BRPI0705586B1

BRPI0705586B1 - use of platelet activating factor receptor antagonists for the treatment of influenza virus infections

Info

Publication number: BRPI0705586B1
Authority: BR
Inventors: De Magalhães Vieira Machado Alexandre; Couto Garcia Cristiana; Martins Teixeira Mauro; de Castro Russo Remo; Tostes Gazzinelli Ricardo
Original assignee: Univ Minas Gerais
Priority date: 2007-11-08
Filing date: 2007-11-08
Publication date: 2019-12-10
Also published as: WO2009059388A1; BRPI0705586B8; BRPI0705586A2

Abstract

uso de antagonistas do receptor fator de ativação plaquetária para o tratamento infecções causadas pelo vírus influenza. a presente invenção diz respeito ao uso de antagonistas do receptor fator de ativação píaquetária (paf), seus análogos e/ou derivados, para o tratamento de infecções causadas pelo vírus influenza.use of platelet activating factor receptor antagonists for the treatment of influenza virus infections. The present invention relates to the use of platelet activating factor receptor (PAF) antagonists, analogs and / or derivatives thereof, for the treatment of influenza virus infections.

Description

“USO DE ANTAGONISTAS DO RECEPTOR FATOR DE ATIVAÇÃO PLAQUETÁRIA PARA O TRATAMENTO INFECÇÕES CAUSADAS PELO VÍRUS INFLUENZA” A presente invenção diz respeito ao uso de antagonistas do receptor Fator de Ativação Plaquetária (PAF), seus análogos e/ou derivados, para o tratamento de infecções causadas pelo vírus influenza. O vírus da gripe pertence à família Orthomyxoviridae (do grego, orthos -correto e myxa - muco), é um vírus envelopado, esférico ou filamentoso com fita simples de RNA senso negativo. A família Orthomyxoviridae possui quatro gêneros: influenza A, B, C e toghotovirus. A distinção entre os gêneros se dá, principalmente, por diferenças entre as seqüências codificadoras das proteínas do nucleocapsídeo e da matriz. Outra distinção entre os gêneros se dá pela composição do material genético: enquanto os tipos A e B possuem oito segmentos distintos de RNA, o tipo C contém 7 desses segmentos. A hemaglutinina (HA) e a neuraminidase (NA), duas glicoproteínas presentes na superfície das partículas virais dos vírus influenza A e B, são seus principais determinantes antigênicos. Os vírus influenza do tipo C, por sua vez, possuem somente uma glicoproteína de superfície. (Knipe, et al, 2001).“USE OF PLATELETARY ACTIVATION FACTOR RECEPTOR ANTAGONISTS FOR THE TREATMENT INFECTIONS CAUSED BY THE INFLUENZA VIRUS” The present invention relates to the use of Platelet Activation Factor (PAF) antagonists, their analogs and / or derivatives, for the treatment of infections caused by the influenza virus. The flu virus belongs to the family Orthomyxoviridae (from Greek, orthos-correct and myxa - mucus), it is an enveloped, spherical or filamentous virus with simple negative sense RNA strand. The Orthomyxoviridae family has four genera: influenza A, B, C and toghotovirus. The distinction between the genders is mainly due to differences between the coding sequences of the nucleocapsid and matrix proteins. Another distinction between the genders is given by the composition of the genetic material: while types A and B have eight distinct RNA segments, type C contains 7 of these segments. Hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA), two glycoproteins present on the surface of viral particles from influenza A and B viruses, are its main antigenic determinants. Type C influenza viruses, in turn, have only one surface glycoprotein. (Knipe, et al, 2001).

Os vírus Influenza A são classificados em diferentes subtipos com base em diferenças sorológicas e na composição genética de suas glicoproteínas de superfície, sendo que, no momento, já foram identificados dezesseis tipos de hemaglutinina, H1-H16, e nove tipos de neuraminidase, N1-N9 (Cox e Subbarao, 1999). Os vírus influenza A representam maior importância clínica, por serem altamente contagiosos e causadores de infecções no trato respiratório superior de humanos de todas as idades, e de outros mamíferos, como suínos e cavalos, além de várias espécies de aves (Julkunen, et al, 2001; Knipe, et al, 2001).Influenza A viruses are classified into different subtypes based on serological differences and the genetic composition of their surface glycoproteins, with sixteen types of hemagglutinin, H1-H16, and nine types of neuraminidase, N1- N9 (Cox and Subbarao, 1999). Influenza A viruses represent greater clinical importance, as they are highly contagious and cause infections in the upper respiratory tract of humans of all ages, and of other mammals, such as pigs and horses, in addition to several species of birds (Julkunen, et al, 2001; Knipe, et al, 2001).

