BRPI0800492A2 - radiofármaco e sua composição farmacêutica para tratamento e diagnóstico de cáncer - Google Patents

Abstract

RADIOFáRMACO E SUA COMPOSIçãO FARMACêUTICA PARA TRATAMENTO E DIAGNóSTICO DE CáNCER. A presente invenção relata um radiofármaco e suas composições farmacêuticas, contendo uma combinação de um componente radioativo e um componente químico (ligante orgânico), podendo também conter excipientes farmacêutica e farmacologicamente aceitáveis. Essas composições farmacêuticas caracterizam-se por conter uma combinação de um radionuclídeo, o Tecnécio-99m, e um componente químico (ligante orgânico) que apresenta afinidade por células tumorais, principalmente em estágios iniciais, favorecendo o tratamento e aumentando as chances de cura da doença.

Description

"RADIOFÁRMACO E SUA COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARATRATAMENTO E DIAGNÓSTICO DE CÂNCER"

A presente invenção relata um radiofármaco e suas composições farmacêuticas,contendo uma combinação de um componente radioativo e um componente químico(ligante orgânico), podendo também conter excipientes farmacêutica efarmacologicamente aceitáveis.

Essas composições farmacêuticas caracterizam-se por conter uma combinaçãode um radionuclídeo, o Tecnécio-99m, e um componente químico (ligante orgânico)que apresenta afinidade por células tumorais, principalmente em estágios iniciais,favorecendo o tratamento e aumentando as chances de cura da doença.

Estado da técnica:

A proliferação celular desordenada é fundamental para o desenvolvimento docâncer. Para a determinação dessa proliferação são utilizadas técnicas de diagnósticoque necessitam de amostras de tecido para a sua realização, como: imuno histoquímica,citometria de' fluxo e contagem do número de mitoses visíveis. No entanto, estastécnicas apresentam algumas limitações. A biópsia, por exemplo, pode não serrepresentativa de todo o tumor devido à heterogeneidade deste, elas podem ser difíceisde serem realizadas dependendo da profundidade do tumor e, além disso, pode haverdiferenças entre o tumor primário e metástases (KENNY, L. M.; ABOAGYE, E. O.;1 PRICE, Ρ. M. Positron emission tomography imaging of cell proliferation in oncology.Clinicai Oncology, v. 16, p. 176-185, 2004).

Outros meios de avaliação da proliferação tumoral se baseiam em mudançasanatômicas observadas em exames clínicos, raios-X, ultra-sonografia, tomografiacomputadorizada e ressonância magnética nuclear, que permitem avaliar alterações notamanho do tumor. Essas mudanças, no entanto, podem tardar semanas ou meses paraserem observadas e avaliadas, dificultando o tratamento (SHIELDS, A. F.; GRIERSON,J. R.; DOHMEN, B. M.; MACHULLA, H.; STAYANOFF, J. C.; OBRADOVICH, J. E.Imaging proliferation in vivo with [F-18] FLT and positron emission tomography.Nature Medicine, v. 4, n. 11, p. 1334-1336, 1998.).

A medicina nuclear vem se tornando uma ferramenta poderosa para a detecçãode diversas doenças, como o câncer. Enqüanto as demais técnicas avaliam alteraçõesanatômicas, a cintilografia é capaz de detectar alterações bioquímicas e fisiológicas noórgão estudado, e assim, identificar a doença em seu estágio inicial. A possibilidade dodiagnóstico precoce de células neoplásicas irá favorecer a terapêutica, aumentando asobrevida dos pacientes e, até, possibilitando sua cura. Nesta técnica, a imagem docorpo é obtida através da captação da radioatividade emitida pelo radiotraçadoradministrado. Os radiofármacos são administrados, em sua maioria, por via endovenosae o diagnóstico é baseado em alterações bioquímicas e fisiológicas do órgão em exame,sem a necessidade de alterações anatômicas, fornecendo o diagnóstico da doença em umestágio inicial (CONTI, P. S.; LILffiN, D. L.; HAWLEY, K.; KEPPLER, J.;GRAFTON, S. T.; BADING, J. R. PET and [18F]-FDG in oncology: A clinicai uptake.Nuclear Medicine and Biology, v. 23, p. 717-735, 1996; THRALL, J. H.; ZIESSMAN,H. A. Medicina Nuclear. 2. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2003. p. 408).

Radiofármacos são compostos radioativos usados no diagnóstico e no tratamentode doenças. Em medicina nuclear cerca de 95% dos radiofármacos são utilizados parafins de diagnósticos. A maioria destes radiofármacos é uma combinação de umcomponente radioativo (radionuclídeo), que permite a detecção externa da fisiologiae/ou anatomia do órgão em exame, e um componente químico (ligante orgânico), que éresponsável pelo direcionamento no organismo. Essas substâncias não apresentam açãofarmacológica, pois são administradas em doses extremamente baixas. O radionuclídeodeve emitir uma radiação que será facilmente detectável por um instrumento nuclear e adose dessa radiação para o paciente deverá ser mínima (SAHA, G. B. Fundamentais ofnuclear pharmacy. 4.ed. New York: Springer-Verlag, 1998a. 358 p.; THRALL;THRALL, J. H.; ZIESSMAN, H. A. Medicina Nuclear. 2. ed. Rio de Janeiro:Guanabara Koogan, 2003. p. 408).

Existe uma grande variedade de radionuclídeos usados em medicina nuclearcomo: iodo-131(131I), índio-111 (lllln), Tálio-201 (201 TI), Flúor-18 (18F), Tecnécio-99m (99mTc), Gálio-67 (67Ga), entre outros (SAHA, G. B. Fundamentais of nuclearpharmacy. 4.ed. New York: Springer-Verlag, 1998a. 358 p.).

