BR112021015549A2

BR112021015549A2 - Método para tratar osteoartrite com uma combinação de exossomos de células tronco mesenquimais, células tronco mesenquimais sinoviais e andaimes

Info

Publication number: BR112021015549A2
Application number: BR112021015549-0A
Authority: BR
Inventors: Kenneth Allen Pettine; Timothy Alexander MOSELEY
Original assignee: Direct Biologics Llc
Priority date: 2019-02-07
Filing date: 2020-02-07
Publication date: 2021-10-26
Also published as: MX2021009485A; AU2020217808A8; JP2022519700A; AU2020217808A1; CA3129678A1; EP3920946A1; US20220125848A1; IL285419A; KR20210137026A; EP3920946A4; WO2020163803A1; SG11202108470YA

Abstract

método para tratar osteoartrite com uma combinação de exossomos de células tronco mesenquimais, células tronco mesenquimais sinoviais e andaimes. são divulgados aqui métodos para o tratamento da osteoartrite que pode ser um procedimento artroscópico de uma etapa e pode incluir separar células-tronco mesenquimais sinoviais (mscs) da sinóvia usando um dispositivo de escova; cobrir a cartilagem articular em uma articulação afetada com um andaime; e colocar exossomos de msc concentrados na articulação afetada para estimular a diferenciação de mscs sinoviais em células de cartilagem articular.

Description

“MÉTODO PARA TRATAR OSTEOARTRITE COM UMA COMBINAÇÃO DE EXOSSOMOS DE CÉLULAS TRONCO MESENQUIMAIS, CÉLULAS TRONCO MESENQUIMAIS SINOVIAIS E ANDAIMES”

[0001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório U.S. 62 / 908.853, depositado em 01 de outubro de 2019 e do Pedido Provisório U.S. 62 / 802.310, depositado em 7 de fevereiro de 2019, pedidos que são incorporados neste documento por referência em sua totalidade.

FUNDAMENTOS

[0002] A osteoartrite (OA) é um distúrbio de qualquer junção do corpo que leva a sintomas como inflamação, dor e função limitada. É também a doença crônica mais comum nos Estados Unidos. A maior parte da artrite ocorre no joelho ou na articulação do quadril, seguida do tornozelo e do ombro. Além disso, a artrite dos dedos e da base do polegar é bastante comum.

[0003] A OA também é chamada de artrite de desgaste e é, de longe, a causa mais comum de artrite. Cerca de um terço dos adultos nos Estados Unidos com mais de 65 anos tem artrite a ponto de exigir medicação regular. Os sintomas incluem dor em uma articulação durante ou após o movimento, sensibilidade na articulação quando empurrada, uma sensação de esmagamento ou som de osso esfregando e rigidez na articulação após períodos de inatividade, como dormir ou sentar.

[0004] A patogênese da OA do joelho tem sido associada a alterações biomecânicas e bioquímicas na cartilagem da articulação do joelho (por exemplo, a incapacidade de suportar tensões mecânicas normais, fornecimento limitado de nutrientes e oxigênio, síntese inadequada de componentes da matriz extracelular, síntese aumentada de tecido proteinases destrutivas, tais como metaloproteinases e agrecanases de matriz e apoptose geral de condrócitos). Recentemente, a inflamação sinovial também foi acreditada como um fator limitante do reparo da cartilagem do joelho. Além disso, se correlaciona com sinais clínicos de OA do joelho, como inchaço do joelho e dor inflamatória. Acredita-se que a inflamação sinovial seja uma resposta dos macrófagos sinoviais aos restos de cartilagem e mediadores catabólicos que entram na cavidade sinovial.

[0005] A cartilagem articular é tanto aneural quanto avascular. Como tal, a cartilagem é incapaz de gerar diretamente dor, inflamação, rigidez ou qualquer um dos sintomas que os pacientes com OA normalmente descrevem. Embora todas as informações acima sejam conhecidas, as causas exatas da dor na OA não são totalmente compreendidas.

[0006] Portanto, o que é necessário é um método para restaurar a cartilagem articular a uma condição fisiológica normal para interromper a inflamação sinovial e, assim, eliminar a dor da OA.

SUMÁRIO

[0007] São divulgados métodos e composições relacionadas a composições de exossomos de células-tronco mesenquimais (MSC) para uso no tratamento de doenças, distúrbios e lesões que afetam as articulações.

[0008] Em um aspecto, são divulgados aqui métodos de tratamento, inibição, redução, melhoria e / ou prevenção de uma doença, distúrbio, lesão (tal como, por exemplo, osteoartrite, artrite juvenil, artrite psoriática, artrite infecciosa, artrite reumatoide, espondilite anquilosante, gota, bursite, tendinose, tendinite, entorse, laceração labral, ruptura de um tendão e / ou ruptura de um ligamento) ou sintomas dos mesmos (como, por exemplo, dor, inflamação e / ou inchaço) afetando uma ou mais articulações (tal como, por exemplo, tornozelo, joelho, quadril, punho, cotovelo, ombro, junta e / ou pescoço) em um sujeito que compreende administrar um sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma preparação de exossomo de células-tronco mesenquimais (MSC).

[0009] Também são divulgados aqui métodos de qualquer aspecto anterior, em que a preparação de exossomo MSC é administrada a cada articulação afetada pelo distúrbio, doença ou lesão.

[0010] Em um aspecto, são divulgados aqui métodos de qualquer aspecto anterior, em que a preparação de exossomo MSC compreende ainda fatores de crescimento (tais como, por exemplo, prostaglandina E2 (PGE2), fator de crescimento transformador β1 (TGF- β 1), fator de crescimento de hepatócitos (HGF), fator-1 derivado de células do estroma (SDF-1), óxido nítrico, indoleamina 2,3-dioxigenase,

interleucina-4 (IL-4), IL-6, interleucina-10 (IL-10), antagonista do receptor de IL-1 e receptor solúvel do TNF-α, fatores de crescimento semelhantes à insulina, fatores de crescimento de fibroblastos (FGF) 1-23 (especialmente, FGF1 e FGF2), proteínas morfogenéticas ósseas (BMPs) 1-15, fator de crescimento epidérmico (EGF), fator de crescimento transformador- β (TGF-α) proteína estimuladora de macrófagos (MSP), fator de crescimento derivado de plaquetas (PLGF), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), fator estimulador de colônia de macrófago (M-CSF), insulina, fator estimulador de colônia de granulócitos (G-CSF), fator estimulador de colônia de granulócitos macrófagos (GM-CSF) e / ou hormônios, incluindo estrogênio e hormônios da tireoide) obtidos a partir de MSC.

[0011] Também são divulgados neste documento métodos de qualquer aspecto anterior, em que os exossomos de MSC são administrados por meio de injeção, exossomo de MSC portando andaime, hidrogel e / ou creme tópico ou pomada.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0012] Os desenhos anexos, que são incorporados e constituem uma parte deste relatório descritivo, ilustram várias modalidades e, juntamente com a descrição, ilustram as composições e métodos divulgados.

[0013] A Figura 1 mostra um BPI e ODI inferior = melhoria, uma pontuação LEFS superior = melhoria.

[0014] A Figura 2 mostra a radiografia pré-procedimento do ombro mostrando osteoartrite grau quatro de Kellgren-Lawrence da articulação gleno-umeral.

[0015] A Figura 3 mostra um BPI mais baixo e QuickDash = melhora, Uma pontuação UFEI mais alta = melhora.

[0016] A Figura 4 mostra um diagrama do tratamento de exossomo MSC para OA.

[0017] A Figura 5 mostra uma radiografia de uma pelve.

[0018] As Figuras 6A mostram uma radiografia do cotovelo direito mostra alterações de grau três de Kellgren-Lawrence da articulação rádio-ulnar e das articulações úmero-ulnar.

[0019] A Figura 6B mostra que as radiografias do cotovelo esquerdo são normais.

[0020] A Figura 7 mostra a amplitude de movimento do cotovelo após a administração de EVIP.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0021] Antes dos presentes compostos, composições, artigos, dispositivos e/ou métodos serem divulgados e descritos, será entendido que eles não estão limitados a métodos sintéticos específicos ou métodos biotecnológicos recombinantes específicos, a menos que especificado de outro modo, ou a reagentes particulares, a menos que especificado de outra forma, como tal pode, é claro, variar. Também deve ser entendido que a terminologia usada neste documento tem o propósito de descrever modalidades particulares apenas e não se destina a ser limitante. Definições

[0022] Como utilizado neste relatório descritivo e nas reivindicações anexas, as formas singulares "um", "uma" e "o(a)" incluem os referentes plurais, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Assim, por exemplo, a referência a "um carreador farmacêutico" inclui misturas de dois ou mais carreadores deste tipo e semelhantes.

[0023] As faixas podem ser expressas neste documento como de "cerca de" um valor específico e/ou a "cerca de" outro valor específico. Quando tal faixa é expressa, uma outra modalidade inclui de um valor particular e/ou até outro valor particular. Da mesma forma, quando os valores são expressos como aproximações, pelo uso do antecedente “cerca de”, será entendido que o valor particular forma uma outra modalidade. Deverá ser compreendido ainda que os pontos extremos de cada uma das faixas são significativos tanto em relação ao outro ponto extremo quanto independentemente do outro ponto extremo. Compreende-se também que há inúmeros valores divulgados neste documento, e que cada valor também é divulgado neste documento como "cerca de" aquele determinado valor além do valor em si. Por exemplo, se o valor "10" é divulgado, então "cerca de 10" é também divulgado. Também é compreendido que quando um valor é divulgado "menor que ou igual ao" valor, "maior que ou igual ao valor" e possíveis faixas entre os valores também são divulgados, como apropriadamente compreendido pelo técnico versado. Por exemplo, se o valor "10" é divulgado, o "menor que ou igual a 10", bem como "maior que ou igual a 10" é também divulgado. Também é entendido que por todo o pedido dados são fornecidos em numerosos formatos diferentes e que esses dados representam pontos extremos e pontos de partida e faixas para qualquer combinação de pontos de dados. Por exemplo, se um determinado ponto de dados "10" e um determinado ponto de dados "15" são divulgados, compreende-se que maior que, maior que ou igual a, menor que, menor que ou igual a, e igual a 10 e 15 são considerados divulgados, bem como entre 10 e 15. Também é entendido que cada unidade entre duas unidades particulares também é divulgada. Por exemplo, se 10 e 15 são divulgados, então, 11, 12, 13 e 14 são também divulgados.

[0024] O termo "sujeito" é definido neste documento para incluir animais, como mamíferos, incluindo, mas não se limitando a, primatas (por exemplo, humanos), vacas, cavalos, porcos, ovelhas, cabras, cães, gatos, coelhos, ratos, camundongos e semelhantes. Em algumas modalidades, o sujeito é um humano.

[0025] "Administração" a um sujeito inclui qualquer rota de introdução ou distribuição a um sujeito um agente. A administração pode ser realizada por qualquer rota adequada, incluindo oral, tópica, intravenosa, subcutânea, transcutânea, transdérmica, intramuscular, intra-articular, parenteral, intra-arteríola, intra-articular, intradérmica, intraventricular, intracraniana, intraperitoneal, intralesional, intranasal, retal, vaginal, por inalação, via um reservatório implantado, parenteral (por exemplo, injeções subcutânea, intravenosa, intramuscular, intra-articular, intra-sinovial, intraesternal, intratecal, intraperitoneal, intra-hepática, intralesional e intracraniana ou técnicas de infusão) e semelhantes. "Administração concomitante", "administração em combinação", "administração simultânea" ou "administrado simultaneamente" como utilizado neste documento, significa que os compostos são administrados no mesmo ponto no tempo ou essencialmente imediatamente após um ao outro. No último caso, os dois compostos são administrados em momentos suficientemente próximos para que os resultados observados sejam indistinguíveis dos obtidos quando os compostos são administrados ao mesmo tempo. "Administração sistêmica" refere-se à introdução ou distribuição a um sujeito de um agente por meio de uma rota que introduz ou distribui o agente a áreas extensas do corpo do sujeito (por exemplo, mais de 50% do corpo), por exemplo, através da entrada no sistema circulatório ou sistemas linfáticos. Em contraste, "administração local" se refere à introdução ou distribuição a um sujeito de um agente via uma rota que introduz ou distribui o agente na área ou área imediatamente adjacente ao ponto de administração e não introduz o agente sistemicamente em uma quantidade terapeuticamente significativa. Por exemplo, os agentes administrados localmente são facilmente detectáveis na vizinhança local do ponto de administração, mas são indetectáveis ou detectáveis em quantidades insignificantes nas partes distais do corpo do sujeito. A administração inclui autoadministração e a administração por outro.

[0026] "Biocompatível" geralmente se refere a um material e quaisquer metabólitos ou produtos de degradação do mesmo que geralmente não são tóxicos para o receptor e não causam efeitos adversos significativos ao sujeito.

[0027] "Compreendendo" pretende significar que as composições, métodos, etc. incluem os elementos recitados, mas não excluem outros. "Consistindo essencialmente em'' quando usado para definir composições e métodos, deve significar incluindo os elementos recitados, mas excluindo outros elementos de qualquer significado essencial para a combinação. Assim, uma composição consistindo essencialmente nos elementos como aqui definidos não excluiria vestígios de contaminantes do método de isolamento e purificação e transportadores farmaceuticamente aceitáveis, tais como solução salina tamponada com fosfato, conservantes e semelhantes. "Consistindo em'' deve significar a exclusão de mais do que elementos vestigiais de outros ingredientes e etapas substanciais do método para administrar as composições desta invenção. As modalidades definidas por cada um desses termos de transição estão dentro do escopo desta invenção.

