BRPI0612728B1 - Anticorpos de il-23p19 isolados - Google Patents

Abstract

anticorpos de anti-il-23p19, composições, métodos e usos. a presente invenção refere-ase a um anticorpo de anti-il-23p19, incluindo ácidos nucléicos isolados que codificam pelo menos um anticorpo de anti-il-23p19, vetores, células hospedeiras, animais ou plantas transgênicos, e métodos de fazer e usar o mesmo que tem aplicações em composições, métodos e dispositivos diagnósticos e/ou terapêuticos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para ANTICORPOS DE IL-23P19 ISOLADOS.

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se a anticorpos, incluindo porções ou variantes especificadas, específicos para pelo menos uma proteína de IL-23 ou fragmento desta, como também anticorpos anti-idiotípicos, e ácidos nucléicos codificando anticorpos de anti-IL-23p19, ácidos nucléicos complementares, vetores, células hospedeiras, e métodos de fazer e usar estes, incluindo formulações terapêuticas, administração e dispositivos. ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Interleucina (IL)-12 é uma citocina heterodimérica segregada compreendida de 2 subunidades de proteína glicosilada ligada a dissulfeto, designadas p35 e p40 para seus pesos moleculares aproximados. IL-12 é produzida primariamente por células de apresentação de antígenos e dirige imunidade mediada por célula ligando a um complexo de receptor de duas cadeias que é expresso na superfície de células T ou células assassinas naturais (NK). A cadeia do receptor beta-1 de IL-12 (IL-12R31) liga à subunidade de p40 de IL-12, fornecendo a interação primária entre IL-12 e seu receptor. Porém, é a ligação de IL-12p35 da segunda cadeia do receptor, IL-12R32, que confere sinalização intracelular (por exemplo fosforilação de STAT4) e ativação da célula portadora de receptor (Presky et al, 1996). Sinalização de IL-12 simultânea com a apresentação de antígeno é suposto invocar diferenciação de células T para o fenótipo ajudante 1 de T (Th1), caracterizado através da produção de interferona gama (IFNy) (Trinchieri, 2003). É acreditado que células de Th1 promovam imunidade para alguns patógenos intracelulares, gerem isótipos de anticorpo de fixação de complemento, e contribuam para imunovigilância do tumor. Desse modo, IL12 é suposta ser um componente significativo para ser hospedar mecanismos de defesa imunes.

Foi descoberto que a subunidade de proteína de p40 de IL-12 pode também associar-se com uma subunidade de proteína separada, designada p19, para formar uma citocina nova, IL-23 (Oppman et al, 2000)

Petição 870180160945, de 10/12/2018, pág. 7/14

IL 23 também sinaliza através de um complexo de receptor de duas cadeias.

Uma vez que a subunidade de p40 é compartilhada entre IL-12 e IL-23, segue que a cadeia de IL-12Rp1 também ser compartilhada entre IL-12 e IL-

23. Porém, é a ligação de IL-23p19 do segundo componente do complexo 5 de receptor de IL-23, IL-23R, que confere sinalização intracelular específica de IL-23 (por exemplo, fosforilação de STAT3) e produção subseqüente de

IL-17 através de células T (Parham et al, 2002; Aggarwal et al. 2003). Estu-

dos recentes demonstraram que as funções biológicas de IL-23 são distintas daquelas de IL-12, apesar da similaridade estrutural entre as duas citocinas 10 (Langrish et al, 2005).

Regulação anormal de populações de IL-12 e de células de Th1 foi associada a muitas doenças imunemediadas uma vez que a neutralização de IL-12 através de anticorpos é eficaz em tratar modelos animais de psoríase, esclerose múltipla (MS), artrite reumatóide, doença inflamatória do 15 intestino, diabetes melito insulino-dependente (tipo 1), e uveíte (Leonard et al, 1995; Hong et al, 1999; Malfait et al, 1998; Davidson et al, 1998). Porém, uma vez que estes estudos alvejaram a subunidade de p40 compartilhada, tanto IL-12 quanto IL-23 foram neutralizadas in vivo. Portanto, estava incerto se IL-12 ou IL-23 estava mediando a doença, ou se ambas as citocinas ne-

cessitavam ser inibidas para alcançar supressão da doença. Recentes estudos confirmaram através de camundongos deficientes de IL-23p19 ou neutralização de anticorpo específico de IL-23 que inibição de IL-23 pode fornecer benefício equivalente como estratégias de anti-IL-12p40 (Cua et al, 2003, Murphy et al, 2003, Benson et al 2004). Portanto, há evidência cresA presente invenção fornece anticorpos isolados mamíferos, incluindo, sem limitação, humanos, que ligam à subunidade de IL-23 de p19, cente para o papel específico de IL-23 em doença imunemediada. Neutralização de IL-23 sem inibição das vias de IL-12 podería depois proporcionar terapia eficaz de doença imunemediada com impacto limitado no mecanismo imune de defesa do hospedeiro importante. Isto representaria uma melhoria significativa sobre as opções terapêuticas atuais.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

anticorpos de anti-IL-23p19 (também referidos como anticorpos de ÍL23p19), imunoglobulinas, fragmentos, produtos de divagem e outras porções especificadas e suas variantes, como também composições de anticorpo de anti-IL-23p19, anticorpos de antiidiotipo de IL-23p19, ácidos nu5 cléicos de codificação ou complementares, vetores, células hospedeiras, composições, combinações, formulações, dispositivos, animais transgêni-

cos, plantas transgênicas, e métodos de fazer e os usar.

A presente invenção fornece, em um aspecto, moléculas compreendendo ácido nucléico isolado, complementar, ou hibridado com, um 10 polínucleotídeo que codifica anticorpos específicos de anti-IL-23p19 ou anticorpos de antiidiotipo, compreendendo pelo menos uma seqüência especificada, domínio, porção ou variante desta. A presente invenção também fornece vetores recombinantes compreendendo as ditas moléculas de ácido nucléico de anticorpo de anti-IL-23p19, células hospedeiras contendo tais ácidos nucléicos e/ou vetores recombinantes, como também métodos de fazer e/ou usar tais ácidos nucléicos de anticorpo, vetores e/ou células hos-

pedeiras.

A presente invenção também fornece pelo menos um método para expressar pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19, ou anticorpo de

Antiidiotipo de IL-23p19, em uma célula hospedeira, compreendendo cultivar uma célula hospedeira como descrita aqui sob condições em que pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 é expresso em quantidades detectáveis e/ou recuperáveis.

A presente invenção também fornece pelo menos uma composi25 ção compreendendo (a) um anticorpo de anti-IL-23p19 isolado que codifica ácido nucléico e/ou anticorpo como descrito aqui; e (b) um veículo ou diluente adequado e/ou farmaceuticamente aceitável.

A presente invenção também fornece pelo menos um método de anticorpo ou composição de anti-IL-23p19, para administrar em uma quanti30 dade terapeuticamente eficaz para modular ou tratar pelo menos uma Condição relacionada a IL-23p19 em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente e/ou, antes, subseqüente, ou durante uma condição relacionada, como

conhecido na técnica e/ou como descrito aqui.

A presente invenção também fornece pelo menos uma composição, dispositivo e/ou método de liberação de uma quantidade terapêutica ou profilaticamente eficaz de pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19, de 5 acordo com a presente invenção.

A presente invenção também fornece pelo menos um método de anticorpo de anti-IL-23p19 ou composição, para diagnosticar pelo menos

uma condição relacionada a IL-23 em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente e/ou, antes, subseqüente, ou durante uma condição relacionada, 10 como conhecido na técnica e/ou como descrito aqui.

A presente invenção também fornece pelo menos uma composição, dispositivo e/ou método de liberação para diagnosticar pelo menos um anticorpo de anti-IL-23pl9, de acordo com a presente invenção.

Também fornecido é um dispositivo médico, compreendendo pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 mamífero isolado da invenção, em que o dispositivo é adequado para contatar ou administrar Pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19, anticorpo anti-idiotípico de IL-23p19, molécula de ácido nucléico, composto, proteína, e/ou composição.

Também fornecido é um artigo de fabricação para o uso farma-

cêutico ou diagnóstico humano, compreendendo material de embalagem e um recipiente compreendendo uma solução ou uma forma liofilizada de pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 isolado da presente invenção. O artigo corpo de anti-IL12 (20C2) é mostrado ligar IL-12 apenas.

A figura 2 mostra a ligação de IL-23 aos anticorpos de IL-23p19 de fabricação pode opcionalmente ter o recipiente como um componente de um dispositivo ou sistema de liberação.

A presente invenção também provê qualquer invenção descrita aqui.

DESCRIÇÃO DAS figuraS

A figura 1 mostra que anticorpos de IL23p19 especificamente ligam ao monômero hrlL-23 e não hrlL-12 ou hrp40. Um anticorpo de p40 de anti-IL12/IL23 é mostrado ligar IL-23, IL-12 e ao monômero de p40. Um anti-

imobilizados em placa da invenção em que todos os quatro anticorpos testados mostram curvas de ligação similares.

A figura 3A mostra que os anticorpos C1249 e C1269 bloqueiam ligação normal de IL-23/IL-23R.

A figura 3B mostra que os anticorpos C1273 e C1275 bloqueiam ligação normal de IL-23/IL-23R.

A figura 4 mostra que os anticorpos de IL-23p19 da invenção

inibem produção de IL-17 mediada por hrlL-23.

A figura 5 mostra o impacto das Mutações de IL-23 na Ligação deC1249, C1269e CNTO209.

A figura 6 mostra um modelo estrutural de IL-23 humana em uma representação de tiras.

A figura 7 mostra os resultados da análise de competição de anticorpos C1249 e C1269.

A figura 8A mostra uma análise de ELISA de proteínas de IL-23 mutantes que ligam ao anticorpo C1249.

A figura 8B mostra uma análise de ELISA de proteínas de IL-23 mutantes que ligam ao anticorpo C1269.

A figura 9 mostra uma comparação da atividade de ligação rela-

tiva para as proteínas de ÍL-23 mutantes que ligam ao anticorpo C1249, C1269 e de controle.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

A presente invenção fornece anticorpos de anti-IL-23p19 isolados, recombinantes e/ou sintéticos, incluindo, sem limitação, anticorpos mamíferos (por exemplo, anticorpos humanos) e de antiidiotipo de IL-23p19 para estes, como também composições e moléculas de codificação de ácido nucléico compreendendo pelo menos um polinucleotídeo que codifica pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 ou anticorpo antiidiotipo. A presente invenção também inclui, mas não é limitada a, métodos de fazer e usar tais ácidos nucléicos e anticorpos e anticorpos de antiidiotipo, incluindo composições, métodos e dispositivos diagnósticos e terapêuticos.

Como aqui usado, um anticorpo de anti-IL-23p19, anticorpo

de IL-23p19, porção de anticorpo de anti IL-23p19, ou fragmento de anticorpo de anti-IL-23p19 e/ou variante de anticorpo de anti-IL-23p19 e similares incluem qualquer proteína ou peptídeo contendo molécula compreendendo pelo menos uma porção de uma molécula de imunoglobulina, como 5 mas não limitada a, pelo menos uma região de determinação de complementaridade (CDR) de uma cadeia pesada ou leve ou uma porção de ligação de ligando desta, uma região variável de cadeia pesada ou de cadeia

leve, uma região constante de cadeia pesada ou cadeia leve, uma região de estrutura, ou qualquer porção destas, ou pelo menos uma porção de um re10 ceptor de IL-23 ou proteína de ligação que pode ser incorporada em um anticorpo da presente invenção. Tal anticorpo opcionalmente também afeta um ligando específico, como mas não limitado a, onde tal anticorpo modula, diminui, aumenta, antagoniza, agoniza, mitiga, alivia, bloqueia, inibe, ab-roga e/ou interfere com pelo menos uma atividade ou ligação de IL-23, ou com 15 atividade ou ligação de receptor de IL-23, in vitro, in situ e/ou in vivo. Como um exemplo não-limitativo, um anticorpo de anti-IL-23p19 adequado, porção especificada ou variante da presente invenção pode ligar Pelo menos uma molécula de IL-23, ou porções, variantes ou domínios especificados desta. Um anticorpo de anti-IL-23p19, porção especificada, ou variante adequada pode também opcionalmente afetar pelo menos uma da atividade ou função de IL-23p19, como mas não limitado a, síntese de RNA, DNA ou de proteína, liberação de IL-23, sinalização de receptor de IL-23, divagem de IL-23 de membrana, atividade de IL-23, produção e/ou síntese de IL-23.

O termo anticorpo é também intencionado abranger anticor25 pos, fragmentos de digestão, porções especificadas e variantes destes, inum IL-23p19 humano. Por exemplo, fragmentos de anticorpo capazes de ligar IL-23p19 ou porções deste, incluindo, mas não limitados a, Fab (por cluindo, sem limitação, miméticos de anticorpo ou porções compreendendo anticorpos que mimetizam a estrutura e/ou função de um anticorpo ou fragmento ou porção especificada deste, incluindo, sem limitação, anticorpos de cadeia simples, anticorpos de domínio simples, e fragmentos destes. Frag30 mentos funcionais incluem fragmentos de ligação de antígeno que ligam a

exemplo através de digestão de papaína). Fab’ (por exemplo, por digestão e redução parcial de pepsina) e F(abj₂ (por exemplo, através de digestão de pepsina), facb (por exemplo, através de digestão de plasmina), pFc’ (por exemplo, por digestão de pepsina ou plasmina), Fd (por exemplo, pordiges5 tão, redução parcial e reagregação de pepsina), fragmentos de Fv ou scFv (por exemplo, através de técnicas de biologia molecular), são abrangidos pela invenção (vide, por exemplo, Colligan, Immunology, supra).

Tais fragmentos podem ser produzidos por divagem enzimática, técnicas sintéticas ou recombinantes, como conhecidas na técnica e/ou co10 mo descritas aqui. Anticorpos podem também ser produzidos em uma variedade de formas truncadas usando genes de anticorpo que foram introduzidos em um ou mais códons de parada a montante do sítio de parada natural. Por exemplo, um gene de combinação que codifica uma porção de cadeia pesada de F(ab’)2 pode ser projetado para incluir seqüências de DNA 15 que codificam o domínio de CF-h e/ou região de dobradiça da cadeia pesada.

As várias porções de anticorpos podem ser unidas quimicamente através de técnicas convencionais, ou podem ser preparadas como uma proteína con tígua usando técnicas de engenharia genética.

O termo anticorpo humano, como aqui usado, é intencionado incluir anticorpos tendo regiões variáveis e constantes derivadas de seqüências de imunoglobulina de linhagem germinal humana ou estritamente equiparadas. Os anticorpos humanos da invenção podem incluir resíduos de aminoácidos não codificados por seqüências de imunoglobulina de linhagem germinal humana (por exemplo, mutações introduzidas aleatórias ou muta25 gênese específica in vitro ou através de mutação somática in vivo). Desse modo, como aqui usado, o termo anticorpo humano refere-se a um anticorpo em que substancialmente toda parte da proteína (por exemplo, CDR, estrutura, CL, domínios de CH (por exemplo, C_H1, C_H2, C_H3), dobradiça, (V_L,

V_H)) é substancialmente similar a um anticorpo de linhagem germinal huma30 na. Anticorpos humanos foram classificados em agrupamentos com base em suas similaridades de seqüência de aminoácido, vide por exemplo http://people.cryst.bbk.ac.uk/~ubcg07s/. Desse modo, usando uma pesquisa

de similaridade de seqüência. um anticorpo com seqüência linear similar pode ser selecionado como um modelo para criar anticorpos humanizados.

Humanização (também chamada Reformatação ou enxerto de CDR) é agora uma técnica bem estabelecida para reduzir a imunogenicidade de anticorpos monoclonais (mAbs) de fontes xenogenéicas (comumente roedor) e para melhorar as funções efetoras (ADCC, ativação de complemento, ligação de C1q). O mAb criado é criado usando as técnicas de biologia molecular, porém enxerto de CDR simples das regiões de determinação de complementaridade roedoras (CDRs) em estruturas humanas freqüentemente resulta em perda da afinidade e/ou especificidade de ligação do mAb original. Para humanizar um anticorpo, o projeto do anticorpo humanizado inclui variações como substituições de aminoácido conservadoras em resíduos das CDRs, e re-substituição de resíduos do mAb roedor nas regiões de estrutura humanas (remutações). As posições podem ser discernidas ou identificadas por comparação da seqüência para análise estrutural ou por análise de um modelo de homologia da estrutura 3D das regiões variáveis. O processo de maturação de afinidade tem mais recentemente usado bibliotecas de fago para variar os aminoácidos nas posições escolhidas. Similarmente, muitos métodos foram usados para selecionar as estruturas humanas mais apropriadas para enxertar as CDRs de roedor. À medida que os conjuntos de dados de parâmetros conhecidos para as estruturas de anticorpo aumenta, assim também aumenta a sofisticação e refinamento destas técnicas. Sequências de consensos ou de linhagem germinal de um anticorpo simples ou fragmentos das seqüências de estrutura dentro de cada região variável de cadeia leve ou pesada de vários mAbs humanos diferentes podem ser usados. Outro método para humanização é modificar apenas resíduos de superfície da seqüência de roedor com os resíduos mais comuns encontrados em mAbs humanos e foi denominada faceamento ou restauração. Seqüências de Ig humana conhecidas são descritas, por exemplo, em www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi;www.ncbi.nih.gov/igblast; www.atcc.org/phage/hdb.html;www.kabatdatabase.com/top.html; www.antibodyresource.com/onlinecomp.html; www.appliedbiosystems.com; www.bio30

design.com; antibody.bath.ac.uk: www.unizh.chwww.cryst.bbk.ac.uk/' ~ubcg07s; Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U. S. Depart. Health (1983), cada um completamente incorporado aqui por referência. Frequentemente, o anticorpo humano ou humanizado é substanci5 almente não-imunogênico em seres humanos.

Similarmente, anticorpos designados primatas (macaco, babuíno, chimpanzé, etc.), roedor (camundongo, rato, coelho, cobaia, porquinhoda-índia, e similares) e similares mamíferos designam tais espécies, subgênero, gênero, subfamília, e anticorpos específicos para família. Anticorpos 10 adicionais, quiméricos podem incluir qualquer combinação dos acima. Tais alterações ou variações opcional e preferivelmente retêm ou reduzem a imunogenicidade em seres humanos ou outras espécies com relação aos anticorpos não-modificados. Desse modo, um anticorpo humano é distinto de um anticorpo quimérico ou humanizado.

É indicado que um anticorpo humano pode ser produzido por um animal não-humano ou célula procariótica ou eucariótica que é capaz de expressar genes de imunoglobulina humana funcionalmente rearranjados (por exemplo, cadeia pesada e/ou cadeia leve). Também, quando um anticorpo humano for um anticorpo de cadeia simples ou de domínio simples,

ele pode compreender um peptídeo ligante que não é encontrado em anticorpos humanos nativos. Por exemplo, um Fv pode compreender um peptídeo ligante, como dois a cerca de oito outros resíduos de glicina ou de aminoácido que conectam à região variável da cadeia pesada e à região variável da cadeia leve. Tais peptídeos ligantes são considerados ser de origem humana.

de IL-23p19, a outra é para qualquer outro antígeno. Métodos para fazer anticorpos biespecíficos sao conhecidos na técnica. Tradicionalmente, a

Anticorpos biespecíficos, heteroespecíficos, heteroconjugados ou similares podem também ser usados que são anticorpos monoclonais, preferivelmente, humanos ou humanizados, que têm especificidades de ligação Pelo menos dois antígenos diferentes. No caso presente, uma das especificidades de ligação é para pelo menos uma subunidade de proteína produção recombinante de anticorpos biespecíficos é com base na co expressão de dois pares de imunoglobulina de cadeia leve-cadeia pesada onde as duas cadeias pesadas têm especificidades diferentes (Milstein e Cuello, Nature 305:537 (1983)). Por causa do sortimento aleatório das ca5 deias pesadas e leves da imunoglobulina, estes hibridomas (quadromas) produzem uma mistura potencial de 10 moléculas de anticorpo diferentes dos quais apenas um tem a estrutura biespecífica correta. A purificação da molécula correta é usualmente feita através de etapas de cromatografia de afinidade. Procedimentos similares são descritos, por exemplo, em WO 10 93/08829, patentes US Nos, 6210668, 6193967, 6132992, 6106833,

6060285,

6037453, 6010902, 5989530,

5959084, 5959083, 5932448,

5833985, 5821333,

5807706, 5643759, 5601819,

5582996, 5496549,

4676980, WO 91/00360, WO 92/00373, EP 03089, Traunecker et al., EMBO

J. 10:3655 (1991), Suresh et al., Methods in Enzymology 121:210 (1986), cada uma completamente incorporada aqui por referência.

Anticorpos de anti-IL-23p19 úteis nos métodos e composições da presente invenção podem opcionalmente ser caracterizados por afinidade alta ligando a IL-23p19 e, opcional e preferivelmente, como tendo baixa toxicidade. Em particular, um anticorpo, fragmento especificado ou variante

da invenção onde os componentes individuais, como a região variável, região constante e estrutura, individual e/ou coletivamente, opcional e preferi velmente possuem baixa imunogenicidade, são úteis na presente invenção. Os anticorpos que podem ser usados na invenção são opcionalmente caracterizados por sua habilidade para tratar os pacientes durante períodos es25 tendidos com alívio mensurável de sintomas e toxicidade baixa e/ou aceitámenos que 25 % dos pacientes, preferivelmente, em menos que 10 % dos pacientes tratados com a dose recomendada para o curso recomendado de vel. Imunogenicidade baixa ou aceitável e/ou afinidade alta, como também outras propriedades adequadas, podem contribuir para os resultados terapêuticos alcançados. Imunogenicidade baixa é definida aqui como a incidência de níveis tituláveis de anticorpos para o anticorpo de anti-IL-23p19 em pacientes tratados com anticorpo de anti-IL-23p19 como ocorrendo em

terapia durante o período de tratamento.

Os ácidos nucléicos isolados da presente invenção podem ser usados para a produção de pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 ou variante especificada deste, que podem ser usado para medir ou realizar em 5 uma célula, tecido, órgão ou animal (incluindo mamíferos e seres humanos), diagnosticar, monitorar, modular, tratar, aliviar, ajudar a impedir a incidência, ou reduzir os sintomas, de pelo menos uma condição relacionada a IL-23, selecionada de, mas não limitada a, pelo menos um de um distúrbio ou doença imune, um distúrbio ou doença cardiovascular, um distúrbio ou doença 10 infecciosa, maligna, e/ou neurológica, ou outra condição relacionada a IL-23 conhecida ou especificada.

Um tal método pode compreender administrar uma quantidade eficaz de uma composição ou uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 a uma célula, tecido, órgão, 15 animal ou paciente em necessidade de tal modulação, tratamento, alívio, prevenção, ou redução nos sintomas, efeitos ou mecanismos. A quantidade eficaz pode compreender uma quantidade de cerca de 0,001 a 500 mg/kg por administração simples (por exemplo, bolus), múltipla ou contínua, ou para alcançar uma concentração de soro de concentração de soro de 0,01 -

5000 pg/ml por administração simples, múltipla, ou contínua, ou qualquer faixa eficaz..Λ ^lor nela, como feito e determinado usando métodos conhecidos, como descritos aqui ou conhecidos nas técnicas relevantes.

ANTICORPOS DA PRESENTE INVENÇÃO - PRODUÇÃO E GERAÇÃO

Pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 da presente invenção pode ser opcionalmente produzido por uma linhagem celular, uma linhagem celular misturada, uma célula imortalizada ou população clonal de células imortalizadas, como bem-conhecido na técnica. Vide, por exemplo, Ausubel, et al., ed., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., NY, NY (1987-2001); Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Ma30 nual, 2^S Edição, Cold Spring Harbor, NY (1989); Harlow e Lane, Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY (1989); Colligan, et al., eds., Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, Inc., NY (1994-2001);

Colligan et al., Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001).

Anticorpos que são específicos para proteínas humanas de IL23p19 ou fragmentos destas podem ser suscitados contra um antígeno imu5 nogênico apropriado, como uma proteína de IL-23p19 isolada e/ou uma porção desta (incluindo moléculas sintéticas, como peptídeos sintéticos). Outros anticorpos específicos ou gerais, incluindo, sem limitação, anticorpos mamíferos, podem ser suscitados similarmente. Preparaçao de antígenos imuno-

gênicos, e produção de anticorpo monoclonal pode ser executada usando qualquer técnica adequada.

Em um método, um hibridoma é produzido fundindo uma linhagem celular imortal adequada (por exemplo, uma linhagem celular de mieloma, como, mas não limitado a, Sp2/0, Sp2/0-AG14, NSO, NS1, NS2, AE1, L.5, L243, P3X63Ag8.653, Sp2 SA3, Sp2 MAI, Sp2 SS1, Sp2 SA5, U937, 15 MLA 144, AÇÃO IV, MOLT4, DA-1, JURKAT, WEHI, K-562, COS, RAJI, NIH

3T3, HL-60, MLA 144, NAMALWA, NEURO 2A, ou outros, ou heteromilomas, produtos de fusão destes, ou qualquer célula ou célula de fusão deri-

vada deles, ou qualquer outra linhagem celular adequada como conhecida na técnica) (vide, por exemplo, www.atcc.org,www.lifetech.com., e simila20 res), com células produtoras de anticorpo, como, mas não limitadas a, baço isolado ou clonado, sangue periférico, linfa, amídala, ou outras células imunes ou contendo células B, ou quaisquer outras células expressando seqüências constantes ou variáveis de cadeia pesada ou leve ou de estrutura ou de CDR, ou como ácido nucléico endógeno ou heterólogo, como recom25 binante ou endógeno, viral, bacteriano, algal, procariótico, anfíbio, inseto, réptil, peixe, mamífero, roedor, eqüino, ovino, cabra, ovelha, primata, eucariótico, DNA genômico, cDNA, rDNA, DNA ou RNA mitocondrial, DNA ou RNA de cloroplasto, hnRNA, mRNA, tRNA, simples, bi ou trifilamentar, hibridado, e similares ou qualquer combinação destes. Vide, por exemplo, Ausubel, supra, e Colligan, Immunology, supra, capítulo 2, completamente incorporado aqui por referência.

Células produtoras de anticorpos podem também ser obtidas do

sangue periférico ou, preferivelmente, do baço ou linfonodos, de seres hu manos ou outros animais adequados que foram imunizados com o antígeno de interesse. Qualquer outra célula hospedeira adequada pode também ser usada para expressar ácido nucléico heterólogo ou endógeno que codifica 5 um anticorpo, fragmento especificado ou variante deste, da presente invenção. As células fundidas (hibridomas) ou células recombinantes podem ser isoladas usando condições de cultura seletivas ou outros métodos conheci-

dos adequados, e clonadas limitando a diluição ou classificação das células, ou outros métodos conhecidos. Células que produzem anticorpos com a βει 0 pecificidade desejada podem ser selecionadas por um ensaio adequado (por exemplo, ELISA).

Métodos para criar ou humanizar anticorpos não-humanos ou humanos podem também ser usados e são bem-conhecidos na técnica. Um anticorpo humanizado ou modificado pode ter um ou mais resíduos de ami15 noácido uma fonte que seja não-humana, por exemplo, mas não limitado a, camundongo, rato, coelho, primata não-humano ou outro mamífero. Estes resíduos de aminoácido não-humanos são substituídos por resíduos que são freqüentemente referidos como resíduos de importação que são tipicamente tirados de uma variável de importação, constante ou outro domí-

nio de uma seqüência humana conhecida.

As seqüências de Ig humana conhecidas são descritas, por exemplo, www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgiwww.ncbi.nih.gov/igblast; www.atcc.org/phage/hdb.html;www.mrc-cpe.cam.ac.uk/ALIGNMENTS.php; www.kabatdatabase.com/top.html; ftp. ncbi.nih.gov/repository/kabat;

www.sciguest.com;www.abcam.com; www.antibodvresource.com/onlinecomp.html; www.public.iastate.edu/~pedro/research_tools.html; www.whfreeman.com/imunology/CH05/kubv05.htm; www.hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab;

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www.mrc-cpe.cam.ac.uk; www.ibt.unam.mx/vir/V mice.html; http://www.bioinf.org.uk/abs; antibody.bath.ac.uk; www.unizh.ch; www.cryst.bbk.ac.uk/~ubcQ07s;

www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewq/ccaewçi.html;

www.path.cam.ac.uk/~mrc7/humanisation/TAHHP.html: www.ibt.unam.mx/vir/structure/stat aim.html; www.biosci.missouh.edu/smithgp/index.html;www.jerini.de; Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U. S. Dept. Health (1983), cada uma completamente incorporada aqui por referência.

Tais sequências importadas podem ser usadas para reduzir imunogenicidade ou reduzir, intensificar ou modificar a ligação, afinidade, taxa interna, taxa externa, avidez, especificidade, meia-vida, ou qualquer outra característica adequada, como conhecido na técnica. Em geral, os resíduos de CDR são direta e substancialmente envolvidos em influenciar li-

gação de antígeno. Conseqüentemente, parte ou todas as seqüências de

CDR não-humanas ou humanas são mantidas enquanto as seqüências nãohumanas das regiões variáveis e constantes podem ser substituídas com aminoácidos humanos ou outros.

Anticorpos podem também opcionalmente ser humanizados ou modificados ou anticorpos humanos modificados com retenção de afinidade alta para o antígeno e outras propriedades biológicas favoráveis. Para alcançar esta meta, anticorpos humanizados (ou seres humanos) podem ser opcionalmente preparados por um processo de análise das seqüências parentais e vários produtos conceituais humanizados e modificados usando modelos tridimensionais das seqüências parentais, modificadas e humanizadas. Modelos de imunoglobulina tridimensionais estão comumente disponíveis e são familiarizadas àqueles versados na técnica. Programas de com

putação estão disponíveis qoe ilustram e exibem estruturas conformacionais tridimensionais prováveis das seqüências de imunoglobulina candidatas selecionadas. Inspeção destas exibições permite análise do possível papel dos resíduos no funcionamento da seqüência de imunoglobulina candidata, isto 5 é, a análise de resíduos que influenciam a habilidade da imunoglobulina candidata para ligar seu antígeno. Desse modo, resíduos de estrutura (FR) podem ser selecionados e combinados das seqüências de consensos e im-

portar seqüências de forma que a característica de anticorpo desejada, como afinidade aumentada para o(s) antígeno(s), seja alcançado.

Além disso, o anticorpo de IL-23p19 da presente invenção pode compreender uma estrutura de cadeia leve de linhagem germinal humana.

Em particular modalidades, a seqüência de linhagem germinal de cadeia leve é selecionada das seqüências de VK humanas incluindo, mas não limitadas a, A1, A10, A11, A14, A17, A18, A19, A2, A20, A23, A26, A27, A3,

A30, A5, A7, B2, B3, L1, L10, L11, L12, L14, L15, L16, L18, L19, L2, L20,

L22, L23, L24, L25, L4/18a, L5, L6, L8, L9, 01, 011, 012, 014, 018, 02, 04, e 08. Em certas modalidades, esta estrutura de linhagem germinal humana de cadeia leve é selecionada de V1-11, V1-13, V1-16, V1-17, V1-18,

V1-19, V1-2, V1-20, V1-22, V1-3, V1-4, V1-5, V1-7, V1-9, V2-1, V2-11, V2-

13, V2-14, V2-15, V2-17, V2-19, V2-6, V2-7, V2-8, V3-2, V3-3, V3-4, V4-1,

V4-2, V4-3, V4-4, V4-6, V5-1, V5-2, V5-4, e V5-6. Vide PCT WO

2005/005604 para uma descrição das seqüências de linhagem germinal diferentes.

Em outras modalidades, o anticorpo de IL-23 da presente inven25 ção pode compreender uma estrutura de linhagem germinal humana de cadeia pesada. Em particular modalidades, esta estrutura de linhagem germinal humana de cadeia pesada é selecionada de VH1-18, VH1-2, VH1-24, VH1-3, VH1-45, VH1-46, VH1-58, VH1-69, VH1-8, VH2-26, VH2-5, VH2-70, VH3-11, VH3-13, VH3-15, VH3-16, VH3-20, VH3-21, VH3-23, VH3-30, VH330 33, VH3-35, VH3-38, VH3-43, VH3-48, VH3-49, VH3-53, VH3-64, VH3-66,

VH3-7, VH3-72, VH3-73, VH3-74, VH3-9, VH4-28, VH4-31, VH4-34, VH4-39, VH4-4, VH4-59, VH4-61, VH5-51, VH6-1, e VH7-81. Vide PCT WO

2005/005604 para uma descrição das seqüências de linhagem germinal diferentes.