Em oncologia, o agente de imagem tumoral mais usado é o 2-[18F]fluoro-2-desoxi-D-glicose ([18F]FDG) (CELEN, S.; GROOT, T.; BALZARINI, J.; VUNCKY,K.; TERWINGHE, C. Synthesis and evaluation of a "mTc-MAMA-propyl-thymidinecomplex as a potential probe for in vivo visualization of tumor cell proliferation withSPECT. Nuclear Medicine and Biology, v. 34. p. 283-291, 2007).O flúor-18 é produzido em ciclotron, tem meia-vida física de 109 minutos edecai por emissão de pósitron (radiação β+) que ao interagir com um elétron do meio seaniquila gerando dois fótons gama de 511 keV num ângulo de 180°, que serãodetectados por tomografia por emissão de pósitron (PET)-( THRALL, J. H.;

ZIESSMAN, H. A. Medicina Nuclear. 2. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2003.p. 408). O [18FJFDG é um análogo da D-glicose, como mostrado na figura 4, e suaaplicação baseia-se na maior atividade glicolítica das células tumorais malignas(CONTI, P. S.; LILIEN, D. L.; HAWLEY, K.; KEPPLER, J.; GRAFTON, S. T.;BADING, J. R. PET and [18FJ-FDG in oncology: A clinicai uptake. Nuclear Medicineand Biology, v. 23, p. 717-735, 1996).0 [18FJFDG penetra na célula por difusãofacilitada através dos transportadores para glicose (GLUT-1), que, conforme jáexplicitado, também apresentam maior expressão em células tumorais (SCHIBLI, R.;DUMAS, C.; PETRIG, J.; SPADOLA, L.; SCAPOZZA, L.; GARCIA-GARAYOA, E.;SCHUBIGER, P. A. Synthesis and iη vitro characterization of organometallic rheniumand technetium glucose complexes against GLUT-I e hexokinase. BioconjugateChemistry, v. 16, p. 105-112, 2005., (LOVE, C.; TOMAS, M. B.; TRONCO, G. G.;PALESTRO, C. J. FDG PET of infection and inflamation. Radiographics, v. 25, n. 5, p.1357-1368, 2005.), é fosforilado pela enzima hexoquinase, como ocorre normalmentecom a D-glicose, gerando o [18F]FDG-6-fosfato (GU et ai, 2006). O segundo passo naglicólise seria a isomerização da glicose-6-fosfato a frutose 6-fosfato pela enzima fosfo-hexose isomerase, porém para a formação da frutose-6 fosfato, é necessário a presençado oxigênio em C-2, que está ausente no 18FDG.

Portanto, a partir desse ponto, o [18F]FDG fosforilado não pode prosseguir nocaminho metabólico normal da glicose, ficando retido no interior da célula de maneiraproporcional a atividade glicolítica desta célula (PAUWELS, Ε. K. J.; RIBEIRO, M. J.;STOOT, J. H.; MCCREADY, V. R.; BOURGUIGNON, M.; MAZIERE, B. FDGaccumulation and tumor biology. Nuclear Medicine and Biology, v. 25, p. 317-322,1998.; BOS, R.; HOEVEN, J. J. M.; WALL, E.; GROEP, P.; DIEST, P. J.;COMANS, E. F. J.; SEMENZA, G. L. Biological correlates of 18Auorodesoxyglucoseuptake in human breast câncer measured by positron emission tomography. Journal ofClinicai Oncology, v. 20, n. 2, p. 379-387, 2002).O uso do [18F]FDG na rotina clínica é, ainda, limitado devido à sua baixadisponibilidade e o custo relativamente alto, tanto em sua produção (ciclotron) como nadetecção das imagens (câmara PET), além da necessidade de uma síntese rápida devidoao baixo tempo de meia-vida física do flúor-18 (109 minutos). Assim, seria de grandevalia o desenvolvimento de agentes de diagnóstico baseados em isótopos emissores deradiação gama, direcionados à produção de imagens em câmaras de cintilaçãoconvencionais (CHEN, X.; LI, L.; LIU, F.; LIU, B. Synthesis and biological oftechnetium-99m-labeled deoxyglucose derivatives as imaging agents for tumor.Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, v. 16, p. 5503-5506,2006.).

O Tecnécio-99m é o radionuclídeo mais usado em medicina nuclear, porapresentar propriedades físicas e químicas ideais para um radioisótopo destinado àprodução de imagens cintilográficas, tais como: meia-vida física de 6,01 horas, emissãogama de baixa energia (140 keV), alta disponibilidade do radioisótopo a partir de umsistema gerador de Molibdênio-99/Tecnécio-99m (99Mo/99mTc), além de apresentarum custo relativamente baixo (JURISSON, S.; BERNING, D.; JIA, W.; DANGSHE, M.Coordination compounds in nuclear medicine. Chemical Reviews, v. 93, n. 3, p. 1137-1156, 1993.; JONES, A. G. Technetium in nuclear medicine. Radiochimica Acta, v.70/71, p. 289-297, 1995; MARQUES, F. L. N.; OKAMOTO, M. R. Y.;BUCHPIGUEL, C. A. Alguns aspectos sobre geradores e radiofármacos de Tecnécio-99m e seus controles de qualidade. Radiologia Brasileira, v. 34, n. 4, p. 233-239, 2001;YANG, D. J.; KIM, C.; SCHECHTER, N. R.; AZHDARINIA, A.; YU, D.; OH, C.,BRYANT, J. L.; WON, J.; KIM, E. E.; PODOLOFF, D. A. Imaging with 99mTc ECDGtargeted at the multifunctional glucose transport system: feasibility study with rodents.Radiology, p. 465-473, 2003).

O tecnécio é um metal de transição da família VII B e tem número atômico 43,podendo existir em oito estados de oxidação (-1 a +7). A estabilidade desses estados detransição depende do tipo de ligação e do ambiente químico. Os estados +7 e +4 sãomais estáveis e são representados em óxidos, sulfetos, haletos e pertecnetatos(DEWANJEE, Μ. K. The chemistry of 99mTc-Iabeled radiopharmaceuticals. Seminars inNuclear Medicine, v. 20, η. 1, p. 5-27, 1990; SAHA, G. B. Fundamentais of nuclearpharmacy. 4.ed. New York: Springer-Verlag, 1998a. 358 p).O íon pertecnetato, 99mTc04 -, tem estado de oxidação +7 para o 99mTc, isso otorna uma espécie não reativa e incapaz de ligar a algum composto, sendo necessária aredução do tecnécio, do estado +7 para um estado de oxidação menor. O cloreto deestanho II (SnCl2 · 2H20) é o agente redutor mais comum usado na preparação decompostos ligados ao 99mTc (NOWOTNIK, D. P. Physico-chemical concepts in thepreparation of technetium radiopharmaceuticals. In: SAMPSON, C. B. Textbook ofradiopharmacy theory and practice. V.3. Gordon and Breach Science Publishers S.A.,1990. Cap. 3, p. 53-72; 1990; SAHA, G. B. Fundamentais of nuclear pharmacy. 4.ed.New York: Springer-Verlag, 1998a. 358 p).