[0028] Um “controle” é um sujeito ou amostra alternativo usado em um experimento para fins de comparação. Um controle pode ser "positivo" ou "negativo".

[0029] "Quantidade eficaz" de um agente refere-se a uma quantidade suficiente de um agente para fornecer um efeito desejado. A quantidade de agente que é "eficaz" variará de sujeito para sujeito, dependendo de muitos fatores, como a idade e a condição geral do sujeito, o agente ou agentes em particular e semelhantes. Assim,

nem sempre é possível especificar uma "quantidade eficaz" quantificada. No entanto, uma "quantidade eficaz" apropriada em qualquer caso do sujeito pode ser determinada por um versado na técnica usando experimentação de rotina. Além disso, como utilizado neste documento, e a menos que especificamente indicado de outra forma, uma "quantidade eficaz" de um agente também pode se referir a uma quantidade que cobre tanto as quantidades terapeuticamente eficazes quanto as quantidades profilaticamente eficazes. Uma "quantidade eficaz" de um agente necessária para atingir um efeito terapêutico pode variar de acordo com fatores como idade, sexo e peso do sujeito. Os regimes de dosagem podem ser ajustados para proporcionar a resposta terapêutica ideal. Por exemplo, várias doses divididas podem ser administradas diariamente ou a dose pode ser reduzida proporcionalmente conforme indicado pelas exigências da situação terapêutica.

[0030] Uma "diminuição" pode referir-se a qualquer mudança que resulte em uma expressão genética, produção de proteína, quantidade de um sintoma, doença, composição, condição ou atividade menores. Uma substância também é entendida como diminuindo a produção genética de um gene quando a produção genética do produto de gene com a substância é menor em relação à produção do produto de gene sem a substância. Além disso, por exemplo, uma diminuição pode ser uma mudança nos sintomas de um distúrbio de forma que os sintomas sejam menores do que os observados anteriormente. Uma diminuição pode ser qualquer diminuição individual, mediana ou média em uma condição, um sintoma, uma atividade, composição em uma quantidade estatisticamente significativa. Assim, a diminuição pode ser 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 , 75, 80, 85, 90, 95 ou 100% de diminuição, desde que a diminuição seja estatisticamente significativa.

[0031] "Inibir", "inibindo" e "inibição" significa diminuir uma atividade, resposta, condição, doença ou outro parâmetro biológico. Isso pode incluir, mas não se limita à completa ablação da atividade, resposta, condição ou doença. Isso também pode incluir, por exemplo, uma redução de 10% na atividade, resposta, condição ou doença em comparação com o nível nativo ou de controle. Assim, a redução pode ser de 10,

20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100% ou qualquer quantidade de redução entre elas em comparação com níveis nativos ou de controle.

[0032] "Tratar", "tratando", "tratamento" e variações gramaticais dos mesmos, conforme usado neste documento, incluem a administração de uma composição com a intenção ou o propósito de prevenir, retardar, curar, curar, aliviar, aliviar, alterar, remediar, melhorar, melhorar, estabilizar, mitigar e/ou reduzir a intensidade ou frequência de uma ou mais doenças ou condições, um sintoma de uma doença, distúrbio, lesão ou condição, ou uma causa subjacente de uma doença ou condição. Tratamentos de acordo com a invenção podem ser aplicados preventivamente, profilaticamente, paliativamente ou remediadoramente. Tratamentos profiláticos são administrados a um sujeito antes do início (por exemplo, antes de sinais óbvios de câncer), durante o início precoce (por exemplo, mediante sinais iniciais e sintomas iniciais de câncer) ou após um desenvolvimento estabelecido de câncer. Administração profilática pode ocorrer por dia(s) a anos antes da manifestação dos sintomas de uma infecção.

[0033] Os termos "prevenir", "prevenindo", "prevenção" e variações gramaticais dos mesmos, conforme usados neste documento, referem-se a um método de retardar parcial ou completamente ou impedir o início ou recorrência de uma doença e / ou um ou mais de seus sintomas associados ou impedindo um sujeito de adquirir ou readquirir uma doença ou reduzir o risco de um sujeito de adquirir ou readquirir uma doença ou um ou mais de seus sintomas concomitantes.

[0034] O componente "farmaceuticamente aceitável" pode se referir a um componente que não é biologicamente ou de outra forma indesejável, ou seja, o componente pode ser incorporado em uma formulação farmacêutica da invenção e administrado a um sujeito conforme descrito neste documento, sem causar efeitos biológicos indesejáveis significativos ou interagir em uma forma prejudicial com qualquer um dos outros componentes da formulação na qual está contido. Quando usado em referência à administração a um ser humano, o termo geralmente implica que o componente atendeu aos padrões exigidos de testes toxicológicos e de fabricação ou que está incluído no Guia de Ingredientes Inativos preparado pela U.S.

Food and Drug Administration.

[0035] "Transportador farmaceuticamente aceitável" (às vezes referido como um "transportador") significa um transportador ou excipiente que é útil na preparação de uma composição farmacêutica ou terapêutica que é geralmente segura e não tóxica e inclui um transportador que é aceitável para uso veterinário e / ou uso farmacêutico ou terapêutico humano. Os termos "transportador" ou "transportador farmaceuticamente aceitável" podem incluir, mas não estão limitados a, solução salina tamponada com fosfato, água, emulsões (como uma emulsão de óleo / água ou água / óleo) e / ou vários tipos de agentes umectantes. Como utilizado neste documento, o termo "transportador" abrange, mas não está limitado a, qualquer excipiente, diluente, enchimento, sal, tampão, estabilizador, solubilizante, lipídeo, estabilizador ou outro material bem conhecido na técnica para uso em formulações farmacêuticas e conforme descrito mais adiante neste documento.

[0036] "Farmacologicamente ativo" (ou simplesmente "ativo"), como em um derivado ou análogo "farmacologicamente ativo", pode se referir a um derivado ou análogo (por exemplo, um sal, éster, amida, conjugado, metabólito, isômero, fragmento, etc.) tendo o mesmo tipo de atividade farmacológica que o composto original e aproximadamente equivalente em grau.

[0037] "Agente terapêutico" refere-se a qualquer composição que tenha um efeito biológico benéfico. Os efeitos biológicos benéficos incluem efeitos terapêuticos, por exemplo, tratamento de um distúrbio ou outra condição fisiológica indesejável, e efeitos profiláticos, por exemplo, prevenção de um distúrbio ou outra condição fisiológica indesejável (por exemplo, um câncer não imunogênico). Os termos também abrangem derivados farmaceuticamente aceitáveis, farmacologicamente ativos de agentes benéficos especificamente mencionados neste documento, incluindo, mas não se limitando a, sais, ésteres, amidas, pró-agentes, metabólitos ativos, isômeros, fragmentos, análogos e semelhantes. Quando os termos "agente terapêutico" são usados, então, ou quando um agente particular é especificamente identificado, deve ser entendido que o termo inclui o agente per se, bem como sais farmaceuticamente aceitáveis, farmacologicamente ativos, ésteres, amidas, pró-agentes, conjugados,

metabólitos ativos, isômeros, fragmentos, análogos, etc.

[0038] "Quantidade terapeuticamente eficaz" ou "dose terapeuticamente eficaz" de uma composição (por exemplo, uma composição compreendendo um agente) refere-se a uma quantidade que é eficaz para atingir um resultado terapêutico desejado. Em algumas modalidades, um resultado terapêutico desejado é o controle da diabetes tipo I. Em algumas modalidades, um resultado terapêutico desejado é o controle da obesidade. Quantidades terapeuticamente eficazes de um determinado agente terapêutico irão tipicamente variar em relação a fatores como o tipo e gravidade do distúrbio ou doença a ser tratada e a idade, sexo e peso do sujeito. O termo também pode se referir a uma quantidade de um agente terapêutico, ou uma taxa de distribuição de um agente terapêutico (por exemplo, quantidade ao longo do tempo), eficaz para facilitar um efeito terapêutico desejado, como o alívio da dor (ou seja, nocicepção). O efeito terapêutico desejado exato irá variar de acordo com a condição a ser tratada, a tolerância do sujeito, o agente e / ou a formulação do agente a ser administrado (por exemplo, a potência do agente terapêutico, a concentração do agente na formulação, e semelhantes), e uma variedade de outros fatores que são apreciados por aqueles versados na técnica. Em alguns casos, uma resposta biológica ou médica desejada é alcançada após a administração de múltiplas dosagens da composição ao sujeito ao longo de um período de dias, semanas ou anos.

[0039] Neste relatório descritivo e nas reivindicações a seguir, será feita referência a um número de termos, que serão definidos para ter os seguintes significados:

[0040] "Opcional" ou "opcionalmente" significa que o evento ou circunstância descrito posteriormente pode ou pode não ocorrer, e que a descrição inclui instâncias em que ocorre o referido acontecimento ou circunstância e instâncias onde isso não acontece.

[0041] Em todo este pedido, é feita referência a várias publicações. As divulgações dessas publicações em suas totalidades estão, por meio deste, incorporadas por referência neste pedido a fim de descrever mais completamente o estado da técnica ao qual este pertence. As referências divulgadas são também individual e especificamente incorporadas por referência neste documento para o material contido nelas que é discutido no período em que a referência é invocada.

[0042] São divulgados componentes a serem utilizados para preparar as composições divulgadas, bem como as composições a serem utilizadas no âmbito dos métodos aqui divulgados. Estes e outros materiais são divulgados neste documento, e compreende-se que quando combinações, subconjuntos, interações, grupos, etc. destes materiais são divulgados que, enquanto referência específica das várias combinações individuais e coletivas e permutação desses compostos não pode ser explicitamente divulgada, cada uma é especificamente contemplada e descrita neste documento. Por exemplo, se um determinado exossomo MSC (com ou sem fatores de crescimento) aqui referido como um produto isolado de vesícula extracelular (EVIP) for divulgado e discutido e uma série de modificações que podem ser feitas em uma série de moléculas, incluindo o EVIP, são discutidas, especificamente contemplada é toda e qualquer combinação e permutação de EVIP e as modificações que são possíveis, a menos que especificamente indicado em contrário. Assim, se uma classe de moléculas A, B, e C é divulgada, bem como uma classe de moléculas D, E, e F e um exemplo de uma combinação das moléculas, A- D é divulgada, então, mesmo se cada um não for recitado individualmente, cada um é individualmente e coletivamente combinações contempladas de significado, A-E, A- F, B-D, B-E, B-F, C-D, C-E e C-F são considerados divulgados. Da mesma forma, qualquer subconjunto ou combinação destes, também é divulgado. Assim, por exemplo, o subgrupo de A-E, B-F, e C-E seria considerado divulgado. Este conceito aplica-se a todos os pedidos, incluindo, mas não se limitando a, etapas nos métodos de fazer e usar as composições divulgadas. Assim, se houver uma variedade de etapas adicionais que podem ser realizadas entende-se que cada uma destas etapas adicionais pode ser realizada com qualquer modalidade específica ou combinação de modalidades dos métodos divulgados. Métodos de tratamento da osteoartrite

[0043] Em contraste com a cartilagem articular, a sinóvia e a cápsula articular são ricamente inervadas e são provavelmente a fonte primária da dor na OA. A reação sinovial na OA inclui hiperplasia sinovial, fibrose, espessamento da cápsula sinovial, sinoviócitos ativados e, em alguns casos, infiltrado linfocítico (células B e T, bem como células plasmáticas). A sinóvia é de óbvia relevância como uma das estruturas mais densamente inervadas da articulação. As causas sinoviais de dor incluem irritação das terminações nervosas sensoriais dentro da sinóvia por osteófitos e inflamação sinovial que é devida, pelo menos em parte, à liberação de prostaglandinas, leucotrienos, proteinases, neuropeptídeos e citocinas. Exemplos pró-inflamatórios incluem Interleucinas 1, 6 e 8 junto com vários fatores de necrose tumoral. Uma medida semiquantitativa de sinovite do coxim adiposo infrapatelar está associada à intensidade da dor. Qualquer diminuição na sinovite está associada a uma diminuição na intensidade da dor da OA.

[0044] Apesar do fato de a medula óssea ser considerada uma fonte bem aceita de MSCs, vários estudos relataram que as MSCs podem ser isoladas de vários tecidos mesenquimais de adultos, incluindo a sinóvia. Estudos têm mostrado que MSCs derivadas de sinóvia têm grande potencial de proliferação e potencial de diferenciação multilinhagem in vitro. Os estudos também compararam as MSCs humanas derivadas da medula óssea, sinóvia, periósteo, tecido adiposo e músculo e determinaram que as MSCs derivadas da sinóvia têm maior expansão e capacidade condrogênica in vitro do que as MSCs de outros tecidos. Isso sugere que as MSCs derivadas da sinóvia são superiores como fonte para a regeneração da cartilagem.

[0045] Estudos demonstraram que as MSCs sinoviais podem ser destacadas da sinóvia por meio de uma técnica de escovação, resultando em um aumento marcante no número de MSCs sinoviais encontradas no líquido sinovial.

