BR112021014467A2 - Composições para iniciação bioativa de uma planta, peptídeo isolado, método para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta, método para aumentar teor de suco e semente - Google Patents

Composições para iniciação bioativa de uma planta, peptídeo isolado, método para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta, método para aumentar teor de suco e semente Download PDF

Info

Publication number
BR112021014467A2
BR112021014467A2 BR112021014467-6A BR112021014467A BR112021014467A2 BR 112021014467 A2 BR112021014467 A2 BR 112021014467A2 BR 112021014467 A BR112021014467 A BR 112021014467A BR 112021014467 A2 BR112021014467 A2 BR 112021014467A2
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
seq
polypeptide
flagellin
plant
amino acid
Prior art date
Application number
BR112021014467-6A
Other languages
English (en)
Inventor
Brian Thompson
Michelle Leslie
Original Assignee
Spogen Biotech Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Spogen Biotech Inc. filed Critical Spogen Biotech Inc.
Publication of BR112021014467A2 publication Critical patent/BR112021014467A2/pt

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2442—Chitinase (3.2.1.14)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H3/00—Processes for modifying phenotypes, e.g. symbiosis with bacteria
    • A01H3/04—Processes for modifying phenotypes, e.g. symbiosis with bacteria by treatment with chemicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6402—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from non-mammals
    • C12N9/6405—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from non-mammals not being snakes
    • C12N9/6408—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/78—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01001—Alpha-amylase (3.2.1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01006—Endo-1,3(4)-beta-glucanase (3.2.1.6)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01014—Chitinase (3.2.1.14)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y305/00—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5)
    • C12Y305/99—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5) in other compounds (3.5.99)
    • C12Y305/99007—1-Aminocyclopropane-1-carboxylate deaminase (3.5.99.7)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Cultivation Of Plants (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Fertilizers (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

composições para iniciação bioativa de uma planta, peptídeo isolado, método para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta, método para aumentar teor de suco e semente. peptídeos de iniciação bioativa isolados e composições de iniciação bioativa compreendendo polipeptídeos de iniciação bioativa e/ou compostos indutores são fornecidos que são úteis quando aplicados a plantas em formulações agrícolas. métodos de usar os peptídeos de iniciação bioativa isolados e/ou as composições também são fornecidas, as quais são aplicadas exogenamente à superfície de uma planta ou uma membrana de célula de planta ou endogenamente ao interior de uma planta ou a uma célula de planta.

Description

“COMPOSIÇÕES PARA INICIAÇÃO BIOATIVA DE UMA PLANTA, PEPTÍDEO ISOLADO, MÉTODO PARA AUMENTAR CRESCIMENTO, RENDIMENTO, SAÚDE, LONGEVIDADE, PRODUTIVIDADE E/OU VIGOR DE UMA PLANTA, MÉTODO PARA AUMENTAR TEOR DE SUCO E SEMENTE” CAMPO DA INVENÇÃO
[001] Composições de iniciação bioativas que podem ser distribuídas em formulações agrícolas são fornecidas. As composições compreendem polipeptídeos e/ou compostos indutores e podem ser aplicadas a colheitas para atingir resultados agronomicamente desejáveis, tal como fenótipos aprimorados em plantas (por exemplo, aqueles que exibem proteção contra pragas, agentes de doenças e tensão abiótica), elevado crescimento, produtividade e rendimento de planta. As composições e os métodos descritos neste documento são particularmente adequados para melhorar a saúde e a produtividade de colheitas de cítricos, especialidades, horticultura, em linha e videira.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[002] Métodos convencionais para alcançar fenótipos agronômicos desejados, tal como elevado rendimento, prevenção de doença, resistência a doença e tolerância a tensão abiótica melhorada, têm utilizado principalmente abordagens de reprodução seletiva, enxerto, transgênicas e agroquímicas.
POLIPEPTÍDEOS DE INICIAÇÃO BIOATIVOS ENVOLVIDOS EM RESPOSTAS DE DEFESA DE PLANTAS
[003] Plantas possuem um sistema imune que detecta e protege contra micróbios que podem causar doença. Peptídeos antimicrobianos (AMPs) em plantas são frequentemente a primeira linha de defesa contra patógenos invasores e estão envolvidos na iniciação de respostas de defesa que podem conferir imunidade inata a uma planta. Muitos AMPs são genericamente ativos contra vários tipos de agentes infecciosos. Eles são geralmente classificados como antibacterianos, antifúngicos, antivirais e/ou antiparasitários.
[004] A resistência de dadas espécies de plantas contra certos organismos patogênicos que pode contactar uma superfície de planta e colonizá-la é baseada em sistemas de reconhecimento altamente especializados para moléculas produzidas apenas por certos micróbios (por exemplo, cepas bacterianas ou fúngicas específicas). Plantas detectam potenciais invasores microbianos usando receptores de reconhecimento de padrão (PRRs) para reconhecer os padrões moleculares associados a patógeno (PAMPs) associados a eles.
FLAGELINA/POLIPEPTÍDEOS ASSOCIADOS A FLAGELINA
[005] Foi relatado que flagelinas e polipeptídeos associados a flagelina derivados dessas flagelinas têm papéis funcionais em respostas imunes inatas em plantas. Esses polipeptídeos são derivados de domínios altamente conservados de flagelina eubacteriana. Flagelina é o principal bloco de construção do flagelo bacteriano. A subunidade de proteína flagelina construindo o filamento de flagelo bacteriano pode agir como um potente eliciador em células para montar respostas relativas a defesa em várias espécies de plantas.
[006] "Flagelina" é uma proteína globular que polimeriza para formar a estrutura de filamento em forma de chicote do flagelo bacteriano.
Flagelina é o principal substituinte de flagelo bacteriano e está presente em bactérias flageladas. Plantas podem perceber, combater infecção e montar sinalização de defesa contra micróbios bacterianos por meio do reconhecimento de epítopos conservados, tal como o trecho de 22 aminoácidos (Flg22) localizado no N terminal de uma sequência de codificação de flagelina de comprimento total. A atividade elicitadora do polipeptídeo Flg22 é atribuída a esse domínio conservado dentro do N terminal da proteína flagelina (Felix et al., 1999). Plantas podem perceber bactérias por meio de receptores de reconhecimento de padrão (PRRs), que incluem cinases de receptor de repetição ricas em leucina localizadas na membrana plasmática e disponíveis na superfície de célula de planta. Em plantas, Flg22 é reconhecido pela cinase de receptor de repetição rico em leucina FLAGELLIN SENSING 2 (FLS2), que é altamente conservado em ambas as plantas monocotiledôneas e dicotiledôneas.
[007] Em Arabidopsis, a resposta imune inata a Flg22 envolve um complexo de proteína de reconhecimento de hospedeiro que contém o receptor de cinase de repetição rico em leucina (LRR) de FLS2 (Gómez-Gómez L. e Boller T., "FLS2: An LRR receptor-like kinase involved in the perception of the bacterial elicitor flagellin in Arabidopsis," Molecular Cell 5: 1003–1011, 2000).
Em Arabidopsis thaliana, FLS2 é um PRR que determina percepção d flagelina e é específico para a ligação do(s) polipeptídeo(s) associado(s) a flagelina. Por exemplo, a ligação de Flg22 ao receptor ligado a membrana plasmática dispara uma cascata de sinalização que está envolvida na ativação da imunidade disparada por padrão (Chinchilla et al., “The Arabidopsis receptor kinase FLS2 binds Flg22 and determines the specificity of flagellin perception,” Plant Cell 18: 465–476, 2006).
[008] Assim, a ligação de Flg22 ao receptor ligado a membrada de FLS2 de Arabidopsis promove a primeira etapa de ativação na qual a ligação elicita uma cascata de ativação para respostas de defesa na planta. A interação Flg22-FLS2 também pode levar à produção de espécies de oxigênio reativas (ROS) que contribuem para a indução de uma explosão oxidativa, alcalinização de meio celular, indução a jusante de genes responsivos a patógenos e respostas relativas a defesa as quais podem, então, conferir resistência a doença a uma planta (Felix G. et al., “Plants have a sensitive perception system for the most conserved domain of bacterial flagellin,” The
Plant Journal 18: 265–276, 1999, Gómez-Gómez L. e Boller T., "FLS2: An LRR receptor-like kinase involved in the perception of the bacterial elicitor flagellin in Arabidopsis," Molecular Cell 5: 1003–1011, 2000, Meindi et al., “The bacterial elicitor flagellin activates its receptor in tomato cells according to the address- message concept,” The Plant Cell 12: 1783–1794, 2000). Em tomate, ligação de alta afinidade de Flg22 a um receptor FLS foi observada usando tanto células intactas quanto preparações de membrana microssomal. Nesse estudo, a ligação de Flg22 ao(s) receptor(es) de FLS2 na superfície de membrana plasmática era não reversível em condições fisiológicas, o que reflete um processo de captação do elicitador Flg22 com importação para as células de tomate (Meindi et al., “The bacterial elicitor flagellin activates its receptor in tomato cells according to the address-message concept,” The Plant Cell 12: 1783–1794, 2000). Reconhecimento de Flg22 por FLS2 dispara ambas as respostas imunes de plantas locais e sistêmicas. O complexo de receptor de FLS2 ativado ligado a Flg22 é internalizado em células de plantas por endocitose e Flg22 é mostrado mover sistemicamente por toda a planta (Jelenska et al., “Flagellin peptide Flg22 gains access to long-distance trafficking in Arabidopsis via its receptor, FLS2,” Journal of Experimental Botany 68: 1769–1783, 2017), que pode contribuir para respostas imunes Flg22 sistêmicas.
[009] Percepção de flagelina envolvendo Flg22 é altamente conservada em táxons de plantas divergentes (Taki et al., “Analysis of flagellin perception mediated by Flg22 receptor OsFLS2 in rice,” Molecular Plant Microbe Interactions 21: 1635–1642, 2008). Concentrações submicromolares de polipeptídeos sintéticos compreendendo entre 15-22 ou 28 aminoácidos de domínios conservados de uma proteína flagelina agem como elicitadores para iniciar respostas de defesa em uma variedade de espécies de plantas.
[010] Geração de plantas transgênicas tem sido usada para confirmar PAMPs específicos de flagelina que ligam aos PRRs específicos de flagelina. Expressão ectópica de FLS2 em plantas de Arabidopsis mostrou uma correlação direta entre as respostas de flagelina e níveis de expressão de FLS2, o que indica que FLS2 está envolvido no reconhecimento de flagelina (um sinal de presença bacteriana) e leva à ativação de respostas de defesa em plantas (Gómez-Gómez L. and Boller T., "FLS2: An LRR receptor-like kinase involved in the perception of the bacterial elicitor flagellin in Arabidopsis," Molecular Cell 5: 1003–1011, 2000). Plantas transgênicas expressando receptor de ligação a flagelina mostraram eficácia contra certos patógenos.
Ligação de flagelina a FLS2 estava envolvida na iniciação de expressão de fatores de transcrição de MAP cinase específicos que funcionam a jusante do receptor de flagelina FLS2. Plantas mutantes (fls2) carecendo do receptor de FLS2 são insensíveis a Flg22 (Gómez-Gómez L. e Boller T., "FLS2: An LRR receptor-like kinase involved in the perception of the bacterial elicitor flagellin in Arabidopsis," Molecular Cell 5: 1003–1011, 2000) e prejudicada na ligação de Flg22 ao receptor de FLS2. Plantas mutantes (fls2) também exibiram suscetibilidade intensificada à infecção e doença quando tratadas com bactérias patogênicas (Zipfel et al., “Bacterial disease resistance in Arabidopsis through flagellin perception,” Nature 428: 764–767, 2004).
[011] Tradicionalmente, métodos para melhorar resistência a doença capitalizaram essas e outras descobertas e adotaram uma abordagem transgênica. Plantas transgênicas e sementes transformadas com uma proteína de receptor de Detecção de Flagelina (FLS) (WO2016007606A2 aqui incorporado por referência em sua totalidade) ou com fatores de transcrição envolvidos em sinalização a jusante de FLS (WO2002072782A2 incorporado aqui por referência em sua totalidade) produziram plantas que conferem resistência a doença a certos microrganismos patogênicos. Em outro exemplo, as plantas transgênicas expressando receptor de Detecção de Flagelina (FLS3)
também exibiram resistência intensificada a doença em comparação com plantas não transgênicas não expressando o receptor de FLS3 (WO2016007606A2 incorporado aqui por referência em sua totalidade).
DEFENSINAS/TIONINAS DE PLANTAS
[012] Defensinas de plantas também são caracterizadas como peptídeos antimicrobianos (AMPs). Defensinas de plantas contêm vários resíduos de cisteinila conservados que formam pontes dissulfeto e contribuem para sua estabilidade estrutural. Defensinas estão dentre os AMPs ricos em cisteína mais bem caracterizados em plantas. Elementos da família das defensinas têm quatro pontes dissulfeto que dobram em uma estrutura globular. Esta estrutura altamente conservada confere papéis altamente especializados em proteção de plantas contra organismos patogênicos microbianos (Nawrot et al., “Plant antimicrobial peptides,” Folia Microbiology 59: 181–196, 2014). Tioninas são AMPs de plantas ricos em cistina classificados na família de defensina e tipicamente compreendem 45-48 resíduos de aminoácidos, nos quais 6-8 desses aminoácidos são cisteína que formam ligações dissulfeto 3-4 em plantas superiores. Foi descoberto que tioninas estão presentes tanto em plantas monocotiledôneas quanto dicotiledôneas e sua expressão pode ser induzida por infecção com vários micróbios (Tam et.
al., “Antimicrobial peptides from plants,” Pharmaceuticals 8: 711–757, 2015).
Verificou-se que aminoácidos particulares de tioninas, tal como Lys1 e Tyr13, que são altamente conservados, são vitais para a toxicidade funcional desses AMPs.
POLIPEPTÍDEO DE PROMOÇÃO DE PELO DE RAIZ (RHPP)
[013] Polipeptídeo de promoção de pelo de raiz (RHP) é um fragmento de 12 aminoácidos derivado de proteína inibidora de tripsina Kunitz (KTI) de soja que foi detectado de farinha de soja que foi submetida a degradação usando uma protease alcalina de Bacillus circulans HA12
(Matsumiya Y. e Kubo M. “Soybean and Nutrition, Chapter 11: Soybean Peptide: Novel plant growth promoting peptide from soybean,” Agricultural and Biological Sciences, Sheny H.E. (editor), páginas 215–230, 2011). Quando aplicado às raízes de soja, RHPP demonstrou acumular nas raízes e promover crescimento de raiz por meio da estimulação da divisão celular e diferenciação de pelo de raiz em Brassica.
ESVEREDEAMENTO DOS CITROS E OUTRAS DOENÇAS DOS CITROS
[014] A doença esverdeamento dos citros asiática é transmitida pelo cítrico asiático psilídeo, Diaphorina citri ou o psilídeo cítrico de duas manchas, Trioza erytreae Del Guercio, que são ambos caracterizados como insetos hemípteros sugadores de seiva da família Psyllidae e froam implicados na disseminação do amarelao dos citros, uma doença causada por uma bactéria habitante do floema altamente fastidiosa, Candidatus Liberibacter asiaticus (Halbert, S.E. and Manjunath, K.L, “Asian citrus psyllids Sternorrhyncha: Psyllidae and greening disease of citrus: A literature review and assessment of risk in Florida,” Florida Entomologist 87: 330–353, 2004).
Três espécies separadas das bactérias foram identificadas como causadoras da doença HLB em plantas cítricas, sendo Candidatus Liberbacter asiaticus (CLas), a mais difundida na América do Norte e responsável pela doença na Flórida (Gottwald, TR., “Current epidemiological understanding of citrus Huanglongbing”, Annual Review of Phytopathology 48: 119–139, 2010).
[015] Infecção por Liberbacter em árvores cítricas é acompanhada por deposição calosa nas unidades de poros de plasmodesma que conectam as células companheiras e os elementos da peneira. Esse acúmulo caloso foi mostrado resultar no comprometimento de movimento ou transporte através do floema em árvores infectadas, resultando em um atraso na exportação de fotoassimilados em folhas infectadas por Liberibacter (Koh et. al., “Callose deposition in the phloem plasmodesmata and inhibition of phloem transport in citrus leaves infected with Candidatus Liberibacter asiaticus” Protoplasma 249: 687–697, 2012). Os sintomas da doença HLB incluem amarelecimento das veias e uma clorose assimétrica das folhas, denominada manchada, que ocorre quando a bactéria obstrui o sistema vascular e é o sintoma mais diagnosticado da doença. Os primeiros sintomas de amarelamento podem aparecer em um único ramo ou galho e, com a progressão de doença, o amarelamento pode se espalhar por toda a árvore. As árvores infectadas são raquíticas e esparsamente foliadas e podem ter perda de raízes. A aparência geral da árvore para as árvores cítricas infectadas com HLB pode exibir brotos amarelos com folhas retas estreitas, murcha dos brotos, foliação esparsa, um dossel fino, nanismo, floração fora de estação ou uma aparência geral amarela.
[016] Como HLB continua a infectar uma árvore, há a propagação de folhas amarelas, arrolhamento de veia e ilhas verdes nas folhas. Frutos podem mostrar sinais de infecção por HLB tanto por dentro quanto por fora. Por fora, frutos podem ter a forma torta ou oblonga, eles podem ser menores que frutos normais e eles podem mudar de cor, tornando-se anormalmente alaranjados perto do caule e ficando verdes na ponta da flor. Frutos de árvores afetadas são frequentemente poucos em número, pequenos, deformados (malformados) ou tortos e não têm a cor adequada (descolorados), permanecendo verdes na extremidade e exibem uma mancha amarela logo abaixo do pedúnculo (haste) em um fruto cortado. Árvores doentes de HLB também produzem frutos com sementes abortadas. O fruto de árvores doentes pode ser verde, cair prematuramente da árvore e ter um baixo teor de ácido solúvel acompanhado por um sabor amargo, perda de raiz e, eventualmente, morte da árvore (International Research Conference on Huanglongbing; Proceedings of the Meeting 2009 Plant Management Network).
[017] Até o momento, não há nenhum tratamento eficaz para árvores infectadas com HLB. Árvores infectadas com o tempo se tornam improdutivas e geralmente são destruídas para minimizar disseminação adicional das bactérias. A doença de HLB é considerada fatal para uma árvore cítrica, uma vez que a árvore é infectada. Todas as variedades de cítricos disponíveis comercialmente são suscetíveis a HLB. Portanto, é necessária a demanda por novos tratamentos e métodos de controle da doença para o HLB.
[018] Doença de HLB também pode ser transmitida por enxerto quando porta-enxertos de citros são selecionados e enxertados em variedades de copa. O manejo da doença de esverdeamento dos citros tem se mostrado difícil e, portanto, os métodos atuais de controle de HLB adotaram uma abordagem integrada de manejo de doença e praga em múltiplos níveis usando 1) a implementação de viveiros livres de doenças e porta-enxertos usados na enxertia, 2) o uso de pesticidas e inseticidas sistêmicos para controlar o vetor psilídeo, 3) o uso de agentes de controle biológico, tal como antibióticos., 4) o uso de insetos benéficos, tal como vespas parasíticas que atacam o psilídeo, e 5) criação de novo germoplasma cítrico com elevada resistência à bactéria causadora do esverdeamento dos citros (Candidatus Liberibacter spp.). O uso de medidas culturais e regulatórias para prevenir a propagação da doença também é parte da abordagem de manejo integrado. Muitos aspectos envolvidos no manejo do esverdeamento dos citros são onerosos tanto monetariamente quanto em relação às perdas na produção de citros.
[019] O seccionamento de tecido de folhas e caules infectados com CLas revelou elevada deposição de calose e amido dentro da vasculatura da planta (Koh et al., “Callose deposition in the phloem plasmodesmata and inhibition of phloem transport in citrus leaves infected with “Candidatus Liberibacter asiaticus” Protoplasma 249: 687–697, 2012). Os sintomas devastadores de Citrus Greening Disease ou HLB são provavelmente causados em parte por um bloqueio da vasculatura da planta com calose, resultando em uma falha em mover fotossintatos através da planta (de folhas de fonte para tecidos absorventes, tal como fruta).
[020] Os especialistas na arte são capazes de testar para infecção por CA. Liberibacter para identificar quais plantas estão infectadas com a bactéria. Tratamentos de tais plantas cítricas infectadas usando tratamentos que compreendem um peptídeo de flagelina (Flg22) ou um antibiótico (oxitetraciclina) fornecido em combinação com compostos indutores e misturas de recuperação e métodos que usam as composições e a mistura para prevenir e tratar HLB são fornecidos aqui.
[021] Além da doença de HLB, outros patógenos de plantas de citros incluem a bactéria Xanthomonas citri causando cancro do citro, Xanthomonas axonopodis pv. citrumelo causando doença da mancha bacteriana do citro e Xylellafastidiosa causando clorose variegada do citro; o fungo patogênico Alternaria citri causando podridão da folha e caule e mancha, Phytophthora spp. causando doenças sérias e transmitidas pelo solo, tal como podridão do pé e da raiz, e Guignardia citricarpa causando manchas pretas dos citros, todos os quais podem resultar em perda econômica de safra, de qualidade de suco e fruta. Métodos e composições eficazes para tratar estes e outros patógenos de plantas cítricas são urgentemente necessários.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[022] Uma composição é fornecida para iniciação bioativa de uma planta ou parte de planta para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou parte de planta e/ou proteger a planta ou parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta. A composição compreende (A) pelo menos um polipeptídeo de iniciação bioativo e pelo menos um composto indutor; ou (B) pelo menos dois polipeptídeos de iniciação bioativos, opcionalmente, com pelo menos um composto indutor; ou (C) um inibidor da calose sintase e pelo menos um composto indutor compreendendo um bactericida, um aminoácido, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou derivado ou sal do mesmo, um ácido dicarboxílico ou derivado ou sal do mesmo, uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol ou qualquer combinação dos mesmos; ou (D) um bactericida e pelo menos um composto indutor compreendendo ácido β-amino butírico (BABA), uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol, ácido salicílico, ácido oxálico ou qualquer combinação dos mesmos; em que:
o polipeptídeo ou os polipeptídeos de iniciação bioativa de (A) ou
(B) compreendem:
(i) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina; ou
(ii) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso
(iii) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP); ou
(iv) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso (RI
RHPP); ou
(v) uma tionina ou um polipeptídeo tipo tionina; ou
(vi) um polipeptídeo de glucanase; ou
(vii) um polipeptídeo de serina protease; ou
(viii) um polipeptídeo ACC desaminase; ou
(ix) uma amilase; ou
(x) uma quitinase; ou
(xi) qualquer combinação dos mesmos;
com as condições de que:
o composto indutor compreende um inibidor da calose sintase,
ácido β-amino butírico (BABA), uma betaína, uma prolina, ácido salicílico, ácido oxálico, um benzotiadiazol ou qualquer combinação dos mesmos quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo de grupos (i) a mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (v) a (x); e o composto indutor compreende um bactericida, um aminoácido ou isômero do mesmo, um inibidor da calose sintase, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou um derivado do mesmo, um ácido dicarboxílico ou derivado do mesmo, uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol ou qualquer combinação dos mesmos quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo de grupos (v) a (x); e a composição compreende o composto indutor e o composto indutor compreende um inibidor da calose sintase, ácido β-amino butírico (BABA), uma betaína, prolina, ácido salicíclico, ácido oxálico, um benzotiadiazol ou qualquer combinação dos mesmos quando os dois ou mais polipeptídeos de (B) compreendem polipeptídeos selecionados dos grupos (i)- (iv), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (v) a (x).
[023] Outra composição é fornecida para iniciação bioativa de uma planta ou uma parte de planta para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta e/ou melhorar a qualidade de uma fruta, suco obtido de uma fruta ou uma colheita obtida de uma planta ou parte de planta, em que a composição compreende bixafen e pelo menos um polipeptídeo livre compreendendo (i) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina; ou (ii) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso (iii) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP); ou (iv) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso (RI RHPP); ou (v) uma tionina ou um polipeptídeo tipo tionina; ou (vi) um polipeptídeo de glucanase; ou
(vii) um polipeptídeo de serina protease; ou (viii) um polipeptídeo ACC desaminase (1-aminociclopropano-1- carboxilato desaminase); ou (ix) uma amilase; ou (x) uma quitinase; ou (xi) qualquer combinação dos mesmos; em que o polipeptídeo livre não está ligado a um exosporium de um membro da família Bacillus cereus ou um esporo do membro da família Bacillus cereus intacto.
[024] Um peptídeo isolado para iniciação bioativa de uma planta ou uma parte de planta é fornecido para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou diminuir tensão abiótica na planta ou parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença, insetos e/ou nematoides e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta e/ou mudar a arquitetura de planta, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende a sequência de aminoácido de qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 735, 746-755 e 757-778, ou o peptídeo consiste na sequência de aminoácido de qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 735 e 745–778.
[025] Um método é fornecido para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou parte de planta e/ou proteger a planta ou parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta, o método compreendendo aplicar uma composição ou um polipeptídeo isolado a uma planta, parte de planta ou um meio de crescimento de planta no qual a planta ou parte de planta será cultivada, ou uma rizosfera em uma área circundando a planta ou a parte de planta para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor da planta ou parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou parte de planta em que o polipeptídeo isolado compreende: uma β-1,3 glucanase e a β-1,3 glucanase é injetada no tronco da planta cítrica; ou uma sequência de aminoácido do polipeptídeo isolado compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 735, 746-755 e 757-778, ou consiste em qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 735 e 745-778; e a composição compreende uma β-1,3 glucanase, ou bixafen e pelo menos um polipeptídeo livre ou (A) pelo menos um polipeptídeo de iniciação bioativo e pelo menos um composto indutor ou (B) pelo menos dois polipeptídeos de iniciação bioativos, opcionalmente com pelo menos um composto indutor; ou
(C) um inibidor de calose sintase e pelo menos um composto indutor compreendendo um bactericida, um aminoácido, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou derivado ou sal do mesmo, um ácido dicarboxílico ou derivado ou sal do mesmo, uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol, um ou qualquer combinação dos mesmos; ou (D) um bactericida e pelo menos um composto indutor compreendendo ácido β-amino butírico (BABA), uma betaína,
uma prolina, um benzotiadiazol, ácido salicílico, ácido oxálico ou qualquer combinação dos mesmos; em que:
o polipeptídeo de iniciação bioativo ou polipeptídeos de (A) ou (B)
ou o polipeptídeo livre compreendem:
(i) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina; ou
(ii) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso
(iii) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP); ou
(iv) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso (RI
RHPP); ou (v) uma tionina ou um polipeptídeo tipo tionina; ou
(vi) um polipeptídeo de glucanase; ou
(vii) um polipeptídeo de serina protease; ou (viii) um polipeptídeo ACC desaminase; ou (ix) uma amilase; ou (x) uma quitinase; ou (xi) qualquer combinação dos mesmos; com as condições de que: o composto indutor compreende um inibidor da calose sintase, ácido β-amino butírico (BABA), uma betaína, uma prolina, ácido salicílico, ácido oxálico, um benzotiadiazol ou qualquer combinação dos mesmos quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo de grupos (i) a (v), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x); e o composto indutor compreende um bactericida, um aminoácido ou isômero do mesmo, um inibidor da calose sintase, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou um derivado do mesmo, um ácido dicarboxílico ou derivado do mesmo, uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol ou qualquer combinação dos mesmos quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo de grupos (vi) a (x); e a composição compreende o composto indutor e o composto indutor compreende um inibidor da calose sintase, ácido β-amino butírico (BABA), uma betaína, prolina, ácido salicíclico, ácido oxálico, um benzotiadiazol ou qualquer combinação dos mesmos quando os dois ou mais polipeptídeos de (B) compreendem polipeptídeos selecionados dos grupos (i)- (v), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[026] Outro método é fornecido para aumentar teor de suco e/ou melhorar teor de suco, açúcar ou ácido ou melhorar uma razão Brix:ácido de suco obtido de uma planta, o método compreendendo aplicar uma composição ou um polipeptídeo isolado à planta ou parte de planta, ou meio de crescimento de planta no qual a planta será cultivada, ou uma rizosfera em uma área circundando a planta ou parte de planta para aumentar teor de suco e/ou melhorar teor de suco, açúcar ou ácido ou melhorar uma razão Brix:ácido do suco obtido da planta ou parte de planta, o polipeptídeo isolado compreende uma β-1,3 glucanase e a β-1,3 glucanase é injetada no tronco da planta cítrica;
ou uma sequência de aminoácido do polipeptídeo isolado compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 735, 746-755 e 757-778, ou consiste em qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 735 e 745-778 e a composição compreendendo β-1,3-glucanase, bixafen e pelo menos um polipeptídeo livre,
ou (A) pelo menos um polipeptídeo e um composto indutor; (B) pelo menos dois polipeptídeos, opcionalmente, com um composto indutor; (C) um inibidor da calose sintase e pelo menos um de um composto indutor compreendendo um bactericida, um aminoácido ou isômero do mesmo, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou derivado ou sal do mesmo, um ácido dicarboxílico ou derivado ou sal do mesmo, um benzotiadiazol, uma betaína,
uma prolina ou qualquer combinação dos mesmos; ou (D) um bactericida e pelo menos um de um composto indutor compreendendo um aminoácido ou isômero do mesmo, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou derivado ou sal do mesmo, um ácido dicarboxílico ou derivado ou sal do mesmo, um benzotiadiazol, uma betaína, um prolina, ou qualquer combinação dos mesmos; em que: o polipeptídeo ou os polipeptídeos de (A) ou (B) ou o polipeptídeo livre compreendem:
(i) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina; ou
(ii) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso
(iii) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP); ou
(iv) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso (RI RHPP); ou
(v) uma tionina ou um polipeptídeo tipo tionina; ou
(vi) um polipeptídeo de glucanase; ou (vii) um polipeptídeo de serina protease; ou (viii) um polipeptídeo ACC desaminase; ou (ix) uma amilase; ou (x) uma quitinase; ou (ix) qualquer combinação dos mesmos;
[027] As características da invenção são ainda definidas nas reivindicações anexas. Outros objetos e características serão em parte aparentes e em parte apontados a seguir.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[028] FIG. 1 mostra o polipeptídeo de iniciação bioativo Bt.4Q7Flg22 em sua configuração L nativa (SEQ ID NO: 226) e a forma de configuração retro inversa ou D correspondente (SEQ ID NO: 375).