O 99mTc reduzido é uma espécie quimicamente reativa e combina com umagrande variedade de agentes quelantes. O agente quelante geralmente é doador deelétrons e forma uma ligação covalente coordenada com o Tc-99m reduzido. (SAHA,G. B. Fundamentais of nuclear pharmacy. 4.ed. New York: Springer-Verlag, 1998a. 358 P).

Desse modo, a alternativa mais viável seria a produção de substâncias quepudessem ser marcadas com Tecnécio-99m, contribuindo para a redução dos custos e,desta forma, tornando a técnica acessível a todos.

Existem muitos compostos capazes de se ligar ao Tecnécio-99m, sendo usados emmedicina nuclear para avaliar a função e/ou a morfologia de um órgão, determinando oestado patológico do paciente. São exemplos desses compostos o 99mTc-HMPAO(marcador cerebral), 99mTc- MAG3 (marcador renal), 99mTc-ECD (marcador paraimagem cerebral), 99mTc-HIDA (marcador adequado para imagens do sistemahepatobiliar), 99mTc-DMSA (agente de marcação renal). (JURISSON, S.; BERNING,D.; JIA, W.; DANGSHE, M. Coordination compounds in nuclear medicine. ChemicalReviews, v. 93, n. 3, ρ. 1137-1156,1993).

O MAG3, mercaptoacetilglicilglicilglicina, é um ligante N3S, que ao sermarcado com Tecnécio-99m apresenta uma pureza radioquímica superior a 90%(ROBLES et al, 2003). É capaz de formar um complexo estável, e carregadonegativamente com tecnécio (VANBILLOEN, H. P.; BORMANS, G. N.; ROO, M. J.;VERBRUGGEN, A. N. Complexes of technetium-99m with tetrapeptides, a new classOf99mTc-Iabeled agents. Nuclear Medicine and Biology, v. 22, n. 3, p. 325-338, 1995;YAMAMURA, N.; MAGATA, Y.; ARANO, Y.; KAWAGUCHI, T.; OGAWA, K.;KONISHI, J.; SAJI, Η. Technetium-99m-labeled medium-chain fatty acid analoguesmetabolized by α-oxidation: radiopharmaceutical for assessing liver function.Bioconjugate Chemistry, v. 10, n. 3, p. 489-495, 1999; OKARVI, S. M. Synthesis,radiolabeling and in vitro and in vivo characterization of a technetium-99m-labeledalpha-M2 peptide as a tumor imaging agent. Journal Peptide Research, v. 63, p. 460-468,2004).

O primeiro passo para a formação do radiofármaco 99mTc- MAG3, consiste naformação de um complexo do 99mTc com um ligante fraco em meio aquoso. Essecomplexo reage, em seguida, com um segundo ligante (MAG3), que forma umcomplexo mais estável. Ligantes fortes, como o MAG3, são menos solúveis em meioaquoso e necessitam de aquecimento ou longo tempo para dissolverem.

Inicialmente é preparado o complexo 99mTc-tartarato ou 99mTc-gluconato porredução do 99mTc04 - com íon estanoso em presença de tartarato de sódio ougluconato de sódio, seguido de aquecimento com MAG3, resultando no 99mTc- MAG3,como esquematizado na figura 6 (BORMANS, G.; CLEYNHENS, B.; ADRIAENS, P.;VANBILLOEN, H.; ROO, M.; VERBRUGGEN, P. Investigation of the labelingcharacteristics of 99mTc-mercaptoacetyltriglycine. Nuclear Medicine and Biology, v. 22,n. 3, p. 339-349, 1995; SAHA, G. B. Fundamentais of nuclear pharmacy. 4.ed. NewYork: Springer-Verlag, 1998a. 358 p).

O 99mTc- MAG3 é usado como marcador da função tubular renal. Apresentaalta ligação a proteínas plasmáticas, cerca de 90%, que confere a ele uma pequena taxade filtração glomerular (menor que 3%). Após administração por via intravenosa, seuclearance sangüíneo é rápido e bifásico, sendo rapidamente excretado por secreçãotubular renal (FRITZBERG, A. R.; KASINA, S.; ESHIMA, D.; JOHNSON, D. L.Synthesis and biological evaluation of technetium-99m MAG3 as a Hippuranreplacement. Journal of Nuclear Medicine, v. 27, η. 1, p. 111-116, 1986; ESHIMA, D.;TAYLOR, A. Technetium-99m (99mTc) Mercaptoacetyltriglycine: Update on the new99mTe renal tubular function agent. Seminars in Nuclear Medicine, v. 22, n. 2, p. 61-73,1992; SAHA, G. B. Fundamentais of nuclear pharmacy. 4.ed. New York: Springer-Verlag, 1998a. 358 p; THRALL, J. H.; ZIESSMAN, H. A. Medicina Nuclear. 2. ed. Riode Janeiro: Guanabara Koogan, 2003. p. 408).Com base no exposto e valendo-se do metabolismo acelerado das célulastumorais, que as tornam mais ávidas por glicose, realizou-se a síntese em oito etapas deβ-D-glicopiranosídeo de 4-^-[iV3-(benzoilmercaptoacetil)glicilglicilglicil]aminofenila,um derivado da D-glicose que complexado ao Tecnécio-99m seria capaz de detectartumores, em estágios iniciais favorecendo o tratamento e aumentando as chances de cura.

Foram relatados, em alguns estudos, a síntese de (S-EOE- MAG3-p-alanine: S-(1-ethoxyethyl) mercaptoacetyltriglycyl -β-alanine and CCK4:Trp-Met-Asp-Phe-NH2)através de sucessivas condensações de aminoácidos ativados em resinas químicas depureza elevada e o desenvolvimento de método de complexação do Tecnécio usando pHfisiológico e temperatura controlados. Além disso, estudos farmacológicos in vitro e invivo demonstraram a afinidade específica do composto obtido por receptores CCKBque são expressos preferencialmente por algumas células tumorais do trato digestivo.(HAFID BELHADJ-TAHAR, JEAN-PAUL ESQUERRE AND YVON COULAIS. "Aneasy-to-use imaging tool and radiopharmaceutical agent derived from CCK4 for internairadiotherapy": Synthesis and assessment of an original biovector. Nuclear Instrumentsand Methods in Physics Research Section.)

O desenvolvimento de um radiofármaco análogo do peptídeo aM2, oMercaptoacetiltriglicina (MAG)3-derivado do peptídeo aM2 com Tecnécio-99m, foirealizado para o diagnóstico do câncer de mama. Estudos farmacológicos debiodistribuição in vivo demonstram a afinidade do composto obtido por célulastumorais da região da mama. (S.M. OKARVI. "Synthesis, radiolabeling and in vitro andin vivo characterization of a technetium-99m labeled alpha-M2 peptide as a tumorimaging agent". Journal of Peptide Research).