[0046] Em um aspecto, são divulgados aqui métodos de tratamento, inibição, redução, melhoria e / ou prevenção de uma doença, distúrbio, lesão (tal como, por exemplo, osteoartrite, artrite juvenil, artrite psoriática, artrite infecciosa, artrite reumatoide, espondilite anquilosante, gota, bursite, tendinose, tendinite, entorse, laceração labral, ruptura de um tendão e / ou ruptura de um ligamento) ou sintomas dos mesmos (como, por exemplo, dor, inflamação e / ou inchaço) afetando uma ou mais articulações (tal como, por exemplo, tornozelo, joelho, quadril, punho, cotovelo,

ombro, junta e / ou pescoço) em um sujeito que compreende administrar um sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma preparação de exossomo de células-tronco mesenquimais (MSC).

[0047] Em um aspecto, são divulgados aqui métodos de tratamento, inibição, redução, melhoria e / ou prevenção de uma doença, distúrbio, lesão (tal como, por exemplo, osteoartrite, artrite juvenil, artrite psoriática, artrite infecciosa, artrite reumatoide, espondilite anquilosante, gota, bursite, tendinose, tendinite, entorse, laceração labral, laceração de um tendão e / ou laceração de um ligamento) ou sintomas dos mesmos (como, por exemplo, dor, inflamação e / ou inchaço) afetando uma ou mais articulações (tal como, por exemplo, o tornozelo, joelho, quadril, punho, cotovelo, ombro, junta e / ou pescoço) em um sujeito, em que a preparação de exossomo MSC (também referido neste documento como EVIP) compreende ainda fatores de crescimento (como, por exemplo, prostaglandina E2 (PGE2), fator de crescimento transformador β1 (TGF-β1), fator de crescimento de hepatócitos (HGF), fator-1 derivado de células do estroma (SDF-1), óxido nítrico, indoleamina 2,3- dioxigenase, interleucina-4 (IL-4), IL-6, interleucina-10 (IL-10), antagonista do receptor de IL-1 e receptor solúvel do TNF-α, fatores de crescimento semelhantes à insulina, fatores de crescimento de fibroblastos (FGF) 1-23 (especialmente, FGF1 e FGF2), proteínas morfogenéticas ósseas (BMPs) 1-15, fator de crescimento epidérmico (EGF), fator de crescimento transformador-α (TGF-α) proteína estimuladora de macrófagos (MSP), fator de crescimento derivado de plaquetas (PLGF), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), fator estimulador de colônia de macrófago (M-CSF), insulina, fator estimulador de colônia de granulócitos (G-CSF), fator estimulador de colônia de granulócitos macrófagos (GM-CSF) e / ou hormônios, incluindo estrogênio e hormônios da tireoide) obtidos da MSC.

[0048] É entendido e aqui contemplado que os tratamentos de exossomos MSC divulgados podem não ser curativos de uma doença, distúrbio, lesão ou condição de uma articulação e podem reduzir ou inibir a lesão, doença ou distúrbio. Em um aspecto, a preparação de exossomo MSC diminui os sintomas de uma doença, distúrbio e / ou lesão (como, por exemplo, dor, inflamação e / ou inchaço) em vez de ser curativa ou reparar a doença, distúrbio ou lesão. Assim, em um aspecto, são divulgados aqui métodos de tratamento, inibição, redução, prevenção e / ou melhora da dor, inflamação e / ou inchaço associado a uma doença, distúrbio e / ou lesão que afeta uma ou mais articulações de um sujeito que compreende administrar ao sujeito qualquer uma das preparações de exossomos de MSC divulgadas neste documento (em alguns casos, incluindo fatores de crescimento derivados de MSC).

[0049] É entendido e aqui contemplado que a administração pode ser diretamente a uma ou mais articulações afetadas. Como observado ao longo, a administração dos exossomos derivados de MSC divulgados e / ou fatores de crescimento pode ser qualquer método conhecido por aqueles versados na técnica. Por conseguinte, são divulgados aqui métodos de tratamento, inibição, redução, melhoria e / ou prevenção de uma doença, distúrbio, lesão (tal como, por exemplo, osteoartrite, artrite juvenil, artrite psoriática, artrite infecciosa, artrite reumatoide, espondilite anquilosante, gota, bursite, tendinose, tendinite, entorse, laceração labral, ruptura de um tendão e / ou ruptura de um ligamento) ou sintomas dos mesmos (como, por exemplo, dor, inflamação e / ou inchaço) afetando uma ou mais articulações (tal como, por exemplo, tornozelo, joelho, quadril, punho, cotovelo, ombro, junta e / ou pescoço) em um sujeito que compreende administrar a um sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma preparação de exossomo de células-tronco mesenquimais (MSC), em que os exossomos MSC são administrados via injeção, exossomo MSC portando andaime, hidrogel e / ou creme tópico ou pomada. À medida que o campo da engenharia de tecidos avança, a necessidade de novas estruturas de andaimes e técnicas de fabricação reproduzíveis se tornou de suma importância. O uso de polímeros biodegradáveis, como o ácido polilático (PLA), tornou-se generalizado, mas a maneira como esses polímeros são processados e os aditivos usados no momento da fabricação permitem que as propriedades finais do andaime sejam ajustadas.

[0050] Os poli-hidroxilácidos, como o PLA e o ácido poli-láctico-co-glicólico (PLGA), têm sido amplamente usados para procedimentos de engenharia de tecidos, uma vez que esses materiais se degradam em massa por hidrólise, proporcionando uma liberação de droga controlável e perfil de degradação para corresponder ao tecido em crescimento. Com o uso cuidadoso de pesos moleculares, ligações cruzadas e cadeias laterais, os materiais podem ser produzidos com propriedades personalizadas, tornando-os ideais para uso em matrizes de engenharia de tecidos. Além disso, os materiais de ácido poli-hidroxilado também têm uma longa história de uso in vivo como suturas degradáveis, dispositivos de distribuição de drogas e componentes cirúrgicos biodegradáveis.

[0051] Os tipos de andaimes existentes incluem alta pressão, andaimes de espumade CO2, andaimes injetáveis e novos andaimes personalizados. Estes podem ser modificados posteriormente usando fatores de crescimento, zoneamento de materiais e deposição de polimerização de plasma. Enquanto o andaime intensifica a residência das MSCs sinoviais para serem adjacentes à cartilagem articular, isso pode ser aumentado pela adição de citocinas. Por exemplo, o PLGA com fator de crescimento transformador-β3 (TFG-β3) intensifica a diferenciação de MSC em condrócitos, enquanto a implantação de PLGA com fator-1α derivado do estroma (SDF-1α) resulta no reparo da cartilagem articular. Assim, a implantação de PLGA combinado com várias citocinas aumenta a diferenciação mais eficiente de MSCs sinoviais em cartilagem articular. Esta técnica fornece fatores de crescimento MSC concentrados e RNA para as MSCs sinoviais localizadas na estrutura peri-articular para maximizar a diferenciação em condrócitos.

[0052] A título de exemplo, algumas modalidades da invenção incluem um método para o tratamento da osteoartrite, o método compreendendo um procedimento artroscópico de uma etapa para restaurar a cartilagem articular artrítica a uma condição fisiológica normal. Especificamente, o método pode compreender separar células-tronco mesenquimais sinoviais (MSCs) da sinóvia usando um dispositivo de escova; cobrindo a cartilagem articular com um andaime; e colocar exossomos de MSC concentrados na articulação afetada, como a articulação do joelho, para estimular a diferenciação das MSCs sinoviais em células da cartilagem articular.

[0053] Em modalidades, a escova pode ser uma escova artroscópica projetada especificamente para ser usada em conjunto com uma junta particular.

[0054] Quando o andaime é colocado artroscopicamente na articulação, como o joelho, para cobrir a cartilagem articular, as MSCs flutuantes intra-articulares podem se anexar ao andaime peri-articular. Colocar os exossomos MSC na articulação pode fornecer fatores de crescimento e vários RNAs para estimular a diferenciação das MSCs sinoviais em condrócitos. Como resultado, a cartilagem articular artrítica danificada pode ser restaurada. Células-tronco mesenquimais

[0055] Conforme observado ao longo, as composições de tratamento divulgadas neste documento podem utilizar exossomos e / ou fatores de crescimento derivados de células-tronco mesenquimais (MSCs). Embora existam MSCs autógenas e alogênicas contidas na medula óssea, concentrado de medula óssea, derivado da sinóvia células-tronco mesenquimais (MSCs), ou fração vascular do estroma derivado do tecido adiposo (SVF) ou vários produtos pós-natais do cordão umbilical, placenta ou âmnio, culturas de MSC expandidas estão sendo usadas atualmente para tratar feridas, patologia ortopédica e patologia da coluna; os tratamentos existentes não contêm grandes quantidades de secretomas de MSC (incluindo, mas não se limitando a fatores de crescimento, citocinas, quimiocinas, exossomos, vesículas extracelulares e / ou extratos). Além disso, apesar das evidências na técnica de que os tratamentos que compreendem células-tronco (incluindo tratamentos injetáveis) podem ajudar a prevenir o envelhecimento e tratar cicatrizes, pigmentação irregular, produtos para a pele existentes, como cremes, loções, soros, maquiagem e semelhantes, incluindo ingredientes que potencialmente ajudam a tratar e fortalecer a pele, outros produtos tópicos não penetram na epiderme e, mais importante, não incluem MSCs humanas ou fatores de crescimento e proteínas derivados de MSC. Na verdade, antes da presente divulgação, não foi desenvolvido um produto de fator de crescimento de MSC ativo que pode ser usado para essas aplicações. Assim, em um aspecto, são divulgadas aqui composições de secretoma de MSC (incluindo, mas não se limitando a fator de crescimento de MSC, exossomo de MSC, extratos de MSC e / ou vesículas extracelulares compreendendo composições) para uso no tratamento de feridas, distúrbios ortopédicos, lesões ortopédicas, oftalmologia, lesão medular ou distúrbios da coluna vertebral, as referidas composições de tratamento compreendendo (i) um fator de crescimento aditivo em pó compreendendo uma preparação derivada de células-tronco mesenquimais (MSC) e (ii) um transportador farmaceuticamente aceitável.

[0056] Como observado acima, as MSC são células multipotentes que têm a capacidade de se diferenciar em uma infinidade de tipos de células, incluindo miócitos, condrócitos, adipócitos e osteoblastos. Normalmente, essas células podem ser encontradas na placenta, sangue do cordão umbilical, tecido adiposo, medula óssea ou líquido amniótico, incluindo tecido perivascular. Como utilizado neste documento, "MSC" refere-se a células diferenciadas não terminais, incluindo, mas não se limitando a células-tronco multipotenciais, células estromais multipotenciais, células vasculares estromais, pericitos, células perivasculares, células estromais, células pluripotentes, células multipotentes, células semelhantes a fibroblastos derivadas de tecido adiposo, fração vascular estromal derivada de adiposo, MSC derivada de tecido adiposo, células semelhantes a fibroblastos derivadas de medula óssea, fração vascular estromal derivada de medula óssea, MSC derivada de medula óssea, células semelhantes a fibroblastos derivadas de tecido, células-tronco adultas, células estromais adultas, queratinócitos e / ou melanócitos.

[0057] Há muito se reconhece que as MSC, além de seu potencial de diferenciação, têm habilidades imunomodulatórias que resultam na expressão de muitas citocinas e fatores de crescimento diferentes. Como utilizado neste documento, uma "preparação de MSC" ou "composição de secretoma de MSC" refere-se a uma composição que compreende fatores de crescimento de MSC, exossomos de MSC, vesículas extracelulares ou extratos acelulares de MSCs ou lisados de MSC obtidos de MSCs humanas, células semelhantes a fibroblastos, e MSCs de animais não humanos incluindo, mas não se limitando a MSCs de cavalos, vacas, porcos, ovelhas, primatas não humanos, cães, gatos, coelhos, ratos e camundongos. Em modalidades, as MSCs podem ser derivadas do paciente ao qual a composição será aplicada (autóloga) ou derivada de outro indivíduo (alogênico). As MSCs podem ser expandidas em cultura para coletar o meio condicionado ou para aumentar a quantidade de células para o lisado ou usadas recentemente antes da incorporação na composição da presente divulgação.

[0058] As composições de secretoma de MSC (incluindo, mas não se limitando a fator de crescimento de MSC, exossomo de MSC, extratos de MSC e / ou vesículas extracelulares compreendendo composições) podem compreender cerca de 0,00001 a cerca de 20% em peso, tal como de cerca de 0,01 a cerca de 10% em peso, de um extrato de célula-tronco mesenquimal (MSC), exossomo MSC ou preparação de fator de crescimento MSC. A preparação de MSC pode compreender meio condicionado de MSC ou lisado de MSC de MSCs expandidas de cultura de células. Em algumas modalidades, a composição pode compreender ainda de cerca de 0,01 a cerca de 10% em peso de um meio livre de células condicionado pelo crescimento de MSCs ou células de linhagem MSC, em que as células são cultivadas em condições normais de cultura hiperóxica ou em condições artificiais de cicatrização de feridas.

[0059] Conforme divulgado neste documento, as MSCs utilizadas para produzir os aditivos de MSC divulgadas (incluindo a composição do secretoma do fator de crescimento, tanto congelados quanto em pó) podem ser estimuladas seletivamente para produzir fatores de crescimento MSC, secretomas, citocinas, quimiocinas, proteínas de células-tronco mesenquimais, peptídeos, glicosaminoglicanos, matriz extracelular (ECM), proteoglicanos, secretomas e exossomos. Como utilizado neste documento, os fatores de crescimento de MSC incluem, mas não estão limitados a prostaglandina E2 (PGE2), fator de crescimento transformador β1 (TGF-β1), fator de crescimento de hepatócitos (HGF), fator-1 derivado de células estromais (SDF-1), óxido nítrico, indoleamina 2,3-dioxigenase, interleucina-4 (IL-4), IL-6, interleucina-10 (IL-10),antagonista do receptor de IL-1 e receptor de TNF-α solúvel, fatores de crescimento semelhantes à insulina, fatores de crescimento de fibroblastos (FGF) 1- 23 (especialmente, FGF1 e FGF2), proteínas morfogenéticas ósseas (BMPs) 1-15, fator de crescimento epidérmico (EGF), fator de crescimento transformador-α (TGF- α) proteína estimuladora de macrófagos (MSP), fator de crescimento derivado de plaquetas (PLGF), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), fator estimulador de colônias de macrófagos (M-CSF), insulina, fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSF), fator estimulador de colônias de granulócitos macrófagos (GM-

CSF), bem como hormônios, incluindo estrogênio e hormônios da tireoide.