Aves aquáticas silvestres são o reservatório de todos os subtipos de Influenza A, sendo que nesses animais a infecção é assintomática. Todavia, as aves aquáticas podem liberar os vírus influenza nas suas fezes, em elevadas concentrações e durante um longo período, permitindo assim que esses vírus infectem outras aves e, algumas vezes, outras espécies. Neste último caso, as infecções podem ser de grande gravidade, como nos casos de infecção de seres humanos pelo vírus influenza aviário de subtipo H5N1. (Widjaja, et al, 2004). É característica peculiar do vírus Influenza causar epidemias anuais recorrentes e pandemias esporádicas na população humana, que se espalham rapidamente e afetam indivíduos de todas as idades. As epidemias são causadas por vírus que sofreram mutações nas proteínas HA e/ou NA, de tal forma que os anticorpos gerados durantes as infecções anteriores ou vacinações não são mais capazes de reconhecer e neutralizar as novas variantes de influenza. (Cox & Subbarao, 1999). Normalmente, novos genes para a hemaglutinina surgem em aves selvagens e podem se adaptar a mamíferos e causar esses surtos pandêmicos. O surgimento de uma pandemia ocorre após o aparecimento de um novo subtipo de vírus modificado e gera infecções de maior gravidade do que as causadas pelos isolados da gripe sazonal, em indivíduos com maior suscetibilidade imunológica. (Reid, et al, 1999). O primeiro relato de pandemia causada pelo vírus Influenza data de 1580, iniciou-se na Ásia e se espalhou pela Europa, África e Américas (García-García e Ramos, 2006). Em 1918 ocorreu a maior pandemia de gripe já registrada, conhecida como gripe espanhola que causou a morte de 20 a 40 milhões de pessoas no mundo. O isolamento recente do vírus dos tecidos das vítimas desta pandemia revelou que este pertencia ao subtipo H1N1. Novas pandemias ressurgiram em 1957, 1968 e 1977 com outros suptipos de vírus causadores, respectivamente H2N2, H3N2 e H1N1 novamente (Webby e Webster, 2003). A partir de 1997 o subtipo H5N1 altamente patogênico, proveniente de aves, passou a ser capaz de infectar humanos em Hong Kong e outros subtipos, também de alta patogenicidade - H9N2, H7N7, H7N3, H7N2 e H7N1 - vem sendo isolados de humanos ou aves em diferentes partes do mundo, e desde então o mundo aguarda uma nova pandemia (García-García e Ramos, 2006; Webby e Webster, 2003).Wild waterfowl are the reservoir for all Influenza A subtypes, and in these animals the infection is asymptomatic. However, water birds can release influenza viruses in their faeces, in high concentrations and over a long period, thus allowing these viruses to infect other birds and, sometimes, other species. In the latter case, infections can be very serious, as in cases of human infection with the H5N1 subtype avian influenza virus. (Widjaja, et al, 2004). It is a peculiar characteristic of the Influenza virus to cause recurring annual epidemics and sporadic pandemics in the human population, which spread rapidly and affect individuals of all ages. Epidemics are caused by viruses that have mutated HA and / or NA proteins, so that antibodies generated during previous infections or vaccinations are no longer able to recognize and neutralize new influenza variants. (Cox & Subbarao, 1999). Typically, new genes for hemagglutinin emerge in wild birds and can adapt to mammals and cause these pandemic outbreaks. The emergence of a pandemic occurs after the appearance of a new modified virus subtype and generates infections of greater severity than those caused by isolates of seasonal influenza, in individuals with greater immunological susceptibility. (Reid, et al, 1999). The first report of a pandemic caused by the Influenza virus dates from 1580, started in Asia and spread throughout Europe, Africa and the Americas (García-García and Ramos, 2006). In 1918 there was the biggest flu pandemic ever recorded, known as the Spanish flu, which caused the death of 20 to 40 million people worldwide. The recent isolation of the virus from the tissues of the victims of this pandemic revealed that it belonged to the H1N1 subtype. New pandemics reemerged in 1957, 1968 and 1977 with other virus-causing subtypes, respectively H2N2, H3N2 and H1N1 again (Webby and Webster, 2003). Since 1997, the highly pathogenic H5N1 subtype, originating from birds, has been able to infect humans in Hong Kong and other highly pathogenic subtypes - H9N2, H7N7, H7N3, H7N2 and H7N1 - have been isolated from humans or birds in different parts of the world, and since then the world has been waiting for a new pandemic (García-García and Ramos, 2006; Webby and Webster, 2003).

Em 2001, a Organização Mundial de Saúde criou a Agenda global para o monitoramento e controle da Influenza com objetivos de aperfeiçoar técnicas de diagnósticos, produção de vacinas e ampliar o conhecimento sobre o risco de um novo surto pandêmico (Webby e Webster, 2003). O primeiro vírus isolado de humanos por Wilson Smith foi adaptado para infectar o sistema nervoso central de camundongos, através da criação da linhagem A/WSN/33 - A, de Influenza A; WS, de Wilson Smith; N, de neuroadaptado e 33, pois foi isolado em 1933. Essa propriedade do vírus deve-se a uma modificação no gene da neuraminidase, que na posição 130, não possui um sítio de glicosilação encontrado em outras linhagens (Li, et al, 1993). Além de ser utilizada no modelo neurotrópico, a linhagem WSN/H1N1 também é base em modelos de estudo da infecção pulmonar em camundongos (Bot, et al, 1998) e para a construção de vírus recombinates (Kash, et al, 2004). A gripe é a doença aguda respiratória de maior prevalência e com alto potencial de transmissão. O vírus se replica nas células colunares do epitélio do trato respiratório, onde tem acesso às secreções respiratórias e é transmitido em pequenas partículas durante a tosse, espirros ou na fala. Uma única pessoa é capaz de transmitir o vírus para um grande número de indivíduos susceptíveis. Os subtipos H1N1 e H2N3 são os causadores mais comuns das epidemias anuais cujos sintomas são fadiga, dores de cabeça e de garganta, febre, tosse, dores no corpo e congestão nasal, que aparecem um ou dois dias após a infecção (Cox & Subbarao, 1999).In 2001, the World Health Organization created the global Agenda for the monitoring and control of Influenza with the objective of improving diagnostic techniques, vaccine production and expanding knowledge about the risk of a new pandemic outbreak (Webby and Webster, 2003). The first virus isolated from humans by Wilson Smith was adapted to infect the central nervous system of mice, through the creation of strain A / WSN / 33 - A, of Influenza A; WS, by Wilson Smith; N, neuroadaptated and 33, since it was isolated in 1933. This property of the virus is due to a modification in the neuraminidase gene, which at position 130, does not have a glycosylation site found in other strains (Li, et al, 1993 ). In addition to being used in the neurotropic model, the WSN / H1N1 strain is also the basis for models of study of lung infection in mice (Bot, et al, 1998) and for the construction of recombinant viruses (Kash, et al, 2004). Influenza is the most prevalent acute respiratory disease with a high potential for transmission. The virus replicates in the columnar cells of the respiratory tract epithelium, where it has access to respiratory secretions and is transmitted in small particles during coughing, sneezing or in speech. A single person is able to transmit the virus to a large number of susceptible individuals. The H1N1 and H2N3 subtypes are the most common causes of annual epidemics whose symptoms are fatigue, headaches and sore throats, fever, cough, body pain and nasal congestion, which appear one or two days after infection (Cox & Subbarao, 1999).