Alguns estudos descrevem a síntese e as características biológicas do Tecnécio-99m triamida derivados do mercaptoacetiltriglicina (MAG3). (S. M. OKARVI, P.ADRIAENS, A. M. VERBRUGGEN. "Synthesis and biological characteristics of theTechnetium-99m triamide derivatives of mercaptoacetyltriglycine (MAG3)". Journal ofLabelled Compounds and Radiopharmaceuticals).

Outros estudos descrevem a síntese de Benzoyl-mercaptoacetylglycylglycyl-glycine-mannosyldextran (Bz MAG3-mannosyl-dextran) e o uso do composto obtidocomo radiofármaco para diagnóstico de células malignas no tecido reticuloendotelial.(DAVID R. VERA, ANNE M. WALLACE AND CARL K. HOHA. "99mTc] MAG3-mannosyl-dextran: a receptor-binding radiopharmaceutical for sentinel node detection".Nuclear Medicine and Biology).

O pedido de patente sob o número US5245018, "Process for preparing aradiopharmaceutical composition", descreve um processo de preparo de umacomposição radiofarmacêutica, compreendendo tecnécio 99m, MAG3, agente redutor eestabilizante solúveis em água, a qual remove qualquer incômodo oriundo dodiagnóstico local e diminui a exposição do técnico à radiação durante a operação.

Contudo, a composição farmacêutica descrita no presente relatório é distinta e não foireivindicada no pedido de patente US5245018.

O pedido de patente de número US5840273, "Technetium-99m complexes foruse as radiopharmaceuticals", descreve uma composição radiofarmacêuticacompreendendo complexo de tecnécio 99-m para exame de função renal, bem como ométodo de exame usando a composição. Dessa forma, a composição da presenteinvenção (caracterizada por descrever um ligante orgânico que complexado aoTecnécio-99m seria capaz de detectar tumores em estágios iniciais) é diferente dadescrita na patente supra citada.

O pedido de patente sob o número US5986074, "Metal chelates aspharmaceutical imaging agents", processes of making such and uses thereof, descreve oprocesso de obtenção e composição farmacêutica de metais quelatos, como o Tecnécio-99m, para ligantes correspondentes destinado ao diagnóstico de diversas doenças.

Entretanto, a composição farmacêutica descrita no presente relatório descritivo é bemdiferente do pedido de patente citado e, portanto, não foi reivindicado.

Não foi encontrada no estado da técnica nenhuma patente contendo composiçãode radiofármaco derivado de MAG-3 capaz de detectar tumores ou que tenham grandeavidez por células tumorais em estágios iniciais.

Para solucionar tal problema a presente invenção propõe a obtenção decomposição contendo uma combinação de um radionuclídeo, o Tecnécio-99m, e umcomponente químico (ligante orgânico) que apresenta afinidade por células tumorais,capaz de detectar tumores principalmente em estágios iniciais, o que inclusive favoreceo tratamento e aumenta enormemente as chances de cura da doença.Realizou-se a marcação dos compostos Benzoilmercaptoacetilglicilglicilglicina£1} e β-D-glicopiranosídeo de 4-JV-[iV3-(benzoil-mercaptoacetil)glicilglicilglicil]aminofenila (2), formando complexos com Tecnécio-99m como o 99mTe- MAG3 (3) e o 99mTc- MAG3-G ^respectivamente, que serãoutilizados nos estudos de biodistribuição.

Foram realizados os estudos de biodistribuição de 99mTc-MAG3-G (4), umderivado da D-glicose, inicialmente em camundongos SWISS, machos, 25-30g, sadios,utilizando o 99mTc-MAG3 £3} como padrão. Os estudos demonstraram que (4) e (3)apresentam padrões de biodistribuição diferentes, observando-se o perfil de clearancebifásico para o (3) que é ausente em (4). Em seguida, realizaram-se os estudos debiodistribuição de (4) em camundongos com tumor de Erhlich implantados na pataposterior direita, novamente utilizando-se o (3) como padrão. O derivado (4) apresentouconcentração cerca de duas vezes maior no tumor em relação à pata posterior esquerda(controle) para todos os tempos analisados (5, 30, 120 e 240 minutos), o que o credenciacomo um promissor marcador tumoral. Tal característica não foi observada para o (3).MAG3

Nesse sentido, a presente invenção caracteriza-se pelo uso de ligantes orgânicosacoplados quimicamente a açúcares, que aumentam sua afinidade por células tumorais.Esses ligantes são complexados ao Tecnécio-99m, tornando-se capaz de detectartumores principalmente em estágios iniciais, favorecendo o tratamento e aumentando aschances de cura.

A formulação da presente invenção caracteriza-se pelo uso da mistura deexcipientes aceitáveis farmaceuticamente combinados ao produto obtido, derivado deMAG3 acoplado ao Tecnécio-99m e/ou outros radionuclídeos. Podem ser preparadasformulações com um excipiente ou misturas desses. Exemplos de excipientes incluemágua para injetáveis, solução salina estéril, soluções tamponadas com fosfato, a soluçãode Ringer, solução de dextrose, a solução de Hank, soluções salinas biocompatíveiscontendo ou não polietileno glicol. Veículos não aquosos, como óleos fixos, óleo desesame, etil-oleato, ou triglicerídeo também podem ser usados. Outras formulações úteisincluem agentes capazes de aumentar a viscosidade, como carboximetilcelulose desódio, sorbitol, ou dextran.Os excipientes também podem conter quantidades menores de aditivos, comosubstâncias que aumentam isotonicidade e estabilidade química de substância outampões. Exemplos de tampões incluem tampão fosfato, tampão bicarbonato e tampãoTris, enquanto exemplos de conservantes incluem timerosal, m - ou o-cresol, formalinae álcool benzílico.. As formulações padrões podem ser líquidas ou sólidas. Desta forma,uma formulação não-líquida, o excipiente pode incluir dextrose, albumina de sorohumano, conservantes, etc, na qual água ou solução salina estéril possa ser acrescentadaantes da administração.

A presente invenção, caracteriza-se ainda pela preparação de sistemas deliberação controlada contendo o produto obtido derivado de MAG3 acoplado aoTecnécio-99m e/ou outros radionuclídeos Os sistemas de liberação controladasatisfatórios incluem, mas não são limitados às ciclodextrinas, polímerosbiocompatíveis, polímeros biodegradáveis, outras matrizes poliméricas, cápsulas,microcápsulas, micropartículas, preparações de bolus, bombas osmóticas, dispositivosde difusão, lipossomas, lipoesferas, e sistemas de administração transdérmicos.