[0060] Em um aspecto, a preparação de MSC (tal como, por exemplo, uma composição de secretoma de MSC) compreende fatores de crescimento de MSC, exossomos de MSC e / ou extratos celulares de MSCs ou lisados de MSC obtidos a partir de MSCs cultivados sob condições de cultivo hiperóxico padrão (por exemplo, 21% de oxigênio) ou MSCs cultivadas em condições artificiais de cicatrização de feridas (como, por exemplo, 0,1% a cerca de 5% de oxigênio na presença de citocinas inflamatórias, fatores angiogênicos e glicose reduzida).

[0061] Conforme divulgado neste documento, as condições de cicatrização de feridas artificiais simulam as condições de crescimento em feridas reais, onde há uma redução no fornecimento de nutrientes e redução da remoção de resíduos que geralmente é causada por uma interrupção na circulação sanguínea local. Isso cria um ambiente hostil para as células até que novos vasos sanguíneos sejam criados e a circulação sanguínea seja restaurada. Consequentemente, as condições de cicatrização de feridas artificiais usadas para cultivar MSCs podem incluir uma ou mais das seguintes condições de crescimento: redução da disponibilidade de glicose, redução da tensão de oxigênio, redução do pH e aumento da temperatura.

[0062] Em um aspecto, a disponibilidade de glicose pode ser reduzida em relação ao controle normal. Os meios de cultura modificados para reduzir a glicose, mas não danificar as células, podem estar entre 0 e 50% de redução na glicose, mais preferencialmente entre cerca de 5% e 40% de redução na glicose. Por exemplo, as condições de cultura de cicatrização de feridas artificiais de MSC podem compreender reduzir a glicose de cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6,7, 8 9, 10, 11, 12,13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 ou 50%, como uma redução de glicose de cerca de 5% a cerca de 15%, de cerca de 10% a cerca de 20%, de cerca de 15% a cerca de 25%, de cerca de 20 % a cerca de 30%, ou de cerca de 25% a cerca de 35%.

[0063] Em um aspecto, a tensão de oxigênio pode ser reduzida a níveis de oxigênio a condições de hipóxia. O oxigênio atmosférico normal é de aproximadamente 21% e qualquer redução é considerada hipóxica. Assim, em um aspecto, as MSCs podem ser cultivadas em entre 0,0% e 20,9% de oxigênio, de cerca de 0,1% a cerca de 0,5% de oxigênio, de cerca de 0,1% a cerca de 2,0%, de cerca de 0,1% a cerca de 5,0% de oxigênio, de cerca de 0,5% a 5,0%, de cerca de 1,0% a cerca de 10% de oxigênio, cerca de 5,0% a cerca de 10,0% de oxigênio; e de cerca de 10,0% a cerca de 15,0% em condições de cicatrização artificial de feridas. De preferência, durante condições de cultura de cura de ferida de MSC, a tensão de oxigênio está entre cerca de 0,5% e 20,5% de oxigênio, tal como, por exemplo, 0, 0,05, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1 , 1,2, 1,3,1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,7, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6 , 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8, 7,9, 8,0, 8,1, 8,2, 8,3, 8,4, 8,5, 8,6 , 8,7, 8,8, 8,9, 9,0, 9,1, 9,2, 9,3, 9,4, 9,5, 9,6, 9,7, 9,8, 9,9, 10, 10,5, 11, 11,5, 12, 12,5, 13, 13,5, 14, 14,5, 15, 15,5, 16, 16,5, 17, 17,5, 18, 18,5, 19, 19,5, 20 ou 20,5% de oxigênio.

[0064] O pH também pode ser reduzido em condições de cicatrização artificial de feridas. O pH fisiológico é mantido com muita rigidez e geralmente está muito próximo de um pH neutro = 7,2 ± 0,2 (7,0 - 7,4). No entanto, em uma ferida, o ambiente acídico pode ter um pH = 6,2 ± 0,2 (isto é, um pH de 6,0 a cerca de 6,4). Assim, sob condições de cultura de cicatrização de feridas artificiais, o pH pode ser de cerca de 6,0 a cerca de 7,4, por exemplo, de 6,0 a cerca de 6,4, de cerca de 6,2 a cerca de 6,4, de cerca de 6,2 a cerca de 6,6, de cerca de 6,4 a cerca de 6,6, de cerca de 6,4 a cerca de 6,8, ou de cerca de 6,6 a cerca de 7,0, tal como 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3 ou 7,4.

[0065] Sob condições de cultura de cicatrização artificial de feridas, a temperatura do ambiente de cultura pode ser aumentada para simular aumentos de temperatura no local de uma ferida. A temperatura da homeostase fisiológica é mantida a 37°C (98,6°F). Um ligeiro aumento ou diminuição pode causar alterações significativas no metabolismo celular. Aumentar a temperatura acima de 37°C para qualquer temperatura até cerca de 40°C (104°F) pode criar um ambiente “febril”. Assim, no aspecto, as condições de cultura de cicatrização de feridas artificiais para as MSCs podem compreender de cerca de 35 ° C a cerca de 39 ° C, de cerca de 35 ° C a cerca de 36 ° C, de cerca de 36 ° C a cerca de 37 ° C, de cerca de 37 ° C a cerca de 38 ° C, de cerca de 38 ° C a cerca de 39 ° C, de cerca de 39 ° C a cerca de 40 ° C. Em um aspecto, a temperatura da cultura de cicatrização artificial de feridas pode ser 35,0, 35,1, 35,2, 35,3, 36,4, 35,5, 35,6, 35,7, 35,8, 35,9, 36,0, 36,1, 36,2, 36,3, 36,4, 36,5, 36,6, 36,7, 36,8, 36,9, 37,0,.37,1, 37,2, 37,3, 37,4, 37,5, 37,6, 37,7, 37,8, 37,9, 38,0, 38,1, 38,2, 38,3, 38,4, 38,5, 38,6, 38,7, 38,8, 38,9, 39,0, 39,1, 39,2, 39,3, 39,4, 39,5, 39,6, 39,7, 39,8, 39,9 ou 40,0 ° C.

[0066] Em um aspecto, as composições de secretoma de MSC (incluindo, mas não se limitando a fator de crescimento de MSC, exossoma de MSC, extratos de MSC e / ou vesículas extracelulares compreendendo composições) podem compreender ainda um revestimento protetor (tal como, por exemplo, um oligossacarídeo crioprotetor e uma solução de proteína) para reduzir a degradação dos fatores de crescimento. É entendido e aqui contemplado que o revestimento protetor pode ser engenheirado como um polímero. "Polímero" refere-se a um composto orgânico de peso molecular relativamente alto, natural ou sintético, cuja estrutura pode ser representada por uma pequena unidade repetida, o monômero. Exemplos não limitativos de polímeros incluem polietileno, borracha, celulose. Os polímeros sintéticos são normalmente formados por polimerização por adição ou condensação de monômeros. O termo "copolímero" refere-se a um polímero formado a partir de duas ou mais unidades de repetição diferentes (resíduos de monômero). A título de exemplo e sem limitação, um copolímero pode ser um copolímero alternativo, um copolímero aleatório, um copolímero em bloco ou um copolímero de enxerto. Também é contemplado que, em certos aspectos, vários segmentos de bloco de um copolímero em bloco podem eles próprios compreender copolímeros. O termo "polímero" abrange todas as formas de polímeros, incluindo, mas não se limitando a, polímeros naturais, polímeros sintéticos, homopolímeros, heteropolímeros ou copolímeros, polímeros de adição, etc. Em um aspecto, a matriz de gel pode compreender copolímeros, copolímeros de bloco, copolímeros de dibloco e / ou copolímeros de tribloco.

[0067] Em um aspecto, o revestimento protetor pode compreender um polímero biocompatível.

Em um aspecto, o polímero biocompatível pode ser reticulado.

Esses polímeros também podem servir para liberar lentamente o agente de escurecimento adiposo e / ou agente modulador de gordura no tecido.

Como utilizado neste documento, os polímeros biocompatíveis incluem, mas não se limitam a polissacarídeos; polipeptídeos hidrofílicos; poli (aminoácidos), como ácido poli-L- glutâmico (PGS), ácido gama-poliglutâmico, ácido poli-L-aspártico, poli-L-serina ou poli-L-lisina; polialquilenoglicóis e óxidos de polialquileno, tais como polietilenoglicol (PEG), polipropilenoglicol (PPG) e poli (óxido de etileno) (PEO); poli(poliol oxietilado); poli (álcool olefínico); polivinilpirrolidona); poli (hidroxialquilmetacrilamida); poli(hidroxialquilmetacrilato); polissacarídeos); poli(hidroxiácidos); poli(álcool vinílico), poli-hidroxiácidos, tais como poli(ácido lático), poli(ácido glicólico) e poli (ácido lático- ácidos coglicólicos); poli-hidroxialcanoatos, tal como poli3-hidroxibutirato ou poli4- hidroxibutirato; policaprolactonas; poli(ortoésteres); polianidridos; poli(fosfazenos); poli(lactídeo-co-caprolactonas); policarbonatos, tais como policarbonatos de tirosina; poliamidas (incluindo poliamidas sintéticas e naturais), polipeptídeos e poli(aminoácidos); poliesteramidas; poliésteres; poli(dioxanonas); poli(alquilenos alquilados); poliéteres hidrofóbicos; poliuretanos; poliéterésteres; poliacetais; policianoacrilatos; poliacrilatos; polimetilmetacrilatos; polissiloxanos; copolímeros de poli(oxietileno)/poli(oxipropileno); policetais; polifosfatos; poli-hidroxivaleratos; oxalatos de polialquileno; succinatos de polialquileno; poli(ácidos maleicos), bem como copolímeros dos mesmos.

Polímeros biocompatíveis também podem incluir poliamidas, policarbonatos, polialquilenos, polialquilenoglicóis, óxidos de polialquileno, tereftalatos de polialquileno, álcoois polivinílicos (PVA), metacrilato PVA (m-PVA), éteres polivinílicos, ésteres de polivinil, haletos de polivinil, polivinilpirrolidona, poliglicolídeos, polissiloxanos, poliuretanos e copolímeros dos mesmos, alquil celulose, hidroxialquil celuloses, éteres de celulose, ésteres de celulose, nitro celuloses, polímeros de ésteres acrílicos e metacrílicos, metil celulose, etil celulose, metil celulose, hidroxipropil celulose, hidroxi-propil metil celulose, hidroxibutil metil celulose, acetato de celulose, propionato de celulose, butirato de acetato de celulose, ftalato de acetato de celulose, carboxiletil celulose, triacetato de celulose, sal de sódio de sulfato de celulose, poli (metacrilato de metil), poli (metacrilato de etil), poli (metacrilato de butil), poli (metacrilato de isobutil), poli (metacrilato de hexil), poli(isodecilmetacrilato), poli (lauril metacrilato), poli (fenil metacrilato), poli (metil acrilato), poli (isopropil acrilato), poli (isobutil acrilato), poli (octadecil acrilato), polietileno, polipropileno, poli (etileno glicol), poli (óxido de etileno), poli (tereftalato de etileno), poli (álcoois vinílicos), poli (vinil acetato, poli cloreto de vinil poliestireno e polivinilpirrolidona, derivados dos mesmos, copolímeros lineares e ramificados e copolímeros em bloco dos mesmos, e misturas dos mesmos. Polímeros biodegradáveis exemplificativos incluem poliésteres, poli(ortoésteres), poli(etileno aminas), poli(caprolactonas), poli(hidroxibutiratos), poli(hidroxivaleratos), polianidridos, poli(ácidos acrílicos), poliglicolídeos, poli (uretanos), policarbonatos, ésteres de polifosfato, polifospliazenos, derivados dos mesmos, copolímeros lineares e ramificados e copolímeros em bloco dos mesmos, e misturas dos mesmos.

[0068] Em algumas modalidades, o revestimento protetor compreende a construção de carboidratos de monossacarídeos, bem como polímeros de carboidratos, como dissacarídeos ou polissacarídeos, incluindo, mas não se limitando a poli ou dissacarídeos não redutores, bem como qualquer combinação dos mesmos. Exemplos de carboidratos que podem ser usados no revestimento protetor compreendem Glicose, Aldoses (D-Allose, D-Altrose, D-Manose, etc.), Glicopiranose, Penta-hidroxi-hexanal, α-D-Glicopiranosil-D-glicose, α-D- Glicopiranosil-di-hidratado, Polímero de unidades β-D-Glicopiranosil, β-D-Frutofuranosil α-D-glicopiranosídeo (anidro / di-hidratado), β-D-Galactopiranosil-D-glicose, α-D-Glicopiranosil-α-D- glicopiranosídeo (anidro / di-hidratado), Galactose, Pentoses (Ribose, xilose, lixose), Dextrose, Dodecacarbono monodeca-hidratado, Frutose, Sacarose, Lactose, Maltose, Trealose, Agarose, D-galactosil-β- (1-4) -anidro-L-galactosil, Celulose, Polímero de unidades β-D-Glicopiranosil e Amido, bem como, Álcoois poli-hídricos, Poliálcoois, Alditóis, Eritritol, Glicitóis, Glicerol, Xilitol e Sorbitol.

