro semanas. Os valores diurnos são mostrados nos gráficos da esquerda, e os valores noturnos são mostrados nos gráficos da direita. FIGURA 9 - Efeito de uma dose única do inibidor de renina Pepstatina, co-administrado com angiotensina (1-7), sobre a pressão arterial média (MAP) de ratos transgênicos hipertensivos superexpressando o gene renina [TG(mREN2)27] (gráfico inferior). O gráfico superior representa experimentos controle, isto é, administração separada de doses únicas de angiotensina (1-7) após veiculação (esquerda) e administração separada de dose única de pepstatina (Direita). FIGURA 10 - Efeitos do bloqueador de canal de cálcio Verapamil isolado ou co-administrado com Ang (1-7) sobre a resposta vasoconstritora de Ang II. O gráfico A mostra a resposta vasoconstritora de Ang II em ratos Wistar conscientes tratados com Ang (1-7) ou excipiente. O gráfico B mostra a resposta vasoconstritora de Ang II em animais tratados com Verapamil isolado ou combinado com Ang (1-7). Os resultados são apresentados como média ±S.E.M. Utilizou-se análise de variância (ANOVA) com dois fatores com comparações múltiplas de Bonferroni pós-teste para comparar as curvas de dose-resposta. O efeito hipertensivo de Ang II foi expresso como modificação de MAP (mmHg). Todas as análises estatísticas foram consideradas significativas quando p< 0.05. *** P<0.001.FIGURE 1 - Effects of a single dose of the angiotensin II receptor blocker (ARB) Losartan, co-administered with angiotensin-(1-7), on the mean arterial pressure (MAP) of spontaneously hypertensive rats (bottom graph). The top two graphs represent control experiments, ie, separate administration of single doses of angiotensin (1-7) or Losartan. FIGURE 2 - Effect of a single dose of the ACE inhibitor Enalapril, co-administered with angiotensin (1-7), on the mean arterial pressure (MAP) of spontaneously hypertensive rats (bottom graph). The top two graphs represent control experiments, ie, separate administration of single doses of angiotensin (1-7) or Enalapril. FIGURE 3 - Effect of a single dose of the beta-blocker Atenolol, co-administered with angiotensin (1-7), on the mean arterial pressure (MAP) of spontaneously hypertensive rats (bottom graph). The top two graphs represent control experiments, ie, separate administration of single doses of angiotensin (1-7) or Atenolol. FIGURE 4 - Effect of a daily dose of the beta-blocker Atenolol, co-administered with angiotensin (1-7), on the mean arterial pressure (MAP) of spontaneously hypertensive rats for one week (lower graphs). The top two pairs of graphs represent control experiments, ie, separate administration of daily doses of angiotensin (1-7) or Atenolol, for one week. Daytime values are shown on the left graphs, and nighttime values are shown on the right graphs. FIGURE 5 - Effect of a daily dose of the beta-blocker Atenolol, co-administered with a low dose of angiotensin (1-7), on the mean arterial pressure (MAP) of spontaneously hypertensive rats, for one week (bottom graphs). The top two pairs of graphs represent control experiments, ie, separate administration of low daily doses of angiotensin (1-7) or daily doses of Atenolol, for one week. Daytime values are shown on the left graphs, and nighttime values are shown on the right graphs. FIGURE 6 - Effect of a daily dose of the beta-blocker Atenolol, co-administered with angiotensin (1-7), on the mean arterial pressure (MAP) of spontaneously hypertensive rats for four weeks (lower graphs). The top two pairs of graphs represent control experiments, ie, separate administration of daily doses of angiotensin (1-7) or Atenolol, for four weeks. Daytime values are shown on the left graphs, and nighttime values are shown on the right graphs. FIGURE 7 - Effect of a daily dose of the beta-blocker Atenolol, co-administered with angiotensin (1-7), on diastolic blood pressure (DAP) of spontaneously hypertensive rats for four weeks (lower graphs). The top two pairs of graphs represent control experiments, ie, separate administration of daily doses of angiotensin (1-7) or Atenolol, for four weeks. Daytime values are shown on the left graphs, and nighttime values are shown on the right graphs. FIGURE 8 - Effect of a daily dose of the beta-blocker Atenolol, co-administered with angiotensin (1-7), on the heart rate (FC) of spontaneously hypertensive rats for four weeks (bottom graphs). The top two pairs of graphs represent control experiments, ie, separate administration of daily doses of angiotensin (1-7) or Atenolol, for four weeks. Daytime values are shown on the left graphs, and nighttime values are shown on the right graphs. FIGURE 9 - Effect of a single dose of the renin inhibitor Pepstatin, co-administered with angiotensin (1-7), on the mean arterial pressure (MAP) of transgenic hypertensive rats overexpressing the renin gene [TG(mREN2)27] (graph bottom). The upper graph represents control experiments, ie, separate administration of single doses of angiotensin (1-7) after delivery (left) and separate administration of single dose of pepstatin (Right). FIGURE 10 - Effects of calcium channel blocker Verapamil alone or co-administered with Ang (1-7) on Ang II vasoconstrictor response. Graph A shows the vasoconstrictor response of Ang II in conscious Wistar rats treated with Ang (1-7) or excipient. Graph B shows the vasoconstrictor response of Ang II in animals treated with Verapamil alone or in combination with Ang (1-7). Results are presented as mean ±S.E.M. Two-way analysis of variance (ANOVA) with post-test Bonferroni multiple comparisons was used to compare dose-response curves. The hypertensive effect of Ang II was expressed as MAP modification (mmHg). All statistical analyzes were considered significant when p< 0.05. *** P<0.001.

