BRPI0919651B1 - "food compositions understanding isolated spices of bacillus coagulans and pasta". - Google Patents

Description

COMPOSIÇÕES ALIMENTÍCIAS COMPREENDENDO ESPOROS ISOLADOS DE BACILLUS COAGULANS E MASSA.

Pedidos Relacionados [001] Este pedido reivindica o benefício do U.S.S.N. 61/106, 116, depositado em 16 de outubro de 2008, o conteúdo do qual é aqui incorporado por referência na sua totalidade.

Campo da Invenção [002] O presente pedido refere-se a composições probióticas à base de grãos que compreendem bactérias produtoras de ácido lático.

Fundamento da Invenção [003] A microflora gastrointestinal desempenha uma série de papéis vitais na manutenção da função do trato gastrointestinal e saúde fisiológica global. O crescimento e o metabolismo de muitas espécies de bactérias individuais que habitam o trato gastrointestinal dependem primariamente dos substratos disponíveis, a maioria dos quais são derivados da dieta. Uma vez que probióticos geralmente não colonizam permanentemente o hospedeiro, eles precisam ser ingeridos regularmente para que quaisquer propriedades promotoras de saúde persistam.

Sumário da Invenção [G04]A invenção é baseada na descoberta de que bactérias produtoras de ácido lático, principalmente espécies de Bacillus, permanecem viáveis retêm suas propriedades probi óticas benéficas em composições de alimentos, tais como aquelas preparadas em altas temperaturas {por exemplo, 80, 96, 100, 120 ou 150 °C) em água ferve nte. A invenção descreve composições probióticas à base de grãos. Especifica mente, a invenção provê uma bactéria Bacillus coagular»s isolada em uma composição à base de grãos.

[005] A invenção fornece composições que compreem uma composição cozida ou crua de um grão e uma bactéria ou esporo Bacillus coagulans isolada. O grão é processado, por exemplo, alterado do seu estado de ocorrência natural. Por exemplo, o grão é descascado, esmagado, quebrado, ou triturado. O grão tem a forma de farinha ou de uma composição feita a partir de manipulação adicional de uma farinha à base de grãos. Exemplos de grãos incluem trigo, arroz, trigo mourisco, cevada, Kamut, milho e aveia. As composições cozidas exemplares incluem massas, farinha de aveia e grãos. Massas adequados incluem massa com ovos, espaguete (cilindros finos, sólidos), macarrão (tubos ou cilindros ocos), fusilli (em forma de espiral), lasanha (folhas), tagliatelle (tiras planas), vermicelli (espaguete fino), ravióli (massa recheada), spátzle e nhoque. Outras massas adequadas incluem penne rigate (massa em forma de cilindro sulcado), penne liso (massa em forma de cilindro liso) rotini, (massa em forma espiral) e rigatoni (massa em forma de tubo).

[006] Em um aspecto, a Bacillus coagulans isolada compreende entre cerca de 0,01% a cerca de 50% em peso da composição à base de grãos. Opcionalmente, a Bacillus coagulans isolada compreende entre cerca de 0,01% e cerca de 10% em peso da composição à base de grãos. Preferencialmente, a Bacillus coagulans isolada compreende entre cerca de 0,01% e cerca de 0,1% em peso da composição à base de grãos.

[007JA invenção também fornece espécies de bactérias, incluindo Bacillus coagulans, por exemplo, Bacillus coagulans hammer, de preferência, cepa de Bacillus coagulans hammer N° de Acesso ATCC 31284, ou uma ou mais cepas derivadas da cepa de Bacillus coagulans hammer N° de Acesso ATCC 31284 (por exemplo, Números ATCC: GBI-20, Número de Designição ATCC PTA-6085; GBI-30 ou BC30, Número de Designação ATCC PTA-6086; e GBI-40, Número de Designação ATCC PTA-6087; ver Patente U.S. n° 6.849.256 para Farmer).

[008]Opcionalmente, a Bacillus coagulans isolada possui a forma de esporos. Em um aspecto, os esporos de Bacillus coagulans se ativam quando do contato com líquido quente. Preferencialmente, o líquido quente é água ou leite. Alternativamente, a Bacillus coagulans isolada possui a forma de uma célula vegetativa. Em outro aspecto, a Bacillus coagulans isolada possui a forma de uma mistura de células vegetativas e esporos. Preferencialmente, a Bacillus coagulans possui predominantemente a forma de esporos, por exemplo, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95%, cerca de 99%, ou cerca de 100 % de esporos.

[009] A invenção também fornece composições que compreendem uma mistura seca para composições à base de grãos compreendendo um grão e uma bactéria Bacillus coagulans isolada. Também são fornecidas composições que compreendem uma mistura seca para sopa compreendendo uma matéria desidratada e bactéria Bacillus coagulans isolada.

[0010] Também são fornecidos métodos para preparar uma composição à base de grãos que compreende fornecer uma mistura básica contendo grãos e uma porção contendo líquido; misturar a mistura básica contendo grãos e a porção líquida para formar uma massa ou pasta, combinar uma bactéria Bacillus coagulans isolada com a massa ou pasta; e processar termicamente a massa ou pasta para cozinhar a composição à base de grãos. Porções líquidas adequadas incluem água e leite. Em um aspecto, a Bacillus coagulans isolada possui a forma de um esporo. Em outro aspecto, a Bacillus coagulans isolada possui a forma de uma célula vegetativa. Em um aspecto, a Bacillus coagulans isolada compreende entre cerca de 0,1% a cerca de 50% em peso da composição à base de grãos. Preferencialmente, a Bacillus coagulans isolada compreende entre cerca de 1% e cerca de 10% em peso da composição à base de grãos. Mais preferivelmente, a quantidade de bactérias Bacillus coagulans é de cerca de 5 x 107 unidades formadoras de colônia (CFU) de bactérias por grama da matriz alimentar.

[0011] Bactérias Bacillus coagulans estão incluídas nas composições de sopa ou à base de grãos da presente invenção. Espécies bacterianas incluem Bacillus coagulans, por exemplo, Bacillus coagulans hammer, de preferência, cepa de Bacillus coagulans hammer N° de Acesso ATCC 31284, ou uma ou mais cepas derivadas da cepa de Bacillus coagulans hammer N° de Acesso ATCC 31284 (por exemplo, Números ATCC: GBI-20, Número de Designação ATCC PTA-6085; GBI-30 ou BC30, Número de Designação ATCC PTA-6086; e GBI-40, Número de Designação ATCC PTA-6087; ver Patente U.S. N° 6.849.256 para Farmer) [0012] Em um aspecto, a Bacillus coagulans isolada possui a forma de um esporo. A invenção prevê a ativação de esporos de Bacillus coagulans após aquecimento. Opcionalmente, a Bacillus coagulans isolada possui a forma de uma célula vegetativa. Em outro aspecto, a Bacillus coagulans isolada possui a forma de uma mistura de células vegetativas e esporos.