[0069] Em algumas modalidades, o revestimento protetor contém poliésteres ou polianidridos biocompatíveis e / ou biodegradáveis, como poli (ácido lático), poli (ácido glicólico) e poli (ácido lático-co-glicólico). As partículas podem conter um mais dos seguintes poliésteres: homopolímeros incluindo unidades de ácido glicólico, aqui referidas como "PGA", e unidades de ácido lático, tais como poli-L-ácido lático, poli- D-ácido lático, poli-D,L-ácido lático, poli-L-lactídeo, poli-D-lactídeo e poli-D,L-lactídeo 5 aqui referidos coletivamente como "PLA", e unidades de caprolactona, tais como poli(e-caprolactona), coletivamente referidas como aqui como "PCL"; e copolímeros incluindo unidades de ácido lático e ácido glicólico, tais como várias formas de poli(ácido lático-co-ácido glicólico) e poli(lactídeo-co-glicolídeo) caracterizados pela razão de ácido láctico:ácido glicólico, coletivamente referidos aqui como "PLGA"; e poliacrilatos e derivados dos mesmos. Polímeros exemplificativos também incluem copolímeros de polietileno glicol (PEG) e os poliésteres acima mencionados, tais como várias formas de copolímeros PLGA-PEG ou PLA-PEG, coletivamente referidos aqui como "polímeros PEGuilados". Em certas modalidades, a região PEG pode ser associada covalentemente ao polímero para produzir "polímeros PEGuilados" por um ligante clivável. Em um aspecto, o polímero compreende pelo menos 60, 65, 70, 75, 80, 85, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99 por cento de grupos pendentes de acetal.

[0070] Os copolímeros tribloco divulgados neste documento compreendem um polímero de núcleo, tal como, por exemplo, polietileno glicol (PEG), acetato de polivinil, álcool polivinílico, polivinil pirrolidona (PVP), óxido de polietileno (PEO), poli(vinil pirrolidona-co-acetato de vinil), polimetacrilatos, éteres alquílicos de polioxietileno, óleos de rícino de polioxietileno, policaprolactama, ácido polilático, ácido poliglicólico, ácido poli(lático-glicólico), ácido poli(lático-co-glicólico) (PLGA), derivados de celulose, tais como hidroximetilcelulose, hidroxipropilcelulose e semelhantes.

[0071] Exemplos de copolímeros dibloco que podem ser usados nos revestimentos de proteção aqui divulgados compreendem um polímero, tal como, por exemplo, polietileno glicol (PEG), acetato de polivinil, álcool polivinílico (PVA), polivinil pirrolidona (PVP), óxido de polietileno (PEO), poli(vinilpirrolidona-co-acetato de vinil), polimetacrilatos, éteres alquílicos de polioxietileno, óleos de rícino polioxietileno, policaprolactama, ácido polilático, ácido poliglicólico, ácido poli(láctico-glicólico), ácido poli(co-glicólico lático) (PLGA).

[0072] Em um aspecto, o revestimento protetor contém (isto é, as composições encapsuladas, as encapsuladas podem compreender ainda lecitina ou lecitina hidrolisada como um transportador ou como material de encapsulamento. Como utilizado neste documento, os revestimentos de lecitina e / ou lecitina hidrolisada incluem revestimentos compreendendo fosfatidil colina, fosfatidil inositol, fosfatidil etanolamina, fosfatidilserina e ácido fosfatídico. As fontes de lecitina podem ser fontes naturais ou animais.

[0073] Em um aspecto, qualquer um dos polímeros, monossacarídeos, dissacarídeos ou polissacarídeos usados para formar o revestimento protetor formado pela colocação do aditivo MSC em uma solução encapsulante pode estar em uma concentração apropriada para formar o revestimento protetor. Por exemplo, polímeros, monossacarídeos, dissacarídeos ou polissacarídeos podem estar em qualquer concentração entre 0,01 mM e concentração de 10,0 M, por exemplo, de cerca de 0,01 M a cerca de 0,1 M, de cerca de 0,1 mM a cerca de 1,0 M, de cerca de 1,0 M a cerca de 10,0 milhões. Concentrações exemplificativas incluem 0,01, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,4, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6 , 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 225, 250 , 275, 300, 325, 350, 375, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900mM, 1, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2, 3, 4 , 5, 6, 7, 8, 9, 10M.

[0074] Como mostrado nas Figuras 1 e 2, os exossomas e vesículas extracelulares nas composições de secretoma de MSC divulgadas foram produzidas.

[0075] Em um aspecto, é entendido e aqui contemplado que uma maneira de tratar uma ferida é através da administração das composições de secretoma de MSC (incluindo, mas não se limitando a fator de crescimento de MSC, exossomo de MSC, extratos de MSC e / ou vesículas extracelulares compreendendo composições) por via subcutânea, por via intramuscular, intravenosa, tópica (como, por exemplo, através do uso de pomadas, cremes e / ou pomadas), mas também por impregnação de stents, esponjas, matrizes, andaimes, bandagens, curativos, suturas, enxertos, fitas cirúrgicas, adesivos cirúrgicos e / ou grampos com as composições de secretoma de

MSC. Assim, em um aspecto, são divulgados aqui stents medicamentosos, andaimes, esponjas, matrizes, bandagens adesivas, curativos para feridas, enxertos, fitas cirúrgicas, suturas, pomadas, cremes ou adesivos para feridas compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição de secretoma de MSC. As composições de secretoma de MSC (incluindo, mas não se limitando a fator de crescimento de MSC, exossomo de MSC, extratos de MSC e / ou vesículas extracelulares compreendendo composições), como observado acima, podem ser administradas topicamente e aplicadas no rosto, pescoço, mãos ou qualquer outra parte desejada do corpo. Quando aplicada a uma bandagem adesiva, curativo para feridas, enxertos, fita cirúrgica, sutura, andaime, matriz, esponja ou stent, a composição do secretoma do MSC pode ser aplicada como um pó.

[0076] Em um aspecto, as composições de secretoma de MSC (incluindo, mas não se limitando a fator de crescimento de MSC, exossomo de MSC, extratos de MSC e / ou vesículas extracelulares compreendendo composições) divulgadas neste documento podem compreender quaisquer ingredientes conhecidos tipicamente encontrados nos campos de cicatrização de feridas, tais como óleos, ceras ou outras substâncias graxas padrão, ou agentes gelificantes convencionais e / ou espessantes; emulsificantes; agentes hidratantes; emolientes; protetores solares; agentes ativos hidrofílicos ou lipofílicos, tais como ceramidas; agentes para combater os radicais livres; bactericidas; agentes sequestrantes; conservantes; agentes basificantes ou acidificantes; fragrâncias; tensoativos; enchimentos; produtos naturais ou extratos de produtos naturais, como aloe vera ou extrato de chá verde; vitaminas; ou materiais de coloração. Outros ingredientes que podem ser combinados com o pó podem incluir um antioxidante, que pode ser selecionado de uma variedade de antioxidantes. Antioxidantes adequados incluem vitaminas, tais como Vitamina C (L-Ascorbato, Ascorbato-2 Fosfato sal de magnésio, Ascorbil Palmitato, Tetra-hexildecil Ascorbato), Vitamina E (Tocotrienol), Vitamina A (retinol, retinal, ácido retinoico, provitamina A carotenoides, tais como beta-caroteno), N-acetil glucosamina ou outros derivados de glucosamina. Outros ingredientes podem incluir pelo menos um ácido graxo essencial, como ácidos graxos poli-insaturados Ω-3, Ω-6 e Ω-9, como ácido linoleico (LA), ácido gama-linoleico (GLA), ácido alfa-linoleico (ALA), ácido di-homo-y-linolênico (DGLA), ácido araquidônico (ARA) e outros. Os ácidos graxos podem ser derivados de várias fontes, incluindo óleo de prímula, óleo de groselha preta, óleo de borragem ou sementes de cártamo modificadas com GLA. Outros ingredientes podem incluir uma matriz de fibrina rica em plaquetas, pelo menos um ingrediente para apoiar a produção de ECM e a produção de ácido hialurônico, como N-acetil glicosamina ou outros derivados de glicosamina, ácido hialurônico de peso molecular ultrabaixo (ULMW), sulfato de condroitina, ou sulfato de queratina.

[0077] É entendido e aqui contemplado que as composições de secretoma de MSC divulgadas neste documento podem fornecer rejuvenescimento, aumento e tecido cutâneo melhorado ou restaurado para a cicatrização de feridas. A composição também pode ser usada como injetável no tratamento de artrite articular e discos espinhais degenerados. Além disso, as modalidades da composição podem não exigir a inclusão de fatores de crescimento adicionais, como insulina, fatores de crescimento semelhantes à insulina, hormônios da tireoide, fatores de crescimento de fibroblastos, estrogênio, ácido retinoico e semelhantes. Em algum aspecto, as composições de fator de crescimento de células-tronco divulgadas podem compreender ingredientes ativos adicionais, incluindo, mas não se limitando a antibióticos, agentes anti-acne, lipossomas, antioxidantes, matrizes de fibrina ricas em plaquetas, analgésicos, anti- inflamatórios, bem como, fatores de crescimento adicionais, tais como insulina, fatores de crescimento semelhantes à insulina, hormônios da tireoide, fatores de crescimento de fibroblastos, estrogênio, ácido retinoico e semelhantes. Tais ingredientes ativos adicionais podem ser misturados com o fator de crescimento de células-tronco e composições de vesículas extracelulares divulgadas neste documento, bem como meio condicionado de MSC, lisatos de MSC e produtos derivados de MSC e, em seguida, descongelados ou dissolvidos, misturados ou suspensos em uma mistura de álcoois de lanolina emulsificantes, ceras e óleos ou uma mistura de vaselina ou óleo mineral, um composto de amônio quaternário, um álcool graxo e um emoliente de éster graxo ou loções que são substancialmente semelhantes em composição. Exemplos

[0078] Os seguintes exemplos são apresentados de modo a proporcionar aos versados na técnica uma divulgação completa e descrição de como os compostos, composições, artigos, dispositivos e/ou métodos aqui reivindicados são feitos e avaliados, e se destinam a ser puramente exemplificativos e não se destinam a limitar a divulgação. Têm sido feitos esforços para assegurar a precisão em relação aos números (por exemplo, quantidades, temperatura, etc), mas alguns erros e desvios devem ser considerados. Salvo indicação em contrário, as partes são partes por peso, a temperatura está em qC ou está à temperatura ambiente, e a pressão está em ou perto da atmosférica. Exemplo 1: injeção intra-articular de um produto isolado de vesícula extracelular para tratar lacerações labrais do quadril

[0079] As articulações diartrodiais, como joelho, quadril e ombro consistem em cartilagem articular, uma cápsula sinovial e uma estrutura fibrocartilaginosa para aumentar a estabilidade da articulação. O joelho possui um menisco medial e lateral. O ombro e o quadril do paciente têm, cada um, um labro que aumenta a concavidade da glenoide e do acetábulo. Todas essas estruturas fibrocartilaginosas têm suprimento nervoso e, quando rompidas, podem ser muito dolorosas. Essas estruturas têm suprimento sanguíneo limitado e, quando danificadas, têm capacidade mínima de cicatrização. Essas estruturas podem se romper com uma lesão aguda ou por um processo degenerativo crônico. O labro acetabular cria um selo fibrocartilaginoso ao redor do acetábulo ósseo. O labro aumenta a profundidade, área de superfície, volume, congruência e estabilidade da articulação do quadril. Foi demonstrado que o labro aumenta em média 22% na área de superfície articular da articulação do quadril. O labro diminui o estresse na cartilagem articular, regulando o transporte de fluido entre os compartimentos central e periférico e distribuindo a pressão de contato pelas superfícies articulares. Esta vedação fluida é uma das funções mais importantes do labro, pois produz uma pressão intra-articular negativa, aumentando significativamente a estabilidade articular.

[0080] Se a forma da cabeça femoral e do acetábulo não corresponderem perfeitamente, pode ocorrer impacto femoral-acetabular. Esta é uma condição genética que predispõe o labro do quadril a lesões traumáticas. As rupturas labrais do quadril estão associadas a certas atividades, como ginástica, corrida, salto, tênis, futebol e ciclismo. O diagnóstico é suspeitado quando a ROM do quadril, especialmente a flexão forçada com rotação interna, duplica a dor na virilha que o paciente normalmente experimenta. O diagnóstico é confirmado com varredura de MRI.

[0081] Há uma escassez de tratamentos não cirúrgicos para rupturas labrais do quadril. A solução mais comum e eficaz inclui diminuir ou evitar atividades que causam dor. A fisioterapia tem demonstrado pouca eficácia. As opções cirúrgicas são geralmente realizadas por via artroscópica. As opções cirúrgicas incluem reparar a laceração labral ou, mais comumente, ressecar o labro rasgado. Krych, et al, relataram os resultados do tratamento artroscópico do quadril para rupturas labrais. Eles relataram 59 pacientes, a idade média foi de 46 e o acompanhamento médio foi de 5 anos. Eles relataram uma taxa de falha clínica de 45% devido à repetição da cirurgia em 20% e dor contínua em 25%.