DEFINIÇÕES
[029] Quando os artigos “um”, “uma”, “o/a” e “dito/dita” são usados aqui, significam “pelo menos um” ou “um ou mais”, a menos que seja indicado de outra forma.
[030] Os termos ”que compreende", ”que inclui" e ”que tem" destinam-se a ser inclusivos e significam que pode haver outros elementos além dos elementos listados.
[031] “Tensão abiótica", conforme usado neste documento, é definida como uma condição ambiental que pode ter um impacto negativo em uma planta. A tensão abiótica pode incluir: tensão de temperatura (alta ou baixa), tensão de radiação (visível ou UV), tensão de seca, tensão de frio, tensão de sal, tensão osmótica, tensão de deficiência de nutriente ou alto metal, ou tensão de água que resulta em déficit de água, inundação ou anoxia.
[032] Outros fatores de tensão abiótica incluem desidratação, ferimentos, ozônio e alta ou baixa umidade.
[033] "Iniciação bioativa" se refere a um efeito dos polipeptídeos e/ou das composições conforme descrito neste documento para melhorar uma planta ou uma parte de planta. A iniciação bioativa pode aumentar crescimento, rendimento, qualidade, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou parte de planta e/ou diminuir tensão abiótica na planta ou parte de planta e/ou proteger a planta ou parte de planta de doença, insetos e/ou nematoides e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta e/ou mudar a arquitetura de planta. A iniciação bioativa pode ser usada para proteger uma planta ou parte de planta de dano cosmético devido a crescimento de bactérias ou fungos na superfície da planta ou parte de planta ou remover/limpar bactérias e/ou fungos da superfície de uma planta ou parte de planta.
[034] A iniciação bioativa também pode melhorar a qualidade e/ou quantidade de um produto obtido de uma planta. Por exemplo, a iniciação bioativa pode melhorar qualidade ou quantidade de suco obtido de uma planta cítrica.
[035] Um "polipeptídeo de iniciação bioativa", como aqui utilizado, pode ser usado intercambiavelmente com o termo "agente(s) de iniciação" e conforme descrito para as classes de polipeptídeos dos: polipeptídeos de flagelina e associados à flagelina, tioninas, polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP), serina proteases, glucanases e ACC desaminases, bem como quaisquer polipeptídeos retroinversos dos mesmos.
[036] Um "corante", conforme usado neste documento, age como um identificador de produto visual para marca e aplicação de produto. Corantes podem incluir, mas não estão limitados a, tintas e pigmentos, pigmentos inorgânicos, pigmentos orgânicos, corantes poliméricos e dispersões de revestimento de pigmento formuladas disponíveis em uma variedade de tons altamente concentrados.
[037] "Endogenamente" aplicado conforme usado neste documento se refere a uma aplicação no interior de uma superfície de planta.
Polipeptídeos de iniciação bioativa pequenos são particularmente adequados para sinalização e comunicação dentro de uma planta. Dentro de uma superfície de planta se refere a uma superfície interna a qualquer membrana de planta ou célula de planta. Interno poderia ser usado para significar ou extracelular ou intracelular a uma célula de planta e é inclusivo de xilema, floema, traqueídeos, etc. Endógeno pode se referir a movimento sistemicamente ou através de uma planta, tal como se referindo a movimento de célula para célula em uma planta. Aplicação endógena pode incluir distribuição de polipeptídeos de iniciação bioativa usando bactérias ou fungos endofíticos recombinantes, em que o microrganismo endofítico é distribuído externamente à planta e através de mecanismos naturais se move internamente para a planta.
[038] "Exogenamente" aplicado, conforme usado neste documento, se refere a uma aplicação no exterior da superfície de uma planta.
A superfície de planta pode ser qualquer superfície de planta externa, por exemplo, uma membrana plasmática, uma cutícula, um tricoma, uma folha, um pelo de raiz, revestimento de semente, etc.
[039] Polipeptídeos "associados" ou “tipo", como aqui utilizados, se referem a polipeptídeos derivados de ou estruturalmente semelhantes ao polipeptídeo recitado, mas tendo uma sequência de aminoácido e/ou fonte distinta do polipeptídeo recitado. Por exemplo, a proteína tipo tionina de Brassica rapa (SEQ ID NO: 664) tem uma sequência diferente da tionina de Brassica napus (SEQ ID NO: 663), mas é estrutural e funcionalmente semelhante.
[040] Um "tratamento foliar", como aqui utilizado, se refere a uma composição que é aplicada às partes acima do solo ou à folhagem de uma planta ou parte de planta e pode ter folhas, caules, flores, ramos ou qualquer parte de planta aérea, por exemplo, enxerto.
[041] Um "polipeptídeo livre", como aqui utilizado, se refere a um peptídeo, polipeptídeo ou uma proteína (por exemplo, uma enzima) que é substancialmente livre de células intactas. O termo "polipeptídeo livre" inclui, mas não está limitado a, extratos de células em bruto contendo um polipeptídeo, um polipeptídeo parcialmente purificado, um substancialmente purificado ou um polipeptídeo. Polipeptídeos livres podem opcionalmente ser imobilizados em uma matriz ou um suporte químico para permitir liberação controlada do polipeptídeo. Preparações de polipeptídeos livres preferencialmente não incluem polipeptídeos ligados a um exosporium de um membro da família Bacillus cereus. Polipeptídeos livres também preferencialmente não incluem polipeptídeos ligados a exosporium de um esporo de membro da família Bacillus cereus intacto.
[042] "Injeção", conforme descrito neste documento, pode ser usada intercambiavelmente com vacinação ou imunização e fornece um processo pelo qual os polipeptídeos de iniciação bioativa são distribuídos endogenamente a uma planta ou parte de planta.
[043] "Inoculação" significa distribuir bactérias ou microrganismos vivos que produzem o polipeptídeo de iniciação a uma planta ou parte de planta. Inoculação também pode se referir à distribuição do polipeptídeo de iniciação para entrada passiva através dos estômatos ou de qualquer abertura em ou sobre uma planta ou parte de planta.
[044] Uma "planta" se refere a, mas não está limitada a, uma planta monocotiledônea, uma planta dicotiledônea ou uma planta gimnosperma. O termo "planta", como aqui utilizado, inclui plantas inteiras, órgãos de plantas, progênie de plantas inteiras ou órgãos de plantas, embriões, embriões somáticos, estruturas tipo embriões, protocormos, corpos tipo protocormos e suspensões de células de plantas. Órgãos de plantas compreendem órgãos/estruturas vegetativas de caule (por exemplo, folhas, caules e tubérculos), raízes, flores e órgãos/estruturas florais (por exemplo, brácteas, sépalas, pétalas, estames, carpelos, anteras e óvulos), sementes, incluindo embrião, endosperma e revestimento de semente e fruto (o ovário maduro), tecido de planta (por exemplo, tecido do floema, tecido do xilema, tecido vascular, tecido do solo e semelhantes) e células (por exemplo, células de proteção, células de óvulos, tricomas e semelhantes). A classe de plantas que pode ser usada nos métodos descritos aqui é geralmente tão ampla quanto a classe de plantas superiores, especificamente angio•espermas monocotiledôneas (monocotiledôneas) e dicotiledôneas (dicotiledôneas) e gimnospermas. Ela inclui plantas de uma variedade de níveis de ploidia, incluindo aneuploides, poliploides, diploides, haploides, homozigóticas e hemizigóticas. As plantas aqui descritas podem ser culturas de monocotiledôneas, tal como sorgo, maiz, trigo, arroz, cevada, aveia, centeio, painço e triticale. As plantas aqui descritas também podem ser culturas de dicotiledôneas, tal como maçã, pêra, pêssego, ameixa, laranja, limão, lima, toranja, kiwi, romã, azeitona, amendoim, tabaco, tomate, etc. Além disso, as plantas podem ser plantas de horticultura, tal como como rosa, calêndula, prímula, dogwood, amor-perfeito, gerânio, etc. Além disso, a planta pode ser uma planta cítrica ou uma cultura em linha. Outras plantas adequadas são discutidas em mais detalhes no relatório descritivo abaixo.
[045] Uma planta "bioestimulante" é qualquer substância ou microrganismo aplicado a uma planta ou a uma parte de planta que é usada para intensificar eficiência de nutrição, tolerância de tensão abiótica e/ou qualquer outro traço de qualidade de planta.
[046] Uma "célula de planta", conforme usada neste documento, se refere a qualquer célula de planta e pode compreender uma célula na superfície de planta ou interna à membrana plasmática de planta, por exemplo, uma célula epidérmica, uma célula de tricoma, uma célula de xilema, uma célula de floema, um elemento de tubo de peneira ou uma célula companheira.
[047] Uma "parte de planta", conforme descrito neste documento, se refere a uma célula de planta, um tecido de planta (por exemplo, tecido de floema, tecido de xilema, tecido vascular, tecido de solo e semelhantes), um sistema de planta (por exemplo, o sistema vascular), uma folha, um caule, uma flor, um órgão floral, uma fruta, pólen, um vegetal, um tubérculo, um cormo, um bulbo, um pseudobulbo, uma vagem, uma raiz, um rizoma, uma bola de raiz, um estoque de raiz, um enxerto ou uma semente.
[048] Um “polipeptídeo", como aqui descrito se refere a qualquer proteína, peptídeo ou polipeptídeo. O polipeptídeo pode compreender ou consistir em 100 aminoácidos ou menos, 90 aminoácidos ou menos, 80 aminoácidos ou menos, 70 aminoácidos ou menos, 60 aminoácidos ou menos, 50 aminoácidos ou menos, ou 40 aminoácidos ou menos. O polipeptídeo pode compreender ou consistir em 6 ou mais aminoácidos, 7 ou mais aminoácidos, 8 ou mais aminoácidos, 9 ou mais aminoácidos ou 10 ou mais aminoácidos. Por exemplo, o polipeptídeo pode compreender ou consistir em 6 a 50 aminoácidos, de 6 a 40 aminoácidos, de 6 a 35 aminoácidos, de 6 a 30 aminoácidos, de 7 a 30 aminoácidos, de 8 a 30 aminoácidos, de 9 a 30 aminoácidos, de 10 a 30 ou de 15 a 30 aminoácidos. O polipeptídeo pode compreender ou consistir em cerca de 6, cerca de 7, cerca de 8, cerca de 9, cerca de 10, cerca de 11, cerca de 12, cerca de 13, cerca de 14, cerca de 15, cerca de 16, cerca de 17, cerca de 18, cerca de 20, cerca de 21, cerca de 22, cerca de 23, cerca de 24, cerca de 25, cerca de 26, cerca de 27, cerca de 28, cerca de 29 ou cerca de 30 aminoácidos.
[049] Alternativamente, o polipeptídeo pode compreender uma proteína de comprimento total e compreender ou consistir em cerca de 100 a cerca de 500 aminoácidos, de cerca de 100 a 400 aminoácidos, de cerca de 200 a cerca de 400 aminoácidos, de cerca de 300 a cerca de 500 aminoácidos, de cerca de 300 a cerca de 350 aminoácidos, de cerca de 350 a 400 aminoácidos, de cerca de 400 a 450 aminoácidos aminoácidos, de cerca de 300 a cerca de 310 aminoácidos, de cerca de 320 a cerca de 330 aminoácidos, de cerca de 330 a cerca de 340 aminoácidos, de cerca de 340 a cerca de 350 aminoácidos, de cerca de 350 a cerca de 360 aminoácidos, de cerca de 360 a cerca de 370 aminoácidos, de cerca de 370 a cerca de 380 aminoácidos, de cerca de 380 a cerca de 390 aminoácidos, de cerca de 390 a cerca de 400 aminoácidos, de cerca de 400 a cerca de 410 aminoácidos, de cerca de 410 a cerca de 420 aminoácidos, de cerca de 420 a cerca de 430 aminoácidos, de cerca de 430 a cerca de 440 aminoácidos, ou de cerca de 440 a cerca de 450 aminoácidos.
[050] “Iniciação" ou “iniciação de peptídeo", conforme usado neste documento, se refere a uma técnica usada para melhorar desempenho de planta. Em particular, a iniciação é um processo pelo qual os polipeptídeos de iniciação bioativa são aplicados ou exogenamente ou endogenamente a uma planta, parte de planta, célula de planta ou ao espaço intercelular de uma planta que resulta em resultados que fornecem benefícios para uma planta, tal como crescimento intensificado, produtividade, tolerância de tensão abiótica, tolerância ou prevenção de praga e doença.
[051] Um polipeptídeo "retro-inverso", como aqui utilizado, se refere a uma cadeia polipeptídica de um polipeptídeo derivado natural de uma cadeia normal-all-L reconfigurada e construída usando D-aminoácidos ocorrendo não naturalmente na ordem reversa dos L-aminoácidos ocorrendo naturalmente. A forma de all-D-aminoácido e a cadeia parental contendo a forma all L são espelhos topológicos da estrutura de proteína.
[052] Um "tratamento de semente", conforme usado neste documento, se refere a uma substância ou composição que é usada para tratar ou revestir uma semente. Tratamentos de sementes de amostras incluem uma aplicação de organismos biológicos, ingredientes químicos, inoculantes, protetores de herbicidas, micronutrientes, reguladores de crescimento de plantas, revestimentos de sementes, etc. fornecidos a uma semente para suprimir, controlar ou repelir patógenos de plantas, insetos ou outras pragas que atacam sementes, mudas ou plantas ou qualquer agente útil para promover crescimento e saúde de planta.
[053] Um “efeito sinérgico” se refere a um efeito surgindo entre a interação ou cooperação de dois ou mais polipeptídeos de iniciação bioativa, substâncias, compostos ou outros agentes para produzir um maior efeito combinado que a soma de seus efeitos separados.
[054] Uma "concentração sinérgica eficaz" se refere à(s) concentração(ões) de dois ou mais polipeptídeos de iniciação bioativa, substâncias, compostos ou outros agentes que produzem um efeito maior do que a soma dos efeitos individuais.
[055] O termo “Citro" ou “citro", como aqui utilizado se refere a qualquer planta do gênero Citrus, família Ruttaceae e inclui, mas não está limitado a: Laranja doce também conhecida como Hamlin ou laranja Valencia (Citrus sinensis, Citrus maxima × Citrus reticulata), Bergamot Orange (Citrus bergamia, Citrus limetta × Citrus aurantium), Bitter Orange, Sour Orange, ou Seville Orange (Citrus aurantium, Citrus maxima × Citrus reticulata), Blood Orange (Citrus sinensis), Orangelo ou Chironja (Citrus paradisi × Citrus sinensis), Mandarin Orange (Citrus reticulate), Trifoliate Orange (Citrus trifoliata), Tachibana Orange (Citrus tachibana), Alemow (Citrus macrophylla), Clementine (Citrus clementina), Cherry Orange (Citrus kinokuni), Limão (Citrus limon, ou híbridos com Citrus maxima × Citrus medica) ou Citrus limonia,, Indian Wild Orange (Citrus indica), Limão Imperial (Citrus limon, Citrus medica
× Citrus paradisi), Lime (Citrus latifoli, Citrus aurantifolia), Meyer Lemon (Citrus meyeri); híbridos de Citrus × meyeri with Citrus maxima, Citrus medica, Citrus paradisi e/ou Citrus sinensis), Rough Lemon (Citrus jambhiri), Volkamer Lemon
(Citrus volkameriana), Ponderosa Lemon (Citrus limon x Citrus medica), Key
Lime (Citrus aurantiifolia), Kaffir Lime (Citrus hystrix or Mauritius papeda),
Sweet Lemon, Sweet Lime, ou Mosambi (Citrus limetta), Persian Lime ou Tahiti
Lime (Citrus latifolia), Palestine Sweet Lime (Citrus limettioides), Winged Lime
(Citrus longispina), Australian Finger Lime (Citrus australasica), Australian
Round Lime (Citrus australis), Australian Desert ou Outback Lime (Citrus glauca), Mount White Lime (Citrus garrawayae), Jambola (Citrus grandis),
Kakadu Lime ou Humpty Doo Lime (Citrus gracilis), Russel River Lime (Citrus inodora), New Guinea Wild Lime (Citrus warburgiana), Brown River Finger Lime
(Citrus wintersii), Mandarin Lime (Citrus limonia; (híbridos com Citrus reticulata
× Citrus maxima × Citrus medica), Carabao Lime (Citrus pennivesiculata),
Blood Lime (Citrus australasica x Citrus limonia) Limeberry (Triphasia brassii,
Triphasia grandifolia, Triphasia trifolia), Lemon híbrido ou Lumia (Citrus medica x Citrus limon), Omani Lime (Citrus aurantiifolia, Citrus medica x Citrus micrantha), Sour Lime ou Nimbuka (Citrus acida), Grapefruit (Citrus paradisi;
Citrus maxima × Citrus ×sinensis), Tangarine (Citrus tangerina), Tangelo (Citrus tangelo; Citrus reticulata × Citrus maxima ou Citrus paradisi), Minneola Tangelo
(Citrus reticulata × Citrus paradisi), Orangelo (Citrus paradisi × Citrus sinensis),
Tangor (Citrus nobilis; Citrus reticulata × Citrus sinensis), Pummelo ou Pomelo
(Citrus maxima ou Citrus retkulata), Citron (Citrus medica), Mountain Citron
(Citrus halimii), Kumquat (Citrus japonica ou Fortunella species), Kumquat híbridos (Calamondin, Fortunella japonica; Citranqequat, Citrus ichangensis;
Limequat, Citrofortunella floridana; Orangequat, híbrido entre Satsuma mandarin x Citrus japonica ou Fortunella species; Procimequat, Fortunella hirdsiie; Sunquat, híbrido entre Citrus meyeri e Citrus japonica ou Fortunella species; Yuzuquat, híbrido entre Citrus ichangensis e Fortunella margarita), Papedas (Citrus halimii, Citrus indica, Citrus macroptera, Citrus micrantha), Ichang Papeda (Citrus ichangensis), Celebes Papeda (Citrus celebica), Khasi Papeda (Citrus latipes), Melanesian Papeda (Citrus macroptera), Ichang Lemon (Citrus ichangensis × Citrus maxima), Yuzu (Citrus ichangensis × Citrus reticulata), Cam sành (Citrus reticulata x Citrus maxima), Kabosu (Citrus sphaerocarpa), Sudachi (Citrus sudachi), Alemow (Citrus macrophylla), Biasong (Citrus micrantha), Samuyao (Citrus micrantha), Kalpi (Citrus webberi), Mikan (Citrus unshiu), Hyuganatsu (Citrus tamurana), Manyshanyegan (Citrus mangshanensis), Lush (Citrus crenatifolia), Amanatsu ou Natsumikan (Citrus natsudaidai), Kinnow (Citrus nobilis × Citrus deliciosa), Kiyomi (Citrus sinensis × Citrus unshiu), Oroblanco (Citrus maxima × Citrus paradisi), Ugli (Citrus reticulata × Citrus maxima e/ou Citrus × paradisi), Calamondin (Citrus reticulata × Citrus japonica), Chinotto (Citrus myrtifolia, Citrus aurantium ou Citrus pumila), Cleopatra Mandarin (Citrus reshni), Daidai (Citrus aurantium ou Citrus daidai), Laraha (Citrus aurantium), Satsuma (Citrus unshiu), Naartjie (Citrus reticulata × Citrus nobilis), Rangpur (Citrus limonia; ou híbrido com Citrus sinensis x Citrus maxima × Citrus reticulata), Djeruk Limau (Citrus amblycarpa), Iyokan, anadomikan (Citrus iyo), Odichukuthi (Citrus odichukuthi), Ougonkan (Citrus flaviculpus), Pompia (Citrus monstruosa), Tangerina (Citrus tangerine), Taiwan Tangerine (Citrus depressa), Shonan gold (Citrus flaviculpus ou Citrus unshiu), Sunki (Citrus sunki), Mangshanyen (Citrus mangshanensis, Citrus nobilis), Clymenia (Clymenia platypoda, Clymenia polyandra), Jabara (Citrus jabara), Mandora (Mandora cyprus), Melogold (Citrus grandis x Citrus paradisii/Citrus maxima/Citrus grandis), Shangjuan (Citrus ichangensis x Citrus maxima), Nanfengmiju (Citrus reticulata), e Shīkwāsaī (Citrus depressa).
[056] O termo "Huanglongbing", "doença de Huanglongbing" ou "HLB", como aqui utilizado, se refere a uma doença de plantas causada por microrganismos do gênero Candidatus Liberibacter, tal como L. asiaticus, L.
africanus e L americanus. Essa doença, por exemplo, pode ser encontrada em plantas cítricas ou outras plantas do gênero Rutaceae. Sintomas da doença de Huanglongbing incluem um ou mais de brotos amarelos e manchas nas folhas da planta, ocasionalmente com espessamento das folhas, tamanho reduzido do fruto, esverdeamento do fruto, queda prematura do fruto da planta, baixo teor de ácido solúvel do fruto, fruto com um sabor amargo ou sabor salgado, ou morte da planta.
[057] O termo "tratar" ou "tratamento" ou seus cognatos, como aqui utilizado, indica qualquer processo ou método que previne, cura, diminui, reduz, melhora ou desacelera a progressão de uma doença. O tratamento pode incluir reduzir título de patógeno em tecido de planta ou o aparecimento de sintomas de doença em relação a controles que não sofreram tratamento.
Tratamento também pode ser profilático (por exemplo, prevenindo ou retardando uma infecção em uma planta).
[058] O termo "redução de sintomas de doença", como aqui utilizado, se refere a uma diminuição mensurável no número ou na severidade de sintomas de doença.
[059] O termo "aplicação de tratamento", como aqui utilizado, se refere a qualquer tratamento que inclua um tratamento de injeção, tal como a injeção em um tronco de uma árvore ou uma parte de planta, qualquer aplicação à folhagem de uma planta ou no solo no qual uma planta está crescendo e qualquer aplicação a uma semente de uma planta ou à área circundando a semente de uma planta.
[060] Conforme usado neste documento, "cisteína" pode compreender análogos, ácidos ou sais de cisteína. Cisteína é um aminoácido contendo tiol na forma de L-cisteína, D-cisteína, DL-cisteína, análogos de L- cisteína compreendendo: DL homocisteína, L-cisteína metil éster, L-cisteína etil éster, N-carbamoil cisteína, N-acetilcisteína, sal de sódio de L-cisteína, sal monossódico de L-cisteína, sal dissódico de L-cisteína, monocloridrato de L- cisteína, cloridrato de L-cisteína, cloridrato de éster etílico de L-cisteína, cloridrato de éster metílico de L-cisteína, outras selenocisteína, seleno-DL- cisteína, N-isobutiril-L-cisteína, N-isobutiril-L-cisteína ou um ácido de cisteína, tal como ácido cisteína sulfínico.
[061] Como utilizado aqui, “betaína" se refere a qualquer betaína, homólogo de betaína ou análogo de betaína. A betaína pode compreender glicina betaína, glicina betaína aldeído, β-alanina betaína, cloridrato de betaína, cetil betaína, prolina betaína, colina-O-sulfato betaína, cocamidopropil betaína, oleil betaína, sulfobetaína, lauril betaína, octil betaína, caprilamidopropil betaína, lauramidopropil betaína, isoestearamidopropil betaína ou uma combinação, homólogo ou análogo de qualquer um dos mesmos. Por exemplo, a betaína pode compreender glicina betaína, glicina betaína aldeído, β-alanina betaína, cloridrato de betaína, cetil betaína, colina-O-sulfato betaína, cocamidopropil betaína, oleil betaína, sulfobetaína, lauril betaína, octil betaína, caprilamidopropil betaína, lauramidopropil betaína, isoestearamidopropil betaína ou uma combinação, homólogo ou análogo de qualquer um dos mesmos. A betaína pode ser derivada de uma fonte de planta, tal como trigo (por exemplo, germe de trigo ou farelo de trigo) ou uma planta do gênero Beta (por exemplo, Beta vulgaris (beterraba)). O homólogo ou análogo de betaína pode compreender ectoína, colina, fosfatidilcolina, acetilcolina, citidina difosfato colina, dimetiletanolamina, cloreto de colina, salicilato de colina, glicerofosfocolina, fosfocolina, uma esfingomielina, bitartrato de colina, propio betaína, deanol betaína, homodeanol betaína, homoglicerol betaína, dietanol homobetaína, trietanol homobetaína ou uma combinação de qualquer uma das mesmas.
[0059] Como utilizado aqui, "prolina" se refere a qualquer prolina, homólogo de prolina ou análogo de prolina. A prolina pode compreender L-prolina, D-prolina, hidroxiprolina, derivados de hidroxiprolina, prolina betaína ou uma combinação, derivado, homólogo ou análogo de qualquer uma das mesmas. O homólogo ou análogo de prolina pode compreender α-metil-L-prolina, α-benzil-Lprolina, trans-4-hidroxi-L-prolina, cis-4-hidroxi-L-prolina, trans-3-hidroxi-L-prolina, cis-3- hidroxi-L-prolina, trans-4-amino-L-prolina, 3,4-de-hidro-α-prolina, ácido (2S)- aziridina-2-carboxílico, ácido (2S)-azetidina-2-carboxílico, ácido L-pipecólico, prolina betaína, 4-oxo-L-prolina, ácido tiazolidina-2-carboxílico, ácido (4R)- tiazolidina-4-carboxílico ou uma combinação de qualquer um dos mesmos.
Conforme usado neste documento, o termo "composto indutor" é qualquer composto ou substância que age sinergicamente com outra substância para melhorar o efeito geral que qualquer substância teria em uma planta ou parte de planta sozinha. Por exemplo, um composto indutor pode melhorar a capacidade de iniciação bioativa de um polipeptídeo de iniciação bioativa.
Alternativamente, dois ou mais compostos indutores podem ser usados na ausência de um polipeptídeo para exercer um efeito benéfico sinérgico na planta ou parte de planta. O "efeito benéfico" melhorado pela presença do indutor pode ser medido por um aumento em crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou por uma melhoria em sintomas de doença ou na resposta imune inata da planta ou parte de planta.
[062] Como aqui utilizado, o termo "derivado" se refere a qualquer derivado, análogo, sal ou éster do composto.
[063] Conforme usado neste documento, o termo "substituído" se refere a um composto tendo um ou mais de seus átomos de carbono ou um ou mais átomos de hidrogênio ligados a um átomo de carbono substituído por um heteroátomo ou outro grupo, tal como hidroxil (-CON(RA)RB), em que RA e RB são independentemente hidrogênio, alquil ou aril), amino (-N(RA)(RB), em que
RA e RB são independentemente hidrogênio, alquil ou aril), halo (fluoro, cloro, bromo oi iodo), silil, nitro (-NO2), um éter (-ORA em que RA é alquil ou aril), um éster (-OC(O)RA é alquil ou aril), ou ceto (-C(O)RA em que RA é alquil ou aril), ou heterociclo. Cada substituição pode compreender um alquil substituído ou não substituído, um aril ou heteroaril substituído ou não substituído ou um heteroátomo. Substituintes adequados incluem, mas não estão limitados a, alquis inferiores (por exemplo, metil, etil, propil, butil), hidroxis, aminas, amidas e benzis. Por exemplo, um "ácido benzoico substituído" pode compreender um ácido benzoico contendo um ou mais substituintes. Em um exemplo, um substituinte pode ser um hidroxil e o ácido benzoico substituído pode ser ácido salicílico.
DESCRIÇÃO DAS MODALIDADES PREFERIDAS
[064] Há uma necessidade crescente de composições bioativas que ajam como "agentes de iniciação" para fornecer benefícios à agricultura. O uso de composições de “iniciação” bioativas em práticas agrícolas fornece uma mudança de paradigma para práticas de manejo integrado de cultura, por exemplo, para gerenciar doença, tensão abiótica e programas de produção.
