BRPI0923273B1

BRPI0923273B1 - AGENT AND METHODS FOR PRODUCTION AND STABILIZATION

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Publication number: BRPI0923273B1
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Publication date: 2017-08-22

Description

AGENTE ANTITUMOR E MÉTODOS PARA SUA PRODUÇÃO E ESTABILIZAÇÃO. A invenção refere-se aos medicamentos, mais especificamente aos medicamentos antitumorais baseados em uma solução aquosa de compostos de platina que podem ser usados no tratamento de tumores malignos, e também aos métodos para sua produção e estabilização.ANTITUMOR AGENT AND METHODS FOR PRODUCTION AND STABILIZATION. The invention relates to medicaments, more specifically to antitumor drugs based on an aqueous solution of platinum compounds that can be used in the treatment of malignant tumors, and also to methods for their production and stabilization.

Entre os fármacos antitumorais amplamente aplicados na prática médica, um dos mais eficazes é baseado em uma solução aquosa de um complexo de monômeros de Cisplatina. Os ions de platina atuam como agente ativo nestas drogas, coordenado com os portadores ligantes que são absorvidos pelas células tumorais praticamente cora a mesma intensidade daqueles outros normais. É por isso que as drogas contendo Cisplatina são notórias não somente pela alta atividade antitumoral, mas também pela alta toxicidade. Não menos ativa, mas muito menos tóxicas são as drogas antitumorais baseadas em uma solução aquosa de um complexo polimérico de platina com ácido desoxirribonucléico (Pt-DNA), representando um produto de reação de cisplatina e DNA, onde um dos transportadores ligantes dos ions de platina é um nucleotideo incorporado na estrutura de espirais de dois filamentos das macromoléculas de DNA, intensamente absorvido apenas pelas células tumorais de rápida reprodução e, conseqüentemente, as drogas antitumorais que contém ligações Pt-DNA afetam tecidos tumorais com alto grau de seletividade com danos insignificantes nos tecidos normais [Treatment of nonresectable tumors of organs of an abdominal cavity. S.A.Shalimov, etc. 1998, p. 103]. 0 complexo monomérico de Cisplatina e o complexo polimérico Pt-DNA, que são substâncias básicas das drogas, não são suficientemente solúveis e são quimicamente instáveis na água. Portanto, os aditivos farmacêuticos são adicionados aos medicamentos baseados em suas soluções aquosas. Como aditivos eles usam sais farmacologicamente aceitáveis, reguladores de pH e outros agentes de estabilização, de preferência aqueles que à custa da sua própria atividade biológica mostrada simultaneamente com a capacidade de obtenção da solubilidade e estabilidade química da substância básica, possibilita fornecer eficácia ao tratamento e melhor tolerância.Among the widely applied antitumor drugs in medical practice, one of the most effective is based on an aqueous solution of a cisplatin monomer complex. Platinum ions act as an active agent in these drugs, coordinated with the ligand carriers that are absorbed by the tumor cells at about the same intensity as those of other normals. This is why Cisplatin-containing drugs are notorious not only for their high antitumor activity, but also for their high toxicity. No less active, but much less toxic are antitumor drugs based on an aqueous solution of a deoxyribonucleic acid platinum polymeric complex (Pt-DNA), representing a reaction product of cisplatin and DNA, where one of the ligand transporters of Platinum is a nucleotide incorporated into the two-stranded spiral structure of DNA macromolecules, intensely absorbed only by rapidly reproducing tumor cells and, consequently, antitumor drugs containing Pt-DNA ligands affect highly selective tumor tissues with negligible damage. in normal tissues [Treatment of nonresectable tumors of organs of an abdominal cavity. S.A.Shalimov, etc. 1998, p. 103]. Cisplatin monomeric complex and Pt-DNA polymeric complex, which are basic substances of drugs, are not sufficiently soluble and are chemically unstable in water. Therefore, pharmaceutical additives are added to medicines based on their aqueous solutions. As additives they use pharmacologically acceptable salts, pH regulators and other stabilizing agents, preferably those which at the expense of their own biological activity shown concurrently with the ability to achieve solubility and chemical stability of the basic substance, make it possible to provide effective treatment and treatment. better tolerance.

Uma droga antitumoral conhecida é baseada em uma solução aquosa dos derivados de platina com poliânion de ácido desoxirribonucléico in si tu (Pt-DNA) (substância ativa) que inclui macromoléculas de Pt-DNA não-associadas com o tamanho máximo de medida de 0,05 a 0,15 microns, cloreto de sódio, citrato de sódio, cloreto de amônio e fluorouracil na forma de sal de sódio (substância auxiliar) na proporção dos componentes em uma solução aquosa, peso em %: Pt -DNA - 0,130 a 0,153 cloreto de sódio - 0,080 a 0,090 citrato de sódio - 0,040 a 0,053 cloreto de amônio - 0,015 a 0,018 fluorouracil na forma de sal de sódio- 0,025 a 0,370 [ver o pedido de patente ucraniana W 70456, publicado em 15/10/2004, requerentes Shalimov S.O., Voltchenskova II, Maidanevitch NM].A known antitumor drug is based on an aqueous solution of the deoxyribonucleic acid polyanion in situ platinum derivatives (Pt-DNA) (active substance) which includes unassociated Pt-DNA macromolecules with a maximum size of 0, 05 to 0.15 microns, sodium chloride, sodium citrate, ammonium chloride and fluorouracil in the form of sodium salt (auxiliary substance) in the ratio of components in an aqueous solution, weight%: Pt -DNA - 0,130 to 0,153 sodium chloride - 0.080 to 0.090 sodium citrate - 0.040 to 0.053 ammonium chloride - 0.015 to 0.018 fluorouracil in the form of sodium salt - 0.025 to 0.370 [see Ukrainian patent application W 70456, published 15/10/2004, Applicants Shalimov SO, Voltchenskova II, Maidanevitch NM].

Como as pesquisas têm mostrado, a solução aquosa de uma droga conhecida tem pH de 6,5 a 7,5 e densidade de 1,0012 a 1,0016 g/sm3 na qual as moléculas não-associadas do composto Pt-DNA tem maior atividade antitumoral, e fluorouracil tem capacidade de fortalecer essa atividade e reduzir a toxicidade dos derivados de platina, se a substância recebida é mantida na faixa de temperaturas acima de 35°C. Reduzir a temperatura faz com que as moléculas das bases do Pt-DNA entrem em interações intramoleculares de caráter cooperativo mais intensamente do que nas interações intermoleculares com ânions relacionados com fluorouracil de sal de sódio. Conseqüentemente, as estruturas espaciais das moléculas de Pt-DNA são condensadas de forma irreversível. A Condensação das estruturas intramoleculares que contêm átomos muito pequenos de platina com densidade de 21,45 g/sm3, leva à redução do tamanho das estruturas espaciais das moléculas de Pt-DNA de tal forma que sua densidade de fluido excede a densidade da solução, e é definida pela gravidade, sob a forma de deposição.As research has shown, the aqueous solution of a known drug has a pH of 6.5 to 7.5 and a density of 1.0012 to 1.0016 g / sm3 in which the unassociated molecules of the Pt-DNA compound have higher antitumor activity, and fluorouracil has the ability to strengthen this activity and reduce the toxicity of platinum derivatives if the incoming substance is kept in the temperature range above 35 ° C. Lowering the temperature causes Pt-DNA base molecules to enter cooperative intramolecular interactions more intensely than intermolecular interactions with sodium salt fluorouracil-related anions. Consequently, the spatial structures of Pt-DNA molecules are irreversibly condensed. Condensation of intramolecular structures containing very small platinum atoms with a density of 21.45 g / sm3 leads to a reduction in the size of the Pt-DNA molecules' spatial structures so that their fluid density exceeds the density of the solution, and is defined by gravity in the form of deposition.