[0082] Relatórios publicados sobre o uso de injeções de concentrado de medula óssea autógeno (BMC) com células-tronco mesenquimais (MSC) para tratar lacerações labrais do ombro indicam segurança e eficácia. O MSC é a única célula que pode se diferenciar em condroblasto, osteoblasto ou fibroblasto. Historicamente, pensava-se que a diferenciação era o mecanismo pelo qual as injeções de MSC tratavam a patologia das articulações. É cada vez mais reconhecido que a eficácia do uso de injeções de MSC para tratar várias doenças se deve à sua função parácrina de liberar fatores de crescimento anti-inflamatórios (GF) e exossomos. Esses GFs e exossomos podem ser injetados sem nenhuma célula viva. Este relato de caso irá apresentar o conceito de uso de MSC GFs e exossomos derivados da medula óssea acelular para tratar rupturas labrais do quadril. Isso é descrito como um produto isolado de vesícula extracelular (EVIP). O artigo irá discutir a razão de porque acelular irá substituir todas as terapias biológicas celulares atuais, tanto autógenas quanto alogênicas para o tratamento de várias patologias articulares. Materiais e Métodos

[0083] Este é um relato de caso de uma injeção de EVIP para o tratamento de uma ruptura labral do quadril. Uma ruptura labral do quadril é caracterizada por um travamento, estalido ou travamento na articulação do quadril. A dor é sentida na virilha ou irradiando para a área trocantérica. Os pacientes se queixam de rigidez ou limitação da amplitude de movimento do quadril. Varredura de MRI é usada para diagnosticar uma ruptura labral da articulação do quadril. A paciente é uma triatleta, treinadora pessoal e instrutora de saúde extremamente ativa, de 50 anos. Após vários meses de dor na virilha não tratada, ela apresentou em 11/06/2019 um aumento na virilha direita e dor nas nádegas irradiando para a parte superior da perna. Seus sintomas foram exacerbados com atividades que exigiam ROM do quadril. Varredura de MRI da articulação do quadril em 4/6/19 revelou uma ruptura do labro superior, desgaste labral anterior superior, ruptura do tendão do glúteo mínimo, inflamação trocantérica da bolsa e tendinose comum dos isquiotibiais. A articulação do quadril não tinha osteoartrite. Ela havia sido tratada com NSAIDs, liberação semanal ativa e tratamentos de quiropraxia. No exame físico, ela teve uma perda geral de 20% da ROM do quadril. A rotação interna forçada e a flexão replicaram e exacerbaram severamente sua dor. A paciente sentia que, de modo geral, seu quadril direito estava menos de 50% do normal em comparação com o quadril oposto. A paciente foi avaliada com um Inventário de Dor Breve (BPI), um Índice Funcional de Extremidade Inferior (LEFI) e um Índice de Deficiência de Oswestry (ODI) antes da injeção e no acompanhamento. A injeção no quadril

[0084] Após aconselhamento e consentimento, a paciente em 11/06/2019 foi submetida à injeção no quadril. A virilha direita e a área das nádegas foram esterilizadas com uma preparação para pele com betadina. Uma agulha de calibre 20 foi colocada através de uma abordagem anterior na articulação do quadril. A colocação da agulha foi verificada por fluoroscopia. Neste ponto, 2 cc do EVIP congelado (ExoFlo-Direct Biologics, St. Louis MO) foi descongelado à temperatura ambiente e colocado na junta. Resultados Clínicos

[0085] A paciente foi colocada em atividade física restrita por 1 semana após o procedimento. A amplitude de movimento passiva de baixa resistência foi encorajada imediatamente. A paciente voltou às atividades completas em 10 dias. Seis semanas após o procedimento, ela conseguiu em um dia correr 7 milhas, 2 horas de caiaque e nadar 600 jardas. Ela foi capaz de dormir como uma “pedra” e acordar sem dor. A paciente opina que experimentou uma melhora geral de 75% em relação aos sintomas de laceração hiplabral pré-procedimento. Varredura de MRI de acompanhamento

[0086] Uma varredura de MRI de artrograma de gadolínio de acompanhamento do quadril direito foi realizada em 28/08/2019. A varredura NÃO mostrou laceração labral discreta. Não houve evidência de tendinose ou laceração intersticial do tendão mínimo dos glúteos. Não houve inflamação trocantérica bursal. A impressão foi uma MRI negativa da articulação do quadril direito. Seus resultados clínicos desde o pré- procedimento até a FU de 12 semanas são mostrados na (Figura 1) e (Tabela 1). Eles detalham a melhora observada em seu Inventário de Dor Breve (uma pontuação mais baixa é melhor), o Índice de Deficiência de Oswestry (uma pontuação mais baixa é melhor) e sua Pontuação Funcional de Extremidade Inferior (uma pontuação mais alta é melhor).

[0087] Tabela 1: Medidas de avaliação física com a melhoria percentual ao longo das 12 semanas iniciais.

12 Semanas Melhoria Linha de Base 6 Semanas Percentual Discussão

[0088] A paciente é uma triatleta ativa de 50 anos com histórico de aumento da dor devido à laceração labral do quadril documentada. Ela foi submetida a uma única injeção anterior no quadril de 2 cc de células-tronco mesenquimais derivadas da medula óssea EVIP (ExoFlo-Direct Biologics, St. Louis MO) contendo fatores de crescimento ativos e exossomos. Duas semanas depois, seus sintomas de laceração labral melhoraram em 75%. Essa melhora foi mantida por três meses. Seus documentos de MRI de artrograma pré-injeção documenta uma ruptura do labro superior, desgaste labral anterior superior, ruptura do tendão glúteo mínimo, inflamação trocantérica da bolsa e tendinose comum dos isquiotibiais. A articulação do quadril não tinha osteoartrite. Documentos de MRI de artrograma pós-injeção não documenta nenhuma evidência de laceração labral. Não houve evidência de tendinose ou laceração intersticial do tendão mínimo dos glúteos. Não houve inflamação trocantérica bursal. A impressão foi uma MRI negativa da articulação do quadril direito. Ela continuará a ser monitorada de perto por dois anos.

[0089] O tratamento não operatório das rupturas labrais sintomáticas consiste basicamente em evitar atividades que causem dor. As opções cirúrgicas são a remoção artroscópica ou o reparo do labro. Os resultados publicados indicam uma taxa de falha de 45% com a cirurgia labral artroscópica do quadril.

[0090] Com base na compreensão da biologia das rupturas labrais, o tratamento não operatório será uma injeção de fatores de crescimento derivados de MSC acelulares e, especialmente, exossomos. O exossomo é uma minúscula estrutura bifosfolipídica fechada com uma membrana de 30 a 150 nanômetros (1 bilionésimo de um metro) criada pelos endossomos. Um MSC (12 a 18 mícrons) é 1.000 vezes maior que um exossomo. O diâmetro de um fio de cabelo é de 80.000 nanômetros. Os exossomos contêm fatores de crescimento, lipídeos de sinalização e micro e RNA mensageiro. Esses fatores parácrinos podem ser colocados em qualquer articulação em concentrações de 100.000 ou mais vezes a de qualquer tratamento MSC celular. Essas proteínas e exossomos do fator de crescimento funcionam de forma parácrina para, direta e indiretamente, alterar o ambiente inflamatório de uma laceração labral dolorosa de volta a um ambiente fisiológico normal não doloroso e estimular a cura fibrocartilaginosa.

[0091] O futuro tratamento acelular para lacerações labrais envolverá um processo de duas etapas: primeiro, fatores de crescimento anti-inflamatórios de MSC derivados de medula óssea altamente concentrados e exossomos são injetados na articulação dolorida. Em segundo lugar, esses fatores de crescimento e exossomos entram nas MSCs sinoviais receptoras para estimular a produção de novos condroblastos e secretomas anti-inflamatórios, quimiocinas e citocinas. Foi demonstrado que esses efeitos curam lacerações fibrocartilaginosas. Este tratamento biológico acelular pode ser alcançado com uma única injeção articular. O futuro da medicina regenerativa em ortopedia e coluna vertebral pode muito bem ser a utilização de fatores de crescimento derivados de MSC acelulares altamente concentrados e especialmente exossomos. Exemplo 2: injeção intra-articular de uma vesícula extracelular isolada para tratar a osteoartrite do ombro em um atleta

[0092] A osteoartrite do ombro (OA) demonstrou em estudos de cadáveres e radiográficos afetar até 33% dos pacientes com mais de 60 anos. Os pacientes que apresentam OA no ombro têm dor, crepitação, perda de movimento e diminuição da capacidade de colocar a mão em um ponto desejado no espaço. Limitar a capacidade de colocar a mão onde deseja prejudica gravemente as atividades da vida diária. Os tratamentos não cirúrgicos para OA de ombro, na tentativa de manter a amplitude de movimento, incluem exercícios de ombro, uso de analgésicos e anti-inflamatórios não esteroidais. Se esses tratamentos não cirúrgicos falharem em aliviar o comprometimento da OA, o tratamento cirúrgico padrão é a artroplastia total do ombro (TSA).

[0093] Recentemente, tem se tornado cada vez mais entendido por pesquisadores e médicos que a eficácia clínica da utilização de células-tronco mesenquimais (MSCs) para tratar a osteoartrite (OA). Além disso, está se tornando evidente que o alívio não depende da diferenciação das células em cartilagem articular, mas inteiramente de sua liberação parácrina de fatores de crescimento (GFs) e exossomos, com as células possivelmente interferindo no processo de cicatrização. Fatores de crescimento ativos e exossomos podem funcionar sem as células quando distribuídos em uma articulação artrítica. Este é um relato de caso de uma injeção de produto isolado de vesícula extracelular (EVIP) derivado de MSC acelular para o tratamento de osteoartrite do ombro. OA de ombro é definida por dor e rigidez na articulação do ombro, agravada pelo exercício e diminuição da amplitude de movimento do ombro. Este relato de caso irá apresentar o conceito de uso de EVIP contendo fatores de crescimento ativos e exossomos para tratar OA e a justificativa de porque os tratamentos biológicos acelulares podem substituir as terapias biológicas celulares autógenas e alogênicas atuais.

MÉTODOS

[0094] O paciente, um atleta do sexo masculino de 57 anos que é destro dominante, apresentava um histórico de mais de 14 anos de aumento de dor bilateral no ombro direito muito pior do que no lado esquerdo. Radiografias e varredura de MRI pré-procedimento foram usadas para distinguir a osteoartrite da articulação glenoumeral das anormalidades do manguito rotador. Uma varredura de MRI prévia do ombro obtida em 5/1/2006 (13 anos antes deste procedimento) revelou uma pontuação Kellgren-Lawrence de 4, que é osteoartrite osso sobre osso da articulação glenoumeral.

[0095] O paciente foi avaliado posteriormente em cada visita com um exame físico do ombro e usando QuickDASH (QD), uma medida da função do ombro com pontuações mais baixas sendo o ideal; O Índice Funcional de Extremidade Superior (UEFI) com maiores porcentagens sendo melhores pontuações; O Inventário de Dor Breve (BPI) com pontuações mais altas indica maior dor, bem como uma avaliação da autoavaliação do paciente sobre a melhora geral do ombro. Esses procedimentos de avaliação física foram realizados em três visitas clínicas diferentes: pré- procedimento e, em seguida, seis semanas e doze semanas após o procedimento. No exame físico inicial, observou-se perda média de 75% da articulação glenoumeral direita interna, externa e abdução. Todas as avaliações da amplitude de movimento foram associadas a dor intensa, crepitação e estalido ósseo. A radiografia pré- procedimento do ombro é mostrada na Figura 2.

INJEÇÃO NO OMBRO

[0096] Após aconselhamento e consentimento, o ombro direito do paciente foi preparado com solução cutânea de betadina. Uma agulha de calibre 20 foi colocada através de uma abordagem anterior na articulação glenoumeral. A agulha foi colocada contra a cabeça humoral dentro da cápsula articular do ombro. A colocação da agulha foi verificada pela rotação interna e externa da cabeça do úmero fazendo com que a agulha se movesse. Uma preparação de 2.0 cc do EVIP congelado(ExoFlo - Direct Biologics, St. Louis, MO) foi descongelada à temperatura ambiente e colocada na articulação glenoumeral.

[0097] O paciente foi colocado em atividade física restrita por 1 semana após o procedimento. A amplitude de movimento passiva de baixa resistência foi encorajada imediatamente. Duas semanas após o procedimento, o paciente voltou às atividades completas.

RESULTADOS

[0098] A melhora geral do ombro avaliada pelo paciente foi de 75% a partir de 2 semanas após a injeção até a avaliação de 12 semanas. O QuickDASH, o Índice Funcional da Extremidade Superior e o Inventário de Dor Breve foram todos melhorados em 2 semanas e essa melhoria foi mantida até 12 semanas, conforme mostrado no gráfico na figura 3 e os valores exibidos na Tabela 2.

[0099] Tabela 2: Medidas de avaliação física com a melhoria percentual ao longo das 12 semanas iniciais. Linha de base 6 semanas 12 semanas Melhoria percentual BPI 43 17 18 58% UEFI 42 84 86 51% QuickDASH 82 41 41 50%

[0100] A melhora geral do ombro foi autoavaliada em 75%. A amplitude de movimento glenoumeral pós-procedimento melhorou em 33% com base no exame físico.