Composições de iniciação bioativa aqui podem compreender polipeptídeos de iniciação bioativa (ocorrendo naturalmente, recombinantes ou sintéticos) e/ou um composto indutor. Composições e métodos de uso dos polipeptídeos de iniciação bioativa e/ou compostos indutores são descritos para fornecer um regime de tratamento em várias camadas para aplicar a culturas para atingir resultados agronomicamente desejáveis. Esses resultados desejáveis incluem fenótipos aprimorados em plantas, tal como aqueles que exibem proteção contra pragas, agentes de doenças e tensão abiótica, bem como elevado crescimento de planta, produtividade e rendimento. Mais especificamente, as formulações dos polipeptídeos de iniciação bioativa e/ou compostos indutores descritos neste documento podem ser aplicadas usando vários regimes de tratamento, exogenamente e/ou endogenamente a uma planta ou parte de planta e foram consideradas aumentarem crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou parte de planta.
[065] Classes específicas de polipeptídeos de iniciação bioativa derivados sinteticamente ou ocorrendo naturalmente que podem ser incluídas, sozinhas ou em combinação, nas composições aqui incluem polipeptídeos de flagelina e associados à flagelina (incluindo aqueles conservados dentre os gêneros Bacillus), tioninas, polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP), serina proteases, glucanases, amilases, quitinases e ACC desaminases. Cada uma dessas classes de polipeptídeos foi selecionada por seus modos de ação distintos e pode ser usada individualmente ou em combinação com outros polipeptídeos para acomodar as necessidades agrícolas específicas descritas acima. Por exemplo, em certos casos, polipeptídeos isolados dessas classes podem ser usados individualmente para acomodar as necessidades agrícolas específicas descritas acima. Eles podem ser usados no lugar de ou em adição de agroquímicos, bioestimulantes, bioativos suplementares e/ou compostos pesticidas suplementares disponíveis comercialmente.
[066] Classes específicas de compostos indutores incluem aminoácidos (particularmente, aminoácidos isolados) e isômeros dos mesmos, certos ácidos (por exemplo, ácidos benzoicos substituídos ou não substituídos e ácidos dicarboxílicos), bactericidas, inibidores da calose sintase, inibidores da succinato desidrogenase, benzotiazóis e osmoprotetores (por exemplo, betaínas ou prolinas). Indutores específicos nessas classes serão descritos abaixo.
[067] Polipeptídeos isolados e combinações dos polipeptídeos de iniciação bioativa e/ou os compostos indutores descritos neste documento foram considerados ter um efeito sinérgico na saúde das plantas, rendimento e prevenção/tratamento de doenças. Combinações aqui descritas são particularmente eficazes no tratamento de doenças cítricas e na melhoria do rendimento e da qualidade de um fruto e/ou suco obtido de uma planta cítrica.
Além disso, as composições fornecem benefícios sinérgicos para melhorar o rendimento e a produtividade de colheitas em linha.
I. COMPOSIÇÕES
[068] Novas composições de iniciação bioativa são fornecidas aqui. Mais especificamente, uma composição é fornecida para iniciação bioativa de uma planta ou parte de planta para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta e/ou aumentar a quantidade e/ou qualidade de suco obtido de uma planta cítrica. As composições podem compreender uma β-1,3-glucanase, ou (A) pelo menos um polipeptídeo de iniciação bioativa e um composto indutor ou (B) pelo menos dois polipeptídeos de iniciação bioativa, opcionalmente com um composto indutor ou (C) pelo menos dois compostos indutores. Os polipeptídeos de iniciação bioativa e compostos indutores que podem ser usados nessas composições e os métodos específicos onde eles podem ser usados são descritos abaixo.
[069] Outra composição é fornecida para iniciação bioativa de uma planta ou parte de planta para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta e/ou aumentar a quantidade e/ou qualidade de suco obtido de uma planta. As composições podem compreender bixafen e um polipeptídeo livre (isto é, não ligado a um exosporium de um membro da família Bacillus cereus ou um esporo do membro da família Bacillus cereus intacto). O polipeptídeo livre pode compreender (i) um polipetídeo de flagelina ou associado à flagelina; ou (ii) um polipetídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso; ou (iii) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP); ou (iv) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso (RI RHPP); ou (v) um polipetídeo de tionina ou tipo tionina; ou (vi) um polipeptídeo de glucanase; ou (vii) um polipeptídeo de serina protease; ou (viii) um polipeptídeo de ACC desaminase (1-aminociclopropano- 1-carboxilato desaminase); ou (ix) uma amilase; ou (x) uma quitinase; ou (xi) qualquer combinação dos mesmos.
a. POLIPEPTÍDEOS E COMPOSIÇÕES DOS MESMOS
[070] As composições aqui descritas podem compreender um ou mais polipeptídeos de iniciação bioactiva ou polipeptídeos livres. Os peptídeos de iniciação bioativa e polipeptídeos livres podem compreender pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina, pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina retro-inverso, pelo menos um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP), pelo menos um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso (RI-RHPP), pelo menos um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina, pelo menos um polipeptídeo de glucanase, pelo menos um polipeptídeo de serina protease, pelo menos um polipeptídeo de amilase, pelo menos um polipeptídeo de quitinase, pelo menos um polipeptídeo de ACC desaminase ou qualquer combinação dos mesmos.
[0069] Os polipeptídeos de iniciação bioativa e polipeptídeos livres usados nas composições e nos métodos descritos neste documento são fornecidos como formas ocorrendo naturalmente, recombinantes ou sintetizadas quimicamente, derivadas de bactérias ou plantas. Os polipeptídeos de iniciação bioativa são fornecidos em ambas as formas normais de aminoácidos normal L e D retro- inverso não natural. Além disso, são fornecidos polipeptídeos de iniciação bioativa que contêm modificações não naturais, incluindo modificações N- terminal e C-terminal, ciclização, contendo β-amino e D-aminoácido e outras modificações químicas que intensificam estabilidade ou desempenho dos polipeptídeos. Por exemplo, polipeptídeos de flagelina e associados a Flg compreendendo 22 aminoácidos de comprimento e derivados da região de codificação completa de flagelina foram inicialmente isolados e identificados de um genoma proprietário montado para a cepa bacteriana, Bacillus thuringiensis 4Q7. Esses polipeptídeos derivados de Flg22 foram fornecidos nas formas padrão (L) e retro-inversa (D). Eles são descritos como Bt.4Q7Flg22 e Bt.4Q7Flg22 retro-inverso (RI). Outros polipeptídeos de iniciação bioativa derivados de bactérias são Ec.Flg22 (Escherichia coli), X.Flg22 (Xanthomonas sp.) e outro Flg22 de outras espécies bacterianas, serina proteases (Bacillus subtilis e outras espécies bacterianas), ACC desaminases (Bacillus thuringinesis e outras espécies bacterianas), β-1,3-D-glucanases (Paenibacillus spp. e outras espécies bacterianas) e amilases (Bacillus subtilis e outras espécies bacterianas), enquanto os polipeptídeos derivados de plantas incluem tioninas (Citrus spp. e outras espécies de plantas) e RHPP (Glycine max).
[071] Os polipeptídeos de iniciação bioativa e polipeptídeos livres usados nas composições e nos métodos descritos neste documento podem incluir proteínas de comprimento total e são fornecidos como formas ocorrendo naturalmente, sintéticas ou recombinantes derivadas de bactérias ou plantas.
Por exemplo, flagelinas, tioninas, RHPPs, serina proteases, glucanases, amilases, quitinases e ACC desaminases podem ser distribuídas às plantas.
[072] Os polipeptídeos de iniciação bioativa e polipeptídeos livres também podem ser distribuídos como parceiros de fusão a outras sequências de proteínas, incluindo sítios de clivagem de protease, proteínas de ligação e proteínas de alvo para preparar formulações para distribuição específica a plantas ou partes de plantas.
[073] Também são fornecidas sequências de assinatura, de triagem de âncora de sinal e de secreção que podem ser sintetizadas naturalmente ou quimicamente e sequências de alvo, tal como sequências de alvo de floema que são produzidas junto com o(s) polipeptídeo(s) de iniciação bioativa e polipeptídeos livres usando microrganismos recombinantes e quer usadas como polipeptídeos de fusão ou assistência com os polipeptídeos de iniciação bioativa e polipeptídeos livres como aqui descritos.
POLIPEPTÍDEOS DE FLAGELINAS E ASSOCIADOS À FLAGELINA
[074] A composição pode compreender um polipeptideo de flagelina ou associado à flagelina.
[075] Flagelina é uma proteína globular que se organiza em um cilindro oco para formar o filamento em um flagelo bacteriano identificado de uma cepa bacteriana proprietária de Bacillus thuringiensis cepa 4Q7. Flagelina é o principal substituinte de flagelo bacteriano e está presente em bactérias flageladas. Plantas podem perceber, combater infecção e montar sinalização de defesa contra micróbios bacterianos por meio do reconhecimento de epítopos conservados, tal como o trecho de 22 aminoácidos (Flg22) localizado no N terminal de uma sequência de codificação de flagelina de comprimento total. A atividade elicitadora do polipeptídeo Flg22 é atribuída a esse domínio conservado dentro do N terminal da proteína flagelina (Felix et al., 1999).
Plantas podem perceber flagelina bacteriana através de um receptor de reconhecimento de padrão (PRR) na superfície celular da planta conhecido como receptor sensível à flagelina, que é uma cinase de receptor de repetição rica em leucina localizada na membrana plasmática e disponível na superfície de célula de planta. Em plantas, o PRR mais bem caracterizado é FLAGELLIN SENSING 2 (FLS2), que é altamente conservado em ambas as plantas monocotiledôneas e dicotiledôneas. A Bt.4Q7Flg22Syn01 é uma forma mutagenizada da versão nativa Bt.4Q7Flg22 que exibe uma elevada atividade usando ensaios para a geração de resposta de oxigênio reativo que se correlaciona positivamente com aumentos em imunidade de plantas e resistência a doenças em plantas.
[076] Polipeptídeos de flagelina ou associados à flagelina são particularmente úteis em composições para tratar doenças bacterianas em plantas. Mediante infecção, Candidatus Liberbacter asiaticus (CLas) evita detecção imune em parte devido a mutações pontuais na proteína de flagelina FliC que impedem ou ligação e/ou ativação do receptor imune de planta Flagellin-Sensing 2 (FLS2). Ativação de FLS2 por fragmentos de proteína de flagelina, tal como Bt.4Q7Flg22, dispara produção de espécies de oxigênio reativas antimicrobianas (ROS), suprarregula o hormônio de defesa de planta ácido salicílico, altera padrões de expressão de gene e promove expressão de proteínas antimicrobianas. Embora flagelina CLas evite detecção pela planta, uma sequência de 22 aminoácidos da flagelina FliC da bactéria não patogênica Bacillus thuringiensis cepa 4Q7, Bt.Flg22 e a forma mutagenizada Bt.4Q7Flg22Syn01 são reconhecidas por plantas cítricas. Tratamento de Bt.4Q7Flg22 ou Bt.4Q7Flg22Syn01 induz produção rápida de ROS, ativando assim o sistema imune da planta, levando a título bacteriano de CLas na planta reduzido, promovendo assim novo crescimento foliar e floração, o que finalmente melhora rendimento de frutos.
[077] O polipetídeo de flagelina ou associado à flagelina pode ser derivado de uma bactéria do gênero Bacillus, uma Lysinibacillus, uma Paenibacillus, uma Aneurinibacillus ou qualquer combinação das mesmas.
Uma das principais classes de polipeptídeos de iniciação bioativa, conforme descrito neste documento, são a(s) flagelina(s) e o(s) polipeptídeo(s) de iniciação associado(s) à flagelina. Sequências de codificação de flagelina de aminoácidos de comprimento total e parcial conservadas foram identificadas de várias espécies de bactérias Bacillus e não Bacillus usando métodos como aqui descritos.
[078] A flagelina é uma proteína estrutural que forma a porção principal de filamentos flagelados de espécies bacterianas flageladas que podem apresentar conservação nas regiões N-terminal e C-terminal da proteína, mas pode ser variável na parte central ou média (Felix G. et al., “Plants have a sensitive perception system for the most conserved domain of bacterial flagellin,” The Plant Journal 18: 265–276, 1999). As regiões conservadas N e C terminais de flagelinas que formam o núcleo interno da proteína de flagelina podem ter papéis na polimerização da proteína em um filamento, na motilidade e no transporte da proteína e na fixação superficial de um fragmento de peptídeo à membrana de célula de planta/receptores de superfície de célula de uma planta.
[079] Flagelinas totais ou parciais (Tabelas 1–2) e os polipeptídeos associados à flagelina derivados dessas flagelinas Bacillus e não Bacillus (Tabelas 3 e 5) são fornecidas.
[080] A sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 226, 1–225, 227–375, 526, 528, 530, 532, 534, 536, 538, 540, 541 ou 572-603, ou qualquer combinação dos mesmos.
[081] Polipeptídeos de iniciação bioativa associados à flagelina são produzidos de polipeptídeos codificando flagelina (tal como as proteínas precursoras de Flg22). Mais especificamente, um polipeptídeo ou um fragmento clivado derivado do polipeptídeo é fornecido para atingir um polipeptídeo Flg de iniciação bioativa que pode ser usado para iniciar ou tratar uma planta. A clivagem do fragmento Flg22 de precursores maiores pode ser realizada através de introdução de sítios de clivagem proteolítica perto da Flg22 para facilitar processamento do biopeptídeo ativo do polipeptídeo maior.
[082] Os polipeptídeos de iniciação bioativa associados à flagelina podem ser derivados de proteínas de flagelinas de comprimento total (ou proteínas precursoras de polipeptídeos associados a Flg de uma Bacillus, uma Lysinibacillus, uma Paenibacillus ou uma Aneurinibacillus ou outra bactéria de gênero não relacionado). Por exemplo, DNA purificado por PCR dos polipeptídeos associados à flagelina, tal como Flg22 e FlgII-28 (gênero Bacillus) e Flg15 e Flg22 (E. coli) são clonados em um vetor recombinante, amplificado para atingir quantidades adequadas de DNA purificado que é, então, sequenciado usando métodos convencionais conhecidos e usados por um versado na técnica. Os mesmos métodos podem ser usados com a codificação de flagelina ou as sequências parciais de flagelina (Tabela 1), polipeptídeos de flagelina N ou C terminal (Tabela 2) e qualquer dos polipeptídeos associados a Flg (Tabelas 3-5).
[083] O polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina pode ser derivado de qualquer membro de Eubacteria que contém a região conservada de 22 aminoácidos que é reconhecida pelas plantas. Polipetídeos de flagelina ou associados à flagelina preferidos podem ser derivados de um gênero de bactéria Bacillus, um Lysinibacillus, um Paenibacillus, uma Aneurinibacillus ou qualquer combinação dos mesmos. Sequências adicionais preferidas de flagelina e Flg22 podem ser obtidas das gamaproteobactérias que contêm 22 sequências de aminoácidos conservadas de >68% de identidade.
SEQUÊNCIAS DE FLAGELINA CONSERVADAS DE BACILLUS
[084] Os polipeptídeos de iniciação bioativa associados à flagelina correspondem aos domínios conservados N-terminal de Bacillus spp. e outra flagelina Eubacteriana e são fornecidos como formas sintéticas, recombinantes ou ocorrendo naturalmente. Os polipeptídeos de iniciação bioativa de flagelina de Flg22, Flg15 e FlgII-28 (Tabela 3) foram identificados e agem como elicitadores potentes em uma ampla faixa de culturas e vegetais para prevenir e tratar a propagação de doenças selecionadas enquanto estimula e promove de forma sinérgica respostas de crescimento em plantas.
[085] Os polipeptídeos de iniciação bioativa de flagelina e associados à flagelina, conforme descrito neste documento, são fornecidos para uso em composições seja individualmente ou em combinação com outros polipeptídeos de iniciação bioativa, conforme descrito neste documento, e incluem flagelinas totais e parciais conservadas de Bacillus (Tabela 1), regiões N e C terminal conservadas de polipeptídeos de flagelina (Tabela 2), polipeptídeos de iniciação bioativa derivados de Bacillus derivados de Flg22 e FlgII-28 (Tabela 3) e sequências retro-inversas que são imagens de espelho derivadas de Bacillus Flg22 e FlgII-28 (Tabela 4). A porção sublinhada das sequências nas Tabelas 1 e 3 representam sequências de triagem ou secreção de âncora de sinal identificadas e sequências de ancoragem de sinal, respectivamente. Outros polipeptídeos não derivados de Bacillus e proteínas também são descritos que são equivalentes funcionais e podem ser utilizados de maneira semelhante (Tabela 5).
TABELA 1. SEQUÊNCIAS DE FLAGELINA CONSERVADAS DE BACILLUS SEQ ID NO: Sequência de Codificação de Flagelina Total ou Parcial - Aminoácido Flagelina SEQ ID NO:1 Bacillus thuringiensis cepa 4Q7 Flagelina SEQ ID NO:2 Bacillus thuringiensis, cepa HD1002 Flagelina SEQ ID NO:3 Bacillus thuringiensis, cepa HD-789
SEQ ID NO: Sequência de Codificação de Flagelina Total ou Parcial - Aminoácido Flagelina SEQ ID NO:4 Bacillus cereus cepa G9842 Flagelina SEQ ID NO:5 Bacillus thuringiensis serovarindiana cepa HD521 Flagelina SEQ ID NO: 6 Bacillus thuringiensis cepa
CTC Flagelina SEQ ID NO: 7 Bacillus thuringiensis serovaryunnanensis cepa IEBC-T20001 Flagelina SEQ ID NO: 8 Bacillus thuringiensis serovar tolworthi Flagelina SEQ ID NO: 9 Bacillus cereus cepa FM1 Flagelina SEQ ID NO: 10 Bacillus cereus cepa FM1
SEQ ID NO: Sequência de Codificação de Flagelina Total ou Parcial - Aminoácido Flagelina SEQ ID NO: 11 Bacillus thuringiensis cepa MC28
Flagelina SEQ ID NO: 12 Bacillus bombysepticus cepa Wang
Flagelina SEQ ID NO: 13 Bacillus thuringiensis serovar kenyae
Flagelina SEQ ID NO: 14 Bacillus thuringiensis serovar kenyae
Flagelina (tipo A) SEQ ID NO: 15 Bacillus cereus
Flagelina (tipo A) SEQ ID NO: 16 Bacillus cereus
Flagelina SEQ ID NO: 17 Bacillus thuringiensis serovar finitimus cepa YBT-020
SEQ ID NO: Sequência de Codificação de Flagelina Total ou Parcial - Aminoácido Flagelina SEQ ID NO: 18 Bacillus thuringiensis serovar finittimus cepa YBT-020
Flagelina SEQ ID NO: 19 Bacillus cereus cepa B4264
Flagelina SEQ ID NO: 20 Bacillus thuringiensis serovar nigeriensis
Flagelina SEQ ID NO: 21 Bacillus thuringiensis
Flagelina SEQ ID NO: 22 Bacillus thuringiensis serovar konkukian cepa 97-27
Flagelina SEQ ID NO: 23 Bacillus thuringiensis serovar konkukian cepa 97-27
Proteína flagelina FlaA SEQ ID NO: 24 Bacillus thuringiensis serovar thuringiensis cepa IS5056
SEQ ID NO: Sequência de Codificação de Flagelina Total ou Parcial - Aminoácido Proteína flagelina FlaA SEQ ID NO: 25 Bacillus thuringiensis serovar thuringiensis cepa IS5056
Flagellin B SEQ ID NO: 26 Bacillus thuringiensis cepa Bt407
Flagelina SEQ ID NO: 27 Bacillus thuringiensis serovar chinensis CT-43
Flagelina SEQ ID NO: 28 Bacillus thuringiensis serovar canadenses
Flagelina SEQ ID NO: 29 Bacillus thuringiensis serovar galleriae
Região helicoidal N terminal de Flagelina SEQ ID NO: 30 Bacillus weihenstephanensis
SEQ ID NO: Sequência de Codificação de Flagelina Total ou Parcial - Aminoácido Flagelina SEQ ID NO: 31 Bacillus thuringiensis serovar ostriniae
Flagelina SEQ ID NO: 32 Bacillus thuringiensis
Flagelina SEQ ID NO: 33 Bacillus thuringiensis
Flagelina SEQ ID NO: 34 Bacillus thuringiensis serovar pondicheriensis
Flagelina B SEQ ID NO: 35 Bacillus thuringiensis serovar Berliner
Flagelina A SEQ ID NO: 36 Bacillus thuringiensis serovar Berliner
Flagelina SEQ ID NO: 37 Bacillus cereus cepa Q1
SEQ ID NO: Sequência de Codificação de Flagelina Total ou Parcial - Aminoácido Flagelina SEQ ID NO: 38 Bacillus cereus cepa Q1
Flagelina SEQ ID NO: 39 Bacillus thuringiensis serovar morrisoni
Flagelina SEQ ID NO: 40 Bacillus thuringiensis serovar neoleonensis
Flagelina SEQ ID NO: 41 Bacillus thuringiensis serovar morrisoni
Flagelina SEQ ID NO: 42 Bacillus thuringiensis serovar morrisoni
Flagelina SEQ ID NO: 43 Bacillus thuringiensis serovar jegathesan
SEQ ID NO: Sequência de Codificação de Flagelina Total ou Parcial - Aminoácido Flagelina SEQ ID NO: 44 Bacillus cereus cepa ATCC 10987
Flagelina SEQ ID NO: 45 Bacillus thuringiensis serovar monterrey
Flagelina SEQ ID NO: 46 Bacillus cereus cepa NC7401
Flagelina SEQ ID NO: 47 Bacillus cereus cepa NC7401
Flagelina (tipo A) SEQ ID NO: 48 Bacillus cereus cepa AH820
Flagelina SEQ ID NO: 49 Bacillus cereus AH187
Flagelina SEQ ID NO: 50 Bacillus cereus
SEQ ID NO: Sequência de Codificação de Flagelina Total ou Parcial - Aminoácido Proteína flagenina Fla SEQ ID NO: 51 Bacillus cereus Flagelina SEQ ID NO: 52 Bacillus thuringiensis Cepa HD-771 [51] Flagelina SEQ ID NO: 53 Bacillus thuringiensis serovar sotto
[52] Flagelina SEQ ID NO: 54 Bacillus thuringiensis serovar Novosibirsk Flagelina SEQ ID NO: 55 Bacillus thuringiensis serovar londrina Flagelina SEQ ID NO: 56 Bacillus cereus cepa E33L
SEQ ID NO: Sequência de Codificação de Flagelina Total ou Parcial - Aminoácido Flagelina SEQ ID NO: 57 Bacillus cereus cepa E33L
Flagelina SEQ ID NO: 58 Bacillus cereus cepa FRI-35
Flagelina SEQ ID NO: 59 Bacillus cereus cepa FRI-35
Flagelina SEQ ID NO: 60 Bacillus thuringiensis
Flagelina SEQ ID NO: 61 Bacillus cereus cepa ATCC 4342
Flagelina SEQ ID NO: 62 Bacillus thuringiensis
Flagelina SEQ ID NO: 63 Bacillus thuringiensis
SEQ ID NO: Sequência de Codificação de Flagelina Total ou Parcial - Aminoácido Flagelina SEQ ID NO: 64 Bacillus aryabhattai
Flagelina SEQ ID NO: 65 Bacillus manliponensis
Flagelina SEQ ID NO: 66 Lysinibacillus sp. cepa BF-4
Flagelina SEQ ID NO: 67 Lysinibacillus sp. cepa 13S34_air
Flagelina SEQ ID NO: 68 Paenibacillus sp. cepa HW567
Flagelina SEQ ID NO: 69 Bacillus anthracis
Flagelina SEQ ID NO: 70 Bacillus anthracis
Flagelina SEQ ID NO: 71 Bacillus anthracis
SEQ ID NO: Sequência de Codificação de Flagelina Total ou Parcial - Aminoácido Flagelina SEQ ID NO: 72 Bacillus anthracis Flagelina SEQ ID NO: 73 Bacillus anthracis cepa H9401 Flagelina SEQ ID NO: 74 Bacillus megaterium cepa WSH-002 Flagelina SEQ ID NO: 75 Aneurinibacillus sp. XH2
REGIÕES CONSERVADAS N E C TERMINAIS DE FLAGELINA
[086] A flagelina ou o polipeptídeo associado a flagelina usado nas composições e nos métodos aqui podem compreender um polipeptídeo N terminal truncado e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo N terminal truncado pode compreender SEQ ID NO: 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106,108, 109, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154,156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 172, 174, 176, 178, 180, 182,184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 208, 210, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 224, 590 ou qualquer combinação das mesmas.
[087] A flagelina ou o polipeptídeo associado a flagelina usado nas composições e nos métodos aqui podem compreender um polipeptídeo C terminal truncado e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo C terminal truncado pode compreender SEQ ID NO: 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127,
129, 131, 133, 135, 137, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 167, 169, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 201, 203, 205, 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225 ou qualquer combinação das mesmas.
[088] Regiões conservadas N terminal e C terminal foram identificadas a partir de sequências de flagelina de comprimento total de diversas cepas de Bacillus spp. e outra Eubacteria (Tabela 2).
[089] Domínios N e C terminais conservados foram identificados usando o software de alinhamento múltiplo BLAST e anotações funcionais atribuídas com base em resultados individuais pesquisando contra outras bases de dados bacterianas de Bacillus e Eubacteria. O sítio de partida para a região N terminal das sequências de codificação é metionina em negrito (M).
Os domínios conservados são fornecidos como sequências de aminoácidos N terminal (coluna esquerda) e C terminal (coluna direita).