DETAILED DESCRIPTION OF THE TECHNOLOGY

A presente invenção será descrita com base nos exemplos que se seguem, com o intuito de ilustrar, de forma não limitante, o escopo da invenção.The present invention will be described on the basis of the following examples, in order to illustrate, in a non-limiting manner, the scope of the invention.

Example 1:

Preparo da droga A angiotensina (1-7) (Asp-Arg-Val-Tyr-lle-His-Pro, C4iH62Ni20n, Bachem) e os anti-hipertensivos Atenolol (C16H22N2O3, Biosintética), Losartan (C22H22CIKN6O), e Enalapril (C22H22CIKN6O) foram pesados, diluídos e administrados em um intervalo de 10 minutos ou menos. A angiotensina (1-7) foi administrada em uma formulação compreendendo hidroxipropil-β- ciclodextrina (HPCD) (C42H70O35 - n(CH3CHOHCH2), Cerestar). Procedimento experimental Animais utilizados: Espécies: Ratos (Rattus norvegicus) Linhagem: Ratos Espontaneamente Hipertensivos (SHR)Drug preparation Angiotensin (1-7) (Asp-Arg-Val-Tyr-lle-His-Pro, C4iH62Ni20n, Bachem) and the antihypertensives Atenolol (C16H22N2O3, Biosynthetic), Losartan (C22H22CIKN6O), and Enalapril (C22H22CIKN6O ) were weighed, diluted and administered at an interval of 10 minutes or less. Angiotensin (1-7) was administered in a formulation comprising hydroxypropyl-β-cyclodextrin (HPCD) (C42H70O35 - n(CH3CHOHCH2), Cerestar). Experimental procedure Animals used: Species: Rats (Rattus norvegicus) Lineage: Spontaneously Hypertensive Rats (SHR)

Fonte provedora: CEBIO - Centro de Bioterismo do Departamento de Fisiologia e Biofísica do Instituto de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Minas Gerais. Sexo e idade: Machos de 12 a 13 semanas (no momento da cirurgia) Aclimatização: os animais foram ambientados no mínimo duas semanas antes da realização dos experimentos.Provider source: CEBIO - Center for Biotherism, Department of Physiology and Biophysics, Institute of Biological Sciences, Federal University of Minas Gerais. Sex and age: Males from 12 to 13 weeks (at the time of surgery) Acclimatization: the animals were acclimatized at least two weeks before the experiments were carried out.

Os ratos foram anestesiados com tribromoetanol (0,25g/kg de peso), uma incisão de 4 a 6 cm foi feita no abdômen e um cateter foi implantado na aorta abdominal. Após a cirurgia, foram administrados antibióticos (0.1 ml) intramuscularmente, os animais descansaram por 7-10 dias e foram então testados quanto ao ciclo circadiano regular por 2-3 dias.Rats were anesthetized with tribromoethanol (0.25g/kg body weight), a 4 to 6 cm incision was made in the abdomen and a catheter was implanted in the abdominal aorta. After surgery, antibiotics (0.1 ml) were administered intramuscularly, animals rested for 7-10 days and then tested for regular circadian cycle for 2-3 days.