Assim, os ânions de fluorouracil são mais propensos a reagir com os prótons da solução do que nos baseados no Pt- DNA e, conseqüentemente, passam para uma condição de moléculas neutras de sua própria base, cuja solubilidade em água é limitada, que se ajusta na forma de cristais e se dissolve com o aumento da temperatura. A sedimentação das substâncias ativas e auxiliares provoca redução da sua concentração na solução do agente, redução da sua atividade antitumoral, aumenta a força terapêutica e limita sua exclusividade de uso em aplicações locais e infusões intra-abdominais, excluindo a infusão intra-arterial, intravenosa e uma forma de administração intersticial. A base de fluorouracil é conhecida por ser usada como fragmento estrutural de tegafur - precursor de fluorouracil no organismo - para preparação da composição antitumor contendo tegafur e uracil na razão molar de 1:4 [ver patente US 5534513, IPC 7 A61K 31/505, requerente: TAIHO PHARMACEUTICAL_CO LTD (JP) , publicada em 09/07/1996] . A uréia é conhecida por ser utilizada como diurético, queratolítico, um agente redutor da pressão intracraniana e intra-ocular [M.M.Turkevich. Pharmaceutical chemistry, 1973, p. 45], e também como excipiente, acrescentada às formas farmacêuticas sólidas de administração peroral.Thus, fluorouracil anions are more likely to react with solution protons than they are based on Pt-DNA and, consequently, move to a condition of neutral molecules of their own base, which have limited solubility in water. in the form of crystals and dissolves with increasing temperature. The sedimentation of active and auxiliary substances causes a reduction in their concentration in the agent solution, a reduction in their antitumor activity, increases therapeutic strength and limits their exclusive use in local applications and intra-abdominal infusions, excluding intraarterial, intravenous infusion. and a form of interstitial administration. The fluorouracil base is known to be used as a structural fragment of tegafur - fluorouracil precursor in the body - for preparation of the tegafur and uracil-containing antitumor composition at a 1: 4 molar ratio [see US Patent 5534513, IPC 7 A61K 31/505, Applicant: TAIHO PHARMACEUTICAL_CO LTD (JP), published 09/07/1996]. Urea is known to be used as a diuretic, keratolytic, an intracranial and intraocular pressure reducing agent [M.M.Turkevich. Pharmaceutical chemistry, 1973, p. 45], and also as an excipient, added to solid dosage forms of peroral administration.

Altas concentrações de uréia e aumento do pH para mais de 11 são conhecidos por serem utilizados para desenrolar as fitas condensadas do DNA de cadeia dupla natural [A.Lenindzher. Biochemistry, 1976, p. 737]. O hidróxido de sódio é conhecido por ser usado em farmácia para controlar o pH de soluções de agentes terapêuticos. Além disso, sabe-se que sob a influência das elevadas concentrações de uréia e em pH> 11,0 as fitas condensadas do DNA de cadeia dupla natural se desespiralizam [A.Lenindzher. Biochemistry, 1976, p. 737] .High urea concentrations and an increase in pH above 11 are known to be used to unwind the condensed strands of natural double stranded DNA [A.Lenindzher. Biochemistry, 1976, p. 737]. Sodium hydroxide is known to be used in pharmacy to control the pH of therapeutic agent solutions. Furthermore, it is known that under the influence of high urea concentrations and at pH> 11.0 the natural double stranded DNA stranded strands de-spiralize [A.Lenindzher. Biochemistry, 1976, p. 737].

No entanto, em fontes especificas nada é dito sobre a aplicação de uracil, uréia e hidróxido de sódio, como agentes de prevenção de condensações intramoleculares de cadeias condensadas de compostos de metais com o DNA. Não se sabe também sobre a aplicação de uréia nas formas de dosagens farmacêuticas para administração parenteral. As faixas de concentração efetiva e a taxa da substância ativa de fluorouracil e sais em uma solução aquosa do fármaco aqui pleiteado, correspondem aos índices especificados no desenvolvimento de uma droga bem conhecida para infusões intra-abdominais, intravenosa e infusão intra-arterial, que são mantidas à temperatura entre 35 a 40°C. As faixas de concentração de uracil e uréia são determinadas pela razão molar de fluorouracil, uracil e uréia de 1:1:1. As faixas de concentração de hidróxido de sódio são limitadas por baixo, com valor de pH que exclui a possibilidade de protonação do fluorouracil, e limitadas acima pelos requisitos farmacêuticos. Não existe outra maneira conhecida se obter uma droga antitumoral através da manutenção das fibras do DNA durante 16 a 26 horas em solução de citrato de sal que contém cloreto de sódio e citrato de sódio, dissolvendo fibras na mistura mecânica e aquecendo a solução de DNA para 70 a 90°C, introduzindo gradualmente a solução de citrato de sal de cis-diclorodiaminoplatina (DDP) aquecida a mesma temperatura para a solução de DNA aquecida, além de uma solução aquosa de sal de sódio de fluorouracil para a mistura e um controle termostático de mistura das soluções de DNA e DDP em 70 a 90°C durante 15 a 20 minutos [ver a patente Ucraniana N* 70 456, publicada em 15/10/2004, requerentes: Shalimov S.O., Voltchenskova I.I., Maidanevitch N.M.]. A adição de uma solução aquosa de sal de sódio de fluorouracil para mistura de soluções de DNA e DDP antes do controle termostático não promove a intensificação das interações intermoleculares das moléculas de Pt-DNA com as moléculas relacionadas da solução e enfraquecimento das interações intramoleculares de caráter cooperativo nelas e não exclui a possibilidade de interação dos ânions de fluorouracil com os prótons da solução a temperaturas inferiores a 35°C. E assim, a forma bem conhecida, não impede a condensação intramolecular irreversível das estruturas espaciais do Pt-DNA e não interfere na protonação dos ânions de fluorouracil na solução da droga. Para evitar estes fenômeno é necessário executar operações tecnológicas adicionais na introdução da droga na solução de componentes que elevaria seu pH bem como a densidade antes do controle termostático. Além disso, é possível usar o agente antitumoral recebido pela forma bem conhecida, somente a temperatura de 35 a 37°C enquanto o declínio da temperatura diminui a atividade do agente. Adicionalmente, a alta temperatura de um agente dificulta o seu armazenamento, transporte e utilização.However, in specific sources nothing is said about the application of uracil, urea and sodium hydroxide as agents for preventing intramolecular condensation of condensed chains of metal compounds with DNA. It is also unknown about the application of urea in pharmaceutical dosage forms for parenteral administration. The effective concentration ranges and the rate of the active substance of fluorouracil and salts in an aqueous solution of the drug claimed here correspond to the indices specified in the development of a well-known drug for intra-abdominal, intravenous and intra-arterial infusions, which are kept at a temperature between 35 to 40 ° C. The concentration ranges for uracil and urea are determined by the 1: 1: 1 molar ratio of fluorouracil, uracil and urea. Sodium hydroxide concentration ranges are limited below, with a pH value excluding the possibility of fluorouracil protonation, and limited above by pharmaceutical requirements. There is no other known way to obtain an antitumor drug by maintaining the DNA fibers for 16 to 26 hours in salt citrate solution containing sodium chloride and sodium citrate, dissolving fibers in the mechanical mixture and heating the DNA solution to 70 to 90 ° C, gradually introducing the warmed cis-dichlorodiaminoplatin (DDP) salt citrate solution at the same temperature as the heated DNA solution, an aqueous fluorouracil sodium salt solution into the mixture and a thermostatic control mixing DNA and DDP solutions at 70 to 90 ° C for 15 to 20 minutes [see Ukrainian Patent No. 70,456, published 10/15/2004, Applicants: Shalimov SO, Voltchenskova II, Maidanevitch NM]. The addition of an aqueous fluorouracil sodium salt solution to mix DNA and DDP solutions prior to thermostatic control does not promote intensification of intermolecular interactions of Pt-DNA molecules with related solution molecules and weakening intramolecular character interactions. cooperative in them and does not exclude the possibility of interaction of fluorouracil anions with the protons of the solution at temperatures below 35 ° C. Thus, the well-known form does not prevent irreversible intramolecular condensation of the Pt-DNA space structures and does not interfere with the protonation of fluorouracil anions in the drug solution. To avoid these phenomena it is necessary to carry out additional technological operations on introduction of drug in solution of components which would raise its pH as well as density before thermostatic control. In addition, it is possible to use the received antitumor agent in the well known form, only at a temperature of 35 to 37 ° C while temperature decline decreases the activity of the agent. Additionally, the high temperature of an agent makes it difficult to store, transport and use it.