Lista de figuras:

Figura 1: Perfil de biodistribuição do 99mTc-MAG3 e do 99mTc-MAG3-Gno sistema urinário.

Figura 2: - Perfil de biodistribuição do 99mTc-MAG3 e do 99mTc-MAG3-Gno sangue.

Figura 3: Perfil de biodistribuição do 99mTc-MAG3 e do 99mTc-MAG3-G nofígado.

Figure 4: Perfil de biodistribuição do 99mTc-MAG3 e do 99mTc-MAG3-Gno coração.

Figura 5: Perfil de biodistribuição do 99mTc-MAG3 e do 99mTc-MAG3-G nopulmão.

Figura 6 - Imagens cintilográficas de 99mTc-MAG3-G em todos os temposestudados, onde se nota maior concentração do produto testado na pataposterior direita (PPD) em relação a esquerda.

A presente invenção pode ser melhor entendida através dos seguintes exemplos,porém não limitantes:EXEMPLO 1- Rendimento de marcação e purificação de 99mTc-MAG3 e 99mTe-MAG3-G

Realizou-se a marcação de Bz-MAG3 (9) e de Bz-MAG3-G (10) utilizando-sefrasco âmbar contendo 1 mg do composto a ser marcado, 40 mg de tartarato de sódio eO1ImL de HCl 0,25 moL/L contendo 0,2 g de cloreto estanoso (SnCl2 · H2O). Ajustou-se o pH para uma faixa de 6 a 8 com uma solução de hidróxido de sódio 0,2 moL/L.Ofrasco foi lacrado e realizou-se vácuo para evitar a oxidação do estanho. Ao frascoadicionou-se 0,1 mL de solução de pertecnetato de sódio com atividade de 37 MBq. Ofrasco com a solução foi mantido em banho-maria fervente por 10 a 40 minutos. Apóseste período a solução foi deixada à temperatura ambiente por 10 a 30 minutos pararesfriamento.

O 99mTc se complexa com os derivados Benzoilmercaptoacetilglicilglicilglicina(1) e β-D-glicopiranosídeo de 4-yV-[W3-(benzoil-mercaptoacetil)glicilglicilglicil]aminofenila (2) através dos três átomos de nitrogênio edo átomo de enxofre, que é desprotegido após o aquecimento (WINNARD, P. Jr;CHANG, F.; RUSCKOWSKI, M.; MARDIROSSIAN, G.; HNATOWICH, D. J.Preparation and use of NHS-MAG3 for Technetium-99m labelinf of DNA. NuclearMedicine & Biology, v. 24, n. 5, p. 425-432, 1997), fornecendo o 99mTc-MAG3 e o99mTc-MAG3-G que serão utilizados nos estudos de biodistribuição.

O rendimento de marcação para o 99mTc-MAG3 e o 99mTc-MAG3-G foramdeterminados com base nos valores obtidos por cromatografia em camada delgada(CCD). Pelos dados obtidos por CCD, utilizando acetona como eluente, foi possíveldeterminar o percentual de 99mTcO4" (6,02 ± 1,15), ou seja, dos átomos de tecnécio quenão foram reduzidos. Utilizando-se salina como eluente, encontrou-se o percentual deaproximadamente 40,28 ± 4,62 de 99mTcO2, sendo este percentual relativo aos átomosde Tecnécio-99m hidrolizados. Portanto, os dois produtos testados, inicialmente, nãoapresentaram rendimento satisfatório de marcação como mostrado na tabela 1. Deacordo com a literatura, o rendimento de marcação recomendado de um produto paraestudos de biodistribuição deve ser superior a 90% (THEOBALD, A. E. Physico-chemical concepts in the preparation of technetium radiopharmaceuticals. In:SAMPSON, C. B. Textbook of radiopharmacy theory and practice. V.3. Gordon andBreach Science Publishers S.A., 1990. Cap. 7, p. 115-148). Impurezas radioquímicasresultam em imagens de baixa qualidade devido à alta radiação de fundo ao redor dostecidos e no sangue, além de expor o paciente a uma dose desnecessária de radiação(SAHA, G. B. Fundamentais of nuclear pharmacy. 4.ed. New York: Springer-Verlag,1998a. 358 p; THRALL, J. H.; ZIESSMAN, H. A. Medicina Nuclear. 2. ed. Rio deJaneiro: Guanabara Koogan, 2003. p. 408).

Desta forma, para atender os objetivos propostos tornou-se necessário apurificação dos produtos marcados, ou seja, a retirada das impurezas radioquímicas99mTcO4- e 99mTcO2.

A pureza radioquímica foi avaliada por cromatografia em camada delgada(CCD) em sílica gel 60. Inicialmente, realizaram-se as CCD das impurezas comumenteencontradas nos processos de marcação, 99mTcO2 e 99mTcO4", empregando-se soluçãosalina a 0,9% e acetona como eluentes. O 99mTcO2 foi obtido tratando-se o pertecnetatode sódio (Na99mTcO4) com um agente redutor (cloreto estanoso) por 5 a 30 minutos.Aplicou-se uma gota da solução em uma tira de CCD para a realização da cromatografiacom os eluentes já citados. A cromatografia com pertecnetato foi realizada diretamentecom a solução eluída do gerador 99Mo/99mTc.

Cada placa de CCD foi preparada nas dimensões de 10 cm de comprimento por1 cm de largura. Após a eluição de cada solvente, as placas foram secadas, cortadas emfragmentos de 1 cm de comprimento cada e, em seguida, a radioatividade foideterminada em um contador gama.

Após definidos os valores de R/ das impurezas acima citadas, realizaram-se ascromatografias dos produtos sintetizados (1) e (2) marcados com 99mTc, tambémutilizando tiras de CCD (sílica gel 60) e, como eluentes, acetona e solução salina a 0,9%.

As soluções contendo os produtos marcados foram purificadas por colunautilizando silicato de magnésio (Florisil 60-100 mesh) como fase estacionária e,inicialmente, acetona como fase móvel para a remoção do pertecnetato em excesso,seguida pela utilização de solução salina a 0,9% para a retirada do produto marcado,ficando o 99mTcO2 retido na coluna. Retirou-se 30 alíquotas de, aproximadamente, 0,25mL com cada eluente e contou-se a radioatividade destas alíquotas, determinando asfrações com maior atividade, nas quais o produto eluído estaria em maior concentração.