No organismo infectado, os vírus que se multiplicaram no epitélio respiratório infectam macrófagos alveolares que acabam morrendo por apoptose, enquanto as células do epitélio morrem de necrose. Esses sinais ativam a produção de citocinas -TNF-α e IL-1 e quimiocinas - MCP-1/CCL2, RANTES/CCL5, MIP-1a/CCL3, MIP-ie/CCL4, IP-10/CXCL10 e IL-8/CXCL8 (Julkunen, et al, 2001). A liberação desses mediadores inflamatórios é responsável pelo recrutamento de neutrófilos, macrófagos e linfócitos T para o tecido pulmonar após a infecção. Esta resposta inflamatória inicial está associada às formas mais severas da doença (La Gruta, et al, 2007). Modelos de estudo em animais e estudos em pacientes revelam que o vírus Influenza A ativa neutrófilos, estimulando a produção de espécies reativas de oxigênio. Esta ativação de neutrófilos está associada a infecções bacterianas que seguem uma gripe comum (Hartshorn, et al, 1990). Além da contribuição dos neutrófilos neste processo inflamatório pulmonar, as células T CD8 são responsáveis pela lise das células infectadas e pela produção de citocinas pró-inflamatórias, tais como IFN-γ e TNF-a, também contribuindo para a resolução da infecção. Mas, por outro lado, estas células também desencadeiam um dano pulmonar exacerbado típico desta patologia, da mesma forma que os macrófagos, que, durante a resposta pró-inflamatória decorrente da infecção, liberam grandes quantidades de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, agindo de forma danosa para o tecido (La Gruta, et al, 2007). É possível concluir que a resposta imune ao vírus Influenza envolve uma grande quantidade de células e mediadores inflamatórios. Esta resposta inflamatória é crucial na eliminação do patógeno, porém uma exacerbação desses processos implica em um maior dano tecidual, que resulta na morbidade observada em certos surtos de gripe. A gripe representa um grande risco para a população, especialmente para crianças, idosos e pessoas imunocomprometidas, mesmo em sua forma “branda” epidêmica anual. Nos anos 90, foram registradas cerca de 36 mil mortes e 200 mil hospitalizações decorrentes da gripe, que também leva a perdas econômicas, uma vez que debilita o indivíduo afetado por uma semana ou mais, e gera gastos elevados para o sistema publico de saúde (Molinari, et al, 2007). Além disso, a infecção viral facilita a adesão e co-infecção por bactérias, como Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus e Haemophilus influenzae, no epitélio danificado do trato respiratório, desencadeando a pneumonia (Julkunen, et al, 2001). Desse modo, a busca por novas vacinas mais eficientes e tratamentos paliativos visam reduzir esses índices, além de evitar ou diminuir as proporções de uma pandemia iminente.In the infected organism, the viruses that multiplied in the respiratory epithelium infect alveolar macrophages that end up dying from apoptosis, while the cells in the epithelium die from necrosis. These signals activate the production of cytokines -TNF-α and IL-1 and chemokines - MCP-1 / CCL2, RANTES / CCL5, MIP-1a / CCL3, MIP-ie / CCL4, IP-10 / CXCL10 and IL-8 / CXCL8 (Julkunen, et al, 2001). The release of these inflammatory mediators is responsible for recruiting neutrophils, macrophages and T lymphocytes into the lung tissue after infection. This initial inflammatory response is associated with the most severe forms of the disease (La Gruta, et al, 2007). Animal study models and patient studies reveal that the Influenza A virus activates neutrophils, stimulating the production of reactive oxygen species. This activation of neutrophils is associated with bacterial infections that follow a common flu (Hartshorn, et al, 1990). In addition to the contribution of neutrophils to this pulmonary inflammatory process, CD8 T cells are responsible for the lysis of infected cells and for the production of pro-inflammatory cytokines, such as IFN-γ and TNF-a, also contributing to the resolution of infection. But, on the other hand, these cells also trigger exacerbated lung damage typical of this pathology, in the same way that macrophages, which, during the pro-inflammatory response resulting from the infection, release large amounts of reactive oxygen and nitrogen species, acting harmful to the tissue (La Gruta, et al, 2007). It is possible to conclude that the immune response to the Influenza virus involves a large number of cells and inflammatory mediators. This inflammatory response is crucial in eliminating the pathogen, but an exacerbation of these processes implies greater tissue damage, which results in the morbidity seen in certain flu outbreaks. The flu represents a great risk for the population, especially for children, the elderly and immunocompromised people, even in its annual "mild" epidemic form. In the 1990s, there were about 36 thousand deaths and 200 thousand hospitalizations due to the flu, which also leads to economic losses, since it weakens the affected individual for a week or more, and generates high expenses for the public health system ( Molinari, et al, 2007). In addition, viral infection facilitates adhesion and co-infection with bacteria, such as Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus and Haemophilus influenzae, in the damaged epithelium of the respiratory tract, triggering pneumonia (Julkunen, et al, 2001). Thus, the search for new, more efficient vaccines and palliative treatments aim to reduce these rates, in addition to avoiding or reducing the proportions of an impending pandemic.

Atualmente, a glicoproteína de superfície viral Neuraminidase, envolvida na liberação de vírions de células infectadas através da clivagem de resíduos de Ácido Siálico, vem sendo alvo de terapias inibidoras da atividade viral. Embora esta glicoproteína apresente diversas regiões de variação antigênica, seu sítio ativo é altamente conservado dentre os subtipos de Influenza A e B. Desse modo, inibidores da Neuraminidase, como o Zanamivir e o Oseltamivir, têm se mostrado estratégias antivirais promissoras (Colman, 1999; Kacergius, et al, 2006; Sidwell, et al, 1998). Outro alvo viral no desenvolvimento de fármacos é a proteína M2, responsável pela perda do envelope viral dentro da célula infectada, que levou ao desenvolvimento dos antivirais Amantadine e Ribamantadine. As duas estratégias antivirais são utilizadas tanto na profilaxia quanto no tratamento da gripe (Regoes e Bonhoeffer, 2006).Currently, the neuraminidase viral surface glycoprotein, involved in the release of virions from infected cells through the cleavage of sialic acid residues, has been the target of therapies that inhibit viral activity. Although this glycoprotein presents several regions of antigenic variation, its active site is highly conserved among Influenza A and B subtypes. Thus, Neuraminidase inhibitors, such as Zanamivir and Oseltamivir, have shown promising antiviral strategies (Colman, 1999; Kacergius, et al, 2006; Sidwell, et al, 1998). Another viral target in drug development is the M2 protein, responsible for the loss of the viral envelope within the infected cell, which led to the development of the antivirals Amantadine and Ribamantadine. Both antiviral strategies are used both in the prophylaxis and in the treatment of influenza (Regoes and Bonhoeffer, 2006).