Existe uma maneira conhecida de estabilização de uma droga antitumoral baseada em uma solução aquosa de Cisplatina com concentração de 0,1 a 1,0 mg/ml em que o uso do cloreto de sódio na quantidade 1 a 20 mg/ml, ácido clorídrico com pH de 2,0 a 3,0 e manitol (diurético) na quantidade de 2 a 150 mg/ml [Patente URSS 1192596 A, publicada em 15 de novembro de 1985]. São conhecidas soluções aquosas do composto de Pt-DNA estabilizado com cloreto de sódio e citrato de sódio (agente de anticoagulação do sangue) , nas quantidades correspondentes a razão molar da platina, fósforo do DNA, cloreto de sódio e citrato de sódio 4:6:30:3 [Patentes ucranianas 60,597, publicada em 15 de julho de 2005, 61,543, publicada em 15 de agosto de 2005; 66476 A, publicada em 17 de maio de 2004] .There is a known way of stabilizing an antitumor drug based on an aqueous solution of Cisplatin with a concentration of 0.1 to 1.0 mg / ml wherein the use of sodium chloride in the amount 1 to 20 mg / ml, hydrochloric acid with pH 2.0 to 3.0 and mannitol (diuretic) in the amount of 2 to 150 mg / ml [USSR Patent 1192596 A, published November 15, 1985]. Aqueous solutions of Pt-DNA compound stabilized with sodium chloride and sodium citrate (blood anticoagulating agent), in the amounts corresponding to platinum molar ratio, DNA phosphorus, sodium chloride and sodium citrate 4: 6 : 30: 3 [Ukrainian Patents 60,597, published July 15, 2005, 61,543, published August 15, 2005; 66476 A, issued May 17, 2004].

No entanto, as drogas antitumorais mais eficazes e menos tóxicas baseadas em uma solução aquosa (derivativos) de Pt-DNA (derivativos) são composições descritas acima na patente ucraniana 70,456. Estas são estabilizadas com cloreto de sódio, citrato de sódio, cloreto de amônio (uma droga que causa a ação expectorante e reforço da ação diurética) e, adicionalmente, o agente de estabilização - sal de sódio de fluorouracil em relação aos componentes acima especificados na solução. 0 sal de sódio de fluorouracil reforça o efeito antitumoral e enfraquece os efeitos tóxicos da substância base, pois é capaz de atuar como modulador da ação farmacológica das macromoléculas de Pt-DNA no organismo e o estabilizador da concentração das macromoléculas de Pt-DNA na solução aquosa da droga.However, the most effective and least toxic antitumor drugs based on an aqueous solution (derivatives) of Pt-DNA (derivatives) are compositions described above in Ukrainian patent 70,456. These are stabilized with sodium chloride, sodium citrate, ammonium chloride (a drug that causes expectorant action and reinforcement of diuretic action) and additionally the stabilizing agent - fluorouracil sodium salt with respect to the components specified above in solution. Fluorouracil sodium salt enhances the antitumor effect and weakens the toxic effects of the base substance as it is able to act as a modulator of the pharmacological action of Pt-DNA macromolecules in the body and stabilize the concentration of Pt-DNA macromolecules in the solution. aqueous drug.

No entanto, a solução aquosa de compostos Pt-DNA nas drogas conhecidas tem pH 6,5 a 7,5 em que o uso do sal de sódio de fluorouracil permite estabilizar a concentração de Pt-DNA na solução em uma temperatura acima de 35°C. A diminuição da temperatura promove o escoamento das macromoléculas de Pt-DNA compostas a partir da solução na forma de deposição e do sal de sódio de fluorouracil sob a forma de cristais da base de fluorouracil que provoca a redução da substância base e a concentração do agente de estabilização na solução da forma de dosagem farmacêutica da droga, influência negativamente sua atividade antitumoral e a eficácia terapêutica. Além disso, limita as suas condições de armazenamento e possibilidades de aplicação em aplicações locais e infusões intraperitoneais, excluindo infusões intravenosas e intra-arteriais, injeções endolinfáticas e forma de administração intersticial. Não há informações sobre o uso de fluorouracil, uracil e a base de uréia na forma de auto-atuação ou em mistura com um destes, ou sobre o uso de reguladores de pH como os agentes que interferem com a alocação de compostos macromoleculares de metais com o DNA das soluções. Também não há informações sobre o uso da uréia na forma de dosagem médica para administração parenteral.However, the aqueous solution of Pt-DNA compounds in known drugs has a pH of 6.5 to 7.5 where the use of fluorouracil sodium salt allows to stabilize the concentration of Pt-DNA in the solution at a temperature above 35Â °. Ç. The decrease in temperature promotes the flow of Pt-DNA macromolecules composed from the solution in the deposition form and the fluorouracil sodium salt as fluorouracil base crystals which causes the reduction of the base substance and the concentration of the agent. of stabilization in the solution of the pharmaceutical dosage form of the drug, negatively influence its antitumor activity and therapeutic efficacy. In addition, it limits its storage conditions and application possibilities in local applications and intraperitoneal infusions, excluding intravenous and intraarterial infusions, endolymphatic injections and form of interstitial administration. There is no information on the use of fluorouracil, uracil and urea-based as self-acting or in admixture with one of them, or on the use of pH regulators as agents that interfere with the allocation of macromolecular metal compounds with the DNA of solutions. There is also no information on the use of urea in medical dosage form for parenteral administration.

As faixas de concentração efetiva e a relação da substância base e sais em solução aquosa estabilizada através do método pleiteado correspondem às concentrações e relações encontradas no desenvolvimento de um método conhecido tendo compostos de Pt-DNA em solução aquosa para infusões intraperitoneal, intravenosa e intra-arterial que têm pH 6,5 a 7,5 e são mantidos em temperatura de 35 a 40°C. As faixas de concentração de fluorouracil, uracil e a base de uréia são determinadas pela razão molar do nucleotídeo Pt-DNA. Fluorouracil, uracil e a base de uréia são 1: (6-12) : (0,6 a 1,2): (0,6 a 1,2). As faixas de concentração do regulador de pH são limitadas por baixo pelos valores que exclui a possibilidade de cristalização da base de fluorouracil, e limitadas por cima pelos requisitos farmacêuticos. O método de estabilização oferecido não permite que as macromoléculas de Pt-DNA e a base de fluorouracil escoem da solução, que por sua vez, oferece a possibilidade de obter drogas antitumorais com tal concentração dos componentes que não alteram suas formas de dosagens farmacêuticas na cura à temperatura dentro de uma faixa de 25 a 5°C por um longo período.The effective concentration ranges and the ratio of base substance and salts in stabilized aqueous solution by the claimed method correspond to the concentrations and ratios found in the development of a known method having Pt-DNA compounds in aqueous solution for intraperitoneal, intravenous and intrauterine infusions. which have a pH of 6.5 to 7.5 and are kept at a temperature of 35 to 40 ° C. Fluorouracil, uracil and urea-based concentration ranges are determined by the molar ratio of the Pt-DNA nucleotide. Fluorouracil, uracil and urea base are 1: (6-12): (0.6 to 1.2): (0.6 to 1.2). The concentration ranges of the pH regulator are limited below by the values which exclude the possibility of crystallization of the fluorouracil base, and limited above by the pharmaceutical requirements. The stabilization method offered does not allow Pt-DNA macromolecules and fluorouracil-based to escape from the solution, which in turn offers the possibility of obtaining antitumor drugs with such concentration of components that do not alter their dosage forms in curing. temperature within a range of 25 to 5 ° C for a long period.