DISCUSSÃO

[0101] O paciente é um atleta ativo do sexo masculino, 57 anos, que apresentou histórico de dor crescente no ombro dominante direito há mais de 14 anos. Ele foi diagnosticado com osteoartrite glenoumeral osso sobre osso de Kellgren-Lawrence grau quatro sem anormalidades do manguito rotador. Não é esperado observar regeneração da cartilagem articular. As radiografias de acompanhamento não mudarão. Ele foi submetido a uma única injeção de 2 cc de um EVIP derivado da medula óssea contendo fatores de crescimento ativos e exossomos. A injeção foi realizada sem complicações. Em duas semanas, o paciente melhorou 50% ou mais com base nas escalas de medição BPI, UEFI e QD. Ele avaliou seu ombro como um todo melhorado em 75%. Ele havia retornado às atividades completas por duas semanas. Esses resultados foram mantidos por 12 semanas. O paciente continuará a ser monitorado em momentos posteriores. O alívio da dor observado parece ser devido à diminuição da inflamação da cápsula sinovial.

[0102] O ombro é uma articulação diartrodial com revestimento sinovial e cápsula articular. A cápsula sinovial contém numerosas MSCs sinoviais (mais do que as encontradas na medula óssea ou adiposa). Essas MSCs têm maior potencial condrogênico do que as MSCs ósseas ou adiposas. Durante o desenvolvimento da OA, fatores de crescimento pró-inflamatórios e catabólicos são produzidos por essas MSCs sinoviais. Isso cria um ambiente articular doloroso e degenerativo cronicamente inflamado. O concentrado de medula óssea (BMC) contém em média apenas cerca de 2.500 MSCs por cc. Apesar do número incrivelmente pequeno de MSCs encontrados no BMC; há extensa literatura relatando eficácia clínica no uso de BMC para o tratamento de OA. Este efeito não pode ser dependente da sobrevida ou diferenciação das células BMC / MSC. O efeito eficaz deve ser a partir da liberação de fatores parácrinos acelulares. O futuro do tratamento biológico da OA será a utilização de fatores de crescimento derivados de MSC acelulares e especialmente exossomos. O exossomo é uma minúscula estrutura fechada por membrana bifosfolipídica de 30 a 150 nanômetros (1 bilionésimo de metro) criada dentro do citoplasma da célula. Um MSC (12 a 30 mícrons) é ~ 1.000 vezes maior que um exossomo. Para referência, o diâmetro de um cabelo é de 80.000 nanômetros ou 80 mícrons. Os exossomos contêm fatores de crescimento, lipídeos de sinalização e micro e RNA mensageiro (miRNA and mRNA). O teor de RNA nos exossomos medeia a maioria de seus efeitos anti-inflamatórios. O RNA é empacotado em um exossomo junto com vários fatores de crescimento naturalmente pela célula. Esses fatores parácrinos derivados de células podem ser colocados em qualquer articulação em concentrações de 100.000 ou mais vezes a de qualquer tratamento de MSC celular e funcionam de forma parácrina para, direta e indiretamente, alterar o ambiente inflamatório de qualquer articulação artrítica dolorosa de volta ao ambiente fisiológico homeostático normal não doloroso. A Figura 4 ilustra essa atualização.

[0103] O futuro tratamento acelular para OA envolverá um ataque em duas frentes. Primeiro, fatores de crescimento derivados de MSC anti-inflamatórios altamente concentrados são injetados na articulação artrítica. Esses fatores de crescimento entrarão no núcleo do receptor sinovial MSC. Os fatores de crescimento EVIP estimularão a transcrição de mRNA contendo instruções celulares para produzir secretomas anti-inflamatórios e regenerativos contínuos, quimiocinas e citocinas. Eles são liberados das células receptoras para o líquido sinovial. Em segundo lugar, os exossomos altamente concentrados do EVIP entrarão nas células receptoras para distribuir seu mRNA e miRNA. Este mRNA distribuído irá sofrer tradução diretamente nos ribossomos MSC sinoviais receptores para produzir um secretoma anti- inflamatório e regenerativo (fatores de crescimento, citocinas, quimiocinas e vesículas extracelulares). Esses efeitos salubres podem durar meses ou anos. Este tratamento biológico acelular pode ser alcançado com uma única injeção na articulação artrítica e evita a morbidade e o custo de obtenção de MSCs autógenas. O futuro da medicina regenerativa em ortopedia e coluna vertebral pode muito bem ser a utilização de fatores de crescimento acelulares derivados da medula óssea MSC altamente concentrados e especialmente exossomos. Exemplo 3: injeção intra-articular de um produto isolado de vesícula extracelular para tratar a osteoartrite do quadril

[0104] A osteoartrite do quadril (OA) demonstrou, em estudos de cadáveres e radiográficos, afetar até 55 milhões de pacientes com mais de 60 anos. Pacientes com OA de quadril têm dor, crepitação, perda de movimento e diminuição da capacidade de suportar peso ou deambular. Limitar a capacidade de deambular prejudica gravemente as atividades da vida diária. Os tratamentos não cirúrgicos para OA de acordo com a American Academy of Orthopaedic Surgeons (AAOS), incluem perda de peso, exercícios leves e o uso de medicamentos anti-inflamatórios não esteroides. O tratamento cirúrgico da OA do qualdril anterior é a artroplastia total do quadril (THA). A AAOS não recomenda a artroscopia do quadril ou o uso de qualquer injeções de ácido hialurônico.

[0105] Nos últimos anos, tem se tornado cada vez mais compreendido por pesquisadores e médicos que a eficácia clínica da utilização de células-tronco mesenquimais (MSCs) para tratar a osteoartrite (OA) não depende da diferenciação das células em cartilagem articular, mas inteiramente de sua liberação parácrina de fatores de crescimento (GFs) e exossomos. As MSCs vivas não são necessárias para realizar a liberação de GFs e exossomos em uma articulação artrítica. Este relato de caso irá apresentar o conceito de uso de um produto isolado de vesícula extracelular derivado de MSC acelular (EVIP) contendo fatores de crescimento ativos e exossomos para tratar hipOAs, bem como a justificativa de por que o acelular pode substituir todas as terapias biológicas celulares atuais tanto autógenas quanto alogênicas atualmente em uso.

MATERIAIS E MÉTODOS

[0106] Este é um relato de caso de uma injeção de EVIP para o tratamento de osteoartrite do quadril. A OA é definida por inchaço, dor e rigidez na articulação do quadril. Os sintomas geralmente pioram com a sustentação do peso e a deambulação. Radiografias e varredura de MRI foram usadas para classificar a osteoartrite da articulação do quadril de um a quatro usando a escala de Kellgen-Lawrence.

[0107] O paciente é um bombeiro aposentado de 63 anos de idade. Ele apresentava uma dor crescente na virilha esquerda e uma perda progressiva da capacidade de continuar sua rotina diária de exercícios na academia. Ele experimentou uma perda progressiva da mobilidade do quadril. Varredura de MRI e radiografias da articulação do quadril esquerdo foram compatíveis com alterações osteoartríticas de grau 3 de Kellgren-Lawrence da articulação do quadril esquerdo. No exame físico, ele apresentava claudicação antálgica e sinal de Trendelenburg positivo. A ROM passiva da articulação do quadril foi associada à reprodução de forte dor na virilha, crepitação e perda da rotação interna. O paciente tinha BMI de 27. Os NSAIDs falharam em fornecer o alívio adequado da dor. O paciente estava considerando seriamente a artroplastia total do quadril. Na tentativa de evitar a cirurgia, ele optou por uma injeção de EVIP contendo GFs ativos e exossomos em seu quadril.

[0108] As radiografias de uma pelve são mostradas na Figura 5. Esta radiografia mostra um quadril direito normal e um quadril OA de grau três à esquerda. O quadril esquerdo foi esterilizado com preparação para pele com betadina. Uma agulha espinhal de calibre 20 foi colocada através de uma abordagem anterolateral na articulação do quadril. A colocação da agulha foi verificada por fluoroscopia. Neste ponto, 2 cc do EVIP congelado (ExoFlo-Direct Biologics, St. Louis MO) foi descongelado à temperatura ambiente e colocado na junta. A paciente foi colocada em atividade física restrita por uma semana após o procedimento. A amplitude de movimento passiva de baixa resistência foi encorajada imediatamente. O paciente voltou às atividades completas em duas semanas.

RESULTADOS CLÍNICOS

[0109] No seguimento de três meses, o paciente havia retornado à sua rotina de condicionamento físico anterior sem limitações. Ele não está mais limitado em seu perfil de exercícios e aproveitou o retorno de uma ROM de quadril sem dor funcional. Ele voltou às atividades plenas sem restrições.

DISCUSSÃO

[0110] O quadril é uma articulação diartrodial com revestimento sinovial e cápsula articular. A cápsula sinovial contém numerosas MSCs sinoviais (mais do que as encontradas na medula óssea ou tecido adiposo). Essas MSCs têm maior potencial condrogênico do que as MSCs ósseas ou adiposas. Durante o desenvolvimento da OA, fatores de crescimento pró-inflamatórios são produzidos por essas MSCs sinoviais. Isso cria um ambiente articular doloroso cronicamente inflamado. O concentrado de medula óssea (BMC) contém em média apenas cerca de 2.500 MSCs por cc. Apesar do número incrivelmente pequeno de MSCs encontrados no BMC;

existe uma extensa literatura relatando a eficácia clínica em animais e humanos usando BMC para o tratamento de OA. Este efeito não pode ser dependente da sobrevida ou diferenciação das células BMC / MSC. Essa eficácia deve ser decorrente da liberação de fatores parácrinos acelulares. O futuro do tratamento biológico da OA será a utilização de fatores de crescimento derivados de MSC acelulares e especialmente exossomos.

[0111] O exossomo é uma minúscula estrutura bifosfolipídica fechada com uma membrana de 30 a 150 nanômetros (1 bilionésimo de um metro) criada pelo corpo ou aparelho de Golgi. Um MSC (12 a 18 mícrons) é 1.000 vezes maior que um exossomo. O diâmetro de um fio de cabelo é de 80.000 nanômetros. Os exossomos contêm fatores de crescimento, lipídeos de sinalização e micro e RNA mensageiro. O teor de RNA dentro dos exossomos medeia a maioria de seus efeitos anti-inflamatórios. O RNA é colocado em um exossomo junto com vários fatores de crescimento de peptídeos. Esses fatores parácrinos podem ser colocados em qualquer articulação em concentrações de 100.000 ou mais vezes a de qualquer tratamento MSC celular. Essas proteínas e exossomos do fator de crescimento funcionarão de forma parácrina, tanto direta quanto indiretamente, alterando o ambiente inflamatório de qualquer articulação artrítica dolorosa de volta a um ambiente fisiológico normal e não doloroso.

[0112] O futuro tratamento acelular para OA envolverá um ataque em duas frentes. Primeiro, fatores de crescimento derivados de MSC anti-inflamatórios altamente concentrados são injetados em uma articulação artrítica. Esses fatores de crescimento entrarão no núcleo do receptor sinovial MSC. Os fatores de crescimento EVIP estimularão a transcrição de mRNA contendo instruções para a produção de secretomas anti-inflamatórios contínuos, quimiocinas e citocinas. Estes serão liberados da MSC sinovial do receptor para o líquido sinovial. Em segundo lugar, os exossomos altamente concentrados do EVIP entrarão nas MSCs sinoviais do receptor para distribuir seu mRNA. Este mRNA será submetido à tradução direta nos ribossomos sinoviais do receptor MSC para produzir secretomas anti-inflamatórios, citocinas e quimiocinas.

[0113] Esses efeitos salubres podem durar meses ou anos. Este tratamento biológico acelular pode ser alcançado com uma única injeção na articulação artrítica sem exigir a morbidade e o custo de obtenção de MSCs autógenas. O futuro da medicina regenerativa em ortopedia e coluna vertebral pode muito bem ser a utilização de fatores de crescimento derivados de MSC acelulares altamente concentrados e especialmente exossomos. Exemplo 4: Tratamento da artrite do cotovelo com uma injeção intra-articular isolada de vesícula extracelular

[0114] A osteoartrite primária (OA) do cotovelo é uma condição incomum associada a uma predisposição genética. Isso ocorre predominantemente na articulação ulno-umeral da extremidade dominante de pacientes que praticam esportes pesados ou trabalho de parto. A OA pós-traumática do cotovelo é muito mais comum. Uma variedade de insultos traumáticos pode resultar em formas específicas de OA pós-traumática do cotovelo. As queixas mais comuns de pacientes com artrite primária ou pós-traumática do cotovelo são dor e / ou perda de movimento. A perda de extensão e pronação pode ser compensada mais facilmente do que a perda de flexão e supinação.

[0115] O manejo não operatório continua sendo a base do tratamento inicial para OA de cotovelo. Isso geralmente inclui luvas de cotovelo, medicamentos anti- inflamatórios não esteroides e injeções de corticosteroides intra-articulares. Evitar atividades agressivas de flexão e extensão terminal pode resultar em alívio substancial da dor (levantamento de peso, boxe, etc.). Um curso de reabilitação supervisionado por um terapeuta certificado é normalmente reservado para pacientes que apresentam uma apresentação aguda sobre crônica de sintomas com derrame associado e limitações de movimento.