TABELA 2. REGIÕES CONSERVADAS N E C TERMINAIS DE FLAGELINAS SEQ ID NO: N terminal conservada C terminal conservada Flagelina N-SEQ ID NO: 76 C-SEQ ID NO: 77 Bacillus thuringensis cepa 4Q7 [CDS de SEQ ID NO:1] Flagelina N-SEQ ID NO: 78 C-SEQ ID NO: 79 Bacillus thuringiensis, cepa HD1002 [CDS de SEQ ID NO:2]
SEQ ID NO: N terminal conservada C terminal conservada
Flagelina N-SEQ ID NO: 80 C-SEQ ID NO: 81 Bacillus thuringiensis, cepa HD-789 [CDS de SEQ ID NO:3]
Flagelina N-SEQ ID NO: 82 C-SEQ ID NO: 83 Bacillus cereus cepa G9842 [CDS de SEQ ID NO:4]
Flagelina N-SEQ ID NO: 84 C-SEQ ID NO: 85 Bacillus thuringiensis sorovar indiana cepa HD521 [CDS de SEQ ID NO:5]
Flagelina N-SEQ ID NO: 86 C-SEQ ID NO: 87 Bacillus thuringiensis cepa CTC [CDS de SEQ ID NO:6]
Flagelina N-SEQ ID NO: 88 C-SEQ ID NO: 89 Bacillus thuringiensis sorovar yunnanensis cepa IEBC-T20001 [CDS de SEQ ID NO:7]
Flagelina N-SEQ ID NO: 90 C-SEQ ID NO: 91 Bacillus thuringiensis serovar tolworthi [CDS de SEQ ID NO:8]
SEQ ID NO: N terminal conservada C terminal conservada
Flagelina N-SEQ ID NO: 92 C-SEQ ID NO: 93 Bacillus cereus cepa FM1 [CDS de SEQ ID NO: 9]
Flagelina N-SEQ ID NO: 94 C-SEQ ID NO: 95 Bacillus cereus cepa FM1 [CDS de SEQ ID NO: 10]
Flagelina N-SEQ ID NO: 96 C-SEQ ID NO: 97 Bacillus thuringiensis cepa MC28 [CDS de SEQ ID NO: 11]
Flagelina N-SEQ ID NO: 98 C-SEQ ID NO: 99 Bacillus bombysepticus cepa Wang [CDS de SEQ ID NO: 12]
Flagelina N-SEQ ID NO: 100 C-SEQ ID NO: 101 Bacillus thuringiensis serovar kenyae [CDS de SEQ ID NO: 13]
Flagelina N-SEQ ID NO: 102 C-SEQ ID NO: 103 Bacillus thuringiensis serovar kenyae [CDS de SEQ ID NO: 14]
SEQ ID NO: N terminal conservada C terminal conservada
Flagelina (tipo A) N-SEQ ID NO: 104 C-SEQ ID NO: 105 Bacillus cereus [CDS de SEQ ID NO: 15]
Flagelina (tipo A) N-SEQ ID NO: 106 C-SEQ ID NO: 107 Bacillus cereus [CDS de SEQ ID NO: 16]
Flagelina N-SEQ ID NO: 108 C-SEQ ID NO: 109 Bacillus thuringiensis serovar finitimus cepa YBT-020 [CDS de SEQ ID NO: 17]
Flagelina N-SEQ ID NO: 110 C-SEQ ID NO: 111 Bacillus thuringiensis serovar finitimus cepa YBT-020 [CDS de SEQ ID NO: 18] Flagelina N-SEQ ID NO: 112 C-SEQ ID NO: 113 Bacillus cereus cepa B4264 [CDS de SEQ ID NO: 19] Flagelina N-SEQ ID NO: 114 C-SEQ ID NO: 115 Bacillus thuringiensis serovar nigeriensis [CDS de SEQ ID NO: 20]
SEQ ID NO: N terminal conservada C terminal conservada
Flagelina N-SEQ ID NO: 116 C-SEQ ID NO: 117 Bacillus thuringiensis [CDS de SEQ ID NO: 21]
Flagelina N-SEQ ID NO: 118 C-SEQ ID NO: 119 Bacillus thuringiensis serovar konkukian cepa 97-27 [CDS de SEQ ID NO: 22]
Flagelina N-SEQ ID NO: 120 C-SEQ ID NO: 121 Bacillus thuringiensis serovar konkukian cepa 97-27 [CDS de SEQ ID NO: 23]
Proteína flagelina FlaA N-SEQ ID NO: 122 C-SEQ ID NO: 123 Bacillus thuringiensis serovar thuringiensis cepa IS5056 [CDS de SEQ ID NO: 24]
Proteína flagelina FlaA N-SEQ ID NO: 124 C-SEQ ID NO: 125 Bacillus thuringiensis serovar thuringiensis cepa IS5056
Flagelina B N-SEQ ID NO: 126 C-SEQ ID NO: 127 Bacillus thuringiensis cepa Bt407 [CDS de SEQ ID NO: 26]
SEQ ID NO: N terminal conservada C terminal conservada
Flagelina N-SEQ ID NO: 128 C-SEQ ID NO: 129 Bacillus thuringiensis serovar chinensis CT-43 [CDS of SEQ ID NO: 27]
Flagelina N-SEQ ID NO: 130 C-SEQ ID NO: 131 Bacillus thuringiensis serovar Canadensis [CDS de SEQ ID NO: 28]
Flagelina N-SEQ ID NO: 132 C-SEQ ID NO: 133 Bacillus thuringiensis serovar galleriae [CDS de SEQ ID NO: 29]
Região helicoidal N terminal de Flagelina N-SEQ ID NO: 134 C-SEQ ID NO: 135 Bacillus weihenstephanensis [CDS de SEQ ID NO: 30]
Flagelina N-SEQ ID NO: 136 C-SEQ ID NO: 137 Bacillus thuringiensis serovar ostriniae [CDS de SEQ ID NO: 31]
Flagelina N-SEQ ID NO: 138 C-SEQ ID NO: 139 Bacillus thuringiensis [CDS de SEQ ID NO: 32]
SEQ ID NO: N terminal conservada C terminal conservada
Flagelina N-SEQ ID NO: 140 C-SEQ ID NO: 141 Bacillus thuringiensis [CDS de SEQ ID NO: 33]
Flagelina N-SEQ ID NO: 142 C-SEQ ID NO: 143 Bacillus thuringiensis serovar pondicheriensis [CDS de SEQ ID NO: 34]
Flagelina B N-SEQ ID NO: 144 C-SEQ ID NO: 145 Bacillus thuringiensis serovar Berliner [CDS de SEQ ID NO: 35]
Flagelina A N-SEQ ID NO: 146 C-SEQ ID NO: 147 Bacillus thuringiensis serovar Berliner [CDS de SEQ ID NO: 36]
Flagelina N-SEQ ID NO: 148 C-SEQ ID NO: 149 Bacillus cereus cepa Q1 [CDS de SEQ ID NO: 37]
Flagelina N-SEQ ID NO: 150 C-SEQ ID NO: 151 Bacillus cereus cepa Q1 [CDS de SEQ ID NO: 38]
SEQ ID NO: N terminal conservada C terminal conservada
Flagelina N-SEQ ID NO: 152 C-SEQ ID NO: 153 Bacillus thuringiensis serovar morrisoni [CDS de SEQ ID NO: 39]
Flagelina N-SEQ ID NO: 154 C-SEQ ID NO: 155 Bacillus thuringiensis serovar neoleonensis [CDS de SEQ ID NO: 40]
Flagelina N-SEQ ID NO: 156 C-SEQ ID NO: 157 Bacillus thuringiensis serovar morrisoni [CDS de SEQ ID NO: 41]
Flagelina N-SEQ ID NO: 158 C-SEQ ID NO: 159 Bacillus thuringiensis serovar morrisoni [CDS de SEQ ID NO: 42]
Flagelina N-SEQ ID NO: 160 C-SEQ ID NO: 161 Bacillus thuringiensis serovar jegathesan [CDS de SEQ ID NO: 43]
Flagelina N-SEQ ID NO: 162 C-SEQ ID NO: 163 Bacillus cereus cepa ATCC 10987 [CDS de SEQ ID NO: 44]
SEQ ID NO: N terminal conservada C terminal conservada
Flagelina N-SEQ ID NO: 164 C-SEQ ID NO: 165 Bacillus thuringiensis serovar monterrey [CDS de SEQ ID NO: 45]
Flagelina N-SEQ ID NO: 166 C-SEQ ID NO: 167 Bacillus cereus cepa NC7401 [CDS de SEQ ID NO: 46] Flagelina N-SEQ ID NO: 168 C-SEQ ID NO: 169 Bacillus cereus cepa NC7401 [CDS de SEQ ID NO: 47]
Flagelina (tipo A) N-SEQ ID NO: 170 C-SEQ ID NO: 171 Bacillus cereus cepa AH820 [CDS de SEQ ID NO: 48]
Flagelina N-SEQ ID NO: 172 C-SEQ ID NO: 173 Bacillus cereus AH187 [CDS de SEQ ID NO: 49]
Flagelina N-SEQ ID NO: 174 C-SEQ ID NO: 175 Bacillus cereus [CDS de SEQ ID NO: 50]
SEQ ID NO: N terminal conservada C terminal conservada
Proteína flagenina Fla N- SEQ ID NO: 176 C-SEQ ID NO: 177 Bacillus cereus [CDS de SEQ ID NO: 51]
Flagelina N-SEQ ID NO: 178 C-SEQ ID NO: 179 Bacillus thuringiensis Cepa HD-771 [CDS de SEQ ID NO: 52]
Flagelina N-SEQ ID NO: 180 C-SEQ ID NO: 181 Bacillus thuringiensis serovar sotto [CDS de SEQ ID NO: 53] Flagelina N-SEQ ID NO: 182 C-SEQ ID NO: 183 Bacillus thuringiensis serovar Novosibirsk [CSD de SEQ ID NO: 54] Flagelina N-SEQ ID NO: 184 C-SEQ ID NO: 185 Bacillus thuringiensis serovar Londrina [CDS de SEQ ID NO: 55]
Flagelina N-SEQ ID NO: 186 C-SEQ ID NO: 187 Bacillus cereus cepa E33L [CDS de SEQ ID NO: 56]
Flagelina N-SEQ ID NO: 188 C-SEQ ID NO: 189 Bacillus cereus cepa E33L [CDS de SEQ ID NO: 57]
SEQ ID NO: N terminal conservada C terminal conservada
Flagelina N-SEQ ID NO: 190 C-SEQ ID NO: 191 Bacillus cereus cepa FRI-35 [CDS de SEQ ID NO: 58]
Flagelina N-SEQ ID NO: 192 C-SEQ ID NO: 193 Bacillus cereus cepa FRI-35 [CDS de SEQ ID NO: 59]
Flagelina N-SEQ ID NO: 194 C-SEQ ID NO: 195 Bacillus thuringiensis [CDS de SEQ ID NO: 60]
Flagelina N-SEQ ID NO: 196 C-SEQ ID NO: 197 Bacillus cereus cepa ATCC 4342 [CDS de SEQ ID NO: 61]
Flagelina N-SEQ ID NO: 198 C-SEQ ID NO: 199 Bacillus thuringiensis [CDS de SEQ ID NO: 62]
Flagelina N-SEQ ID NO: 200 C-SEQ ID NO: 201 Bacillus thuringiensis [CDS de SEQ ID NO: 63]
SEQ ID NO: N terminal conservada C terminal conservada
Flagelina N-SEQ ID NO: 202 C-SEQ ID NO: 203 Bacillus aryabhattai [CDS de SEQ ID NO: 64]
Flagelina N-SEQ ID NO: 204 C-SEQ ID NO: 205 Bacillus manliponensis [CDS de SEQ ID NO: 65]
Flagelina N-SEQ ID NO: 206 C-SEQ ID NO: 207 Lysinibacillus sp. cepa BF- 4 [CDS de SEQ ID NO: 66]
Flagelina N-SEQ ID NO: 208 C-SEQ ID NO: 209 Lysinibacillus sp. cepa 13S34_air [CDS de SEQ ID NO: 67]
Flagelina N-SEQ ID NO: 210 C-SEQ ID NO: 211 Paenibacillus sp. cepa HW567 [CDS de SEQ ID NO: 68] Flagelina N-SEQ ID NO: 212 C-SEQ ID NO: 213 Bacillus anthracis [CDS de SEQ ID NO: 69]
SEQ ID NO: N terminal conservada C terminal conservada Flagelina N-SEQ ID NO: 214 C-SEQ ID NO: 215 Bacillus anthracis [CDS de SEQ ID NO: 70] Flagelina N-SEQ ID NO: 216 C-SEQ ID NO: 217 Bacillus anthracis [CDS de SEQ ID NO: 71] Flagelina N-SEQ ID NO: 218 C-SEQ ID NO: 219 Bacillus anthracis [CDS de SEQ ID NO: 72] Flagelina N-SEQ ID NO: 220 C-SEQ ID NO: 221 Bacillus anthracis cepa H9401 [CDS de SEQ ID NO: 73] Flagelina N-SEQ ID NO: 222 C-SEQ ID NO: 223 Bacillus megaterium cepa WSH-002 [CDS de SEQ ID NO: 74] Flagelina N-SEQ ID NO: 224 C-SEQ ID NO: 225 Aneurinibacillus sp. XH2 [CDS de SEQ ID NO: 75]
[090] A sequência de aminoácido da flagelina ou do polipeptídeo associado à flagelina usado nas composições e nos métodos aqui pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 226-300, ou qualquer combinação das mesmas.
[091] A sequência de aminoácido da flagelina ou do polipeptídeo associado à flagelina usado nas composições e nos métodos aqui pode compreender SEQ ID NO: 226 ou 571.
[092] A sequência de aminoácido da flagelina ou do polipeptídeo associado à flagelina usado nas composições e nos métodos aqui pode compreender SEQ ID NO: 590.
[093] A sequência de aminoácido da flagelina ou do polipeptídeo associado à flagelina usado nas composições e nos métodos aqui pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 301-375 e 587 ou qualquer combinação das mesmas.
[094] A sequência de aminoácido da flagelina ou do polipeptídeo associado à flagelina usado nas composições e nos métodos aqui pode compreender SEQ ID NO: 301.
[095] A sequência polipeptídica derivada de flagelina para Bt 4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) foi identificada a partir de uma biblioteca "interna" proprietária de Bacillus thuringiensis (Bt.) cepa 4Q7. Iniciadores conservados para flagelina de comprimento total de E. coli foram usados para triar a biblioteca de cepa Bt.4Q7 e identificar um polipeptídeo Flg22 de iniciação bioativo funcional associado à flagelina.
TABELA 3. POLIPEPTÍDEOS DE FLAGELINA FLG22 E FLGII-28 IDENTIFICADOS DE BACILLUS SPP. SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 Flg22-Bt.4Q7 DRLSSGKRINSASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 226 Bacillus thuringiensis cepa 4Q7 Flg22 DRLSSGKRINSASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 227 Bacillus thuringiensis, cepa HD1002
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 Flg22 DRLSSGKRINSASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 228 Bacillus thuringiensis, cepa HD-789 Flg22 DRLSSGKRINSASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 229 Bacillus cereus cepa G9842 Flg22 EHLATGKKLNNASDNPANIAIV SEQ ID NO: 230 Bacillus thuringiensis serovar indiana cepa HD521 Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIAT SEQ ID NO: 231 Bacillus thuringiensis cepa CTC Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 232 Bacillus thuringiensis serovar yunnanensis cepa IEBC-T20001 Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 233 Bacillus thuringiensis serovar tolworthi Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 234 Bacillus cereus cepa FM1 Flg22 EHLATGKKLNHASDNPANVAIV SEQ ID NO: 235 Bacillus cereus cepa FM1 Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 236 Bacillus thuringiensis cepa MC28 Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 237 Bacillus bombysepticus cepa Wang Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 238 Bacillus thuringiensis serovar kenyae Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 239 Bacillus thuringiensis serovar kenyae Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 240 Bacillus cereus Flg22 EHLATGKKLNNASDNPANIAIV SEQ ID NO: 241 Bacillus cereus Flg22 EHLATGKKLNHASDNPANVAIV SEQ ID NO: 242 Bacillus thuringiensis serovar finitimus cepa YBT-020 Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 243
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 Bacillus thuringiensis serovar finitimus cepa YBT-020 Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 244 Bacillus cereus cepa B4264 Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 245 Bacillus thuringiensis serovar nigeriensis Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 246 Bacillus thuringiensis Flg22 EHFATGKKLNHASDNPANVAIV SEQ ID NO: 247 Bacillus thuringiensis serovar konkukian cepa 97-27 Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 248 Bacillus thuringiensis serovar konkukian cepa 97-27 Flg22 EHLATGKKLNHASDNPANIVIV SEQ ID NO: 249 Bacillus thuringiensis serovar thuringiensis cepa IS5056 Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 250 Bacillus thuringiensis serovar thuringiensis cepa IS5056 Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 251 Bacillus thuringiensis cepa Bt407 Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 252 Bacillus thuringiensis serovar chinensis CT-43 Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 253 Bacillus thuringiensis serovar canadensis Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 254 Bacillus thuringiensis serovar galleriae Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 255 Bacillus weihenstephanensis Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 256 Bacillus thuringiensis serovar ostriniae Flg22 EHLATGKKLNHASDNPANVAIV SEQ ID NO: 257 Bacillus thuringiensis
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 258 Bacillus thuringiensis Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 259 Bacillus thuringiensis serovar pondicheriensis Flg22 EHLATGKKLNHASDNPANIVIV SEQ ID NO: 260 Bacillus thuringiensis serovar Berliner Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 261 Bacillus thuringiensis serovar Berliner Flg22 EHLATGKKLNHASNNPANVAIV SEQ ID NO: 262 Bacillus cereus cepa Q1 Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 263 Bacillus cereus cepa Q1 Flg22 EHLATGKKLNHASDNPANIAIV SEQ ID NO: 264 Bacillus thuringiensis serovar morrisoni Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 265 Bacillus thuringiensis serovar neoleonensis Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 266 Bacillus thuringiensis serovar morrisoni Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 267 Bacillus thuringiensis serovar morrisoni Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 268 Bacillus thuringiensis serovar jegathesan Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 269 Bacillus cereus cepa ATCC 10987 Flg22 de Flagelina A DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 270 Bacillus thuringiensis serovar monterrey Flg22 EHLATGKKLNNASDNPANIAIV SEQ ID NO: 271 Bacillus cereus cepa NC7401 Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 272 Bacillus cereus cepa NC7401 Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 273 Bacillus cereus cepa AH820 Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 274
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 Bacillus cereus AH187 Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 275 Bacillus cereus Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 276 Bacillus cereus Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 277 Bacillus thuringiensis Cepa HD-771 [51] Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 278 Bacillus thuringiensis serovar sotto [52] Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 279 Bacillus thuringiensis serovar Novosibirsk Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 280 Bacillus thuringiensis serovar londrina Flg22 EHLATGKKLNHASNNPANIAIV SEQ ID NO: 281 Bacillus cereus cepa E33L Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 282 Bacillus cereus cepa E33L Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 283 Bacillus cereus cepa FRI-35 Flg22 EHLATGKKLNNASDNPANIAIV SEQ ID NO: 284 Bacillus cereus cepa FRI-35 Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 285 Bacillus thuringiensis Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 286 Bacillus cereus cepa ATCC 4342 Flg22 EHLATGKKLNHASDNPANIAIV SEQ ID NO: 287 Bacillus thuringiensis Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 288 Bacillus thuringiensis Flg22 EKLSSGQRINSASDDAAGLAIS SEQ ID NO: 289 Bacillus aryabhattai Flg22 NRLSSGKQINSASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 290 Bacillus manliponensis Flg22 LRLSSGYRINSAADDAAGLAIS
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 SEQ ID NO: 291 Lysinibacillus sp. cepa BF-4 Flg22 LRLSSGYRINSAADDAAGLAIS SEQ ID NO: 292 Lysinibacillus sp. cepa 13S34_air Flg22 GKLSSGLRINGASDDAAGLAIS SEQ ID NO: 293 Paenibacillus sp. cepa HW567 Flg22 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 294 Bacillus anthracis Flg22 NRLSSGKRINSAADDAAGLAIA SEQ ID NO: 295 Bacillus anthracis Flg22 NRLSSGKRINSAADDAAGLAIA SEQ ID NO: 296 Bacillus anthracis Flg22 NRLSSGKRINSAADDAAGLAIA SEQ ID NO: 297 Bacillus anthracis Flg22 NRLSSGKRINSAADDAAGLAIA SEQ ID NO: 298 Bacillus anthracis cepa H9401 Flg22 EKLSSGQRINSASDDAAGLAIS SEQ ID NO: 299 Bacillus megaterium cepa WSH-002 Flg22 ERLSSGYRINRASDDAAGLAIS SEQ ID NO: 300 Aneurinibacillus sp.
XH2 SEQ ID NO: Peptídeo Flg15 Flg15‐Bt4Q7 SEQ ID NO: 590 RINSAKDDAAGLAIA FLG15-Bt4Q7 modificado; Syn01 Bacillus thuringiensis cepa 4Q7 SEQ ID NO: Peptídeo FglI-28 FlgII-28-Bt.4Q7 SEQ ID NO: 301 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTKGNQAS Bacillus thuringiensis cepa 4Q7 FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTKGNQAS SEQ ID NO: 302 Bacillus thuringiensis, cepa HD1002 FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTKGNQAS SEQ ID NO: 303 Bacillus thuringiensis, cepa HD-789 FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTKGNQAS SEQ ID NO: 304 Bacillus cereus cepa G9842 FlgII-28 TVTNILQRMRDLAVQSANGTNSNKNRHS SEQ ID NO: 305 Bacillus thuringiensis serovar indiana cepa HD521
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 FlgII-28 SVSNILLRMRDIANQSANITNTNENKSA SEQ ID NO: 306 Bacillus thuringiensis cepa CTC FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTDDNQKA SEQ ID NO: 307 Bacillus thuringiensis serovar yunnanensis cepa IEBC-T20001 FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTDENKAA SEQ ID NO: 308 Bacillus thuringiensis serovar tolworthi FlgII-28 SVSNILLRMRDIANQSANGTNTDKNQVA SEQ ID NO: 309 Bacillus cereus cepa FM1 FlgII-28 TVTNILQRMRDVAVQSANGTNSNKNRDS SEQ ID NO: 310 Bacillus cereus cepa FM1 FlgII-28 SVSNILLRMRDIANQSANGTNTADNQQA SEQ ID NO: 311 Bacillus thuringiensis cepa MC28 FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSASGTNTDKNQAA SEQ ID NO: 312 Bacillus bombysepticus cepa Wang FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSASGTNTDKNQAA SEQ ID NO: 313 Bacillus thuringiensis serovar kenyae FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSASGTNTDKNQAA SEQ ID NO: 314 Bacillus thuringiensis serovar kenyae FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTGDNQKA SEQ ID NO: 315 Bacillus cereus FlgII-28 TNILQRMRDLAVQSANGTNSNKNRDSLN SEQ ID NO: 316 Bacillus cereus FlgII-28 TNVLQRMRDVAVQSANGTNLNKNRDSLN SEQ ID NO: 317 Bacillus thuringiensis serovar finitimus cepa YBT-020 FlgII-28 SVSNILLRMRDIANQSANGTNTDSNKSA SEQ ID NO: 318 Bacillus thuringiensis serovar finitimus cepa YBT-020 FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTAENKAA SEQ ID NO: 319 Bacillus cereus cepa B4264 FlgII-28 SVSNILLRMRDIANQSANGTNTSDNQKA SEQ ID NO: 320 Bacillus thuringiensis serovar nigeriensis FlgII-28 SVSNILLRMRDIANQSANGTNTADNQQA SEQ ID NO: 321 Bacillus thuringiensis FlgII-28 TVMNILQRMRDLAVQSANGTNSNKNRDS
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 SEQ ID NO: 322 Bacillus thuringiensis serovar konkukian cepa 97-27 FlgII-28 SVSNILLRMRDIANQSANGTNTADNQQA SEQ ID NO: 323 Bacillus thuringiensis serovar konkukian cepa 97-27 FlgII-28 TVTNILQHMRDFAIQSANGTNSNTNRDS SEQ ID NO: 324 Bacillus thuringiensis serovar thuringiensis cepa IS5056 FlgII-28 SVSNILLRMRDISNQSANGTNTDKNQSA SEQ ID NO: 325 Bacillus thuringiensis cepa IS5056 FlgII-28 SVSNILLRMRDISNQSANGTNTDKNQSA SEQ ID NO: 326 Bacillus thuringiensis cepa Bt407 FlgII-28 SVSNILLRMRDISNQSANGTNTDKNQSA SEQ ID NO: 327 Bacillus thuringiensis serovar chinensis CT-43 FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENQAA SEQ ID NO: 328 Bacillus thuringiensis serovar canadensis FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENQAA SEQ ID NO: 329 Bacillus thuringiensis serovar galleriae FlgII-28 SVSNILLRMRDLSNQSANGTNTDENQQA SEQ ID NO: 330 Bacillus weihenstephanensis FlgII-28 SVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKA SEQ ID NO: 331 Bacillus thuringiensis serovar ostriniae FlgII-28 TVANILQRMRDLAVQSSNDTNSNKNRDS SEQ ID NO: 332 Bacillus thuringiensis FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTDDNQKA SEQ ID NO: 333 Bacillus thuringiensis FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTDDNQKA SEQ ID NO: 334 Bacillus thuringiensis serovar pondicheriensis FlgII-28 TVTNILQHMRDFAIQSANGTNSNTNRDS SEQ ID NO: 335 Bacillus thuringiensis serovar Berliner FlgII-28 SVSNILLRMRDISNQSANGTNTDKNQSA SEQ ID NO: 336 Bacillus thuringiensis serovar Berliner
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 FlgII-28 TVTNVLQRMRDVAVQSANGTNSSKNRDS SEQ ID NO: 337 Bacillus cereus cepa Q1 FlgII-28 SVSNILLRMRDIANQSANGTNTDKNQVA SEQ ID NO: 338 Bacillus cereus cepa Q1 FlgII-28 TVMNILQRMRDLAIQSANSTNSNKNRDS SEQ ID NO: 339 Bacillus thuringiensis serovar morrisoni FlgII-28 SVSNILLRMRDIANQSANGTNTSDNQKA SEQ ID NO: 340 Bacillus thuringiensis serovar neoleonensis FlgII-28 SVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKA SEQ ID NO: 341 Bacillus thuringiensis serovar morrisoni FlgII-28 SVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKA SEQ ID NO: 342 Bacillus thuringiensis serovar morrisoni FlgII-28 SVSNILLRMRDIANQSANGTNTNGNQAA SEQ ID NO: 343 Bacillus thuringiensis serovar jegathesan FlgII-28 SVSNILLRMRDIANQSANGTNTDKNQAA SEQ ID NO: 344 Bacillus cereus cepa ATCC 10987 FlgII-28 de Flagelina A SEQ ID NO: 345 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENQAA Bacillus thuringiensis serovar monterrey FlgII-28 TVTNVLQRMRDLAVQSANDTNSNKNRDS SEQ ID NO: 346 Bacillus cereus cepa NC7401 FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENKAA SEQ ID NO: 347 Bacillus cereus cepa NC7401 FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTSDNQAA SEQ ID NO: 348 Bacillus cereus cepa AH820 FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENKAA SEQ ID NO: 349 Bacillus cereus AH187 FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENKAA SEQ ID NO: 350 Bacillus cereus FlgII-28 SVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKA SEQ ID NO: 351 Bacillus cereus FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSASETNTSKNQAA SEQ ID NO: 352 Bacillus thuringiensis Cepa HD-771 [51] FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSASETNTSKNQAA SEQ ID NO: 353 Bacillus thuringiensis serovar sotto [52]
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 FlgII-28 SVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKA SEQ ID NO: 354 Bacillus thuringiensis serovar Novosibirsk FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTSENQAA SEQ ID NO: 355 Bacillus thuringiensis serovar londrina FlgII-28 TVTNILQRMRDLAVQSANVTNSNKNRNS SEQ ID NO: 356 Bacillus cereus cepa E33L FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTDKNQGA SEQ ID NO: 357 Bacillus cereus cepa E33L FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTDKNQAA SEQ ID NO: 358 Bacillus cereus cepa FRI-35 FlgII-28 TVTNVLQRMRDLAVQSANGTNSNKNRDS SEQ ID NO: 359 Bacillus cereus cepa FRI-35 FlgII-28 SVSNILLRMRDIANQTANGTNKDTDIEA SEQ ID NO: 360 Bacillus thuringiensis FlgII-28 SVSNILLRMRDIANQTANGTNKDTDIEA SEQ ID NO: 361 Bacillus cereus cepa ATCC 4342 FlgII-28 TVMNILQRMRDLAIQSANSTNSNKNRDS SEQ ID NO: 362 Bacillus thuringiensis FlgII-28 SVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKA SEQ ID NO: 363 Bacillus thuringiensis FlgII-28 ETHDILQRMRELVVQAGNGTNKTEDLDA SEQ ID NO: 364 Bacillus aryabhattai FlgII-28 SVSNILLRMRDLATQSATGTNQGNDRES SEQ ID NO: 365 Bacillus manliponensis FlgII-28 ETHAIVQRMRELAVQAATDTNTDDDRAK SEQ ID NO: 366 Lysinibacillus sp. cepa BF-4 FlgII-28 ETHAIVQRMRELAVQAATDTNTDDDRAK SEQ ID NO: 367 Lysinibacillus sp. cepa 13S34_air FlgII-28 EIHSMLQRMNELAVQASNGTYSGSDRLN SEQ ID NO: 368 Paenibacillus sp. cepa HW567 FlgII-28 SVSNILLRMRDLANQSANGTNTKENQDA SEQ ID NO: 369 Bacillus anthracis FlgII-28 SVSNILTRMRDIAVQSSNGTNTAENQSA SEQ ID NO: 370 Bacillus anthracis
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 FlgII-28 SVSNILTRMRDIAVQSSNGTNTAENQSA SEQ ID NO: 371 Bacillus anthracis FlgII-28 SVSNILTRMRDIAVQSSNGTNTAENQSA SEQ ID NO: 372 Bacillus anthracis FlgII-28 SVSNILTRMRDIAVQSSNGTNTAENQSA SEQ ID NO: 373 Bacillus anthracis cepa H9401 FlgII-28 ETHDILQRMRELVVQAGNGTNKTEDLDA SEQ ID NO: 374 Bacillus megaterium cepa WSH-002 FlgII-28 EIHEMLQRMRELAVQAANGTYSDKDKKA SEQ ID NO: 375 Aneurinibacillus sp. XH2 POLIPEPTÍDEO ASSOCIADO A FLAGELINA RETRO-INVERSO
[096] Polipeptídeo(s) Flg bioativo(s) útil(eis) para as composições ou métodos de iniciação bioativos aqui pode(m) ser criados em uma forma isomérica não natural ou retro-inverso (RI) e usado(s) nas composições e nos métodos aqui.
[097] Os polipeptídeos Flg retro-inversos podem exibir afinidade de ligação intensificada para a(s) proteína(s) de receptor FLS. Receptores de flagelina de planta, tal como FLS2, podem reconhecer um fragmento de polipeptídeo Flg retro inverso, tal como ou Flg22 ou FlgII-28, localizado dentro do domínio conservado N-terminal de flagelina. As formas retro-inversas desses polipeptídeos Flg são fornecidas como formas biologicamente ativas, que podem reconhecer e interagir com a proteína associada a Flg ou de receptor FLS na superfície da membrana de célula de planta.
[098] Polipeptídeos Flg retro-inversos podem possuir uma elevada atividade e estabilidade à degradação proteolítica na superfície de membrana de planta. Por exemplo, formas retro inversas de polipeptídeos Flg22 ou FlgII- 28 de Bacillus podem aumentar atividade e estabilidade do(s) polipeptídeo(s) Flg e aumentar a proteção contra degradação proteolítica na superfície de planta ou superfície de raiz. As formas retro inversas também exibem estabilidade intensificada quando aplicadas em um campo, ou sobre ou em um solo.
[099] Polipeptídeos retro-inversos são imagens de espelho topológicas das estruturas nativas do polipeptídeo parental. Formas sintéticas retro inversas das sequências polipeptídicas são criadas revertendo as sequências polipeptídicas e usando peptídeos retro-all-D ou retro-enantio. O(s) polipeptídeo(s) Flg de aminoácido de cadeia all D adota(m) uma "imagem de espelho" da estrutura tridimensional de seu peptídeo L ou aminoácido de cadeia L relacionado.