Com base no citado acima, existe uma gama específica de problemas a serem resolvidos por esta invenção.Based on the above, there is a specific range of problems to be solved by this invention.

Um dos problemas consiste na criação de uma droga antitumoral, onde através da adição de uracil, uréia e hidróxido de sódio para um agente conhecido, pode-se alcançar a possibilidade de evitar a condensação intramolecular da substância básica e a protonização da substância auxiliar, evitando assim, a sedimentação e redução da sua concentração na solução na faixa de temperatura de 25 a 15°C, e alcançando o aumento da atividade antitumoral e eficácia terapêutica da droga e na expansão da sua aplicação. 0 segundo problema consiste em desenvolver um modo de obter uma droga antitumoral, onde através do uso de soluções aquosas de uracil, uréia e hidróxido de sódio sob condições tecnológicas correspondentes, chegaremos a atenuação da intensidade das interações intramoleculares de caráter cooperativo nas moléculas de Pt-DNA, por um lado. Por outro lado, teremos aumento da intensidade da interação de suas bases com as moléculas da solução, ou seja, com fluorouracil, uracil e uréia, o que dá uma possibilidade de obtenção de uma droga contendo a substância ativa Pt-DNA cujas moléculas não são condensadas enquanto cura a droga pronta para o uso em uma faixa de temperatura de 25 a 15°C, que por sua vez, evita a sedimentação das macromoléculas da solução. O terceiro problema consiste em encontrar o método de estabilização de drogas antitumorais baseada, em uma solução aquosa de compostos de platina com a discriminação aumentada da ação especificada e o aumento da eficácia terapêutica.One of the problems is the creation of an antitumor drug, where by adding uracil, urea and sodium hydroxide to a known agent, it is possible to avoid intramolecular condensation of the basic substance and protonization of the auxiliary substance, avoiding thus, sedimentation and reduction of its concentration in the solution in the temperature range of 25 to 15 ° C, achieving the increase of antitumor activity and therapeutic efficacy of the drug and the expansion of its application. The second problem is to develop a way to obtain an antitumor drug, where through the use of aqueous solutions of uracil, urea and sodium hydroxide under corresponding technological conditions, we will attenuate the intensity of cooperative intramolecular interactions in Pt- DNA, on the one hand. On the other hand, we will increase the intensity of the interaction of their bases with the solution molecules, that is, with fluorouracil, uracil and urea, which gives us the possibility of obtaining a drug containing the active substance Pt-DNA whose molecules are not. condensate while curing the drug ready for use over a temperature range of 25 to 15 ° C, which in turn prevents sedimentation of the macromolecules in the solution. The third problem is to find the anti-tumor drug stabilization method based on an aqueous solution of platinum compounds with increased discrimination of the specified action and increased therapeutic efficacy.

Os problemas vistos são resolvidos pela presente invenção. 0 primeiro problema é resolvido pelo fato da droga antitumoral baseada em uma solução aquosa dos derivados de platina com poliânion do ácido desoxirribonucléico in situ (Pt-DNA), que inclui macromoléculas de Pt-DNA não-associadas com o tamanho máximo de medida de 0,05 a 0,15 microns, cloreto de sódio, citrato de sódio, cloreto de amônio e fluorouracil na forma de sal de sódio, de acordo com a invenção conter adicionalmente uracil e uréia na razão molar de fluorouracil, uracil e uréia 1:1:1, na proporção dos componentes em uma solução aquosa, peso em %: Pt -DNA - 0,130 a 0,153 cloreto de sódio - 0,080 a 0,090 citrato de sódio - 0,040 a 0,053 cloreto de amônio - 0,015 a 0,018 fluorouracil na forma de sal de sódio - 0,025 a 0,370 uracil - 0,018 a 0,270 uréia - 0,010 a 0,144 e também hidróxido de sódio até obter pH 8,4 a 9,9. 0 segundo problema é resolvido através da manutenção das fibras do DNA durante 16 a 26 horas em uma solução de citrato de sal que contém cloreto de sódio e cloreto de citrato, dissolvendo as fibras na mistura mecânica e aquecendo-as na solução de DNA em 70 a 90 °C, com adição gradual da solução de citrato de sal de cis-diclorodiaminoplatina (DDP) aquecida à mesma temperatura para a solução de DNA aquecida, soluções DDP e DNA de controle termostático misturadas a 70 a 90°C durante 15 a 20 minutos e adição de uma solução aquosa de sal de sódio de fluorouracil para a mistura antes do controle termostático. De acordo com a invenção, antes do controle termostático com uma solução aquosa de sal de sódio de furaracil, devemos introduzir uma solução aquosa de uracil e uma solução de uréia em concentrações que correspondem a razão molar de fluorouracil, uracil e uréia de 1:1:1, e uma solução aquosa de hidróxido de sódio com pH 11,0 a 12,0, e assim a solução é levada a um pH 8,4 a 9,9 com densidade de 1,0054 a 1,0058 g/cm3. O método oferecido para obtenção de uma agente antitumor permite alcançar valores de pH aumentados e densidades da solução que exclui a possibilidade de interação do fluorouracil com os prótons da solução que, por sua vez, permite a obtenção da droga com macromoléculas de Pt-DNA que não são condensadas, com o tamanho máximo de medida de 0,05 a 0,15 microns, a droga está pronta para o uso em uma faixa de temperatura de cura de 25 a 15°C. Aumentando, assim, a densidade da solução evitando a sedimentação das macromoléculas provenientes da solução da droga.The problems seen are solved by the present invention. The first problem is solved by the fact that the antitumor drug based on an aqueous solution of the in situ deoxyribonucleic acid polyanion platinum derivatives (Pt-DNA), which includes non-associated Pt-DNA macromolecules with a maximum size of 0 0.05 to 0.15 microns, sodium chloride, sodium citrate, ammonium chloride and fluorouracil in the form of sodium salt according to the invention further contain uracil and urea in the 1: 1 molar ratio of fluorouracil, uracil and urea. : 1, in the proportion of the components in an aqueous solution, weight%: Pt -DNA - 0.130 to 0.153 sodium chloride - 0.080 to 0.090 sodium citrate - 0.040 to 0.053 ammonium chloride - 0.015 to 0.018 fluorouracil in the form of sodium - 0.025 to 0.370 uracil - 0.018 to 0.270 urea - 0.010 to 0.144 and also sodium hydroxide to pH 8.4 to 9.9. The second problem is solved by maintaining the DNA fibers for 16 to 26 hours in a salt citrate solution containing sodium chloride and citrate chloride by dissolving the fibers in the mechanical mixture and heating them in the DNA solution at 70 ° C. at 90 ° C with gradual addition of the cis-dichlorodiaminoplatin (DDP) salt citrate solution heated at the same temperature to the heated DNA solution, thermostatic control DDP and DNA solutions mixed at 70 to 90 ° C for 15 to 20 minutes and adding an aqueous solution of fluorouracil sodium salt to the mixture before thermostatic control. According to the invention, prior to thermostatic control with an aqueous furaracil sodium salt solution, we must introduce an aqueous uracil solution and a urea solution at concentrations corresponding to 1: 1 fluorouracil, uracil and urea molar ratio. : 1, and an aqueous sodium hydroxide solution with pH 11.0 to 12.0, and thus the solution is brought to pH 8.4 to 9.9 with a density of 1.0054 to 1.0058 g / cm3. . The method offered to obtain an antitumor agent allows to reach increased pH values and solution densities that exclude the possibility of fluorouracil interaction with the protons of the solution which, in turn, allows the drug to be obtained with Pt-DNA macromolecules. are not condensed, with a maximum measurement size of 0.05 to 0.15 microns, the drug is ready for use in a curing temperature range of 25 to 15 ° C. Thus increasing the density of the solution avoiding sedimentation of macromolecules from the drug solution.