[0013] As cepas de Bacillus coagulans hammer da invenção são não-patogênicas e geralmente consideradas seguras para utilização em nutrição humana (isto é, classificação GRAS) pelo U.S. Federal Drug Administration (FDA) e U.S. Department of Agriculture (USDA), e por aqueles versados na técnica. Além disso, as cepas de Bacillus coagulans hammer da invenção germinam em ou abaixo da temperatura do corpo humano, tornando-as úteis como probióticos. Muitas cepas de Bacillus coagulans fora do grupo hammer têm, na maioria das vezes, aplicações industriais, pouco ou nenhum benefício nutricional, e contaminantes ambientais que não foram avaliados quanto à segurança. Além disso, muitas outras cepas de Bacillus coagulans não-hammer crescem otimamente a temperaturas superiores à temperatura do corpo humano e, portanto, não germinam de forma eficiente no organismo humano. Essas cepas são menos ou não apropriadas como probióticos para consumo humano, [0014] As publicações citadas estão aqui incorporadas por referência. Tanto a descrição geral acima como a descrição detalhada e os exemplos a seguir são exemplares e explicativos e não são restritivos da invenção como reivindicado.

Breve Descrição dos Desenhos [0015] A Figura 1 é um gráfico de barras que demonstra a sobrevivência de BC30 em gnocchi (massa de batata).

[0016] A Figura 2 é um gráfico de barras que ilustra a sobrevivência de BC30 em recheio de massa de ovos fresca. Barra da esquerda: massa não-tratada com recheio à base de queijo (contendo culturas bacterianas de queijo); barra central: massa com recheio à base de queijo tratada com BC30; barra da direita: massa com recheio à base de queijo tratada com BC30 e pasteurizada a 100 °C por 5 minutos.

Descricão Detalhada da Invenção [OÜ17]Oganismos probióticos são não-patogênicos, não-toxigènicos, mantêm a viabilidade durante o armazenamento, e sobrevivem à passagem pelo estômago e intestino delgado. Bactérias produtoras de ácido lático não-patogênicas (isto é, "bactérias de ácido láctico"), tais como a Bacillus coagulam exemplar, permanecem viáveis e retêm suas propriedades probióticas benéficas em composições de sopa e à base de grãos, tais como as que são preparadas em água fervente. Especificamente, os organismos probióticos aqui descritos, por exemplo, cepa de Bacillus coagulans GBI-30 ou BC30, Número de Designação ATCC PTA-6086, sobrevivem aos processos rigorosos de produção e cozimento das composições de sopa e à base de grãos descritas abaixo.

Bactéria de Produção de Ácido Lático Probiótica [0018] Uma bactéria de produção de ácido lático probiótica adequada para uso nos métodos e composições da invenção produz ácido e é não-patogênica. Existem muitas bactérias adequadas identificadas como aqui descritas, embora a invenção não se limite às espécies de bactérias atualmente conhecidas na medida em que os propósitos e objetivos das bactérias são descritos. A propriedade de produção de ácido é importante para a eficácia das bactérias produtoras de ácido lático probióticas da presente invenção.

[0019] A invenção prevê a utilização de uma bactéria produtora de ácido lático, tal como uma espécie de Bacillus formador de esposos, tais como B. coagulans. De preferência, a espécie de Bacillus formador de esporos da invenção é B. coagulans hammer.

[0020] Métodos e composições exemplares são descritos a seguir utilizando Bacillus coagulans como um probiótico. Bacillus coagulans purificada e/ou isolada é particularmente útil como um probiótico em composições de sopa ou à base de grãos. B. Coagulans probiótica é não-patogênica e é geralmente considerada como segura (isto é, classificação GRAS) pelo U.S. Federal Drug Administration (FDA) e o U.S. Department of Agriculture (USDA) e por aqueles versados na técnica.

[0021] Sac///i/s coagulans é uma bactéria formadora de esporos gram positiva não-patogênica que produz ácido L(+)lático (dextrógiro) em condições de fermentação. Foi isolada a partir de fontes naturais, tais como amostras de solo tratado termicamente inoculadas em meio nutritivo (Bergey’s Manual off Systemic Bacteriology, vol. 2, Sneath, PHA, et al. eds. Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 1986). Cepas de B. coagulans purificada serviram como fonte de enzimas incluindo endonucleases (por exemplo, Patente U.S. N° 5.200.336); amilase (Patente U.S. N° 4.980.180), lactase (Patente U.S. N° 4.323.651) e ciclo-malto-dextrina-glucano transferase (Patente U.S. N° 5.102.800). B. coagulans tem sido usada para produzir ácido láctico (Patente U.S. N° 5.079.164). Uma cepa de B. coagulans (referida como L. sporogenes; Sakaguti & Nakayama (ATCC 31284)) foi combinada com outras bactérias produtoras de ácido láctico e B. natto para produzir um produto alimentar fermentado a partir da soja cozida (Patente U.S. N° 4.110.477).

[0022] Espécies bacterianas incluem Bacillus coagulans, por exemplo, Bacillus coagulans hammer, de preferência, cepa de Bacillus coagulans hammer N° de Acesso ATCC 31284, ou uma ou mais cepas derivadas da cepa de Bacillus coagulans hammer N° de Acesso ATCC 31284 (por exemplo, Números ATCC: GBI-20, Número de Designação ATCC PTA-6085; GBI-30, Número de Designação ATCC PTA-6086; e GBI-40, Número de Designação ATCC PTA-6087; ver Patente U.S. N° 6.849.256 para Farmer) [0023] Sac///us coagulans foi previamente descaracterizada como um Lactobacillus e rotulada como Lactobacillus sporogenes (Veja Nakamura et al 1988 Int. J. Syst Bacteriol 38:63-73). No entanto, a classificação inicial foi incorreta porque Bacillus coagulans produz esporos e excreta ácido L(+)-láctico através do metabolismo. Ambas estas características proporcionam características fundamentais para a utilidade de Bacillus coagulans. Estes aspectos metabólicos e de desenvolvimento exigem que a bactéria seja classificada como um Bacillus de ácido láctico. Além disso, geralmente não é apreciado que espécies de Lactobacillus clássicas sejam impróprias para a colonização do intestino, devido à sua instabilidade no ambiente com pH severo (ou seja, ácido) da bílis, particularmente bílis humana. Em contrapartida, Bacillus coagulans é capaz de sobreviver e colonizar o trato gastrointestinal no ambiente da bílis e até crescer nesta faixa de baixo pH.