As drogas foram administradas oralmente, em dose única ou doses diárias, por gavagem (alimentação forçada) em um volume de 0,1ml/100g de peso animal.The drugs were administered orally, in a single dose or daily doses, by gavage (forced feeding) in a volume of 0.1ml/100g of animal weight.

Os dados de PAS (pressão arterial sitólica), PAD(pressão arterial diastólica), PAM (pressão arterial média) e FC (frequência cardíaca) foram coletados por 10 segundos, em intervalos de 10 minutos, pelo período indicado. Os valores são dados como médias aritméticas dos valores observados durante as leituras de 10 segundos. Em algumas análises, a PAS, PAD, PAM e FC foram coletadas em intervalos de 12 h, correspondendo aos períodos diurnos e noturnos. Os valores apresentados obtidos para uma semana e quatro semanas correspondem à média subtraída dos valores obtidos nos experimentos controle correspondentes.SBP (systolic blood pressure), DBP (diastolic blood pressure), MAP (mean blood pressure) and HR (heart rate) data were collected for 10 seconds, at 10-minute intervals, for the indicated period. Values are given as arithmetic averages of the values observed during the 10 second readings. In some analyses, SBP, DBP, PAM and HR were collected at 12 h intervals, corresponding to daytime and nighttime periods. The presented values obtained for one week and four weeks correspond to the mean subtracted from the values obtained in the corresponding control experiments.

Example 2

A co-administração do bloqueador do receptor de angiotensina II (ARB) Losartan e Anq-(1-7) diminui a pressão arterial Os gráficos da FIGURA 1 mostram a variação da pressão arterial média (MAP) em ratos espontaneamente hipertensivos após administração oral única de Ang-(1-7)/hidroxipropil-β-ciclodextrina (HPCD) (149 μg/kg, N=4) (painel superior), Losartan (1 mg/kg; N=5) (painel central), ou Ang-(1-7)/HPCD + Losartan (N=5) (painel inferior). O efeito desta administração foi seguido por telemetria por 12h. T p < 0.05 em relação à Ang-(1-7)/HPCD; * p < 0.05 em relação ao anti-hipertensivo (ANOVA com dois fatores, seguida de Bonferroni pós-teste). A co-administração de Losartan e Ang-(1-7) resultou em uma diminuição da MAP em comparação com os experimentos controle.Co-administration of the angiotensin II receptor blocker (ARB) Losartan and Anq-(1-7) decreases blood pressure The graphs in FIGURE 1 show the change in mean arterial pressure (MAP) in spontaneously hypertensive rats after single oral administration of Ang-(1-7)/hydroxypropyl-β-cyclodextrin (HPCD) (149 μg/kg, N=4) (top panel), Losartan (1 mg/kg; N=5) (middle panel), or Ang -(1-7)/HPCD + Losartan (N=5) (bottom panel). The effect of this administration was followed by telemetry for 12 h. T p < 0.05 with respect to Ang-(1-7)/HPCD; * p < 0.05 in relation to antihypertensive drug (two-way ANOVA, followed by post-test Bonferroni). Co-administration of Losartan and Ang-(1-7) resulted in a decrease in MAP compared to control experiments.

Example 3

A co-administração do inibidor de ECA Enalapril e Ang-(1-7) diminui a pressão arterial Os gráficos da FIGURA 2 mostram a variação da pressão arterial média (MAP) em ratos espontaneamente hipertensivos após administração oral única de Ang-(1-7)/HPCD (147 μg/kg, N=4) (painel superior), Enalapril (2 mg/kg; N=3) (painel central), ou Ang-(1-7)/HPCD + Enalapril (N=4) (painel inferior). O efeito desta administração foi seguido por telemetria por 12h. T p < 0.05 em relação à Ang-(1-7)/HPCD; * p < 0.05 em relação ao anti-hipertensivo (ANOVA com dois fatores, seguida de Bonferroni pós-teste). A co- administração de Enalapril e Ang-(1-7) resultou em uma diminuição da MAP em comparação com os experimentos controle.Co-administration of the ACE inhibitor Enalapril and Ang-(1-7) decreases blood pressure The graphs in FIGURE 2 show the change in mean arterial pressure (MAP) in spontaneously hypertensive rats after single oral administration of Ang-(1- 7)/HPCD (147 μg/kg, N=4) (top panel), Enalapril (2 mg/kg; N=3) (middle panel), or Ang-(1-7)/HPCD + Enalapril (N= 4) (bottom panel). The effect of this administration was followed by telemetry for 12 h. T p < 0.05 with respect to Ang-(1-7)/HPCD; * p < 0.05 in relation to antihypertensive drug (two-way ANOVA, followed by post-test Bonferroni). Co-administration of Enalapril and Ang-(1-7) resulted in a decrease in MAP compared to control experiments.