Em particular modalidades, a região variável de cadeia leve e/ou região variável de cadeia pesada compreende uma região de estrutura ou 5 pelo menos uma porção de uma região de estrutura (por exemplo, contendo 2 ou 3 sub-regiões, como FR2 e FR3). Em certas modalidades, pelo menos FRL1, FRL2, FRL3, ou FRL4 é completamente humana. Em outras modali-

dades, pelo menos FRH1, FRH2, FRH3, ou FRH4 é completamente humana. Em algumas modalidades, pelo menos FRL1, FRL2, FRL3, ou FRL4 é uma seqüência de linhagem germinal (por exemplo, linhagem germinal humana) ou compreende seqüências de consenso humanas para a estrutura particular (facilmente disponível nas fontes de seqüências de Ig humana conhecidas descritas acima). Em outras modalidades, pelo menos FRH1, FRH2, FRH3, ou FRH4 é uma seqüência de linhagem germinal (por exemplo, linhagem germinal humana) ou compreende seqüências de consenso humanas para a estrutura particular. Em modalidades preferidas, a região de estrutura é uma região de estrutura humana.

Humanização ou modificação de anticorpos da presente invenção pode ser executada usando qualquer método conhecido, como mas não

limitado àqueles descritos em Winter (Jones et al., Nature 321:522 (1986);

Riechmann et al., Nature 332:323 (1988); Verhoeyen et al., Science

239:1534 (1988)), Sims et al., J. Immunol. 151: 2296 (1993); Chotia e Lesk,

J. Mol. Biol. 196:901 (1987), Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A

89:4285 (1992); Presta et al., J. Immunol. 151:2623 (1993), patentes US

Nos: 5723323, 5976862, 5824514, 5817483, 5814476, 5763192, 5723323,

5,766886, 5714352, 6204023, 6180370, 5693762, 5530101, 5585089,

5225539; 4816567, PCT/: US98/16280, US96/18978, US91/09630,

US91/05939, US94/01234, GB89/01334, GB91/01134, GB92/01755;

WO90/14443, WO90/14424, W090/14430, EP 229246, cada um completa30 mente incorporado aqui por referência, inclusas referências neles citadas.

Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma região de

Fc alterada (por exemplo, mutada). Por exemplo, em algumas modalidades,

a região de Fc foi alterada para reduzir ou intensificar as funções efetoras do anticorpo. Em algumas modalidades, a região de Fc é um isótipo selecionado de IgM, IgA, IgG, IgE, ou outro isótipo.

Alternativa ou adicionalmente, pode ser útil combinar modifica5 ções de aminoácido com uma ou mais modificações de aminoácido adicio-

nais que alteram ligação de C1q e/ou a função de citotoxicidade dependente de complemento (CDC) da região de Fc de uma molécula de ligação de IL23p19. O polipeptídeo de ligação de interesse particular pode ser um que liga a C1q e exibe citotoxicidade dependente de complemento. Polipeptí10 deos com atividade de ligação de C1q pré-existente, tendo também opcionalmente a habilidade para mediar CDC, podem ser modificados de modo

que um ou ambas destas atividades são intensificadas. Modificações de aminoácido que alteram C1q e/ou modificam sua função de citotoxicidade dependente de complemento são descritas, por exemplo, em WO/0042072, 15 que é por este meio incorporado por referência.

Como descrito acima, pode-se projetar uma região de Fc do anticorpo de IL-23p19 da presente invenção com função efetora alterada, por exemplo, modificando ligação de C1q e/ou ligação de FcyR e assim a atividade de CDC e/ou a atividade de ADCC variável. Funções efetoras são 20 responsáveis para ativar ou diminuir uma atividade biológica (por exemplo, em um sujeito). Exemplos de funções efetoras incluem, mas não são limitadas a: ligação de C1q; citotoxicidade dependente de complemento (CDC); receptor de ligação de Fc; citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo (ADCC); fagocitose; sub-regulação de receptores de superfície de 25 célula (por exemplo, receptor de célula B; BCR), etc. Tais funções efetoras podem requerer que a região de Fc seja combinada com um domínio de ligação (por exemplo, um domínio variável de anticorpo) e podem ser avaliadas usando vários ensaios (por exemplo, ensaios de ligação de Fc, ensaios de ADCC, ensaios de CDC, etc.).

Por exemplo, pode-se gerar uma região de Fc variante do anticorpo de IL-23p19 com ligação de C1q melhorada e ligação de FcyRIII melhorada (por exemplo, ambos tendo atividade de ADCC melhorada e ativida-

de de CDC melhorada). Alternativamente, se for desejado que a função efetora seja reduzida ou removida, uma região de Fc variante pode ser criada com atividade de CDC reduzida e/ou atividade de ADCC reduzida. Em outras modalidades, apenas uma destas atividades pode ser aumentada, e, 5 opcionalmente, também a outra atividade reduzida (por exemplo, para gerar uma região variante de Fc com atividade de ADCC melhorada, mas atividade de CDC reduzida e vice-versa).

Mutações de Fc podem também ser introduzidas na engenharia para alterar sua interação com o receptor de Fc neonatal (FcRn) e melhorar 10 suas propriedades farmacocinéticas. Uma coletânea de variantes de Fc humanas com ligação melhorada para o FcRn foi descrita (Shields et al., (2001). High resolution mapping of the binding site on human IgG 1 for FcyRI, FcyRII, FcyRIII, and FcRn and design of IgG 1 variants with improved binding to the FcyR, J. Biol. Chem. 276:6591-6604).

Outro tipo de substituição de aminoácido serve para alterar o padrão de glicosilação da região de Fc do anticorpo de IL-23p19. Glicosila ção de uma região de Fc é tipicamente ligada a N ou O. Ligada a N referese à ligação da porção de carboidrato à cadeia lateral de um resíduo de asparagina. Glicosilação O-ligada refere-se à ligação de um dos açúcares N acetilgalactosamina, galactose, ou xilose a um ácido hidroxiamino, comumente serina ou treonina, embora 5-hidroxiprolina ou 5-hidroxilisina possam também ser usados. As seqüências de reconhecimento para ligação enzimática da porção de carboidrato para as seqüências de peptídeo de cadeia lateral de asparagina são asparagina-X-serina e asparagina-X-treonina onde X é qualquer aminoácido exceto prolina. Desse modo, a presença de qualquer uma destas seqüências de peptídeo em um polipeptídeo cria um sítio de glicosilação potencial.

O padrão de glicosilação pode ser alterado, por exemplo, excluindo um ou mais sítios de glicosilação encontrados no polipeptídeo, e/ou adicionando um ou mais sítios de glicosilação que não estão presentes no polipeptídeo. Adição de sítios de glicosilação à região de Fc de um anticorpo de IL-23p19 é convenientemente realizada alterando a seqüência de amino30 ácido modo que eia contenha uma ou mais das seqüências de tripeptídeo acima descritas (para sítios de glicosilação N-ligados). Uma variante de glicosilação exemplar tem uma substituição de aminoácido resíduo Asn 297 da cadeia pesada. A alteração pode também ser feita pela adição, ou substitui5 ção, de um ou mais resíduos de serina ou de treonina para a seqüência do polipeptídeo original (para sítios de glicosilação O-ligados). Adicionalmente, uma alteração de Asn 297 para Ala pode remover um dos sítios de glicosila-

ção.

Em certas modalidades, o anticorpo de IL-23p19 da presente invenção é expresso em células que expressam beta (1,4)-N-acetilglucosaminiltransferase III (GnT III), de modo que GnT III adiciona GlcNAc ao anticorpo de IL-23p19. Métodos para produzir anticorpos em um tal maneira são fornecidos em WO/9954342, WO/03011878, publicação de patente 20030003097A1, e Umana et al., Nature Biotechnology, 17:176-180, feve15 reiro de 1999. Um anticorpo de anti-IL-23p19 pode ser opcionalmente gerado por imunização de um animal transgênico (por exemplo, camundongo, rato, hamster, primata não-humano, e similares) capaz de produzir um repertório de anticorpos humanos, como descrito aqui e/ou como conhecido na técnica. Células que produzem um anticorpo de anti-IL-23p19 podem ser

isoladas de tais animais e imortalizadas usando métodos adequados, como os métodos descritos aqui.

Camundongos transgênicos que podem produzir um repertório de anticorpos humanos que ligam a antígenos humanos podem ser produzidos através de métodos conhecidos (por exemplo, mas não limitados a,

Pats. U. S. Nos: 5.770.428, 5.569.825, 5.545.806, 5.625.126, 5.625.825,

5.633.425, 5.661.016 e 5.789.650 emitida por Lonberg et al.; Jakobovits et al. WO 98/50433, Jakobovits et al. WO 98/24893, Lonberg et al. WO

98/24884, Lonberg et al. WO 97/13852, Lonberg et al. WO 94/25585, Kucherlapate et al. WO 96/34096, Kucherlapate et al. EP 0463 151 B1, Ku30 cherlapate et al. EP 0710 719 A1, Surani et al. Pat. US No. 5.545.807, Bruggemann et al. WO 90/04036, Bruggemann et al. EP 0438 474 B1, Lonberg et al. EP 0814 259 A2, Lonberg et al. GB 2 272 440 A, Lonberg et al. Nature

368:856-859 (1994), Taylor et al., Int. Immunol. 6(4)579-591 (1994), Green et al, Nature Genetics 7:13-21 (1994), Mendez et al., Nature Genetics 15:146-156 (1997), Taylor et al., Nucleic Acids Research 20(23):6287-6295 (1992), Tuaillon et al., Proc Natl Acad Sci USA 90(8)3720-3724 (1993), Lon5 berg et al., Int Rev Immunol 13(1):65-93 (1995) e Fishwald et al., Nat Biotechnol 14(7):845-851 (1996) que são cada um completamente incorporado aqui por referência). Em geral, estes camundongos compreendem pelo me-

nos um transgene compreendendo o DNA de pelo menos um locus de imunoglobulina humana que é rearranjado funcionalmente, ou que pode sofrer 10 rearranjo funcional. Os loci de imunoglobulina endógena podem ser rompidos em tais camundongos ou deletados para eliminar a capacidade do animal de produzir anticorpos codificados por genes endógenos.

Triagem de anticorpos para ligação específica para proteínas ou fragmentos similares pode ser convenientemente alcançada usando biblio15 tecas de exibição de peptídeo. Este método envolve a triagem de coletâneas grandes de peptídeos para membros individuais tendo a função ou estrutura desejada. Triagem de anticorpo de bibliotecas de exibição de peptídeo é bem-conhecida na técnica. As seqüências de peptídeo exibidas podem ser de 3 a 5000 ou mais aminoácidos em comprimento, freqüentemente de 5-

100 aminoácidos de comprimento, e frequentemente de cerca de 8 a 25 aminoácidos de comprimento. Além dos métodos sintéticos químicos diretos para gerar bibliotecas de peptídeo, vários métodos de DNA recombinante foram descritos. Um tipo envolve a exibição de uma seqüência de peptídeo na superfície de um bacteriófago ou célula. Cada bacteriófago ou célula con25 tém a seqüência de nucleotídeo que codifica a seqüência de peptídeo particular exibida. Tais métodos são descritos nas Publicações de Patente PCT Nos. 91/17271,91/18980, 91/19818, e 93/08278.

Outros sistemas para gerar bibliotecas de peptídeos têm aspectos tanto da síntese química in vitro como métodos recombinantes. Vide, 30 Publicações de Patente PCT Nos. 92/05258 , 92/14843, e 96/19256. Vide também, patentes U. S. Nos. 5.658.754; e 5.643.768. Bibliotecas de exibição de peptídeo, vetor, e kits de triagem estão comercialmente disponíveis

de tais provedores como Invitrogen (Carlsbad, CA), e Cambridge Antibody Technologies (Cambridgeshire, UK). Vide, por exemplo, Pats. U. S. Nos. 4704692, 4939666, 4946778, 5260203, 5455030, 5518889, 5534621, 5656730, 5763733, 5767260, 5856456, atribuída a Enzon; 5223409, 5 5403484, 5571698, 5837500, atribuídas a Dyax, 5427908, 5580717, atribuída a Affymax; 5885793, atribuída a Cambridge Antibody Technologies; 5750373, atribuída a Genentech, 5618920, 5595898, 5576195, 5698435,

5693493, 5698417, atribuída a Xoma, Colligan, supra; Ausubel, supra; ou Sambrook, supra.

Anticorpos da presente invenção podem também ser preparados usando pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 que codifica ácido nucléico para fornecer animais ou mamíferos transgênicos, como cabras, vacas, cavalos, ovelha, coelhos e similares, que produzam tais anticorpos em seu leite. Tais animais podem ser fornecidos usando métodos conhecidos. Vide, por exemplo, mas não limitado a, patentes US Nos. 5.827.690; 5.849.992;

4.873.316; 5.849.992; 5.994.616; 5.565.362; 5.304.489, e similares, cada uma destas é completamente incorporada aqui por referência.

Anticorpos da presente invenção podem ser adicionalmente preparados usando pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 que codifica

ácido nucléico para fornecer plantas transgênicas e células de plantas cultivadas (por exemplo, mas não limitadas a, tabaco e milho) que produzem tais anticorpos, porções especificadas ou variantes nas partes de plantas ou em células cultivadas delas. Como um exemplo não-limitativo, folhas de tabaco transgênico expressando proteínas recombinantes foram de forma bem su25 cedida usadas para fornecer quantidades grandes de proteínas recombinantes, por exemplo, usando um promotor induzível. Vide, por exemplo, Cramer et al., Curr. Top. Microbol. Immunol. 240:95-118 (1999) e referências nele citadas. Também, milho transgênico foi usado para expressar proteínas mamíferas em níveis de produção comercial, com atividades biológicas e30 quivalentes às produzidas em outros sistemas recombinantes ou purificadas de fontes naturais. Vide, por exemplo, Hood et al., Adv. Exp. Med. Biol. 464:127-147 (1999) e referências nele citadas. Anticorpos foram também

produzidos em quantidades grandes de sementes de plantas transgênicas incluindo fragmentos de anticorpo, como anticorpos de cadeia simples (scFv), incluindo sementes de tabaco e tubérculos de batata. Vide, por exemplo, Conrad et al., Plant Mol. Biol. 38:101-109 (1998) e referências nele 5 citadas. Desse modo, anticorpos da presente invenção podem também ser produzidos usando plantas transgênicas, de acordo com os métodos conhecidos. Vide também, por exemplo, Fischer et al., Biotechnol. Appl. Biochem.

30:99-108 (out., 1999), Ma et al·, Trends Biotechnol. 13:522-7 (1995); Ma et al., Plant Physiol. 109:341-6 (1995); Whitelam et al., Biochem. Soc. Trans. 10 22:940-944 (1994); e referências neles citadas.

Os anticorpos da invenção podem ligar IL-23p19 humano com uma gama extensiva de afinidades (KD). Em uma modalidade preferida, pelo menos um mAb da presente invenção pode opcionalmente ligar IL-23p19 humano com afinidade alta. Por exemplo, um mAb humano ou outro pode 15 ligar IL-23p19 humano com uma K_D igual ou menor que cerca de 10'⁷ M, como mas não limitado a, 0,1-9,9 (ou qualquer faixa ou valor nela) X 10’⁷, 10 ⁸, 10’⁹, 10’¹°, 10’¹¹, 10’¹², 10’¹³, 10’¹⁴, 10‘¹⁵ou qualquer faixa ou valor nela, como determinado por ressonância de plasmon de superfície ou pelo método de Kínexa, como praticado por aqueles versados na técnica. Em uma

modalidade, os anticorpos da invenção ligam IL-23 humana, ou mais especificamente, IL-23p19, com uma K_D entre cerca de 3,38 X 10’¹° M e cerca de

4,3 X 10’¹¹ M.

A afinidade ou avidez de um anticorpo para um antígeno pode ser determinada experimentalmente usando qualquer método adequado.

(Vide, por exemplo, Berzofsky, et a!., Antibody-Antigen Interactions, Em Fundamental immunology, Paul, W. E., Ed., Raven Press: Nova Iorque, NI (1984); Kuby, Janis Immunology, W. H. Freeman and Company: Nova Iorque, NI (1992); e métodos descritos aqui). A afinidade medida de uma interação de anticorpo-antígeno particular pode variar se medida sob condições diferentes (por exemplo, concentração de sal, pH). Desse modo, medições de afinidade e similares parâmetros de ligação de antígeno (por exemplo, Kd, K_on, K_off) são preferivelmente feitas com soluções padronizadas de anti-

corpo e antígeno, e um tampão padronizado, como o tampão descrito aqui.

Certas modalidades dos anticorpos de anti-IL-23p19 da invenção têm as sequências mostradas nas Tabelas de Seqüência abaixo. Por exemplo, um anticorpo de anti-IL-23p19 da invenção tem uma das seqüên5 cias de CDR1 de cadeia leve da SEQ ID NOS: 9, 19, 29, e 39; uma das seqüências de CDR2 de cadeia leve da SEQ ID NOS: 10, 20, 30, e 40; uma das seqüências de cadeia leve de CDR3 da SEQ ID NOS: 11,21, 31, e 41;

uma das seqüências de CDR1 de cadeia pesada da SEQ ID NOS: 4, 14, 24, e 34; uma das seqüências de CDR2 de cadeia pesada da SEQ ID NOS: 5, 10 15, 25, e 35; e/ou uma das seqüências de CDR1 de cadeia pesada da SEQ

ÍD NOS: 6, 16, 26, e 36.

MOLÉCULAS DE ÁCIDO NUCLÉICO

Usando a informação fornecida aqui, por exemplo, as seqüências de nucleotídeo que codificam pelo menos 70-100 % dos aminoácidos 15 contíguos de pelo menos uma das regiões variáveis de cadeia leve da SEQ ID NOS: 7, 17, 27, e 37 e pelo menos uma das regiões variáveis de cadeia pesada da SEQ ID NOS: 2, 12, 22, e 32, fragmentos especificados, variantes ou seqüências de consenso destas, ou um vetor depositado compreendendo pelo menos uma destas seqüências, uma molécula de ácido nucléico

da presente invenção que codifica pelo menos um anticorpo de anti-IL23p19 pode ser obtida usando métodos descritos aqui ou como conhecidos na técnica.

Moléculas de ácido nucléico da presente invenção podem ser na forma de RNA, como mRNA, hnRNA, tRNA ou qualquer outra forma, ou na 25 forma de DNA, incluindo, mas não limitado a, cDNA e DNA genômico obtido clonando ou produzindo sinteticamente, ou qualquer combinação destes. O DNA pode ser trifilamentar, bifilamentar ou unifilamentar, ou qualquer combinação destes. Qualquer porção de pelo menos um filamento do DNA ou RNA pode ser o filamento de codificação, também conhecido como o fila30 mento sense, ou pode ser o filamento de não-codificação, também referido como o filamento anti-sentido.

Moléculas de ácido nucléico isolado da presente invenção po23 dem incluir moléculas de ácido nucléico compreendendo uma estrutura de leitura aberta (ORF), opcionalmente, com um ou mais íntrons, por exemplo, mas não limitado a, pelo menos uma porção especificada de pelo menos uma CDR, como CDR1, CDR2 e/ou CDR3 de pelo menos cadeia leve (9, 5 10, 11, 19, 20, 21,29, 30, 31,39, 40, 41) ou pelo menos uma cadeia pesada (SEQ ID NOS: 4, 5, 6, 14, 15, 16, 24, 25, 26, 34, 35, e 36); moléculas de ácido nucléico compreendendo a sequência de codificação para um anticorpo de anti-IL-23p19 ou região de variável (por exemplo, regiões variáveis de cadeia leve da SEQ ID NOS: 7, 17, 27, e 37 e regiões variáveis de cadeia pesada da SEQ ID NOS: 2, 12, 22, e 32); e moléculas de ácido nucléico compreendendo uma seqüência de nucleotídeo substancialmente diferente daquelas descritas acima mas que, devido à degeneração do código genético, ainda codificam pelo menos um anticorpo de anti-lL-23p19 como descrito aqui e/ou como conhecido na técnica. Claro que, o código genético é bem-conhecido na técnica. Desse modo, seria rotineiro para alguém versado na técnica gerar tais variantes de ácido nucléico degeneradas que codificam para anticorpos específicos de anti-IL-23p19 da presente invenção, Vide, por exemplo, Ausubel, et al., supra, e tais variantes de ácido nucléico são incluídas na presente invenção.

Como indicado aqui, moléculas de ácido nucléico da presente invenção compreendendo um ácido nucléico que codifica um anticorpo de anti-IL-23p19 podem incluir, mas não são limitadas a, aquelas codificando a seqüência de aminoácido um fragmento de anticorpo, por si só; a seqüência de codificação para o anticomprimento total ou uma porção desta; a se25 qüência de codificação para um anticorpo, fragmento ou porção, como também sequências adicionais, como a seqüência de codificação de pelo menos um peptídeo líder de sinal ou de fusão, com ou sem as sequências de codificação adicionais acima mencionadas, comPelo menos um íntron, junto com seqüências de não-codificação adicionais, incluindo mas não limitadas 30 a, seqüências de não-codificação de 5’ e 3’, como as seqüências transcritas, não-transladadas que representam um papel na transcrição, processamento de mRNA, incluindo sinais de encaixe e de poliadenilação (por exemplo, li-

gação de ribossoma e estabilidade de mRNA); uma seqüência de codificação adicional que codifica para aminoácidos adicionais, como aqueles que fornecem funcionalidades adicionais. Desse modo, a seqüência que codifica um anticorpo pode ser fundida com uma seqüência rotuladora, como uma 5 seqüência que codifica um peptídeo que facilita a purificação do anticorpo fundido compreendendo um fragmento de anticorpo ou porção.

POLINUCLEOTÍDEOS SELETIVAMENTE HIBRIDAM COM UM POLINUCLEOTÍDEO COMO DESCRITO AQUI

A presente invenção fornece ácidos nucléicos isolados que hi10 bridam sob condições de hibridação seletivas com um polinucleotideo descrito aqui. Desse modo, os polinucleotídeos desta modalidade podem ser usados para isolar, detectar, e/ou quantificar os ácidos nucléicos compreendendo tais polinucleotídeos. Por exemplo, polinucleotídeos da presente invenção podem ser usados para identificar, isolar, ou amplificar clones parci15 ais ou de comprimento total em uma biblioteca depositada. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos são genômicos ou seqüências de cDNA isoladas, ou do contrário complementares a, um cDNA de uma biblioteca de ácido nucléico humana ou mamífera.

Preferivelmente, a biblioteca de cDNA compreende pelo menos

80% de seqüências de comprimento total, preferivelmente, pelo menos 85% ou 90% de seqüências de comprimento total, e, mais preferivelmente, pelo menos 95% de seqüências de comprimento total. As bibliotecas de cDNA podem ser normalizadas para aumentar a representação de seqüências raras. Condições de hibridação de severidade baixa ou moderada são tipica25 mente, mas não exclusivamente, empregadas com seqüências que têm uma identidade de seqüência reduzida com relação às seqüências complementares. Condições de severidade moderada e alta podem opcionalmente ser empregadas para seqüências de maior identidade. Condições de severidade baixa permitem hibridação seletiva das seqüências que têm cerca de 70% 30 de identidade de seqüência e podem ser empregadas para identificar seqüências ortólogos ou parólogas.

Opcionalmente, polinucleotídeos desta invenção codificarãPelo

menos uma porção de um anticorpo codificado pelos polinucleotídeos descritos aqui. Os polinucleotídeos desta invenção abrangem seqüências de ácido nucléico que podem ser empregadas para hibridação seletiva com um polinucleotídeo que codifica um anticorpo da presente invenção. Vide, por exemplo, Ausubel, supra; Colligan, supra, cada um completamente incorporado aqui por referência.

CONSTRUÇÃO DE ÁCIDOS NUCLÉICOS

Os ácidos nucléicos isolados da presente invenção podem ser feitos usando (a) métodos recombinantes, (b) técnicas sintéticas, (c) técni10 cas de purificação, e/ou (d) combinações destas, como bem-conhecidas na técnica.

Os ácidos nucléicos podem convenientemente compreender seqüências além de um polinucleotídeo da presente invenção. Por exemplo, um sítio de multiclonagem compreendendo um ou mais sítios de restrição de 15 endonuclease pode ser inserido no ácido nucléico para auxiliar no isolamento do polinucleotídeo. Também, seqüências traduzíveis podem ser inseridas para auxiliar no isolamento do polinucleotídeo transladado da presente invenção. Por exemplo, uma seqüência de rotulador de hexa-histidina fornece um meio conveniente para purificar as proteínas da presente invenção. O 20 ácido nucléico da presente invenção, excluindo a seqüência de codificação, é opcionalmente um vetor, adaptador, ou ligante para clonagem e/ou expressão de um polinucleotídeo da presente invenção.

Seqüências adicionais podem ser acrescentadas a tais seqüências de clonagem e/ou de expressão para otimizar sua função de clonagem e/ou expressão, auxiliar no isolamento do polinucleotídeo, ou melhorar a introdução do polinucleotídeo em uma célula. Uso de vetores de clonagem, vetores de expressão, adaptadores, e ligantes são bem-conhecidos na técnica. (Vide, por exemplo, Ausubel, supra; ou Sambrook, supra)

MÉTODOS RECOMBINANTES PARA CONSTRUIR ÁCIDOS NUCLÉICOS

As composições de ácido nucléico isolado desta invenção, como

RNA, cDNA, DNA genômico, ou qualquer combinação destes, podem ser obtidas de fontes biológicas usando qualquer número de metodologias de

clonagem conhecidas àqueles versados na técnica. Em algumas modalidades, sondas de oligonucleotídeo que seletivamente hibridam, sob condições rigorosas, com os polinucleotídeos da presente invenção são usadas para identificar a seqüência desejada em uma biblioteca de cDNA ou de DNA 5 genômica. O isolamento de RNA, e construção de cDNA e bibliotecas genômicas, são bem-conhecidos àqueles versados na técnica. (Vide, por exemplo, Ausubel, supra; ou Sambrook, supra)

MÉTODOS DE TRIAGEM E DE ISOLAMENTO DE ÁCIDO NUCLEICO

Uma biblioteca de cDNA ou genômica pode ser triada usando uma sonda com base na seqüência de um polinucleotídeo da presente invenção, como aquele descrito aqui. As sondas podem ser usadas para hibridar com seqüências de DNA ou de cDNA genômicas para isolar genes homólogos nos mesmos organismos ou diferentes. Aqueles versados na técnica apreciarão que vários graus de severidade de hibridação podem ser 15 empregados no ensaio; e ou a hibridação ou o meio de lavagem pode ser rigoroso. À medida que as condições para hibridação ficam mais rigorosas, deve haver um maior grau de complementaridade entre a sonda e o alvo para formação dupleta ocorrer. O grau de severidade pode ser controlado por um ou mais de temperatura, resistência iônica, pH e pela presença de 20 um solvente parcialmente desnaturando, como formamida. Por exemplo, a severidade de hibridação é convenientemente variada alterando a polaridade da solução de reagente através de, por exemplo, manipulação da concentração de formamida dentro da faixa de 0 % a 50 %. O grau de complementaridade (identidade de seqüência) requerido para ligação detectável 25 variará de acordo com a severidade do meio de hibridação e/ou meio de lavagem. O grau de complementaridade será otimamente 100%, ou 70100%, ou qualquer faixa ou valor nela. Porém, deveria ser entendido que variações de seqüência secundária nas sondas e preparadores podem ser compensadas reduzindo a severidade da hibridação e/ou meio de lavagem.

Métodos de amplificação de RNA ou DNA são bem-conhecidos na técnica e podem ser usados de acordo com a presente invenção sem experimentação imprópria, com base no ensinamento e orientação apresen-

tados aqui

Métodos conhecidos de DNA ou amplificação de RNA incluem, mas não são limitados a, reação em cadeia de polimerase (PCR) e processos relacionados à amplificação (vide, por exemplo, Patentes U. S. Nos.

4.683.195, 4.683.202, 4.800.159, 4.965.188, para Mullis, et al.; 4.795.699 e

4.921.794 para Tabor. et al; 5.142.033 para Innis; 5.122.464 para Wilson, et al.; 5.091.310 para Innis; 5.066.584 para Gyllensten, et al; 4.889.818 para

Gelfand, et al; 4.994.370 Silver, et al; 4.766.067 para Biswas; 4.656.134 para Ringold) e amplificação mediada por RNA que usa RNA anti-sentido para 10 a seqüência alvo como um modelo para síntese de DNA bifilamentar (patente U. S. No. 5.130.238 para Malek, et al, com o nome comercial NASBA), os conteúdos inteiros destas referências são incorporadas aqui por referência.

(Vide, por exemplo, Ausubel, supra; ou Sambrook, supra.)

Por exemplo, tecnologia de reação em cadeia de polimerase (PCR) pode ser usada para amplificar as seqüências de polinucleotídeos da presente invenção e genes relacionados diretamente das bibliotecas de DNA ou de cDNA genômicas. PCR e similares métodos de amplificação in vitro podem também ser úteis, por exemplo, para clonar seqüências de ácido nucléico que codificam para proteínas a ser expressas, para fazer ácidos

nucléicos para usar como sondas para detectar a presença do mRNA desejado nas amostras, para seqüenciação de ácido nucléico, ou para outros propósitos. Exemplos de técnicas suficientes para direcionar as pessoas de habilidade através de métodos de amplificação in vitro são encontrados em

Berger, supra, Sambrook, supra, e Ausubel, supra, como também Mullis, et al., Patente U. S. No. 4.683.202 (1987); e Innis, et al., PCR Protocols A Guide to Methods and Applications, Eds., Academic Press Inc., San Diego, CA (1990). Kits comercialmente disponíveis para amplificação de PCR genômica são conhecidos na técnica. Vide, por exemplo, Kit de PCR Genômica Advantage-GC (Clontech). Adicionalmente, por exemplo, o gene de proteína de

T4 32 (Boehrínger Mannheim) pode ser usado para melhorar o rendimento dos produtos de PCR longos.

MÉTODOS SINTÉTICOS PARA CONSTRUIR ÁCIDOS NUCLÉICOS

Os ácidos nucléícos isolados da presente invenção podem também ser preparados por síntese química direta através de métodos conhecidos (vide, por exemplo, Ausubel, et al., supra). Síntese química em geral produz um oligonucleotídeo unifilamentar que pode ser convertido em DNA 5 bifilamentar para hibridação com uma seqüência complementar ou para polimerização com uma DNA polimerase usando o filamento simples como um modelo. Alguém de habilidade na técnica reconhecerá que embora a síntese química de DNA possa ser limitada às seqüências de cerca de 100 ou mais bases, seqüências mais longas podem ser obtidas pela ligação de seqüên10 cias mais curtas.

CASSETES DE EXPRESSÃO RECOMBINANTES

A presente invenção também fornece cassetes de expressão recombinantes compreendendo um ácido nucleico da presente invenção. Uma seqüência de ácido nucléico da presente invenção, por exemplo, um 15 cDNA ou uma seqüência genômica que codifica um anticorpo da presente invenção, pode ser usada para construir um cassete de expressão recombinante que pode ser introduzido pelo menos em uma célula hospedeira desejada. Um cassete de expressão recombinante tipicamente compreenderá um polinucleotideo da presente invenção operavelmente ligado às seqüên20 cias reguladoras de iniciação transcripcionais que direcionarão a transcrição do polinucleotideo na célula hospedeira intencionada. Promotores heterólogo e não-heterólogos (isto é, endógenos) podem ser empregados para direcionar a expressão dos ácidos nucléícos da presente invenção.

Em algumas modalidades, ácidos nucléícos isolados que servem 25 como promotor, intensifícador, ou outros elementos podem ser introduzidos na posição apropriada (a montante, a jusante ou no íntron) de uma forma não-heteróloga de um polinucleotideo da presente invenção para sobre ou sub-regular a expressão de um polinucleotideo da presente invenção. Por exemplo, os promotores endógenos podem ser alterados in vivo ou in vitro 30 através de mutação, deleção e/ou substituição.

VETORES E CÉLULAS HOSPEDEIRAS

A presente invenção também diz respeito aos vetores que inclu-

em moléculas de ácido nucléico isolado da presente invenção, células hospedeiras que são criadas geneticamente com os vetores recombinantes, e à produção de pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 através de técnicas recombinantes, como é bem-conhecído na técnica. Vide, por exemplo, 5 Sambrook, et al., supra; Ausubel, et al., supra, cada um completamente in-

corporado aqui por referência.