Atividade Probiótica de Bacillus coagulans [0024] É bem documentado clinicamente que muitas espécies de patógenos bacterianos, micóticos e de leveduras possuem a capacidade de causar uma variedade de distúrbios gastrointestinais, incluindo mas não limitados a: rompimento da função bioquímica gastrointestinal normal, necrose de tecidos gastrointestinais e rompimento da bioabsorção de nutrientes, e condições semelhantes. As composições contendo microrganismos probióticas aqui descritas inibem estes patógenos. Assim, as composições são úteis no tratamento profilático ou terapêutico de doenças associadas à infecção por esses patógenos acima mencionados.

[0025] Em um aspecto, uma cepa de Bacillus coagulans está incluída na composição na forma de células vegetativas. Em outro aspecto, a cepa de Bacillus coagulans está incluída na composição na forma de esporos. A invenção também fornece a inclusão da cepa de Bacillus coagulans na composição na forma de um pó, uma massa de células secas, uma pasta estabilizado, ou um gel estabilizado.

[0026] Porque esporos de Bacillus são resistentes à pressão e calor e podem ser armazenados na forma de pó seco, eles são particularmente úteis para formulação e fabricação de produtos, tais como as diversas composições de sopa e à base de grãos aqui descritas. Uma espécie Bacillus é adequada para a presente invenção, em particular, as espécies que possuem a capacidade de formar esporos, que são relativamente resistentes a calor e outras condições, tornando-as ideais para o armazenamento (vida de prateleira) em formulações de produtos, por exemplo, composições de sopa e à base de grãos. Devido às propriedades estáveis de prateleira das cepas de Bacillus coagulans aqui descritas, por exemplo, cepa de Bacillus coagulans GBI-30 ou BC30, Número de Designação ATCC PTA-6086, as formulações de produto da invenção não estão confinadas a um refrigerador e podem ser armazenadas em temperatura ambiente.

[0027] A Bacillus coagulans da invenção sobrevive a armazenamento (vida de prateleira) de cerca de 12 dias a cerca de 2 anos; de cerca de um mês a cerca de 18 meses; de cerca de 3 meses a cerca de um ano; ou cerca de 6 meses a cerca de 9 meses.

Atividade Probiótica Anti-microbiana [0028] 0s organismos probióticos aqui descritos, por exemplo, cepa de Bacillus coagulans GBI-30 ou BC30, Número de Designação ATCC PTA-6086, promovem a saúde digestiva e apoiam o sistema imune. A capacidade do Bacillus coagulans em inibir vários patógenos bacterianos foi quantitativamente determinada através da utilização de um ensaio in vitro. Este ensaio é parte de uma tela de patógenos bacterianos padrão (desenvolvida por U.S. Food and Drug Administration(FDA)) e está disponível comercialmente em discos de suporte sólido (Discos de Antibióticos DIFCO ® BACTROL ®). Para realizar o ensaio, placas de batata-dextrose (DIFCO ®) foram inicialmente preparadas usando procedimentos padrão. As placas foram então individualmente inoculadas com a bactéria (cerca de 1.5x106 CFU) a ser testada de modo a formar um leito bacteriano confluente.

[0029] A inibição de microorganismos (por exemplo, patógenos gastrointestinais) por Bacillus coagulans foi posteriormente confirmada colocando aproximadamente 1,8 x 106 CFU de Bacillus coagulans em 10 μΙ de caldo ou tampão, diretamente no centro da placa de batata-dextrose com um teste de locus de aproximadamente 8 mm de diâmetro por placa. Um mínimo de três testes de locus foram utilizados para cada ensaio. O controle negativo consistiu em um volume de 10 μΙ de uma solução salina estéril, enquanto o controle positivo consistiu em um volume de 1 μΙ de glutaraldeído. As placas foram incubadas por cerca de 18 horas a 30 °C, momento em que as zonas de inibição foram medidas. Como aqui designado, "inibição excelente" significa que a zona foi de 10 mm ou mais de diâmetro, e " boa inibição" significa que a zona foi maior que 2 mm de diâmetro, mas inferior a 10 mm de diâmetro.

[0030]Como esperado, nenhuma "inibição" foi vista com o controle negativo de salina, e "inibição" excelente (cerca de 16,2 mm de diâmetro; média de três testes) foi vista com o controle positivo de glutaraldeído. Para os microrganismos entéricos testados, a seguinte inibição por Bacillus coagulans foi observada: (i) espécies de Clostridium - inibição excelente; (ii) Escherichia coli - inibição excelente; (iii) espécies de Clostridium - inibição excelente, onde a zona de inibição foi consistentemente maior de 15 mm de diâmetro. Da mesma forma, inibição excelente também foi observada para os patógenos oportunistas Pseudornonas aeruginosa e Staphylococcus aureus. As bactérias patogênicas entéricas que foram inibidas pela atividade de Bacillus coagulans incluem, mas não estão limitadas a: Staphylococcus aureus\ Staphylococcus epidermidis-, Streptococcus pyogenes; Pseudornonas aeruginosa·, Escherichia coli (espécies enterohemorrágicas); várias espécies de Clostridium (por exemplo, Clostridium perfingens, Clostridium botulinum, Clostridium tribu-trycum, Clostridium sporogenes, e semelhantes); Gardnereia vaginails; Proponbacte-rium aenes; Aeromonas hydrophia-, espécies de Aspergillus; espécies de Proteus; e espécies de Klebsiella.