Os inibidores de Neuraminidase são drogas com custo elevado e de difícil produção e, assim como acontece com o uso de drogas inibidoras de M2, cujos efeitos colaterais são mais intensos, podem surgir linhagens ou subtipos de vírus resistentes a elas. Durante uma epidemia, em que a pressão seletiva se torna maior, linhagens resistentes poderiam sobreviver e fatalmente continuariam a matar milhares de pessoas (Regoes e Bonhoeffer, 2006). Estudos clínicos mostram, ainda, que Oseltamivir e Zanamivir têm ação restrita a indivíduos com mais de 12 e 5 anos de idade, respectivamente (Langley e Faughnan, 2004). A presença de anticorpos específicos para a glicoproteína viral Hemaglutinina, passível de variação antigênica, em locais de infecção sistêmica ou mucosa, garante proteção imediata contra a infecção viral. Logo, a produção de vacinas que estimulem a produção desses anticorpos específicos contra os subtipos mais freqüentes de vírus vem sendo utilizada. Por outro lado, o combate ao vírus em células já infectadas é mediado pela imunidade celular contra proteínas internas e mais conservadas do vírus, como a núceloproteína - NP, ou as proteínas de RNA polimerase PB2 e PA. Sendo assim, a presença de linfócitos T de memória contendo epítopos específicos para essas proteínas conservadas pode ser crucial na sobrevivência após uma pandemia como a gripe aviária (Subbarao & Joseph, 2007). Atualmente, a vacinação contra os subtipos causadores das epidemias anuais é direcionada para parcelas da população consideradas de alto risco, como idosos, que apresentam as maiores taxas de mortalidade decorrentes de gripes e deve ser dada anualmente (Fleming, 2001). A Organização Mundial de Saúde recomenda que a produção de vacinas deve ser anual e baseada nas variantes dos subtipos H1N1, H3N2 e influenza B causadores de surtos em 83 países naquele ano. O acerto dos subtipos utilizados para a produção de vacinas foi, em 10 anos, de 88%, o que pode afetar a efetividade da vacina (Langley & Faughnan, 2004).Neuraminidase inhibitors are drugs with high cost and difficult to produce and, as with the use of M2 inhibitory drugs, whose side effects are more intense, strains or virus subtypes resistant to them may appear. During an epidemic, in which the selective pressure becomes greater, resistant strains could survive and fatally continue to kill thousands of people (Regoes and Bonhoeffer, 2006). Clinical studies also show that Oseltamivir and Zanamivir are restricted to individuals over 12 and 5 years of age, respectively (Langley and Faughnan, 2004). The presence of specific antibodies to the viral glycoprotein Hemagglutinin, susceptible to antigenic variation, in sites of systemic or mucosal infection, guarantees immediate protection against viral infection. Therefore, the production of vaccines that stimulate the production of these specific antibodies against the most frequent subtypes of viruses has been used. On the other hand, the fight against the virus in already infected cells is mediated by cellular immunity against internal and more conserved proteins of the virus, such as the nucleus protein - NP, or the RNA polymerase proteins PB2 and PA. Thus, the presence of memory T lymphocytes containing specific epitopes for these conserved proteins can be crucial in survival after a pandemic such as avian influenza (Subbarao & Joseph, 2007). Currently, vaccination against the subtypes that cause annual epidemics is directed at portions of the population considered to be at high risk, such as the elderly, who have the highest mortality rates due to influenza and must be given annually (Fleming, 2001). The World Health Organization recommends that vaccine production should be annual and based on variants of the H1N1, H3N2 and influenza B subtypes that cause outbreaks in 83 countries that year. The correctness of the subtypes used for the production of vaccines was, in 10 years, 88%, which can affect the effectiveness of the vaccine (Langley & Faughnan, 2004).

Existem, atualmente, dois principais tipos de vacina, a Vacina Inativada Trivalente - TIV e a Vacina de Vírus Influenza Vivo Atenuado - LAIV. TIV é administrada via intramuscular e contém as proteínas Hemaglutinina e Neuraminidase purificadas, desencadeando uma alta resposta de anticorpos IgG; é indicada a indivíduos com mais de 6 meses de idade e resulta em uma redução de gripe diagnosticada em laboratório de 65%. A vacina contendo o vírus atenuado, administrada via intranasal, leva a uma melhor resposta por IgA nos locais primários de entrada dos vírus, as mucosas; é indicada para indivíduos saudáveis de 5 a 49 anos e pode desencadear sintomas respiratórios, como a coriza, por 2 dias, conferindo proteção de 79-80%. Uma vez que a mucosa respiratória é a via de entrada dos vírus influenza, uma eficaz indução de resposta imune por IgA é fundamental para conter a infecção e a replicação extensiva do vírus no trato respiratório. (Nichol & Treanor, 2006) Um cenário pandêmico representa um grande desafio na produção de vacinas, uma vez que a pandemia pode afetar milhões de pessoas em todo o mundo - 20% da população - espalhando-se rapidamente. Vacinas contra influenza para humanos são produzidas em ovos de galinha embrionados e todo o processo de produção demora de 6 a 9 meses. Uma pandemia atingiria todo o planeta em 6 a 10 meses após o seu surgimento. Sendo assim, obstáculos técnicos e clínicos na produção de vacinas contra o tipo de vírus causador da possível pandemia devem ser superados para que um maior número de pessoas possam ser imunizadas a tempo. Vários laboratórios no mundo inteiro já estão trabalhando no desenvolvimento de uma vacina efetiva contra o subtipo H5N1, mas a produção concentra-se principalmente em países europeus, americanos e asiáticos. Resta saber se a distribuição de vacinas será feita de forma igualitária no mundo, ou se beneficiará apenas os países produtores. Quanto mais a pandemia demorar a acontecer, maiores serão as chances de haver doses suficientes de vacinas para a população. (Stohr & Esveld, 2004; Subbarao & Joseph, 2007) No que se refere aos vírus influenza aviários do subtipo H5N1, foi demonstrado que grande parte dos efeitos devastadores da infecção em seres humanos resultam da produção exacerbada e descontrolada de certas citocinas. Desta forma, abordagens farmacológicas capazes de a chamada “tempestade de citocinas” decorrente da infecção podem ser uma alternativa simples e barata para o tratamento da gripe com conseqüente redução da sua morbidade. A reação imune excessiva em resposta ao vírus leva à inflamação e danos pulmonares que podem desencadear falência múltipla de órgãos e a morte. Regular essa resposta pode representar uma estratégia alternativa para evitar os danos da doença. O uso de estatinas e de outros fármacos redutores dos níveis lipídicos no sangue mostrou-se eficiente contra a letalidade associada à gripe. (Butler, 2007; Rainsford, 2006) A combinação de estratégias antivirais com estratégias antiinflamatórias pode potencializar o efeito protetor de cada uma delas aplicada separadamente, reduzindo o dano pulmonar (Ottolini, et al, 2003) O fator de ativação plaquetária - PAF, é um mediador fosfolipídico com efeitos diretos em respostas inflamatórias e imunes (Weijer, et al, 2003). Seu receptor contém 7 domínios transmembranares e é acoplado à proteína G heterotrimérica, capaz de ativar várias vias de sinalização intracelular (Honda, et al, 2002).There are currently two main types of vaccine, the Trivalent Inactivated Vaccine - TIV and the Live Attenuated Influenza Virus Vaccine - LAIV. TIV is administered intramuscularly and contains the purified Hemagglutinin and Neuraminidase proteins, triggering a high IgG antibody response; it is indicated for individuals older than 6 months of age and results in a 65% reduction of flu diagnosed in the laboratory. The vaccine containing the attenuated virus, administered intranasally, leads to a better response by IgA at the primary sites of virus entry, the mucous membranes; it is indicated for healthy individuals from 5 to 49 years old and can trigger respiratory symptoms, such as runny nose, for 2 days, providing protection of 79-80%. Since the respiratory mucosa is the route of entry for influenza viruses, an effective induction of an immune response by IgA is essential to contain infection and extensive replication of the virus in the respiratory tract. (Nichol & Treanor, 2006) A pandemic scenario represents a major challenge in vaccine production, since the pandemic can affect millions of people worldwide - 20% of the population - spreading rapidly. Influenza vaccines for humans are produced on embryonated chicken eggs and the entire production process takes 6 to 9 months. A pandemic would hit the entire planet in 6 to 10 months after its emergence. Therefore, technical and clinical obstacles in the production of vaccines against the type of virus causing the possible pandemic must be overcome so that a greater number of people can be immunized in time. Several laboratories worldwide are already working on the development of an effective vaccine against the H5N1 subtype, but production is mainly concentrated in European, American and Asian countries. It remains to be seen whether the distribution of vaccines will be made equally throughout the world, or whether it will benefit only producing countries. The longer the pandemic takes place, the greater the chances of having sufficient doses of vaccines for the population. (Stohr & Esveld, 2004; Subbarao & Joseph, 2007) With regard to avian influenza viruses of the H5N1 subtype, it has been shown that a large part of the devastating effects of infection on humans result from the exacerbated and uncontrolled production of certain cytokines. In this way, pharmacological approaches capable of the so-called “cytokine storm” resulting from infection can be a simple and inexpensive alternative for the treatment of influenza with a consequent reduction in its morbidity. The excessive immune reaction in response to the virus leads to inflammation and lung damage that can trigger multiple organ failure and death. Regulating this response may represent an alternative strategy to prevent damage from the disease. The use of statins and other drugs that lower blood lipid levels has been shown to be effective against lethality associated with influenza. (Butler, 2007; Rainsford, 2006) The combination of antiviral strategies with anti-inflammatory strategies can enhance the protective effect of each applied separately, reducing lung damage (Ottolini, et al, 2003) The platelet activation factor - PAF, is a phospholipid mediator with direct effects on inflammatory and immune responses (Weijer, et al, 2003). Its receptor contains 7 transmembrane domains and is coupled to the heterotrimeric G protein, capable of activating several intracellular signaling pathways (Honda, et al, 2002).