[0100] Isto é ainda realizado criando uma alteração retro-inversa de qualquer do polipeptídeo Flg parental derivado de Bacillus ou outra Eubacteria na Tabela 3. Polipeptídeos retro-inversos que foram desenhados para o Flg22 (RI Flg22: SEQ ID NOs: 376-450) e FlgII-28 (RI-FlgII-28: SEQ ID NOs: 451-525) são fornecidos na Tabela 4. Formas retro inversas de Ec.Flg22 (SEQ ID NO: 526) e Ec.Flg15 (SEQ ID NO: 529) conforme fornecido na Tabela 5 também foram criadas de sequências derivadas de E. coli.
[0101] Qualquer dos polipeptídeos de iniciação bioativos associados à flagelina compreendendo Bacillus ou de outros polipeptídeos de Eubacteria Flg22 ou FlgII-28 na Tabela 3 pode ser usado em suas formas retro- inversas (Tabela 4) nas composições e nos métodos aqui.
[0102] Formas retro inversas dos polipeptídeos de iniciação bioativos Flg, como aqui referenciado, podem ser fornecidas em qualquer de três formas onde a inversão da quiralidade de aminoácido contém a forma normal-all-D (inverso), all-L (retro) e/ou retro-all-D (retro-inverso) ou uma combinação destas formas para obter os fenótipos desejados em uma planta.
[0103] Os polipeptídeos L-Flg22 e L-FlgII-28 derivado de Bacillus na Tabela 3 e os polipeptídeos L-Flg22 e L-Flg15 Ec nativos na Tabela 5 foram gerados sinteticamente via engenharia retro-inversa para formar polipeptídeo
D-Flg22 retro-inverso (SEQ ID NO: 376-450), D-FlgII-28 (SEQ ID NO: 451-525) e E.c. Polipeptídeo D-Flg22 (SEQ ID NO: 527, 529).
[0104] A inversão de quiralidade de aminoácido (all-L para all-D) para Bt.4Q7 Flg22 (SEQ ID NO: 376), que é fornecida como um pequeno fragmento de polipeptídeo linear e é referida como uma modificação retro invers foi alcançada por uma reversão da direção da espinha dorsal polipeptídica e descrita abaixo: (DADIADLDGDADADDDDDSDADSDNDIDRDKDGDSDSDLDRDD)
[0105] O polipeptídeo Flg22 de aminoácido de cadeia all D retro- inverso adota uma "imagem de espelho" da estrutura tridimensional de seu polipeptídeo L-Bt.4Q7Flg 22 nativo relativo e esta cadeia all L tem uma imagem de espelho equivalente ao polipeptídeo Bt.4Q7Flg22 all D. Todos os resíduos de aminoácidos all L são substituídos por seus D-enantiômeros levando a peptídeos all D ou peptídeos de isômero all D retro contendo ligações amida. A forma de cadeia de L-aminoácido nativa da cadeia polipeptídica Bt.4Q7 Flg22 revertida para gerar a confirmação all-D sintética retro inversa que é preparada substituindo todos os resíduos de L-aminoácido por seus D-enantiômeros correspondentes.
[0106] FIG.1 fornece uma representação diagramática de um Bt.4Q7 Flg22 natural (all L) e seu retro inverso ou imagem de espelho para formar um polipeptídeo enantiomérico D Bt.4Q7 Flg22 all D. O polipeptídeo Flg retro-inverso que corresponde a Bt.4Q7 Flg22 (SEQ ID NO: 226) é descrito como SEQ ID NO: 376.
[0107] No caso de polipeptídeos curtos, tal como Flg22, Flg15 e FlgII-28, o espelhamento das posições de cadeia lateral em uma mudança conformacional de estados de conversão L para D resulta em um espelhamento de transformações de simetria das cadeias laterais também.
[0108] Análogos retro-all-D foram considerados como possuindo atividade biológica (Guptasarma, “Reversal of peptide backbone direction may result in mirroring of protein structure, FEBS Letters 310: 205–210, 1992). O(s) polipeptídeo(s) D-Flg retro-inverso(s) pode(m) assumir uma topologia de cadeia lateral em sua conformação estendida que é semelhante a uma sequência polipeptídica L-Flg nativa correspondente, emulando assim atividades biológicas da molécula L-parental nativa, embora totalmente resistente a degradação proteolítica, aumentando assim a estabilidade quando o polipeptídeo entra contata a planta ou o ambiente circundante.
[0109] Polipeptídeos de iniciação bioativos Flg retro-inversos são descritos na Tabela 4 ou Tabela 5. Polipeptídeos de iniciação bioativos associados a Flg retro inversos fornecidos na Tabela 4 foram selecionados por sua atividade e estabilidade intensificadas e sua capacidade de sobreviver em condições e ambientes variáveis. Com base na natureza de seu D enantiômero, eles são mais resistentes à degradação proteolítica e podem sobreviver e existir em condições ambientais mais adversas.
TABELA 4. POLIPEPTÍDEOS DE FLAGELINA RETRO-INVERSOS DE FLG22 E FLGII-28
DE BACILLUS SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 RI Bt.4Q7Flg22 SEQ ID NO: 376 AIALGAADDSASNIRKGSSLRD Bacillus thuringiensis cepa 4Q7 RI Flg22 AIALGAADDSASNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 377 Bacillus thuringiensis, cepa HD1002 RI Flg22 AIALGAADDASNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 378 Bacillus thuringiensis, cepa HD-789 RI Flg22 AIALGAADDSASNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 379 Bacillus cereus cepa G9842 RI Flg22 VIANAPNDSANNLKKGTALHE SEQ ID NO: 380 Bacillus thuringiensis serovar indiana cepa HD521 RI Flg22 TAIAGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 381 Bacillus thuringiensis cepa CTC
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 382 Bacillus thuringiensis Serovaryunnanensis cepa IEBC-T20001 RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 383 Bacillus thuringiensis serovar tolworthi RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 384 Bacillus cereus cepa FM1 RI Flg22 VIAVNAPNDSAHNLKKGTALHE SEQ ID NO: 385 Bacillus cereus cepa FM1 RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 386 Bacillus thuringiensis cepa MC28 RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 387 Bacillus bombysepticus cepa Wang RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 388 Bacillus thuringiensis serovar kenyae RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 389 Bacillus thuringiensis serovar kenyae RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 390 Bacillus cereus RI Flg22 VIAINAPNDASNNLKKGTALHE SEQ ID NO: 391 Bacillus cereus RI Flg22 VIANAPNDSAHNLKKGTALHE SEQ ID NO: 392 Bacillus thuringiensis serovar finitimus cepa YBT-020 RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 393 Bacillus thuringiensis serovar finitimus cepa YBT-020 RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 394 Bacillus cereus cepa B4264 RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 395 Bacillus thuringiensis serovar nigeriensis RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 396 Bacillus thuringiensis RI Flg22 VIANAPNDSAHNLKKGTAFHE SEQ ID NO: 397
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 Bacillus thuringiensis serovar konkukian cepa 97-27 RI Flg22 AIALGAADDSANNRKGSSLRD SEQ ID NO: 398 Bacillus thuringiensis serovar konkukian cepa 97-27 RI Flg22 VIVINAPNDSAHNLKKGTALHE SEQ ID NO: 399 Bacillus thuringiensis serovar thuringiensis cepa IS5056 RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 400 Bacillus thuringiensis serovar thuringiensis cepa IS5056 RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 401 Bacillus thuringiensis cepa Bt407 RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 402 Bacillus thuringiensis serovar chinensis CT-43 RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 403 Bacillus thuringiensis serovar canadensis RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 404 Bacillus thuringiensis serovar galleriae RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 405 Bacillus weihenstephanensis RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 406 Bacillus thuringiensis serovar ostriniae RI Flg22 VIANAPNDSAHNLKKGTALHE SEQ ID NO: 407 Bacillus thuringiensis RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 408 Bacillus thuringiensis RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 409 Bacillus thuringiensis serovar pondicheriensis RI Flg22 VIVINAPNDASHNLKKGTALHE SEQ ID NO: 410 Bacillus thuringiensis serovar Berliner RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 411 Bacillus thuringiensis serovar Berliner
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 RI Flg22 VIAVANPNNSAHNLKKGTALHE SEQ ID NO: 412 Bacillus cereus cepa Q1 RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 413 Bacillus cereus cepa Q1 RI Flg22 VIANAPNDSAHNLKKGTALHE SEQ ID NO: 414 Bacillus thuringiensis serovar morrisoni RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 415 Bacillus thuringiensis serovar neoleonensis RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 416 Bacillus thuringiensis serovar morrisoni RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 417 Bacillus thuringiensis serovar morrisoni RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 418 Bacillus thuringiensis serovar jegathesan RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 419 Bacillus cereus cepa ATCC 10987 RI Flg22 de Flagellin A SEQ ID NO: 420 AIALGAADDASNNIRKGSSLRD Bacillus thuringiensis serovar monterrey RI Flg22 VIANAPNDSANNLKKGTALHE SEQ ID NO: 421 Bacillus cereus cepa NC7401 RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 422 Bacillus cereus cepa NC7401 RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 423 Bacillus cereus cepa AH820 RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 424 Bacillus cereus AH187 RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 425 Bacillus cereus RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 426 Bacillus cereus RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 427 Bacillus thuringiensis Cepa HD-771 [51] RI Flg22 AIALGAADDANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 428 Bacillus thuringiensis serovar sotto [52]
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 429 Bacillus thuringiensis serovar Novosibirsk RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 430 Bacillus thuringiensis serovar londrina RI Flg22 VIAINAPNNSAHNLKKGTALHE SEQ ID NO: 431 Bacillus cereus cepa E33L RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 432 Bacillus cereus cepa E33L RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 433 Bacillus cereus cepa FRI-35 RI Flg22 VIAINAPNDSANNLKKGTALHE SEQ ID NO: 434 Bacillus cereus cepa FRI-35 RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 435 Bacillus thuringiensis RI Flg22 AIALGAADDANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 436 Bacillus cereus cepa ATCC 4342 RI Flg22 VIANAPNDSAHNLKKGTALHE SEQ ID NO: 437 Bacillus thuringiensis RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 438 Bacillus thuringiensis RI Flg22 SIALGAADDSASNIRQGSSLKE SEQ ID NO: 439 Bacillus aryabhattai RI Flg22 AIALGAADDSASNIQKGSSLRN SEQ ID NO: 440 Bacillus manliponensis RI Flg22 SIALGAADDAASNIRYGSSLRL SEQ ID NO: 441 Lysinibacillus sp. cepa BF-4 RI Flg22 SIALGAADDAASNIRYGSSLRL SEQ ID NO: 442 Lysinibacillus sp. cepa 13S34_air RI Flg22 SIAGLAADDSAGNIRLGSSLKG SEQ ID NO: 443 Paenibacillus sp. cepa HW567 RI Flg22 AIALGAADDSANNIRKGSSLRD SEQ ID NO: 444 Bacillus anthracis RI Flg22 AIALGAADDAASNIRKGSSLRN SEQ ID NO: 445 Bacillus anthracis
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 RI Flg22 AIALGAADDAASNIRKGSSLRN SEQ ID NO: 446 Bacillus anthracis RI Flg22 AIALGAADDAASNIRKGSSLRN SEQ ID NO: 447 Bacillus anthracis RI Flg22 AIALGAADDAASNIRKGSSLRN SEQ ID NO: 448 Bacillus anthracis cepa H9401 RI Flg22 SIALGAADDSASNIRQGSSLKE SEQ ID NO: 449 Bacillus megaterium cepa WSH-002 RI Flg22 SIALGAADDSARNIRYGSSLRE SEQ ID NO: 450 Aneurinibacillus sp.
XH2 SEQ ID NO: Peptídeo Flg15 RI Flg15‐Bt4Q7 SEQ ID NO: 586 AIALGAADDKASNIR FLG15-Bt4Q7 modificado; Syn01 Bacillus thuringiensis cepa 4Q7 SEQ ID NO: Peptídeo FlgII-28 RI FlgII-28-Bt.4Q7 SAQNGKTNTGNASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 451 Bacillus thuringiensis cepa 4Q7 RI FlgII-28 SAQNGKTNTGNASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 452 Bacillus thuringiensis, cepa HD1002 RI FlgII-28 SAQNGKTNTGNASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 453 Bacillus thuringiensis, cepa HD-789 RI FlgII-28 SAQNGKTNTGNASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 454 Bacillus cereus cepa G9842 RI FlgII-28 SHRNKNSNTGNASQVALDRMRQLINTVT SEQ ID NO: 455 Bacillus thuringiensis serovar indiana cepa HD521 RI FlgII-28 ASKNENTNTGNASQNAIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 456 Bacillus thuringiensis cepa CTC RI FlgII-28 AKQNDDTNTGNASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 457 Bacillus thuringiensis serovaryunnanensis cepa IEBC-T20001 RI FlgII-28 AAKNEDTNTGNASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 458 Bacillus thuringiensis serovar tolworthi RI FlgII-28 LAVQNKDTNTGNASQNAIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 459 Bacillus cereus cepa FM1 RI FlgII-28 SDRNKNSNTGNASQVAVDRMRQLINTVT
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 SEQ ID NO: 460 Bacillus cereus cepa FM1 RI FlgII-28 AQQNDATNTGNASQNAIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 461 Bacillus thuringiensis cepa MC28 RI FlgII-28 AAQNKDTNTGSASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 462 Bacillus bombysepticus cepa Wang RI FlgII-28 AAQNKDTNTGSASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 463 Bacillus thuringiensis serovar kenyae RI FlgII-28 AAQNKDTNTGSASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 464 Bacillus thuringiensis serovar kenyae RI FlgII-28 AKQNDGTNTGNASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 465 Bacillus cereus RI FlgII-28 NLSDRNKNSNTGNASQVALDRMRQLINT SEQ ID NO: 466 Bacillus cereus RI FlgII-28 NLSDRNKNLNTGNASQVAVDRMRQLVNT SEQ ID NO: 467 Bacillus thuringiensis serovar finitimus cepa YBT-020 RI FlgII-28 ASKNSDTNTGNASQNAIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 468 Bacillus thuringiensis serovar finitimus cepa YBT-020 RI FlgII-28 AAKNEATNTGNASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 469 Bacillus cereus cepa B4264 RI FlgII-28 AKQNDSTNTGNASQNAIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 470 Bacillus thuringiensis serovar nigeriensis RI FlgII-28 AQQNDATNTGNASQNAIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 471 Bacillus thuringiensis RI FlgII-28 SDRNKNSNTGNASQVALDRMRQLINMVT SEQ ID NO: 472 Bacillus thuringiensis serovar konkukian cepa 97-27 RI FlgII-28 AQQNDATNTGNASQNAIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 473 Bacillus thuringiensis serovar konkukian cepa 97-27 RI FlgII-28 SDRNTNSNTGNASQIAFDRMHQLINTVT SEQ ID NO: 474 Bacillus thuringiensis serovar thuringiensis cepa IS5056 RI FlgII-28 ASQNKDTNTGNASQNSIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 475
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 Bacillus thuringiensis serovar thuringiensis cepa IS5056 RI FlgII-28 ASQNKDTNTGNASQNSIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 476 Bacillus thuringiensis cepa Bt407 RI FlgII-28 ASQNKDTNTGNASQNSISRMRLLINSVS SEQ ID NO: 477 Bacillus thuringiensis serovar chinensis CT-43 RI FlgII-28 AAQNENTNTGNASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 478 Bacillus thuringiensis serovar canadensis RI FlgII-28 AQQNEDTNTGNASQNSLDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 479 Bacillus thuringiensis serovar galleriae RI FlgII-28 AQQNEDTNTGNASQNSLDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 480 Bacillus weihenstephanensis RI FlgII-28 AKQNDGTNTGNASQNAIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 481 Bacillus thuringiensis serovar ostriniae RI FlgII-28 SDRNKNSNTDNSSQVALDRMRQLINAVT SEQ ID NO: 482 Bacillus thuringiensis RI FlgII-28 AKQNDDTNTGNASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 483 Bacillus thuringiensis RI FlgII-28 AKQNDDTNTGNASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 484 Bacillus thuringiensis serovar pondicheriensis RI FlgII-28 SDRNTNSNTGNASQIAFDRMHQLINTVT SEQ ID NO: 485 Bacillus thuringiensis serovar Berliner RI FlgII-28 ASQNKDTNTGNASQNSIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 486 Bacillus thuringiensis serovar Berliner RI FlgII-28 SDRNKSSNTGNASQVAVDRMRQLVNTVT SEQ ID NO: 487 Bacillus cereus cepa Q1 RI FlgII-28 AVQKDTNTGNASQNAIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 488 Bacillus cereus cepa Q1 RI FlgII-28 SDRNKNSNTSNASQIALDRMRQLINMVT SEQ ID NO: 489 Bacillus thuringiensis serovar morrisoni RI FlgII-28 AKQNDSTNIGNASQNAIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 490 Bacillus thuringiensis serovar neoleonensis
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 RI FlgII-28 AKQNDGTNTFNASQNAIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 491 Bacillus thuringiensis serovar morrisoni RI FlgII-28 AKQNDGTNTFNASQNAIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 492 Bacillus thuringiensis serovar morrisoni RI FlgII-28 AAQNGNTNTFNASQNAIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 493 Bacillus thuringiensis serovar jegathesan RI FlgII-28 AAQNKDTNTGNASQNAIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 494 Bacillus cereus cepa ATCC 10987 RI FlgII-28 de Flagelina A SEQ ID NO: AAQNENTNTGNASQNALDRMRLLINSVS 495 Bacillus thuringiensis serovar monterrey RI FlgII-28 SDRNKNSNTDNASQVALDRMRQLVNTVT SEQ ID NO: 496 Bacillus cereus cepa NC7401 RI FlgII-28 AAKNENTNTGNASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 497 Bacillus cereus cepa NC7401 RI FlgII-28 AAQNDSTNTGNASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 498 Bacillus cereus cepa AH820 RI FlgII-28 AAKNENTNTGNASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 499 Bacillus cereus AH187 RI FlgII-28 AAKNENTNTGNASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 500 Bacillus cereus RI FlgII-28 AKQNDGTNTGNASQNAIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 501 Bacillus cereus RI FlgII-28 AAQNKSTNTESASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 502 Bacillus thuringiensis Cepa HD-771 [51] RI FlgII-28 AAQNKSTNTESASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 503 Bacillus thuringiensis serovar sotto [52] RI FlgII-28 AKQNDGTNTGNASQNAIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 504 Bacillus thuringiensis serovar Novosibirsk RI FlgII-28 AAQNESTNTGNAQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 505 Bacillus thuringiensis serovar londrina RI FlgII-28 SNRNKNSNTVNASQVALDRMRQLINTVT SEQ ID NO: 506 Bacillus cereus cepa E33L RI FlgII-28 AGQNKDTNTNASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 507 Bacillus cereus cepa E33L
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 RI FlgII-28 AAQNKDTNTGNASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 508 Bacillus cereus cepa FRI-35 RI FlgII-28 SDRNKNSNTGNASQVALDRMRQLVNTVT SEQ ID NO: 509 Bacillus cereus cepa FRI-35 RI FlgII-28 AEIDTDKNTGNATQNAIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 510 Bacillus thuringiensis RI FlgII-28 AEIDTDKNTGNATQNAIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 511 Bacillus cereus cepa ATCC 4342 RI FlgII-28 SDRNKNSNTSNASQIALDRMRQLINMT SEQ ID NO: 512 Bacillus thuringiensis RI FlgII-28 AKQNDGTNTGNASQNAIDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 513 Bacillus thuringiensis RI FlgII-28 ADLDETKNTGNGAQVVLERMRQLIDHTE SEQ ID NO: 514 Bacillus aryabhattai RI FlgII-28 SERDNGQNTGTAQTALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 515 Bacillus manliponensis RI FlgII-28 KARDDDTNTDTAAQVALERMRQVIAHTE SEQ ID NO: 516 Lysinibacillus sp. cepa BF-4 RI FlgII-28 KARDDDTNTDTAAQVALERMRQVIAHTE SEQ ID NO: 517 Lysinibacillus sp. cepa 13S34_air RI FlgII-28 NLRDSGSYTGNSAQVALENMRQLMSHIE SEQ ID NO: 518 Paenibacillus sp. cepa HW567 RI FlgII-28 ADQNEKTNTGNASQNALDRMRLLINSVS SEQ ID NO: 519 Bacillus anthracis RI FlgII-28 ASQNEATNTGNSSQVAIDRMRTLINSVS SEQ ID NO: 520 Bacillus anthracis RI FlgII-28 ASQNEATNTGNSSQVAIDRMRTLINSVS SEQ ID NO: 521 Bacillus anthracis RI FlgII-28 ASQNEATNTGNSSQVAIDRMRTLINSVS SEQ ID NO: 522 Bacillus anthracis RI FlgII-28 ASQNEATNTGNSSQVIADRMRTLINSVS SEQ ID NO: 523 Bacillus anthracis cepa H9401 RI FlgII-28 ADLDETKNTGNGAQVVLERMRQLIDHTE SEQ ID NO: 524 Bacillus megaterium cepa WSH-002
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 RI FlgII-28 AKKDKSYTGNAAQVALERMRQLMEHIE SEQ ID NO: 525 Aneurinibacillus sp. XH2
SEQUÊNCIAS DE FLG DE VÁRIOS ORGANISMOS TABELA 5. POLIPEPTÍDEOS FLG22 E FLG15 ASSOCIADOS À FLAGELINA E
POLIPEPTÍDEOS RI DOS MESMOS DE OUTROS ORGANISMOS SEQ ID NO: Peptídeo - Aminoácido Flagelina (Flg22) ERLSSGLRINSAKDDAAGQAIA SEQ ID NO: 526 Escherichia coli Flagelina (Retro-Inverso Flg22) AIAQGAADDKASNIRLGSSLRE SEQ ID NO: 527 Escherichia coli Flagelina (Flg15) RINSAKDDAAGQAIA SEQ ID NO: 528 Escherichia coli Flagelina (Retro-Inverso Flg15) AIAQGAADDKASNIR SEQ ID NO: 529 Escherichia coli Flagelina (Flg22) QRLSTGSRINSAKDDAAGLQIA SEQ ID NO: 530 Pseudomonas aeruginosa Flagelina (Retro Inverso Flg22) AIQLGAADDKASNIRSGTSLRQ SEQ ID NO: 531 Pseudomonas aeruginosa Flagelina (Flg22) QRLSSGLRINSAKDDAAGLAIS SEQ ID NO: 532 Xanthomonas spp. X. campestris & X. citri Flagelina (Retro Inverso Flg22) SIALGAADDKASNIRLGSSLRQ SEQ ID NO: 533 Xanthomonas spp. X. campestris & X. citri Flagelina (Flg22) QRLSSGLRINSAKDDAAGQAIS SEQ ID NO: 534 Erwinia amylovora Flagelina (Retro Inverso Flg22) SIAQGAADDKASNIRLGSSLRQ SEQ ID NO: 535 Erwinia amylovora Flagelina (Flg22) TRLSSGKRINSAADDAAGLAIS SEQ ID NO: 536 Burkholderia phytofirmans Flagelina (Retro Inverso Flg22) SIALGAADDAASNIRKGSSLRT SEQ ID NO: 537 Burkholderia phytofirmans
SEQ ID NO: Peptídeo - Aminoácido Flagelina (Flg22) NRLSSGKRINTAADDAAGLAIS SEQ ID NO: 538 Burkholderia ubonensis Flagelina (Retro Inverso Flg22) SIALGAADDAATNIRKGSSLRN SEQ ID NO: 539 Burkholderia ubonensis Flagelina (Flg22) TRLSSGLKINSAKDDAAGLQIA SEQ ID NO: 540 Pseudomonas syringae Flagelina (Retro Inverso Flg22) AIQLGAADDKASNIKLGSSLRT SEQ ID NO: 541 Pseudomonas syringae Flagelina (FlgII-28) ESTNILQRMRELAVQSRNDSNSATDREA (SEQ ID NO: 587) Pseudomonas syringae Flagelina (Retro Inverso FlgII- 28) AERDTASNSDNRSQVALERMRQLINTSE (SEQ ID NO: 588) Pseudomonas syringae
[0110] A composição pode compreender, pelo menos, um polipetídeo associado a flagelina ou flagelina retro-inverso.
[0111] O polipeptídeo associado a flagelina ou flagelina retro- inverso pode ser um polipeptídeo Flg22 retro inverso. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo Flg22 retro-inverso pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 376-450, 527, 531, 533, 535, 537 e 539.
[0112] O polipeptídeo associado a flagelina ou flagelina retro- inverso pode ser um polipeptídeo FlgII-28 retro inverso. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo FlgII-28 retro-inverso pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 451-525 ou 588.
[0113] O polipeptídeo associado a flagelina ou flagelina retro- inverso pode ser um polipeptídeo Flg15 retro inverso. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo Flg15 retro-inverso pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 529 ou 586.
SEQUÊNCIAS QUE AUXILIAM EM DIRECIONAMENTO DE FLAGELINAS OU POLIPEPTÍDEOS ASSOCIADOS À FLAGELINA PARA A PLANTA
[0114] As sequências de assinatura, triagem de âncora de sinal e secreção podem ser usadas separadamente ou juntas em combinação com qualquer dos polipeptídeos de flagelina ou associados a flagelina como aqui descrito. Essas sequências de assistência são úteis para a distribuição eficiente dos polipeptídeos de flagelina à superfície de membrana celular de planta. Outras sequências de assistência também podem auxiliar na translocação do fragmento de polipeptídeo Flg através da membrana plasmática. A distribuição de flagelinas e polipeptídeos associados à flagelina à superfície de membrana plasmática de uma planta (ou parte de planta) pode contribuir para processos de sinalização a jusante e resultar em resultados benéficos para uma planta ou uma parte de planta, tal como saúde e produtividade de planta intensificadas.
[0115] O polipeptídeo nas composições ou nos métodos da presente invenção podem ainda compreender um polipeptídeo de assistência.
[0116] O polipeptídeo de assistência pode compreender um polipeptídeo de assinatura e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de assinatura pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 542-548, listadas na Tabela 6, ou qualquer combinação das mesmas. Por exemplo, a sequência de aminoácido do polipeptídeo de assinatura pode compreender SEQ ID NO:
542.
[0117] O polipeptídeo de assistência pode compreender um polipeptídeo de triagem de âncora de sinal e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de triagem de âncora de sinal pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 549-562, listadas na Tabela 7, ou qualquer combinação das mesmas. Por exemplo, a sequência de aminoácido do polipeptídeo de triagem de âncora de sinal pode compreender SEQ ID NO: 549.
[0118] O polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina pode ser produzido de forma recombinante por um microrganismo. Por exemplo, o microrganismo pode compreender um Bacillus, um Pseudomonas, um
Paenibacillus, Aneurinibacillus ou um Lysinibacillus.
[0119] O polipeptídeo de assistência pode compreender um polipeptídeo de secreção e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de secreção pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 563-570, ou qualquer combinação das mesmas. Por exemplo, a sequência de aminoácido do polipeptídeo de secreção pode compreender a SEQ ID NO: 563.
[0120] Esses três tipos de sequências de assistência são ainda descritos na Tabela 6 (sequências de assinatura N-terminais), Tabela 7 (sequências de triagem de âncora de sinal) e Tabela 8 (sequências de secreção).
[0121] Também são fornecidas sequências de "assistência" tendo sequências de assinatura (Tabela 6; SEQ ID NOs: 542-548), triagem de âncora de sinal (Tabela 7; SEQ ID NOs: 549-562) e secreção (Tabela 8; SEQ ID NOs : 563-570) conservadas em combinação com qualquer dos polipeptídeos associados a flagelina, conforme descrito neste documento. Particularmente úteis são combinações das sequências de assistência de assinatura, triagem de âncora de sinal e secreção com os polipeptídeos L-Flg nativos (Tabela 3.
SEQ ID NOs: 226-375) ou qualquer dos polipeptídeos Flg22 retro inversos (Tabela 4. SEQ ID NOs: 376-525) para fornecer distribuição eficiente dos polipeptídeos Flg para a superfície de membrana de planta extracelular, tal como a superfície de uma planta ou parte de planta.
SEQUÊNCIAS DE ASSINATURA N-TERMINAL
[0122] Sequências de "assinatura" de aminoácido conservadas dentro de bactérias Bacillus, Lysinibacillus, Paenibacillus ou Aneurinibacillus (gêneros) e outros gêneros Eubacterianos podem funcionar em direcionamento de polipeptídeos de flagelina para a(s) proteína(s) de receptor associado a Flg apropriada(s), tal como receptores FLS, que têm um sítio de ligação exposto na superfície de membrana celular de planta e podem ser usadas para intensificar ligação polipeptídeo-receptor Flg levando a um elevado potencial de ativação do(s) receptor(es) associado(s) a Flg. As sequências de assinatura de flagelina, conforme identificadas na Tabela 6, são úteis para direcionar e distribuir de forma estável os polipeptídeos Flg para ligação ao FLS ou receptor(es) tipo FLS, portanto, aumentando o contato e a ligação entre o receptor de membrana e o polipeptídeo Flg.