Micro-encapsulação [0031 ]Em um aspecto, as bactérias produtoras de ácido lático são incorporadas a um revestimento de microcápsula antes da adição à composição à base de grãos, usando qualquer processo de micro-encapsulação conhecido na técnica. As Bacillus coagulans isoladas são embaladas, ou encapsuladas, dentro de outro material, a fim de proteger as bactérias do ambiente em volta. As cápsulas da invenção variam em tamanho de um milésimo de milímetro a sete milímetros. Os ingredientes internos da cápsula são liberados de seus invólucros de várias maneiras, incluindo ruptura mecânica da parede da cápsula, dissolução da parede, derretimento da parede e difusão através da parede. Assim, a micro-encapsulação oferece proteção adicional para a bactéria Bacillus isolada durante o processamento térmico de composições à base de grãos da invenção. Os métodos físicos de micro-encapsulação incluem revestimento de resina, revestimento de suspensão de ar, extrusão centrífuga, bocal vibracional e pulverização. Os métodos químicos de micro-encapsulação incluem polimerização interfacial, polimerização in situ, e polimerização de matriz.

[0032] Alternativamente, a bactéria produtora de ácido lático é adicionada à composição à base de grãos sem micro-encapsulação.

Composições probióticas de sopa e à base de grãos [0033] A invenção é direcionada à surpreendente descoberta de que bactérias produtoras de ácido lático, principalmente espécies de Bacillus, permanecem viáveis e retêm suas propriedades probióticas benéficas em composições de sopa e à base de grãos, tais como as que são preparadas em água fervente. As composições são preparadas pela combinação de matéria seca e um líquido, por exemplo, água ou leite. Em um aspecto, a composição é preparada por combinação de matéria seca e um líquido, e aquecimento da combinação resultante. Opcionalmente, a combinação é aquecida (termoprocessada), utilizando calor, uma chama ou um microondas. A composição de sopa ou à base de grãos é fervida em água quente, por exemplo, fervura no fogão, adição de água fervente a um recipiente, ou colocação no microondas da composição de sopa ou à base de grãos junto com água. De preferência, água fervente (cerca de 100 °C) é adicionada a uma combinação de composição à base de grãos e bactérias Bacillus coagulans.

[0034] Em um aspecto, pelo menos cerca de 5% a 25% das bactérias são viáveis após aquecimento, por exemplo, pelo menos cerca de 25% a 50%; pelo menos cerca de 50% a 75%; ou, pelo menos, cerca de 75% a 99% das bactérias são viáveis após aquecimento. Como os níveis de dieta recomendados (RDA ou ingestão diária recomendada; RDI) são de cerca de 1 x 109 bactéria (de acordo com as directrizes da UE), de preferência, a composição de sopa ou à base de grãos compreende pelo menos cerca de 1 x 109 bactérias viáveis após aquecimento. Em outro aspecto, a composição de sopa ou à base de grãos compreende pelo menos cerca de 1 x 106 a 1 x 107, pelo menos cerca de 1 x 107 a 1 x 108, ou pelo menos cerca de 1 x 108 a 1 x 109 bactérias viáveis após aquecimento.

[0035] As composições são formuladas em diversas configurações, porque a bactéria está presente como uma célula vegetativa ou como um esporo, ou ambos, dependendo da espécie e forma do organismo probiótico. As células / esporos são formulados em uma variedade de composições adequadas para uso em uma composição de sopa ou à base de grãos. Em um aspecto, a bactéria está presente como uma mistura de esporos e células vegetativas. Em outro aspecto, a bactéria está presente em pelo menos 90% de esporos, por exemplo, 95%, 98% ou 99% de esporos. Opcionalmente, antes de serem adicionadas às composições de sopa ou à base de grãos da invenção, as células de Bacillus coagulans são cultivadas no estado líquido, na ausência ou com quantidades limitadas de uma fonte de alimento para induzir a esporulação. Em outro aspecto, pulverização com arma térmica mata cerca de 50%, cerca de 75%, cerca de 90%, cerca de 95%, ou cerca de 99% das células vegetativas antes da adição às composições de sopa ou à base de grãos da invenção.

[0036] Composições à base de grãos, tais como as aqui descritas, são feitas a partir de uma variedade de grãos conhecidos por aqueles versados na técnica. Grãos adequados incluem arroz, trigo, milho, cevada, centeio, aveia, trigo mourisco, sorgo, milheto, triticale, fonio e quinoa. Outros tipos de grãos utilizados para preparar as composições à base de grãos da invenção incluem teff, arroz selvagem e trigo durum.

[0037]Composições à base de grãos exemplares incluem massas, farianha de aveia, grãos, cereais etc. A invenção fornece massas enriquecidas com probióticos, por exemplo, Bacillus coagulans isoladas e massas. Massas (termo italiano para "pasta") é um termo genérico para as variantes italianas de macarrão, comida feita a partir de uma massa de farinha, água e / ou ovos. A massa é cozida em água quente/água fervente antes do consumo. Os organismos probióticos aqui descritos, por exemplo, cepa de Bacillus coagulans GBI-30 ou BC30, Número de Designação ATCC PTA-6086, sobrevivem exclusivamente aos processos de cozedura e fabricação severos das composições de sopa e à base de grãos. Em um aspecto, a massa é o ingrediente principal, servida com molho ou temperos. Variedades comuns de massa incluem massa tubular, massa da haste redonda reta, massa em fita, micro-massa, massas recheadas e massas de formas irregulares. Massas exemplares incluem espaguete (cilindros finos, sólidos), macarrão (tubos ou cilindros ocos), fusilli (em forma de espiral), lasanha (folhas), tagliatelle (tiras planas), vermicelli (espaguete fino) e ravióli (massa recheada). Outras massas adequadas incluem penne rigate (massa em forma de cilindro sulcado), penne liso (massa em forma de cilindro liso) rotini, (massa em forma espiral) e rigatoni (massa em forma de tubo). Na Itália, penne são produzidos em duas variantes: "penne liso" (suave) e "rigate penne" (sulcado), o último tendo arestas em cada macarrão. Dois outros macarrões, nhoque e spátzle, às vezes, são contadas como massas, porque são tradicionais na Itália, no entanto, a suas distribuições "nativas" (e talvez suas origens) estão fora da Itália, e esses macarrões têm mais em comum com tortas do que com massas típicas. Os dois estilos básicos de massas são secas e frescas. A massa seca tem uma textura mais firme, mais densa quando cozida e é adequada para molhos chunky, de carne ou oleosos. A massa fresca tem uma textura mais suave, mais absorvente e é adequada para molhos amanteigados ou cremosos ou molhos com sabores delicados. Há também variações nos ingredientes utilizados na massa. O tempo em que massa pode ser armazenada varia de dias a anos, dependendo se a massa é feita com ovo ou não, e se é seca ou fresca.