Além do clássico efeito de agregação plaquetária, PAF medeia a transmigração leucocitária, a produção de superóxido e a expressão de VEGF, diretamente relacionada à angiogênese em tecidos com resposta inflamatória (Ishii & Shimizu, 2000). A transmigração de neutrófilos é mediada por PAF, uma vez que o mediador fosfolipídico ativa a célula, modulando a expressão de moléculas de adesão que facilitam a sua passagem através do endotélio e estimulando a produção de espécies reativas de oxigênio (Condliffe, et al, 1996). Vários estudos relacionam PAF a doenças respiratórias, que age aumentando a permeabilidade vascular, mediando a perda de matriz vascular e de hidroxiprolina (Uhlig, et al, 2005). Modelos animais de asma mostram que, além de PAF ser produzido por células como macrófagos alveolares, plaquetas, neutrófilos, mastócitos e eosinófilos e ser capaz de ativar as mesmas, o mediador provoca brococonstrição, hiperresponsividade aérea, exudação plasmática e aumento na secreção de muco, respostas fundamentais no desenvolvimento da inflamação pulmonar (Ishii & Shimizu, 2000). O primeiro estudo a demonstrar aumento na produção de PAF após infecção viral foi realizado in vitro, através da infecção de fagócitos mononucleares com o Vírus Sincicial Respiratório, principal causador de inflamação pulmonar em crianças (Villani, et al, 1991). Sabe-se, também, que PAF tem papel fundamental na neuropatogênese associada à infecção pelo vírus da imunodeficiencia humana, através do aumento da resposta inflamatória e da replicação viral (Martin, et al, 2000). Outro estudo recente demonstrou aumento nos níveis de PAF e redução de acetil-hidrolase de PAF, seu principal modulador negativo, em pacientes com hepatite C crônica (Caini, et al, 2007).In addition to the classic platelet aggregation effect, PAF mediates leukocyte transmigration, superoxide production and VEGF expression, directly related to angiogenesis in tissues with an inflammatory response (Ishii & Shimizu, 2000). Neutrophil transmigration is mediated by PAF, since the phospholipid mediator activates the cell, modulating the expression of adhesion molecules that facilitate its passage through the endothelium and stimulating the production of reactive oxygen species (Condliffe, et al, 1996 ). Several studies relate PAF to respiratory diseases, which acts by increasing vascular permeability, mediating the loss of vascular matrix and hydroxyproline (Uhlig, et al, 2005). Animal models of asthma show that, in addition to PAF being produced by cells such as alveolar macrophages, platelets, neutrophils, mast cells and eosinophils and being able to activate them, the mediator causes brococonstriction, aerial hyperresponsiveness, plasma exudation and increased mucus secretion, fundamental responses in the development of pulmonary inflammation (Ishii & Shimizu, 2000). The first study to demonstrate an increase in the production of PAF after viral infection was carried out in vitro, through the infection of mononuclear phagocytes with the Respiratory Syncytial Virus, the main cause of pulmonary inflammation in children (Villani, et al, 1991). It is also known that PAF has a fundamental role in neuropathogenesis associated with infection by the human immunodeficiency virus, through an increase in the inflammatory response and viral replication (Martin, et al, 2000). Another recent study demonstrated an increase in PAF levels and a reduction in PAF acetylhydrolase, its main negative modulator, in patients with chronic hepatitis C (Caini, et al, 2007).

Infecções no trato respiratório são a terceira causa de mortes no mundo (Murray e Lopez, 1997). Esta alta morbidade está relacionada com o recrutamento e ativação de linfócitos T para a eliminação de vírus, que ocorre de forma excessiva no pulmão, levando a danos teciduais, oclusão das vias aéreas e produção de mediadores inflamatórios de forma sistêmica. Dentre estes mediadores, principalmente o TNF-α e IL-6, levam à maioria dos sintomas das infecções respiratórias, como caquexia, febre e perda de apetite (Hussel, et al, 2004). Logo, estratégias que bloqueiem uma ativação excessiva do sistema imune em resposta à infecção viral, são alvos potenciais para intervenção farmacológica com objetivo de tratamento dos sintomas e redução na morbidade. A redução do recrutamento de células inflamatórias para o pulmão pode ter grande potencial terapêutico ao reduzir as manifestações clínicas, sem alterar, necessariamente o curso da eliminação do patógeno (Hussel, et al, 2004).Respiratory tract infections are the third leading cause of death worldwide (Murray and Lopez, 1997). This high morbidity is related to the recruitment and activation of T lymphocytes for the elimination of viruses, which occurs excessively in the lung, leading to tissue damage, airway occlusion and production of inflammatory mediators in a systemic way. Among these mediators, mainly TNF-α and IL-6, they lead to most symptoms of respiratory infections, such as cachexia, fever and loss of appetite (Hussel, et al, 2004). Therefore, strategies that block an excessive activation of the immune system in response to viral infection are potential targets for pharmacological intervention with the aim of treating symptoms and reducing morbidity. Reducing the recruitment of inflammatory cells to the lung can have great therapeutic potential by reducing clinical manifestations, without necessarily changing the path of elimination of the pathogen (Hussel, et al, 2004).