[0123] Sequências de assinatura N-terminal conservadas (SEQ ID NO: 542-548) podem ser usadas em combinação com qualquer dos polipeptídeos associados à flagelina, conforme descrito neste documento. De particular utilidade são as sequências de assinatura usadas em combinação com os polipeptídeos L-Flg nativos (L-Flg22 SEQ ID NOs: 226-300; L-FlgII-28 SEQ ID NOs: 301-375) ou qualquer dos polipeptídeos D-Flg retro inversos (D- Flg22 SEQ ID NOs: 376-450; FlgII-28 SEQ ID NO: 451-525) ou qualquer das outras sequências associadas a Flg fornecidas na Tabela 5 (SEQ ID NOs: 526- 541) para fornecer distribuição eficiente dos polipeptídeos associados a Flg à superfície de membrana de planta.
[0124] As sequências de assinatura auxiliam as sequências polipeptídicas de iniciação bioativa de Flg22 e FlgII-28 na ligação ao(s) receptor(es) associado(s) a Flg apropriado(s) a fim de ativar o(s) receptor(es) tornando-os funcionalmente ativos.
TABELA 6. SEQUÊNCIAS DE ASSINATURA N-TERMINAL ASSOCIADAS À FLAGELINA SEQ ID NO: Sequências de Assinatura de Flagelina SEQ ID NO: 542 GFLN SEQ ID NO: 543 WGFLI SEQ ID NO: 544 MGVLN SEQ ID NO: 545 GVLN SEQ ID NO: 546 WGFFY SEQ ID NO: 547 LVPFAVWLA SEQ ID NO: 548 AVWLA
SEQUÊNCIAS DE TRIAGEM DE ÂNCORA DE SINAL N-TERMINAL
[0125] Sequências de “triagem de âncora de sinal" de aminoácido conservadas dentro de gêneros Bacillus, Lysinibacillus, Aneurinibacillus e Paenibacillus e outras bactérias dos gêneros Eubacteria podem funcionar na ancoragem e localização dos polipeptídeos associados à flagelina na superfície de membrana de célula de planta e auxiliar em uma ligação de alta afinidade para o(s) receptor(es) associado(s) a Flg apropriado(s), desse modo aumentando o potencial de ativação do(s) receptor(es) ligado(s).
[0126] Sequências de âncora de sinal conservadas (SEQ ID NO: 549-562; Tabela 7) estão localizadas a jusante da codificação pré-clivada ou de comprimento total ou sequências de flagelina de codificação parcial, por exemplo, conforme descrito neste documento (SEQ ID NOs: 1–75; Tabela 1).
[0127] Os domínios de triagem de âncora de sinal como aqui descrito são úteis em fixação à membrana. Eles podem ser usados para auxiliar na localização e ligação de polipeptídeos associados a Flg a um receptor de membrana de superfície e têm alguma similaridade funcional no nível de aminoácido com proteínas que são endossômicas (vesiculares) traficadas ou destinadas a direcionamento à via secretora. Essas sequências de triagem de âncora de sinal, como aqui descritas, que são úteis para ancorar os polipeptídeos de iniciação bioativa Flg à membrana de célula de planta, também são usadas para intensificar a integração de membrana dos polipeptídeos Flg de iniciação bioativos para a célula de planta.
[0128] Tais sequências, conforme descrito na Tabela 7, podem ainda ser funcionalmente anotadas como sequências de âncora de sinal de receptor de importação, que podem ser usadas para melhorar direcionamento ou distribuição e ancoragem de membrana eficiente de polipeptídeos associados a Flg a uma planta e auxiliar na integração de membrana no citosol da célula de planta.
[0129] Combinar as sequências de âncora de sinal (SEQ ID NOs: 549-562; Tabela 7) com qualquer dos polipeptídeos de iniciação bioativos de flagelina ou associados à flagelina, conforme descrito neste documento, é útil para facilitar a fixação e importação desse(s) polipeptídeo(s) associado(s) à flagelina na planta.
[0130] Tais sequências de triagem âncora de sinal podem ser utilizadas em combinação com os polipeptídeos associados a Flg e são úteis para direccionamento, ancoragem de membrana eficiente, integração de membrana e tráfico Golgi-a-lisossomal/vacuolar. As sequências de triagem de âncora de sinal são usadas para distribuir de forma estável os polipeptídeos Flg à superfície da membrana de planta e incorporá-los integralmente na planta.
[0131] Tais sequências, conforme descrito neste documento, contêm aminoácidos di-leucina que são referenciados para conferir funcionalidades de endocitose em sistemas de plantas (Pond et al. 1995, “A role for acidic residues in di-leucine motif-based targeting to the endocytic pathway”, Journal of Biological Chemistry 270: 19989–19997, 1995).
[0132] Tais sequências de triagem de âncora de sinal, conforme descrito, também podem ser usadas para fornecer sinais sistêmicos de forma eficiente para sítios de infecção e estimular imunidade inata de uma planta em células de plantas.
TABELA 7. SEQUÊNCIAS DE TRIAGEM DE ÂNCORA DE SINAL ASSOCIADAS À FLAGELINA SEQ ID NO: Sequência de Âncora de Sinal SEQ ID NO: 549 LLGTADKKIKIQ SEQ ID NO: 550 LLKSTQEIKIQ SEQ ID NO: 551 LLNEDSEVKIQ SEQ ID NO: 552 LGVAANNTQ SEQ ID NO: 553 LLRMRDLANQ SEQ ID NO: 554 LQRMRDVAVQ SEQ ID NO: 555 LLRMRDISNQ SEQ ID NO: 556 LLRMRDIANQ
SEQ ID NO: Sequência de Âncora de Sinal SEQ ID NO: 557 LQKQIDYIAGNTQ SEQ ID NO: 558 LLIRLPLD SEQ ID NO: 559 QRMRELAVQ SEQ ID NO: 560 TRMRDIAVQ SEQ ID NO: 561 TRMRDIAVQ SEQ ID NO: 562 QRMRELVVQ SEQUÊNCIAS DE SECREÇÃO C-TERMINAL
[0133] Sequências conservadas localizadas no C-terminal de flagelina(s) são ainda descritas como sequências de secreção (SEQ ID NO: 563-570; Tabela 8).
[0134] Sequências conservadas foram identificadas no C-terminal das bactérias (gêneros) Bacillus, Lysinibacillus e Paenibacillus e outras proteínas de flagelina derivadas dos gêneros Eubacterianos e compreendem 6 aminoácidos, por exemplo, LGATLN, LGSMIN ou LGAMIN. Essas sequências foram anotadas funcionalmente usando BLAST contra as bases de dados bacterianos como motifs que têm a mais alta homologia para polipeptídeos de secreção. Os polipeptídeos conservados de 6 aminoácidos identificados foram considerados mais semelhantes àqueles encontrados em sistemas de secreção tipo III em E. coli. Foi citado que sistemas de exportação tipo III estão envolvidos na translocação de polipeptídeos através da membrana de célula de planta. A montagem de filamento de flagelina é dependente da disponibilidade de flagelinas a serem secretadas e pode exigir chaperonas que auxiliem no processo secretório.
[0135] Esses polipeptídeos de secreção como aqui descritos podem ser usados em combinação com qualquer dos polipeptídeos associados a flagelina, como aqui descrito, para distribuir esses polipeptídeos/peptídeos para o citosol da planta hospedeira proporcionando assim resultados benéficos para uma planta.
TABELA 8. SEQUÊNCIAS DE SECREÇÃO ASSOCIADAS À FLAGELINA C-TERMINAL SEQ ID NO: Polipeptídeos de secreção de flagelina SEQ ID NO: 563 LGATLN SEQ ID NO: 564 LGATQN SEQ ID NO: 565 LAQANQ SEQ ID NO: 566 LGAMIN SEQ ID NO: 567 LGSMIN SEQ ID NO: 568 MGAYQN SEQ ID NO: 569 LGAYQN SEQ ID NO: 570 YGSQLN
[0136] As sequências de assinatura (SEQ ID NO: 542-548; Tabela 6), triagem de âncora de sinal (SEQ ID NO: 549-562; Tabela 7) e secreção (SEQ ID NO: 563-570; Tabela 8), conforme fornecido aqui, podem ser usadas com qualquer dos polipeptídeos de flagelina ou dos polipeptídeos associados à flagelina para promover crescimento e fornecer benefícios de saúde e proteção para uma planta ou uma parte de planta.
MODIFICAÇÃO DA FUNÇÃO DE SEQUÊNCIAS POLIPEPTÍDICAS FLG
[0137] Qualquer das sequências associadas a L ou D Flg fornecidas nas Tabelas 3, 4 ou 5 pode ser modificada de forma semelhante como fundida a qualquer das sequências de assistência, conforme descrito nas Tabelas 6-8. Por exemplo, fusão de qualquer dessas sequências de assistência apresentará uma modificação na sequência polipeptídica de iniciação bioativa Bt.4Q7Flg22 identificada como SEQ ID NO: 226.
MUTAÇÕES EM POLIPEPTÍDEOS ASSOCIADOS A FLG PARA AUMENTAR RESPONSIVIDADE A ESPÉCIES DE OXIGÊNIO REATIVAS OU ESTABILIDADE DE POLIPEPTÍDEO
[0138] O polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina úteis nas composições e nos métodos aqui pode compreender um polipeptídeo de flagelina mutante ou associado a flagelina.
[0139] O polipeptídeo de flagelina mutante ou associado a flagelina pode ser derivado de uma bactéria do gênero Bacillus, uma Lysinibacillus, uma Paenibacillus ou uma Aneurinibacillus. Outros polipeptídeos de outras classes de Eubacterianas, incluindo Enterobacteraciae, também podem ser usados da mesma maneira. Outros gêneros de interesse incluem Pseudomonas, Escherichia, Xanthomonas, Burkholderia, Erwinia e outros.
[0140] A sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 226, 289, 290, 291, 293, 294, 295, 300, 437, 526, 532, 534, 536, 538, 540, 571–585 e 587–603. Por exemplo, a sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 226, 293, 295, 300, 540, 571-579 e 589-590, ou qualquer combinação das mesmas. Por exemplo, a sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina pode compreender SEQ ID NO: 226, 571, 590 ou qualquer combinação das mesmas. A sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina pode compreender a SEQ ID NO: 226. A sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina usada nas composições e nos métodos aqui pode compreender SEQ ID NO: 590. A sequência de aminoácido da flagelina ou do polipeptídeo associado à flagelina usado nas composições e nos métodos aqui pode compreender SEQ ID NO: 571. A sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 591-603.
[0141] O polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina pode ser modificado quimicamente no seu N ou C terminal. Modificação comum dos N e C terminais incluem: acetilação, adição de lipídio, adição de ureia, adição de piroglutamil, adição de carbamato, adição de sulfonamida, adição de alquilamida, biotinilação, fosforilação, glicosilação, PEGuilação, metilação, biotinilação, adição de ácido, adição de amida, éster adição, adição de aldeído, adição de hidrazida, adição de ácido hidroxâmico, adição de clorometil cetona ou adição de marcadores de purificação. Esses marcadores podem aumentar atividade dos polipeptídeos, aumentar estabilidade, adicionar capacidades de inibidor de protease aos polipeptídeos, bloquear proteases diretamente, permitir rastreamento e ajudar na ligação a tecidos de planta.
[0142] O polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina pode ser modificado via reticulação ou ciclização. Reticulação pode ligar polipeptídeos entre si ou a uma superfície ou fração secundária para ajudar na distribuição ou estabilidade dos polipeptídeos. Ciclização pode ser realizada, por exemplo, tanto para aumentar atividade do polipeptídeo assim como para evitar interação da protease com o polipeptídeo.
[0143] Modificações ou mutações de sequência podem ser feitas em qualquer(quaisquer) sequência(s) de aminoácidos, conforme descrito nas Tabelas 4 e 5, e substituídas por qualquer das 20 sequências de aminoácidos padrão conhecidas na natureza ou substituídas por uma sequência de aminoácido não padrão ou não canônica, tal como selenocisteína, pirrolisina, N-formilmetiona, etc. Por exemplo, modificações ou mutações podem ser feitas nas sequências internas como mostrado em SEQ ID NO: 571, no terminal C como mostrado em SEQ ID NO: 572 ou SEQ ID NO: 589, ou no terminal N como mostrado em SEQ ID NO: 573 para produzir polipeptídeos Flg com ROS intensificado e funcionalidade aumentada em uma planta ou parte de planta.
Polipeptídeos modificados também podem ser truncados no terminal N ou C, como mostrado na SEQ ID NO: 590 (truncamento N terminal) para aumentar ainda mais a funcionalidade em uma planta ou parte de planta.
[0144] A Tabela 9 resume polipeptídeos de flagelina identificados que fornecem atividade ROS modificada.
TABELA 9. POLIPEPTÍDEOS DE FLAGELINA FLG22 IDENTIFICADOS A PARTIR DE
BACILLUS OU OUTRAS BACTÉRIAS COM MUTAÇÕES QUE FORNECEM ATIVIDADE
ROS MODIFICADA SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 Flg22-Bt4Q7 DRLSSGKRINSAKDDAAGLAIA SEQ ID NO: 571 Bacillus thuringiensis cepa 4Q7 FLG22-Bt4Q7 modificado (S13K); Syn01 Flg22-Bt4Q7 DRLSSGKRINSASDDAAGLQIA SEQ ID NO: 572 Bacillus thuringiensis cepa 4Q7 FLG22-Bt4Q7 modificado (A20Q); Syn02 Flg22-Bt4Q7 QRLSSGKRINSASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 573 Bacillus thuringiensis cepa 4Q7 FLG22-Bt4Q7 modificado (D1Q); Syn03 Flg22-Bt4Q7 NRLSSGKRINSASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 574 Bacillus thuringiensis cepa 4Q7 FLG22-Bt4Q7 modificado (D1N); Syn06 Caballeronia megalochromosomata TRLSSGKRINSASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 575 Flg22-Bt4Q7 DRLSSGYRINSASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 576 Bacillus thuringiensis cepa 4Q7 FLG22-Bt4Q7 modificado (K7Y); Syn07 Flg22-Bt4Q7 DRLSSGFRINSASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 577 Bacillus thuringiensis cepa 4Q7 FLG22-Bt4Q7 modificado (K7F); Syn08 Flg22-Bt4Q7 DRLSSGKRINSASDDPAGLAIA SEQ ID NO: 578 Bacillus thuringiensis FLG22-Bt4Q7 modificado (A16P); Syn05 Flg22-Bt4Q7 DRLSSGQRINSASDDAAGLAIA SEQ ID NO: 579
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 Bacillus thuringiensis cepa 4Q7 FLG22-Bt4Q7 modificado (K7Q); Syn09 Flg22‐Bt4Q7 DRLSSGKRINSASDPAAGLAIA SEQ ID NO: 589 Bacillus thuringiensis cepa 4Q7 FLG22-Bt4Q7 modificado (D15P); Syn04 Flg15‐Bt4Q7 RINSAKDDAAGLAIA SEQ ID NO: 590 Bacillus thuringiensis Syn01 truncado N-term Bm.Flg22-B1 NRLSSGKQINSASDDAAGLAIA Bacillus manliponensis SEQ ID NO: 290 Ba.Flg22-B2 NRLSSGKRINSAADDAAGLAIA Bacillus anthracis SEQ ID NO: 295 Bc.Flg22-B3 DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA Bacillus cereus SEQ ID NO:294 A. spp.Flg22-B4 ERLSSGYRINRASDDAAGLAIS Aneurinibacillus spp.
XH2 SEQ ID NO: 300 Ba.Flg22-B5 EKLSSGQRINSASDDAAGLAIS Bacillus aryabhattai SEQ ID NO: 289 P spp.Flg22-B6 GKLSSGLRINGASDDAAGLAIS Paenibacillus spp. cepa HW567 SEQ ID NO: 293 L spp.Flg22-L1 Lysinibacillus spp.
LRLSSGYRINSAADDAAGLAIS SEQ ID NO: 291 L spp.Flg22-L2 Lysinibacillus spp.
EKLSSGLRINRAGDDAAGLAIS SEQ ID NO: 580 L spp.Flg22-L3 Lysinibacillus spp.
EKLSSGYKINRASDDAAGLAIS SEQ ID NO: - 581 L spp.Flg22-L4 Lysinibacillus spp.
SG9 LRISSGYRINSAADDPAGLAIS SEQ ID NO: 582 Lf.Flg22-L5 LRISTGYRINSAADDPAGLAIS Lysinibacillus fusiformis SEQ ID NO: 583 Lm.Flg22-L6 EKLSSGFRINRAGDDAAGLAIS Lysinibacillus macroides SEQ ID NO: 584 Lx.Flg22-L6 EKLSSGYKINRAGDDAAGLAIS Lysinibacillus xylanilyticus SEQ ID NO: 585 Pa.Flg22 QRLSTGSRINSAKDDAAGLQIA Pseudomonas aeruginosa SEQ ID NO: 530 Ec.Flg22 Escherichia coli ERLSSGLRINSAKDDAAGQAIA SEQ ID NO: 526
SEQ ID NO: Peptídeo Flg22 Xcc.Flg22 QRLSSGLRINSAKDDAAGLAIS Xanthomonas campestris pv campestris cepa 305 ou (Xanthomonas citri pv. citri) SEQ ID NO: 532 Ea.Flg22 QRLSSGLRINSAKDDAAGQAIS Erwinia amylovora SEQ ID NO: 534 Bp.Flg22 TRLSSGKRINSAADDAAGLAIS Burkholderia phytofirmans cepa PsJN SEQ ID NO: 536 Bu.Flg22 NRLSSGKRINTAADDAAGLAIS Burkholderia ubonensis SEQ ID NO: 538 Ps.Flg22 TRLSSGLKINSAKDDAAGLQIA Pseudomonas syringae pv. actinidiae ICMP 19096 SEQ ID NO: 540 DOMÍNIO ATIVO DE NÚCLEO DE FLG22
[0145] As porções sublinhadas das sequências na Tabela 9 representam o domínio ativo de núcleo de Flg22. Este domínio de núcleo compreende, por exemplo, SEQ ID NO: 591 com até uma, duas ou três substituições de aminoácidos (representadas por SEQ ID NOs 592-603) que podem promover crescimento, redução de doença e/ou prevenção em colheitas, horticultura e plantas ornamentais. Para facilidade de referência, este domínio de núcleo é representado como a sequência de consenso tendo a SEQ ID NO: 603. Os vários polipeptídeos Flg22 nativos e mutantes compreendendo SEQ ID NOs 591-603 são descritos juntamente com a sequência de consenso na Tabela 10 abaixo. Portanto, os polipeptídeos usados nas composições e métodos aqui podem compreender ainda uma sequência de núcleo. A sequência de núcleo pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs 591-603.
[0146] O polipeptídeo usado em qualquer das composições ou métodos aqui também pode compreender qualquer polipeptídeo compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs 1-590, 604-778 e 794-796, em que o polipeptídeo compreende ainda a sequência de núcleo compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 591–603. A inclusão da sequência de núcleo no polipeptídeo ou na proteína de comprimento total de função diferente pode aumentar a atividade de iniciação bioativa do polipeptídeo e qualquer composição compreendendo o polipeptídeo.
TABELA 10 SEQUÊNCIA DE NÚCLEO FLG22 COM VARIANTES SEQ ID NO: Sequência de núcleo FLG22 Polipeptídeos compreendendo sequência de núcleo SEQ ID NO: 226–229 SEQ ID NO: 591 RINSASDD SEQ ID NO: 289 SEQ ID NO: 299 SEQ ID NO: 536 SEQ ID NO: 572–579 SEQ ID NO: 231–234 SEQ ID NO: 236–240 SEQ ID NO: 243–246 SEQ ID NO: 592 RINNASDD SEQ ID NO: 248 SEQ ID NO: 250–256 SEQ ID NO: 258–259 SEQ ID NO: 261 SEQ ID NO: 263 SEQ ID NO: 265–270 SEQ ID NO: 272–280 SEQ ID NO: 282–283 SEQ ID NO: 285–286 SEQ ID NO: 288 SEQ ID NO: 294 SEQ ID NO: 593 QINSASDD SEQ ID NO: 290 RINSAADD SEQ ID NO: 291–292 SEQ ID NO: 594 SEQ ID NO: 295–298 SEQ ID NO: 582–583 SEQ ID NO: 536 SEQ ID NO: 582–583 SEQ ID NO: 595 RINGASDD SEQ ID NO: 293 SEQ ID NO: 596 RINRASDD SEQ ID NO: 300
SEQ ID NO: Sequência de núcleo FLG22 Polipeptídeos compreendendo sequência de núcleo RINSAKDD SEQ ID NO: 526 SEQ ID NO: 597 SEQ ID NO: 528 SEQ ID NO: 530 SEQ ID NO: 532 SEQ ID NO: 534 SEQ ID NO: 571 SEQ ID NO: 586 SEQ ID NO: 598 RINTAADD SEQ ID NO: 538 SEQ ID NO: 599 KINSAKDD SEQ ID NO: 540 SEQ ID NO: 600 RINRAGDD SEQ ID NO: 580 SEQ ID NO: 584 SEQ ID NO:601 KINRASDD SEQ ID NO: 581 SEQ ID NO: 602 KINRAGDD SEQ ID NO: 585 (R/Q/K)IN(S/N/G/R/T)A(S/A/K/G)DD Consenso de SEQ ID NO: 591–602 SEQ ID NO: 603 (sequências identificadas nesta Tabela) POLIPEPTÍDEO DE PROMOÇÃO DE PELO DE RAIZ (RHPP)
[0147] A composição pode compreender pelo menos um RHPP.
[0148] A sequência de aminoácido do RHPP pode compreender qualquer uma de SEQ ID NO: 604, 607, 608 e 745-755. Por exemplo, a sequência de aminoácido do RHPP pode compreender SEQ ID NO: 604.
[0149] A combinação do polipeptídeo compreendendo um RHPP e um polipeptídeo compreendendo um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina também é fornecida. O polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina pode compreender qualquer uma de SEQ ID NO: 226, 590 e 571. Em alguns casos, a composição compreende um RHPP compreendendo SEQ ID NO: 604 e uma flagelina compreendendo SEQ ID NO: 226. Em outros casos, a composição compreende um RHPP compreendendo SEQ ID NO: 604 e uma flagelina compreendendo SEQ ID NO: 571.
[0150] Polipeptídeos de iniciação bioativos de RHPP adicionais podem ser derivados da proteína Inibidora de Tripsina Kunitz de comprimento total de Glycine max compreendendo SEQ ID NO: 606 ou podem ser obtidos de espécies adicionais (Tabela 12). O polipeptídeo RHPP pode ser modificado via amidação C-terminal, acetilação N-terminal ou outra modificação. O polipeptídeo de iniciação bioativo de RHPP pode ser obtido através de adição de digestão de protease bruta de inibidor de tripsina de kunitz e/ou farelo de soja.
[0151] RHPP pode ser fornecido, por exemplo, como uma aplicação foliar para produzir fenótipos benéficos em milho, soja e outros vegetais ou em plantas cítricas. Por exemplo, aplicação foliar de RHPP pode aumentar colheita de linha e rendimento de vegetais e/ou melhorar sintomas de doença e/ou melhorar qualidade de suco e rendimento de colheita em plantas cítricas.
TABELA 11. SEQUÊNCIA DE AMINOÁCIDO PARA SEQUÊNCIAS DIRETAS E RETRO-
INVERSAS DE RHPP SEQ ID NO: Aminoácido de Sequência de Peptídeo Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHPP) SEQ ID NO: 604 Glycine max MW 1.198,20 Da Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHHP Retro Inverso) SEQ ID NO:605 Glycine max MW 1.198,20 Da
SEQ ID NO: Aminoácido de Sequência de Peptídeo Inibidor de Tripsina KunItz SEQ ID NO: 606 Glycine Max TABELA 12. HOMÓLOGOS E VARIANTES DE RHPP SEQ ID NO: Aminoácido de Sequência de Peptídeo RHPP homólogo GGIRATPTENER SEQ ID NO: 607 Glycine max RHPP homólogo GGIRVAATGKER SEQ ID NO: 608 Glycine max/Glycine soja Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHPP)-Pp SEQ ID NO: 745 GGIRAAPT Physcomitrella patens Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHPP)-Mc SEQ ID NO: 746 GIRDAPAGNE Macleaya cordata Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHPP)-Bd SEQ ID NO: 747 GGARAAPAGEER Brachypodium distachyon Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHPP)-Va GGIRTAITGNE SEQ ID NO: 748 Vigna angularis Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHPP)-Ls SEQ ID NO: 749 GGISASPTGN Lactuca sativa Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHPP)-Vr SEQ ID NO: 750 GGIRRARTGNE Vigna radiata Syn01 Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHPP) GGIRRAPTGNER SEQ ID NO: 751 Syn02 Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHPP) GGIRDAPTGNER SEQ ID NO: 752 Syn03 Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHPP) GGIRAARTGNER SEQ ID NO: 753 Syn04 Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHPP) GGIRAAPTGKER SEQ ID NO: 754 Syn05 Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHPP) GGIRASPTGNER SEQ ID NO: 755
[0152] O polipeptídeo pode compreender pelo menos um RHPP retro inverso (RI).
[0153] O RHPP retro inverso pode ter qualquer sequência de aminoácido que compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 605, 609, 610 ou 756-766 (Tabela 13).
[0154] O RHHP retro inverso (RI) pode ser modificado via amidação C-terminal ou acetilação N-terminal.
TABELA 13. SEQUÊNCIAS DE AMINOÁCIDOS RETRO INVERSAS PARA HOMÓLOGOS E VARIANTES DE RHPP. SEQ ID NO: Aminoácido de Sequência de Peptídeo RHPP homólogo retro-inverfso RENETPTARIGG SEQ ID NO: 609 Glycine max RHPP homólogo retro-inverfso REKGTAAVRIGG SEQ ID NO: 610 Glycine max/Glycine soja Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz Retro-Inverso (RHPP)-Pp TPAARIGG SEQ ID NO: 756 Physcomitrella patens Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz Retro-Inverso (RHPP)-Mc ENGAPADRIG SEQ ID NO: 757 Macleaya cordata Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz ENGTIATRIGG (RHPP) Retro-Inverso-Va SEQ ID NO: 759 Vigna angularis Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHPP) Retro- Inverso-Ls NGTPSASIGG SEQ ID NO: 760 Lactuca sativa Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHPP) Retro- Inverso-Vr ENGTRARRIGG SEQ ID NO: 761 Vigna radiate Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHPP) Syn01 Retro-Inverso RENGTPARRIGG SEQ ID NO: 762 Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHPP) Syn02 Retro-Inverso RENGTPADRIGG SEQ ID NO: 763
SEQ ID NO: Aminoácido de Sequência de Peptídeo Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHPP) Syn03 Retro-Inverso RENGTRAARIGG SEQ ID NO: 764 Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHPP) Syn04 Retro-Inverso REKGTPAARIGG SEQ ID NO: 765 Peptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHPP) Syn05 Retro-Inverso RENGTPSARIGG SEQ ID NO: 766
[0155] O RHPP e RI-RHPPs descrito nas Tabelas 11 a 13 também podem ser fornecidos como polipeptídeos isolados. Por conseguinte, um polipeptídeo isolado é fornecido, em que o polipeptídeo tem uma sequência de aminoácido compreendendo ou consistindo em qualquer uma de SEQ ID NOs: 745-766.
[0156] Por exemplo, a sequência de aminoácido do polipeptídeo isolado pode consistir em qualquer uma de SEQ ID NOs: 745-766.
[0157] A sequência de aminoácido do polipeptídeo isolado pode compreender ou consistir em qualquer uma de SEQ ID NOs: 746-755 e 757-
766.
[0158] A sequência de aminoácido do polipeptídeo isolado pode compreender ou consistir em qualquer uma de SEQ ID NOs: 746-755 e 757-
766.
[0159] A sequência de aminoácido do polipeptídeo isolado pode compreender ou consistir em qualquer uma de ID SEQ NOs: 746-750 e 757-
761.
[0160] A sequência de aminoácido do polipeptídeo isolado pode compreender ou consistir em qualquer uma de SEQ ID NOs: 746, 748, 749, 750, 757, 759, 760 e 761.
[0161] A sequência de aminoácido do polipeptídeo isolado pode compreender ou consistir em qualquer uma de SEQ ID NOs: 747 e 758.
TIONINAS E POLIPEPTÍDEOS DE DIRECIONAMENTO DE TIONINA
[0162] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina.
[0163] O polipeptídeo de tionina ou tipo tionina pode ser fundido a uma sequência de direcionamento de floema para formar um polipeptídeo fundido. A sequência de aminoácido da sequência de direcionamento de floema pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 611-619, ou qualquer combinação das mesmas, para distribuir o polipeptídeo fundido ao tecido ou células vasculares e/ou ao floema ou ao tecido ou células associadas a floema na planta ou parte de planta.
[0164] A sequência de aminoácido da sequência de direcionamento de floema pode compreender SEQ ID NO: 611.