[0038] Muitos ingredientes são usados para preparar massas, que vão desde uma simples mistura de farinha e água, até aquelas que exigem a adição de ovos, especiarias, queijos, ou mesmo tinta de calamar à massa. Opcionalmente, a massa contém um recheio, por exemplo, queijo, legumes, frutas e/ou carne. Em um aspecto, a massa seca é feita de trigo durum ou farinha de semolina. Farinha de trigo durum tem um tom de cor amarelo. Alternativamente, massas secas são feitas a partir de outros tipos de farinha (como fécula), que produz um produto mais macio. Certas variedades de massas também podem utilizar outros grãos e/ou métodos de moagem para fazer a farinha. Algumas variedades de massas, tais como Pizzoccheri, são feitas de farinha de trigo mourisco. Diversos tipos de massas frescas incluem ovos (massa com ovos). Gnocchi são geralmente considerados pratos de massa, apesar de serem bastante diferentes nos ingredientes (principalmente batata moída).

[0039] Também são fornecidas composições probiótica à base de grãos na forma de farinha de aveia com Bacillus coagulans isoladas. Farinha de aveia é um produto dos grumos de aveia do solo (ou seja, farinha de aveia, farinha de milho, farinha de ervilha etc.) ou um mingau feito com o produto (também chamado de cereal de aveia). Em regiões como os Estados Unidos e Canadá, “farinha de aveia” pode se referir a outros produtos feitos de grumos de aveia, tais como aveia cortada, aveia esmagada, e aveia em flocos. Os grumos são grosseiramente moídos para fazer farinha de aveia, ou cortados em pequenos pedaços para fazer a aveia cortada em lâminas, ou cozidos e laminados para fazer aveia em flocos. No caso da aveia flocos (aveia old-fashioned), grumos de aveia são cozidos, pressionados com um rolo, e secos. Aveia em flocos leva cerca de 15 minutos para cozinhar. A aveia laminada de rápido cozimento ("aveia rápida") é cortada em pequenos pedaços antes de ser cozida e laminada. Farinah de aveia "instantânea" é pré-cozida e seca. Opcionalmente, a farinha de aveia inclui: adoçantes e aditivos de sabor. Adoçantes e aditivos de sabor apropriados e incluem sal, açúcar branco, açúcar mascavo, estévia canela, mel, geléias, melado, xarope de maple, manteiga, chocolate, molho de soja, leite de soja, leite, vinagre, leite condensado ou evaporado e creme. Vários tipos de frutas e nozes também são adicionados, incluindo: morangos, mirtilos, maçãs, pêssegos, mangas, bananas, uvas passas, cerejas secas, cranberries secas, pecans, nozes e manteiga de amendoim. A farinha de aveia é usada para fazer mingau, como ingrediente em biscoitos de aveia e bolos de aveia, ou como um realce, tal como na cobertura de pães de farelo de aveia e revestimento de queijos Caboc. A farinha de aveia é usada como espessante em alguns alimentos, como enlatados de carne com pimenta. A farinha de aveiaveia é usada também em algumas bebidas alcoólicas, cosméticos, sabonetes, tratamentos médicos externos, e às vezes é adicionada a produtos de alimentação animal.

[0040] Em outro aspecto, a composição probiótica da invenção são grãos com Bacillus coagulans isolada. Grãos é um alimento à base de milho índio americano comum no sul dos Estados Unidos, composto de milho moí-do grosso. Tradicionalmente, o milho para grãos é moído por um moinho de pedra. Os resultados são transmitidos através de telas, com a parte mais fina sendo farinha de milho, e a parte mais grossa sendo grãos.

[0041] Também são fornecidos sopas instantâneas probióticas, incluindo Bacillus coagulans isoladas em sopas que necessitam de água quente. A sopa é um alimento que é feito pela combinação de ingredientes, tais como carne e vegetais em estoque ou água quente/fervente, até que o sabor seja extraído, formando um caldo. Tradicionalmente, as sopas são classificadas em dois grandes grupos: sopas claras e sopas espessas. As sopas espessas são classificadas dependendo do tipo de agente de espessamento utilizado: purês são sopas de legumes engrossadas com amido; bisques são feitas a partir de purê de marisco engrossado com creme; sopas cremosas são engrossadas com molho bechamel, e veloutés são engrossados com ovos, manteiga e creme. Outros ingredientes comumente usados para engrossar sopas e caldos incluem arroz, farinha e grãos. Misturas de sopa de estilo oriental contendo macarrão são comercializadas como um almoço econômico instantâneo, necessitando apenas de água quente para a preparação. Vários tipos de sopas incluem sopa de tomate, sopa de cogumelos, sopa de macarrão de galinha, sopa de carne e vegetais, minestrone, sopa de batata e alho-poró, sopa de lentilha, sopa de peixe, sopa de miso, sopa de ervilha, sopa de frutas, ensopado de amêijoas, quiabo e bisque. Muitas sopas, tais como sopas de vegetais, à base de frango, de batata, de massa e de queijo também estão disponíveis na forma de mistura seca, pronta para ser servida por adição de água quente. Sopa de mistura seca inclui matéria desidratada, por exemplo, carne desidratada, tal como aves e carne bovina, vegetais desidratados, ervas desidratadas, temperos desidratados, macarrões desidratados etc. Um pacote de estoque de sopa seca (por exemplo, ramen) normalmente não contém água. A sopa instantânea é preparada por adição de água primeiro e depois aquecimento do produto por um curto período de tempo (normalmente 3-5 minutos) ou por adição de água quente diretamente à sopa seca. A sopa Instantânea também pode ser conservada em um pó seco que pode ser armazenado em, por exemplo, um pacote ou um copo. Bactéria Bacillus coagulans na forma de pó seco por pulverização é adicionado antes ou após a adição do pó de sopa de mistura seca à água quente.

[0042] Em um aspecto, a bactéria Bacillus coagulans sob a forma de um pó seco por pulverização está incluída em ou na superfície da composição probiótica à base de grãos aqui descrita. Preferencialmente, a Bacillus coagulans isolada é na forma de um esporo. As Bacillus coagulans isoladas são pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 99% de esporos puros. Altemativamente, a Bacillus coagulans isolada possui a forma de uma célula vegetativa. Em um aspecto, as Bacillus coagulans isoladas são pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% de células vegetativas. Em outro aspecto, a Bacillus coagulans isolada possui a forma de uma mistura de células vegetativas e esporos. A mistura de Bacillus coagulans é de 90% de esporos, 10% de células vegetativas; 75% de esporos, 25% de células vegetativas; 60% de esporos, 40% de células vegetativas; 50% de esporos, 50% de células vegetativas; 60% de células vegetativas, 40% de esporos; 75% de células vegetativas, 25% de esporos; ou 90% de células vegetativas, 10% de esporos.