Os polinucleotídeos podem opcionalmente ser unidos a um vetor que contém um rotulador selecionável para propagação em um hospedeiro. Em geral, um vetor de plasmídeo é introduzido em um precipitado, como um 10 precipitado de fosfato de cálcio, ou em um complexo com um lipídio carregado. Se o vetor for um vírus, ele pode ser empacotado in vitro usando uma linhagem celular de embalagem apropriada e depois transduzido para células hospedeiras.

A inserção de DNA deveria ser operativamente ligada a um promotor apropriado. Os constructos de expressão também conterão sítios para iniciação de transcrição, terminação e, na região transcrita, um sítio de ligação de ribossoma para translação. A porção de codificação das transcrições maduras expressas pelos constructos preferivelmente incluirá uma translação que inicia no princípio e um códon de terminação (por exemplo,

UAA, UGA ou UAG) apropriadamente posicionado no término do mRNA a ser transladado, com UAA e UAG preferidos para expressão de célula mamífera ou eucariótica.

Vetores de expressão de preferência mas opcionalmente incluirãPelo menos um rotulador selecionável. Tais rotuladores incluem, por e25 xemplo, mas não são limitados a, metotrexato (MTX), diidrofolato reductase (DHFR, País. U.S. N^Qs. 4.399.216; 4.634.665; 4.656.134; 4.956.288; 5.149.636; 5.179.017, ampicilina, neomicina (G418), ácido micofenólico, ou glutamina sintetase (GS, Pat. U.S. Nos. 5,122.464; 5.770.359; 5.827.739) de resistência à cultura de célula eucariótica, e genes de resistência à tetraci30 clina ou ampicilina para cultivar em E. colie outras bactérias ou procarióticos (as patentes acima são por este meio completamente incorporadas por referência). Meios e condições de cultura apropriados para as células hospedei-

ras acima descritas são conhecidos na técnica. Vetores adequados serão facilmente evidentes ao artesão versado. Introdução de uma construção de vetor em uma célula hospedeira pode ser realizada através de transfecção de fosfato de cálcio, transfecção mediada por DEAE-dextrano, transfecção 5 catiônica mediada por lipídio, eletroporação, transdução, infecção ou outros métodos conhecidos. Tais métodos são descritos na técnica, como Sambrook, supra, Capítulos 1-4 e 16-18; Ausubel, supra, Capítulos 1,9, 13, 15, 16.

Pelo menos um anticorpo da presente invenção pode ser ex-

presso em uma forma modificada, como uma proteína de fusão, e não só pode incluir sinais de secreção, mas também regiões funcionais heterólogas adicionais. Por exemplo, uma região de aminoácidos adicionais, particularmente aminoácidos carregados, pode ser acrescentada ao término N de um anticorpo para melhorar a estabilidade e persistência na célula hospedeira, durante a purificação, ou durante a manipulação e armazenamento subse15 qüentes. Também, porções de peptídeo podem ser acrescentadas a um anticorpo da presente invenção para facilitar a purificação. Tais regiões podem ser removidas antes da preparaçao final de um anticorpo ou pelo menos um fragmento deste. Tais métodos são descritos em muitos manuais de laboratório padrão, como Sambrook, supra, Capítulos 17.29-17.42 e 18.1-18.74;

Ausubel, supra, Capítulos 16, 17 e 18.

Aqueles versados usual na técnica são instruídos sobre os numerosos sistemas de expressão disponíveis para expressão de um ácido nucléico que codifica uma proteína da presente invenção. Alternativamente, ácidos nucléicos da presente invenção podem ser expressados em uma cé25 lula hospedeira transformando (através de manipulação) em uma célula ticorpos, porções especificadas ou variantes destes, são células mamíferas. Sistemas de células mamíferas frequentemente serão na forma de monohospedeira que contém DNA endógeno que codifica um anticorpo da presente invenção. Tais métodos são bem-conhecidos na técnica, por exemplo, como descritos nas patentes US Nos. 5.580.734, 5.641.670, 5.733.746, e

5.733.761, completamente incorporadas aqui por referência.

Ilustrativas de culturas de células úteis para a produção dos an31

camadas de células embora suspensões de células mamíferas ou biorreatores possam também ser usados. Várias linhagens de célula hospedeira adequadas capazes de expressar proteínas glicosiladas intactas foram desenvolvidas na técnica, e incluem linhagens celulares de COS-1 (por exem5 pio, ATCC CRL 1650), COS-7 (por exemplo, ATCC CRL-1651), HEK293,

BHK21 (por exemplo, ATCC CRL-10), CHO (por exemplo, ATCC CRL 1610) e BSC-1 (por exemplo, ATCC CRL-26), células de Cos-7, células de CHO,

células de hep G2, P3X63Ag8.653, SP2/0-Ag14, células 293, células de HeLa e outras, que estão facilmente disponíveis, por exemplo, American Type

Culture Collection, Manassas, Va (www.atcc.org). Células hospedeiras preferidas incluem células de origem linfóide, como células de mieloma e de linfoma. Células hospedeiras particularmente preferidas são células de P3X63Ag8.653 (Número de Acesso de ATCC CRL-1580) e células de

SP2/0-Ag14 (Número de Acesso de ATCC CRL-1851). Em uma modalidade particularmente preferida, a célula recombinante é uma célula de P3X63Ab8.653 ou uma de SP2/0-Ag14.

Vetores de expressão para estas células podem incluir uma ou mais das seqüências de controle de expressão a seguir, como, mas não li-

mitadas a, uma origem de replicação; um promotor (por exemplo, promoto20 res de SV40 tardios ou prematuros, promotor de CMV (Pats. U. S. Nos.

5.168.062; 5.385.839), um promotor de tk de HSV, um promotor de pgk (fosfoglicerato cinase), um promotor de EF-1 alfa (Pat. US No. 5.266.491), pelo menos um promotor de imunoglobulina humana; um intensificador, e/ou sítios de processamento de informação, como sítios de ligação de ribossoma, 25 sítios de encaixe de RNA, sítios de poliadenilação (por exemplo, um sítio de adição de poli A de T Ag grande de SV40), e seqüências terminadoras transcripcionais. Vide, por exemplo, Ausubel et al., supra; Sambrook, et al., supra. Outras células úteis para produção de ácidos nucléicos ou proteínas da presente invenção são conhecidas e/ou disponíveis, por exemplo, do 30 American Type Culture Collection Catalogue de Linhagens Celulares e Hibridomas (www.atcc.org) ou outras fontes conhecidas ou comerciais.

Quando células hospedeiras eucarióticas forem empregadas,

seqüências terminadoras de poliadenilação ou de transcrição são tipicamente incorporadas no vetor. Um exemplo de uma seqüência terminadora é a seqüência de poliadenilação do gene de hormônio de crescimento bovino. Seqüências para encaixe preciso da transcrição podem também ser incluí5 das. Um exemplo de uma seqüência de encaixe é o íntron de VP1 de SV40 (Sprague, et al., J. Virol. 45:773-781 (1983)). Adicionaimente, seqüências de gene podem ser incorporadas para controlar a replicação na célula hospe-

deira no vetor, como conhecido na técnica.

PURIFICAÇÃO DE UM ANTICORPO

Um anticorpo de anti-IL-23p19 pode ser restabelecido e purificado de culturas de células recombinantes através de métodos bemconhecidos incluindo, mas não limitados a, purificação de proteína A, precipitação de sulfato de amônio ou etanol, extração de ácido, cromatografia de permuta de ânion ou cátion, cromatografia de fosfocelulose, cromatografia 15 de interação hidrofóbica, cromatografia de afinidade, cromatografia de hi-

droxilapatita e cromatografia de lectina. Cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) pode também ser empregada para purificação. Vide, por exemplo, Colligan, Current Protocols in Immunology, ou Current Protocois in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001), por e20 xemplo, Capítulos 1, 4, 6, 8, 9, 10, cada um completamente incorporado aqui por referência.

Anticorpos da presente invenção incluem produtos naturalmente purificados, produtos de procedimentos sintéticos químicos, e produtos produzidos através de técnicas recombinantes de um hospedeiro eucariótico, 25 incluindo, por exemplo, células de levedura, planta mais alta, inseto e mamíferas. Dependendo do hospedeiro empregado em um procedimento de produção recombinante, o anticorpo da presente invenção pode ser glicosilado ou não-glicosilado, com glicosilado preferido. Tais métodos são descritos em muitos manuais de laboratório padrão, como Sambrook, supra, Seções 30 17.37-17.42; Ausubel, supra, Capítulos 10, 12, 13, 16, 18 e 20, Colligan,

Protein Science, supra, Capítulos 12-14, todos completamente incorporados aqui por referência.

ANTICORPOS DE ANTI-IL-23p19

Um anticorpo de antí-IL-23p19 de acordo com a presente invenção incluí qualquer proteína ou peptídeo que contém molécula compreendendo pelo menos uma porção de uma molécula de imunoglobulina, como 5 mas não limitado a, pelo menos uma porção de ligação de ligando (LBP), como mas não limitada a, uma região de determinação de complementaridade (CDR) de uma cadeia pesada ou leve ou uma porção de ligação de

ligando desta, uma região variável de cadeia pesada ou de cadeia leve, uma região de estrutura (por exemplo, FR1, FR2, FR3, FR4 ou fragmento desta, outro compreendendo opcionalmente pelo menos uma substituição, inserção ou deleção), uma região constante de cadeia pesada ou cadeia leve, (por exemplo, compreendendo pelo menos uma Ch1 , dobradiçal, dobradiça2, dobradiça3, dobradiça4, CH2, ou CH3 ou fragmento destes, outra compreendendo opcionalmente pelo menos uma substituição, inserção ou dele15 ção), ou qualquer porção desta, que pode ser incorporada em um anticorpo da presente invenção. Um anticorpo da invenção pode incluir ou derivar de qualquer mamífero, como mas não limitado a, um humano, um camundongo, um coelho, um rato, um roedor, um primata, ou qualquer combinação destes, e similares.

Os anticorpos isolados da presente invenção compreendem as sequências de aminoácido de anticorpo descritas aqui codificadas por qualquer polinucleotídeo adequado, ou qualquer anticorpo isolado ou preparado. Preferivelmente, o anticorpo humano ou fragmento de ligação de antígeno IL-23p19 humano e, assim, parcial ou substancialmente neutraliza pelo me25 nos uma atividade biológica da proteína. Um anticorpo, ou porção ou variante especificada deste, que parcialmente ou de preferência substancialmente neutraliza pelo menos uma atividade biológica de pelo menos uma proteína de IL-23 ou fragmento, pode ligar a proteína ou fragmento e assim inibir as atividades mediadas através da ligação de IL-23 a um ou mais dos recepto30 res de IL-23 ou através de similares mecanismos dependentes ou mediados por IL-23. Como aqui usado, o termo anticorpo de neutralização refere-se a um anticorpo que pode inibir uma atividade dependente de IL-23 por cerca

de 20-120 %, preferivelmente por pelo menos cerca de 10, 20, 30, 40, 50,

55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 % ou mais dependendo do ensaio. A capacidade de um anticorpo de anti-IL23p19 para inibir uma atividade dependente de IL-23 é preferivelmente ava- liada por pelo menos um ensaio de proteína de IL-23 ou receptor adequado, como descrito aqui e/ou como conhecido na técnica. Um anticorpo humano

da invenção pode ser de qualquer classe (IgG, IgA, IgM, IgE, IgD, etc.) ou isótipo e pode compreender uma cadeia leve capa ou lambda. Em uma modalidade, o anticorpo humano compreende uma cadeia pesada de IgG ou 10 fragmento definido, por exemplo, pelo menos um de isótipos, lgG1, lgG2, igG3 ou igG4 (por exemplo, γ1, γ2, γ3, ou γ4). Anticorpos deste tipo podem ser preparados empregando um camundongo transgênico ou outro mamífero não-humano transgênico compreendendo pelo menos um transgene de cadeia leve humana (por exemplo, IgG, IgA, e IgM) como descrito aqui e/ou 15 como conhecido na técnica. Em outra modalidade, o anticorpo de anti-IL23p19 humano compreende uma cadeia pesada de lgG1 e uma cadeia leve de lgG1.

Pelo menos um anticorpo da invenção liga pelo menos um epitopo específico especificado para pelo menos uma proteína de IL-23p19,

subunidade, fragmento, porção ou qualquer combinação desta. Pelo menos um epitopo pode compreender pelo menos um região de ligação de anticorpo compreendendo pelo menos uma porção da proteína, cujo epitopo é preferivelmente compreendido de pelo menos uma porção externa ou citoplásmica extracelular, solúvel, hidrófila da proteína. Pelo menos um epitopo es25 pecificado pode compreender qualquer combinação de pelo menos uma seqüência de aminoácido de pelo menos 1-3 aminoácidos para a porção especificada inteira de aminoácidos contíguos de resíduos de aminoácido 93104 e 127-137 da SEQ ID NO: 1 (que contém a seqüência de sinal de 19 aminoácidos inicial para a subunidade de proteína de p19) (ou resíduos de aminoácido 74-85 e 108-118 da seqüência de p19 sem inclusão da seqüência de sinal), por exemplo, resíduos de aminoácido 93, 93-94, 93-95, 93-96,

97-99, 100-102, 127, 127-128, 128-129, etc. da SEQ ID NO: 1, etc. que in-

cluem qualquer porção ou combinações destas seqüências.

Em geral, o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno da presente invenção compreenderá uma região de ligação de antígeno compreendendo pelo menos uma região de determinação de complementaridade (CDR1, CDR2 e CDR3) ou variante de pelo menos uma região variável de cadeia pesada e pelo menos uma região de determinação de complementaridade (CDR1, CDR2 e CDR3) ou variante de pelo menos uma região variável de cadeia leve. Opcionalmente, as seqüências de CDR podem ser derivadas de seqüências de linhagem germinais humanas ou seqüências de linhagem germinal estritamente equiparadas. Por exemplo, as CDRs de uma biblioteca sintética derivada das CDRs de camundongo originais podem ser usadas. Estas CDRs podem ser formadas mediante incorporação de substituições conservadoras da seqüência de camundongo de original. Como um exemplo não-limitativo, a porção ou variante de ligação de anticorpo ou antígeno pode compreender pelo menos uma da CDR3 de cadeia pesada, por exemplo, selecionada da SEQ ID NOS: 6, 16, 26, e 36, e/ou uma CDR3 de cadeia leve, por exemplo, selecionada da SEQ ID NOS: 11, 21,31, e 41. Em uma modalidade particular, o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno pode ter uma região de ligação de antígeno compreendendo pelo menos uma porção de pelo menos uma CDR de cadeia pesada (isto é, CDR1, CDR2 e/ou CDR3) (por exemplo, aquelas descritas aqui). Em outra modalidade particular, a porção ou variante de ligação de anticorpo ou antígeno pode ter uma região de ligação de antígeno compreendendo pelo menos uma porção de pelo menos uma CDR de cadeia leve (isto é, CDR1, CDR2 e/ou CDR3) (por exemplo, aquelas descritas aqui).

Em uma modalidade preferida, a três CDRs de cadeia pesada e as três CDRs de cadeia leve do fragmento de ligação de anticorpo ou antígeno podem ser preparadas quimicamente unindo as várias porções (por exemplo, CDRs, estrutura) do anticorpo usando técnicas convencionais, preparando e expressando uma molécula de ácido nucléico (isto é, uma ou mais) que codifica o anticorpo usando técnicas convencionais de tecnologia de DNA recombinante ou usando qualquer outro método adequado.

O anticorpo de anti-IL-23p19 pode compreender peio menos um de uma região variável de cadeia pesada ou leve tendo uma seqüência de aminoácido definida. Por exemplo, em uma modalidade preferida, o anticorpo de anti-IL-23p19 compreende pelo menos um de pelo menos uma região 5 variável de cadeia pesada opcionalmente selecionada da SEQ ID NOS: 3,

13, 23, e 33 e/ou pelo menos uma região variável de cadeia leve opcional- mente selecionada da SEQ ID NOS: 8, 18, 28, e 38. Anticorpos que ligam a

IL-23p19 humano e que compreendem uma região variável de cadeia pesada ou leve definida pode ser preparados usando métodos adequados, como 10 exibição de fago (Katsube, Y., et al., IntJ Mol. Med, 1(5):863-868 (1998)) ou métodos que empregam animais transgênicos, como conhecido na técnica e/ou como descrito aqui. Por exemplo, um camundongo transgênico, compreendendo transgene de cadeia pesada de imunoglobulina humana funcionalmente rearranjado e um transgene compreendendo o DNA de um locus de cadeia leve de imunoglobulina humana pode sofrer rearranjo funcional, ser imunizado com IL-23 humana ou um fragmento desta para suscita a produção de anticorpos. Se desejado, as células produtoras de anticorpo podem ser isoladas e hibridomas ou outras células produtoras de anticorpo imortalizadas podem ser preparadas como descrito aqui e/ou como conheci-

do na técnica. Alternativamente, o anticorpo, porção especificada ou variante pode ser expressa usando o ácido nucléico de codificação ou porção deste em uma célula hospedeira adequada. CÓDIGOS DE AMINOÁCIDO

Os aminoácidos que compõem os anticorpos de anti-IL-23p19 da presente invenção são freqüentemente abreviados. As designações de aminoácido podem ser indicadas designando o aminoácido por seu código de uma letra, seu código de três letras, nome, ou três códons de nucleotídeo, como são bem-entendidos na técnica (vide Alberts, B., et al., Molecular Biology of the Cell, Terceira Ed., Garland Publication, Inc., Nova Iorque,

1994). Um anticorpo de anti-IL-23p19 da presente invenção pode incluir uma ou mais substituições, deleções ou adições de aminoácido, ou de mutações manipulação natural ou humana, como especificado aqui. Aminoácidos em

um anticorpo de anti-IL-23p19 da presente invenção que são essenciais para a função podem ser identificados por métodos conhecidos na técnica, como mutagênese dirigida ou mutagênese de varredura por alanina (por exemplo, Ausubel, supra, Capítulos 8, 15; Cunningham e Wells, Science 5 244:1081-1085 (1989)). O procedimento posterior introduz mutações de ala-

nina simples em cada resíduo na molécula. As moléculas mutantes resultantes são depois testadas para atividade biológica, como, mas não limitada a, pelo menos uma atividade de neutralização de IL-23. Sítios que são críticos para ligação de anticorpo podem também ser identificados por análise estru10 tural, como cristalização, ressonância magnética nuclear ou marcação de fotoafinidade (Smith, et al., J. Mol. Biol. 224:899-904 (1992) e de Vos, et al.,

Science 255:306-312 (1992)).

Anticorpos de anti-IL-23p19 da presente invenção podem incluir, mas não são limitados a, pelo menos uma porção, seqüência ou combina15 ção selecionada de 5 a todos os aminoácidos contíguos das seqüências de região variável da SEQ ID NOS: 8, 18, 28, e 38 e SEQ ID NOS: 3, 13, 23, e

33.

Variantes não-limitativas que podem intensificar ou manter pelo menos uma das atividades listadas incluem, mas não são limitadas a, qual-

quer um dos polipeptídeos acima, adicionalmente compreendendo pelo menos uma mutação que corresponde Pelo menos uma substituição nos resíduos variados entre as seqüências de aminoácido variantes descritas.

Um anticorpo de anti-IL-23p19 pode também opcionalmente compreender um polipeptídeo com uma seqüência de aminoácido que varia da seqüência da SEQ ID NOS: 3-6, 8-11,13-16, 18-21,23-26, 28-31,33-36, e 38-41 (por exemplo, uma ou mais substituições conservadoras das seqüéncias fornecidas aqui). Também, a presente invenção compreende variantes da seqüência de aminoácido de uma região variável de cadeia leve da SEQ ID NOS: 8, 18, 28, e 38 ou a seqüência de aminoácido de uma região variável de cadeia pesada da SEQ ID NOS: 3, 13, 23, e 33.

Como aqueles versados apreciarão, a presente invenção inclui pelo menos um anticorpo biologicamente ativo da presente invenção. Anti38 corpos biologicamente ativos têm uma atividade especifica de pelo menos %, 30 %, ou 40 %, e, preferivelmente, pelo menos 50 %, 60 %, ou 70 %, e, o mais preferivelmente, pelo menos 80 %, 90 %, ou 95 %-1000 % ou mais que do anticorpo nativo (não-sintético), endógeno ou relacionado e conheci- do. Métodos de ensaiar e quantificar as medidas de atividade enzimática e especificidade de substrato são bem-conhecidos àqueles versados na técni- ca.

Em outro aspecto, a invenção diz respeito aos anticorpos humanos e fragmentos de ligação de antígeno, como descritos aqui, que são mo10 dificados pela ligação covalente de uma porção orgânica. Tal modificação pode produzir um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno com propriedades farmacocinéticas melhoradas (por exemplo, meia-vida de soro in vivo aumentada). A porção orgânica pode ser um grupo polimérico hidrófilo linear ou ramificado, grupo ácido graxo, ou grupo éster de ácido graxo. Em 15 particular modalidades, o grupo polimérico hidrófilo pode ter um peso molecular de cerca de 800 a cerca de 120.000 Dáltons e pode ser um polialcano glicol (por exemplo, polietileno glicol (PEG), polipropileno glicol (PPG)), polímero de carboidrato, polímero de aminoácido ou polivinil pirolidona, e o grupo ácido graxo ou éster de ácido graxo pode compreender de cerca de

oito a cerca de quarenta átomos de carbono.

Os anticorpos modificados e fragmento de ligação de antígenos da invenção podem compreender uma ou mais porções orgânicas que são covalentemente ligadas, direta ou indiretamente, ao anticorpo. Cada porção orgânica que é ligada a um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno 25 da invenção pode independentemente ser um grupo polimérico hidrófilo, um grupo de ácido graxo ou um grupo éster de ácido graxo. Como aqui usado, o termo ácido graxo abrange ácidos monocarboxílicos e ácidos dicarboxílícos. Um grupo polimérico hidrófilo, como o termo é aqui usado, refere-se a um polímero orgânico que é mais solúvel em água que em octano. Por e30 xemplo, polilisina é mais solúvel em água que em octano. Desse modo, um anticorpo modificado pela ligação covalente de polilisina é abrangido pela invenção. Polímeros hidrófilos adequados para modificar anticorpos da in39 venção podem ser lineares ου ramificados e podem inciuir, por exemplo, polialcano glicóis (por exemplo, PEG, monometóxi-polietileno glicol (mPEG), PPG e similares), carboidratos (por exemplo, dextrano, celulose, oligossacarídeos, polissacarídeos e similares), polímeros de aminoácidos hidrófilos 5 (por exemplo, polilisina, poliarginina, poliaspartato e similares), óxidos de polialcano (por exemplo, óxido de polietileno, óxido de polipropileno e simila-

res) e polivinil pirolidona. Preferivelmente, o polímero hidrófilo que modifica o anticorpo da invenção tem um peso molecular de cerca de 800 a cerca de 150.000 Dáltons como uma entidade molecular separada. Por exemplo, 10 PEG_5Ooo θ PEG20.000, em que a subscrição é o peso molecular médio do polímero em Dáltons, podem ser usados. O grupo polimérico hidrófilo pode ser

substituído com um a cerca de seis grupos alquila, ácido graxo ou éster de ácido graxo. Polímeros hidrófilos que são substituídos com um grupo ácido graxo ou éster de ácido graxo podem ser preparados empregando métodos 15 adequados. Por exemplo, um polímero compreendendo um grupo amina pode ser acoplado a um carboxilato do ácido graxo ou éster de ácido graxo, e um carboxilato ativado (por exemplo, ativado com N, N-carbonil diimidazol) em um ácido graxo ou éster de ácido graxo pode ser acoplado a um grupo hidroxila em um polímero.

Ácidos graxos e ésteres de ácido graxo adequados para modificar os anticorpos da invenção podem ser saturados ou conter uma ou mais unidades de insaturação. Ácidos graxos que são adequados para modificar anticorpos da invenção incluem, por exemplo, n-dodecanoato (C12, laurato), n-tetradecanoato (C14, miristato), n-octadecanoato (C₁₈, estearato), n-eicosa25 noato (C20. araquidato), n-docosanoato (C22, beenato), n-triacontanoato (C₃o), n-tetracontanoato (C40), cis-A9-octadecanoato (C₁₅, oleato), todo cisΔ5,8,11,14-eicosatetraenoato (C₂o> araquidonato), ácido octanodióico, ácido tetradecanodióico, ácido octadecanodióico, ácido docosanodióico, e similares. Ésteres de ácido graxo adequados incluem mono-ésteres de ácidos di30 carboxílicos compreendendo um grupo alquila inferior linear ou ramificado. O grupo alquila inferior pode compreender de um a cerca de doze, preferivelmente, um a cerca de seis, átomos de carbono.

Os anticorpos humanos modificados e fragmentos de ligaçao de antígeno podem ser preparados usando métodos adequados, como por reação com um ou mais agentes modificadores. Um agente modificador como o termo é aqui usado, refere-se a um grupo orgânico adequado (por exem5 pio, polímero hidrófilo, um ácido graxo, um éster de ácido graxo) que compreende um grupo ativador. Um grupo ativador é uma porção química ou grupo funcional que pode, sob condições apropriadas, reagir com um segundo grupo químico assim formando uma ligação covalente entre o agente

modificador e o segundo grupo químico. Por exemplo, grupos ativadores reativos com amina incluem grupos eletrofílicos, como tosilato, mesilato, halo (cloro, bromo, flúor, iodo), ésteres de N-hidroxissuccinimidila (NHS), e similares. Grupos ativadores que podem reagir com tióis incluem, por exemplo, maleimida, iodoacetila, acrilolila, dissulfetos de piridila, tiol de ácido 5tiol-2-nitrobenzóico (TNB-tiol), e similares. Um aideído grupo funcional pode 15 ser acoplado às moléculas contendo amina ou hidrazida, e um grupo azida pode reagir com um grupo fósforo trivalente para formar ligações de fosforamidato ou de fosforimida. Métodos adequados para introduzir grupos de ativação nas moléculas são conhecidos na técnica (vide por exemplo, Hermanson, G. T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA

(1996)). Um grupo de ativação pode ser diretamente ligado ao grupo orgânico (por exemplo, polímero hidrófilo, ácido graxo, éster de ácido graxo), ou através de uma porção ligante, por exemplo, um grupo C1-C12 divalente em que um ou mais átomos de carbono podem ser substituídos por um heteroátomo, como oxigênio, nitrogênio ou enxofre. Porções ligantes adequadas incluem, por exemplo, tetraetileno glicol, -(CH₂)3-, -NH-(CH2)e-NH-, -(CH₂)2NH- e -CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-CH-NH-. Agentes modificadores compreendendo uma porção ligadora podem ser produzidos, por exemplo, reagindo um mono-Boc-alquildiamina (por exemplo, mono-Bocetilenodiamina, mono-Boc-diaminoexano) com um ácido graxo na presença de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC) para formar uma ligação de amida entre a amina livre e o carboxilato de ácido graxo. O grupo de proteção de Boc pode ser removido do produto através de tratamento com ácido trifluoroacético (TFA) para expor uma amina primária que pode ser acoplada a outro carboxilato, como descrito, ou pode ser reagido com anidrido maléico e o produto resultante ciclizado para produzir um derivado de maleimido ativado do ácido graxo. (Vide, por exemplo, Thompson, et al., 5 WO 92/16221, os ensinamentos inteiros deste são incorporados aqui por

referência.)

Os anticorpos modificados da invenção podem ser produzidos reagindo um anticorpo humano ou fragmento de ligação de antígeno com um agente modificador. Por exemplo, as porções orgânicas podem ser liga10 das ao anticorpo em uma maneira não específica ao sítio empregando um agente modificador reativo com amina, por exemplo, um éster de NHS de PEG. Anticorpos humanos modificados ou fragmentos de ligação de antígeno podem também ser preparados reduzindo as ligações de dissulfeto (por exemplo, ligações de dissulfeto de intracadeia) de um anticorpo ou fragmen15 to de ligação de antígeno. O anticorpo reduzido ou fragmento de ligação de antígeno pode depois ser reagido com um agente modificador reativo com tiol para produzir o anticorpo modificado da invenção. Anticorpos humanos modificados e fragmentos de ligação de antígeno compreendendo uma porção orgânica que está ligada aos sítios específicos de um anticorpo da pre-

sente invenção podem ser preparados usando métodos adequados, como proteólise reversa (Fisch et al., Bioconjugate Chem., 3:147-153 (1992); Werlen et al., Bioconjugate Chem., 5:411-417 (1994); Kumaran et al., Protein

Sci. 6(10):2233-2241 (1997); Itoh et al., Bioorg. Chem., 24(1): 59-68 (1996);

Capellas et al., Biotechnol. Bioeng., 56(4):456-463 (1997)), e os métodos descritos em Hermanson, G. T., Bioconjugate Techniques, Academic Press:

fico para tais anticorpos da invenção. Um anticorpo anti-id é um anticorpo que reconhece determinantes únicos em geral associados à região de ligaSan Diego, CA (1996).

ANTICORPOS DE ANTIIDIOTIPO PARA COMPOSIÇÕES DE ANTICORPO

DE ANTI-IL-23p19

Além dos anticorpos de anti-IL-23p19 monoclonais, a presente invenção é também direcionada a um anticorpo antiidiotípico (anti-id) especí42 ção de antígeno de outro anticorpo. O anti-id pode ser preparado imunizando um animal da mesma espécie e tipo genético (por exemplo, cepa de camundongo) como a fonte do anticorpo Id com o anticorpo ou uma CDR contendo região deste. O animal imunizado reconhecerá e responderá aos de5 terminantes idiotípicos do anticorpo imunizante e produzirá um anticorpo anti-id. O anticorpo anti-id pode também ser usado como um imunógeno para induzir uma resposta imune em ainda outro animal, produzindo um as-

sim-chamado anticorpo anti-anti-id.

A presente invenção também fornece pelo menos uma composi10 ção de anticorpo anti-IL-23p19 compreendendo pelo menos um, pelo menos

dois, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos seis ou mais anticorpos de anti-IL-23p19 deste, como descrito aqui e/ou como conhecido na técnica que é fornecida em uma composição de ocorrência não-natural, mistura ou forma. Tais composições compreendem composi15 ções de ocorrência não-natural compreendendo pelo menos uma ou duas variantes de comprimento total, C- e/ou N-terminalmente excluídas, domínios, fragmentos, ou variantes especificadas, da seqüência de aminoácido anticorpo anti-IL-23p19 selecionada do grupo que consiste em 70-100 % dos aminoácidos contíguos da SEQ ID NOS: 3-6, 8-11, 13-16, 18-21,23-26, 20 28-31, 33-36, e 38-41, ou fragmentos, domínios ou variantes especificados destas. Composições de anticorpo anti-IL-23p19 preferidas incluem pelo menos um ou dois fragmentos de comprimento total, domínios ou variantes de pelo menos uma CDR ou porções contendo LBP da seqüência de anticorpo anti-IL-23p19 descrita aqui, por exemplo, 70-100% da SEQ ID NOS: 25 3-6, 8-11,13-16, 18-21, 23-26, 28-31,33-36, e 38-41, ou fragmentos, domínios ou variantes especificados destas. Outras composições preferidas compreendem, por exemplo, 40-99% de pelo menos um de 70-100% da

SEQ ID NOS: 3-6, 8-11, 13-16, 18-21, 23-26, 28-31, 33-36, e 38-41, ou fragmentos, domínios ou variantes especificados destas. Tais porcentagens de composição são em peso, volume, concentração, molaridade, ou molalidade como soluções líquidas ou secas, misturas, suspensão, emulsões, partículas, pó, ou colóides, como conhecido na técnica ou como descrito aqui.