[0165] Mais especificamente, sequências de direcionamento úteis para direcionar polipeptídeos AMP, tal como polipeptídeos de tionina ou Flg aos tecidos vasculares (xilema e floema) pode ser extremamente úteis para tratar doenças que colonizam tecidos restritos envolvidos no transporte de fluidos e nutrientes (por exemplo, nutrientes solúveis em água, açúcares, aminoácidos, hormônios, etc.). Tecidos vasculares, tal como o xilema, transportam e armazenam água e nutrientes solúveis em água e as células de floema transportam açúcares, proteínas, aminoácidos, hormônios e outras moléculas orgânicas em plantas.
[0166] Polipeptídeos de direcionamento vascular/de floema preferidos, úteis para direcionar os polipeptídeos de tioninas e associados à flagelina, como aqui descritos, são fornecidos na Tabela 14.
TABELA 14. POLIPEPTÍDEOS DE SEGMENTAÇÃO DE FLOEMA SEQ ID NO: Polipeptídeos de direcionamento vascular/de floema Peptídeo de direcionamento de floema Sintético SEQ ID NO: 611 Peptídeo de direcionamento induzido por tensão de sal Citrus clementina SEQ ID NO: 612 Proteína hipotética CICLE Citrus trifoliata SEQ ID NO: 613 Proteína hipotética CICLE Citrus sinensis SEQ ID NO: 614 Proteína responsiva a baixa temperatura e sal Citrus sinensis SEQ ID NO: 615 Proteína hipotética CICLE Citrus clementina SEQ ID NO: 616 Proteína responsiva a baixa temperatura e sal Arabidopsis thaliana SEQ ID NO: 617 Proteína induzível por frio Camelina sativa SEQ ID NO:618 Proteína responsiva a baixa temperatura e sal Arabidopsis lyrata SEQ ID NO: 619
[0167] Uma versão sintética de um polipeptídeo de direcionamento de floema (SEQ ID NO: 611) é particularmente útil em direcionamento de polipeptídeos antimicrobianos para o tubo de peneira de floema e células de companhia.
[0168] Polipeptídeos de tionina antimicrobianos também são fornecidos (Tabela 15) e são utilizados com as sequências de direcionamento de floema fornecidas na Tabela 14 para direcionar as sequências de tionina para tecidos de floema de citros bem como outras plantas.
[0169] A sequência de aminoácido do polipeptídeo de tionina ou tipo tionina pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 620-719, tal como SEQ ID NO: 620.
TABELA 15. SEQUÊNCIAS DE TIONINA E TIPO TIONINA SEQ ID NO: Sequências de tionina ou tipo tionina - aminoácido Proteína tipo tionina Sintética SEQ ID NO: 620 Proteína tipo tionina Citrus sinensis SEQ ID NO: 621 Proteína tipo tionina Avena sativa SEQ ID NO: 622 Proteína tipo tionina Sintética SEQ ID NO: 623 Proteína tipo tionina Citrus sinensis SEQ ID NO: 624 Proteína tipo se60 inibidora da proteinase Citrus paradise SEQ ID NO: 625 Precursor da defensina Citrus clementina SEQ ID NO: 626 precursor da defensina Citrus clementina SEQ ID NO: 627 Proteína tipo tionina Citrus clementina SEQ ID NO: 628 Peptídeo tipo tionina Nicotiana benthamiana SEQ ID NO: 629 Proteína tipo tionina Nicotiana sylvestris SEQ ID NO: 630
SEQ ID NO: Sequências de tionina ou tipo tionina - aminoácido Proteína tipo tionina Nicotiana tabaccum SEQ ID NO: 631
Proteína tipo tionina Nicotiana tomentosiformis SEQ ID NO: 632
Proteína tipo tionina Nicotiana tabaccum SEQ ID NO: 633
Defensina classe I Nicotiana alata SEQ ID NO: 634
Tionina de folha Avena sativa SEQ ID NO: 635
Tionina de folha Avena sativa SEQ ID NO: 636
Tionina Classe I Tulipa gesneriana SEQ ID NO: 637
Proteína tipo tionina Classe I Vitis vinifera SEQ ID NO: 638
Proteína tipo tionina Classe I Vitis vinifera SEQ ID NO: 639 defensina Ec-AMP-D1 Citrus sinensis SEQ ID NO: 640
Proteína Antimicrobiana 1 (Ah- Amp1) Aesculus hippocastanum SEQ ID NO: 641 proteína hipotética DCAR Dacus carota SEQ ID NO: 642
Proteína antimicrobiana rica em cisteína Clitoria ternatea SEQ ID NO: 643 proteína hipotética DCAR Dacus carota SEQ ID NO: 644
SEQ ID NO: Sequências de tionina ou tipo tionina - aminoácido Tipo tionina Bupleurum kaoi SEQ ID NO: 645 defensina Dm-AMP1 = proteína antimicrobiana rica em cisteína Dahlia merckii SEQ ID NO: 646 Tipo tionina Helianthus annuus SEQ ID NO: 647
Tionina Cynara cardunculus var. scolymus SEQ ID NO: 648
Tionina Cynara cardunculus var. scolymus SEQ ID NO: 649 proteína tipo defensina 1 - tipo DCAR Daucus carota subsp.
Sativus SEQ ID NO: 650 defensina rica em cisteína de baixo peso molecular Arabidopsis lyrata SEQ ID NO: 651 Proteína tipo tionina Parthenium hysterophorus SEQ ID NO: 652 proteína AMP1 de defensina putativa Arabidopsis thaliana SEQ ID NO: 653
Tipo Tionina Eutrema salsugineum SEQ ID NO: 654 tipo defensina Vitis vinifera SEQ ID NO: 655
Knottin Corchorus olitorius SEQ ID NO: 656
Knottin Corchorus olitorius SEQ ID NO: 657
Proteína tipo tionina Camelina sativa SEQ ID NO: 658
SEQ ID NO: Sequências de tionina ou tipo tionina - aminoácido Proteína tipo tionina Cucumis sativus SEQ ID NO: 659
Proteína tipo tionina Cynara cardunculus var. scolymus SEQ ID NO: 660
Tipo Tionina Capsella rubella SEQ ID NO: 661
Tionina Arabidopsis thaliana SEQ ID NO: 662
Tionina Brassica napus SEQ ID NO: 663
Proteína tipo tionina Brassica rapa SEQ ID NO: 664
Proteína tipo tionina Camelina sativa SEQ ID NO: 665 proteína tipo defensina Brassica napus SEQ ID NO:666
Proteína tipo tionina Vitis vinifera SEQ ID NO: 667
Proteína tipo tionina Brassica napus SEQ ID NO: 668
Proteína tipo tionina Raphanus sativus SEQ ID NO: 669
Tipo Tionina Arabis alpine SEQ ID NO: 670
Proteína tipo tionina Cucumis melo SEQ ID NO: 671
Proteína tipo tionina Erythranthe guttate SEQ ID NO: 672
SEQ ID NO: Sequências de tionina ou tipo tionina - aminoácido Proteína tipo tionina Sesamum indicum SEQ ID NO: 673
Proteína tipo tionina Eclipta prostrata SEQ ID NO: 674
Tionina gama Cynara cardunculus var. scolymus SEQ ID NO: 675
Art v 1 precursor Ambrosia artemisiifolia SEQ ID NO: 676
Art v 1 precursor Ambrosia artemi679siifolia SEQ ID NO: 677
Proteína tipo tionina Jatropha curcas SEQ ID NO: 678
Proteína tipo tionina Nelumbo nucifera SEQ ID NO: 679
Proteína tipo tionina Pyrus x bretschneideri SEQ ID NO: 680
Precursor de proteína LCR78 rica em cisteína de baixo peso molecular Ricinus communi SEQ ID NO: 681 homólogo de precursor Art v 1 Ambrosia artemisiifolia SEQ ID NO: 682 homólogo de precursor Art v 1 Ambrosia artemisiifolia SEQ ID NO: 683
Proteína tipo tionina Prunus mume SEQ ID NO: 684
Knottin Corchorus olitorius SEQ ID NO: 685
Knottin Corchorus olitorius SEQ ID NO: 686
SEQ ID NO: Sequências de tionina ou tipo tionina - aminoácido Proteína semelhante à tionina Solanum pennellii SEQ ID NO: 687
Proteína tipo tionina Fragaria vesca subsp.
Vesca SEQ ID NO: 688
Knottin Corchorus capsularis SEQ ID NO: 689
Proteína semelhante à tionina Solanum tuberosum SEQ ID NO: 690
Proteína tipo defensina 1.2 PDF1.2-1 Dimocarpus longan SEQ ID NO: 691
Proteína tipo tionina Camelina sativa SEQ ID NO: 692
Tipo Tionina Arabis alpine SEQ ID NO: 693
Tipo Tionina Theobroma cacao SEQ ID NO: 694
Tipo Tionina Amborella trichopoda SEQ ID NO: 695 rica em cisteína de baixo peso molecular 67 Arabidopsis thaliana SEQ ID NO: 696
Tipo Tionina Arabis alpine SEQ ID NO: 697
Tipo Tionina Brassica juncea SEQ ID NO: 698
Tipo Tionina Brassica oleracea var. oleracea SEQ ID NO: 699
Tipo Tionina Camelina sativa SEQ ID NO: 700
SEQ ID NO: Sequências de tionina ou tipo tionina - aminoácido Tipo Tionina Camelina sativa SEQ ID NO: 701
Tipo Tionina Brassica napus SEQ ID NO:702
Tipo Tionina Eutrema salsugineum SEQ ID NO: 703
Proteína antifúngica rica em cisteína Raphanus sativus SEQ ID NO: 704
Proteína tipo tionina 1 Raphanus sativus SEQ ID NO: 705
Proteína tipo tionina 1 Raphanus sativus SEQ ID NO: 706
Tipo Tionina Brassica Rapa SEQ ID NO: 707
Tipo Tionina Solanum pennellii SEQ ID NO: 708
Tipo Tionina Citrus clementina SEQ ID NO: 709
Tipo Tionina Brassica rapa SEQ ID NO: 710
Tipo Tionina Eutrema salsugineum SEQ ID NO: 711
Tipo Tionina Eutrema salsugineum SEQ ID NO: 712
Tipo Tionina Heliophila coronopifolia SEQ ID NO: 713
Tipo Tionina Brassica oleracea SEQ ID NO: 714
SEQ ID NO: Sequências de tionina ou tipo tionina - aminoácido Tipo Tionina Cicer arietinum SEQ ID NO: 715 Tipo Tionina Citrus clementina SEQ ID NO: 716 Tipo Tionina Citrus sinensis SEQ ID NO: 717 Tipo Tionina Citrus sinensis SEQ ID NO: 718 Ec-AMP-D1 Citrus sinensis SEQ ID NO: 719
[0170] A composição pode compreender uma proteína de fusão.
[0171] A Tabela 16 (SEQ ID NO: 720) descreve as sequências usadas para fazer uma fusão translacional usando a sequência de nucleotídeo que codifica o polipeptídeo de alvo de floema sintético (SEQ ID NO: 611) com um polipeptídeo de tionina sintético (SEQ ID NO: 620). A sequência de fonte maiúscula (não em negrito) identifica a sequência de alvo de floema, a fonte em negrito maiúscula identifica o polipeptídeo de tionina. A Tabela 16 representa SEQ ID NO: 720 que representa a fusão dessas duas sequências de peptídeos resultando em um polipeptídeo de iniciação bioativo direcionado a floema.
TABELA 16. FUSÃO TRANSLACIONAL DE UMA SEQUÊNCIA ALVO DE FLOEMA COM
UM POLIPEPTÍDEO DERIVADO DE TIONINA Sequência alvo de floema de fusão translacional com polipeptídeo de tionina (sintético): SEQ ID NO: 720
SERINA PROTEASES
[0172] A composição pode compreender pelo menos uma serina protease. As serina proteases fornecidas neste documento compreendem proteínas ou domínios catalíticos de proteínas que pertencem à família de serina protease. As proteínas de comprimento total (por exemplo, SEQ ID NOs: 722 ou 795) contêm um domínio transmembrana tipo II, um domínio de receptor de classe A, um domínio rico em cisteína de receptor de eliminador e um domínio de protease. Serina proteases podem inibir outras proteases em plantas e funcionam na proteção da planta contra insetos herbívoros inibindo proteases digestivas. Composições aqui preparadas com serina proteases podem ser particularmente eficazes na proteção contra psilídeos causadores de doença HLB. Serina proteases também podem ser eficazes para interromper biofilmes bacterianos por meio da clivagem de componentes de proteína, desse modo reduzindo sobrevivência bacteriana e reduzindo espalhamento de bactérias dentro ou em uma planta, ou parte de planta.
[0173] Para facilidade de referência, sequências ilustrativas de aminoácidos de serina protease são fornecidas na Tabela 17 abaixo, juntamente com suas SEQ ID NOs. As composições aqui podem compreender uma serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 721, 722 e 794-796. As composições deste documento podem compreender uma serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 722 ou 795. As composições deste documento podem compreender uma serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 794 ou 796.
[0174] A serina protease pode compreender uma versão truncada de SEQ ID NO: 722 compreendendo o domínio catalítico da proteína de comprimento total. Por exemplo, a sequência de aminoácido da serina protease pode compreender a SEQ ID NO: 794 (Tabela 17). Consequentemente, as composições aqui podem compreender uma serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 794.
[0175] A sequência de aminoácido de serina protease 2 (SEQ ID NO: 795) fornecida na Tabela 17 foi clonada de uma biblioteca proprietária de Bacillus subtilis e compreende quatro substituições de aminoácidos em relação à sequência nativa (SEQ ID NO: 722), o que confere um polipeptídeo com atividade de serina protease. Em algumas composições, a serina protease pode compreender uma versão truncada de SEQ ID NO: 795 compreendendo o domínio catalítico da proteína de comprimento total. Por exemplo, a sequência de aminoácido da serina protease pode compreender a SEQ ID NO: 796 (Tabela 17). Consequentemente, as composições aqui podem compreender uma serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 796.
[0176] A sequência de aminoácido nativa da serina protease de SEQ ID NO: 722 inclui o peptídeo sinal MKKGIIRFLLVSFVLFFALSTGITGVQAAPA (SEQ ID NO: 797) no amino terminal da sequência, imediatamente precedendo o primeiro aminoácido de SEQ ID NO: 722. Esse peptídeo sinal não está incluído na SEQ ID NO: 722. No entanto, o peptídeo sinal de SEQ ID NO: 797, ou outro peptídeo sinal, pode opcionalmente ser incluído no amino terminal da serina protease de qualquer de SEQ ID NO: 721-722, 794-796 ou no amino terminal de qualquer dos outros peptídeos aqui descritos.
TABELA 17: SERINA PROTEASES SEQ ID NO: Sequências de Serina Protease - Aminoácido Protease 1 (Bsub168 aprX) (Bacillus subtilis subespécie Subtilis cepa 168) SEQ ID NO: 721
SEQ ID NO: Sequências de Serina Protease - Aminoácido Serina Protease 2 Bacillus subtilis subsp.
Substilis str. 168, nativa SEQ ID NO: 722
Serina Protease 2 nativa (truncada) Bacillus subtilis SEQ ID NO: 794
Serina Protease 2 mutante (Bacillus subtilis subsp. subtilis str. 168, com mutações) SEQ ID NO: 795
SEQ ID NO: Sequências de Serina Protease - Aminoácido Serina Protease 2 mutante truncada (Bacillus subtilis subsp. subtilis str. 168, com mutações) SEQ ID NO: 796
ACC DESAMINASE
[0177] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo ACC desaminase (1-aminociclopropano-1-carboxilato desaminase). De preferência, a composição compreende um polipeptídeo tendo atividade ACC desaminase.
[0178] Como explicado em mais detalhes abaixo, podem ser feitas mutações em polipeptídeos que exibem atividade de D-cisteína dessulfidrase e/ou de ACC desaminase a fim de aumentar a atividade de ACC desaminase dos polipeptídeos. Todas as plantas fazem ACC e respondem a etileno e, assim, esses polipeptídeos ACC desaminase modificados têm ampla aplicabilidade.
[0179] Para facilidade de referência, sequências ilustrativas de aminoácidos de D-cisteína dessulfidrase e 1-aminociclopropano-1-carboxilato desaminase (ACC desaminase) são fornecidas na Tabela 18 abaixo, junto com suas SEQ ID NOs. Mutação de certos aminoácidos em uma enzima D-cisteína dessulfidrase ou ACC desaminase tipo selvagem pode resultar em um polipeptídeo tendo elevada atividade ACC desaminase em comparação com a atividade ACC desaminase do polipeptídeo tipo selvagem (por exemplo, enzima) nas mesmas condições.
[0180] Na Tabela 18, SEQ ID NOs. 723–726 são sequências de aminoácidos para enzimas tipo selvagem que exibem tanto atividade ACC desaminase quanto D-cisteína dessulfidrase, e as SEQ ID NOs. 246-249 são sequências de aminoácidos para as versões correspondentes dessas enzimas tendo duas substituições de aminoácidos em relação à sequência tipo selvagem que resultam em elevada atividade enzimática. Assim, a SEQ ID NO: 723 é uma sequência tipo selvagem e SEQ ID NO: 727 fornece a sequência de aminoácido para a mesma enzima tendo as duas substituições de aminoácidos em relação à sequência tipo selvagem. SEQ ID NOs. 724 e 728, 725 e 729 e 726 e 730 se referem uma à outra da mesma maneira. Os aminoácidos substituídos são mostrados em SEQ ID NOs. 727–730 na Tabela 18 em texto em negrito e sublinhado.
[0181] As composições aqui descritas podem compreender um polipeptídeo tendo atividade ACC-desaminase. De preferência, o polipeptídeo tem uma sequência de aminoácido compreendendo pelo menos uma substituição de aminoácido em relação à sequência de uma enzima D-cisteína desulfidrase tipo selvagem ou ACC desaminase de uma bactéria do gênero Bacillus. A sequência de aminoácido de um polipeptídeo ACC desaminase exemplar que pode ser usado nas composições e métodos aqui pode compreender SEQ ID NOs 723-730 (Tabela 18). De preferência, a sequência de aminoácido do polipeptídeo ACC desaminase compreende SEQ ID NO:
730.
TABELA 18. POLIPEPTÍDEOS ACC DESAMINASE Enzima (SEQ ID NO) Sequência de aminoácido D-cisteína dessulfidrase (ACC deaminase nativa 1b) Tipo selvagem Bacillus thuringiensis (SEQ ID NO: 723)
Enzima (SEQ ID NO) Sequência de aminoácido
D-cisteína dessulfidrase (ACC deaminase nativa 2b) Tipo selvagem Bacillus pseudomycoides (SEQ ID NO: 724)
D-cisteína dessulfidrase (ACC deaminase nativa 3b) do tipo selvagem Bacillus thuringiensis (SEQ ID NO: 725)
D-Cisteína Dessulfidrase (ACC desaminase) Bacillus thuringiensis tipo selvagem (SEQ ID NO: 726)
D-cisteína dessulfidrase (ACC deaminase nativa 1b) Com mutações Bacillus thuringiensis (SEQ ID NO: 727)
D-cisteína dessulfidrase (ACC deaminase nativa 2b) Com mutações Bacillus pseudomycoides (SEQ ID NO: 728)
D-cisteína dessulfidrase (ACC deaminase nativa 3b) com mutações Bacillus thuringiensis (SEQ ID NO: 729)
Enzima (SEQ ID NO) Sequência de aminoácido ACC desaminase (D-cisteína dessulfidrase) Bacillus thuringiensis, com mutações) (SEQ ID NO: 730) POLIPEPTÍDEOS DE GLUCANASE, AMILASE E QUITINASE
[0182] A composição pode compreender um polipeptídeo glucanase.
[0183] Glucanases usam água para quebrar ligações químicas entre moléculas individuais de glicose em glucanos, que são polissacarídeos de cadeia longa. Os glucanos podem ser divididos em dois tipos, alfa glucano, constituído principalmente por cadeias alfa de moléculas de glicose, e beta glucanos, constituídos principalmente por cadeias beta de moléculas de glicose. Os alfa glucanos comuns incluem dextranos, glicogênios, pulalanos e amido. Os alfa glucanos geralmente incluem combinações de alfa 1,4; alfa 1,6 e/ou alfa 1,3 glucanos e ramificações. As glucanases específicas para a clivagem das ligações alfa são chamadas alfa-glucanases. Beta glucanases são específicas para ligações beta entre glucanos. Os beta-glucanos comuns incluem celulose, laminarina, liquenina e zimosan. Beta-glucanos são comumente encontrados com b1,3; ligações b1,4 e/ou b1,6 entre moléculas de glicose. As glucanases podem ser "exo" ou "endo", dependendo da localização da clivagem do polissacarídeo. Endo-glucanases (particularmente β-1,3-D- glucanases) e amilases são particularmente eficazes nas composições terapêuticas e promotoras de rendimento aqui descritas.
[0184] A sequência de aminoácido de polipeptídeos de glucanase ilustrativos que podem ser usados nas composições e nos métodos aqui podem compreender qualquer uma de SEQ ID NOs 731-735 ou 767-776,
conforme descrito na Tabela 19. O polipeptídeo de glucanase pode compreender uma β-1,3-D-glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo, por exemplo, qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 ou 767-
776. Por exemplo, o polipeptídeo de glucanase pode compreender uma β-1,3- D-glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 772. Por exemplo, o polipeptídeo de glucanase pode compreender uma β- 1,3-D-glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 732.
[0185] A composição pode compreender um polipeptídeo de amilase.
[0186] Amilases são alfa-glucanases específicas que quebram amido. Amilases são enzimas que clivam hidroliticamente ligações α-1,4- glicosídicas entre frações de glicose individuais na espinha dorsal de amilose e amilopectina. Amilose e amilopectina são os componentes de amido, que são polissacarídeos de armazenamento derivados de plantas. Amilose é um polissacarídeo não ramificado consistindo em monômeros de glicose ligados a α-1,4 glicosídicos. Na amilopectina de polissacarídeo ramificado estruturalmente relacionado, várias cadeias de α-1,4-glucano estão ligadas umas às outras por ligações α-1,6-glicosídicas.
[0187] A sequência de aminoácido de polipeptídeos de amilase ilustrativos que podem ser usados nas composições e nos métodos aqui pode compreender SEQ ID NO: 734 ou SEQ ID NO: 735.
[0188] A composição pode compreender um polipeptídeo de quitinase.
[0189] Quitinases são enzimas que clivam hidroliticamente ligações β-1,4-glicosídicas entre frações N-acetilglucosamina individuais na espinha dorsal de moléculas de quitina. Quitina é um polissacarídeo estrutural não ramificado consistindo em frações N-acetilglucosamina ligadas a β-1,4 glicosídicas, que é de alta ocorrência nas paredes celulares de muitos fungos e no exoesqueleto de muitos artrópodes.
[0190] A sequência de aminoácido de polipeptídeos de quitinase ilustrativos que podem ser usados nas composições e nos métodos aqui pode compreender SEQ ID NO: 777 ou SEQ ID NO: 778.
[0191] Em alguns casos, as composições e os métodos aqui compreendem dois ou mais polipeptídeos de glucanase, amilase ou quitinase (por exemplo, uma β-1,3-glucanase e uma amilase ou uma β-1,3-glucanase e uma quitinase). Por exemplo, uma composição pode compreender uma amilase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo pelo menos uma de SEQ ID NO: 734 ou 735 e uma β-1,3-D-glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NO: 731–735 ou 767–
776. Como um exemplo adicional, uma composição pode compreender uma quitinase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo pelo menos uma de SEQ ID NO: 777 ou 778 e uma β-1,3-D-glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NO: 731– 735 ou 767–776. Em qualquer uma dessas combinações, a β-1,3-D-glucanase pode ter uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 772. Em qualquer uma dessas combinações, a β-1,3-D-glucanase pode ter uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 732.
TABELA 19: GLUCANASES, AMILASES E QUITINASES ILUSTRATIVAS SEQ ID NO: Sequências de Glucanase - Aminoácido β-1,3-D-glucanase Hordeum vulgare SEQ ID NO: 731
SEQ ID NO: Sequências de Glucanase - Aminoácido β-1,3-D-glucanase Paenibacillus spp.
SEQ ID NO:732 β-1,3-D-glucanase (Bacillus circulans cepa WL-12) SEQ ID NO: 733
Amilase (amyE) Bacillus subtilis 168 SEQ ID NO: 734
SEQ ID NO: Sequências de Glucanase - Aminoácido
Amilase Bacillus licheniformis SEQ ID NO: 735 β-1,3-D-glucanase (LamA1) Paenibacillus sp.
CCRC17245 SEQ ID NO: 767
SEQ ID NO: Sequências de Glucanase - Aminoácido β-1,3-D-glucanase - domínio funcional (LamA1) Paenibacillus sp.
CCRC17245 SEQ ID NO: 768 β-1,3-D-glucanase (AtPr2) Arabidopsis thaliana SEQ ID NO: 769 β-1,3-D-glucanase (CsPr2) Citrus sinensis SEQ ID NO: 770 β-1,3-D-glucanase (Curd) Streptomyces sioyaensis SEQ ID NO: 771 β-1,3-D-glucanase (DK-1) Cellulosimicrobium cellulans cepa .DK-1 SEQ ID NO: 772 β-1,3-D-glucanase (QLK1) Kitasatospora phosalacinea cepa SYBCQL SEQ ID NO: 773
SEQ ID NO: Sequências de Glucanase - Aminoácido β-1,3-D-glucanase (17-W) Streptomyces sp.
SYBC17 SEQ ID NO: 774 β-1,3-D-glucanase (Bgls27) Streptomyces sp.
S27 SEQ ID NO: 775 β-1,3-D-glucanase (BglM) Paenibacillus sp IAM1165 SEQ ID NO: 776
Endoquitinase (ChiC) Bacillus thuringiensis (E0) SEQ ID NO: 777
SEQ ID NO: Sequências de Glucanase - Aminoácido Quitinase (ChiB) Serratia marcescens SEQ ID NO: 778
[0192] A sequência de aminoácido nativa da glucanase de SEQ ID NO: 767 inclui o peptídeo sinal MTLSSGKSNRFRRRFAAVLFGTVLLAGQIPA (SEQ ID NO: 779) no amino- terminal da sequência, imediatamente precedendo o primeiro aminoácido de SEQ ID NO: 767. Esse peptídeo sinal não está incluído na SEQ ID NO: 767. No entanto, o peptídeo sinal de SEQ ID NO: 779, ou outro peptídeo sinal, pode opcionalmente ser incluído no amino terminal da glucanase de SEQ ID NO: 767, ou no amino terminal da glucanase truncada de SEQ ID NO: 768 ou no amino terminal de qualquer dos outros peptídeos aqui descritos.
[0193] A sequência de aminoácido nativa da glucanase de SEQ ID NO: 769 inclui o peptídeo sinal MSESRSLASPPMLMILLSLVIASFFNHTAG (SEQ ID NO: 780) no amino terminal da sequência precedendo imediatamente o primeiro aminoácido de SEQ ID NO: 769 Esse peptídeo sinal não está incluído em SEQ ID NO: 769. No entanto, o peptídeo sinal de SEQ ID NO: 780, ou outro peptídeo sinal, pode opcionalmente ser incluído no amino terminal da glucanase de SEQ ID NO: 769, ou no amino terminal de qualquer dos outros peptídeos aqui descritos.
[0194] A sequência de aminoácido nativa da glucanase de SEQ ID NO: 770 inclui o peptídeo sinal MAKFFSSPNTSSTAPVVLFVVGLLMATLHTASA (SEQ ID NO: 781) no amino terminal da sequência, que precede imediatamente o primeiro aminoácido das
SEQ ID NO: 770. Esse peptídeo sinal não está incluído na SEQ ID NO: 770. No entanto, o peptídeo sinal de SEQ ID NO: 781, ou outro peptídeo sinal, pode opcionalmente ser incluído no amino terminal da glucanase de SEQ ID NO: 770, ou no amino terminal de qualquer dos outros peptídeos aqui descritos.
[0195] A sequência de aminoácido nativa da glucanase de SEQ ID NO: 771 inclui o peptídeo sinal
MSDSSGTPRPRSHSRPRSRSVRRALMAAVATFGLAAAVATAATGPADA (SEQ ID NO: 782) no amino terminal da sequência que precede imediatamente o primeiro aminoácido de SEQ ID NO: 771. Esse peptídeo sinal não está incluído na SEQ ID NO: 771. No entanto, o peptídeo sinal de SEQ ID NO: 782, ou outro peptídeo sinal, pode opcionalmente ser incluído no amino terminal da glucanase de SEQ ID NO: 771, ou no amino terminal de qualquer dos outros peptídeos aqui descritos.
[0196] A sequência de aminoácido nativa da glucanase de SEQ ID NO: 772 inclui o peptídeo sinal
MDLARHRSLTPPTTPPGTSVGPRPRARRRLAGALVAALTAAAAALAVTV
PATSAAA (SEQ ID NO: 783) no amino terminal da sequência, que precede imediatamente o primeiro aminoácido das SEQ ID NO: 772. Esse peptídeo sinal não está incluído em SEQ ID NO: 772. No entanto, o peptídeo sinal de SEQ ID NO: 783, ou outro peptídeo sinal, pode opcionalmente ser incluído no amino terminal da glucanase de SEQ ID NO: 772, ou no amino terminal de qualquer dos outros peptídeos aqui descritos.