Na prática, a droga antitumoral foi recebida da seguinte forma.In practice, the antitumor drug was received as follows.

As fibras de DNA foram mantidas durante 16 a 26 horas em uma solução de citrato de sal, que contendo cloreto de sódio e citrato de sódio. Estas foram dissolvidas em uma mistura mecânica e a solução de DNA aquecida de 70 a 90°C. A solução de citrato de sal de cis-diclorodiaminoplatina (DDP) aquecida à mesma temperatura foi introduzida na solução de DNA aquecida. Então, uma solução aquosa do sal de sódio de fluorouracil foi adicionada à mistura. Além disto, simultaneamente com uma solução aquosa do sal de sódio de fluorouracil foi adicionada uma solução aquosa de uracil e uma solução aquosa de uréia em concentrações que correspondem a razão molar de fluorouracil, uracil e uréia 1:1:1, e uma solução aquosa de hidróxido de sódio com pH 11,0 a 12,0. Através da qual uma solução da droga foi trazida para pH 8,4 a 9,9 e a densidade de 1,0054 a 1,0058/cm3. Depois as misturas das soluções de DNA e DDP foram mantidas em temperaturas de 70 a 90°C durante 15 a 20 minutos.The DNA fibers were kept for 16 to 26 hours in a salt citrate solution containing sodium chloride and sodium citrate. These were dissolved in a mechanical mixture and the DNA solution heated to 70 to 90 ° C. The cis-dichlorodiaminoplatin (DDP) salt citrate solution heated at the same temperature was introduced into the heated DNA solution. Then an aqueous solution of the fluorouracil sodium salt was added to the mixture. In addition, simultaneously with an aqueous solution of the fluorouracil sodium salt, an aqueous solution of uracil and an aqueous solution of urea were added at concentrations corresponding to the 1: 1: 1 molar ratio of fluorouracil, uracil and urea. of sodium hydroxide with pH 11.0 to 12.0. Through which a drug solution was brought to pH 8.4 to 9.9 and density from 1.0054 to 1.0058 / cm3. Then mixtures of DNA and DDP solutions were kept at temperatures of 70 to 90 ° C for 15 to 20 minutes.

Exemplos de obtenção de uma droga antitumoral são apresentados na Tabela 1, onde os exemplos de 1 a 3 se referem à droga pleiteada, e o exemplo 4 à droga conhecida.Examples of obtaining an antitumor drug are presented in Table 1, where examples 1 to 3 refer to the claimed drug, and example 4 to the known drug.

Tabela 1 Símbolos da Tabela: NaCl - cloreto de sódio, Na3Cit -citrato de sódio, NaFu - fluorouracil sob a forma de sal de sódio, Ura - uracil, Uréia - Uréia.Table 1 Table Symbols: NaCl - sodium chloride, Na3Cit - sodium nitrate, NaFu - fluorouracil in the form of sodium salt, Ura - uracil, Urea - Urea.

Com os pesos molares de uracil de 112 g-mole, fluorouracil 153 g-mole, uréia 60 g-mole para o primeiro exemplo o número de moles de uracil é igual a 2,70/112 = 0,024; fluorouracil - 3,70/153 = 0,024; uréia - 1,44/60 = 0,024;With uracil molar weights of 112 g-mole, fluorouracil 153 g-mole, urea 60 g-mole for the first example the number of moles of uracil is 2.70 / 112 = 0.024; fluorouracil - 3.70 / 153 = 0.024; urea - 1.44 / 60 = 0.024;

Para o segundo exemplo, o número das substâncias indicadas é igual a 0,016 e para o terceiro 0,0016. Assim, uma solução aquosa de uracil e uma solução aquosa de uréia foram introduzidas em concentrações correspondentes à razão molar de fluorouracil, uracil e uréia 1:1:1.For the second example, the number of substances indicated is equal to 0.016 and for the third 0.0016. Thus, an aqueous uracil solution and an aqueous urea solution were introduced at concentrations corresponding to the 1: 1: 1 molar ratio of fluorouracil, uracil and urea.

As características da droga pleiteada, dependendo das condições da sua obtenção foram comparadas com as características da droga conhecida. Os resultados são apresentados na Tabela 2, onde os exemplos de 1 a 3 se referem à droga pleiteada, e o exemplo 4 à uma droga conhecida.The characteristics of the claimed drug, depending on the conditions of its obtaining were compared with the characteristics of the known drug. The results are presented in Table 2, where examples 1 to 3 refer to the claimed drug, and example 4 to a known drug.

Tabela 2 As diferenças entre as soluções aquosas da droga pleiteada e conhecida são provadas pelos diferentes valores de pH, que são definidos potenciometricamente e os diferentes valores de densidade definidos através do método do picnômetro. As diferenças, nas estruturas espaciais das moléculas de Pt-DNA, entre a droga conhecida e pleiteada, que são formadas em temperaturas inferiores a 35°C são provadas nos exemplos da tabela com os seus diferentes tamanhos nas estruturas moleculares que, de acordo com os dados submicroscópicos diferem uma das outras de 2 a 3 vezes. 0 tamanho das estruturas moleculares nos exemplos da droga pleiteada corresponde ao tamanho das macromoléculas individuais não-associadas da substância, o que confirma a ausência de condensação intramolecular das moléculas de Pt-DNA da droga mantidas em temperatura entre 25 a 15°C. A atividade antitumoral da droga conhecida e daquela pleiteada foi investigada pelo teste de citotoxicidade no modelo das células cultivadas recebidas de um material cirúrgico do paciente doente com oligodendroastrocitoma maligno do cérebro. As células foram cultivadas em uma mistura nutritiva da estrutura padrão: meio Eagle (40%), soro de bezerros embrionário (30 a 40%) , glicose (800 mg de %) , insulina (0,2 unidades/ml) em uma condição constante da composição do gás e temperatura de 36,5°C em uma câmara com temperatura regulada.Table 2 Differences between the aqueous solutions of the claimed and known drug are proved by the different pH values, which are potentiometrically defined and the different density values defined by the pycnometer method. The differences in the spatial structures of the Pt-DNA molecules between the known and claimed drug, which are formed at temperatures below 35 ° C, are proved in the table examples with their different sizes in molecular structures which, according to Submicroscopic data differ from each other 2 to 3 times. The size of the molecular structures in the claimed drug examples corresponds to the size of the individual unassociated macromolecules of the substance, which confirms the absence of intramolecular condensation of the drug Pt-DNA molecules maintained at 25 to 15 ° C. The antitumor activity of the known and claimed drug was investigated by cytotoxicity testing on the cultured cell model received from a surgical patient's material with malignant brain oligodendroastrocytoma. Cells were grown in a nutritive mixture of the standard structure: Eagle Medium (40%), Embryonic Calf Serum (30 to 40%), Glucose (800 mg%), Insulin (0.2 units / ml) in one condition. gas composition constant and temperature of 36.5 ° C in a temperature controlled chamber.