[0043] 0 agente ativo de Bacillus e/ou Bacillus coagulans isolada é aplicado utilizando qualquer um de uma variedade de métodos conhecidos, incluindo, por exemplo, a aplicação de um pó, pulverizando o probiótico à composição de sopa de mistura seca ou à base de grãos, ou embebendo a composição em uma solução contendo o probiótico. Opcionalmente, a bactéria Bacillus é adicionada à pasta e seca no produto (massas, por exemplo). Alternativamente, a bactéria Bacillus é misturada com o produto de mistura seca (por exemplo, farinha de aveia ou sopa) antes de ferver em água. Em outro aspecto, a bactéria Bacillus coagulans na forma de seco por pulverização é adicionada diretamente à própria composição de sopa ou à base de grãos. Em ainda outro aspecto, maltodextrina junto com as bactérias Bacillus coagulans na forma de seco por pulverização é adicionada diretamente à própria composição de sopa ou à base de grãos. Opcionalmente, cerca de 5 x 107 CFU de bactérias Bacillus coagulans (por grama de matriz de alimento) na forma de seco por pulverização junto com maltodextrina é adicionado diretamente à própria composição de alimento.

[0044] Qualquer um de uma variedade de métodos para colocar a composição bacteriana em uma composição de sopa ou à base de grãos pode ser utilizado. Entretanto, os métodos preferidos incluem um método de "pulverização" em que as composições são expostas em uma câmara de baixa umidade a uma mistura atomizada contendo uma composição líquida, onde a câmara é posteriormente exposta a cerca de 80 a 110 °C para secar o líquido, assim, impregnando o material de composição de sopa de mistura seca ou à base de grãos com os componentes.

[0045] A concentração típica é de cerca de 1x107 a 1x1012; 1x108 a 1x1011 CFU; ou 1x109 a 1x1010 CFU de bactérias ou esporos viáveis/g de matriz alimentar. Após a secagem, o alimento está pronto para uso imediato ou para armazenamento em embalagem esterilizada, por exemplo, um pacote de 3 onças, um pacote de 6 onças, um pacote de 9 onças, um pacote de 12 onças, um pacote de 15 onças, um pacote de 18 onças, ou um pacote de 24 onças.

[0046] 0s ingredientes ativos (ou seja, bactérias vivas ou componentes extracelulares), compreendem entre cerca de 0,01% a cerca de 10%; 0,01% a cerca de 1%; ou cerca de 0,05% a cerca de 0,1% em peso da composição probiótica de sopa ou à base de grãos. Opcionalmente, a Bacillus coagulans isolada compreende cerca de 1 mg a cerca de 10 g; cerca de 10 mg a cerca de 1 g; ou cerca de 25 mg a cerca de 75 mg em peso da composição probiótica. Mais preferivelmente, a quantidade de bactéria Bacillus coagulans é de cerca de 5 x 107 unidades formadoras de colônia (CFU) de bactérias por grama de matriz alimentar.

[0047] Em um aspecto, a quantidade de bactérias é de cerca de 104 a 1014 unidades formadoras de colônia (CFU) de bactérias por grama de composição probiótica (isto é, células vegetativas e/ou esporos de bactérias), de preferência, 105 a 1013 CFU/g de matriz alimentar. Alternativamente, as concentrações são de 108 a 1013 CFU/g; 109 a 1012 CFU/g; ou 101° a 1011 CFU/g de matriz alimentar. Em um aspecto, a quantidade de bactérias é de cerca de 1 x 106 CFU por grama de matriz alimentar. A quantidade real em uma composição de sopa ou à base de grãos irá variar dependendo das quantidades de composição a serem dispersadas na composição do alimento e das rotas de dispersão.

[0048] Em um aspecto, a invenção prevê armazenar a composição de sopa de mistura seca ou à base de grãos em um pacote estéril à temperatura ambiente antes do consumo. Alternativamente, a composição é consumida imediatamente.

[0049] Em outro aspecto, a composição compreende pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou 100% de esporos de Bacillus coagulans isolada.

[0050] A título de exemplo, e não de limitação, os esporos de Bacillus coagulans podem ser incorporados a qualquer tipo de produto seco ou liofilizado que é dissolvido ou misturado com água quente, enquanto a temperatura da mistura contendo esporo de Bacillus coagulans é elevada para a temperatura de choque térmico requerida (ou seja, 80 °C por 5 minutos) necessária para a germinação dos esporos. Os esporos de Bacillus coagulans podem ser tanto incorporados ao produto seco ou liofilizado pelo fabricante do produto ou pelo consumidor durante a preparação. Estes produtos secos ou liofilizados incluem, mas não estão limitados a: sopas de mistura seca, massa, farinha de aveia, grãos etc. A composição de sopa ou à base de grãos é posteriormente fervida em água quente, por exemplo, fervendo no fogão, adicionando água fervente em um recipiente ou colocando no microondas a composição de sopa ou à base de grãos junto com água.

[0051 ]Em um aspecto, os esporos de Bacillus coagulans sobrevivem ao armazenamento (vida de prateleira), ou seja, mantêm a viabilidade ou a capacidade de germinar em condições fisiológicas (por exemplo, ingestão), de cerca de 12 dias a cerca de 2 anos; de cerca de um mês a cerca de 18 meses; de cerca de 3 meses a cerca de 1 ano; ou de cerca de 6 meses a cerca de 9 meses.

Exemplo 1: Preparação de culturas de Bacillus coagulans [0052] Bactéria Bacillus coagulans hammer (Adesão ATCC N° 31.284) foi inoculada e cultivada em densidade celular de cerca de 108 a 109 células/ml em caldo nutritivo contendo 5 g de peptona, 3 g de extrato de carne, 10-30 mg de MnS04, e 1.000 ml de água destilada, pH ajustado para 7.0, utilizando um vaso de fermentação padrão a 30 °C. A faixa de MnSQ* aceitável para esporulação é de 1 mg/l a 1 g/l. As células vegetativas podem ativamente se reproduzir até 45 °C, e os esporos são estáveis até 90 °C. Após a fermentação, os esporos ou as células bacterianas de B. coagulans são coletados por meio de métodos convencionais (por exemplo, filtração, centrifugação) e as células e esporos coletados podem ser liofilizados, pulverizados, secos a ar ou congelados. Como descrito, o sobrenadante da cultura de células é coletado e usado como um agente extracelular secretado por B. coagulans.