Example 4

A co-administração do beta-bloqueador Atenolol e Ang-(1-7) diminui a pressão arterialCo-administration of the beta-blocker Atenolol and Ang-(1-7) lowers blood pressure

Os gráficos da FIGURA 3 mostram a variação da pressão arterial média (MAP) em ratos espontaneamente hipertensivos após administração oral única de Ang-(1-7)/HPCD (147 μg/kg, N=8) (painel superior), Atenolol (3 mg/kg; N=5) (painel central), ou Ang-(1-7)/HPCD + Atenolol (N=5) (painel inferior). O efeito desta administração foi seguido por telemetria por 12h. T p < 0.05 em relação à Ang-(1-7)/HPCD; * p < 0.05 em relação ao anti-hipertensivo (ANOVA com dois fatores, seguida de Bonferroni pós-teste). A co-administração de Atenolol e Ang-(1-7) resultou em uma diminuição da MAP em comparação com os experimentos controle.The graphs in FIGURE 3 show the change in mean arterial pressure (MAP) in spontaneously hypertensive rats after single oral administration of Ang-(1-7)/HPCD (147 μg/kg, N=8) (upper panel), Atenolol ( 3 mg/kg; N=5) (middle panel), or Ang-(1-7)/HPCD + Atenolol (N=5) (bottom panel). The effect of this administration was followed by telemetry for 12 h. T p < 0.05 with respect to Ang-(1-7)/HPCD; * p < 0.05 in relation to antihypertensive drug (two-way ANOVA, followed by post-test Bonferroni). Co-administration of Atenolol and Ang-(1-7) resulted in a decrease in MAP compared to control experiments.

Os gráficos da FIGURA 4 mostram a variação da pressão arterial média (MAP) em ratos espontaneamente hipertensivos durante urna semana de administração oral diária de Ang-(1-7)/HPCD (147 μg/kg, N=8), Atenolol (3 mg/kg; N=5), ou Ang-(1-7)/HPCD + Atenolol (N=6). Os valores diurnos são mostrados nos gráficos da esquerda, e os efeitos noturnos são mostrados nos gráficos da direita, T p < 0.05 em relação à Ang-(1-7)/HPCD (ANOVA com dois fatores, seguida de Bonferroni pós-teste). A co-administração de Atenolol e Ang-(1-7) resultou em uma diminuição da MAP em comparação com os experimentos controle.The graphs in FIGURE 4 show the change in mean arterial pressure (MAP) in spontaneously hypertensive rats during one week of daily oral administration of Ang-(1-7)/HPCD (147 μg/kg, N=8), Atenolol (3 mg/kg; N=5), or Ang-(1-7)/HPCD + Atenolol (N=6). Daytime values are shown in the left graphs, and night effects are shown in the right graphs, T p < 0.05 with respect to Ang-(1-7)/HPCD (two-way ANOVA followed by post-test Bonferroni) . Co-administration of Atenolol and Ang-(1-7) resulted in a decrease in MAP compared to control experiments.