Quatro dias após a inoculação, durante o período de intenso crescimento das células da cultura de controle, estas foram tratadas com uma solução salina normal, e as células de culturas experimentais foram tratadas com as soluções da droga pleiteada e com a solução da droga conhecida, mantidas à temperatura de 25 a 15°C. 0 período de incubação após o tratamento das culturas foi de 24 horas. A atividade antitumoral foi estimada pela citotoxicidade que foi caracterizada pela comparação relativa com o controle da quantidade de células mortas. Os resultados do cálculo da quantidade relativa de células mortas são mostrados em porcentagem, e podem ser vistos na tabela 3, onde sob Ν' 1, existem indicadores do controle de cultura de células tratada por uma solução salina normal, sob números de 2 a 4 indicadores das células de culturas experimentais tratadas por soluções da droga pleiteada, sob o N* 5 - indicadores de células de culturas experimentais tratadas por uma solução da droga conhecida. Os dados da tabela 3 são apresentados sem dados sobre a concentração de sais de cloreto de sódio, citrato de sódio e cloreto de amônio.Four days after inoculation, during the period of intense growth of the control culture cells, they were treated with a normal saline solution, and the experimental culture cells were treated with the claimed drug solutions and the known drug solution. kept at 25 to 15 ° C. The incubation period after treatment of the cultures was 24 hours. Antitumor activity was estimated by cytotoxicity which was characterized by relative comparison with the control of the amount of dead cells. The results of calculating the relative amount of dead cells are shown in percent, and can be seen in Table 3, where under Ν '1 there are indicators of cell culture control treated by normal saline, under numbers 2 through 4. Indicators of experimental culture cells treated by drug solution under N * 5 - Indicators of experimental culture cells treated by a known drug solution. Table 3 data are presented without data on the concentration of sodium chloride, sodium citrate and ammonium chloride salts.

Tabela 3 Os dados da tabela 3 mostram que na comparação entre a estimativa quantitativa da atividade antitumoral no teste de citotoxicidade, a droga pleiteada está na forma substancial superior aquela conhecida. Mantidas em temperatura idêntica de 15°C e colocadas em culturas com concentrações idênticas de derivados Pt-DNA 30 mkg/ml e fluorouracil 50 mkg/ml da droga conhecida causa a destruição de apenas 24,2% das células, enquanto que a droga pleiteada destrói 86,6%.Table 3 The data in Table 3 show that in comparing the quantitative estimate of antitumor activity in the cytotoxicity test, the claimed drug is in substantially greater form than known. Maintained at an identical temperature of 15 ° C and placed in cultures with identical concentrations of Pt-DNA derivatives 30 mkg / ml and fluorouracil 50 mkg / ml of known drug causes the destruction of only 24.2% of cells, while the drug claimed destroys 86.6%.

Assim, a droga oferecida mantém a sua atividade antitumoral e alta eficácia terapêutica, mesmo em temperaturas de 25 a 15°C o que simplifica consideravelmente seu armazenamento, transporte e utilização. A droga oferecida pode ser utilizada em diferentes formas farmacêuticas. A droga antitumoral pleiteada foi usada em tratamento clínico dos tumores primários e metastáticos do pulmão, rins, peritoneal e pleuras, órgãos digestivos e sarcomatose do sistema locomotor, em formas de dosagem para a administração intravenosa, intra-arterial e intra-abdominal, na terapia de lesões tumorais da cabeça, pescoço e pele - em formas farmacêuticas para administração local na forma de aplicações; em tumores cerebrais - intersticialmente com implantação intraoperacional do reservatório Ommaya na remoção de um tumor removido cirurgicamente. A experiência da aplicação clínica da droga pleiteada demonstrou que a utilização de suas formas de dosagem tanto para aplicação intra-abdominal quanto local, e para a administração intravenosa, intra-arterial e intersticial, aumenta a eficácia da quimioterapia, que se expressa no aumento da esperança de vida e na melhoria da qualidade de vida dos pacientes durante o curso do tratamento e por um longo período de tempo. Ao mesmo tempo, por conseqüência, nenhum desenvolvimento clínico ou laboratorial importante foram observados nos pacientes. O próximo problema (terceiro) é resolvido pela invenção pleiteada quando apresenta um método de estabilização dos agentes antitumorais, baseado em uma solução aquosa (composto) dos derivados de platina com o ácido desoxirribonucléico (Pt-DNA) . De acordo com este método, é usado uma mistura de base fluorouracil com uracil e uréia na razão molar de nucleotídeos Pt-DNA, base de fluorouracil, uracil e uréia, 1: (6-12:(0,6 a 1,2: (0,6 a 1,2), como agente de estabilização adicionais ao diminuir a concentração de prótons na solução a 8,4 a 9,9.Thus, the drug offered maintains its antitumor activity and high therapeutic efficacy, even at temperatures of 25 to 15 ° C which considerably simplifies its storage, transport and use. The drug offered can be used in different dosage forms. The claimed antitumor drug was used in the clinical treatment of primary and metastatic tumors of the lung, kidneys, peritoneal and pleura, digestive organs and locomotor system sarcomatosis, in dosage forms for intravenous, intraarterial and intra-abdominal administration, in therapy. of head, neck and skin tumor lesions - in pharmaceutical forms for local administration in the form of applications; in brain tumors - interstitially with intraoperative implantation of Ommaya reservoir on removal of a surgically removed tumor. Experience with the clinical application of the claimed drug has shown that the use of its dosage forms for both intra-abdominal and local administration and for intravenous, intraarterial and interstitial administration increases the effectiveness of chemotherapy, which is expressed in increasing life expectancy and improving the quality of life of patients over the course of treatment and over a long period of time. At the same time, therefore, no major clinical or laboratory development was observed in the patients. The next problem (third) is solved by the claimed invention when it presents a method of stabilizing antitumor agents based on an aqueous solution (compound) of the platinum derivatives with deoxyribonucleic acid (Pt-DNA). According to this method, a mixture of fluorouracil base with uracil and urea is used in the molar ratio of Pt-DNA nucleotides, fluorouracil, uracil and urea base, 1: (6-12: (0.6 to 1.2: (0.6 to 1.2) as an additional stabilizing agent by decreasing the proton concentration in the solution to 8.4 to 9.9.

Além disso, são usados compostos de platina com o ácido desoxirribonucléico (Pt-DNA) na concentração de 1,30 a 1,53 mg/ml, contendo cloreto de sódio no volume de 0,80 a 0,90 mg/ml, citrino de sódio no volume de 0,40 a 0,53 mg/ml, cloreto de amônio no volume de 0,15 a 0,18 m/ml e agente de estabilização adicional, de acordo com a invenção, e utilização de complexo Pt-DNA cujas moléculas não partiram de solução com menos do que 35°C.In addition, platinum compounds with deoxyribonucleic acid (Pt-DNA) at a concentration of 1.30 to 1.53 mg / ml, containing sodium chloride in the volume of 0.80 to 0.90 mg / ml, citrus are used. 0.40 to 0.53 mg / ml sodium chloride, 0.15 to 0.18 m / ml ammonium chloride and additional stabilizing agent according to the invention, and use of Pt- DNA whose molecules did not break out of solution below 35 ° C.

Como parte da droga, as macromoléculas de Pt-DNA podem conter um dos DNA, atribuídos a partir de fontes naturais ou sintetizadas por meio de métodos de engenharia genética com a massa molecular, não limitada a 0,3 a 20 milhões de Dalton.As part of the drug, Pt-DNA macromolecules may contain one of the DNAs, assigned from natural sources or synthesized by genetic engineering methods with molecular weight not limited to 0.3 to 20 million Dalton.

Para aumentar o pH da solução da droga para 8,4 a 9,9 também foi usado hidróxido de sódio ou hidróxido de potássio ou hidróxido de amônio, ou qualquer outro regulador de pH farmaceuticamente aceitável. A forma declarada de estabilização foi utilizada na tecnologia de obtenção de drogas antitumorais listadas na tabela 4, que diferem entre si com suas naturezas de DNA, seguindo para os compostos de Pt-DNA. TABELA 4 Símbolos na Tabela: A - adenina, T - timina, G guanina, C - citosina.To raise the pH of the drug solution to 8.4 to 9.9 sodium hydroxide or potassium hydroxide or ammonium hydroxide or any other pharmaceutically acceptable pH regulator was also used. The declared form of stabilization was used in the technology for obtaining antitumor drugs listed in Table 4, which differ with their DNA nature, following for the Pt-DNA compounds. TABLE 4 Symbols in Table: A - adenine, T - thymine, G guanine, C - cytosine.