Uma vez que o receptor de PAF favorece a aderência e invasão bacteriana e que infecções pelo vírus Influenza também favorecem infecções bacterianas que levam à pneumonia, dois trabalhos investigaram o bloqueio do receptor na pneumonia por Streptococcus pneumoniae. O primeiro estudo utilizou um antagonista competitivo do receptor de PAF antes da infecção bacteriana pós-influenza que proporcionou atraso na letalidade, porém os animais tratados apresentaram maior bacteremia, o que sugeriu que a bacteremia teria mecanismos independentes do receptor de PAF (McCullers & Rehg, 2002). O outro estudo avaliou o papel do receptor de PAF através do uso de animais nocaute para tal receptor e mostrou redução da letalidade nos camundongos nocaute, causada por pnemonia pós-influenza. Sendo assim, o bloqueio do receptor na infecção por Influenza pode resultar em menor susceptibilidade a uma subseqüente infecção por Streptococcus pneumoniae (van der Sluijs, et al, 2005).Since the PAF receptor favors bacterial adherence and invasion and infections by the Influenza virus also favor bacterial infections that lead to pneumonia, two studies investigated the blockade of the receptor in pneumonia caused by Streptococcus pneumoniae. The first study used a competitive PAF receptor antagonist before the post-influenza bacterial infection, which caused a delay in lethality, but the treated animals showed greater bacteremia, which suggested that the bacteremia would have mechanisms independent of the PAF receptor (McCullers & Rehg, 2002). The other study evaluated the role of the PAF receptor through the use of knockout animals for that receptor and showed a reduction in lethality in knockout mice, caused by post-influenza pnemonia. Thus, blocking the receptor in Influenza infection may result in less susceptibility to a subsequent infection by Streptococcus pneumoniae (van der Sluijs, et al, 2005).

Os pesquisadores da presente invenção descobriram que a utilização de antagonistas do receptor PAF, seus análogos e/ou derivados, são úteis para o tratamento de infecções provocadas pelo vírus influenza. A administração em mamíferos de antagonistas do receptor fator de ativação plaquetária (PAF), em uma concentração terapêutica adequada, é eficaz para o tratamento de infecções causadas pelo vírus influenza.The researchers of the present invention have found that the use of PAF receptor antagonists, their analogs and / or derivatives, are useful for the treatment of infections caused by the influenza virus. The administration in mammals of antagonists of the platelet activating factor receptor (PAF), in an appropriate therapeutic concentration, is effective for the treatment of infections caused by the influenza virus.

As vias de administração antagonistas do receptor fator de ativação plaquetária (PAF) podem ser realizadas pelas vias endovenosa, intramuscular, oral, subcutânea, transdérmica ou intraperitoneal.Platelet activation factor receptor (PAF) antagonist routes of administration can be performed via intravenous, intramuscular, oral, subcutaneous, transdermal or intraperitoneal routes.

Além disso, antagonistas do receptor fator de ativação plaquetária (PAF) podem ser administrado em associação a outros fármacos considerados úteis para o tratamento de infecções causadas pelo vírus influenza, de forma a otimizar o tratamento proposto. O documento de patente US5559109 descreve um método de tratamento de uma condição patológica mediada por PAF através da administração de um antagonista de PAF denominado N-acril-piperazina ou de seus derivados. O documento de patente US6099836 descreve seqüências de polinucleotídeos que codificam a enzima acetilhidrolase plasmática de PAF. Também são descritos métodos para a produção recombinante da referida enzima, bem como métodos para o tratamento de condições patológicas, como injúria por isquemia-reperfusão, e produtos derivados da enzima acetilhidrolase recombinante. O documento de patente US20050032713A1 descreve o uso de antagonistas de PAF como agente analgésico e limitador da liberação de mediadores inflamatórios. O uso desses antagonistas em composições farmacêuticas ou nutricionais é dita benéfica para o tratamento de condições dolorosas agudas e crônicas, para a inibição da contração uterina excessiva, para o tratamento do choque séptico e para a inibição da angiogênese e proliferação celular tumoral. O documento de patente EP0459432A1 descreve o uso de antagonistas de PAF-acético para o tratamento de condições patológicas causadas por lipoproteínas (normais ou modificadas). O antagonista de PAF-acético é selecionado do grupo de moléculas hidrofílicas ou não-hidrofílicas triazolotieno-diazepina ou análogos. Componentes ginkgolídeos ou misturas destes, bem como seus derivados sintéticos, também são incluídos como moléculas antagonistas de PAF-acético. O documento de patente US20020127287A1 descreve o tratamento e prevenção de desordens mediadas por PAF através da administração de uma quantidade efetiva de pelo menos um antagonista de PAF. Os antagonistas de PAF são ginkgolídeos que são administrados , por exemplo, topicalmente ou em alimentos. O documento de patente US5631246 descreve o uso de PAF para aumentar os níveis dos fatores sanguíneos de von Willebrand e/ou fator VIII. Este uso possui aplicação particular para o tratamento da doença de von Willebrand e hemofilia A. O documento de patente WO9001927A2 descreve o uso de antagonistas de PAF para o tratamento de desordens auto-imunes, como por exemplo, trombocitopenia púrpura idiopática. Os antagonistas de PAF podem ser utilizados sozinhos ou combinados com outra substância imunossupressora, como por exemplo, a ciclosporina A. O documento de patente US6277846 descreve o uso de antagonistas de PAF como agentes antipruríticos. A invenção revela ainda um método para o tratamento de prurido através da administração de uma quantidade terapeuticamente efetiva de um antagonista de PAF. Os antagonistas de PAF podem, por exemplo, ser selecionados entre moléculas análogas de PAF, produtos naturais isolados de PAF que possuem atividade antagonista de PAF e triazolbenzodiazepinas. Os antagonistas de PAF são prefrencilamente aplicados por via tópica no local acometido, entretanto vias sistêmicas também são ditas possíveis.In addition, platelet activation factor receptor (PAF) antagonists can be administered in combination with other drugs considered useful for the treatment of infections caused by the influenza virus, in order to optimize the proposed treatment. Patent document US5559109 describes a method of treating a PAF-mediated pathological condition by administering a PAF antagonist called N-acryl-piperazine or its derivatives. Patent document US6099836 describes polynucleotide sequences encoding the plasma PAF acetylhydrolase enzyme. Also described are methods for the recombinant production of said enzyme, as well as methods for the treatment of pathological conditions, such as ischemia-reperfusion injury, and products derived from the recombinant acetylhydrolase enzyme. Patent document US20050032713A1 describes the use of PAF antagonists as an analgesic agent and limiting the release of inflammatory mediators. The use of these antagonists in pharmaceutical or nutritional compositions is said to be beneficial for the treatment of acute and chronic painful conditions, for the inhibition of excessive uterine contraction, for the treatment of septic shock and for the inhibition of angiogenesis and tumor cell proliferation. Patent document EP0459432A1 describes the use of PAF-acetic antagonists for the treatment of pathological conditions caused by lipoproteins (normal or modified). The PAF-acetic antagonist is selected from the group of hydrophilic or non-hydrophilic molecules triazolothieno-diazepine or the like. Ginkgolide components or mixtures of these, as well as their synthetic derivatives, are also included as PAF-acetic antagonist molecules. Patent document US20020127287A1 describes the treatment and prevention of PAF-mediated disorders by administering an effective amount of at least one PAF antagonist. PAF antagonists are ginkgolides that are administered, for example, topically or in food. Patent document US5631246 describes the use of PAF to increase the levels of von Willebrand's blood factors and / or factor VIII. This use has particular application for the treatment of von Willebrand disease and hemophilia A. Patent document WO9001927A2 describes the use of PAF antagonists for the treatment of autoimmune disorders, such as idiopathic purple thrombocytopenia. PAF antagonists can be used alone or in combination with another immunosuppressive substance, such as cyclosporin A. Patent document US6277846 describes the use of PAF antagonists as antipruritic agents. The invention further discloses a method for treating itching by administering a therapeutically effective amount of a PAF antagonist. PAF antagonists can, for example, be selected from analogous PAF molecules, natural products isolated from PAF that have PAF antagonist activity and triazolbenzodiazepines. PAF antagonists are prefractically applied topically to the affected site, however systemic routes are also said to be possible.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA TECNOLOGIA A presente tecnologia trata de composições farmacêuticas para preparação de um medicamento para tratar infecções causadas pelo vírus influenza, compreendendo o antagonista do receptor de ativação plaquetária PCA 4248. O vírus influenza pode ser selecionado do grupo compreendendo os tipos influenza A, influenza B ou influenza C.DETAILED TECHNOLOGY DESCRIPTION The present technology deals with pharmaceutical compositions for the preparation of a medicine to treat infections caused by the influenza virus, comprising the platelet activation receptor antagonist PCA 4248. The influenza virus can be selected from the group comprising the types influenza A, influenza B or influenza C.