COMPOSIÇÕES DE ANTICORPO COMPREENDENDO OUTROS INGREDIENTES TERAPEUTICAMENTE ATIVOS

As composições de anticorpo da invenção podem opcionalmente também compreender uma quantidade eficaz de pelo menos um compos- to ou proteína selecionada de pelo menos um de um fármaco antiinfeccioso, um fármaco do sistema cardiovascular (CV), um fármaco do sistema nervoso central (CNS), um fármaco do sistema nervoso autonômico (ANS), um fármaco do trato respiratório, um fármaco do trato gastrointestinal (GI), um fármaco hormonal, um fármaco para equilíbrio de fluido ou de eletrólito, um 10 fármaco hematológico, um antineoplástico, um fármaco de imunomodulação, um fármaco oftáimico, ótico ou nasal, um fármaco tópico, um fármaco nutricional ou outros. Tais fármacos são bem-conhecidos na técnica, incluindo formulações, indicações, doseamento e administração para cada um apresentado aqui (vide, por exemplo, Nursing 2001 Handbook of Drugs, 21^a 15 edição, Springhouse Corp., Springhouse, PA, 2001; Health Professional’s

Drug Guide 2001, ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle River, NJ; Pharmacotherapy Handbook, Wells et al., ed., Appleton & Lange, Stamford, CT, cada um completamente incorporado aqui por referência).

O fármaco antiinfeccioso pode ser pelo menos um selecionado de amebicidas ou pelo menos um antíprotozoários, anti-helmínticos, antifúngicos, antimaláricos, antituberculósicos ou pelo menos um antilepróticos, aminoglicosidos, penicilinas, cefalosporinas, tetraciclinas, sulfonamidas, fluoroquinolonas, antivirais, antiinfecciosos de macrolida, e antiinfecciosos di25 versos. O fármaco de CV pode ser pelo menos um selecionado de inotrópicos, antiarrítmicos, antiangínais, anti-hipertensivos, antilipêmicos, e fármacos cardiovasculares diversos. O fármaco de CNS pode ser pelo menos um selecionado de analgésicos não-narcóticos ou pelo menos um selecionado de antipiréticos, fármacos antiinflamatórios não-esteroidais, narcótico ou pe30 Io menos um analgésico opióide, hipnóticos sedativos, anticonvulsivos, antidepressivos, fármacos antianxiedade, antipsicóticos, estimulantes do sistema nervoso central, antiparquinsonianos, e fármacos diversos do sistema

nervoso central. O fármaco de ANS pode ser pelo menos um selecionado de colinérgicos (parassimpatomiméticos), anticolinérgicos, adrenérgicos (simpatomiméticos), bloqueadores adrenérgicos (simpatolíticos), relaxantes dos músculos esqueléticos, e bloqueadores neuromusculares. O fármaco do tra5 to respiratório pode ser pelo menos um selecionado de anti-histamínicos, broncodilatores, expectorantes ou pelo menos um antitussivo, e fármacos

respiratórios diversos. O fármaco do trato GI pode ser pelo menos um selecionado de antiácidos ou pelo menos um adsorvente ou pelo menos um antiflatulento, enzima digestiva ou pelo menos um solubilizante de cálculo bili10 ar, antidiarréicos, laxantes, antieméticos, e fármacos antiúlcera. O fármaco

hormonal pode ser pelo menos um selecionado de corticosteróides, andrógeno ou pelo menos um esteróide anabólico, estrogênio ou pelo menos uma progestina, gonadotropina, fármaco antidiabético ou pelo menos um glucagon, hormônio da tireóide, antagonista de hormônio da tireóide, hormônio 15 pituitário, e fármaco semelhante à paratireóide. O fármaco para fluido e equilíbrio de eletrólitos pode ser pelo menos um selecionado de diuréticos, eletrólitos ou pelo menos uma solução de substituição, acidificante ou pelo menos um alcalinizante. O fármaco hematológico pode ser pelo menos um selecionado de hematínicos, anticoagulantes, derivados de sangue, e enzi20 mas trombolíticas. Os antineoplásticos pode ser pelo menos um selecionado de fármacos de alquilação, antimetabolitos, antineoplásticos antibióticos, antineoplásticos que altera o equilíbrio hormonal, e antineoplásticos diversos. O fármaco de imunomodulação pode ser pelo menos um selecionado de imunossupressores, vacinas ou pelo menos um toxóide, antitoxina ou midriáticos, vasoconstritores oftálmicos, oftálmicos diversos, óticos, e fármacos nasais. O fármaco tópico pode ser pelo menos um selecionado de anti30 infecciosos locais, escabicidas ou pelo menos um pediculicida ou corticosteróide tópico. O fármaco nutricional pode ser pelo menos um selecionado de vitaminas, minerais, ou calóricos. Vide, por exemplo, conteúdos de Nursing pelo menos um antiveneno, soro imune, e modificador de resposta biológica.

Os fármacos oftálmicos, óticos, e nasais podem ser pelo menos um selecionado de antiinfecciosos oftálmicos, antiinflamatórios oftálmicos, mióticos,

2001 Drug Handbook, supra.

Pelo menos um amebicida ou antiprotozoário pode ser pelo menos um selecionado de atovaquona, cloridrato de cloroquina, fosfato de cloroquina, metronidazol, cloridrato de metronidazol, e isetionato de pentamidi5 na. Pelo menos um anti-helmíntico pode ser pelo menos um selecionado de mebendazol, pamoato de pirantel, e tiabendazol. Pelo menos um antifúngico pode ser pelo menos um selecionado de anfotericina B, complexo de anfote-

ricina B - sulfato de colesterila, complexo de anfotericina B-lipídio, anfotericina B lipossomal, fluconazol, flucitosina, griseofulvina de microtamanho, gri10 seofulvina de ultramicrotamanho, itraconazol, cetoconazol, nistatina, e clori-

drato de terbinafina. Pelo menos um antimalárico pode ser pelo menos um selecionado de cloridrato de cloroquina, fosfato de cloroquina, doxiciclina, sulfato de hidroxicloroquina, cloridrato de mefloquina, fosfato de primaquina, pirimetamina, e pirimetamina com sulfadoxina. Pelo menos um antitubercu15 lótico ou antileprótico pode ser pelo menos um selecionado de clofazimina, ciclosserina, dapsona, cloridrato de etambutol, isoniazid, pirazinamida, rifabutina, rifampina, rifapentina, e sulfato de estreptomicina. Pelo menos uma aminoglicosida pode ser pelo menos uma selecionada de sulfato de amicacina, sulfato de gentamicina, sulfato de neomicina, sulfato de estreptomicina, 20 e sulfato de tobramicina. Pelo menos uma penicilina pode ser pelo menos uma selecionada de amoxcilina/clavulanato de potássio, triidrato de amoxicilina, ampicilina, ampicilina sódica, triidrato de ampicilina, ampicilina sódica/sulbactama de sódio, cloxacilina sódica, dicloxacilina sódica, mezlocilina sódica, nafcilina sódica, oxacilina sódica, penicilina G de benzatina, penicili25 na G de potássio, penicilina G de procaína, penicilina G sódica, penicilina V de potássio, piperacilina sódica, piperacilina sódica/tazobactama de sódio, ticarcilina dissódica, e ticarcilina de dissódio/clavulanato de potássio. Pelo menos uma cefalosporina pode ser pelo menos uma selecionada de cefaclor, cefadroxil, cefazolina sódica, cefdinir, cloridrato de cefepima, cefixima, 30 cefmetazol sódico, cefonicid sódico, cefoperazona sódica, cefotaxima sódica, cefotetan dissódico, cefoxitina sódica, proxetil de cefpodoxima, cefprozil, ceftazidima, ceftibuteno, ceftizoxima sódica, ceftriaxona sódica, axetil de

cefuroxima, cefuroxima sódica, cloridrato de cefalexina, monoidrato de cefalexina, cefradina, e loracarbef. Pelo menos uma tetracíclina pode ser pelo menos uma selecionada de cloridrato de demeclociclina, cálcio de doxiciclina, hiclato de doxiciclina, cloridrato de doxiciclina, monoidrato de doxiciclina, 5 cloridrato de minociclina, e cloridrato de tetraciclina. Pelo menos uma sulfonamida pode ser pelo menos uma selecionada de co-trimoxazol, sulfadiazina, sulfametoxazol, sulfisoxazol, e sulfisoxazol acetil. Pelo menos uma fluo-

roquinolona pode ser pelo menos uma selecionada de mesilato de alatrofloxacina, ciprofloxacina, enoxacina, levofloxacina, cloridrato de lomefloxacina, 10 ácido nalidíxico, norfloxacina, ofloxacina, sparfloxacina, e mesilato de trovafioxacina. Pelo menos uma fluoroquinolona pode ser pelo menos uma selecionada de mesilato de alatrofloxacina, ciprofloxacina, enoxacina, levofloxacina, cloridrato de lomefloxacina, ácido nalidíxico, norfloxacina, ofloxacina, esparfloxacina, e mesilato de trovafloxacina. Pelo menos um antiviral pode ser pelo menos um selecionado de sulfato de abacavir, aciclovir sódico, cloridrato de amantadina, amprenavir, cidofovir, mesilato de delavirdina, didanosina, efavirenz, fanciclovir, fomivirsen sódico, foscarnet sódico, ganciclovir, sulfato de indinavir, lamivudina, lamivudina/zidovudina, mesilato de nelfinavir, nevirapina, fosfato de oseltamivir, ribavirin, cloridrato de rimantadina,

ritonavir, saquinavir, mesilato de saquinavir, estavudina, cloridrato de valaciclovir, zalcitabina, zanamivir, e zidovudina. Pelo menos um antiinfeccioso de macrolina pode ser pelo menos um selecionado de azitromicina, claritromicina, diritromicina, base de eritromicina, estolato de eritromicina, etilsuccinato de eritromicina, lactobionato de eritromicina, e estearato de eritromicina. Pe25 lo menos um antiinfeccioso diverso pode ser pelo menos um selecionado de aztreonam, bacitracina, sucinato de sódio de cloranfenicol, cloridrato de clindamicina, cloridrato de palmitato de clindamicina, fosfato de clindamicina, imipenem e cilastatina sódica, meropenem, macrocristais de nitrofurantoína, microcristais de nitrofurantoína, quinupristina/dalfopristina, cloridrato de es30 pectinomicina, trimetoprim, e cloridrato de vancomicina. (Vide, por exemplo, págs. 24-214 de Nursing 2001 Drug Handbook.)

Pelo menos um inotrópico pode ser pelo menos um selecionado

de lactato de anrinona. digoxina. e lactato de milrinona. peio menos um antiarrítmico pode ser pelo menos um selecionado de adenosina, cloridrato de amiodarona, sulfato de atropina, tosilato de bretílio, cloridrato de diltiazem, disopiramida, fosfato de disopiramida, cloridrato de esmolol, acetato de fle5 cainida, fumarato de ibutilida, cloridrato de lidocaína, cloridrato de mexiletina, cloridrato de moricizina, fenitoína, fenitoína sódica, cloridrato de procainamida, cloridrato de propafenona, cloridrato de propranolol, bissulfato de

quinidina, gluconato de quinidina, poligalacturonato de quinidina, sulfato de quinidina, sotalol, cloridrato de tocainida, e cloridrato de verapamil. Pelo me10 nos um antianginat pode ser pelo menos um selecionado de besilato de amiodipidina, nitrito de amila, cloridrato de bepridil, cloridrato de diltiazem, dinitrato de isossorbida, mononitrato de isossorbida, nadolol, cloridrato de

nicardipina, nifedipina, nitroglicerina, cloridrato de propranolol, verapamil, e cloridrato de verapamil. Pelo menos um anti-hipertensivo pode ser pelo me15 nos um selecionado de cloridrato de acebutolol, besilato de amlodipina, atenolol, cloridrato de benazepril, cloridrato de betaxolol, fumarato de bisoprolol, cilexetil de candesartan, captopril, cloridrato de carteolol, carvedilol, clonidina, cloridrato de clonidina, diazóxido, cloridrato de diltiazem, mesilato de doxazosina, enalaprilat, maleato de enalapril, mesilato de eprosartan, felodipi20 na, mesilato de fenoldopam, fosinopril sódico, acetato de guanabenz, sulfato de guanadrel, cloridrato de guanfacina, cloridrato de hidralazina, irbesartan, isradipina, cloridrato de labetalol, lisinopril, potássio de losartan, metildopa, cloridrato de metildopato, succinato de metoprolol, tartarato de metoprolol, minoxidil, cloridrato de moexipril, nadolol, cloridrato de nicardipina, nifedipi25 na, nisoldipina, nitroprussida sódica, sulfato de penbutolol, erbumina de perindopril, mesilato de fentolamína, pindolol, cloridrato de prazosina, cloridrato de propranolol, cloridrato de quinapril, ramipril, telmisartan, cloridrato de terazosina, maleato de timolol, trandolapril, valsartan, e cloridrato de verapamil. Pelo menos um antilrpêmico pode ser pelo menos um selecionado de 30 atorvastatina de cálcio, cerivastatina sódica, colestiramina, cloridrato de colestípol, fenofibrato (micronized), fluvastatina sódica, genfibrozil, lovastatina, niacina, pravastatina sódica, e sinvastatina. Pelo menos um fármaco de CV

diverso pode ser pelo menos um selecionado de abciximab, aiprostadii, cioridrato de arbutamina, cilostazol, bissulfato de clopidogrel, dipiridamol, eptifibatida, cloridrato de midodrina, pentoxifilina, cloridrato de ticlopidina, e cloridrato de tirofiban. (Vide, por exemplo, págs. 215-336 de Nursing 2001 Drug

Handbook.)

Pelo menos um analgésico de não-narcótico ou antipirético pode ser pelo menos um selecionado de acetaminofeno, aspirina, trisalicilato de magnésio de colina, diflunisal, e salicilato de magnésio. Pelo menos um fármaco antiinflamatório não-esteroidal pode ser pelo menos um selecionado 10 de celecoxib, diclofenaco de potássio, diclofenaco sódico, etodolaco, fenoproíeno de cálcio, flurbiprofeno, ibuprofeno, indometacina, trirdrato de sódio de indometacina, cetoprofeno, trometamina de cetorolaco, nabumetona, naproxeno, naproxeno sódico, oxaprozina, piroxicam, rofecoxib, e sulindaco. Pelo menos um narcótico ou analgésico de opióide pode ser pelo menos um selecionado de cloridrato de alfentanil, cloridrato de buprenorfina, tartarato de butorfanol, fosfato de codeína, sulfato de codeína, citrato de fentanila, sistema transdérmico de fentanila, fentanila transmucosal, cloridrato de hidromorfona, cloridrato de meperidina, cloridrato de metadona, cloridrato de morfina, sulfato de morfina, tartarato de morfina, cloridrato de nalbufina, clo-

ridrato de oxicodona, pectinato de oxicodona, cloridrato de oximorfona, cloridrato de pentazocina, cloridrato de pentazocina e cloridrato de naloxona, lactato de pentazocina, cloridrato de propoxifeno, napsilato de propoxifeno, cloridrato de remifentanil, citrato de sufentanil, e cloridrato de tramadol. Pelo menos um sedativo-hipnótico pode ser pelo menos um selecionado de hi25 drato de cloral, estazolam, cloridrato de flurazepam, pentobarbital, pentobarbital sódico, fenobarbital sódico, secobarbital sódico, temazepam, triazolam, zaleplon, e tartarato de zolpidem. Pelo menos um anticonvulsivo pode ser pelo menos um selecionado de acetazolamida sódica, carbamazepina, clonazepam, clorazepato dipotássio, diazepam, divalproex sódico, etosu30 ximda, fosfenitoína sódica, gabapentina, lamotrigina, sulfato de magnésio, fenobarbital, fenobarbital sódico, fenitoína, fenitoína sódica, fenitoína sódica (estendida), primidona, cloridrato de tíagabina, topiramato, valproato sódico,

e ácido valpróico. Pelo menos um antidepressivo pode ser pelo menos um selecionado de cloridrato de amitriptílina, pamoato de amitriptilina, amoxapina, cloridrato de bupropion, hidrobrometo de citalopram, cloridrato de clomipramina, cloridrato de desipramina, cloridrato de doxepina, cloridrato de flu- oxetina, cloridrato de imipramina, pamoato de imipramina, mirtazapina, cloridrato de nefazodona, cloridrato de nortriptilina, cloridrato de paroxetina, sulfato de fenolzina, cloridrato de sertralina, sulfato de tranilcipromina, maleato de trimipramina, e cloridrato de venlafaxina. Pelo menos um fármaco de antianxiedade pode ser pelo menos um selecionado de alprazolam, cloridrato 10 de buspirona, clordiazepóxido, cloridrato de clordiazepóxido, clorazepato de dipotássio, diazepam, cloridrato de doxepina, embonato de hidroxizina, cloridrato de hidroxizina, pamoato de hidroxizina, lorazepam, mefrobamato, cloridrato de midazolam, e oxazepam. Pelo menos um fármaco antipsicótico pode ser pelo menos um selecionado de cloridrato de clorpromazina, cloza15 pina, decanoato de flufenazina, enantato de fluefenazina, cloridrato de flufe-

nazina, haloperidol, decanoato de haloperidol, lactato de haloperidol, cloridrato de loxapina, succinato de loxapina, besilato de mesoridazina, cloridrato de molindona, olanzapina, perfenazina, pimozida, proclorperazína, fumarato de quetiapina, risperidona, cloridrato de tioridazina, tiotixeno, cloridrato de 20 tiotixeno, e cloridrato de trifluoperazina. Pelo menos um estimulante do sistema nervoso central pode ser pelo menos um selecionado de sulfato de anfetamina, cafeína, sulfato de dextroanfetamina, cloridrato de doxapram, cloridrato de metanfetamina, cloridrato de metilfenidato, modafinil, pemolina, e cloridrato de fentermina. Pelo menos um antiparkinsoniano pode ser pelo 25 menos um selecionado de cloridrato de amantadina, mesílato de benztropina, cloridrato de biperiden, lactato de biperiden, mesilato de bromocriptina, carbidopa-levodopa, entacapona, levodopa, mesilato de pergolida, cloridrato de pramipexol, cloridrato de ropinirol, cloridrato de selegilina, tolcapona, e cloridrato de triexifenidila. Pelo menos um fármaco do sistema nervoso cen30 trai diverso pode ser pelo menos um selecionado de cloridrato de bupropion, cloridrato de donepezil, droperidol, maleato de fluvoxamina, carbonato de lítio, citrato de lítio, cloridrato de naratriptan, polacrilex de nicotina, sistema

transdérmico de nicotina, propofol, benzoato de rizatriptan, monoidrato de cloridrato de sibutramina, succinato de sumatriptan, cloridrato de tacrina, e zolmitriptan. (Vide, por exemplo, págs, 337-530 de Nursing 2001 Drug

Handbook.)

Pelo menos um colinérgico (por exemplo, parassimatomimético) pode ser pelo menos um selecionado de cloreto de betanocol, cloreto de edrofônio, brometo de neostígmina, metilsulfato de neostigmina, salicilato de

fisostigmina, e brometo de piridostigmina. Pelo menos um anticolinérgico pode ser pelo menos um selecionado de sulfato de atropina, cloridrato de 10 diciclomina, glicopirrolato, hiosciamina, sulfato de hiosciamina, brometo de propantelina, escopolamina, butilbrometo de escopolamina, e hidrobrometo de escopolamina. Pelo menos um adrenérgico (simpatomiméticos) pode ser pelo menos um selecionado de cloridrato de dobutamina, cloridrato de dopamina, bitartarato de metaraminol, bitartarato de norepinefrina, cloridrato 15 de fenilefrina, cloridrato de pseudoefedrina, e sulfato de pseudoefedrina.

Pelo menos um bloqueador adrenérgico (simpatolítico) pode ser pelo menos um selecionado de mesilato de diidroergotamina, tartarato de ergotamina, maleato de metisergida, e cloridrato de propranolol. Pelo menos um relaxan-

te muscular esquelético pode ser pelo menos um selecionado de baclofeno, carisoprodol, clorzoxazona, cloridrato de ciclobenzaprina, dantroleno sódico, metocarbamol, e cloridrato de tizanidina. Pelo menos um bloqueador neuromuscular pode ser pelo menos um selecionado de besilato de atracúrio, besilato de cisatracúrio, cloreto de doxacúrío, cloreto de mivacúrio, brometo de pancurônio, brometo de pipecurônio, brometo de rapacurônio, brometo de rocurônio, cloreto de succinilcolina, cloreto de tubocurarina, e brometo de vecurônio. (Vide, por exemplo, págs. 531-84 de Nursing 2001 Drug Handbook.)

Pelo menos um anti-histamínico pode ser pelo menos um selecionado de maleato de bronfeniramina, cloridrato de cetirizina, maleato de clorfeniramina, fumarato de clemastina, cloridrato de ciproeptadina, cloridrato de difenidramina, cloridrato de fexofenadina, loratadina, cloridrato de prometazina, teoclato de prometazina, e cloridrato de triprolidina. Pelo menos

um broncodil atado r pode ser pelo menos um selecionado de aibuteroi, sulfato de aibuteroi, aminofilina, sulfato de atropina, sulfato de efedrina, epinefrina, bitartarato de epinefrina, cloridrato de epinefrina, brometo de ipratrópio, isoproterenol, cloridrato de isoproterenol, sulfato de isoproterenol, cloridrato 5 de levalbuterol, sulfato de metaproterenol, oxtrifilina, acetato de pirbuterol, xinafoato de salmeterol, sulfato de terbutalina, e teofilina. Pelo menos um expectorante ou antitussivo pode ser pelo menos um selecionado de benzo-

natato, fosfato de codeína, sulfato de codeína, hidrobrometo de dextrametorfano, cloridrato de difenidramina, guaifenosina, e cloridrato de hidromorfona.

Pelo menos um fármaco respiratório diverso pode ser pelo menos um selecionado de acetilcisteína, dipropionato de beclometasona, beractant, budesonida, calfactant, cromolina sódica, dornase alfa, epoprostenol sódico, flunisolida, propionato de fluticasona, montelukast sódico, nedocromil sódico, palivizumab, acetonida de triancinolona, zafirlukast, e zileuton. (Vide, por exemplo, págs. 585-642 de Nursing 2001 Drug Handbook.)

Pelo menos um antiácido, adsorvente, ou antiflatulento pode ser pelo menos um selecionado de carbonato de alumínio, hidróxido de alumí-

nio, carbonato de cálcio, magaldrato, hidróxido de magnésio, óxido de magnésio, simeticona, e bicarbonato de sódio. Pelo menos uma enzima digesti20 va ou solubilizante de cálculo biliar pode ser pelo menos um selecionado de pancreatina, pancrelipase, e ursodiol. Pelo menos um antidiarréico pode ser pelo menos um selecionado de atapulgita, subsalicilato de bismuto, policarbofil de cálcio, cloridrato de difenoxilato e sulfato de atropina, loperamida, acetato de octreotida, tintura de ópio, e tincure de ópio (canforado). Pelo 25 menos um laxante pode ser pelo menos um selecionado de bisocodil, policarbofil de cálcio, extrado fluido de casca sagrada aromático, extrato fluido de casca sagrada, óleo de rícino, docusato cálcio, docusato sódico, glicerina, lactulose, citrato de magnésio, hidróxido de magnésio, sulfato de magnésio, metilcelulose, óleo mineral, polietileno glicol ou solução de eletrólito, 30 psílio, sene, e fosfato de sódio. Pelo menos um antiemético pode ser pelo menos um selecionado de cloridrato de clorpromazina, dimenidrinato, mesilato de dolasetron, dronabinol, cloridrato de granisetron, cloridrato de mecli-

zina, cloridrato de metocloproamida, cloridrato de ondansetron, perfenazina, proclorperazina, edisilato de proclorperazina, maleato de proclorperazina, cloridrato de prometazina, escopolamina, maleato de tietilperazina, e cloridrato de trimetobenzamida. Pelo menos um fármaco de antiúlcera pode ser 5 pelo menos um selecionado de cimetidina, cloridrato de cimetidina, famotidi-

na, lansoprazol, misoprostol, nizatidina, omeprazol, rabeprozol sódico, citrato de bismuto de rantidina, cloridrato de ranitidina, e sucralfato. (Vide, por exemplo, págs. 643-95 de Nursing 2001 Drug Handbook.)

Pelo menos um corticosteróide pode ser pelo menos um sele10 cionado de betametasona, acetato de betametasona ou fosfato de sódio de betametasona, fosfato de sódio de betametasona, acetato de cortisona, dexametasona, acetato de dexametasona, fosfato de sódio de dexametasona, acetato de fludrocortisona, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, cipionato de hidrocortisona, fosfato de sódio de hidrocortisona, succinato de só15 dio de hidrocortisona, metilprednisolona, acetato de metilprednisolona, succinato de sódio de metilprednisolona, prednisolona, acetato de prednisolona, fosfato de sódio de prednisolona, tebutato de prednisolona, prednísona, triancinolona, acetonida de triancinolona, e diacetato de triancinolona. Pelo

norgestimato, estradiol de etinila e norgestrel, estradiol de etinila e noretindrona e acetato e fumarato ferroso, levonorgestrel, acetato de medroxipromenos um andrógeno ou esteróide anabólico pode ser pelo menos um sele20 cionado de danazol, fluoximasterona, metiltestosterona, decanoato de nandrolona, fenpropionato de nandrolona, testosterona, cipionato de testosterona, enantato de testosterona, propionato de testosterona, e sistema transdérmico de testosterona. Pelo menos um estrogênio ou progestina pode ser pelo menos um selecionado de estrogêníos estereficados, estradiol, cipiona25 to de estradiol, sistema transdérmico de estradiol/acetato de noretindrona, valerato de estradiol, estrogênios (conjugados), estropipato, estradiol de etinila, estradiol de etinila e desogestrel, estradiol de etinila e diacetato de etinodiol, estradiol de etinila e desogestrel, estradiol de etinila e diacetato de etinodiol, estradiol de etinila e levonorgestrel, estradiol de etinila e noretin30 drona, estradiol de etinila e acetato de noretindrona, estradiol de etinila e

gesterona, mestrano! e noretindron, noretindrona, acetato de noretindrona, norgestrel, e progesterona. Pelo menos uma gonadroptropina pode ser pelo menos uma selecionada de acetato de ganirelix, acetato de gonadorrelina, acetato de histrelina, e menotropinas. Pelo menos um antidíabético ou glu5 cagon pode ser pelo menos um selecionado de acarbose, clorpropamida, glimepirida, glipizida, glucagon, gliburida, insulinas, cloridrato de metformina, miglitol, cloridrato de pioglitazona, repaglinida, maleato de rosiglitazona, e

troglitazona. Pelo menos um hormônio da tireóíde pode ser pelo menos um selecionado de levotiroxina sódica, liotironina sódica, liotrix, e tireóide. Pelo 10 menos um antagonista de hormônio da tireóide pode ser pelo menos um selecionado de metimazol, iodeto de potássio, iodeto de potássio (solução saturada), propiltiouracila, iodo radioativo (¹³¹l iodeto de sódio), e solução de iodo forte. Pelo menos um hormônio pituitário pode ser pelo menos um selecionado de corticotropina, cosintropina, acetato de desmofressina, acetato 15 de leuprolida, corticotropina repositória, somatrem, somatropina, e vasopressina. Pelo menos um fármaco semelhante à paratireóide pode ser pelo menos um selecionado de calcifediol, calcitonina (humana), calcitonina (salmão), calcitriol, diidrotacisterol, e dissodioetidronato. (Vide, por exemplo, págs. 696-796 de Nursing 2001 Drug Handbook.)

Pelo menos um diurético pode ser pelo menos um selecionado de acetazolamida, acetazolamida sódica, cloridrato de amilorida, bumetaní da, clortalidona, etacrinato sódico, ácido etacrínico, furosemida, hidroclorotiazida, indapamida, manitol, metolazona, espironolactona, torsemida, triamtereno, e uréia. Pelo menos um eletrólito ou solução de substituição pode 25 ser pelo menos uma selecionada de acetato de cálcio, carbonato de cálcio, cloreto de cálcio, citrato de cálcio, glubionato de cálcio, gluceptato de cálcio, gluconato de cálcio, lactato de cálcio, fosfato de cálcio (dibásico), fosfato de cálcio (tribásico), dextrano (peso molecular alto), dextrano (peso molecular baixo), heta-amido, cloreto de magnésio, sulfato de magnésio, acetato de 30 potássio, bicarbonato de potássio, cloreto de potássio, gluconato de potássio, injeção de Ringer, injeção de Ringer (lactada), e cloreto de sódio. Pelo menos um acidificante ou alcalinizante pode ser pelo menos um selecionado

de bicarbonato de sódio, lactato de sódio, e trometamina. (Vide, por exem pio, págs. 797-833 de Nursing 2001 Drug Handbook.)

Pelo menos um hematínico pode ser pelo menos um selecionado de fumarato terroso, gluconato terroso, sulfato terroso, sulfato terroso

(secado), dextrano de ferro, sorbitol de ferro, complexo de polissacarídeoferro, complexo de sódio-gluconato férrico. Pelo menos um anticoagulante pode ser pelo menos um selecionado de ardeparina sódica, dalteparina sódica, danaparóide sódico, enoxaparina sódica, heparina de cálcio, heparina sódica, e warfarina sódica. Pelo menos um derivado de sangue pode ser 10 pelo menos um selecionado de albumina 5 %, albumína 25 %, fator antihemofílico, complexo coagulante de anti-inibidor, antitrombina III (humana), fator IX (humano), complexo de fator IX, e frações de proteína do plasma. Pelo menos uma enzima trombolítica pode ser pelo menos uma selecionada de alteplase, anistreplase, reteplase (recombinante), estreptocinase, e uro15 cinase. (Vide, por exemplo, págs. 834-66 de Nursing 2001 Drug Handbook.)

Pelo menos um fármaco de alquilação pode ser pelo menos um selecionado de bussulfano, carboplatina, carmustina, clorambucil, cisplatina, ciclofosfamida, ifosfamida, lomustina, cloridrato de mecloretamina, melfalan,

cloridrato de melfalan, estreptozocina, temozolomida, e tiotepa. Pelo menos um antimetabólito pode ser pelo menos um selecionado de capecitabina, cladribina, citarabina, floxuridina, fosfato de fludarabina, fluorouracil, hidroxiuréia, mercaptopurina, metotrexato, metotrexato sódico, e tioguanina. Pelo menos um antibiótico antineoplástico pode ser pelo menos um selecionado de sulfato de bleomicina, dactinomicina, lipossomal de citrato de daunorrubi25 cina, cloridrato de daunorrubicina, cloridrato de doxorrubicina, cloridrato de doxorrubicina lipossomal, cloridrato de epirrubicina, cloridrato de idarrubicina, mitomicina, pentostatina, plicamicina, e valrubicina. Pelo menos um antineoplástico que altera o equilíbrio hormonal pode ser pelo menos um selecionado de anastrozol, bicalutamida, fosfato de estramustina sódica, exe30 mestano, flutamida, acetato de goserrelina, letrozol, acetato de leuprolida, acetato de megestrol, nilutamida, citrato de tamoxifeno, testolactona, e citrato de toremifeno. Pelo menos um antineoplástico diverso pode ser pelo me-

cr nos um selecionado de asparaginase, bacillus Calmette-Guerin (BCG) (intravesical viva), dacarbazina, docetaxel, etoposida, fosfato de etoposida, cloridrato de gencitabina, cloridrato de irinotecan, mitotano, cloridrato de mitoxantrona, paclitaxel, pegaspargase, porfímero sódico, cloridrato de procar5 bazina, rituximab, teniposida, cloridrato de topotecan, trastuzumab, tretinoína, sulfato de vinblastina, sulfato de vincristina, e tartarato de vinorelbina.

(Vide, por exemplo, págs. 867-963 de Nursing 2001 Drug Handbook.)