Os resultados mostraram que as impurezas radioquímicas foram removidas (tabela 2).Tabela 1 - Rendimento de marcação do MAG3 e do MAG3-G com yymTc antes da purificação por coluna

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Os valores são expressos em média ± desvio padrão («-9)

Tabela 2 - Rendimento de marcação do MAG3 e do MAG3-G com mTc apóspurificação por coluna de Florisil

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Os valores são expressos em média ± desvio padrão (n-9)

EXEMPLO 2- Estudos de biodistribuição de 99mTc-MAG3 e 99mTc-MAG3-G emanimais sadios:

Alíquotas das frações eluídas da coluna contendo 370 KBq de 99mTc-MAG3 ou99mTc-MAG3-G foram injetadas por via endovenosa, em camundongos SWISS, machos,pesando de 25 a 30 gramas.Utilizou-se 20 animais divididos em 4 grupos de 5 camundongos cada. Após aadministração dos produtos marcados os camundongos foram anestesiados, por viaintraperitoneal, com solução de Ketamine/Xylazine em dose de 40 mg/Kg e 5 mg/Kg,respectivamente. Nos tempos de 5, 15, 30 e 60 minutos os animais foram sacrificados.

Fígado, baço, rins, estômago, coração, pulmão, sangue e bexiga foram retirados,pesados e colocados em contador gama de poço para determinação da radioatividade.Para correção do decaimento radioativo do Tecnécio-99m utilizou-se um padrão de dosecontendo a mesma atividade e o mesmo volume da dose injetada nos animais.

A radioatividade contida em cada órgão estudado foi dividida pela massa desse órgão,conseguindo-se, assim, a medida em contagem por minuto por grama tecidual (cpm/g).Este procedimento teve como finalidade a padronização dos experimentos, de maneira aevitar a interferência das diferentes massas dos órgãos. O valor em cpm obtido para opadrão de dose foi considerado como 100%, obtendo-se ao final a relação %dose/g.

Observa-se pela tabela 3 que no decorrer dos experimentos os órgãos queapresentaram maior captação de radioatividade foram os rins e a bexiga. Isso evidenciaeliminação renal do produto 99mTc-MAG3. Sabe-se, pela literatura, que o MAG3 que seencontra disponível comercialmente apresenta alta afinidade pelo sistema urinário: rinse bexiga (FRITZBERG, A. R.; KASINA, S.; ESHIMA, D.; JOHNSON, D. L. Synthesisand biological evaluation of technetium-99m MAG3 as a Hippuran replacement. JournalofNuclear Medicine, v. 27, η. 1, p. 111-116, 1986; ROBLES, B. R.; HERRERA, J.;CABALLERO, J.; OTERO, M. Purificación dei benzoil-mercaptoacetil triglicinacomplementado con evaluaciones biológicas. Alasbimn Journal, v. 5, n. 21, 2003).

Portanto, os dados obtidos de biodistribuição do complexo 99mTc-MAG3 sintetizadonesse trabalho encontram-se respaldados pela literatura.

Tabela 3 - Biodistribuição 99mTc-MAG3 em animais sadios (%dose/g).

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Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão (n=5).

A biodistribuição do derivado sacarídico (99mTc-MAG3-G) caracteriza-se poruma eliminação renal mais rápida para este complexo. Observa-se pela tabela 4 e pelafigura 1 que nos tempos de 5 e 15 min após a administração foi verificado uma excreçãorenal estatisticamente superior quando comparada com aquela observada para o 99mTc-MAG3. Isso provavelmente pode ser explicado pelo fato da glicose ter contribuído paraaumentar a hidrossolubilidade da molécula favorecendo a eliminação renal. Dados daliteratura mostram que moléculas hidrosolúveis são eliminadas mais rapidamente(RANG, H. P.; DALE, M. M.; RITTER, J. M.; MOORE, Ρ. K. Mecanismos celulares:proliferação celular e apoptose. In: Farmacologia. 5. ed. Rio de Janeiro: Elsevier, 2004.Cap. 5, p. 77-89).

Tabela 4 - Biodistribuição 99mTc-MAG3-G em animais sadios (%dose/g).

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Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão (n-5).

De uma maneira geral, observa-se pelas Tabelas 3 e 4 que os níveis deradioatividade presentes no estômago e baço, durante todo o período, não ultrapassaram7%. Este dado é de grande importância, pois indica que o teor de impurezasradioquímicas (99mTcO4' e 99mTcO2) presentes nas preparações injetadas estão dentrodos limites preconizados. Sabe-se, pela literatura, que o TcO4" uma vez presente nasolução injetada é captado preferencialmente pelo estômago, enquanto que o TcO2 écaptado pelo baço (THRALL, J. H.; ZIESSMAN, H. A. Medicina Nuclear. 2. ed. Rio deJaneiro: Guanabara Koogan, 2003. p. 408).

No sangue os resultados de biodistribuição do 99mTc-MAG3 mostraram um perfilde clareamento bifásico (figura 2). Este mesmo perfil encontra-se descrito na literaturapara o 99mTc-MAG3 encontrado comercialmente e disponível para os exames demedicina nuclear (SAHA, G. B. Fundamentais of nuclear pharmacy. 4.ed. New York:Springer-Verlag, 1998a. 358 p). Esse dado corrobora para o sucesso da síntese domercaptoacetiltriglicina (MAG3) obtida nessa invenção. Outro aspecto que merecedestaque é que, quando a molécula de glicose encontra-se ligada à estrutura do MAG3, ocomposto 99mTc-MAG3-G apresenta um perfil de biodistribuição monofásico no sangue.

Esses comportamentos distintos foram reproduzidos nos órgãos que apresentam maioraporte sangüíneo, como fígado (figura 3), coração (figura 4) e pulmão (figura 5). Essesresultados mostraram, de forma inequívoca, que a presença da molécula de glicoseligada ao MAG3 modifica a biodistribuição do mesmo. Portanto, trata-se de produtosdistintos apresentando perfis de biodistribuição característicos (KIM, I.; KOBAYASHI,H.; YOO, T. M.; KIM, M.; LE, N.; HAN, E.; WANG, Q-C.; PASTAN, I.;CARRASQUILLO, J. Α.; PAIK, C. H. Lowering of pi by acylation improves the renaluptake of 99mTc-Iabeled anti-Tac ds Fv: effect of different acylating reagents. NuclearMedicine and Biology, v. 29, p. 795-801, 2002; CHEN, X.; LI, L.; LIU, F.; LIU, B.Synthesis and biological of technetium-99m-labeled deoxyglucose derivatives asimaging agents for tumor. Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, v. 16, p. 5503-5506, 2006).