Alternativamente, a composição pode compreender outros fármacos, preferencialmente o Tamiflu.Alternatively, the composition can comprise other drugs, preferably Tamiflu.

Os exemplos seguintes são apresentados com intuito de esclarecer mais a invenção. Esses exemplos não limitam a invenção em qualquer sentido. EXEMPLO 01: Padronização da DL-50: Para a determinação da DL-50, dose letal para 50% do grupo, camundongos C57/BL6 machos, com idade entre 8 e 10 semanas, foram infectados com a linhagem WSN do sorotipo H1N1 do vírus Influenza, com inóculos de 103, 104, 105 e 106 unidades formadoras de placa - PFU. Um grupo controle, chamado Mock, foi inoculado com salina estéril (FIGURA 01).The following examples are presented in order to further clarify the invention. These examples do not limit the invention in any way. EXAMPLE 01: Standardization of DL-50: For the determination of DL-50, a lethal dose for 50% of the group, male C57 / BL6 mice, aged between 8 and 10 weeks, were infected with the WSN strain of the H1N1 serotype of the virus Influenza, with inoculants of 103, 104, 105 and 106 plaque-forming units - PFU. A control group, called Mock, was inoculated with sterile saline (FIGURE 01).

Com base nessa curva, a DL-50 do vírus WSN em camundongos C57 ficou entre 1x104 e 1x105 PFU. EXEMPLO 02: Administração do antagonista do receptor de PAF, PCA 4248, em camundongos infectados com influenza Camundongos C57 selvagens, com idade variando entre 8 e 10 semanas foram infectados com 106 PFU do vírus WSN e separados em dois grupos. O primeiro grupo recebeu como “tratamento” o veículo utilizado para diluição do PCA 4248, 200 μΙ de uma solução de 5% de álcool etílico 98% diluído em PBS estéril, duas vezes ao dia, subcutâneo. O segundo grupo recebeu 200 μl do antagonista, em uma dose de 5 mg/kg do animal, de 12 em 12 horas, subcutâneo, desde o 3° dia após a infecção até o 10° dia. A sobrevida dos animais foi observada por 21 dias.Based on this curve, the DL-50 of the WSN virus in C57 mice was between 1x104 and 1x105 PFU. EXAMPLE 02: Administration of the PAF receptor antagonist, PCA 4248, in mice infected with influenza Wild C57 mice, aged between 8 and 10 weeks were infected with 106 PFU of the WSN virus and separated into two groups. The first group received as a “treatment” the vehicle used to dilute PCA 4248, 200 μΙ of a solution of 5% ethyl alcohol 98% diluted in sterile PBS, twice a day, subcutaneously. The second group received 200 μl of the antagonist, in a dose of 5 mg / kg of the animal, every 12 hours, subcutaneously, from the 3rd day after infection until the 10th day. The animals' survival was observed for 21 days.

Enquanto animais tratados com o veículo apresentaram letalidade de 100% após 8 dias de infecção, até o 21° dia, 37,5% dos animais tratados com PCA 4248 estavam vivos e foram sacrificados para coleta do soro (FIGURA 02). EXEMPLO 03: Administração do antagonista do receptor de PAF, PCA 4248, em camundongos infectados com influenza em combinação com o inibidor de neuraminidase Fosfato de Oseltamivir.While animals treated with the vehicle showed 100% lethality after 8 days of infection, until the 21st day, 37.5% of the animals treated with PCA 4248 were alive and were sacrificed for serum collection (FIGURE 02). EXAMPLE 03: Administration of the PAF receptor antagonist, PCA 4248, in mice infected with influenza in combination with the neuraminidase inhibitor Oseltamivir phosphate.