Pelo menos um imunossupressor pode ser pelo menos um selecionado de azatioprina, basiliximab, ciclosporinao, daclizumab, linfócito imu10 noglobulina, muromonab-CD3, mofetil de micofenolato, cloridrato de mofetil de micofenolato, sirolimus, e tacrolimus. Pelo menos uma vacina ou toxóide pode ser pelo menos uma selecionada de vacina de BCG, vacina de cólera, toxóides de difteria e de tétano (adsorvidos), toxóides de difteria e de tétano e vacina de coqueluche acelular adsorvida, toxóides de difteria e de tétano e 15 vacina de coqueluche de célula inteira-, vacinas conjugadas de Haemophilius b, vacina de hepatite A (inativada), vacina de hepatite B (recombinante), vacina de vírus influenza 1999-2000 tipos trivalentes A & B (antígeno de superfície purificado), vacina de vírus influenza 1999-2000 tipos trivalentes A &

B (subvirion ou subvirion purificado), vacina de vírus influenza 1999-2000

tipos trivalentes A & B (virion inteiro), vacina de vírus de encefalite japonesa (inativada), vacina da doença de Lyme (OspA recombinante), vacina de sarampo e caxumba e rubéola (viva), vacina de sarampo e caxumba e rubéola (viva atenuada), vacina de sarampo (viva atenuada), vacina de polissacarídeo meningocócico, vacina anticaxumba (viva), vacina de pestilência, vacina pneumocócica (polivalente), vacina de poliovírus (inativado), vacina de poliovírus (viva, oral, trivalente), vacina anti-rábica (adsorvida), vacina antirábica (célula diplóide humana), vacina de rubéola e anticaxumba (viva), vacina de rubéola (viva, atenuada), toxóide de tétano (adsorvido), toxóide de tétano (fluido), vacina antitífica (oral), vacina antitífica (parenteral), vacina de polissacarídeo Vi de tifóide, vacina do vírus de varicela, e vacina da febre amarela. Pelo menos uma antitoxina ou antiveneno pode ser pelo menos um selecionado de antiveneno de aranha viúva negra, antiveneno de Crotalidae (polivalente), antitoxina de difteria (eqüina), e antiveneno de Micrurusfufvius. Pelo menos um soro imune pode ser pelo menos um selecionado de imunoglobulina de citomegalovírus (intravenesa), imunoglobulina de hepatite B (humana), imunoglobulina intramuscular, imunoglobulina intravenosa, imu5 noglobulina de raivas (humana), imunoglobulina intravenosa de vírus sincicial respiratório (humana), Rh₀(D) imunoglobulina (humana), imunoglobulina intravenosa de Rh₀(D) (humana), imunoglobulina de tétano (humana), e i-

munoglobulina de varicela-zoster. Pelo menos um modificador de resposta biológica pode ser pelo menos um selecionado de aldesleucina, alfa de e10 poetina, filgrastim, acetato de glatirâmero para injeção, interferona alfacon-1, interferona aifa-2a (recombinante), interferona alfa-2b (recombinante), interferona beta-1a, interferona beta-1b (recombinante), interferona gama-1b, cloridrato de levamisol, oprelvecina, e sargramostima. (Vide, por exemplo, págs. 964-1040 de Nursing 2001 Drug Handbook.)

Pelo menos um antiinfeccioso oftálmico pode ser selecionado de bacitracina, cloranfenicol, cloridrato de ciprofloxacina, eritromicina, sulfato de gentamicina, ofloxacina 0,3 %, sulfato de polimixina B, sulfacetamida sódica 10 %, sulfacetamida sódica 15 %, sulfacetamida sódica 30 %, tobramicina, e vidarabina. Pelo menos um antiinflamatório oftálmico pode ser pelo menos

um selecionado de dexametasona, fosfato de sódio de dexametasona, diclofenaco sódico 0,1 %, fluorometolona, flurbiprofeno sódico, trometamina de cetorolaco, acetato de prednisolona (suspensão) e fosfato de sódio de prednisolona (solução). Pelo menos um miótico pode ser pelo menos um selecionado de cloreto de acetilocolina, carbacol (intra-ocular), carbacol (tópico), iodeto de ecotiofato, pilocarpina, cloridrato de pilocarpina, e nitrato de pilocarpina. Pelo menos um midriátrico pode ser pelo menos um selecionado de sulfato de atropina, cloridrato de ciclopentolato, cloridrato de epinefrina, borato de epinefrila, hidrobrometo de homatropina, cloridrato de fenilefrina, hidrobrometo de escopolamina, e tropicamida. Pelo menos um vasoconstri30 tor oftálmico pode ser pelo menos um selecionado de cloridrato de nafazolina, cloridrato de oximatazolina, e cloridrato de tetraidrozolina. Pelo menos um oftálmico diverso pode ser pelo menos um selecionado de cloridrato de • Λ ¢-, apraclonidina, cloridrato de betaxolol, tartarato de brimonidina, cloridrato de carteolol, cloridrato de dipivefrina, cloridrato de dorzolamida, difumarato de emedastina, fluoresceína sódica, fumarato de cetotifeno, latanoprost, cloridrato de levobunolol, cloridrato de metipranolol, cloreto de sódio (hipertôni5 co), e maleato de timolol. Pelo menos um ótico pode ser pelo menos um selecionado de ácido bórico, peróxido de carbamida, cloranfenicol, e condensato de oleato de polipeptídeo de trietanolamina. Pelo menos um fárma-

co nasal pode ser pelo menos um selecionado de dipropionato de beclometasona, budesonida, sulfato de efedrina, cloridrato de epinefrina, flunisolida, 10 propionato de fluticasona, cloridrato de nafazolina, cloridrato de oximatazolina, cloridrato de fenilefrina, cloridrato de tetraidrozolina, acetonida de triancinolona, e cloridrato de xilometazolina. (Vide, por exemplo, págs. 1041-97 de Nursing 2001 Drug Handbook.)

Pelo menos um antiinfeccioso local pode ser pelo menos um selecionado de aciclovir, anfoterícina B, creme de ácido azeláico, bacitracina, nitrato de butoconazol, fosfato de clindamicina, clotrimazol, nitrato de

econazol, eritromicina, sulfato de gentamicina, cetoconazol, acetato de mafenida, metronidazol (tópico), nitrato de miconazol, mupirocina, cloridrato de naftifina, sulfato de neomicina, nitrofurazona, nistatina, sulfadiazina de prata, 20 cloridrato de terbinafina, terconazol, cloridrato de tetraciclina, tioconazol, e tolnaftato. Pelo menos uma escabicida ou pediculicida pode ser pelo menos uma selecionada de crotamiton, lindano, permetrina e piretrinas. Pelo menos um corticosteróide tópico pode ser pelo menos um selecionado de dipropionato de betametasona, valerato de betametasona, propionato de clobetasol, 25 desonida, desoximatasona, dexametasona, dexametasona fosfato de sódio, diacetato de diflorasona, acetonida de fluocinolona, fluocinonida, flurandrenolida, propionato de fluticasona, halcionida, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, butirato de hidrocortisona, valerato de hidrocorisona, furoato de mometasona, e acetonida de triancinolona. (Vide, por exemplo, págs.

1098-1136 de Nursing 2001 Drug Handbook.)

Pelo menos uma vitamina ou mineral pode ser pelo menos um selecionado de vitamina A, vitamina do complexo de B, cianocobalamina,

ácido fólico. hidroxocobalamina, cálcio de leucovorina, niacina, niacinamida, cloridrato de piridoxina, riboflavina, cloridrato de tiamina, vitamina C, vitamina D, colecalciferol, ergocalciferol, análogo de vitamina D, doxercalciferol, pancalcitol, vitamina E, análogo de vitamina K, fitonadiona, fluoreto de sódio, 5 fluoreto de sódio (tópico), elementos de traço, cromo, cobre, iodo, manganês, selênio, e zinco. Pelo menos um calórico pode ser pelo menos um selecionado de infusões de aminoácido (cristalinas), infusões de aminoácido em dextrose, infusões de aminoácido com eletrólitos, infusões de aminoáci-

do com eletrólitos em dextrose, infusões de aminoácido para insuficiência hepática, infusões de aminoácido para tensão metabólica alta, infusões de aminoácido para insuficiência renai, dextrose, emulsões graxas, e triglicerídeos de cadeia média. (Vide, por exemplo, págs. 1137-63 de Nursing 2001

Drug Handbook.)

Composições de anticorpo de anti-IL-23p19 da presente inven15 ção podem também compreender pelo menos um de qualquer quantidade adequada e eficaz de uma composição ou composição farmacêutica compreendendo pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 contatado ou administrado a uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente em necessidade de

tal modulação, tratamento ou terapia, adicionalmente compreendendo op20 cionalmente pelo menos um selecionado de pelo menos um antagonista de

TNF (por exemplo, mas não limitado a, um antagonista de TNF químico ou de proteína, anticorpo monoclonal ou policlonal de TNF ou fragmento, um receptor de TNF solúvel (por exemplo, p55, p70 ou p85) ou fragmento, polipeptídeos de fusão destes, ou um antagonista de TNF de molécula peque25 na, por exemplo, Proteína de Ligação de TNF I ou II (TBP-1 ou TBP-II), nerelimonmab, infliximab, etanorcept, CDP-571, CDP-870, afelimomab, lenercept, e similares), um anti-reumático (por exemplo, metotrexato, auranofina, aurotioglicose, azatioprina, etanorcept, tiomalato de sódio de ouro, sulfato de hidroxicloroquina, leflunomida, sulfasalzina), um relaxante muscular, um 30 narcótico, um fármaco antiinflamatório não-esteróide (NSAID), um analgésico, um anestésico, um sedativo, um anestésico local, um bloqueador neuromuscular, um antimicrobiano (por exemplo, aminoglicosida, um antifúngi-

co_; um antiparasitário, um antiviral, um carbapenem, cefalosporina, uma flu rorquinofona, uma macrolida, uma penicilina, uma sulfonamida, uma tetraciclina, outro antimicrobiano), um antipsoriático, um corticosteróide, um esteróide anabólico, um agente relacionado a diabetes, um mineral, um nutricio5 nal, um agente tireóide, uma vitamina, um hormônio relacionado a cálcio, um antidiarréico, um antitussivo, um antiemético, um antiúlcera, um laxante,

um anticoagulante, uma eritropoietina (por exemplo, epoetina alfa), um filgrastim (por exemplo, G-CSF, Neupogen), um sargramostim (GM-CSF, Leukine), uma imunização, uma imunoglobulina, um imunossupressor (por e10 xemplo, basiliximab, ciclosporinao, daclizumab), um hormônio de crescimento, um fármaco de substituição hormonal, um modulador de receptor de estrogênio, um midriático, um cicloplégico, um agente de alquilação, um antimetabólito, um inibidor de mitótico, um radiofarmacêutico, um antidepressivo, agente antimaníaco, um antipsicótico, um anxiolítico, um hipnótico, um simpatomimético, um estimulante, donepezil, tacrina, uma medicação de asma, um agonista beta, um esteróide inalado, um inibidor de leucotrieno, uma metilxantina, uma cromolina, uma epinefrina ou análogo, dornase alfa (Pulmozyme), uma citocina ou um antagonista de citocina. Exemplos nãolimitativos de tais citocinas incluem, mas não são limitados a, qualquer de IΙ-

ΣΟ 1a IL-28 (por exemplo, IL-1, IL-2, etc.). Dosagens adequadas são bemconhecidas na técnica. Vide, por exemplo, Wells et al., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2- Edição, Appleton e Lange, Stamford, CT (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Edição Deluxe, Tarascon Publishing, Loma Linda, CA (2000), cada uma destas referências 25 é completamente incorporada aqui por referência.

Tal anticâncer ou antiinfecciosos podem também incluir moléculas de toxina que são associadas, ligadas, co-formuladas ou co-administradas com pelo menos um anticorpo da presente invenção. A toxina pode atuar opcionalmente para seletivamente matar a célula patológica ou tecido. 30 A célula patológica pode ser um câncer ou outra célula. Tais toxinas podem ser, mas não são limitadas a, toxina purificada ou recombinante ou fragmento de toxina compreendendo pelo menos um domínio citotóxico funcional de

toxina, por exemplo, selecionada de pelo menos um de ricina, toxina de difteria, uma toxina de veneno, ou uma toxina bacteriana. O termo toxina também inclui endotoxinas e exotoxinas produzidas por quaisquer bactérias ou vírus de ocorrência natural, mutantes ou recombinantes que podem causar 5 qualquer condição patológica nos humanos e similares mamíferos, incluindo choque de toxina que pode resultar em morte. Tais toxinas podem incluir, mas não são limitadas a, enterotoxina instável ao calor de E. coli enterotoxi-

gênica (LT), enterotoxina estável ao calor (ST), citotoxina de Shigella, enterotoxinas de Aeromonas, toxina-1 de síndrome de choque tóxico (TSST-1), 10 enterotoxina de Estafilocócica A (MAR), B (SEB), ou C (SEC), enterotoxinas

Estreptocócicas e similares. Tais bactérias incluem, mas não são limitadas a, cepas de uma espécie de E. coli enterotoxigênica (ETEC), E. co//enterohemorrágica (por exemplo, cepas de sorotipo 0157:H7), espécies de Estafilococos (por exemplo, Staphylococcus aureus, Staphylococcus pyogenes), espécies de Shigella (por exemplo, Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella boydii, e Shigella sonnei), espécies de Salmonella (por exemplo, Salmonella typhi, Salmonella cholera-suis, Salmonella enteritidis), espécies de Clostrídium (por exemplo, Clostridium perfringens, Clostrídium dificile, Clostrídium botulinum), espécies de Camphlobacter (por exemp\o, Camphlo-

bacter jejuni, Camphlobacter fetus}, espécies de Heliobacter, (por exemplo,

Heliobacter pylori). espécies de Aeromonas (por exemplo, Aeromonas sobría, Aeromonas hydrophila, Aeromonas caviae), Pleisomonas shigelloides,

Yersina enterocolitica, espécies de Vibrios (por exemplo, Vibrios cholerae,

Vibrios parahemolyticus), Klebsiella species, Pseudomonas aeruginosa, e

Streptococci. Ver, por exemplo, Stein, ed., INTERNAL MEDICINE, 3- ed., págs. 1-13, Little, Brown and Co., Boston, (1990); Evans et al., eds., Bacterial Infections of Humans: Epidemiology and Control, 2-. Ed., págs 239-254, Plenum Medicai Book Co., Nova Iorque (1991); Mandell et al, Principies and Practíce of Infectious Diseases, 3-. Ed., Churchill Livingstone, Nova Iorque (1990); Berkow et al, eds., The Merck Manual, 16^a edição, Merck e Co.,

Rahway, N.J., 1992; Wood et al, FEMS Microbiology Immunology, 76:121 134 (1991); Marrack et al, Science, 248:705-711 (1990), os conteúdos des61 ί\./Ό

X tas referências são completamente incorporados aqui por referência.

Compostos de anticorpo de anti-IL-23p19, composições ou combinações da presente invenção podem também compreender pelo menos um de qualquer auxiliar adequado, como, mas não limitado a, diluente, 5 aglutinante, estabilizante, tampões, sais, solventes lipofílicos, conservante, adjuvante ou outros. Auxiliares farmaceuticamente aceitáveis são preferidos.

Exemplos não-limitativos, e métodos de preparar tais soluções estéreis são

bem-conhecidos na técnica, como, mas limitado a, Gennaro, Ed., Remington’ Pharmaceutical Sciences, 18^a Edição, Mack Publishing Co. (Easton, PA) 10 1990. Veículos farmaceuticamente aceitáveis podem ser habitualmente selecionados que sejam adequados para o modo de administração, solubilidade e/ou estabilidade do anticorpo de anti-IL-23p19, fragmento ou composição variante como bem-conhecido na técnica ou como descrito aqui.

Excipientes farmacêuticos e aditivos úteis na composição pre15 sente incluem, mas não são limitados a, proteínas, peptídeos, aminoácidos, lipídios, e carboidratos (por exemplo, açúcares, incluindo monossacarídeos, di-, tri-, tetra-, e oligossacarídeos; açúcares derivatizados, como alditóis, ácidos aldônico, açúcares estereficados e similares; e polissacarídeos ou polímeros de açúcar) que podem estar presentes isoladamente ou em combina

ção, compreendendo sozinho ou em combinação 1-99,99 % em peso ou volume. Excipientes de proteína exemplares incluem albumina de soro, como albumina de soro humano (HSA), albumina humana recombinante (rHA), gelatina, caseína, e similares. Componentes de aminoácído/anticorpo representativos que podem também funcionar em uma capacidade de tamponarose, trealose, celobiose, e similares; polissacarídeos, como rafinose, melezitose, maltodextrinas, dextranos, amidos, e similares; e alditóis, como mani25 ção, incluem alanina, glicina, arginina, betaína, histidina, ácido glutâmico, ácido aspártico, cisteína, lisina, leucina, isoleucina, valina, metionina, fenilalanina, aspartame, e similares. Um aminoácido preferido é glicina.

Excipientes de carboidrato adequados para o uso na invenção incluem, por exemplo, monossacarídeos, como frutose, maltose, galactose, glicose, D-manose, sorbose, e similares; dissacarídeos, como lactose, saca-

tol xilitol, maltitol, lactitol. sorbitol de xilitol (glucitoi), mioinositoi e similares. Excipientes de carboidrato preferidos para o uso na presente invenção são manitol, trealose, e rafinose.

Composições de anticorpo de anti-IL-23p19 podem também in5 cíuir um tampão ou um agente de ajuste de pH; tipicamente, o tampão é um sal preparado de um ácido ou base orgânica. Tampões representativos incluem sais de ácidos orgânicos, como sais de ácido cítrico, ácido ascórbico,

ácido glucônico, ácido carbônico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido acético, ou ácido ftálico; Tris, cloridrato de trometamina, ou tampões de fosfato. 10 Tampões preferidos para o uso nas composições presentes são sais de ácidos orgânicos, como citrato.

Adicionalmente, composições de anticorpo de anti-IL-23p19 da invenção podem incluir excipientes/aditivos poliméricos, como polivinilpirrolidonas, ficóis (um açúcar polimérico), dextratos (por exemplo, ciclodextrinas,

como 2-hidroxipropil-p-ciclodextrina), polietileno glícóis, agentes aromatízantes, agentes antimicrobianos, adoçantes, antioxidantes, agentes antiestáticos, tensoativos (por exemplo, polissorbatos, como TWEEN 20 e TWEEN 80), lipídios (por exemplo, fosfolipídeos, ácidos graxos), esteróides (por exemplo, colesterol), e agentes quelantes (por exemplo, EDTA).

Estes e excipientes e/ou aditivos farmacêuticos adicionais conhecidos adequados para o uso no anticorpo de anti-IL-23p19, porção ou composições variantes de acordo com a invenção são conhecidos na técnica, por exemplo, como listado em Remington: The Science & Practice of Pharmacy, 19^ô ed., Williams & Williams, (1995), e na Physician’s Desk Re25 ference, 52^ã ed., Medicai Economics, Montvale, NJ (1998), as descrições destas são completamente incorporadas aqui por referência. Materiais de veículo ou de excipiente preferidos são carboidratos (por exemplo, sacarídeos e alditóis) e tampões (por exemplo, citrato) ou agentes poliméricos. Molécula de veículo exemplares são mucopolissacarídeo, ácido hialurônico que pode ser útil para liberação intra-articular.

FORMULAÇÕES

Como observado acima, a invenção provê formulações estáveis que preferivelmente compreendem um tampão de fosfato com solução salina ou um sal escolhido, como também soluções e formulações preservadas que contêm um conservante como também formulações preservads de multiuso adequadas para uso farmacêutico ou veterinário, compre5 endendo pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 em uma formulação farmaceuticamente aceitável. Formulações preservadas contêm pelo menos

um conservante conhecido ou opcionalmente selecionadas do grupo que consiste em pelo menos um fenol, m-cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, álcool benzílico, nitríto fenilmercúrico, fenoxietanol, formaldeído, clorobu10 tanol, cloreto de magnésio (por exemplo, hexahidrato), alquilparabeno (rnetira, etiia, propila, butila e similares), cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio, deidroacetato de sódio e timerosal, polímeros, ou misturas destes em um diluente aquoso. Qualquer concentração ou mistura adequada pode ser usada como conhecido na técnica, como cerca de 15 0,0015 %, ou qualquer faixa, valor, ou fração nela. Exemplos não-limitativos incluem, nenhum conservante, cerca de 0,1-2 % de m-cresol (por exemplo,

0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,9, 1,0 %), cerca de 0,1-3 % de álcool benzílico (por exemplo, 0,5, 0,9, 1,1, 1,5, 1,9, 2,0, 2,5 %), cerca de 0,001-0,5 % de timerosal (por exemplo, 0,005, 0,01), cerca de 0,001-2,0 % de fenol (por 20 exemplo, 0,05, 0,25, 0,28, 0,5, 0,9, 1,0 %), 0,0005-1,0 % de alquilparabeno(s) (por exemplo, 0,00075, 0,0009, 0,001, 0,002, 0,005,

1,0%), e similares.

Como observado acima, a invenção fornece um artigo de fabri25 cação, compreendendo material de embalagem e pelo menos um frasco compreendendo uma solução de pelo menos um anticorpo de antí-IL-23p19 com os tampões e/ou conservantes prescritos, opcionalmente em um diluente aquoso, em que o dito material de embalagem compreende uma marcação que indica que tal solução pode ser mantida por um período de 1,2, 3,

4, 5, 6, 9, 12, 18, 20, 24, 30, 36, 40, 48, 54, 60, 66, 72 horas ou mais. A invenção também compreende um artigo de fabricação, compreendendo material de embalagem, um primeiro frasco compreendendo liofilizado pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19, e um segundo frasco compreendendo um diluente aquoso de tampão ou conservante prescrito, em que o dito material de embalagem compreende uma marcação que ensina que um paciente reconstitua Pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 no diluente a5 quoso para formar uma solução que pode ser mantida por um período de vinte e quatro horas ou mais.

Pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 usado de acordo com

a presente invenção pode ser produzido através de meios recombinantes, incluindo de preparações de células mamíferas ou transgênicas, ou pode 10 ser purificado de outras fontes biológicas, como descritas aqui ou como conhecidas na técnica.

A faixa de pelo menos um anticorpo de anti-IL-23pl9 no produto da presente invenção inclui quantidades que rendem sob reconstituição, se em um sistema seco/molhado, concentrações de cerca de 1,0 pg/ml a cerca 15 de 1000 mg/ml, embora concentrações inferiores e mais altas são operáveis e são dependentes do veículo de liberação intencionado, por exemplo, formulações de solução diferirão do emplasto transdérmico, métodos de microbombeameto pulmonar, transmucosal, ou osmótico.

Preferivelmente, o diluente aquoso opcionalmente também 20 compreende um conservante farmaceuticamente aceitável. Conservantes preferidos incluem aqueles selecionados do grupo que consiste em fenol, mcresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, álcool benzílico, alquilparabeno (metila, etila, propila, butila e similares), cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio, deidroacetato de sódio e timerosal, ou misturas destes. A concentra25 ção de conservante usada na formulação é uma concentração suficiente render um efeito antimicrobiano. Tais concentrações são dependentes do conservante selecionado e são facilmente determinadas pelo artesão versado.

Outros excipientes, por exemplo, agentes de isotonicidade, tam30 pões, antioxidantes, e intensificadores conservantes, podem ser opcionalmente e de preferência acrescentados ao diluente. Um agente de isotonicidade, como glicerina, é comumente usado em concentrações conhecidas.

Um tampão fisiologicamente tolerado é preferivelmente adicionado para fornecer controle de pH melhorado. As formulações podem cobrir uma gama extensiva de pHs, como de cerca de pH 4 a cerca de pH 10, e faixas preferidas de cerca de pH 5 a cerca de pH 9, e uma faixa mais preferida de cerca de 6,0 a cerca de 8,0, Preferivelmente, as formulações da presente inven-

ção têm um pH entre cerca de 6,8 e cerca de 7,8. Tampões preferidos incluem tampões de fosfato, o mais preferivelmente, fosfato de sódio, particularmente, solução salina tamponada com fosfato (PBS).

Outros aditivos, como uns solubilizantes farmaceuticamente a10 ceitável como Tween 20 (monolaurato de sorbitano de polioxietileno (20)),

Tween 40 (monopalmitato de sorbitano de polioxietileno (20)), Tween 80 (monooleato de sorbitano de polioxietileno (20)), Pluronic F68 (copolímeros de bloco de polioxietileno - polioxipropileno), e PEG (polietileno glicol) ou tensoativos não-iônicos, como polissorbato 20 ou 80 ou poloxâmero 184 ou 15 188, polilas de Pluronic®, outros co-polímeros de bloco, e quelantes, como

EDTA e EGTA, podem opcíonalmente ser acrescentados às formulações ou composições para reduzir a agregação. Estes aditivos são particularmente úteis se uma bomba ou recipiente de plástico for usado para administrar a formulação. A presença de tensoativo farmaceuticamente aceitável mitiga a 20 tendência da proteína se agregar.

As formulações da presente invenção podem ser preparadas por um processo compreendendo misturar pelo menos um anticorpo de anti-IL23p19 e um conservante selecionado do grupo que consiste em fenol, mcresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, álcool benzílico, alquilparabeno, (meti25 la, etila, propila, butila e similares), cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio, deidroacetato de sódio e timerosal ou misturas destes em um diluente aquoso. Mistura do pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 e conservante em um diluente aquoso é realizada usando procedimentos de dissolução e mistura convencionais. Para preparar uma formulação adequada, por e30 xemplo, uma quantidade medida de pelo menos um anticorpo de anti-IL23p19 em solução tamponada ela é combinada com o conservante desejado em uma solução tamponada em quantidades suficiente paa fornecer a

proteína e conservante nas concentrações desejadas. Variações deste processo seriam reconhecidas por alguém versado técnica. Por exemplo, a ordem que os componentes são adicionados, se aditivos adicionais são usados, a temperatura e pH sob os quais a formulação é preparada, são todos 5 fatores que podem ser otimizados para a concentração e meios de administração usados.

As formulações reivindicadas podem ser fornecidas a pacientes

como soluções claras ou como frascos duais compreendendo um frasco de liofilizados de pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 que é reconstituído 10 com um segundo frasco contendo água, um conservante e/ou excipientes, preferivelmente, um tampão de fosfato e/ou solução salina e um sal escolhido, em um diluente aquoso. Um frasco de solução simples ou frasco dual que requer reconstituição pode ser usado de novo múltiplas vezes e pode ser suficiente durante uns ciclos simples ou múltiplos de tratamento do paci15 ente e desse modo fornecer um regime de tratamento mais conveniente que correntemente disponível.

Os artigos de fabricação presentes reivindicados são úteis para administração em um período que varia de imediato a vinte e quatro horas ou mais. Consequentemente, os artigos de fabricação presentemente rei20 vindicados oferecem vantagens significativas para o paciente. Formulações da invenção podem opcionalmente ser seguramente armazenadas em temperatura de cerca de 2°C a cerca de 40°C e retém a atividade biológica da proteína durante períodos estendidos de tempo, desse modo permitindo uma marcação de pacote que indica que a solução pode ser mantida e/ou 25 usada em um período de 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72, ou 96 horas ou mais. Se diluente preservado for usado, tal marcação pode incluir uso até 1-12 medo procedimentos de dissolução e mistura convencionais. Preparar um diluente adequado, por exemplo, uma quantidade medida de pelo menos um ses, porção, uma porção e meia, e/ou dois anos.

As soluções de pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 da invenção podem ser preparadas por um processo compreendendo misturar pelo menos um anticorpo em um diluente aquoso. Mistura é realizada usan-

anticorpo em água ou tampão é combinada em quantidades suficientes para fornecer a proteína e, opcionalmente, um conservante ou tampão nas concentrações desejadas. Variações deste processo seriam reconhecidas por alguém versado técnica. Por exemplo, a ordem que os componentes são 5 adicionados, se aditivos adicionais são usados, a temperatura e pH aos quais a formulação é preparada, são todos fatores que podem ser otimizados para a concentração e meios de administração usados.

Os produtos reivindicados podem ser fornecidos a pacientes como soluções claras ou como frascos duais compreendendo um frasco de 10 liofilizados de pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 que é reconstituído com um segundo frasco contendo o diluente aquoso. Um frasco de solução simples ou frasco dual que requerem reconstituição podem ser usados de novo múltiplas vezes e podem ser suficientes durante uns ciclos simples ou múltiplos de tratamento do paciente e desse modo fornecer um regime de 15 tratamento mais conveniente que correntemente disponível.

Os produtos reivindicados podem ser fornecidos indiretamente aos pacientes fornecendo às farmácias, clínicas, ou outras tais instituições e instalações, soluções claras ou frascos duais compreendendo um frasco de liofilizados de pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19, que é reconstituí-

do com um segundo frasco contendo o diluente aquoso. A solução clara neste caso pode estar até um litro ou até mais em tamanho, fornecendo um reservatório grande do qual porções menores da pelo menos uma solução de anticorpo podem ser recuperadas uma ou múltiplas vezes por transferência em frascos menores e pode ser fornecida pela farmácia ou clínica a seus 25 clientes e/ou os pacientes.

Dispositivos reconhecidos compreendendo sistemas de frasco simples incluem dispositivos de injetor de caneta para liberação de uma solução, como BD Pens, BD Autojector®, Humaject®’ NovoPen®, B-D®Pen, AutoPen®, and OptiPen®, GenotropinPen®, Genotronorm Pen®, Humatro Pen®, 30 Reco-Pen®, Roferon Pen®, Biojector®, Iject®, J-tip Needle-Free Injector®, Intraject®, Medi-Ject®, por exemplo, como feitos ou desenvolvidos por Becton Dickensen (Franklin Lakes, NJ, www.bectondickenson.com), Disetronic

(Burgdorf, Suíça, www.disefronic.com, Bíoject, Portland, Oregon (www.bioject.com); National Medicai Products, Weston Medicai (Peterborough, UK, www.weston-medical.com), Medi-Ject Corp (Mineápolis, MN, www.mediject.com), e dispositivos adequados similares. Dispositivos reco5 nhecidos compreendendo um sistema de frasco dual incluem aqueles sistemas de caneta-injetor para reconstituir um fármaco liofilizado em um cartucho para liberação da solução reconstituída, como o HumatroPen®. Exemplos de similares dispositivos adequados incluem seringas preenchidas, auto-injetores, injetores livres de agulha e conjuntos de infusão livres de agulha 10 IV.

Os produtos presentemente reivindicados incluem material de

embalagem. O material de embalagem fornece, além da informação requerida pelos órgãos fiscalizadores, as condições sob as quais o produto pode ser usado. O material de embalagem da presente invenção fornece instru15 ções ao paciente para reconstituir Pelo menos um anticorpo de anti-IL23p19 no diluente aquoso para formar uma solução e usar a solução em um período de 2-24 horas ou mais para o produto dos dois frascos, seco/molhado. Para o produto de solução de frasco simples, a marcação indica que tal solução pode ser usada em um período de 2-24 horas ou mais. 20 Os produtos presentemente reivindicados são úteis para uso de produto farmacêutico humano.

As formulações da presente invenção podem ser preparadas por um processo compreendendo misturar pelo menos um anticorpo de anti-IL23p19 e um tampão selecionado, preferivelmente, um tampão de fosfato 25 que contém solução salina ou um sal escolhido. Mistura do pelo menos um anticorpo de antí-IL-23p19 e tampão em um diluente aquoso é realizada usando procedimentos de dissolução e mistura convencionais. Para preparar uma formulação adequada, por exemplo, uma quantidade medida de pelo menos um anticorpo em água ou tampão é combinada com o agente tam30 ponante desejado em água em quantidades suficiente para fornecer a proteína e tampão nas concentrações desejadas. Variações deste processo seriam reconhecidas por alguém versado técnica. Por exemplo, a ordem que os

componentes são adicionados, se aditivos adicionais são usados, a temperatura e pH sob os quais a formulação é preparada, são todos fatores que podem ser otimizados para a concentração e meios de administração usados.

As formulações reivindicadas estáveis ou preservadas podem ser fornecidas aos pacientes como soluções claras ou como frascos duais compreendendo um frasco de liofilizados de pelo menos um anticorpo de

anti-IL-23p19 que é reconstituído com um segundo frasco contendo um conservante ou tampão e excipientes em um diluente aquoso. Um frasco de 10 solução simples ou frasco dual que requer reconstituição pode ser usado de novo múltiplas vezes e pode ser suficiente durante uns ciclos simples ou múltiplos de tratamento do paciente e desse modo fornece um regime de tratamento mais conveniente que correntemente disponível.