Na prática, o método de estabilização de drogas antitumorais foi realizado da seguinte forma. A solução aquosa do agente de estabilização adicional contendo uma mistura de base de fluorouracil com uracil e uréia foi inserida na solução aquosa contendo composto de Pt-DNA, cujas moléculas não partiram da solução com menos do que 35°C, cloreto de sódio, citrino de sódio e cloreto de amônio. Simultaneamente, juntamente com a solução aquosa do agente estabilizador foram introduzidos em uma solução aquosa do regulador pH, contendo hidróxido de sódio com pH até 11 a 12, com a ajuda dos quais a solução do agente-alvo foi trazida até o pH de 8,4 a 9,9.In practice, the anti-tumor drug stabilization method was performed as follows. The aqueous solution of the additional stabilizing agent containing a mixture of fluorouracil base with uracil and urea was inserted into the aqueous solution containing Pt-DNA compound whose molecules did not depart from the solution below 35 ° C, sodium chloride, citrus. of sodium and ammonium chloride. Simultaneously, together with the aqueous solution of the stabilizing agent, they were introduced into an aqueous pH regulator solution containing sodium hydroxide with a pH of up to 11 to 12, with the aid of which the targeting agent solution was brought to pH 8. 4 to 9.9.

As condições específicas do método de estabilização de drogas antitumorais, representadas na tabela 4, com a indicação das quantidades de componentes iniciais da solução da substância básica, na solução do agente de estabilização adicional e na solução reguladora de pH são apresentadas na tabela 5, onde exemplos de 1 a 9 se refere ao método pleiteado, e os exemplos 10 e 11 - para o método conhecido.The specific conditions of the antitumor drug stabilization method, shown in Table 4, with an indication of the initial component amounts of the basic substance solution, the additional stabilizing agent solution, and the pH-regulating solution are presented in Table 5, where Examples 1 to 9 refer to the claimed method, and Examples 10 and 11 to the known method.

Tabela 5 Símbolos na Tabela: NaCl - cloreto de sódio; Na3Cit -citrino de sódio; NHC1 - cloreto de amônio; NaFu - sal de sódio de f luorouracil; Fu - base de f luorouracil; Ura -uracil; Uréia - uréia; NaOH - hidróxido de sódio.Table 5 Symbols in Table: NaCl - sodium chloride; Sodium Na3Cit-citrine; NHCl - ammonium chloride; NaFu - fluorouracil sodium salt; Fu - fluorouracil base; Uracuracil; Urea - urea; NaOH - sodium hydroxide.

As características do método pleiteado, dependendo das condições da sua implementação e a temperatura de cura da droga foram comparadas com as características do método conhecido pelos dados apresentados na tabela 6, onde exemplos de 1 a 9 se referem ao método reivindicado, e os exemplos 10 e 11 ao método conhecido.The characteristics of the claimed method, depending on the conditions of its implementation and the cure temperature of the drug, were compared with the characteristics of the method known from the data presented in table 6, where examples 1 to 9 refer to the claimed method, and examples 10. and 11 to the known method.

Tabela 6 As diferenças nas características do método pleiteado e conhecido são provadas pelas diferentes faixas de valores do pH, medido pela via potenciometrica, e ausência da dependência de temperatura das concentrações da substância base e do agente de estabilização adicional, controlada pela análise quantitativa dos métodos. As diferenças nas concentrações que surgem em temperatura inferior a 35°C no método conhecido, são provadas nos exemplos da tabela com a redução da concentração do composto de Pt-DNA de 1,50 mg/ml a 1,04 mg/ml, ou seja, 30,7% e Na Fu de 1,89 mg/ml a 1,47 mg/ml, ou seja, 22% em solução aquosa da droga mantidos a 15°C.Table 6 Differences in the characteristics of the claimed and known method are proved by the different pH value ranges, measured by the potentiometric pathway, and absence of temperature dependence of the base substance and additional stabilizing agent concentrations, controlled by the quantitative analysis of the methods. . Differences in concentrations arising at temperatures below 35 ° C in the known method are proved in the table examples by reducing the concentration of Pt-DNA compound from 1.50 mg / ml to 1.04 mg / ml, or ie 30.7% and Na Fu from 1.89 mg / ml to 1.47 mg / ml, ie 22% in aqueous drug solution maintained at 15 ° C.

Quando a droga foi mantida em temperatura próxima de 10°C a concentração diminuiu para Pt-DNA de 1,48 mg/ml a 0,63 mg/ml, ou seja, já em 57,4%, e para NaFu de 1,82 mg/ml a 1,19 mg/ml, ou seja, por 34,4%. As concentrações da substância base e do agente de estabilização adicional nos exemplos do método pleiteado, correspondem às concentrações nas soluções mantidas em temperaturas acima de 35°C o que confirma a possibilidade do método fornecer condições em que macromoléculas de Pt-DNA e moléculas baseadas em fluorouracil não partem de solução de manter o produto alvo na faixa de temperatura de 25 a 5°C. A atividade antitumoral, em que os métodos pleiteados e conhecidos de estabilização de droga, são capazes de proporcionar, foi estudada em ensaio de citotoxicidade sobre o modelo das células do astrocitoma anaplásico do cérebro humano adaptado para o cultivo. As células foram mantidas em meio de cultura Eagle com a adição de soro embrionário de bezerro, glicose no soro embrionário, e insulina, em condições constantes da composição do gás e a temperatura de 36,5°C na câmara com temperatura regulada. No período de intenso crescimento das células da cultura de controle, estas foram tratadas com uma solução salina normal, e as células de culturas experimentais foram tratadas com soluções de drogas estabilizadas pelos métodos pleiteados e conhecidos, que foram preliminares mantidas à temperatura de 10°C. A atividade antitumoral foi estimada pela citotoxicidade que foi caracterizada pela sua comparação relativa com o controle da quantidade de células perdidas 24 horas após terem sido tratadas com a droga. Os resultados do cálculo da quantidade relativa das células perdidas em percentagem são apresentados na tabela 7, onde sob N* 1, existem indicadores do controle de cultura de células tratadas com uma solução salina normal, sob os números 2 a 5 -Indicadores de culturas experimentais tratadas com soluções das drogas estabilizadas pelo método pleiteado, sob o número 6 - Indicadores de culturas experimentais tratadas com soluções das drogas estabilizadas por meio do método conhecido.When the drug was kept at a temperature close to 10 ° C the concentration decreased for Pt-DNA from 1.48 mg / ml to 0.63 mg / ml, or 57.4%, and for NaFu of 1, 82 mg / ml to 1.19 mg / ml, ie by 34.4%. The concentrations of the base substance and additional stabilizing agent in the examples of the claimed method correspond to the concentrations in the solutions maintained at temperatures above 35 ° C which confirms the possibility of the method providing conditions where Pt-DNA macromolecules and molecules based on Fluorouracil does not depart from keeping the target product in the temperature range of 25 to 5 ° C. Antitumor activity, in which the claimed and known methods of drug stabilization are capable of providing, has been studied in a cytotoxicity assay on the anaplastic astrocytoma cell model of the human brain adapted for cultivation. Cells were maintained in Eagle culture medium with the addition of calf embryonic serum, embryonic glucose, and insulin under constant gas composition conditions and at a temperature of 36.5 ° C in the temperature-controlled chamber. In the period of intense growth of control culture cells, they were treated with normal saline, and experimental culture cells were treated with drug solutions stabilized by known and claimed methods, which were preliminary kept at 10 ° C. . Antitumor activity was estimated by cytotoxicity which was characterized by its relative comparison with control of the amount of cells lost 24 hours after being treated with the drug. The results of calculating the relative amount of cells lost in percent are shown in Table 7, where under N * 1 there are indicators of culture control of cells treated with normal saline under numbers 2-5 - Experimental Culture Indicators treated with drug solutions stabilized by the claimed method, under number 6 - Indicators of experimental cultures treated with drug solutions stabilized by the known method.