Camundongos C57 selvagens, com idade variando entre 8 e 10 semanas foram infectados com 106 PFU do vírus WSN e separados em 4 grupos, além de um grupo não infectado. O primeiro grupo, denominado veículo, recebeu o veículo utilizado para diluição do PCA 4248, 200 μl de uma solução de 5% de álcool etílico 98% diluído em PBS estéril, uma vez ao dia (manhã), subcutâneo e 100 μl de uma solução estéril de NaCl 0,9% - o veículo para a diluição do Tamiflu, via oral, uma vez ao dia (noite). O segundo grupo recebeu 200 μl do antagonista do receptor de PAF, em uma dose de 5 mg/kg do animal, de 12 em 12 horas, subcutâneo. O terceiro grupo recebeu 100 μl via oral do inibidor de neuraminidase fosfato de Oseltamivir, cujo nome comercial é Tamiflu, na dose de 1mg/kg do animal, de 12 em 12 horas. O quarto grupo recebeu 100 μl via oral de Tamiflu, na dose de 1mg/kg do animal, de 12 em 12 horas e em seguida 200 μl do antagonista do receptor de PAF, em uma dose de 5 mg/kg do animal, de 12 em 12 horas, via subcutânea. O tratamento foi iniciado 3 dias após a infecção e no quinto dia, 5 a 6 animais por grupo foram sacrificados para a realização de lavado broncoalveolar, visando avaliar o recutamento de leucócitos para o espaço alveolar.Wild C57 mice, aged between 8 and 10 weeks, were infected with 106 PFU of the WSN virus and separated into 4 groups, in addition to an uninfected group. The first group, called vehicle, received the vehicle used to dilute PCA 4248, 200 μl of a solution of 5% ethyl alcohol 98% diluted in sterile PBS, once a day (morning), subcutaneous and 100 μl of a solution sterile 0.9% NaCl - the vehicle for the dilution of Tamiflu, orally, once daily (night). The second group received 200 μl of the PAF receptor antagonist, at a dose of 5 mg / kg of the animal, every 12 hours, subcutaneously. The third group received 100 μl orally of the neureltidase phosphate inhibitor of Oseltamivir, whose commercial name is Tamiflu, at a dose of 1mg / kg of the animal, every 12 hours. The fourth group received 100 μl of oral Tamiflu, at a dose of 1mg / kg of the animal, every 12 hours and then 200 μl of the PAF receptor antagonist, at a dose of 5 mg / kg of the animal, of 12 in 12 hours, subcutaneously. The treatment was initiated 3 days after the infection and on the fifth day, 5 to 6 animals per group were sacrificed for bronchoalveolar lavage, aiming to evaluate the leukocyte recruitment to the alveolar space.

Após 9 dias de infecção com 106 PFU do vírus WSN, o grupo tratado somente com a dose de 1mg/kg de Tamiflu não possuía sobreviventes; o grupo tratado com o veículo continha 13% dos seus representantes; o grupo tratado com 5 mg/kg do antagonista do receptor de PAF ainda possuía 22,2% dos animais infectados, enquanto o grupo tratado com a combinação de Tamiflu com o antagonista do receptor de PAF apresentou uma sobrevida de 62,8%. Esses resultados demonstram a potencialização da proteção conferida pelo antagonista do receptor de PAF quando combinado com o uso do antiviral Tamiflu.After 9 days of infection with 106 PFU of the WSN virus, the group treated only with the dose of 1mg / kg of Tamiflu had no survivors; the group treated with the vehicle contained 13% of its representatives; the group treated with 5 mg / kg of the PAF receptor antagonist still had 22.2% of the infected animals, while the group treated with the combination of Tamiflu and the PAF receptor antagonist had a survival rate of 62.8%. These results demonstrate the potentiation of the protection conferred by the PAF receptor antagonist when combined with the use of the antiviral Tamiflu.

Todos os grupos apresentaram aumento significativo nas contagens total e diferencial de leucócitos em relação ao grupo não infectado. O grupo tratado com o PCA 4248 e o grupo tratado com PCA 4248 juntamente com o antiviral Tamiflu apresentaram menor recrutamento total de leucócitos e de neutrófilos, em relação aos animais tratados com veículo e com Tamiflu somente, mostrando a atuação do antagonista no recrutamento de leucócitos para o sítio de infecção. BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS: FIGURA 01: Letalidade: Padronização da DL-50 do vírus WSN em camundongos C57/BL6: o valor da dose letal para 50% dos animais está entre 1x104 e 1x105 PFU. FIGURA 02: Tratamento com PCA: O tratamento com o antagonista do receptor de PAF, PCA 4248, atrasou e reduziu a letalidade decorrente da infecção com inóculo letal de WSN. FIGURA 03: Contagem total e Neutrofilos após cinco dias: Recrutamento celular no lavado broncoalveolar após a infecção com inóculo de 106 PFU de WSN: os grupos tratados com o PCA 4248 e com PCA 4248 juntamente com o antiviral Tamiflu apresentaram menor recrutamento total de leucócitos e de neutrófilos, em relação aos animais tratados com veículo e com Tamiflu somente.All groups showed a significant increase in the total and differential leukocyte counts in relation to the uninfected group. The group treated with PCA 4248 and the group treated with PCA 4248 together with the antiviral Tamiflu showed less total recruitment of leukocytes and neutrophils, compared to animals treated with vehicle and with Tamiflu only, showing the role of the antagonist in the recruitment of leukocytes to the infection site. BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES: FIGURE 01: Lethality: Standardization of the WSN virus DL-50 in C57 / BL6 mice: the value of the lethal dose for 50% of the animals is between 1x104 and 1x105 PFU. FIGURE 02: Treatment with PCA: Treatment with the PAF receptor antagonist, PCA 4248, delayed and reduced the lethality resulting from infection with lethal WSN inoculum. FIGURE 03: Total count and Neutrophils after five days: Cell recruitment in bronchoalveolar lavage after infection with inoculum of 106 PFU of WSN: the groups treated with PCA 4248 and with PCA 4248 together with antiviral Tamiflu showed less total recruitment of leukocytes and neutrophils in relation to animals treated with vehicle and Tamiflu only.

REIVINDICAÇÕES

Claims

1. Use of the compound of formula (I) below, characterized by being in the preparation of a medicine to treat infections caused by the influenza virus. ¢ 0

2. Use of the compound of formula (I), according to claim 1, according to claim 1, characterized in that the virus comprises the types influenza A, influenza B or influenza C.

Use of the compound of formula (I), according to claim 1, according to claims 1 and 2, characterized in that it comprises a therapeutic concentration suitable for the treatment of infections caused by the influenza virus.

Use of the compound of formula (I), according to claim 1, according to claims 1, 2 and 3, characterized in that it is administered in mammals.

5. Use of the compound of formula (I), according to claim 1, according to claims 1, 2, 3 and 4, characterized in that it can be administered by the intravenous, intramuscular, oral, subcutaneous, transdermal or intraperitoneal routes.

6. Use of the compound of formula (I), according to claim 1, according to claims 1, 2, 3, 4 and 5, characterized in that it can be administered in combination with other drugs considered useful for the treatment of infections caused by the virus influenza.