[0053] Um rendimento típico da cultura acima está na faixa de cerca de 109 a 101° esporos viáveis e, mais tipicamente, cerca de 100 a 150 bilhões de células/esporos por grama antes da secagem. Esporos mantêm pelo menos 90% de viabilidade após a secagem, quando armazenados em temperatura ambiente por até dez anos, e assim a vida de prateleira efetiva de uma composição contendo esporos de B. coagulans hammer em temperatura ambiente é de cerca de 10 anos.

Exemplo 2:Preparação de esporos de Bacillus coagulans [0054] Uma cultura de esporos de B. coagulans seca foi preparada como segue. Dez milhões de esporos foram inoculados em um litro de cultura contendo 24 g de broto de batata dextrose, 10 g de digestão enzimática de tecidos de aves e peixes, 5 g de FOS e 10 g MnS04. A cultura foi mantida por 72 horas sob um ambiente de alto oxigênio a 37 °C para produzir cultura com cerca de 150 bilhões de células por grama de cultura. Posteriormente, a cultura foi filtrada para remover o líquido do meio de cultura, e o grânulo de bactérias foi ressuspenso em água e liofilizado. O pó liofilizado é, então, moído a um pó fino usando boas práticas de fabricação padrão (GMP).

Exemplo 3: Esporos de Bacillus coagulans sobrevivem no ambiente gástrico [0055]Este estudo foi realizado para determinar a taxa de sobrevivência de esporos de Bacillus coagulans à medida que passam através do estômago. Amostras de esporos de Bacillus coagulans foram submetidas a um ambiente de simulação gástrica por diferentes períodos de tempo para atingir sua taxa de sobrevivência. Primeiro, uma amostra homogênea de material bruto de Bacillus coagulans de pelo menos 12 gramas foi preparada. Solução salina em pH 1 foi preparada usando 3N HCI (150 ml cada em seis garrafas de meio de 250 ml) e esterilizada. Soluções salinas adicionais com pH 2 e 3 foram preparadas similarmente, resultando em 6 garrafas estéreis de 250 ml, cada uma contendo 150 ml de solução salina com pH ajustado. Seis garrafas de meio de 250 ml estéreis cada uma contendo 150 ml de solução salina normal foram preparadas e esterilizadas. Tampão de fosfato (~ 400 ml) foi preparado em pH 7,2. Tubos de ensaio (24) foram preparados e esterilizados, cada um contendo 9 ml de tampão de fosfato pH 7,2. Tubos de ensaio (120) foram preparados, cada um contendo 9 ml de soolução salina normal. Meio ágar de GYE (extrato de glicose-levedura) foi preparado e esterilizado e resfriado a 45 °C em banho-maria.

As amostras (24) de material bruto foram pesadas, cada -500 miligramas {teoricamente equivalentes a 10 bilhões de esporos). As amostras foram adicionadas às garrafas de meio a 37 °C e metade delas foi incubada por 20 minutos, a outra metade por 120 minutos. Após 20 e 120 minutos de incubação, respectivamente, as amostras foram misturadas para uniformidade e uma pipeta de 1 ml a 9 ml de tampão de fosfato estéril, pH 7,2. Após todas as 12 amostras de cada ponto terem sido colocadas em tubos de ensaio contendo tampão de fosfato estéril, foram feitas diluições em série até que 6 tubos fossem utilizados para cada amostra. A diluição final para dois tubos de ensaio finais foram de 3 x 107 e 3 x 108, que deu uma contagem de cerca de 300 e 30 CFU, respectivamente. O 2 tubos de ensaio finais de cada amostra foram colocados em banho-maria a 70 °C por 30 minutos. Após 30 minutos, eles foram resfriados imediatamente para 45 °C. Três placas de petri estéreis por tubo foram definidas. 1,0 ml do tubo tratado termicamente foi adicionado em cada placa de petri, em seguida, 15 ml de meio Ágar de GYE fundido (a 45 °C) foram derramados em cada uma das placas de petri e misturados. Quando solidificados, as placas foram incubadas em posição invertida por 48 horas a 40 eC. As colônias individuais foram contadas. Os resultados foram expressos em CFU/g conforme demonstrado na Tabela 1 abaixo. 1.0E+10 = 1 x 1010.

Tabela 1.

Exemplo 4: Bacillus coagulans mantém viabilidade em nhoque (massa de batata) [0056]O objetivo do estudo foi determinar a taxa de sobrevivência de GB 1-30 (Bacillus coagulans-30: BC30)) em nhoque (massa de batata) após o cozimento e pasteurização, BC30 foi misturada em nhoque (massa de batata) na dose de 5 x 1Q7 CFU/g de matriz alimentar, seco por pulverização, e cozido em água a 100 X por 1 minuto e 30 segundos, A massa de batata foi subseqü ente mente pasteurizada por 1 hora e 20 minutos a 95 °C. Após a pasteurização, a massa de batata foi cozida a 100 “C por 1 minuto e 30 segundos para simular o cozimento caseiro. A massa foi armazenada a 4 X por 30 dias (a vida de prateleira é de 60 dias), sofreu choque térmico a aproximadamente 80 X por cerca de 5 minutos, e foi colocada em meio ágar de GYE. Os resultados demonstram que cerca de 1.3 x 107 CFU de Bacillus coagulans por grama de matriz alimentar sobreviveram mesmo após o armazenamento por cerca de 30 dias. Resultados comparáveis foram observados após o choque térmico (thermiz), sugerindo que após o processo de cozimento, a massa é composta principalmente por esporos de Bacillus coagulans e poucas células vegetativas. A massa de batata foi embalada em atmosfera modificada. A atividade de água (Aw) da composição foi de aproximadamente 0,95%. Os dados da Figura 1 mostram que, após a pré-fervura, a pasteurização, e o cozimento, a quantidade de BC30 na massa de batata foi de 3 x 106 CFU/g de matriz alimentar, sugerindo que a dose diária aproximada de probióticos em 100 g de nhoque é cerca de 1.3 x 109 CFU ou 100% de RDA (1 bilhão de células viáveis é a dose recomendada nas orientações da UE).