Os gráficos da FIGURA 6 mostram a variação da pressão arterial média (MAP) em ratos espontaneamente hipertensivos durante quatro semanas de administração oral diária de Ang-(1-7)/HPCD (30 μg/kg, N=3), Atenolol (3 mg/kg; N=5), ou Ang-(1-7)/HPCD + Atenolol (N=6). Os valores diurnos são mostrados nos gráficos da esquerda, e os efeitos noturnos são mostrados nos gráficos da direita, T p < 0.05 em relação à Ang-(1-7)/HPCD (ANOVA com dois fatores, seguida de Bonferroni pós-teste). A co- administração de Atenolol e Ang-(1-7) resultou em uma diminuição da MAP em comparação com os experimentos controle.The graphs in FIGURE 6 show the change in mean arterial pressure (MAP) in spontaneously hypertensive rats during four weeks of daily oral administration of Ang-(1-7)/HPCD (30 μg/kg, N=3), Atenolol (3 mg/kg; N=5), or Ang-(1-7)/HPCD + Atenolol (N=6). Daytime values are shown in the left graphs, and night effects are shown in the right graphs, T p < 0.05 with respect to Ang-(1-7)/HPCD (two-way ANOVA followed by post-test Bonferroni) . Co-administration of Atenolol and Ang-(1-7) resulted in a decrease in MAP compared to control experiments.

A co-administração do beta-bloqueador Atenolol e Anq-(1-7) diminui a pressão arterial diastólica Os gráficos da FIGURA 7 mostram a variação da pressão arterial diastólica (DAP) em ratos espontaneamente hipertensivos durante quatro semanas de administração oral diária de Ang-(1-7)/HPCD (30 μg/kg, N=3), Atenolol (3 mg/kg; N=5), ou Ang-(1-7)/HPCD + Atenolol (N=5). Os valores diurnos são mostrados nos gráficos da esquerda, e os efeitos noturnos são mostrados nos gráficos da direita, T p < 0.05 em relação à Ang-(1-7)/HPCD (ANOVA com dois fatores, seguida de Bonferroni pós-teste). A co- administração de Atenolol e Ang-(1-7) resultou em uma diminuição da DAP em comparação com os experimentos controle.Co-administration of the beta-blocker Atenolol and Anq-(1-7) decreases diastolic blood pressure The graphs in FIGURE 7 show the variation in diastolic blood pressure (DAP) in spontaneously hypertensive rats during four weeks of daily oral administration of Ang -(1-7)/HPCD (30 µg/kg, N=3), Atenolol (3 mg/kg; N=5), or Ang-(1-7)/HPCD + Atenolol (N=5). Daytime values are shown in the left graphs, and night effects are shown in the right graphs, T p < 0.05 with respect to Ang-(1-7)/HPCD (two-way ANOVA followed by post-test Bonferroni) . Co-administration of Atenolol and Ang-(1-7) resulted in a decrease in DAP compared to control experiments.

A co-administração do beta-bloqueador Atenolol e Anq-(1-7) diminui a frequência cardíaca Os gráficos da FIGURA 8 mostram a variação da frequência cardíaca (CF) em ratos espontaneamente hipertensivos durante quatro semanas de administração oral diária de Ang-(1-7)/HPCD (30 μg/kg, N=3), Atenolol (3 mg/kg; N=5), ou Ang-(1-7)/HPCD + Atenolol (N=5). A média dos valores experimentais semanais é mostrada em relação aos valores semanais dos controles. Os valores diurnos são mostrados nos gráficos da esquerda, e os efeitos noturnos são mostrados nos gráficos da direita, T p < 0.05 em relação à Ang-(1-7)/HPCD (ANOVA com dois fatores, seguida de Bonferroni pós-teste). A co-administração de Atenolol e Ang-(1-7) resultou em uma diminuição da frequência cardíaca em comparação com os experimentos controle.Co-administration of the beta-blocker Atenolol and Anq-(1-7) decreases heart rate The graphs in FIGURE 8 show the change in heart rate (FC) in spontaneously hypertensive rats during four weeks of daily oral administration of Ang-( 1-7)/HPCD (30 µg/kg, N=3), Atenolol (3 mg/kg; N=5), or Ang-(1-7)/HPCD + Atenolol (N=5). The mean of the weekly experimental values is shown in relation to the weekly values of controls. Daytime values are shown in the left graphs, and night effects are shown in the right graphs, T p < 0.05 with respect to Ang-(1-7)/HPCD (two-way ANOVA followed by post-test Bonferroni) . Co-administration of Atenolol and Ang-(1-7) resulted in a decrease in heart rate compared to control experiments.