Outras formulações ou métodos de estabilizar o anticorpo de anti-IL-23p19 pode resultar em diferente de uma solução clara de pó liofilizado compreendendo o anticorpo. Entre as soluções não-claras estão formulações compreendendo suspensões particuladas, os ditos particulados sendo uma composição que contém o anticorpo de anti-IL-23p19 em uma estrutura de dimensão variável e variadamente conhecidos como uma mi-

croesfera, micropartícula, nanopartícula, nanoesfera, ou lipossoma. Tais formulações essencialmente esféricas, particuladas relativamente homogêneas contendo um agente ativo podem ser formadas contatando uma fase aquosa que contém o agente ativo e um polímero e uma fase não-aquosa seguido por evaporação da fase não-aquosa para causar a coalescência das partículas da fase aquosa como ensinado na U. S. 4.589.330. Micropartículas porosas podem ser preparados usando uma primeira fase contendo agente ativo e um polímero disperso em um solvente contínuo e removendo o dito solvente da suspensão mediante secagem por congelamento ou dilurção-extração-precipítação como ensinado em U. S. 4.818.542. Polímeros 30 preferidos para tais preparações são copolímeros naturais ou sintéticos ou polímeros selecionados do grupo que consiste em ágar de gleatina, amido, arabinogalactana, albumina, colágeno, ácido poliglicólico, ácido poliláctico,

glicolida-L (-)lactídeo poli(episilon-caprolactona), ácido láctico de poli (epsilon-caprolactona-CO), ácido glicólico de poli(epsilon-capro)actona-CO), ácido butírico de poli(3-hidróxi), óxido de polietileno, polietileno, poli(alquil-2cianoacrilato), metacrilato de poli(hidroxietila), poliamidas, poli(amino) áci-

dos, poli(2-hidroxietil DL-aspartamida), uréia de poli(éster), poli(L-fenilalanina/etileno glicol/1,6-diisocianatoexano) e metacrilato de poli(metila). Polímeros particularmente preferidos são poliésteres, como ácido poliglicólico, ácido poliláctico, glicolida-L (-) lactídeo poli(episilon-caprolactona), ácido láctico de poli(epsilon-caprolactona-CO), e ácido glicólico de poli(epsilon10 caprolactona-CO). Solventes úteis para dissolver o polímero e/ou o ativo incluem: água, hexafluoroisopropanol, metilenocloreto, tetraidrofurano, hexano, benzeno, ou sesquiidrato de hexafluoroacetona. O processo de dispersar a fase contendo ativo com uma segunda fase pode incluir pressão forçando a dita primeira fase através de um orifício em um bico para afetar a 15 formação de gotícula.

Formulações de pó seco podem ser o resultado de processos diferentes de liofilização, como por secagem de atomização ou extração de solvente por evaporação ou por precipitação de uma composição cristalina seguido por uma ou mais etapas para remover o solvente aquoso ou não-

aquoso. Preparação de uma preparação de anticorpo secada por pulverização é ensinada em U. S. 6.019.968. As composições de pó seco baseadas em anticorpo podem ser produzidas através de soluções de secagem por pulverização ou pastas do anticorpo e, opcionalmente, excipientes, em um solvente sob condições para fornecer um pó seco respirável. Solventes po25 dem incluir compostos polares, como água e etanol que podem ser secados facilmente. Estabilidade do anticorpo pode ser intensificada executando a pulverização procedimentos de secagem na ausência de oxigênio, como sob uma manta de nitrogênio ou usando nitrogênio como o gás secante. Outra formulação relativamente seca é uma dispersão de uma pluralidade de mi30 croestruturas perfuradas dispersas em um meio de suspensão que tipicamente compreende um propulsor de hidrofluoroalcano como ensinado em

WO 9916419. As dispersões estabilizadas podem ser administradas ao

pulmão de um paciente usando um inalador de dose medida. Equipamento útil na fabricação comercial de medicamentos secados por pulverização é fabricado por Buchi Ltd. ou Niro Corp.

Pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 ou as formulações ou soluções estáveis ou preservadas descritas aqui, podem ser administradas a um paciente de acordo com a presente invenção por meio de uma variedade de métodos de liberação incluindo injeção de SC ou IM; transdérmica, pul-

monar, transmucosal, implante, bomba osmótica, cartucho, micro bomba, ou outros meios apreciados pelo artesão versado, como bem-conhecido na 10 técnica.

APLICAÇÕES TERAPÊUTICAS

A presente invenção também provê um método para modular ou tratar pelo menos uma doença relacionada a IL-23, em uma célula, tecido, órgão, animal, ou paciente, como conhecido na técnica ou como descrito 15 aqui, usando pelo menos um anticorpo de IL-23p19 da presente invenção, por exemplo, administrando ou contatando a célula, tecido, órgão, animal, ou paciente com uma quantidade eficaz terapêutica de anticorpo de IL23p19. A presente invenção também provê um método para modular ou tratar pelo menos uma doença relacionada a IL-23, em uma célula, tecido, ór20 gão, animal, ou paciente incluindo, mas não limitado a, pelo menos um de obesidade, uma doença relacionada imune, uma doença cardiovascular, uma doença infecciosa, uma doença maligna ou uma doença neurológica.

A presente invenção também provê um método para modular ou tratar pelo menos uma doença relacionada imune relacionada a IL-23, em 25 uma célula, tecido, órgão, animal, ou paciente incluindo, mas não limitada a, pelo menos uma de artrite reumatóide, artrite reumatóide juvenil, artrite reumatóide juvenil de princípio sistêmico, artrite psoriátíca, espondilite ancilosante, úlcera gástrica, artropatias seronegativas, osteoartrite, osteólise, afrouxamento asséptico de implantes ortopédicos, doença inflamatória do 30 intestino, colite ulcerativa, lúpus sistêmico eritematoso, síndrome de antifosfolipídios, iridociclite/uveíte/neurite óptica, fibrose pulmonar idiopática, vasculite sistêmica/granulomatose de wegener, sarcoidose, procedimentos de

reversão de orquite/vasectomia, doenças alérgicas/atòpicas, asma, rinite alérgica, eczema, dermatite de contato alérgica, conjuntivite alérgica, pneumonite de hipersensibilidade, transplantes, rejeição de transplante de órgão, doença de enxerto-versus-hospedeiro, síndrome de resposta inflamatória 5 sistêmica, síndrome de sepse, sepse gram-positiva, sepse gram-negativa, sepse negativa de cultura, sepse fúngica, febre neutropênica, urosepse, meningococcemia, trauma/hemorragia, queimaduras, exposição à radiação

ionizante, pancreatite aguda, síndrome de angústia respiratória adulta, artrite reumatóide, hepatite induzida por álcool, patologias inflamatórias crônicas, 10 sarcoidose, patologia de Crohn, anemia de célula de foicinho, diabetes, nefrose, doenças atópicas, reações de hipersensibilidade, rinite alérgica, febre do feno, rinite perene, conjuntivite, endometríose, asma, urticária, anafalaxia sistêmica, dermatite, anemia perniciosa, doença hemolítica, trombocitopenia, enxerte rejeição de qualquer órgão ou tecido, rejeição de transplante de 15 rim, rejeição de transplante de coração, rejeição de transplante de fígado, rejeição de transplante de pâncreas, rejeição de transplante pulmonar, transplante de medula óssea (BMT) rejeição, rejeição de aloenxerto de pele, rejeição de transplante de cartilagem, rejeição de enxerto de osso, rejeição

de transplante de intestino delgado, rejeição de implante de timo fetal, rejei20 ção de transplante da paratireóide, rejeição de xenoenxerto de qualquer órgão ou tecido, rejeição de aloenxerto, reações de hipersensibilidade de antireceptor, doença de Grave, doença de Raynaud, diabetes insulino-resistente do tipo B, asma, miastenia grave, citotoxicidade mediada por anticorpo, reações de hipersensibilidade do tipo III, síndrome de POEMS (polineuropatia, organomegalia, endocrinopatia, gamopatia monoclonal, e síndrome de alteração de pele), polineuropatia, organomegalia, endocrinopatia, gamopatia monoclonal, síndrome de alteração de pele, síndrome de antifosfolipídeos, pênfigo, escleroderma, doença de tecido conjuntrvo misturada, doença de Addison idiopática, diabetes melito, hepatite ativa crônica, cirrose biliar pri30 mária, vitiligo, vasculite, síndrome pós-MI cardiotomia, hipersensibilidade do tipo IV, dermatite de contato, pneumonite de hipersensibilidade, rejeição de aloenxerto, granulomas devido a organismos intracelulares, sensibilidade de fármaco, metabólica/idiopática. doença de Wilson, hemacromatose, deficiência de alfa-1-antitripsina, retinopatia diabética, tiroidite de Hashimoto, osteoporose, avaliação de eixo geométrico hipotalâmico-pituitário-ad-renal, cirrose biliar primária, tiroidite, encefalomielite, caquexia, fibrose cística, do-

ença pulmonar crônica neonatal, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), linfoistiocitose hematofagocítica familial, condições dermatológicas, psoríase, alopecia, síndrome nefrótica, nefrite, nefrite glomerular, insuficiência renal aguda, hemodiálise, uremia, toxicidade, preeclampsia, terapia de okt3, terapia de anti-cd3, terapia de citocina, quimioterapia, terapia de radia10 ção (por exemplo, incluindo mas não limitado a, astenía, anemia, caquexia, e outras), intoxicação de salicilato crônica, e similares. Vide, por exemplo, Merck Manual, 12--17⁶ Edições, Merck & Company, Rahway, NJ (1972, 1977, 1982, 1987, 1992, 1999), Pharmacotherapy Handbook, Wells et al., eds., Segunda Edição, Appleton e Lange, Stamford, Conn. (1998, 2000), 15 cada uma completamente incorporada por referência.

A presente invenção também provê um método para modular ou tratar pelo menos uma doença cardiovascular em uma célula, tecido, órgão, animal, ou paciente, incluindo, mas não limitado a, pelo menos um de síndrome cardíaca, infartação do miocárdio, parada cardíaca congestiva, aci20 dente vascular cerebral, acidente vascular cerebral isquêmico, hemorragia, síndrome coronária aguda, arteriosclerose, aterosclerose, restenose, doença aterosclerótica diabética, hipertensão, hipertensão arterial, hipertensão renovascular, síncope, choque, sífilis do sistema cardiovascular, parada cardíaca, cor pulmonar, hipertensão pulmonar primária, arritmias cardíacas, bati25 das ectópicas atriais, agitação atrial, fibrilação atrial (contínua ou paroximal), síndrome de pós-perfusão, resposta de inflamação de desvio cardiopulmonar, caótico ou multifocal taquicardia atrial, taquicardia de QRS estreita regular, arritmias específicas, fibrilação ventricular, arritmias de feixe His, bloqueio atrioventricular, bloco de ramificação de feixe, distúrbios isquêmicos do miocárdio, doença de artéria coronária, angina pectoris, infartação do miocárdio, cardiomiopatia, cardiomiopatia congestiva dilatada, cardiomiopatia restritiva, doenças de coração valvulares, endocardite, doença pericardi-

Ί 1

al. tumores cardíacos, aneurismas aórticos e periféricos, dissecação aórtíca, inflamação da aorta, oclusão da aorta abdominal e suas ramificações, distúrbios vasculares periféricos, distúrbios arteriais oclusivos, doença ateroscleróticas periférica, tromboangite obliterans, distúrbios arteriais periféricos 5 funcionais, fenômeno e doença de Raynaud, acrocianose, eritromelalgia, doenças venosas, trombose venosa, veias varicosas, fístula arteriovenosa, linfoderma, lipedema, angina instável, lesão de reperfusão, síndrome de pós

bomba, lesão de isquem ia-reperfusão, e similares. Um tal método pode opcionalmente compreender administrar uma quantidade eficaz de uma com10 posição ou composição farmacêutica compreendendo pelo menos um anticorpo de anti-ÍL-23p19 a uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente em necessidade de tal modulação, tratamento ou terapia.

A presente invenção também provê um método para modular ou tratar pelo menos uma doença infecciosa relacionada a IL-23 em uma célu15 Ia, tecido, órgão, animal ou paciente, incluindo, mas não limitado a, pelo menos uma de: infecção bacteriana aguda ou crônica, processos parasitários ou infecciosos agudos e crônicos, incluindo infecções bacterianas, virais e fúngicas, infecção por HlV/neuropatia de HIV, meningite, hepatite (por exemplo, A, B ou C, ou outras), artrite séptica, peritonite, pneumonia, epigloti20 te, 0157:h7 de E. coli, síndrome urêmica hemolítica/púrpura trombocitopênica trombolítica, malária, febre hemorrágica de dengue, leishmaniase, lepra, síndrome de choque tóxico, miosite estreptocócica, gangrena gasosa, tuberculose de micobactéria, micobactéria de avium intracelular, pneumonia por pneumociste carínii, doença inflamatória pélvica, orquite/epididimite, legione25 Ia, doença de Lyme, influenza a, vírus de epstein-barr, síndrome hemafagocítica viral associada, encefalite viral/meningite asséptica, e outras.

A presente invenção também provê um método para modular ou uma de: leucemia, leucemia aguda, leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia linfocítica aguda, ALL de célula B, célula T ou de FAB, leucemia mielóide aguda (AML), leucemia mielogenosa aguda, leucemia mielocítica crôtratar pelo menos uma doença maligna relacionada IL-23 em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente, incluindo, mas não limitada a, pelo menos

nica (CML), leucemia línfocítica crônica (CLL), leucemia de céiula pilosa, síndrome mielodisplástica (MDS), um linfoma, doença de Hodgkin, um Irnfoma maligno, linfoma de não-hodgkin, linfoma de Burkitt, mieloma múltiplo, sarcoma de Kaposí, carcinoma colorretal, carcinoma pancreático, carcinoma 5 de nasofaringeano, histiocitose maligna, síndrome paraneoplástica/hipercalcemia de malignidade, tumores sólidos, câncer de bexiga, câncer de mama, câncer colorretal, câncer de endometrial, câncer de cabeça, câncer de pescoço, câncer de nâo-polipose hereditária, linfoma de Hodgkin, câncer de fígado, câncer do pulmão, câncer do pulmão de célula não-pequena, 10 câncer ovariano, câncer pancreático, câncer de próstata, carcinoma de célula renai, câncer testicular, adenocarcinomas, sarcomas, melanoma maligno, hemangioma, doença metastática, ressorção óssea relacionada a câncer, dor óssea relacionada a câncer, e outras.

A presente invenção também provê um método para modular ou tratar pelo menos uma doença neurológica relacionada a IL-23 em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente, incluindo, mas não limitada a, pelo menos uma de: doenças neurodegenerativas, esclerose múltipla, dor de cabeça de enxaqueca, complexo de demência de AIDS, doenças desmielinizantes, como esclerose múltipla e mielite transversal aguda; distúrbios ex20 trapiramidais e cerebelares, como lesões do sistema corticoespinhal; distúrbios dos gânglios basais; distúrbios de movimento hipercinético, como o Coréia de Huntington e coréia senil; distúrbios de movimento induzidos por fármaco, como aqueles induzidos por fármacos que bloqueiam receptores de dopamina do CNS; distúrbios de movimento hipocinético, como doença de Parkinson; paralisia de supranúcleo progressiva; lesões estruturais do cerebelo; degenerações espinocerebelares, como ataxia espinhal, ataxia de Friedreich, degenerações corticais cerebelares, degenerações de sistemas múltiplos (Mencel, Dejerine-Thomas, Shi-Drager, e Machado-Joseph); distúrbios sistêmicos (doença de Refsum, abetalipoprotemia, ataxia, telangiec30 tasia, e distúrbio de multi-sistema mitocondrial); distúrbios de núcleos desmielinizantes, como esclerose múltipla, mielite transversal aguda; e distúrbios da unidade motora, como atrofias musculares neurogênicas (degenera-

ção de célula de corno anterior, como esclerose lateral amiotrófica, atrofia muscular espinhal infantil e atrofia muscular espinhal juvenil); doença de Alzheímer; Síndrome de Down em meia-idade; Doença difusa de corpos de Lewy; Demência Senil do tipo corpos de Lewy; síndrome de Wernicke-

Korsakoff; alcoolismo crônico; doença de Creutzfeldt-Jakob; panencefalite esclerosante subaguda, doença de Hallerrorden-Spatz; Demência pugilística; lesão neurotraumática (por exemplo, lesão de espinha dorsal, lesão de cérebro, choque, choque repetitivo); dor; dor inflamatória; autismo; depressão; acidente vascular cerebral; distúrbios cognitivos; epilepsia; e similares.

Um tal método pode opcionalmente compreender administrar uma quantidade eficaz de uma composição ou composição farmacêutica compreendendo pelo menos um anticorpo de TNF ou porção especificada ou variante a uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente em necessidade de tal modulação, tratamento ou terapia. Vide, por exemplo, Merck Manual, 16- Edição, Merck 15 & Company, Rahway, NJ (1992).

A presente invenção também provê um método para modular ou tratar pelo menos uma ferida, trauma ou lesão de tecido relacionada a IL-23,

ou condição crônica relacionada, em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente, incluindo, mas não limitada a, pelo menos uma de: lesão corporal 20 ou um trauma associado à cirurgia oral incluindo cirurgia peridental, extração(Ões) de dente, tratamento endodôntico, inserção de implantes de dente, aplicação e uso de prótese de dente; ou em que a ferida é selecionada do grupo que consiste em feridas assépticas, feridas contusadas, feridas incisas, feridas laceradas, feridas não-penetrantes, feridas abertas, feridas pe30 herpes.

Feridas e/ou úlceras são normalmente encontradas protraindose da pele ou em uma superfície mucosa ou como resultado de uma infarta25 netrantes, feridas perfurantes, feridas puntiformes, feridas sépticas, infartações e feridas subcutâneas; ou em que a ferida é selecionada do grupo que consiste em úlceras isquêmicas, chagas de pressão, fístulas, mordidas severas, queimaduras térmicas e feridas no sítio de doador; ou em que a ferida é uma ferida aftosa, uma ferida traumática ou uma ferida associada a

ção em um órgão (acidente vascular cerebral). Uma ferida pode ser um resultado de um defeito de tecido macio ou uma lesão ou de uma condição subjacente. No contexto presente, o termo pele diz respeito à superfície mais externa do corpo de um animal, incluindo um ser humano, e abrange 5 pele intacta ou quase intacta como também uma superfície de pele ferida. O termo mucosa diz respeito à mucosa não danificada ou estragada de um animal, como um ser humano, e pode ser a mucosa oral, bucal, auricular,

nasal, pulmonar, olho, gastrointestinal, vaginal, ou retal.

No contexto presente o termo ferida denota uma lesão corporal com rompimento da integridade normal das estruturas do tecido. O termo é também intencionado abranger os termos chaga, lesão, necrose, e úlcera, Normalmente, o termo chaga é um termo popular para quase qualquer lesão da pele ou membranas mucosas e o termo úlcera é um defeito

local, ou escavação, da superfície de um órgão ou tecido, que é produzida 15 mudando de tecido necrótico. Lesão em geral diz respeito a qualquer defeito de tecido. Necrose está relacionada ao tecido morto que é o resultado de infecção, lesão, inflamação ou infartações.

O termo ferida usado no contexto presente denota qualquer ferida (vide abaixo para uma classificação de feridas) e a qualquer estágio 20 particular no processo curativo, incluindo o estágio antes de qualquer cura ter iniciado ou mesmo antes de uma ferida específica como uma incisão cirúrgica ser feita (tratamento profiláctico). Exemplos de feridas que podem ser impedidas e/ou tratadas de acordo com a presente invenção são, por exemplo, feridas assépticas, feridas contusadas, feridas incisas, feridas la25 ceradas, feridas não-penetrantes (isto é, feridas em que hão nenhum rompimento da pele mas hão lesão da estruturas subjacentes), feridas abertas, feridas penetrantes, feridas perfurantes, feridas puntiformes, feridas sépticas, feridas subcutâneas, etc. Exemplos de chagas são chagas de leito, chagas bucais, chagas de cromo, chagas frias, chagas de pressão, etc. E30 xemplos de úlceras são, por exemplo, uma úlcera péptica, úlcera duodenal, úlcera gástrica, úlcera gotosa, úlcera diabética, úlcera isquêmica hipertensiva, úlcera de estase, ulcus cruris (úlcera venosa), úlcera sublingual, úlcera

submucosa. úlcera sintomática, úlcera trófica, úlcera tropical, e úlcera venérea, por exemplo, causada por gonorréia (incluindo uretrite, endocervicite e proctite). Condições relacionadas às chagas ou feridas que podem ser de forma bem sucedida tratadas de acordo com a invenção são queimaduras, 5 antraz, tétano, gangrena gasosa, escarlatina, erisipelas, sicose da barba, foliculite, impetigo contagioso, ou impetigo bolhoso, etc. Há frequentemente uma certa sobreposição entre o uso dos termos ferida e úlcera e ferida

e chaga e, além disso, os termos são frequentemente usados ao acaso. Portanto, como mencionado acima, no contexto presente o termo ferida 10 abrange os termos úlcera, lesão, chaga e infartação, e os termos são indiscriminadamente usados a menos que do contrário indicado.

Os tipos de feridas a ser tratadas de acordo com a invenção incluem também (í) feridas gerais, como, por exemplo, feridas cirúrgicas, traumáticas, infecciosas, isquêmicas, térmicas, químicas e bolhosa; (ii) ferr15 das específicas para a cavidade oral, como, por exemplo, feridas pósextraçâo, feridas endodônticas especialmente com relação a tratamento de cistos e abscessos, úlceras e lesões de origem bacteriana, viral ou autoimunológica, feridas mecânicas, químicas, térmicas, infecciosas e liquenóides;

úlceras de herpes, estomatite aftosa, gengivite ulcerativa necrosante aguda e síndrome de boca ardente são exemplos específicos; e (iii) ferida na pele, como, por exemplo, neoplasma, queima (por exemplo químico, térmico), lesões (bacterianas, virais, autoimunológicas), mordidas e incisões cirúrgicas.

Outro modo de classificar as feridas é como (i) perda de tecido pequena devido a incisões cirúrgicas, abrasões secundárias e mordidas menores, ou 25 como (ii) perda de tecido significativa. O grupo posterior inclui úlceras isquêmicas, chagas de pressão, fístulas, dilacerações, mordidas severas, queimaduras térmicas e feridas de sítio de doador (em tecidos macios e duros) e infartações.

Outras feridas que são de importância com relação à presente 30 invenção são feridas como úlceras isquêmicas, chagas de pressão, fístulas, mordidas severas, queimaduras térmicas e feridas de sítio de doador. Úlceras isquêmicas e chagas de pressão são feridas que normalmente apenas

curam muito lentamente e especialmente em tais casos, um processo melhorado e curativo mais rápido é, claro, de grande importância para o paciente. Além disso, os custos envolvidos no tratamento de pacientes que sofrem de tais feridas são notadamente reduzidos quando a cura é melhorada e 5 ocorre mais rapidamente.

Feridas de sítio de doador são feridas que, por exemplo, ocorrem com relação à remoção de tecido duro de uma parte do corpo para ou-

tra parte do corpo, por exemplo, com relação à transplantação. As feridas que são o resultado de tais operações são muito dolorosas e uma cura me10 Ihorada é portanto muito valiosa. O termo pele é usado em um sentido muito vasto que abrange a camada epidérmica da pele e - naqueles casos onde a superfície de pele está mais ferida - também a camada dérmica da pele. Além do estrato córneo, a camada epidérmica da pele é a camada externa (epitelial) e a camada de tecido conjuntivo mais profunda da pele é 15 chamada a derme.

A presente invenção também provê um método para modular ou tratar psoríase, artrite psoriática, doença de Crohn, esclerose múltipla, e neurite ótica, entre as outras doenças listadas acima como relacionadas a

IL-23, em uma célula, tecido, órgão, animal, ou paciente incluindo, mas não20 limitadas a, pelo menos uma de doença relacionada imune, doença cardiovascular, infecciosa, maligna e/ou doença neurológica. Um tal método pode opcionalmente compreender administrar uma quantidade eficaz de pelo menos uma composição ou composição farmacêutica compreendendo pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 para uma célula, tecido, órgão, animal 25 ou paciente em necessidade de tal modulação, tratamento ou terapia.

Qualquer método da presente invenção pode compreender administrar uma quantidade eficaz de uma composição ou composição farmacêutica compreendendo pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 a uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente em necessidade de tal modulação, 30 tratamento ou terapia. Um tal método pode opcionalmente também compreender co-administração ou terapia de combinação para tratar tais doenças ou distúrbios, em que a administração do dito pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19_; porção especificada ou variante deste, também compreende administrar, antes, simultaneamente, e/ou após, pelo menos um selecionado de pelo menos um antagonista de TNF (por exemplo, mas não limitado a, um TNF químico ou antagonista de proteína, anticorpo de TNF monoclonal ou policlonal ou fragmento, um receptor de TNF solúvel (por exemplo, p55, p70 ou p85) ou fragmento, polipeptídeos de fusão destes, ou um antagonista de TNF de molécula pequena, por exemplo, Proteína Ligadora de TNF I ou II (TBP-1 ou TBP-ll), nerelimonmab, infliximab, etanorcept (Enbrel™), adalimulab (Humira™), CDP-571, CDP-870, afelimomab, lenercept, e similares), um anti-reumático (por exemplo, metotrexato, auranofin, aurotioglicose, azatioprina, tiomalato de sódio de ouro, sulfato de hidroxicloroquina, leflunomida, sulfasalzina), um relaxante muscular, um narcótico, um fármaco antiinflamatório não-esteróide (NSAID), um analgésico, um anestésico, um sedativo, uma anestesia local, um bloqueador neuromuscular, um antimícrobiano (por exemplo, aminoglicosida, um antifúngico, um antiparasitário, um antiviral, um carbapenem, cefalosporina, uma flurorquinolona, uma macrolída, uma penicilina, uma sulfonamida, uma tetraciclina, outro antimicrobiano), um antipsoriático, um corticosteróide, um esteróide anabólico, um agente relacionado a diabetes, um mineral, um nutricional, um agente da tireóide, uma vitamina, um hormônio relacionado a cálcio, um antidiarréico, um antitussivo, um antiemético, um antiúlcera, um laxante, um anticoagulante, uma eritropoietina (por exemplo, epoetina alfa), um filgrastim (por exemplo, GCSF, Neupogen), um sargramostim (GM-CSF, Leukine), uma imunização, uma imunoglobulina, um imunossupressor (por exemplo, basiliximab, ciclosporina, daclizumab), um hormônio de crescimento, um fármaco de substituição de hormônio, um modulador de receptor de estrogênio, um midriático, um cicloplégico, um agente de alquilação, um antimetabólito, um inibidor mitótico, um radiofarmacêutico, um antidepressivo, agente antimaníaco, um antipsicótico, um anxiolítico, um hipnótico, um simpatomimétíco, um estimulante, donepezil, tacrina, uma medicação de asma, um agonista beta, um esteróide inalado, um inibidor de leucotrieno, uma metilxantina, uma cromolina, uma epinefrina ou análogo, dornase alfa (Pulmozyme), uma citocina ou

um antagonista de citocina. Dosagens adequadas são bem-conhecidas na técnica. Vide, por exemplo, Wells et al., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2^â Edição, Appleton e Lange, Stamford, CT (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Edição Deluxe, Tarascon Publi5 shing, Loma Linda, CA (2000); Nursing 2001 Handbook of Drugs, 21- edição, Springhouse Corp., Springhouse, PA, 2001; Health Professional's Drug

Guide 2001, ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle

River, NJ, cada uma destas referências é completamente incorporada aqui por referência.

Antagonistas de TNF adequados para composições, terapia de combinação, co-administração, dispositivos e/ou métodos da presente invenção (adicionalmente compreendendo pelo menos um anticorpo, porção especificada e variante deste, da presente invenção), incluem, mas não são limitados, anticorpos de anti-TNF (por exemplo, pelo menos um antagonista de TNF como definido acima), fragmento de ligação de antígenos destes, e moléculas de receptor que especificamente ligam a TNF; compostos que impedem e/ou inibem síntese de TNF, liberação de TNF ou sua ação em células alvos, como talidomida, tenidap, inibidores de fosfodiesterase (por exemplo, pentoxifilina e rolipram), agonistas de receptor de adenosina de

A2b e intensificadores de receptor de adenosina de A2b; compostos que impedem e/ou inibem sinalização de receptor de TNF, como inibidores de proteína cinase ativada por mitógeno (MAP); compostos que bloqueiam e/ou inibem divagem de membrana de TNF, como inibidores de metaloproteina se; compostos que bloqueiam e/ou inibem a atividade de TNF, como inibido25 res de enzima de conversão de angiotensina (ACE) (por exemplo, captopril); e compostos que bloqueiam e/ou inibem a produção de TNF e/ou síntese, como inibidores de MAP cinase.

Como aqui usado, um anticorpo de fator de necrose tumoral, anticorpo de TNF, anticorpo de TNFa, ou fragmento e similares diminui, 30 bloqueia, inibe, ab-roga ou interfere com a atividade de TNFa in vitro, in situ e/ou, preferivelmente, in vivo. Por exemplo, um anticorpo humano de TNF adequado da presente invenção pode ligar TNFa e inclui anticorpos de anti-

TNF, fragmentos de ligação de antígeno destes, e mutantes ou domínios especificados destes que especificamente ligam a TNFa. Um anticorpo de TNF adequado ou fragmento pode também diminuir, bloquear, ab-rogar, interferir, impedir e/ou inibir a síntese de RNA, DNA ou de proteína de TNF, 5 liberação de TNF, sinalização de receptor de TNF, divagem de TNF de membrana, atividade de TNF, produção e/ou síntese de TNF.

Um exemplo de um anticorpo de TNF ou antagonista é o anticorpo quimérico cA2. Exemplos adicionais de anticorpos de anti-TNF mono-

clonais que podem ser usados na presente invenção são descritos na técni10 ca (vide, por exemplo, Patente U. S. No. 5.231.024; Mõller, A., et al., Cytoki-

ne 2(3):162-169 (1990); Pedido de Patente U. S. No. 07/943.852 (depositado em 11 de setembro de 1992); Rathjen et al., Publicação Internacional No. WO 91/02078 (publicada em 21 de fevereiro de 1991); Rubin et al., Publicação de Patente de EPO No. 0 218 868 (publicada em 22 de abril de 1987);

Yone et al., Publicação de Patente de EPO No. 0 288 088 (26 de outubro de 1988); Liang, et al., Biochem. Biofis. Fies. Comm. 137:847-854 (1986); Meager, et al., Hybrídoma 6:305-311 (1987); Fendly et al., Hybrídoma 6:359-369 (1987); Bringman, et al., Hybrídoma 6:489-507 (1987); e Hirai, et al., J. Immunol. Met. 96:57-62 (1987).

MOLÉCULAS DE RECEPTOR DE TNF

Moléculas de receptor de TNF preferidas úteis na presente invenção são aquelas que ligam TNFa com afinidade alta (vide, por exemplo, Feldmann et al., Publicação Internacional No. WO 92/07076 (publicada em 30 de abril de 1992); Schall et al., Cell61:361-370 (1990); e Loetscher et al., 25 Cell 61:351-359 (1990) cujas referências são completamente incorporadas aqui por referência) e opcionalmente possuem baixa imunogenicidade. Em particular, os receptores de superfície de célula de TNF de 55 kDa (TNF-R de p55) e de 75 kDa (TNF-R de p75) são úteis na presente invenção. Formas truncadas destes receptores, compreendendo os domínios extracelula30 res (ECD) dos receptores ou porções funcionais destes (vide, por exemplo,

Corcoran et al., Eur. J. Biochem. 223:831-840 (1994)), são também úteis na presente invenção. Formas truncadas dos receptores de TNF, compreen

dendo ECD, foram detectadas em urina e soro como inibidores de proteínas ligadoras de TNFa de 30 kDa e 40 kDa (Engelmann, H., et al., J. Biol. Chem. 265:1531-1536 (1990)). Moléculas multiméricas de receptor de TNF e moléculas de fusão de imunorreceptor de TNF, e derivados e fragmentos ou porções destas, são exemplos adicionais de moléculas de receptor de TNF que são úteis nos métodos e composições da presente invenção.

Moléculas multiméricas de receptor de TNF úteis na presente invenção compreendem todo ou uma porção funcional do ECD de dois ou mais receptores de TNF ligados por meio de um ou mais ligantes de polipeptídeo ou outros ligantes não-peptídicos, como polietileno glicol (PEG). Um exemplo de uma tal molécula de fusão de imunorreceptor de TNF é proteína de fusão de receptor/lgG de TNF. Moléculas de fusão de imonorreceptor de TNF e métodos para sua produção foram descritos na técnica (Lesslauer et al., Eur. J. Immunol. 2/:2883-2886 (1991); Ashkenazi et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 85:10535-10539 (1991); Peppel et a!., J. Exp. Med. /74:14831489 (1991); Kolls et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 9/:215-219 (1994); Butler et al., Cytokine 6(6):616-623 (1994); Baker et ai., Eur. J. Immunol. 24:2040-2048 (1994); Beutler et al., Patente U. S. No. 5.447.851; e Pedido de Patente U. S. No. 08/442.133 (depositado em 16 de maio de 1995), cada uma destas referências são completamente incorporadas aqui por referência). Métodos para produzir moléculas de fusão de imunorreceptor podem também ser encontrados em Capon et al., Patente U.S. No. 5.116.964; Capon et ai., Patente U. S. No. 5.225.538; e Capon et al., Nature 337:525-531 (1989), cujas referências são completamente incorporadas aqui por referência.