Exemplo 5: Bacillus coagulans mantém viabilidade em massa com ovos fresca [0057] Este estudo foi realizado para determinar a taxa de sobrevivência de GBI-30 (Bacillus coagulans-30m, BC30), em massas com ovos frescas após pasteurização. BC30 foi misturada na assa com ovos fresca com queijo, legumes e recheio de carne na dose de 5 x 107 CFU/g de matriz alimentar. A massa com ovos fresca foi posteriormente seca por pulverização e pasteurizada por cerca de 5 minutos a 100 °C. A vida de prateleira da massa de ovos fresca foi de 50 dias. A massa foi acondicionada em atmosfera modificada. A atividade de água (Aw) da composição foi de cerca de 0,92-0,97%. Os resultados ilustrados na Figura 2 demonstram que cerca de 2 x 107 CFU de BC30 sobreviveram à pasteurização descrita acima, indicando que Bacillus coagulans mantém a viabilidade em massa com ovos fresca.

Exemplo 6: Sobrevivência de Bacillus coagulans termo-ativado [0058] A capacidade de GBI-30 sobreviver (Bacillus coagulans-30; BC30) em farinha de aveia a aquecimento no microondas foi determinada. A Tabela 2 mostra que aproximadamente 82% de BC30 sobreviveram sozinhas no microondas por 1 minuto e 50 segundos. Conforme demonstrado na Tabela 2, cerca de 79% das bactérias Bacillus coagulans iniciais em farinha de aveia sobreviveram após microondas por 1 minuto e 50 segundos, sugerindo que Bacillus coagulans mantêm a viabilidade em farinha de aveia após o cozimento. A Tabela 2 mostra a sobrevivência de BC30 após tratamento térmico sob várias condições.

Tabela 2. A: BC30 1g+10ml de água, 75°C 30min, resfriada para 45°C, diluição em série, contagem de placas total. B: BC30 1g+250ml de água, microondas 1 min 50 segundos, diluição em série, contagem de placas total. C: BC30 1g+1 porção de farinha de avela (35.6g)+250ml de água, microondas 1 min 50 segun- dos, diluição em série, contagem de placas total._______________________________________ Exemplo 7: Bacillus coagulans em mistura de sopa Turtle Island seca [005Çt]Bacillus coagulans probiótica da invenção foi adicionada à mistura de sopa Turtle Island seca na quantidade indicada na Tabela 3. A

Tabela 3 é um gráfico que indica o número de unidades formadoras de colônia (CFU) de BC30 por porção de mistura sopa seca.

Tabela 3.

Exemplo 8: Bacillus coagulans mantém viabilidade em massa de semolina de trigo durum [0060]0 objetivo do estudo a seguir foi determinar a taxa de sobrevivência de GBI-30 {Bacillus coagulans-30; BC30) em massa de semolina de trigo durum após o cozimento. BC30 foi misturado na massa de semolina de trigo durum na porção de cerca de 4 x 108 CFU i porção (cerca de 7 x 106 CFU/g de matriz alimentar (cerca de 30 mg de BC30); tamanho da porção é de cerca de 56 gramas). A composição foi extrusada a 37-38 °C, seguida por 20 horas de secagem a 50 °G , A Tabela 4 mostra a sobrevivência de BC30 após a fabricação da massa seca e após o cozimento da massa seca por meio de fervura por aproximadamente 8 minutos. Os resultados apresentados na Tabela 4 mostram que aproximadamente 55% do BC30 sobrevivem ao processo de produção, enquanto que aproximadamente 30% de BC30 sobrevivem ao processo de cozimento, indicando que Bacillus coagulans BC30 mantém a viabilidade em massa de semolina de trigo durum.

Tabela 4.

REIVINDICAÇÕES

Claims (18)

1. Composição alimentícia CARACTERIZADA pelo fato de que compreende esporos isolados de Baciiius coagulans e massa,

2. Composição, de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADA pelo fato de que a referida massa é selecionada a partir do grupo consistindo em espaguete, lasanha, massa de ovos, spãtzle, penne rigate, rotini, rigatoni, e nhoque.

3. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que os referidos esporos isolados de Baciiius coagulans compreendem entre 0,01 % e 10% em peso da referida composição cozida.

4. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que os referidos esporos isolados de Baciiius coagulans são esporos da cepa Baciiius coagulans hammer N° de Acesso ATCC 31284.

5. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que os referidos esporos isolados de Baciiius coagulans são esporos da cepa GBI-30 (Número de Designação ATCC PTA-6086), esporos da cepa GBI-20 (Número de Designação ATCC PTA-6085), ou esporos da cepa GBI-40 (Número de Designação ATCC PTA-6087).

6. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que os referidos esporos de Baciiius coagulans estão ativos após contato com um líquido tendo uma temperatura de cerca de 100 °C, em que o referido líquido compreende água ou leite.

7. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende ainda células vegetativas isoladas de Baciiius coagulans.

8. Composição alimentícia, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende uma mistura seca para composições à base de grãos compreendendo esporos isolados de Baciiius coagulans e massa.

9. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que a referida composição compreende massa seca.

10. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que a referida composição compreende massa de macarrão.

11. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que a referida composição compreende massa cozida.

12. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que a referida composição foi submetida a uma temperatura selecionada a partir dos grupos consistindo em 100 °C, 120 °C, e 150 °C.

13. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que os referidos esporos isolados de Bacillus coagulans são esporos da cepa GBI-30 (ATCC Número de Designação PTA-6086).

14. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que pelo menos cerca de 5% a 25% dos referidos esporos de Bacillus coagulans se mantém viáveis após serem submetidos a uma temperatura de cerca de 100 °C para cerca de um minuto em água.

15. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que pelo menos cerca de 5% a 25% dos referidos esporos de Bacillus coagulans se mantém viáveis após a composição ter sido cozida em água fervente por cerca de um minuto.

16. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que pelo menos cerca de 5% a 25% dos referidos esporos de Bacillus coagulans se mantém viáveis após a composição ter sido cozida em água fervente por cerca oito minutos.

17. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que pelo menos cerca de 25% a 50% dos referidos esporos de Bacillus coagulans se mantém viáveis após serem submetidos a uma temperatura de cerca de 100 °C por cerca de um minuto em água.

18. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que pelo menos cerca de 25% a 50% dos referidos esporos de Bacillus coagulans se mantém viáveis após a composição ter sido cozida em água fervente por cerca de um minuto.