[0116] O manejo cirúrgico é indicado para pacientes com dor intensa no cotovelo ou perda significativa de mobilidade com consequente comprometimento da função dos membros superiores e limitação das atividades diárias. Os avanços na artroscopia do cotovelo resultaram em desfechos favoráveis e substituíram totalmente qualquer desbridamento cirúrgico aberto. O desbridamento artroscópico do cotovelo, particularmente em uma população de pacientes mais jovens, tem resultados razoáveis com melhora da dor e da amplitude de movimento. É importante observar que os procedimentos publicados são realizados por cirurgiões com experiência substancial em técnicas seguras e meticulosas em artroscopia de cotovelo. A artroplastia total do cotovelo é mais apropriada para pacientes idosos de baixa demanda (> 60 anos) com artrite inflamatória, pós-traumática ou primária do cotovelo. A artroplastia total de cotovelo raramente é aplicada no contexto de OA de cotovelo em uma população mais jovem e tipicamente masculina.

[0117] Há um grande vazio entre o tratamento não operatório e operatório da OA de cotovelo. Este é um relato de caso de uma jovem quiroprática muito ativa com OA de cotovelo. Ela foi tratada com uma única injeção intra-articular de um isolado de vesícula extracelular de células-tronco mesenquimais (MSC) derivadas da medula óssea contendo fatores de crescimento ativos e exossomos. Materiais e Métodos:

[0118] A paciente é uma quiroprática praticante de 60 anos de idade, muito ativa e saudável. Ela inicialmente machucou o cotovelo direito dominante aos 16 anos em um grave acidente de esqui aquático. Ela sofreu uma luxação completa do cotovelo com sua ulna e rádio localizados posteriormente ao úmero. Não houve lesão neurovascular. O cotovelo foi reduzido sob anestesia geral. Após a recuperação, ela não tinha 150 de extensão total e 100 de flexão total. Não houve redução da supinação ou pronação. Ela sofreu uma segunda lesão aos 58 anos, resultando em uma luxação completa da cabeça do rádio. Após esta lesão, ela desenvolveu artrite traumática da articulação do capitelo radial com dor diária e edema articular exacerbado com atividades. Sua capacidade de praticar o tratamento quiroprático foi severamente limitada. Ela tomava NSAIDs e terapia com gelo regularmente depois do trabalho. Seu exame físico do cotovelo revelou uma perda de 15 0 de extensão do cotovelo e perda de 100 de flexão. Ela teve uma perda de 100 de pronação e supinação. Havia mais um inchaço na articulação do cotovelo. Suas radiografias revelam osteoartrite de Kellgren-Lawrence grau três da articulação do cotovelo (Figuras 6A e 6B). Injeção de cotovelo:

[0119] Após aconselhamento e consentimento, a paciente em 11/06/2019 foi submetida à injeção no cotovelo. A área da articulação do cotovelo direito foi esterilizada com um preparado de pele com betadina. Uma agulha de calibre 20 foi colocada através de uma abordagem lateral e medial na articulação do cotovelo. Neste ponto, 3 cc do EVIP congelado (ExoFlo-Direct Biologics, St. Louis MO) foi descongelado à temperatura ambiente e colocado no lado medial e lateral da articulação do cotovelo. O paciente não apresentou reações adversas. Todo o procedimento durou 15 minutos. Resultados

[0120] Após a injeção, a articulação do cotovelo ficou dolorida e inchada por vários dias. Ela ficou sem trabalhar por uma semana. Seus sintomas melhoraram nas 4 semanas seguintes. Por volta de 6 semanas após a injeção, ela sentiu que seu cotovelo estava 50% melhor. Essa melhora continuou por 3 meses e o cotovelo agora está 70% melhorado antes da injeção. A amplitude de movimento do cotovelo não mudou após a injeção de EVIP (Tabela 3 e Figura 7).

[0121] Tabela 3: 6 Pré-injeção semanas 3 meses Melhoria percentual ODI 26 12 6 77% UEFS 24 42 54 56% BPI 22 14 8 64%

DISCUSSÃO

[0122] Este é um estudo de caso de uma quiroprática ativa de 60 anos com um histórico de muitos anos de um cotovelo osteoartrítico traumático cada vez mais sintomático. Ela sofreu uma luxação posterior do cotovelo grave aos 16 anos. Seus sintomas foram exacerbados pelo trabalho, a ponto de ela estar pensando em se aposentar. Esta foi uma decisão importante porque ela estava trabalhando sozinha com despesas financeiras. Sua opção cirúrgica foi a artroplastia total do cotovelo. Ela seria incapaz de retornar à sua prática de Quiropraxia após este procedimento cirúrgico. O objetivo da cirurgia era tentar melhorar suas atividades da vida diária, não um retorno ao trabalho extenuante. Em uma tentativa de evitar a cirurgia e continuar a praticar a quiropraxia, ela decidiu tentar uma injeção de cotovelo do EVIP MSC derivado da medula óssea contendo fatores de crescimento ativos e exossomos (ExoFlo-Direct Biologics, St. Louis MO). Três meses após a injeção, seu cotovelo melhorou 70% e ela está trabalhando em tempo integral.

[0123] O cotovelo é uma articulação diartrodial com revestimento sinovial e cápsula articular. A cápsula sinovial contém numerosas MSCs sinoviais (mais do que as encontradas na medula óssea ou adiposa). Essas MSCs têm maior potencial condrogênico do que as MSCs ósseas ou adiposas. Durante o desenvolvimento da OA, fatores de crescimento pró-inflamatórios são produzidos por essas MSCs sinoviais. Isso cria um ambiente articular doloroso cronicamente inflamado. O concentrado de medula óssea (BMC) contém em média apenas cerca de 2.500 MSCs por cc. Apesar do número incrivelmente pequeno de MSCs encontrados no BMC; existe uma extensa literatura relatando a eficácia clínica em animais e humanos usando BMC para o tratamento de OA. Este efeito não pode ser dependente da sobrevida ou diferenciação das células BMC / MSC. O efeito eficaz deve ser a partir da liberação de fatores parácrinos acelulares. O futuro do tratamento biológico da OA será a utilização de fatores de crescimento derivados de MSC acelulares e especialmente exossomos. O exossomo é uma minúscula estrutura bifosfolipídica fechada com uma membrana de 30 a 150 nanômetros (1 bilionésimo de um metro) criada pelo corpo ou aparelho de Golgi. Um MSC (12 a 18 mícrons) é 1.000 vezes maior que um exossomo. O diâmetro de um fio de cabelo é de 80.000 nanômetros. Os exossomos contêm fatores de crescimento, lipídeos de sinalização e micro e RNA mensageiro. O teor de RNA nos exossomos medeia a maioria de seus efeitos anti- inflamatórios. O RNA é colocado em um exossomo junto com vários fatores de crescimento de peptídeos. Esses fatores parácrinos podem ser colocados em qualquer articulação em concentrações de 100.000 ou mais vezes a de qualquer tratamento MSC celular. Essas proteínas e exossomos do fator de crescimento funcionarão de forma parácrina, direta e indiretamente, alterando o ambiente inflamatório de qualquer articulação artrítica dolorosa de volta a um ambiente fisiológico normal e não doloroso.

[0124] O futuro tratamento acelular para OA envolverá um ataque em duas frentes. Primeiro, fatores de crescimento derivados de MSC anti-inflamatórios altamente concentrados são injetados na articulação artrítica. Esses fatores de crescimento entrarão no núcleo do receptor sinovial MSC. Os fatores de crescimento EVIP estimularão a transcrição de mRNA contendo instruções para a produção de secretomas anti-inflamatórios contínuos, quimiocinas e citocinas. Estes serão liberados da MSC sinovial do receptor para o líquido sinovial. Em segundo lugar, os exossomos altamente concentrados do EVIP entrarão nas MSCs sinoviais do receptor para distribuir seu mRNA. Este mRNA distribuído será diretamente submetido à tradução nos ribossomos sinoviais do receptor MSC para produzir secretomas anti- inflamatórios, citocinas e quimiocinas. Esses efeitos salubres podem durar meses ou anos. Este tratamento biológico acelular pode ser alcançado com uma única injeção na articulação artrítica sem exigir a morbidade e o custo de obtenção de MSCs autógenas. O futuro da medicina regenerativa em ortopedia e coluna vertebral pode muito bem ser a utilização de fatores de crescimento acelulares derivados da medula óssea MSC altamente concentrados e especialmente exossomos. Exemplo 5: tratamento de osteoartrite por administração EVIP

[0125] O produto isolado de vesícula extracelular (EVIP) derivado de células- tronco mesenquimais da medula óssea contém fatores de crescimento ativos (mais de 800) e exossomos (mais de 10 bilhões por cc). Este é o primeiro relatório patrocinado pelo IRB sobre a segurança e eficácia de uma injeção de EVIP para tratar OA. Trinta e três ex-Navy Seals foram injetados com o EVIP para joelho (n = 58), ombro (n = 32), cotovelo (n = 16), quadril (n = 12), tornozelo (n = 8) ou punho (n = 6) OA. No acompanhamento de três meses, o paciente médio do joelho melhorou 70% no Inventário de Dor Breve (BPI), 67% no Índice de Deficiência de Oswestry (ODI) e 62% na Escala Funcional de Extremidade Inferior (LEFS), o paciente médio do ombro melhorou 68% no BPI, 82% no ODI, 74% no QD e 68% no UEFS, o paciente médio do cotovelo melhorou 76% no BPI 81% no QD e 76% no UEFS, o paciente médio do quadril melhorou 70% no BPI, 72% no ODI e 64% no LEFS, o paciente médio do tornozelo melhorou 70% no BPI, 72% no ODI e 64% no LEFS, e o paciente médio do punho melhorou 68% no BPI, 64% no QD e 74% no UEFS. Todas as melhorias foram para um p <0,001. Não houve complicações e nenhum paciente piorou com a injeção de EVIP. No acompanhamento de 3 meses, a injeção de EVIP para OA parece segura e eficaz e deve ser considerada antes da substituição da articulação. Caracterização EVIP:

[0126] O produto é derivado da medula óssea de uma doadora de 22 anos cujas MSCs foram armazenadas e registradas no FDA. O produto final dessas células contém mais de 800 fatores de crescimento ativos diferentes e bem mais de 30 bilhões de exossomos por cc. O produto é utilizado na forma congelada. A esterilização é obtida por ultrafiltração, não por radiação. Os exossomos acelulares, derivados de MSCs da medula óssea, fornecem um produto consistente com extensa caracterização que inclui análise avançada de partículas, avaliação proteômica e garantia de esterilidade USP <71>. A identificação e quantificação de citocinas e fatores de crescimento também são realizadas. Pense nos exossomos acelulares como um produto de qualidade terapêutica consistente, padronizado e com qualidade testada em relação à dose e à atividade. Dados Demográficos do Paciente:

[0127] O número de pacientes em tratamento para joelho, ombro, cotovelo, quadril, tornozelo e punho juntamente com o BMI médio e a idade média são apresentados na Tabela 4.

[0128] Técnica de injeção: Todas as articulações injetadas foram esterilizadas com preparação para pele de betadina. Sob fluoroscopia, uma agulha de calibre 20 foi colocada na articulação artrítica. A colocação da agulha foi verificada sob controle fluoroscópico. Neste ponto, 2 cc do EVIP congelado (ExoFlo-Direct Biologics, St. Louis MO) foi descongelado à temperatura ambiente e colocado na junta. Todo o procedimento de injeção de quatro articulações por paciente demorou em média 30 minutos.

[0129] Os pacientes não receberam nenhuma medicação para a dor. Eles foram colocados em uma atividade física restrita por 2 semanas após o procedimento. A amplitude de movimento passiva de baixa resistência foi encorajada imediatamente. Após duas semanas, os pacientes puderam retornar à atividade plena. Testes de hipóteses

[0130] As comparações de dados univariáveis foram analisadas pelo teste t de Student bicaudal com um intervalo de confiança de 95% (α = 0,05. Microsoft Excel). Os dados multivariáveis foram avaliados por análise de variância (ANOVA) usando o software de análise estatística JMP 9 (SAS Institute, Cary NC). Resultados

[0131] Cada paciente foi contatado 12 horas, 24 horas, 48 horas e em 2 semanas, 6 semanas e 3 meses para discutir todos e quaisquer efeitos colaterais da injeção de EVIP. Não houve efeitos adversos relatados por nenhum paciente com a injeção de EVIP. Nenhum paciente piorou clinicamente com a injeção de EVIP.

[0132] Tabela 4: Descrição dos dados demográficos do paciente Ombro Quadril Joelho Número de pacientes 32 12 58

[0133] BMI = Média 28,5, Faixa = 23-35

[0134] Idade média = 48,8 anos, Faixa = 36-70

[0135] Joelho = 58, Ombro = 32, Cotovelo = 16, Quadris = 12, Tornozelos = 8, Pulso = 6, Número total de articulações injetadas = 132 Referências

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Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método para tratar, inibir, reduzir, melhorar e / ou prevenir uma doença, distúrbio, lesão ou sintomas dos mesmos que afetam uma ou mais articulações em um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma preparação de exossomo de células- tronco mesenquimais (MSC).

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a doença ou distúrbio compreende osteoartrite, artrite juvenil, artrite psoriática, artrite infecciosa, artrite reumatoide, espondilite anquilosante, gota, bursite, tendinose, tendinite, entorse, laceração labial, ruptura de um tendão e / ou laceração de um ligamento.

3. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a articulação compreende o tornozelo, joelho, quadril, punho, cotovelo, ombro, junta e / ou pescoço.

4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-3, caracterizado pelo fato de que a preparação de exossomo MSC é administrada a cada articulação afetada pelo distúrbio, doença ou lesão.

5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a preparação de exossomo de MSC compreende ainda fatores de crescimento obtidos de MSC.

6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que os exossomos de MSC são administrados via injeção, exossomo de MSC portando andaime, hidrogel e / ou creme ou pomada tópico.