Citocinas incluem qualquer citocina conhecida. Vide, por exemplo, CopewithCitokines.com. Antagonistas de citocina incluem, mas não são limitados a, qualquer anticorpo, fragmento ou mimético, qualquer receptor solúvel, fragmento ou mimético, qualquer antagonista de molécula pequena, ou qualquer combinação destes.

TRATAMENTOS TERAPÊUTICOS

Qualquer método da presente invenção pode compreender um

método para tratar um distúrbio mediado por iL-23, compreendendo administrar uma quantidade eficaz de uma composição ou composição farmacêutica compreendendo pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 a uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente em necessidade de tal modulação, 5 tratamento ou terapia. Um tal método pode opcionalmente também compreender co-administração ou terapia de combinação para tratar tais doenças ou distúrbios, em que a administração do dito pelo menos um anticorpo de

anti-IL-23p19, porção especificada ou variante deste, também compreende administrar antes, simultaneamente, e/ou após, pelo menos um selecionado 10 de um fármaco antiinfeccioso, um fármaco do sistema cardiovascular (CV), um fármaco do sistema nervoso central (CNS), um fármaco do sistema nervoso autonômico (ANS), um fármaco do trato respiratório, um fármaco do

trato gastrointestinal (GI), um fármaco hormonal, um fármaco para equilíbrio de fluido ou de eletrólito, um fármaco hematológico, um antineoplástico, um 15 fármaco de imunomodulação, um fármaco oftálmico, ótico ou nasal, um fármaco tópico, um fármaco nutricional ou outros, pelo menos um antagonista de TNF (por exemplo, mas não limitado a um anticorpo de TNF ou fragmento, um receptor de TNF solúvel ou fragmento, proteínas de fusão deste, ou um antagonista de TNF de molécula pequena), um anti-reumático (por e20 xemplo, metotrexato, auranofina, aurotioglicose, azatioprina, etanorcept, tiomalato de sódio de ouro, sulfato de hidroxicloroquina, leflunomida, sulfasalzina), um relaxante muscular, um narcótico, um fármaco antiinflamatório não-esteróide (NSAID), um analgésico, um anestésico, um sedativo, uma anestesia local, um bloqueador neuromuscular, um antimicrobiano (por e xemplo, aminoglicosida, um antifúngico, um antiparasitário, um antiviral, um emético, um antiúlcera, um laxante, um anticoagulante, uma eritropoietína (por exemplo, epoetina alfa), um filgrastim (por exemplo, G-CSF, Neupocarbapenem, cefalosporina, um flurorquinolona, uma macrolida, uma penicilina, uma sulfonamida, uma tetraciclina, outro antimicrobiano), um antipsoriático, um corticosteróide, um esteróide anabólico, um agente relacionado a diabetes, um mineral, um nutricional, um agente da tireóide, uma vitamina, um hormônio relacionado a cálcio, um antidiarréico, um antitussivo, um anti-

gen), um sargramostim (GM-CSF, Leukine), uma imunização, uma imunoglobulina, um imunossupressor (por exemplo, basiliximab, ciclosporina, daclizumab), um hormônio de crescimento, um fármaco de substituição hormonal, um modulador de receptor de estrogênio, um midriático, um cicloplé5 gico, um agente de alquilação, um antimetabólito, um inibidor mitótico, um radiofarmacêutico, um antidepressivo, agente antimaníaco, um antipsícótico, um anxiolítico, um hipnótico, um simpatomimético, um estimulante, donepe-

zil, tacrina, uma medicação de asma, um agonista beta, um esteróide inalado, um inibidor de leucotrieno, uma metilxantina, uma cromolina, uma epine10 frina ou análogo, dornase alfa (Pulmozyme), uma citocina ou um antagonista de citocina. Tais fármacos são bem-conhecidos na técnica, incluindo formulações, indicações, doseamento e administração para cada um apresentados aqui (vide, por exemplo, Nursing 2001 Handbook of Drugs, 21- edição, Springhouse Corp., Springhouse, PA, 2001; Health Professional's Drug Gui15 de 2001, ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle River, NJ; Pharmacotherapy Handbook, Wells et al., ed., Appleton & Lange, Stamford, CT, cada uma completamente incorporada aqui por referência).

Tipicamente, tratamento de condições patológicas é realizado administrando uma quantidade ou dosagem eficaz de pelo menos uma 20 composição de anticorpo anti-IL-23p19 que uma faixa total, em média, de pelo menos cerca de 0,01 a 500 miligramas de pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 por quilograma de paciente por dose, e, preferivelmente, de pelo menos cerca de 0,1 a 100 miligramas de anticorpo/quilograma de paciente por administração simples ou múltipla, dependendo da atividade espe25 cífica do agente ativo contido na composição. Alternativamente, a concentração de soro eficaz pode compreender 0,1-5000 pg/ml de concentração de soro por administração simples ou múltipla. Dosagens adequadas são conhecidas aos médicos e, claro, dependerão do estado de doença particular, atividade específica da composição sendo administrada, e do paciente parti30 cular que passa pelo tratamento. Para alcançar a quantidade terapêutica desejada, pode ser necessário prover administração repetida em algumas circunstâncias, isto é, administrações individuais repetidas de uma dose par

ticular monitorada ou medida onde as administrações individuais são repetidas até a dose diária desejada ou efeito ser alcançado.

Doses preferidas podem opcionalmente incluir cerca de 0,1-99 e/ou 100-500 mg/kg/administração, ou qualquer faixa, valor ou fração desta, 5 ou para alcançar uma concentração de soro de cerca de 0,1-5000 pg/ml de

concentração de soro por administração simples ou múltipla, ou qualquer faixa, valor ou fração desta. Uma faixa de dosagem preferida para o anticorpo de anti-IL-23p19 da presente invenção é de cerca de 1 mg/kg, até cerca de 3, cerca de 6 ou cerca de 12 mg/kg de peso do corpo do paciente.

Alternativamente, a dosagem administrada pode variar, dependendo de fatores conhecidos, como as características farmacodinâmicas do agente particular, e seu modo e rota de administração; idade, saúde, e peso do recipiente; natureza e extensão dos sintomas, tipo de tratamento simultâneo, frequência de tratamento, e o efeito desejado. Usualmente uma do15 sagem de ingrediente ativo pode ser cerca de 0,1 a 100 miligramas por quilograma de peso do corpo. Ordinariamente 0,1 a 50, e, preferivelmente, 0,1 r a 10 miligramas por quilograma por administração ou em forma de liberação contínua é eficaz para obter resultados desejados.

Como um exemplo não-limitativo, tratamento de humanos ou animais pode ser fornecido como uma dosagem única ou periódica de pelo menos um anticorpo da presente invenção cerca de 0,1 a 100 mg/kg ou qualquer faixa, valor ou fração desta por dia, em pelo menos um de dia 1 40, ou, alternativa ou adicionalmente, pelo menos um de semana 1-52, ou, alternativa ou adicionalmente, pelo menos um de 1-20 anos, ou qualquer 25 combinação destas, usando infusão simples, ou doses repetidas.

Formas de dosagem (composição) adequadas para administração interna em geral contêm de cerca de 0,001 miligrama a cerca de 500 miligramas de ingrediente ativo por unidade ou recipiente. Nestas composições farmacêuticas o ingrediente ativo ordinariamente estará presente em 30 uma quantidade de cerca de 0,5-99,999 % em peso com base no peso total da composição.

Para administração parenteral, o anticorpo pode ser formulado

como uma solução, suspensão, emulsão, partícula, pó, ou pó liofilizado em associação, ou separadamente fornecido, com um veículo parenteral farmaceuticamente aceitável. Exemplos de tais veículos são água, solução salina, solução de Ringer, solução de dextrose, e cerca de 1-10 % albumina de so5 ro humano. Lipossomas e veículos não-aquosos, como óleos fixos, podem também ser usados. O veículo ou pó liofilizado pode conter aditivos que mantêm isotonicidade (por exemplo, cloreto de sódio, manitol) e estabilidade

química (por exemplo, tampões e conservantes). A formulação é esterilizada através de técnicas conhecidas ou adequadas.

Veículos farmacêuticos adequados são descritos na mais recente edição de Remington’s Pharmaceutical Sciences, A. Osol, um texto de referência padrão neste campo.

ADMINISTRAÇÃO ALTERNATIVA

Muitos modos conhecidos e desenvolvidos podem ser usados de acordo com a presente invenção para administrar quantidades farmaceuticamente eficazes de pelo menos um anticorpo de anti-IL-23pl9 de acordo com a presente invenção. Embora administração pulmonar seja usada na descrição a seguir, outros modos de administração podem ser usados de acordo com a presente invenção com resultados adequados. Anticorpos de

IL-23pl9 da presente invenção podem ser liberados em veículo, como uma solução, emulsão, colóide, ou suspensão, ou como um pó seco, usando qualquer de uma variedade de dispositivos e métodos adequados para ad ministração por inalação ou outros modos descritos aqui dentro ou conhecidos na técnica.

FORMULAÇÕES E ADMINISTRAÇÃO PARENTERAIS

Formulações para administração parenteral podem conter como excipientes comuns água estéril ou solução salina, polialquileno glicóis, como polietileno glicol, óleos de origem vegetal, naftalenos hidrogenados e similares. Suspensões aquosas ou oleosas para injeção podem ser prepa30 radas usando um emulsificante ou umidificante apropriado e um agente de suspensão, de acordo com os métodos conhecidos. Agentes para injeção podem ser um agente diluente não-tóxico, não-oralmente administrável, co-

mo solução aquosa, uma solução ou suspensão injetável estéril em um solvente. Como o veículo utilizável ou solvente, água, solução de Ringer, solução salina isotônica, etc. são permitidos; como um solvente usual ou solvente suspensor, pode ser usado óleo não-volátil estéril. Para estes propósitos, 5 qualquer tipo de óleo não-volátil e ácido graxo pode ser usado, incluindo óleos graxos ou ácidos graxos naturais ou sintéticos ou semi-sintéticos; mono- ou di- ou trí-glicerídeos naturais ou sintéticos ou semi-sintéticos. Administração parental é conhecida na técnica e inclui, mas não é limitada a, meios convencionais de injeções, uma injeção de menos agulha pressuriza10 da a gás como descrita na Pat. U. S. No. 5.851.198, e um dispositivo perfurador a laser como descrito na Pat. U. S. No. 5.839.446 completamente incorporada aqui por referência.

LIBERAÇÃO ALTERNATIVA

A invenção também diz respeito à administração de pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 por meios parenterais, subcutâneos, intramusculares, intravenosos, intra-articulares, intrabronquiais, intra-abdominais, intracapsulares, intracartilaginosos, intracavitários, intraceiiais, intracerebelares, intracerebroventriculares, intracólicos, intracervicais, intragástricos, intra-hepáticos, intramiocárdicos, intra-osteais, intrapélvicos, intrapericardía20 cos, intraperitoneais, intrapleurais, intraprostáticos, inírapulmonares, intrarretais, intrarrenais, intrarretinais, intra-espinhais, intrassinoviais, intratorácicos, intra-uterinos, intravesicais, intralesionais, bolus, vaginais, retais, bucais, sublinguais, intranasais, ou transdérmicos. Pelo menos uma composição de anticorpo de antí-IL-23p19 pode ser preparada para uso para administração 25 parenteral (subcutânea, intramuscular ou intravenosa) ou qualquer outra nasais ou aerossóis ou certos agentes; ou transdermicamente, como não limitados a um gel, ungüento, loção, suspensão ou sistema de liberação de particularmente na forma de soluções ou suspensões líquidas; para uso em administração vaginal ou retal particularmente em formas semi-sólidos, como, mas não limitados a, cremes e supositórios; para administração bucal, ou sublingual, como, mas não limitados a, na forma de comprimidos ou cáp30 sulas; ou intranasalmente, como, mas não limitados a, a forma de pós, gotas emplasto com intensificadores químicos como sulfóxido de dimetila para modificar a estrutura da pele ou aumentar a concentração de fármaco no emplasto transdérmico (Junginger, et al. Em Crug Permeation Enhancement; Hsieh, D. S., Eds., págs. 59-90 (Marcei Dekker, Inc. Nova Iorque 5 1994, completamente incorporada aqui por referência), ou com agentes oxidantes que permitem a aplicação de formulações contendo proteínas e peptídeos sobre a pele (WO 98/53847), ou aplicações de campos elétricos para

criar vias de transporte transientes, como eletroporação, ou para aumentar a mobilidade dos fármacos carregados através da pele, como iontoforese, ou 10 aplicação de ultra-som, como sonoforese (Pats. U. S. Nos. 4.309.989 e

4.767.402) (as publicações e patentes acima sendo completamente incorporadas aqui por referência).

ADMINISTRAÇÃO PULMONAR/NASAL

Para administração pulmonar, preferivelmente, pelo menos uma 15 composição de anticorpo de anti-IL-23p19 é liberada em um tamanho de partícula eficaz para alcançar as vias aéreas inferiores do pulmão ou seíos. De acordo com a invenção, pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 pode ser liberado por qualquer de uma variedade de inalação ou dispositivos nasais conhecidos na técnica para administração de um agente terapêutico 20 através de inalação. Estes dispositivos capazes de depositar formulações aerosolizadas na cavidade dos seios ou alvéolos de um paciente incluem inaladores de dose medida, nebulizadores, geradores de pó secos, pulverizadores, e similares. Outros dispositivos adequados para direcionar a administração pulmonar ou nasal de anticorpos são também conhecidos na téc25 nica. Todos tais dispositivos podem usar formulações adequadas para a administração dispensando o anticorpo em um aerossol. Tais aerossóis podem ser compreendidos de quaisquer soluções (tanto aquosas como não aquosas) ou partículas sólidas.

Inaladores de dose medida como o inalador de dose medida

Ventolin®, tipicamente usam um gás propulsor e requerem atuação durante a inspiração (Vide, por exemplo, WO 94/16970, WO 98/35888). Inaladores de pó seco como Turbuhaler® (Astra), Rotahaler® (Glaxo), Diskus® (Glaxo),

inalador de Spiros® (Dura), dispositivos comercializados por Inalam Therapeutics, e o inalador de pó de Spinhaler® (Fisons), usam atuação de respiração de um pó misturado (US 4668218 Astra, EP 237507 Astra, WO 97/25086 Glaxo, WO 94/08552 Dura, US 5458135 Inhale, WO 94/06498 5 Fisons, completamente incorporados aqui por referência). Nebulizadores como AERx® Aradigm, o nebulizador de Ultravent® (Mallinckrodt), e o nebulizador de Acorn II® (Marquest Medicai Products) (US 5404871 Aradigm, WO

97/22376), as referências acima completamente incorporadas aqui por referência, produzem aerossóis de soluções, inaladores de dose medida, inala10 dores de pó seco, etc. geram aerossóis de partícula pequena. Estes exemplos específicos de dispositivos de inalação comercialmente disponíveis são intencionados ser um representativo dos dispositivos específicos adequados para a prática desta invenção, e não são intencionados a limitar o escopo da invenção.

Preferivelmente, uma composição compreendendo pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 é liberada por um inalador de pó seco ou um pulverizador. Há várias características desejáveis de um dispositivo de inalação para administrar pelo menos um anticorpo da presente invenção. Por exemplo, liberação pelo dispositivo de inalação é vantajosamente segura, reprodutível, e precisa. O dispositivo de inalação pode opcionalmente liberar partículas secas pequenas, por exemplo, menores que cerca de 10 gm, preferivelmente cerca de 1-5 qm, para respirabilídade boa.

ADMINISTRAÇÃO DE COMPOSIÇÕES DE ANTICORPO DE IL-23p19 COMO UMA PULVERIZAÇÃO

Uma pulverização incluindo composição de anticorpo de IL23p19 pode ser produzida forçando uma suspensão ou solução de pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 através de um bico sob pressão. O tamanho e configuração do bico, a pressão aplicada, e a taxa de alimentação líquida podem ser selecionados para alcançar a saída e tamanho desejados 30 da partícula. Uma eletropulverização pode ser produzida, por exemplo, por um campo elétrico com relação a um vaso capilar ou alimentação de bico. Vantajosamente, partículas de pelo menos uma composição de anticorpo de

anti-IL-23pl 9 liberada por um pulverizador têm um tamanho de partícula menor que cerca de 10 gm, preferivelmente, na faixa de cerca de 1 pm a cerca de 5 pm, e, o mais preferivelmente, cerca de 2 pm a cerca de 3 pm.

Formulações de pelo menos uma composição de anticorpo de 5 anti-IL-23p19 adequada para o uso com um pulverizador tipicamente incluem composição de anticorpo em uma solução aquosa a uma concentração de cerca de 0,1 mg a cerca de 100 mg de pelo menos uma composição de

anticorpo de anti-lL-23p19 por ml de solução ou mg/gm, ou qualquer faixa, valor, ou fração nela. A formulação pode incluir agentes, como um excipien10 te, um tampão, um agente de isotonicidade, um conservante, um tensoativo, e, preferivelmente, zinco. A formulação pode também incluir um excipiente ou agente para estabilização da composição de anticorpo, como um tampão, um agente redutor, uma proteína de volume, ou um carboidrato. Proteínas de volume úteis na formulação das composições de anticorpo incluem albumina, protamina, e similares. Carboidratos típicos úteis na formulação das composições de anticorpo incluem sacarose, manitol, lactose, trealose, glicose, e similares. A formulação de composição de anticorpo pode também incluir um tensoativo que pode reduzir ou impedir agregação induzida por superfície da composição de anticorpo causada por atomização da solução 20 formando um aerossol. Vários tensoativos convencionais, como ésteres e alcoóis de ácido graxo de polioxietileno, e ésteres de ácido graxo de sorbitol de polioxietileno, podem ser empregados. Quantidades em geral variarão entre 0,001 e 14 % em peso da formulação. Tensoativos especialmente preferidos para os propósitos desta invenção são monooleato de sorbitano de 25 polioxietileno, polissorbato 80, polissorbato 20, e similares. Agentes adicionais conhecidos na técnica para formulação de uma proteína, como anticorpos de IL-23p19, ou porções ou variantes especificadas, podem também ser incluídos na formulação.

ADMINISTRAÇÃO DE COMPOSIÇÕES DE ANTICORPO DE IL-23p19 POR

UM NEBULIZADOR

Composições de anticorpo da invenção podem ser administradas por um nebulizador, como nebulizador a jato ou um nebulizador ultra sônico Tipicamente, em um nebulizador a jato, uma fonte de ar comprimido é usada para criar um jato de ar de alta velocidade através de um orifício. À

medida que o gás se expande além do bico, uma região de baixa pressão é criada que extrai uma solução de composição de anticorpo através de um tubo capilar conectado a um reservatório líquido. O fluxo líquido do tubo capilar é cisalhado em filamentos instáveis e gotículas à medida que sai do tubo, criando o aerossol, Uma faixa de configurações, taxas de fluxo, e tipos de abafador podem ser empregados para alcançar as características de desempenho desejadas de um nebulizador de jato dado. Em um nebulizador 10 ultra-sônico, freqüência alta é usada para criar energia elétrica vibratória, energia mecânica, tipicamente empregando um transdutor priezoelétrico. Esta energia é transmitida diretamente à formulação de composição de anticorpo ou através de um fluido de acoplamento, criando um aerossol incluindo a composição de anticorpo. Vantajosamente, as partículas da composi15 ção de anticorpo liberadas por um nebulizador têm um tamanho de partícula menor que cerca de 10 gm, preferivelmente, na faixa de cerca de 1 pm a cerca de 5 pm, e, o mais preferivelmente, cerca de 2 pm a cerca de 3 pm.

Formulações de pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 adequado para o uso com um nebulizador, jato ou ultra-sônico, tipicamente in20 cluem uma concentração de cerca de 0,1 mg a cerca de 100 mg de pelo menos uma proteína de anticorpo de anti-IL-23p19 por ml de solução. A formulação pode incluir agentes, como um excípiente, um tampão, um agente de isotonicidade, um conservante, um tensoativo, e, preferivelmente, zinco. A formulação pode também incluem um excípiente ou agente para esta25 bilização da pelo menos uma composição de anticorpo de anti-lL-23p19, como um tampão, um agente redutor, uma proteína de volume, ou um carboidrato. Proteínas de volume úteis na formulação de pelo menos umas composições de anticorpo anti-IL-23p19 incluem albumina, protamina, ou outras. Carboídratos típicos úteis na formulação de pelo menos um anticor30 po de anti-IL-23p19 incluem sacarose, manitol, lactose, trealose, glicose, ou outros. Pelo menos uma formulação de anticorpo de anti-IL-23p19 pode também incluir um tensoativo que pode reduzir ou impedir agregação indu-

zida por superfície do pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 causada por atomização da solução na formação de um aerossol. Vários tensoativos convencionais podem ser empregados, como ésteres e alcoóis de ácido graxo de polioxietileno, e ésteres de ácido graxo de sorbital de polioxietileno.

Quantidades em geral variarão entre cerca de 0,001 e 4 % em peso da formulação. Tensoativos especialmente preferidos para propósitos desta invenção são monooleato de sorbitano de polioxietileno, polissorbato 80, polissorbato 20, ou outros. Agentes adicionais conhecidos na técnica para formulação de uma proteína, como proteína de anticorpo, podem também ser 10 incluídos na formulação.

ADMINISTRAÇÃO DE COMPOSIÇÕES DE ANTICORPO DE IL-23p19 POR UM INALADOR DE DOSE MEDIDA

Em um inalador de dose medida (MDI), um propulsor, pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19, e quaisquer excipientes ou outros aditi15 vos são contidos em uma lata como uma mistura incluindo um gás comprimido liquidificado. Atuação da válvula dosadora libera a mistura como um aerossol, preferivelmente contendo partículas no tamanho variando de menos que cerca de 10 pm, preferivelmente, cerca de 1 pm a cerca de 5 pm, e, o mais preferivelmente, cerca de 2 pm a cerca de 3 pm. O tamanho de par20 tícula de aerossol desejado pode ser obtido empregando uma formulação de composição de anticorpo produzida por vários métodos conhecidos àqueles versados na técnica, incluindo moagem a jato, secagem por pulverização, condensação de ponto crítico, ou outros. Inaladores de dose medida preferidos incluem aqueles fabricados por 3M ou Glaxo e empregando um propul25 sor de hidrofluorocarbono. Formulações de pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 para uso com um dispositivo inalador de dose medida em geral incluirão um pó finamente dividido contendo pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 como uma suspensão em um meio não-aquoso, por exemplo, suspenso em um propulsor com a ajuda de um tensoativo. O propulsor pode 30 ser qualquer material convencional empregado para este propósito, como clorofluorocarbono, um hidroclorofluorocarbono, um hidrofluorocarbono, ou um hidrocarboneto, incluindo triclorofluorometano, diclorodifluorometano,

diclorotetrafluoroetanol e 1,1,1,2-tetrafluoroetano, HFA-134a (hidrofluroalcano-134a), HFA-227 (hidrofluroalcano-227), ou outros. Preferivelmente, o propulsor é um hidrofluorocarbono. O tensoativo pode ser selecionado para estabilizar Pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 como uma suspensão no propulsor, para proteger o agente ativo contra degradação química, e similares. Tensoativos adequados incluem trioleato de sorbitano, lecitina de

soja, ácido oléico, ou outros. Em alguns casos, aerossóis de solução são preferidos usando solventes, como etanol. Agentes adicionais conhecidos na técnica por formulação de uma proteína podem também ser incluídos na 10 formulação. Alguém versado técnica reconhecerá que os métodos da invenção atuai podem ser alcançados por administração pulmonar de pelo menos uma composição de anticorpo de anti-IL-23p19 por meio de dispositivos não descritos aqui.

FORMULAÇÕES ORAIS E ADMINISTRAÇÃO

Formulações para administração oral contam com a co-administração de adjuvantes (por exemplo, resorcinóis e tensoativos não-iônicos, como éter de oleíla de polioxietileno e éter de n-hexadecilpolietileno) para artificialmente aumentar a permeabilidade das paredes intestinais, como também a co-administração de inibidores enzimáticos (por exemplo, inibido20 res pancreáticos de tripsina, diisopropilfluorofosfato (DFF) e trasilol) para inibir degradação enzimática. Formulações para liberação de agentes hidrófilos incluindo proteínas e anticorpos e uma combinação de pelo menos dois tensoativos intencionados para administração oral, bucal, mucosa, nasal, pulmonar, transmembrana vaginal, ou retal são ensinadas na U. S.

6.309.663. O composto constituinte ativo da forma de dosagem do tipo sólido para administração oral pode ser misturado com pelo menos um aditivo, incluindo sacarose, lactose, celulose, manitol, trealose, rafinose, maltitol, dextrano, amidos, ágar, arginatos, quitinas, quitosanas, pectinas, goma tragacanto, goma arábica, gelatina, colágeno, caseína, albumina, polímero sin30 tético ou semi-sintético, e glicerídeo. Estas formas de dosagem podem também conter outro(s) tipo(s) de aditivos, por exemplo, agente diluente inativo, lubrificante, como estearato de magnésio, parabeno, agente preservante,

como ácido sórbico, ácido ascórbico, alfa- tocoferol, antioxidante como ciste ína, desintegrador, aglutinante, espessante, agente tamponante, agente adoçante, agente aromatizante, agente perfumante, etc.

Comprimidos e pílulas podem ser também processados em pre5 parações revestidas entéricas. As preparações líquidas para administração oral incluem emulsão, xarope, elixir, preparações de suspensão e de solução permissíveis para uso médico. Estas preparações ordinariamente po-

dem conter agentes diluentes inativos usados no dito campo, por exemplo, água. Lipossomas têm também sido descritos como sistemas de liberação de fármaco para insulina e heparina (Pat. U. S. No. 4.239.754). Mais recentemente, microesferas de polímeros artificiais de aminoácidos misturados (proteinóides) foram usadas para liberar farmacêuticos (Pat. U. S. No.

4.925.673). Além disso, os compostos de veículo descritos na Pat. U. S. No.

5.879.681 e Pat. U. S. No. 5.871.753 e usados para oralmente liberar agen15 tes biologicamente ativos são conhecidos na técnica.

FORMULAÇÕES MUCQSAS E ADMINISTRAÇÃO

Uma formulação para oralmente administrar um agente bioativo encapsulado em um ou mais excipientes de polímero ou copolímero biocompatíveis, preferivelmente, um polímero ou copolímero biodegradável, fornecendo microcápsulas que devido ao tamanho apropriado das microcápsulas resultantes resultam no agente alcançando e sendo absorvido pelos folículos linfáticos agregados, do contrário conhecidos como o emplasto de Peyer“, ou GALT do animal sem perda de eficácia devido ao agente tendo passado pelo trato gastrointestinal. Folículos linfáticos agregados similares podem ser encontrados nos tubos dos brônquios (BALT) e no intestino grosso. Os tecidos acima descritos são referidos em geral como tecidos linforreticulares mucosalmente associados (MALT). Para absorção através das superfícies da mucosa, composições e métodos de administrar pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 incluem uma emulsão compreendendo uma pluralidade de partículas de submícron, uma macromolécula mucoadesiva, um peptídeo bioativo, e uma fase contínua aquosa que promovem absorção através das superfícies mucosas alcançando mucoadesão das partículas da emulsão (Pat U. S. No. 5.514.670). Superfícies mucosas adequadas para aplicação das emulsões da presente invenção podem incluir rotas córneas, conjuntivais, bucais, sublinguais, nasais, vaginais, pulmonares, estomacais, intestinais, e retais de administração. Formulações para administração vagi5 nal ou retal, por exemplo, supositórios, podem conter como excipientes, por exemplo, polialquilenoglicóis, vaselina, manteiga de cacau, e outras. Formulações para administração intranasal podem ser sólidas e conter como excipientes, por exemplo, lactose ou ser soluções aquosas ou oleosas de gotas

nasais. Para administração bucal, excipientes incluem açúcares, estearato 10 de cálcio, estearato de magnésio, amido pré-gelinatinizado, e similares (Pat.

U. S. No. 5.849.695).

FORMULAÇÕES TRANSDÉRMICAS E ADMINISTRAÇÃO

Para administração transdérmica, pelo menos um anticorpo de anti-IL-23p19 é encapsulado em um dispositivo de liberação, como um li15 possoma ou nanopartículas poliméricas, micropartícula, microcápsula, ou microesferas (referidas coletivamente como micropartículas a menos que do contrário declarado). Vários dispositivos adequados são conhecidos, incluindo micropartículas feitas de polímeros sintéticos, como poliidroxi ácidos, como ácido poliláctico, ácido poliglicólico e copolímeros destes, poliortoéste20 res, polianidridos, e polifosfazenos, e polímeros naturais, como colágeno, poliamino ácidos, albumina e outras proteínas, alginato e similares polissacarídeos, e combinações destes (Pat. U. S. No. 5.814.599).

ADMINISTRAÇÃO PROLONGADA E FORMULAÇÕES

Pode ser desejável iiberar os compostos da presente invenção ao sujeito em períodos prolongados de tempo, por exemplo, durante períodos de uma semana a um ano de uma administração simples. Várias formas de dosagem de liberação lenta, depósito ou implante podem ser usadas. Por exemplo, uma forma de dosagem pode conter um sal não-tóxico farmaceuti camente aceitável dos compostos tendo um baixo grau de solubilidade em ácido tânico, ácido pamóico, ácido algínico, ácido poliglutâmico, ácidos naf30 fluidos do corpo, por exemplo, (a) um sal de adição de ácido com um ácido polibásico, como ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido cítrico, ácido tartárico,

taleno mono- ou di-sulfônicos, ácido poligalacturônico, e similares; (b) um sa! com um cátion de metal polivalente, como zinco, cálcio, bismuto, bário, magnésio, alumínio, cobre, cobalto, níquel, cádmio e similares, ou com um cátion orgânico formado por exemplo de, Ν,Ν’-dibenzil-etilenodiamina ou 5 etilenodiamina; ou (c) combinações de (a) e (b), por exemplo, um sal de tanato de zinco. Adicionalmente, os compostos da presente invenção ou, preferivelmente, um sal relativamente insolúvel, como aqueles recém-descritos,

pode ser formulado em um gel, por exemplo, um gel de monoestearato de alumínio com, por exemplo, óleo de gergelim, adequado para injeção. Sais 10 particularmente preferidos são sais de zinco, sais de tanato de zinco, sais de pamoato, e similares. Outro tipo de formulação de depósito de liberação lenta para injeção conteria o composto ou sal disperso para encapsulação em um polímero degradante, não-tóxico, não-antigênico lento, como um polímero de ácido poliláctico/ácido poliglicólico por exemplo como descrito na Pat.

U. S. No. 3.773.919. Os compostos ou, preferivelmente, sais relativamente insolúveis, como aqueles descritos acima, podem também ser formulados em péletes silásticas de matriz de colesterol, particularmente para uso em animais. Formulações adicionais de liberação lenta, depósito ou de implante, por exemplo, gás ou lipossomas líquidos, são conhecidas na literatura (Pat. U. S. No. 5.770.222 e Sustained and Controlled Release Drug Delivery

Systems, J. R. Robinson ed., Marcei Dekker, Inc., N. Y., 1978).

Tendo em geral descrito a invenção, a mesma será entendida mais facilmente em referência aos exemplos a seguir que são fornecidos por via de ilustração e não são intencionados como limitação.

EXEMPLOS

EXEMPLO 1 - ESPECIFICIDADE DA SUBUNIDADE DOS ANTICORPOS MONOCLONAIS DE IL-23p19 mAbs de IL-23 anti-humano de camundongo purificados foram avaliados em ELISA de captura de citocina para determinar sua especifici30 dade da subunidade de antígeno. Brevemente, mAbs de IL-23 foram revestidos sobre placas e incubadas com 100 ng/ml (h = recombinante humano) hrlL-23, hrlL-12, e hrp40, respectivamente. Seguindo incubação com mAb de anti-p40 biotinilado, a ligação foi detectada usando estreptavidina conjugada com HRP. Um mAb de anti-p40 e um mAb de anti-IL-12 (20C2, Catálogo No. 555065, BD Pharmingen, San Diego, CA) com especificidade conhecida foi usado como controles.