Os padrões de biodistribuição apresentados nas tabelas acima foram avaliadospelo teste t. Valores de ρ < 0,05 foram considerados com significância estatística.

EXEMPLO 3- Implantação do tumor Ehrlich e estudos de biodistribuição.

Inicialmente, células de tumor de Ehrlich foram implantadas,intraperitonealmente, em camundongos SWISS, machos, pesando 25 a 30 g, com ointuito de produzir um foco de tumor ascítico. Utilizaram-se para este experimento oitoanimais que após 8 dias do implante foram anestesiados, intraperitonealmente, comsolução de Ketamine/Xylazine em dose de 40 mg/Kg e 5 mg/Kg, respectivamente. Emseguida, os animais foram sacrificados. Retirou-se o líquido ascítico contendo célulastumorais viáveis, que foram transferidas para um tubo Falcon estéril de 50 mL.Centrifugou-se o líquido ascítico a 3000 vezes a força gravitacional por 5 minutos e oprecipitado foi ressuspendido com solução salina a 0,9%. Esse processo foi repetido e,em seguida, as células foram coradas com solução de Tripan 0,4% e contadas emmicroscópio com aumento de 400 vezes com o auxílio de uma câmara de Newbawer,determinando a concentração da solução contendo as células tumorais.

A solução contendo as células de tumor de Ehrlich foi novamente centrifugada eo sobrenadante (salina) foi retirado. O sedimento contendo as células tumorais foiressuspendido, utilizando o mesmo volume do sobrenadante retirado, com meio paracongelamento contendo soro fetal bovino inativado a 57 0C por 1 hora edimetilsulfóxido na proporção de 9:1. As células foram aliquotadas em criotubos de 1,5mL com concentração de IO8 células/mL sendo posteriormente armazenadas emnitrogênio.

Para os estudos de biodistribuição em animais com tumor sólido, foramutilizados 20 camundongos SWISS, machos, pesando 25 a 30 g, para cada experimento(Bz-MAG3 Qeo Bz-MAG3-G (2) marcados com 99mTc divididos em 4 grupos de 5animais cada. Implantou-se, via subcutânea, na pata posterior direita, o volume de 0,1mL de solução salina a 0,9% contendo, aproximadamente, IO6 células tumorais. Osanimas foram mantidos em um biotério por 15 a 20 dias sem restrição de alimento eágua. Administraram-se, então, os derivados (1) e (2) radiomarcados. Os camundongosforam anestesiados, por via intraperitoneal, com solução de Ketamine/Xylazine em dosede 40 mg/Kg e 5 mg/Kg respectivamente, e sacrificados nos tempos de 5, 30, 120 e 240minutos após a administração. Fígado, baço, rins, estômago, coração, pulmão, sangue,bexiga, tumor (pata posterior direita) e músculo controle (pata posterior direita) foramretirados, pesados e colocados em um contador gama de poço para a determinação daradioatividade, bem como o padrão de dose relativo ao experimento.

Células de tumor de Ehrlich são células transplantáveis provenientes deadenocarcinoma mamário de camundongos fêmeas, que se desenvolvem rapidamente.

Tais células têm sido utilizadas como modelo no estudo de diversas substâncias, comoagentes terapêuticos e agentes de diagnóstico (SEGURA, J. A.; BARBERO, L; G.;MARQUEZ. J. Ehrlich ascites tumor imbalances splenic cell populations and reducesresponsiveness of T cells to Staphylococcus aureus enterotoxin B stimulation.Immunology Letters, v. 74, p. 111-115, 2000; OLORIS, S. C. S.; DAGLI, M. L. Z.;GUERRA, J. L. Effeet of β-earotene on the development of the solid Ehrlich tumor inmice. Life Science, v. 71, p. 717-724, 2002; SILVA, A. E.; SERAKIDES, R.;FERREIRA, E.; MORAES, J. R. C.; OCARINO, N. M.; CASSALI, G. D. Efeito dohipertiroidismo no tumor de Ehrlich sólido em camundongos fêmeas castradas e nãocastradas. Arq. Bras. Endocrinol. Metabol., v. 48, n. 6, p. 867-874, 2004; FERREIRA,E.; SILVA, A. E.; SERAKIDES, R.; GOMES, M. G.; CASSALI, G. D. Ehrlich tumoras model to study artificial hyperthyroidism influence on breast câncer. Pathology:Research and practice, v. 203, p. 39-44, 2007).

Os estudos de biodistribuição dos compostos marcados (99mTc-MAG3 e 99mTc-MAG3-G) em animais portadores de tumores, não apresentaram diferençasestatisticamente significativas para o sistema urinário, quando comparado comresultados obtidos em animais sadios (Tabelas 5 e 6). Portanto, a presença do tumor nãoalterou o tropismo dos compostos marcados pelo sistema renal, mantendo o alto nível deexcreção renal verificado para os radiofármacos testados.

Tabela 5 - Biodistribuição no sistema urinário de 99mTc-MAG3 em animaissadios e com tumor (%dose/g)

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Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão («-5). Os valoresapresentados não são estatisticamente diferentes (p>0,05).Tabela 6 - Biodistribuição no sistema urinário de 99mTc-MAG3-G em animaissadios e com tumor (%dose/g)

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Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão (n-5). Os valoresapresentados não são estatisticamente diferentes (p>0,05).

Avaliou-se, também, a radioatividade presente no tecido tumoral (pata posteriordireita) e no tecido muscular (pata posterior esquerda). Desta maneira, foi possívelexpressar os resultados em forma da relação alvo/não alvo tomando-se como premissaque, o músculo da pata posterior esquerda foi considerado a região não alvo. Os dadosda Tabela 7 mostraram relação superior a 2,0 para todos os tempos investigados. Istosugere que o 99mTc-MAG3-G foi 100% mais captado pelo tumor do que o 99mTc-MAG3.Substâncias que apresentarem relação alvo/não alvo maior que 1,5 (captação 50% maiorno tecido alvo) podem ser consideradas como potenciais agentes de diagnóstico(PHILLIPS, W.T. Delivery of gamma-imaging agents by liposomes. Advanced grugdelivery reviews, v. 37, p. 13-32, 1999). Portanto, os dados obtidos sugerem que ocomplexo 99mTc-MAG3-G pode ser empregado para a identificação de tumores.