Example 5

A co-administração do inibidor de renina Pepstatina e Anq-(1-7) diminui a pressão arterial Linhagem: Ratos transgênicos hipertensos superexpressando o gene renina [TG(mREN2)27], Fonte provedora: CEBIO - Centro de Bioterismo do Departamento de Fisiologia e Biofísica do Instituto de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Minas Gerais. Sexo e idade: Machos de 12 a 13 semanas (no momento da cirurgia). Aclimatização: Os animais foram ambientados em gaiolas individuais com livre acesso a alimento e água.Co-administration of the renin inhibitor Pepstatin and Anq-(1-7) reduces blood pressure. and Biophysics from the Institute of Biological Sciences of the Federal University of Minas Gerais. Gender and age: Males 12 to 13 weeks (at the time of surgery). Acclimatization: The animals were housed in individual cages with free access to food and water.

A pressão arterial sistólica (SAP), diastólica (DAP), média (MAP), e a frequância cardíaca (CF) foram medidas de forma invasiva. Um catéter de polietileno (PE50) foi introduzido na artéria femoral esquerda para registro destes parâmetros cardiovasculares via transdutor (MP150, Biopac Systems, Inc.). Outro catéter foi inserido na veia cava inferior através da veia femoral para injeção de fármacos.Systolic (SAP), diastolic (DAP), mean (MAP) blood pressure, and heart rate (FC) were measured invasively. A polyethylene catheter (PE50) was introduced into the left femoral artery to record these cardiovascular parameters via transducer (MP150, Biopac Systems, Inc.). Another catheter was inserted into the inferior vena cava through the femoral vein for drug injection.

Os gráficos da FIGURA 9 mostram a variação da pressão arterial média (MAP) em machos [TG(mREN2)27] após administração oral única de Ang-(1-7)/ HPCD (30μg/kg, N=3) 120 minutos após pepstatina (300μg/kg) (painel inferior) ou 120 min após excipiente (N=3) (gráfico superior direito). O gráfico superior esquerdo mostra a variação de MAP após administração única de pepstatina (N=3).The graphs in FIGURE 9 show the change in mean arterial pressure (MAP) in males [TG(mREN2)27] after single oral administration of Ang-(1-7)/HPCD (30μg/kg, N=3) 120 minutes after pepstatin (300μg/kg) (lower panel) or 120 min after excipient (N=3) (upper right graph). The upper left graph shows the MAP change after a single administration of pepstatin (N=3).

A administração de Ang-(1-7) após pepstatina resultou em uma diminuição da MAP em comparação aos experimentos controle.Administration of Ang-(1-7) after pepstatin resulted in a decrease in MAP compared to control experiments.

Example 6

A co-administração do bloqueador de canal de cálcio Verapamil e Ang- (1-7) diminui a resposta vasoconstritora da Ang II Linhagem: ratos Wistar normotensos Fonte provedora: CEBIO - Centro de Bioterismo do Departamento de Fisiologia e Biofísica do Instituto de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Minas Gerais. Sexo e idade: Machos de 12 a 13 semanas (no momento da cirurgia). Aclimatização: Os animais foram ambientados em gaiolas individuais com acesso livre a alimento e água.Co-administration of the calcium channel blocker Verapamil and Ang-(1-7) decreases the vasoconstrictor response of Ang II. from the Federal University of Minas Gerais. Gender and age: Males 12 to 13 weeks (at the time of surgery). Acclimatization: The animals were housed in individual cages with free access to food and water.

Os experimentos foram realizados em rator Wistar machos conscientes. Vinte e quatro horas antes, sob anestesia intraperitoneal com tribromoetanol 2,5% (1,0 mL/0,1 kg), implantou-se um cateter de polietileno (PE-10 conectado a PE-50) na aorta abdominal, através da artéria femoral, para a medida da pressão arterial média (MAP). Outro cateter foi introduzido na veia femoral para infusões intravenosas e injeções. Após recuperação da 5 anestesia, os ratos foram mantidos em gaiolas individuais, com acesso livre a alimento e água, até o fim dos experimentos. A pressão arterial média foi monitorada por um transdutor de estado sólido “strain gauge” (extensômetro) conectado a um computador, através de um sistema de aquisição de dados (MP 100; BIOPAC Systems, Inc, Santa Barbara, Calif).The experiments were carried out in conscious male Wistar rats. Twenty-four hours before, under intraperitoneal anesthesia with 2.5% tribromoethanol (1.0 mL/0.1 kg), a polyethylene catheter (PE-10 connected to PE-50) was implanted in the abdominal aorta, through the femoral artery, for the measurement of mean arterial pressure (MAP). Another catheter was introduced into the femoral vein for intravenous infusions and injections. After recovery from anesthesia, the rats were kept in individual cages, with free access to food and water, until the end of the experiments. Mean arterial pressure was monitored by a solid-state strain gauge transducer connected to a computer through a data acquisition system (MP 100; BIOPAC Systems, Inc, Santa Barbara, Calif).