Tabela 7 Dados da Tabela 7 comprovam que na comparação entre a avaliação quantitativa da atividade antitumoral no teste de citotoxicidade pelo método pleiteado de estabilização é essencialmente superior ao método conhecido. Mantidas à temperaturas idênticas de 10 °C e aplicadas em volumes idênticos de 0,02 ml, com quantidades idênticas de 1,48 mg/ml de Pt-DNA em temperatura acima de 35°C as soluções aquosas da droga estabilizada por meio do método conhecido, cria concentração da substância básica de apenas 12,6 mg/1 após ser introduzida no meio de cultivo no volume de 1 litro, causando destruição de apenas 32,2%, enquanto que soluções aquosas da droga estabilizada pelo método pleiteado, após ser introduzida no meio de cultivo produz concentração de Pt-DNA de 29,6 mg/1, o que provoca a destruição de 80,4 a 82,1% das células.Table 7 Data from Table 7 show that comparing the quantitative evaluation of antitumor activity in the cytotoxicity test by the claimed stabilization method is essentially superior to the known method. Maintained at identical temperatures of 10 ° C and applied in identical volumes of 0.02 ml, with identical amounts of 1.48 mg / ml Pt-DNA at temperature above 35 ° C, the aqueous solutions of the stabilized drug by the method known, creates a concentration of the basic substance of only 12.6 mg / 1 after being introduced into the culture medium in a volume of 1 liter, causing destruction of only 32.2%, while aqueous solutions of the drug stabilized by the claimed method, after being introduced into the culture medium produces a Pt-DNA concentration of 29.6 mg / 1, which causes the destruction of 80.4 to 82.1% of cells.

Assim, o método oferecido de estabilização proporciona o aumento do efeito específico do composto de Pt-DNA e aumento sua eficácia terapêutica, mesmo em temperaturas de 25 a 5°C, bem como prevê condições de armazenamento expandida das drogas e uma gama mais ampla de sua aplicação, através da utilização dos compostos de platina com o ácido desoxirribonucléico (Pt-DNA) cujas macromoléculas não partiram da solução à temperatura inferior a 35°C em detrimento do uso da mistura baseada em fluorouracil com uracil e uréia, bem como às custas do uso da solução com baixa concentração de prótons.Thus, the offered stabilization method provides increased specific effect of the Pt-DNA compound and increased therapeutic efficacy, even at temperatures of 25 to 5 ° C, as well as provides for expanded drug storage conditions and a wider range of their application by using the platinum compounds with deoxyribonucleic acid (Pt-DNA) whose macromolecules did not leave the solution at a temperature below 35 ° C to the detriment of using fluorouracil-based mixture with uracil and urea, as well as at the expense of of the solution with low proton concentration.

As drogas antitumorais estabilizadas pelo método pleiteado podem ser usadas em diferentes formas farmacêuticas. A experiência da aplicação clínica das drogas antitumorais estabilizadas pelo método pleiteado tem mostrado que a sua utilização em formas de dosagem tanto para meio de introdução intraperitoneal quanto local; e para intravenosa, intra-arterial, endolinfática e intersticial, aumentam a eficiência do tratamento dos tumores primários e metastáticos localizados na cabeça, pescoço, pulmão, rins, órgãos digestivos e áreas do sistema locomotor. 0 aumento da eficácia é expressa no aumento da expectativa de vida e na melhoria da qualidade de vida dos pacientes, tanto durante o curso do tratamento quanto ao longo do período de tempo após o tratamento. Ao mesmo tempo, por consequência nenhum desenvolvimento clínico ou laboratorial importante foram observados nos pacientes.Antitumor drugs stabilized by the claimed method can be used in different pharmaceutical forms. Experience in the clinical application of antitumor drugs stabilized by the claimed method has shown that their use in dosage forms for both intraperitoneal and local introduction medium; and for intravenous, intraarterial, endolymphatic and interstitial, increase the efficiency of treatment of primary and metastatic tumors located in the head, neck, lung, kidneys, digestive organs and areas of the locomotor system. Increased efficacy is expressed in increasing life expectancy and improving patients' quality of life both during the course of treatment and over the time period after treatment. At the same time, therefore, no major clinical or laboratory development was observed in the patients.

REIVINDICAÇÕES

Claims

1. Aqueous pharmaceutical preparation based on an aqueous solution of the deoxyribonucleic acid polyanion platinum derivatives, non-associated Pt-DNA macromolecules with a maximum measurement size of 0.05 to 0.15 microns, sodium chloride, sodium, ammonium chloride and fluorouracil in the form of sodium salt, CHARACTERIZED by the fact that it additionally contains 1: 1: 1 molar ratio of fluorouracil, uracil and urea, in proportion to the components in an aqueous solution, weight in Pt -DNA - 0,130 to 0,153 sodium chloride - 0,080 to 0,090 sodium citrate - 0,040 to 0,053 ammonium chloride - 0,015 to 0,018 fluorouracil in the form of sodium salt - 0,025 to 0,370 uracil - 0,018 to 0,270 urea - 0,010 to 0,144 and also sodium hydroxide to pH 8.4 to 9.9, the density of the solution is 1.0054-1.0058 g / cm3.

2. Method for obtaining aqueous pharmaceutical preparation by maintaining DNA fibers for 16 to 26 hours in a salt citrate solution containing sodium chloride and citrate chloride by dissolving fibers in the mechanical mixture and heating the DNA solution in 70 to 90 ° C, with the gradual addition of the heated cis-dichlorodiaminoplatin (DDP) salt citrate solution at the same temperature as the heated DNA solution, DDP solutions and thermostatic control DNA mixed at 70 to 90 ° C for 15 to 20 minutes and addition of an aqueous solution of fluorouracil sodium salt to the mixture prior to thermostatic control; The method being CHARACTERIZED by the fact that prior to thermostatic control an aqueous uracil solution and an aqueous urea solution at concentrations corresponding to a 1: 1: 1 molar ratio of fluorouracil, uracil and urea, and an aqueous solution of pH 11.0 to 12.0 are also added simultaneously with an aqueous solution of fluorouracil sodium salt, after which the drug solution is brought to pH 8.4 to 9.9 with a density of 1.0054 to 1.0058 g / cm3.

3. Method for stabilizing an aqueous pharmaceutical preparation for use as an antitumor drug based on an aqueous solution of platinum derivatives with deoxyribonucleic acid (Pt-DNA), the method being characterized by the use of a mixture of fluorouracil, uracil and urea base. on molar ratio of Pt-DNA nucleotides, fluorouracil, uracil and urea base, 1: (6 to 12) :( 0.6 to 1.2) :( 0.6 to 1.2) as an additional stabilizing agent by decreasing the proton concentration in the solution from 8.4 to 9.9.

A method according to claim 3, characterized in that the concentration of the Pt-DNA complex is 1.30 to 1.53 mg / ml.

A method according to claim 3, characterized in that the aqueous pharmaceutical preparation also contains sodium chloride in the amount of 0.80 to 0.90 mg / ml.

A method according to claim 3, characterized in that the drug also contains sodium citrate in the amount of 0.40 to 0.53 mg / ml.

A method according to claim 3, characterized in that the aqueous pharmaceutical preparation also contains ammonium chloride in the amount of 0.15 to 0.18 mg / ml.

A method according to claim 3, characterized in that the aqueous pharmaceutical preparation is an acceptable therapeutic DNA recovered from natural or synthetic sources by genetic engineering methods with 0.3 to 20 megadalton molar mass.

Method according to claim 3, characterized in that it brings the pH of the aqueous pharmaceutical preparation to 8.4 to 9.9, sodium hydroxide or potassium hydroxide or ammonium hydroxide or any other regulator of pharmacologically acceptable pH.