Figura 1 demonstra que quatro mAbs especificamente ligam hrlL-23 e nao monômero de hrlL-12 ou de hrp40. Porque a subunidade de

IL-23p19 deve covalentemente associar-se a p40 para ser segregada das células mamíferas, mAbs de IL-23 não reconhecem o monômero de p40 ou

têm que ligar à subunidade de IL-23p19 sozinhos ou um epitopo de junção do heterodímero de p19-p40. Portanto, estes mAbs de IL-23 são referidos como mAbs de IL-23p19. Todos os quatro mAbs de anti-IL-23p19 humanos demonstram curvas de ligação similares a hrlL-23 (Figura 2) e análise de BIAcore subsequente demonstrou afinidades variando de 43-338 pM. Foi também determinado que estes mAbs de IL-23 não reagem cruzado com IL15 23 murino (dados não mostrados).

EXEMPLO 2 - INIBIÇÃO DE LIGAÇÃO DE RECEPTOR DE IL-23 POR mAbs DE IL-23P19

Para demonstrar que os mAbs de IL-23p19 são anticorpos neutralizantes contra a subunidade de p19, os mAbs foram testados para sua inibição de ligação de IL-23 e IL-23R. Neste experimento, IL-23R foi imobilizado em uma placa. HrlL-23 biotinilado ou foi adicionado sozinho à placa ou após pré-incubação com mAbs de IL-23p19 individuais. IL-23R solúvel (IL23R-Fc) foi usado como um controle positivo. Ligação de IL-23 foi detectada com estreptavidina HRP-conjugada. Como mostrado na figura 3, todos os 25 quatro mAbs de IL-23p19 puderam impedir ligação de IL-23/IL-23R com potência comparável ao IL-23R-FC solúvel. Em contraste, quando IL-12Rp1 foi imobilizado em uma placa, nenhum dos mAbs de IL-23p19 puderam inibir ligação de IL-23/IL-12Rpi (dados não mostrados). Similarmente, os mAbs de IL-23p19 não bloqueiam ligação de IL-12/IL-12Rpi (dados não mostra30 dos). A inibição seletiva de ligação de IL-23/IL-23R e a carência de interferência com IL-12 ou IL-23 ligando IL-12Rp1 também demonstra que estes mAbs de IL-23p19 não ligam à subunidade de p40 e desse modo são anti

corpos de anti-IL-23p19 neutralizantes humanos.

EXEMPLO 3 - NEUTRALIZAÇÃO DA FUNÇÃO BIOLÓGICA DE IL-23 POR mAbs de IL-23p19

IL-23 é conhecido induzir fosforilação de STAT3 intracelular e produção de IL-17 através de células T. Portanto, mAbs de IL-23p19 foram testados por sua habilidade em inibir estas funções biológicas de IL-23 hu mano.

Em um experimento, células assassinas naturais (NKL) foram estimuladas com hrlL-23 sozinhas ou após pré-incubação com mAbs de IL10 23p19 individuais. As células tratadas foram tingidas com anticorpos de antifosfo-STAT3 conjugado com fluorocromo e analisadas através de citometria de fluxo intracelular. Foi mostrado que todos os quatro mAbs de IL-23p19 inibem fosforilação de STAT3 com potência comparável a um mAb de antip40 neutralizante.

Em outro experimento, esplenócitos murinos recentemente isolados foram tratados com hrlL-23 pré-incubados com mAbs de IL-23p19 titulados ou mAbs de controle. hrlL-23 sem pré-incubação de anticorpo foi usado como o controle positivo. Após 3 dias em cultura, os sobrenadantes de célula foram colhidos e ensaiados por ELISA usando conjunto dual de ELI20 SA de IL-17 (R&D Systems). Como mostrado na figura 4, mAbs de IL-23p19 inibem produção de IL-17 mediada por hrlL-23. Estes mAbs foram também mostrados inibir produção de IL-17 mediada por IL-23 humano nativo (produzido por PBMC humano).

Em comparação, mAbs de IL-23p19 foram também testados por sua habilidade para inibir produção de IFNy induzida por IL-12. Brevemente, células de NK92MI foram tratadas com IL-12 pré-incubado com mAbs de IL23p19 titulados ou mAbs de controle. IL-12 sem pré-incubação de anticorpo foi usado como o controle positivo. Análise de ELISA executada 24 horas pós-estimulação não mostrou nenhum efeito de mAbs de IL-23p19 na pro30 dução de IFNy induzida por IL-12 que demonstra que os anticorpos não ligam à subunidade de p40 compartilhada por IL-12 e IL-23.

EXEMPLO 4 - IDENTIFICAÇÃO DE EPÍTOPO DE mABs DE IL-23p19 E LI-

100

GAÇÃO COMPETITIVA

Análise de ligação de competição foi executada para determinar se os quatro mAbs de IL-23p19 neutralizantes ligam a epítopos de IL-23p19 similares ou diferentes. mAbs de IL-23 foram revestidos individualmente em placas de ELISA. mAbs de competição foram adicionados, seguido pela adição de hrlL-23 biotinilado. Para controle positivo, o mesmo mAb para revestimento foi usado como o mAb de competição (auto-competição). Ligação de IL-23 foi detectada usando estreptavidina. C1269, C1273 e C1275 todos

mostram competição cruzada indicando ligação a um sítio espacialmente similar. C1249 mostra pouca ou nenhuma competição com C1269 ou C1273 e inibição parcial de C1275. Estes resultados indicam que os mAbs reconhecem epítopos similares ou parcialmente de sobreposição em IL-23.

ELISA de competição de anticorpo de C1269 rotulado ligado a

IL-23 foi executado como mostrado na figura 7. 5 pL de 20 pg/ml de hlL-23

revestido na placa, misturados com 10 nM de C1269 rotulado e serialmente diluídos de 3000 nM a 0 competidor não-rotulado, C1269 e C1249, em 25 pL. Ligação relativa foi calculada ajustando o sinal na ausência de competidor para 100%. Os resultados indicam que os anticorpos C1249 e C1269 não competem para o mesmo epítopo de ligação.

Para mapear seus epítopos de ligação diretamente, os mAbs de

IL-23p19, 75 pg de C1249 ou IgG de camundongo, foram misturados com cerca de 65 pg de IL-23 e incubados a 4°C durante a noite. O complexo de antígeno-anticorpo foi isolado através de cromatografia em gel e transferidos para tampão de digestão (0,1 M de Tris-HCL pH 8,5) usando uma unidade de filtro de 100,000 NMWL. Depois, 4 pg de tripsina (0,16 unidades) em tampão de digestão foram adicionados e incubados durante 2 horas a 37°C.

Após incubação, os complexos foram capturados através de contas de Proteína G, lavados duas vezes com PBS e uma vez com bicarbonato de amônio, e os peptídeos capturados eluídos em 30 pL de tampão de elução (10% de Acetonitrila, 0,5% de TFA). Formação do complexo e digestão com tripsina de C1269 foram realizadas da mesma maneira.

Os peptídeos eluídos foram analisados através de espectrome-

101

tria de massa de MALDI-TOF como descrito abaixo. Eluentes do complexo de digestão com tripsina foram dessalgados pipetando a amostra através de um Zip Tip de C18, a Zip Tip foi intumescida com 100 % de Acetonitrila seguido por equilibração com 0,1% de TFA. O eluente foi depois ligado aos 5 meios, lavados com 0,1% de TFA e eluído em um volume de 2 pL de matriz de a-ciano (10 mg/mL de a-ciano, 0,1% de TFA, 50% de Acetonitrila em água) e diretamente manchado no alvo de MALDI-TOF. O MALDI-TOF (Voyager-DE™ STR, ABI) foi calibrado com mistura de Calibração 2 (ABI). Os espectros foram obtidos em intensidade de laser entre 1500-1800 unidades 10 e faixa de massa de aquisição de 800 a 5000 m/z.

Um peptídeo de p19 a m/z = 1248 (₇4lHQGLIFYEK₈₃) foi capturado pelos mAbs de C1249 e C1269. Porém, com C1269, este peptídeo foi menos intenso e não-especificamente pôde ser ligado. Estes resultados indicam que a região de ₇₄IHQGLIFYEK₈₃ contribui para o epitopo de ligação 15 para C1249 eC1269.

ANÁLISE DE EPITOPO POR MUTAGÊNESE DE TROCA DE PROTEÍNAS DE hulL-23p19/mulL-23p19

Foi observado que C1269 e C1249 não ligam à IL-23 de camundongo, porém, C1269, mas não C1249, neutraliza IL-23 nativa de macaco 20 cinomolgo. Portanto, diferenças de seqüência entre IL-23p19 de humano, macaco cinomolgo, e camundongo foram analisadas para identificar as regiões de ligação putativas para estes anticorpos monoclonais. A subunidade de p19 de macaco cinomolgo foi clonada e seqüenciada em Centocor. Alinhamento das seqüências de p19 humano, cinomolgo e para camundongo é 25 mostrado da região identificada como compreendendo pelo menos uma porção da região de epitopo para os anticorpos da presente invenção ₇₄IHQGLIFYEK₈₃. Nesta região de aminoácido de 10 resíduos, há apenas uma diferença simples em H75 entre o IL-23p19 humano e de macaco cinomolgo. Isto indica que H75 é crítico para a ligação de C1249 que não neu30 traliza IL-23p19 de cinomolgo, mas não parece ser crítico para ligação de C1269.

Com base no alinhamento de seqüência, mutagênese de troca

102 de espécies foi executada. Uma proteína de IL 23 humana mutante (designada 3220) foi gerada em que a região de peptídeo tríptica foi mutada na seqüência de camundongo, 74IRQGLAFYKH83, com as quatro mutações realçadas em negrito (quatro mutações de ponto simples em 3220 - ₇₅His hu5 mano ₇₅Arg de camundongo, ₇₉lle humano -> ₇₉Ala de camundongo, 82GIU humano -> ₈2Lys de camundongo e ₈3Lys humano —> 83HÍS de camundongo.

Uma segunda proteína mutante (designada 3397) foi construída que incor-

pora as substituições D e K imediatamente C-terminais deste peptídeo ₇₄IRQGLAFYKHLLDSDIFK₉₁ (do tipo selvagem ₇₄IHQGLIFYEKLLGSDOFT₉i) 10 com as seis mutações realçadas em negrito (as quatro mutações de 3220 junto com duas mutações de ponto simples adicionais -^₇₅His Humano ->

₇₅Arg de Camundongo, ₇₉ lie Humano -» ₇₉Ala de Camundongo, ₈2Glu Humano -> 82Lys de Camundongo e 83Lys Humano _S3 His de Camundongo, ee Gly Humano -> _θ6 Asp de Camundongo e 91 Thr Humano 91 Lys de Ca15 mundongo).

Para avaliar a especificidade de ligação para as proteínas mutantes, ligação de ELISA foi realizada para C1249, C1269, como também o anticorpo substituto de controle CNTO 209 (IL-23p19 de anti-camundongo de rato). Os resultados estão mostrados nas figuras 8A, 8B, e 9. Os resulta20 dos de ELISA mostram que as mutações em IL-23 p19 (3220) reduziu a atividade de ligação para C1249 e C1269 por mais que 80 % (Figura 5 e figuras 8A e 8B). As substituições adicionais em 3397 mutante também reduziram a ligação em 95 % em C1249 e em 90 % em C1269.

Cerca de 65 pg de IL-23 foram misturados com 75 pg de C1249, 25 C1269, IgG de camundongo, respectivamente, e incubados durante a noite a 4°C durante a noite. O complexo de antígeno-anticorpo foi transferido para tampão de digestão usando uma unidade de filtro de 100.000 NMWL. Decom PBS e duas vezes com 50 mM de Bicarbonato de Amônio, e os compois, 4 pg de tripsina (0,16 unidades) em tampão de digestão foram adicionados e incubados durante 2 horas a 37°C. Após digestão, contas de prote30 ína G foram adicionadas para capturar 0 anticorpo e fragmentos ligados através do anticorpo. Depois, as contas de proteína G foram lavadas uma vez

103

plexos capturados foram eluídos com 30 μ! de tampão de elução (10% de Acetonitrila, 0,5 % de Ácido Trifluoracético).

Eluentes do complexo de digesto de tripsina foram dessalgados pipetando a amostra através de ZipTip C18, lavados com 0,1% de TFA em 5 água, depois eluídos em 2 μΙ de matriz de a-ciano (10 mg/ml de a-ciano, 0,1% de TFA, 50% de Acetonitrila em água) e manchados em um alvo de MALDI-TOF. O MALDI-TOF (Voyager-DETM STR, ABI) foram calibrados com mistura de calibração 2 (ABI). Espectros foram obtidos em intensidade de laser entre 1.500-1.800 unidades e faixa de massa de aquisição 80010 5.000 m/z.

Placas de ligação de MSD alta (Meso Scale Diagnostics, Gaithersburg, MD) foram revestidas, a 4°C durante a noite, com 5 μΙ de amostras serialmente diluídas, de 100 a 0 pg/ml, de reagentes de proteína diferentes, incluindo IL-23 humana, IL-23 murina e duas proteínas mutantes tro15 cadas em segmento, 3220 e 3397. Cento e cinquenta μΙ de 5% de tampão de Bloqueador A de MSD foram adicionados a cada poço e incubados por 1 h em temperatura ambiente. As placas foram lavadas três vezes com 0,1 M de tampão de HEPES, pH 7,4. Estes micro-poços de ELISA carregados com proteína foram incubados com 25 μ! de 2 pg/mL de C1249 de MSD rotulado 20 com Sulfo-Tag, C1269, ou mAbs de CNTO 209. As placas foram lavadas 3 vezes com 0,1 M de tampão de HEPES após incubação durante 2 horas com agitação em temperatura ambiente, (pH 7,4). Tampão MSD Read T foi diluído com água destilada (4 vezes) e dispensado em um volume de 150 μΙ/ poço e analisado com um imageador SECTOR 6000.

ANÁLISE ESTRUTURAL DE IL-23

Figura 6 mostra o modelo estrutural para IL-23 humana com base na estrutura de cristal de IL-12 humana (código de pdb 1 f45). Está claro que os resíduos (H75, I79, E82, K83 e G86) são expostos à superfície e agrupados entre si. Este arranjo é típico de epitopos conformacionais para 30 ligação de anticorpo. Portanto, este segmento (₇4lHQGLIFYEKLLG₈₆) pode constituir parte do epitopo de ligação para C1249 como também determinantes de especificidade de espécies do epitopo. Ligação de Ab/Ag típica enco-

104

bre cerca de 1000 ² da área de superfície. Isto sugere que resíduos expostos adicionais do IL-23p19 na redondeza do segmento acima também serão requeridos para um sítio de ligação típico. Inspeção do modelo molecular sugere que os resíduos da hélice C vizinha (resíduos L109, L110, S113, 5 Q114, L116, e Q117) estivessem expostos e formariam um agrupamento de superfície estendido junto com os resíduos no segmento 74-86. Resíduos identificados e propostos fazer parte do epítopo para C1249 são rotulados e mostrados nos modelos de bastões na figura 6. A subunidade de p40 é rotulada 2 e a subunidade de pl9 rotulada 1.

A seqüência para esta parte da hélice C é idêntica entre p19 humano e murino. É plausível que como parte do epitopo estes resíduos contribuiríam para a ligação residual dos mutantes de troca de humanospara-murinos descrita acima. Portanto, o epitopo pode ser compreendido de dois segmentos de p19 (74-85 e 108-118) com os resíduos expostos (H75,

I79, E82, K83, G86, L109, L110, S113, Q114, L116, e Q117) a estar prova-

velmente mais envolvidos nas interações diretas de anticorpo.

Análise de mutagênese é executada com o segmento de IL23p19 que atravessa os resíduos 108-118 em que os resíduos são seletivamente alterados individualmente e/ou em grupos (isto é, alterações múlti20 pias). Atividade de IL-23 é monitorada após as mutações serem feitas como nos experimentos acima usando o segmento IL-23p19 que atravessa os resíduos de aminoácido 74-86. O epitopo é confirmado com base na alteração na atividade correlatada com as várias combinações de mutações.

Para o propósito desta invenção, 70-100% de aminoácido ou identidade de seqüência de nucleotídeo (isto é, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 ou qualquer faixa ou valor nela) são determinados usando um algoritmo de computador adequado, como conhecido na técnica.

Estará claro que a invenção pode ser praticada diferente que como particularmente descrita na descrição anterior e exemplos. Numerosas 30 modificações e variações da presente invenção são possíveis levando em conta os ensinamentos acima e, portanto, estão dentro do escopo das reivindicações em anexo.

105

TABELAS DE SEQÜÊNCIA

SEQ ID NO:1 (subunidade de IL-23p19 humano)

Met 1

Leu

Gly

Ser Arg 5

Ala

Vai

Met

Leu

Leu 10

Leu

Leu

Leu

Pro

Trp 15

Thr

Ala

Gin

Gly

Arq

Ala

Vai

Pro

Gly

Gly

Ser

Ser

Pro

Ala

Trp

Thr

Gin

20

25

30

Cys

Gin

Gin

Leu

Ser

Gin

Lys

Leu

Cys

Thr

Leu

Ala

Trp

Ser

Ala

His

35

40

45

Pro

Leu

Vai

Gly

His

Met

Asp

Leu

Arg

Glu

Glu

Gly

Asp

Glu

Glu

Thr

50

55

60

Thr c t

Asn

Asp

Vai

Pro

His

Ile

Gin

Cys

Gly

Asp

Gly

Cys

Asp

Pro

Gin

Gly

Leu

Arg

Asp

Asn

Ser

Gin

Phe

Cys

Leu

Gin

Arg

Ile

His

Gin

Gly

85

90

95

Leu

Ile

Phe

Tyr

Glu

Lys

Leu

Leu

Gly

Ser

Asp

Ile

Phe

Thr

Gly

Glu

100

105

110

Pro

Ser

Leu

Leu

Pro

Asp

Ser

Pro

Vai

Ala

Gin

Leu

His

Ala

Ser

Leu

115

120

125

Leu

Gly

Leu

Ser

Gin

Leu

Leu

Gin

Pro

Glu

Gly

His

His

Trp

Glu

Thr

130

135

140

Cln

τ Ί «

Pro

GCL

beu

Ser

Pro

Ser

Gin

Pro

Trp

Gin

Arg

Leu

Leu

145

150

155

160

Leu

Arg

Phe

Lys

Ile

Leu

Arg

Ser

Leu

Gin

Ala

Phe

Vai

Ala

Vai

Ala

165

170

175

Ala

Arg

Vai

Phe

Ala

His

Gly

Ala

Ala

Thr

Leu

Ser

Pro

180 185

SEQ ID NO:2 - Seqüência de Nucleotídeo de Cadeia Pesada de C1273

Atgagcagtgaacacagacccctcaccatgaacttcgggctcagattgattttccttgtccttactttaaaaggtg tccagtgtgacgtgaacttggtggagtctgggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgc agcctctggattcactttcagtagctataccatgtcttgggttcgccagactccggagaagaggctggagtgggtc gcaaccattagtagtggtggtacttacacctactatccagacagtgtgaagggccgattcaccatctccagagaca atgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtctgaagtctgaggacacagccatgttttactgtacaagaga taaccatgcttacgacaggggccctttctttgactactggggccaaggcgccactctcacagtctcctca

SEQ ID NO:3 - Seqüência de Aminoácido de Cadeia Pesada de C1273 (seqüência de CDR em negrito e sublinhadas)

MSSEHRPLTMNFGLRLIFLVLTLKGVQCDVNLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASgFTFSSYTMSWVRQTPEKRLEWV ATISSGGTYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMS SLKS EDTAMF YC TRDNHAYDRGPFFDYWGQGATLTVS S

SEQ ID NO:4 GFTFSSYTMS	- Seqüência	de	Aminoácido	de	CDRI	de	Cadeia	Pesada	de	C1273
SEQ ID NO:5	- Seqüência	de	Aminoácido	de	CDR2	de	Cadeia	Pesada	de	C1273
TISSGGTYTYYPDSVKG
SEQ ID NO:6	- Seqüência	de	Aminoácido	de	CDR3	de	Cadeia	Pesada	de	C1273

DNHAYDRGPFFDY

SEQ ID NO:7 - Seqüência de Nucleotídeo de Cadeia Leve de C1273

Atggattcacaggcccaggttcttttgttactgc tgctatgggtttctggtacctgtggggacattgtgatgtcac agtccccatcctccctagttgtgtcagttggagagaaggttactatgagctgcaagtccagtcagaacctctttta taggagtaatcaaaagaaccacttggcctggtaccagcagaaaccagggcagtctcctacactgctgatttactgg acgtccactagggaatctggggtccctgatcgcttcacaggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatca gccgtgtgaaggctgaagacctggcagtttattactgtcagcaatattatagctatcctccgacgttcggtggagg caccaagctggaaatcaaa

SEQ ID NO:8 - Seqüência de Aminoácido de Cadeia Leve de C1273

MDSQAQVLLLLLLWSGTCGDIVMSQSPSSLWSVGEKVTMSCKSSgNLFYRSNgKNHIAWYQOKPGQSPTLLIYW

TSTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISRVKAEDLAVYYCQQYYSYPPTFGGGTKLEIK

SEQ ID NO:9 - Seqüência de Aminoácido de CDRI de Cadeia Leve de C1273 KS SQNLFYRSNQKNHLA

SEQ ID NO:10 - Seqüência de Aminoácido de CDR2 de Cadeia Leve de C1273 WTSTRES

106

SEQ ID NO:11 - Seqüência ae Aminoácido de CDR3 de Cadeia Leve de C1273 nQYYSYPPT

SEQ ID NO:12 - Seqüência de Nucleotídeo de Cadeia Pesada de C1269

Atgagcagtgaacacagacccctcaccatgaacttcgggctcagattgattttccttgtcctgactttaaaaggtg tccagtgtgacgtgaacttggtggagtctgggggaggct tagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgc agcctctggattcac tttcagtagctatacca tgtcttggattcgccagac.tccggagaagaggc tggagtgggtc gcaaccat tagtagtggtggtacttacacctac tatccagacagcgtgaagggccgat tcaccatttccagagaca atgccaagaatacattgtatctgcaaatgagcagtctgaagtctgaggacacagccatcttttattgtacaagaga taaccatgcttacgacaggggccctttctttgactcctggggccaaggcgccactctcacagtctcctca

SEQ ID NO113 - Seqüência de Aminoácido de Cadeia Pesada de C1269

MSSEHRPLTMNFGLRLIFLVLTLKGVQCDVNLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYTOBSWVRQTPEKRLEWV ATISSGGTYTYYPDSVKGRF TISRDNAKNTL YLQMSS LK SEDTAIF YC TRDNHAYDRGPFFDS WGQGATLTVS S

SEQ ID NO:14 - GFTFSSYTMS	Seqüência	de	Aminoácido	de	CDRi	de	Cadeia	Pesada	de	C1269
SEQ ID NO:15 -	Seqüência	de	Aminoácido	de	CDR2	de	Cadeia	Pesada	de	C1269
ISSGGTYTYYPDSVKG
SEQ ID NO:16 - DNHAYDRGPFFDS	Seqüência	de	Aminoácido	de	CDR3	de	Cadeia	Pesads	de	C1269
SEQ ID NO:17 -	Seqüência	de	Nucleotídeo	i de	: Cadeia	Leve de	C1269

Atggattcacaggcccaggttcttatgttactgctgctatgggtttctggtacctgtggggacattgtgatgtcac agtctccatcctccctagctgtgtcagttggagagaaggttactatgagctgcaagtccagtcagaacctctttta taggaataatcaaaagaactacttggcctggtaccagcagaaaccagggcagtctcctacactgctgatttactgg acgtccactagggagtctggggtccctgatcgcttcacaggcagtggatctgggacagatttcactctcaocatca gccgtgtgaaggctgaagacctggcagtttatt ac tgtcagcaatattatagc tatee tccgacgttcggtggagg caccaagctggaaatcaaa

SEQ ID NO:18 - Seqüência de Aminoácido de Cadeia Leve de C1269

MPSQAQVLMLLLLWVSGTCGDIVMSQSPSSLAVSVGEKVTMSCKSSQNLFYRNNQKNYIAWYQQKPGQSPTLLIYW TSTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISRVKAEDLAVYYCQQYYSYPPTFGGGTKLEIK

SEQ ID NO:19	- Seqüência	de	Aminoácido	de	CDRI	de	Cadeia	Leve	de	C1269
KSSQNLFYRNNQKNYLA
SEQ ID NO:20 YWTSTRES	- Seqüência	de	Aminoácido	de	CDR2	de	Cadeia	Leve	de	C1269
SEQ ID NO:21 QQYYSYPPT	- Seqüência	de	Aminoácido	de	CDR 3	de	Cadeia	Leve	de	C1269
SEQ ID NO:22	- Seqüência	de	Nucleotídeo	i de	: Cadeia	Pesada	de C1275

Atgtacttgggactgaactgtgtattcatagtttttctcttaaaaggtgtccagagtgaagtgaaccttgaggagt ctggaggaggcttggtgcaacctggaagatccatgaaactctcctgtgttgcctctggattcactttcagtaacta ctggatgacctgggtccgccagtctccagagaaggggcttgagtgggttgctgaaattagattgaaatctaataat tatgcaacacattatgcggagtctgtgaaagggaggttcaccatctcaagagatgattccaaaagtagtgtctaec tgcaaatgaacaacttaagagctgaagacactgccatttattactgtaecaggggggggggttacgacgtaggagc ctggtttgcttactggggccaagggactctggtcactgtctctgca

SEQ ID NO:23 - Seqüência de Aminoácido de Cadeia Pesada de C1275

MYLGLNCVFIVFLLKGVQSEVNLEESGGGLVQPGRSMKLSCVASGFTFSNYWNTWVRQSPEKGLEWVAEIRLKSNN

YATHYAESVKGRFTISRDDSKSSVYLQMNHLRAEDTAIYYCTRGGGYDVGAWFAYWGQGTLVTVSA

SEQ ID NO:24 GFTFSNYWMT	- Seqüência	de	Aminoácido	de	CDRI	de	Cadeia	Pesada	de	C1275
SEQ ID NO:25	- Seqüência	de	Aminoácido	de	CDR2	de	Cadeia	Pesada	de	C1275
EIRLK SNNYATHYAESVKG
SEQ ID NO:26	- Seqüência	de	Aminoácido	de	CDR3	de	Cadeia	Pesada	de	C1275

GGGYDVGAWFAY

SEQ ID NO:27 - Seqüência de Nucleotídeo de Cadeia Leve de C1275

Atggagtcagacacactcctgctatgggtgctgctgctctgggttccaggctccactggtgacattgtgctcaccc aatctccagcttctttggctgtgtctctagggcagagagccaccatctcctgcagagccagtgaaaatgttgaata

107 ttatggcacaggtttaattcagtggtaccaacagaaaccaggacagccacccaaaccccccatcLatgcLLcaccc aargt-agaa^ragtggcagtgggtctgggacagact tcagcctctacatccatcctg cggaqgaggatgatactgcaatgtatt tctgtcagcaaagtaggaaggt tccttcgacgt tcggtggaggcaccaa gctggaaatcaaa

SEQ ID NO:28 - Seqüência de Aminoácido de Cadeia Leve de C1275

MESDTLLLWVLLLWVPGSTGDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASENVEYYGTGLIQWYQQKPGQPPKLLIYASS

NVESGVPARF SG SGSGTDF SLYIHPVEEDDIAMYFCQQSRKVPSTFGGGTKLEIK

SEQ ID NO:29 - Seqüência RAS ENVEYYGTG LIQ	de	Aminoácido	de	CDRl	de	Cadeia Leve	de	C1275
SEQ ID NO;30 - Seqüência	de	Aminoácido	de	CDR2	de	Cadeia	Leve	de	C1275
ASSNVES
SEQ ID NO:31 - Seqüência	de	Aminoácido	de	CDR3	de	Cadeia	Leve	de	C1275

QQSRKVPST

SEQ ID NO:32 - Seqüência de Nucleotídeo de Cadeia Pesada de C1249

Atggtgttggggctgaagtgggttttctttgttgttttttatcaaggtgtgcattgtgaggtgcaacttgttgagt ctggtggaggattggtgcagcctaaaggatcattgaaactctcatgtgccgcctctggtttcaacttcaataccta tgccatgcactgggtctgccaggctccaggaaagggtttggaatggattggtcgcataagaagtaaaagtcataat tatgcaacagactatgccgatccagtgaaagacagattcaccatctccagagatgattcacaaggcttgctctatc tgctaatgaacaacctgaaaactgaggacacagccatgtattactgtatgagggagggaatctatggtagttt tgc ttactggggccaagggactctggtcactgtctctgca

SEQ ID NO:33 - Seqüência de Aminoácido de Cadeia Pesada de C1249

MVLGLKV^FFVVFYQGVHCEVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTmmfAMHWVCQAPGKGLEWTGFTRSKSHN

YATDYADPVKDRFTISRDDSQGLLYLLMNNLKTEDTAMYYCMREGIYGSFAYWGQGTLVTVSA

SEQ ID NO:34 - Seqüência GFNFNTYAMH	de	Aminoácido	de	CDRl	de	Cadeia	Pesada	de	C1249
SEQ ID NO:35 - Seqüência IRSKSHNYATDYADPVKD	de	Aminoácido	de	CDR2	de	Cadeia	Pesada	de	C1249
SEQ ID NO:36 - Seqüência EGIYGSFAY	de	Aminoácido	de	CDR3	de	Cadeia	Pesada	de	C1249
SEQ ID NO:37 - Seqüência	de	Nucleotídeo de Cadeia	Leve de	• C1249

Atggagacagacacactcctgttatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgacattgtgctgacac agtctcctgcttccttagctgtatctctggggcagagggccaccatctcatgcagggccagcaaaagtgtcagttc atctgcctatagttttttccactggtaccaacagaagccaggacagccacccaaactcctcatctatcttgcatcc aacctacaatctggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccatcctg tggaggcggaggatgctgcaacctattactgtcaacacagtggggagcttccattcacgttcggctcggggacaaa gttggaaataaaa

SEQ ID NO:38 - Seqüência de Aminoácido de Cadeia Leve de C1249

METDTLLLWVLLLWVPGSTGDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSSSAYSFFHWYQQKPGQPPKLLIYLAS NDQSGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEAEDAATYYCgHSGELPFTFGSGTKLEIK

SEQ ID NO:39	- Seqüência	de	Aminoácido	de	CDRl de	: Cadeia	Leve de C1249
CRASK SVS S SAY S FFH
SEQ ID NO:40 LASNLQS	- Seqüência	de	Aminoácido	de	Cadeia	Leve	de	C1249
SEQ ID NO:41	- Seqüência	de	Aminoácido	de	Cadeia	Leve	de	C1249

CQHSGELPFT

Claims (8)

1. reivindicações

   1. Anticorpo de IL-23p19 isolado, caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de cadeia leve e uma região variável de cadeia pesada, a dita região variável de cadeia leve compreendendo:

   uma sequência de aminoácido de cadeia leve da região de determinação de complementaridade 1 (CDRL1) de SEQ ID NO: 29;

   uma sequência de aminoácido da CDRL2 de SEQ ID NO: 30; e uma sequência de aminoácido da CDRL3 de SEQ ID NO: 31, e a dita região variável de cadeia pesada compreendendo:

   uma sequência de aminoácido de cadeia pesada da região de determinação de complementaridade 1 (CDRH1) de SEQ ID NO: 24;

   uma sequência de aminoácido da CDRH2 de SEQ ID NO: 25; e uma sequência de aminoácido da CDRH3 de SEQ ID NO: 26.
2. 2. Anticorpo de IL-23p19 isolado, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência de aminoácido variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 28.
3. 3. Anticorpo de IL-23p19 isolado, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência de aminoácido variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 23.
4. 4. Anticorpo de IL-23p19 isolado, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende a região variável de cadeia leve como definida na reivindicação 2 e a região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 23.
5. 5. Anticorpo de IL-23p19 isolado, caracterizado pelo fato de que se liga à subunidade IL-23p19 da IL-23 humana com um anticorpo como definido na reivindicação 1.
6. 6. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o dito anticorpo é selecionado do grupo que consiste em quimérico, humanizado e enxertado em CDR.
7. 7. Anticorpo de IL-23p19 isolado, caracterizado pelo fato de que se liga competitivamente à subunidade IL-23p19 da IL-23 humana com um

   Petição 870180160945, de 10/12/2018, pág. 8/14 anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 28 e uma região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 23.
8. 8. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o dito anticorpo é selecionado do grupo que 5 consiste em quimérico, humanizado e enxertado em CDR.