A resposta vasoconstritora de Ang II foi realizada por injeção intravenosa seqüencial de Ang II (5, 10, 20, 40 ng). Foi permitido um intervalo de dois minutos entre cada injeção de Ang II. Anteriormente à série de injeções de Ang II, os ratos foram tratados por infusão intravenosa durante 20 minutos de: excipiente (salina isotônica, NaCI 0,9%); Ang-(1-7) (3nmol/min); Verapamil (20μg/min); ou Ang-(1-7) combinada com Verapamil.The Ang II vasoconstrictor response was performed by sequential intravenous injection of Ang II (5, 10, 20, 40 ng). An interval of two minutes was allowed between each injection of Ang II. Prior to the series of Ang II injections, rats were treated by intravenous infusion over 20 minutes of: excipient (isotonic saline, 0.9% NaCI); Ang-(1-7) (3nmol/min); Verapamil (20μg/min); or Ang-(1-7) combined with Verapamil.

A Ang (1-7) isolada não modificou a resposta de Ang II. O Verapamil reduziu a resposta vasoconstritora de Ang II e este efeito foi potencializado pela co-administração de Ang (1-7) (FIGURA 10).Ang (1-7) alone did not modify the Ang II response. Verapamil reduced the vasoconstrictor response of Ang II and this effect was potentiated by the co-administration of Ang (1-7) (FIGURE 10).

Claims

1. Pharmaceutical composition for treating arterial hypertension, characterized in that it comprises angiotensin (1-7) in a formulation comprising cyclodextrins or cyclodextrin derivatives, and an antihypertensive selected from the group comprising angiotensin II receptor blockers, or inhibitors of ACE or beta-blockers or renin inhibitors or calcium channel blockers, and pharmaceutically acceptable excipients, where the mass ratio of angiotensin (1-7) to antihypertensive is between 1:100 and 1:7.

Pharmaceutical composition for treating arterial hypertension, according to claim 1, characterized in that the beta-blocker is selected from a group comprising Alprenolol, Carteolol, Levobunolol, Mepindolol, Metipranolol, Nadolol, Oxprenolol, Penbutolol, Pindolol, Propranolol, Sotalol , Timolol, Acebutolol, Atenolol, Betaxolol, Bisoprolol, Esmolol, Metoprolol, Nebivolol, Carvedilol, Celiprolol, Labetalol and Butaxamine.

Pharmaceutical composition for treating arterial hypertension, according to claim 1, characterized in that the calcium channel blocker is selected from a group comprising Amlodipine, Felodipine, Nicardipine, Nifedipine, Nimodipine, Nisoldipine, Nitrendipine, Lacidipine, Lercanidipine, Isradipine , Iercanidipine, Verapamil, Gallopamil and Diltiazem.

Pharmaceutical composition for treating arterial hypertension, according to claim 1, characterized in that the angiotensin II receptor blocker is selected from a group comprising Candesartan, Eprosartan, Irbesartan, Losartan, Olmesartan, Telmisartan and Valsartan.

Pharmaceutical composition for treating arterial hypertension, according to claim 1, characterized in that the ACE inhibitor is selected from a group comprising Captopril, Enalapril, Ramipril, Quinapril, Perindopril, Lisinopril, Benazepril, Trandolapril and Fosinopril.

6. Pharmaceutical composition for the treatment of arterial hypertension, according to claim 1, characterized in that the renin inhibitor is renin antibodies, synthetic derivatives of renin precursor, pepstatin or angiotensinogen analogues.

A pharmaceutical composition for treating arterial hypertension, according to claim 1, characterized in that it is administered orally, inhalation, intramuscular, intravenous, subcutaneous or topical injection or as an implantable device.