Tabela 7 - Relação Alvo/Não-Alvo de 99mTc-MAG3 e 99mTc-MAG3-G

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Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão (n=5). Os valores foramavaliados pelo teste Tukey-Kramer. Letras diferentes indicam diferenças estatisticamentesignificativa.

EXEMPLO 6- Imagens cintilográficas

Para o estudo cintilográfico os produtos Bz-MAG3 (1) e Bz-MAG3-G (2) foramradiomarcados com uma alíquota da solução de pertecnetado de sódio com atividade de185 MBq5 afim de se obter atividade suficiente para aquisição das imagens. As imagensforam obtidas em uma gama câmara, com colimador Iow energy high resolution(LEHR), matriz 256x256x16 e tempo de aquisição de 600 segundos. Foram utilizados 3animais, com tumor de Ehrlich implantado na pata posterior direita, para cadaexperimento ("mTc-MAG3 e o 99mTc-MAG3-G) e as imagens foram adquiridas nostempos de 5, 30, 120 e 240 minutos.

O estudo cintilográfico foi realizado em câmara de cintilação a raios gama, com3 animais por experimento (99mTc-MAG3 e 99mTc-MAG3-G). As imagens foram obtidasnos tempos de 5, 30, 120 e 240 minutos após a administração do produto a ser testado(99mTc-MAG3 ou 99mTc-MAG3-G), como mostrado na figura 5.

Foi selecionada a região de interesse (ROI) nas patas posteriores direita (alvo) eesquerda (não-alvo) e com isso foi possível determinar a área e a atividade presente emcada ROI. Além disso, obtiveram-se as relações alvo/não alvo corrigidas pela área decada região. Essa relação para o 99mTc-MAG3-G manteve-se próxima a dois e para o99mTc-MAG3 próxima a 1, como mostrado na Tabela 8, sendo estatisticamentediferentes pelo teste de Tukey-Kramer.

Tabela 8 - Relação Alvo/Não-Alvo de 99mTc-MAG3 e 99mTc-MAG3-G obtida porimagens em câmara de cintilação a raios gama (%dose/cm2).

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Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão (n=3). Os valores foramavaliados pelo teste Tukey-Kramer.As análises das imagens apresentaram dados que foram congruentes com os estudos debiodistribuição (não apresentando diferenças estatísticas pelo teste t (p>0,05)), comoobservado nas Tabelas 9 e 10. A coerência dos dados foi mantida também para osdemais órgãos não sendo observado sinais de impurezas radioquímicas.

Tabela 9 - Relação Alvo/ Não Alvo apresentada pelo 99mTc-MAG3 nos estudos debiodistribuição (%dose/g) e imagens cintilográficas (%dose/cm )

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Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão. Os valores foram avaliadospelo teste t (p>0,05).

Tabela 10 - Relação Alvo/ Não Alvo apresentada pelo 99mTc-MAG3-G nos estudos debiodistribuição (%dose/g) e imagens cintilográficas (%dose/cm )

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Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão. Os valores foram avaliadospelo teste t (p>0,05).

Claims (12)

1. RADIOFÁRMACOS DERIVADOS DE MAG3, caracterizadas porcompreenderem a seguinte fórmula estrutural acoplada ao Tecnécio-99m:com as possíveis substituições:a) Os radicais Rl por a- ou β-D-glicopiranosil, a- ou β -D-galactopiranosil, a- ou β-D-manopiranosil, a- ou β -L-fucopiranosil, 2-amino-2-desoxi- a- ou β -D-glicopiranosil, 2-acetilamino-2-desoxi a- ou β -D-glicopiranosil;b) Os radicais R2 por metil, fenil, Triclorometil, Trifluorometil, 4-nitrofenil;c) A porção X por -OC6H4NH (orto, meta, para), ou -SC6H4NH (orto, meta, para),Ou -O(CH2)nNH5 -S(CH2)nNH (n= 1,2,3,4, 5, 6), ou por -NH;

2. COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS DE RADIOFÁRMACO DERIVADODE MAG3 caracterizadas por compreenderem o radiofármaco descrito nareivindicação 1;

3. COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS DE RADIOFÁRMACO DERIVADODE MAG3 de acordo com as reivindicação 2 caracterizadas por compreenderemum veículo farmacêutica e fisiologicamente aceitável para uso humano comoágua para injetáveis, solução salina estéril, solução tampão, mas não limitantes;

4. COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS DE RADIOFÁRMACO DERIVADODE MAG3 de acordo com as reivindicações de 2-3 caracterizadas porcompreenderem excipientes inertes farmaceuticamente aceitáveis tais como:amido, lactose, celulose microcristalina, hidroxipropilmetilcelulose,carboximetilcelulose, talco, estearato de magnésio, mas não limitantes;

5. COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS DE RADIOFÁRMACO DERIVADODE MAG3 de acordo com as reivindicações 2-4, caracterizadas por seremadministradas pelas vias: oral, intramuscular, intravenosa, subcutânea,transdérmica ou como dispositivos que possam ser implantados ou injetados;

6. COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS DE RADIOFÁRMACO DERIVADODE MAG3 de acordo com as reivindicações 2-5, caracterizadas porcompreenderem perfis de biodistribuição característicos descritos;

7. COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS DE RADIOFÁRMACO DERIVADODE MAG3 de acordo com as reivindicações 2-6, caracterizadas por apresentaremeliminação renal mais rápida;

8. COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS DE RADIOFÁRMACO DERIVADODE MAG3 de acordo com as reivindicações 2-7, caracterizadas porcompreenderem uma maior captação por células tumorais;

9. COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS DE RADIOFÁRMACO DERIVADODE MAG3, de acordo com as reivindicações 2-8, caracterizadas porcompreenderem o perfil das imagens cintilográficas apresentados;

10. COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS DE RADIOFÁRMACO DERIVADODE MAG3, caracterizadas por ser na preparação de medicamentos paradiagnóstico de processos oncológicos conforme descrito nas reivindicações de 2-4;

11. MÉTODO PARA DIAGNÓSTICO DE CÉLULAS TUMORAIS EDISTÚRBIOS NEOPLÁSICOS, caracterizado pelo fato da administração dacomposição farmacêutica, descrita na reivindicação 2-4, por uma pessoa quenecessite do tratamento;

12. MÉTODO PARA ESTUDO DE DIAGNÓSTICO DE CÉLULAS TUMORAISE DISTÚRBIOS NEOPLÁSICOS caracterizado pelo fato da administração dacomposição descrita na reivindicação 2-4;