[0197] A sequência de aminoácido nativa da glucanase de SEQ ID NO: 773 inclui o peptídeo sinal MAAAPRTRRWSLGGFVLLVATALVAAAPFGSAPTGSA (SEQ ID NO: 784) no amino terminal da sequência que precede imediatamente o primeiro aminoácido de SEQ ID NO: 773. Esse peptídeo sinal não está incluído em SEQ
ID NO: 773. No entanto, o peptídeo sinal de SEQ ID NO: 784, ou outro peptídeo sinal, pode opcionalmente ser incluído no amino terminal da glucanase de SEQ ID NO: 773, ou no amino terminal de qualquer dos outros peptídeos aqui descritos.
[0198] A sequência de aminoácido nativa da glucanase de SEQ ID NO: 774 inclui o peptídeo sinal MASPRLLRRCLFAALSAALVGSVAVGPAQA (SEQ ID NO: 785) no amino terminal da sequência precedendo imediatamente o primeiro aminoácido de SEQ ID NO: 774 Esse peptídeo sinal não está incluído em SEQ ID NO: 774. No entanto, o peptídeo sinal de SEQ ID NO: 785, ou outro peptídeo sinal, pode opcionalmente ser incluído no amino terminal da glucanase de SEQ ID NO: 774, ou no amino terminal de qualquer dos outros peptídeos aqui descritos.
[0199] A sequência de aminoácido nativa da glucanase de SEQ ID NO: 775 inclui o peptídeo sinal
MVMHPTTPHTPHDPPRGKPARRRRSRRWASAATLLTLAVTMAVTGTAA (SEQ ID NO: 786) no amino terminal da sequência que precede imediatamente o primeiro aminoácido de SEQ ID NO: 775. Esse peptídeo sinal não está incluído em SEQ ID NO: 775. No entanto, o peptídeo sinal de SEQ ID NO: 786, ou outro peptídeo sinal, pode opcionalmente ser incluído no amino terminal da glucanase de SEQ ID NO: 775, ou no amino terminal de qualquer dos outros peptídeos aqui descritos.
[0200] A sequência de aminoácido nativa da glucanase de SEQ ID NO: 776 inclui o peptídeo sinal MMLRKGICVVILFSLLVVLLPVNKTNA (SEQ ID NO: 787) no amino terminal da sequência precedendo imediatamente o primeiro aminoácido de SEQ ID NO: 776. Esse peptídeo sinal não está incluído em SEQ ID NO: 776. No entanto, o peptídeo sinal de SEQ ID NO: 787, ou outro peptídeo sinal, pode opcionalmente ser incluído no amino terminal da glucanase de SEQ ID NO: 776, ou no amino terminal de qualquer dos outros peptídeos aqui descritos.
POLIPEPTÍDEOS ISOLADOS - GLUCANASES/AMILASES E QUITINASES
[0201] As glucanases, quitinases e amilases descritas na Tabela 19, podem também ser fornecidas como polipeptídeos isolados. Por conseguinte, um polipeptídeo isolado é fornecido, em que o polipeptídeo tem uma sequência de aminoácido compreendendo ou consistindo em qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 735 e 767-778.
[0202] O polipeptídeo isolado pode ter uma sequência de aminoácido compreendendo ou consistindo em qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 767-776 e 778.
[0203] O polipeptídeo isolado pode ter uma sequência de aminoácido compreendendo ou consistindo em qualquer uma das SEQ ID NOs: 767-769, 771-773, 775 e 778.
[0204] O polipeptídeo isolado pode ter uma sequência de aminoácido compreendendo ou consistindo em qualquer uma das SEQ ID NOs: 767-769, 772-773, 775 e 778.
[0205] O polipeptídeo isolado pode ter uma sequência de aminoácido compreendendo ou consistindo em SEQ ID NO: 772.
MODIFICAÇÕES ADICIONAIS
[0206] Qualquer polipeptídeo de iniciação bioativo, seja ocorrendo naturalmente ou não natural e sejam fornecidos como um polipeptídeo isolado ou em uma composição, pode ser ainda modificado via modificação química para aumentar o desempenho, bem como a estabilidade dos polipeptídeos.
Tais polipeptídeos de iniciação bioativos incluem polipeptídeos de flagelina, polipeptídeos retroinversos, polipeptídeos de tionina, polipeptídeos de RHPP, polipeptídeos de serina protease, polipeptídeos de ACC desaminase, polipeptídeos de glucanase, polipeptídeos de quitinase e polipeptídeos de amilase.
[0207] Sequências específicas que podem ser quimicamente modificadas incluem SEQ ID NOs: 1–610, 620–719, 721–735 e 745–778.
Sequências quimicamente modificadas podem ser fornecidas nas composições aqui descritas. Além disso, quando a sequência quimicamente modificada compreende ou consiste em qualquer uma de SEQ ID NOs 732, 735 e 745- 778, o polipeptídeo quimicamente modificado pode ser fornecido como um polipeptídeo isolado.
[0208] Esses polipeptídeos de iniciação bioativos também podem ser conjugados a outras frações, incluindo um domínio de ligação de planta e um polipeptídeo e outros transportadores, tal como óleos, plásticos, contas, cerâmica, solo, fertilizantes, péletes e a maioria de materiais estruturais.
[0209] Além disso, os polipeptídeos podem ser quimicamente sintetizados com D-aminoácidos, β2-aminoácidos, β3-aminoácidos, homoaminoácidos, gama aminoácidos, peptoides, N-metil-aminoácidos e outros aminoácidos não naturais miméticos e derivados.
[0210] Os polipeptídeos podem ser modificados, quer por processos naturais, tal como processamento pós-tradução, ou por técnicas de modificação química, que são bem conhecidas na arte. Modificações podem ocorrer em qualquer lugar em um polipeptídeo, incluindo a espinha dorsal do polipeptídeo, as cadeias laterais de aminoácidos e os amino ou carboxil terminais. O mesmo tipo de modificação pode estar presentes no mesmo ou em vários graus em vários sítios em um polipeptídeo. Além disso, um polipeptídeo pode conter muitos tipos de modificações.
[0211] Peptídeos podem ser ramificados, por exemplo, como resultado de ubiquitinação e podem ser cíclicos, com ou sem ramificação.
Polipeptídeos cíclicos, ramificados e cíclicos ramificados podem resultar de processos naturais pós-tradução ou podem ser feitos por métodos sintéticos.
[0212] Modificações incluem acetilação, adição de ácido, acilação,
ADP-ribosilação, adição de aldeído, adição de alquilamida, amidação, aminação, biotinilação, adição de carbamato, adição de clorometil cetona, fixação covalente de um nucleotídeo ou derivado de nucleotídeo, reticulação, ciclização, formação de ligação dissulfeto, desmetilação, adição de éster, formação de reticulações covalentes, formação de ligações dissulfeto cisteína- cisteína, formação de piroglutamato, formilação, gama-carboxilação, glicosilação, formação de âncora de GPI, adição de hidrazida, adição de ácido hidroxâmico, hidroxilação, iodação, adição de lipídio, metilação, miristoilação, oxidação, PEGuilação, processamento proteolítico, fosforilação, prenilação, palmitoilação, adição de um marcador de purificação, adição de piroglutamil, racemização, selenoilação, adição de sulfonamida, sulfatação, adição mediada por RNA de transferência de aminoácidos a proteínas, tal como arginilação, ubiquitinação e adição de ureia. (ver, por exemplo, Creighton et al. (1993) Proteins – Structure and Molecular Properties, 2nd Ed., T. E. Creighton, W. H.
Freeman and Company, New York; Johnson, ed. (1983) Posttranslational Covalent Modification Of Proteins, Academic Press, New York; Seifter et al.
(1990) Meth. Enzymol., 182: 626–646; Rattan et. al. (1992) Ann. N.Y. Acad.
Sci., 663: 48–62; e similares).
[0213] Utilizando métodos conhecidos de engenharia de proteína e tecnologia de DNA recombinante, variantes podem ser geradas para melhorar ou alterar as características dos polipeptídeos aqui descritos. Tais variantes incluem deleções, inserções, inversões, repetições, duplicações, extensões e substituições (por exemplo, substituições conservativas) selecionadas de acordo com regras gerais bem conhecidas na técnica de modo a ter pouco efeito na atividade.
[0214] O polipeptídeo pode compreender uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 70% de identidade para qualquer uma de SEQ ID NOs. 1-735, 745-787 e 794-797, em que o polipeptídeo tem atividade de iniciação bioativa.
[0215] O polipeptídeo pode compreender uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 75% de identidade para qualquer uma de SEQ ID NOs. 1-735, 745-787 e 794-797, em que o polipeptídeo tem atividade de iniciação bioativa.
[0216] O polipeptídeo pode compreender uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 80% de identidade para qualquer uma de SEQ ID NOs. 1-735, 745-787 e 794-797, em que o polipeptídeo tem atividade de iniciação bioativa.
[0217] O polipeptídeo pode compreender uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 85% de identidade para qualquer uma de SEQ ID NOs. 1-735, 745-787 e 794-797, em que o polipeptídeo tem atividade de iniciação bioativa.
[0218] O polipeptídeo pode compreender uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 90% de identidade para qualquer uma de SEQ ID NOs. 1-735, 745-787 e 794-797, em que o polipeptídeo tem atividade de iniciação bioativa.
[0219] O polipeptídeo pode compreender uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 95% de identidade para qualquer uma de SEQ ID NOs. 1-735, 745-787 e 794-797, em que o polipeptídeo tem atividade de iniciação bioativa.
[0220] O polipeptídeo pode compreender uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 98% de identidade para qualquer uma de SEQ ID NOs. 1-735, 745-787 e 794-797, em que o polipeptídeo tem atividade de iniciação bioativa.
[0221] O polipeptídeo pode compreender uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 99% de identidade para qualquer uma de SEQ ID NOs. 1-735, 745-787 e 794-797, em que o polipeptídeo tem atividade de iniciação bioativa.
b. PREPARAÇÃO DE POLIPEPTÍDEOS DE INICIAÇÃO BIOATIVOS
[0222] Métodos e abordagens são fornecidos para clonar, modificar geneticamente e expressar os polipeptídeos de iniciação bioativos (por exemplo, flagelinas) e os polipeptídeos de iniciação bioativos (por exemplo, Bt.4Q7Flg22) usando aqueles métodos bem compreendidos e comumente usados por um versado na arte. Os métodos descritos neste documento podem ser usados com qualquer dos polipeptídeos de iniciação bioativos conforme descrito neste documento e, portanto, incluem qualquer das flagelinas, polipeptídeos associados à flagelina, tioninas, RHPP, serina proteases, ACC desaminases, glucanases e/ou quaisquer combinações dos mesmos.
[0223] Polipeptídeos de iniciação bioativos podem ser fornecidos como parte de uma proteína de fusão, tal como um polipeptídeo livre, imobilizados na superfície de uma partícula, ou impregnados no interior ou sobre uma matriz. Vários sistemas de expressão podem ser usados para a produção de polipeptídeo livre.
[0224] Os polipeptídeos derivados de flagelina de codificação total, codificação parcial (polipeptídeos de flagelina) e associados a flagelina podem ser sobre-expressados em cepa Bacillus, por exemplo, Bacillus thuringiensis cepa BT013A, em Bacillus cereus ou Bacillus subtilis. As flagelinas e os polipeptídeos derivados de flagelina são clonados usando um vetor de expressão apropriado para permitir produção abundante do polipeptídeo. No entanto, quando um sistema de expressão, tal como uma cepa Bacillus, é usado, de preferência os peptídeos não estão ligados a um exosporium de um membro da família Bacillus cereus ou um esporo membro da família Bacillus cereus intacto (isto é, os polipeptídeos são fornecidos como "polipeptídeos livres”.
[0225] Por exemplo, a fim de facilitar clonagem dos nucleotídeos alvo que codificam o(s) polipeptídeo(s) de iniciação bioativo(s), como aqui descrito, um vetor shuttle compatível de E. coli pSUPER foi construído fundindo a espinha dorsal de plasmídeo pBC descrita acima com o vetor de clonagem de E. coli pUC57 em sítios de endonuclease de restrição BamHI compatíveis.
O vetor pSUPER resultante carrega marcadores de seleção dupla (seleção de ampicilina em E. coli e seleção de tetraciclina em Bacillus spp). A clonagem foi realizada por amplificação PCR de nucleotídeos alvo com iniciadores específicos sintetizados com 15 bp se sobrepondo ao sítio de inserção pSUPER. Polipeptídeos codificando gene específico foram fundidos ao vetor pSUPER com In-Fusion HD Cloning Kit (Clontech). Construtos pSUPER verificadas por sequência foram amplificados usando os iniciadores Reverso e Direto da espinha dorsal adequados de pBC. Os produtos PCR resultantes foram auto-ligados para gerar o plasmídeo pBC que foi usado para transformar a cepa Bacillus spp. doadora. O construto final foi verificado ser completamente intragenérico por sequenciamento de Sanger.
[0226] Os polipeptídeos/peptídeos de iniciação bioativos, conforme descritos neste documento, são produzidos em grandes quantidades para aplicações de campo e cultivo usando um sistema de expressão livre que pode utilizar uma cepa de Bacillus subtilis e/ou Bacillus thuringiensis como a cepa de expressão heteróloga designada. O plasmídeo de expressão de base designado pFEe4B consiste em uma seção de E. coli (= e) e uma seção de Bacillus (= pFE). A seção e foi derivada de pUC19 e permite seleção e amplificação do vetor em E. coli para fins de clonagem. Ela compreende o gene da beta-lactamase (bla) que confere resistência a antibióticos beta-lactâmicos, tal como ampicilina e outros derivados de penicilina, bem como uma origem de replicação de E. coli permitindo multiplicação de vetor.
[0227] A seção pFE fornece seleção e amplificação de plasmídeo em Bacillus spp. e conduz expressão do polipeptídeo/peptídeo heterólogo de interesse. Como tal, ela contém um gene que confere resistência à tetraciclina (tetL), bem como o gene para uma proteína de replicação (repU) responsável por amplificar o plasmídeo em Bacillus spp., ambos os quais foram derivados do plasmídeo Bacillus cereus nativo pBC16. O cassete de expressão de pFEe4B contém um sinal de secreção (amyQ, SEQ ID NO: 736, Tabela 20), um sítio de clonagem e um terminador (rspD), o primeiro resultando em secreção da proteína/do peptídeo expresso das células de cepa hospedeira para o meio circundante e o último impedindo transcrição além da estrutura de leitura aberta de interesse. A expressão em pFEe4B é conduzida por um promotor autoindutível modificado, que inicia expressão uma vez que a cultura atinge uma densidade óptica suficiente. No sistema de expressão de pFEe4b, a expressão é controlada por uma sequência promotora indutível por IPTG de Bacillus subtilis. Esse promotor consiste em um promotor constitutivo modificado combinado com o repressor lac de E. coli (lacl) e um sítio de ligação a ribossoma. Assim, a expressão de polipeptídeos/peptídeos codificados por pFEe4B depende da presença de agentes de indução adequados, tal como isopropil beta-D-1-tiogalactopiranosídeo (IPTG). No entanto, outros sistemas pFe úteis para expressão dos polipeptídeos, como aqui descrito, não dependem de tais sistemas de indução para sua expressão. O plasmídeo pFEe4 aloja ainda o gene lacI de E. coli sob controle do promotor da penicilinase de Bacillus licheniformis para prevenir expressão de polipeptídeo/peptídeo como aqui descrito na ausência de qualquer agente de indução.
[0228] Outros vectores de expressão disponíveis comercialmente, por exemplo, qualquer daqueles derivados de Bacillus subtilis, pode também ser útil. Outros vetores de expressão foram selecionados para produzir os polipeptídeos de iniciação bioativos recombinantes devido aos seguintes critérios desejados: o microrganismo recombinante é não patogênico e é considerado geralmente como organismos seguros (GRAS), ele não tem nenhum desvio significativo em uso de códon e ele é capaz de secretar proteínas extracelulares diretamente no meio de cultura, proporcionando uma versão livre de célula dos polipeptídeos de iniciação bioativos.
[0229] Um sistema exemplar para produzir Bt.4QFlg22, Bt.Flg22Syn01 e tioninas usando fermentação é fornecido. Os polipeptídeos podem ser fornecidos em uma confirmação para estabilizar o polipeptídeo e intensificar atividade para um método de produção alternativo, nomeadamente fermentação bacteriana. O polipeptídeo (por exemplo, um polipeptídeo tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 226, 571 ou 620) pode ser combinado com um sinal de secreção amyQ de Bacillus amyloliquefaciens alfa-amilase) fundido a glutationa S-transferase (GST, Schistosoma japonicum) e uma sequência de marcação de clivagem de enterocinase conforme descrito na Tabela 20.
TABELA 20. SEQUÊNCIAS ÚTEIS PARA AUMENTAR ESTABILIDADE DE UM POLIPEPTÍDEO DE FLAGELINA OU ASSOCIADO À FLAGELINA EXPRESSADO.
sinal de secreção amyQ (Bacillus amyloliquefaciens) SEQ ID NO:736
GST (Schistosoma japonicum) SEQ ID NO:737 ligante SEQ ID NO:738 Marcador de clivagem de enterocinase (alvo de clivagem de consenso para Enterokinase bovina, protease de cadeia leve) SEQ ID NO: 739
[0230] As sequências da Tabela 20 podem ser clonadas juntamente com a sequência de interesse (por exemplo, SEQ ID NO: 226, 571, ou 620) para um vetor de clonagem padrão contendo um marcador de seleção de ampicilina e qualquer de um marcador de seleção de cloranfenicol (Cm) ou uma Tetraciclina (Tet) que pode replicar em E. coli e, então, ser transferido para Bacillus subtilis cepa K08 para fins de produção, de acordo com métodos padrão na técnica. O produto de fermentação resultará em uma proteína de fusão (por exemplo, uma proteína de fusão GST-Bt.4Q7Flg22) que pode ser aplicada à planta ou parte de planta como uma proteína de fusão, ou isolada e aplicada com o marcador de GST clivado para resultar em um polipeptídeo purificado.
[0231] Outros sistemas de expressão comuns na arte podem ser utilizados para expressar polipeptídeos de iniciação bioativode de um modo semelhante.
[0232] Os polipeptídeos de iniciação bioativos, como aqui descritos, podem ser produzidos e purificados quer pelo uso de um marcador de proteína utilizando purificação de afinidade ou utilizando métodos de clivagem de protease de coluna que liberam o polipeptídeo não marcado.
Métodos de uso desta abordagem para fazer versões livres dos polipeptídeos de iniciação bioativos são comumente conhecidos e compreendidos por um versado na técnica.
[0233] Marcadores de proteína geralmente compreendem uma sequência relativamente pequena de amino ácidos incorporados em um polipeptídeo traduzido, basicamente proporcionando uma amarração molecular para o polipeptídeo de iniciação bioativo de interesse. Eles são comumente usados para auxiliar na expressão e purificação de polipeptídeos recombinantes. O marcador de glutationa S-transferase (GST) foi selecionado para fins de purificação de afinidade dos polipeptídeos de iniciação bioativos,
conforme descrito. Um marcador de GST pode ser fundido a qualquer do N ou C terminal de um polipeptídeo. Marcadores de GST são frequentemente combinados com outros marcadores para marcação dupla. Marcadores para os polipeptídeos de iniciação bioativos podem ser úteis para purificá-los por afinidade. Os marcadores também podem ser clivados dos polipeptídeos de iniciação bioativos usando proteases específicas e métodos de clivagem de protease específica de coluna para liberar o polipeptídeo de iniciação bioativo não marcado purificado ou a proteína precursora de comprimento total de interesse. Esses métodos também são comuns e bem conhecidos por aqueles versados na técnica. Outros marcadores que podem ser utilizados são conhecidos na técnica e incluem marcadores de poli-histidina (His), marcadores FLAG, epítopos de anticorpos, estreptavidina/biotina, dentre outras ferramentas de purificação.
[0234] Marcadores de proteína podem ser fornecidos dentro do plasmídeo para produzir o polipeptídeo.
[0235] Idealmente, o plasmídeo compreende, juntamente com a sequência codificando o polipeptídeo de interesse, um sinal de secreção (por exemplo, o sinal de secreção amyE ou amyQ) para promover secreção e um marcador de proteína (por exemplo, glutationa S transferase) para intensificar a estabilidade do polipeptídeo, desse modo aumentando produção e estabilidade. Em casos preferidos, o marcador de proteína (por exemplo, GST) é ligado ao polipeptídeo usando uma sequência de ligante compreendendo uma sequência de clivagem de consenso. Isso pode permitir a adição de uma cinase direcionada que pode clivar o marcador e liberar o polipeptídeo isolado purificado. Uma sequência de clivagem de consenso adequada pode compreender uma sequência de clivagem de enterocinase (DDDDK, SEQ ID NO: 739), que pode ser clivada por simples aplicação de uma enterocinase bovina, por exemplo.
[0236] Portanto, é fornecido um método para produzir um polipeptídeo compreendendo produzir uma proteína de fusão compreendendo qualquer polipeptídeo aqui descrito e um sítio de clivagem de Enterocinase (EK) via fermentação, o sítio de clivagem EK servindo para intensificar a atividade e a estabilidade do polipeptídeo. A proteína de fusão codificada pelo plasmídeo pode ainda compreender um marcador de proteína (por exemplo, um marcador de poli-histidina (His), um marcador FLAG, um epítopo de anticorpo, estreptavidina/biotina, glutationa S-transferase (GST) ou qualquer combinação dos mesmos), em que o sítio de clivagem de enterocinase compreende uma região de ligação conectando o polipeptídeo e o marcador de proteína. A proteína de fusão também pode compreender um sinal de secreção. O sinal de secreção pode compreender um sinal de secreção amyE ou amyQ (por exemplo, SEQ ID NO: 736), ou ele pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs 563-570 ou 779-787 ou 797, conforme descrito acima ou quaisquer outras sequências de secreção que são bem conhecidas dos especialistas na técnica. O polipeptídeo compreendendo o sítio de clivagem da enterocinase (EK) pode ser mais estável e produzido com rendimentos mais elevados usando fermentação do que um polipeptídeo carecendo do sítio de clivagem de enterocinase (EK). Quando desejado, uma enterocinase (por exemplo, uma enterocinase bovina) pode ser aplicada à proteína de fusão para ativar (por exemplo, isolar) o polipeptídeo de interesse. A enterocinase pode ser aplicada no local para permitir estabilidade máxima do polipeptídeo de iniciação bioativo antes da administração.
[0237] Os polipeptídeos de iniciação bioativos podem ser fornecidos em uma forma sintética usando tecnologias disponíveis comercialmente de síntese de peptídeo para produzir polipeptídeos de alta pureza. A produção sintética dos polipeptídeos de iniciação bioativos utiliza metodologias de síntese de peptídeo de fase sólida ou de fase de solução que são bem conhecidas por aqueles versados na técnica. Metodologias de síntese química incluem: uma montagem em etapas de peptídeos de precursores de aminoácidos, pelo que alongamento do peptídeo prossegue via clivagem de um grupo de proteção de aminoácido reversível seguida por uma reação de acoplamento entre aminoácidos. A síntese de peptídeo de fase sólida é usada para adicionar uma etapa de fixação covalente que liga a cadeia de peptídeo nascente a um suporte polimérico insolúvel, pelo que o peptídeo ancorado pode ser estendido por uma série de ciclos. Polipeptídeos podem ser opcionalmente montados em unidades ou fragmentos menores, que são posteriormente conjugados para produzir a sequência polipeptídica de comprimento total. Reações de extensão de polipeptídeo são conduzidas até conclusão e, em seguida, o polipeptídeo sintetizado é removido do suporte sólido por lavagem com um ácido forte, seguida por etapas para produzir um peptídeo altamente purificado, opcionalmente para incluir precipitação, troca de sal, filtração e liofilização Análises de espectrometria de massa, teor de nitrogênio, composição de aminoácido e cromatografia líquida de alta pressão são realizadas após a conclusão de síntese e purificação para confirmação de massa molecular, sequência polipeptídica e determinação de pureza.
[0238] Qualquer dos polipeptídeos de iniciação bioativos conforme descrito neste documento para polipeptídeos associados à flagelina (Tabelas 1- 5), RHPP (Tabelas 11-13), polipeptídeos de tionina e tipo tionina (Tabela 15), serina proteases (Tabela 17), ACC desaminase (Tabela 18), ou glucanases, amilases e quitinases (Tabela 19) pode ser fornecido em formas sintéticas.
[0239] Adicionalmente, tais métodos podem ser usados para fazer e usar sequências de assistência conservadas, de preferência denominadas sequências de assinatura (SEQ ID NOs: 542-548), triagem de âncora de sinal (SEQ ID NOs: 549-562) e secreção (SEQ ID NOs: 563–570).
[0240] Retro inverso também pode ser feito sinteticamente ou fabricado quimicamente.
[0241] Polipeptídeos sintéticos produzidos na confirmação all-D são preparados substituindo todos os resíduos de L-aminoácidos por seus D- enantiômeros, resultando em um polipeptídeo Flg reverso ou retro-all-D- isômero. Síntese de fase sólida é usada para preparar as versões retro- inversas do(s) polipeptídeo(s) Flg. Após síntese e purificação do(s) polipeptídeo(s) retro-inverso(s), a composição de aminoácido é confirmada usando espectrometria de massa do(s) polipeptídeo(s) Flg. A pureza do(s) polipeptídeo(s) retro-inverso(s) é, então, confirmada em um nível maior ou igual a 95% usando análise de HPLC. As versões retro-inversas do(s) polipeptídeo(s) Flg são ainda caracterizadas usando tempo de retenção de HPLC, massa molecular relativa e valores de composição de aminoácidos (IC50 µM). A produção retro inversa usando tecnologia de DNA recombinante geralmente envolve o uso de mecanismos de síntese de proteínas não ribossomais.
[0242] Polipeptídeos de iniciação bioativos Flg sintéticos retro- inversos preparados por síntese de fase sólida poderiam ser testados quanto à sua capacidade para ligar ao FLS2 ou receptores FLS alternativos, por exemplo, FLS3 também encontrado em plantas. Experimentos de ELISA competitivos ou ensaios de ligação in vivo com peptídeos marcados (por exemplo, biotina, GST) podem ser usados para confirmar as afinidades de ligação de polipeptídeos associados a Flg retro inversos para receptores FLS de planta.
BACTÉRIAS RECOMBINANTES QUE EXPRESSAM POLIPEPTÍDEOS DE INICIAÇÃO BIOATIVOS
[0243] Também é fornecido um microrganismo recombinante que expressa ou sobre-expressa um polipeptídeo. O polipeptídeo compreende os polipeptídeos descritos acima para a composição. Por exemplo, o polipeptídeo pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, um RHPP; um polipeptídeo de tionina ou semelhante a tionina), um polipeptídeo de glucanase, um polipeptídeo de amilase, um polipeptídeo de quitinase, um polipeptídeo de serina protease ou um polipeptídeo de ACC desaminase. Por exemplo, o polipeptídeo pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 226, 1–225, 227–375, 526, 528, 530, 532, 534, 536, 538, 540, 541 ou 571–603; ou um RHPP tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de 604, 606-610 e 745-755; ou um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 620-719; ou um polipeptídeo de glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 e 767-776; ou uma amilase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 734 ou SEQ ID NO: 735; ou uma quitinase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 777 ou SEQ ID NO: 778; ou uma serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 721, 722 e 794-796; ou um polipeptídeo de ACC desaminase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 723-730.
[0244] O polipeptídeo pode ser sobre-expresso pelo microrganismo.
[0245] O microrganismo recombinante pode compreender um microrganismo que é capaz de fazer polipeptídeos de iniciação bioativos recombinantes ou seus precursores de uma maneira eficaz. O microrganismo preferido seria do gênero Bacillus, uma bactéria do gênero Paenibacillus, um fungo do gênero Penicillium, uma bactéria do gênero Glomus, uma bactéria do gênero Pseudomonas, uma bactéria do gênero Arthrobacter, uma bactéria do gênero Paracoccus, uma bactéria do gênero Rhizobium, uma bactéria do gênero Bradyrhizobium, uma bactéria do gênero Azosprillium, uma bactéria do gênero Enterobacter, uma bactéria do gênero Escherichia ou qualquer combinação das mesmas.
[0246] O microrganismo recombinante pode compreender uma bactéria do gênero Bacillus, uma bactéria do gênero Paenibacillus, ou qualquer combinação das mesmas.
[0247] Por exemplo, o microrganismo pode compreender bactérias dos gêneros Bacillus mycoides, Bacillus pseudomycoides, Bacillus cereus, Bacillus thuringiensis, Bacillus megaterium, Bacillus subtilis, Bacillus firmus, Bacillus aryabhattai, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus licheniformis, Bacillus circulans, Bacillus flexus, Bacillus nealsonii, Bacillus pumulis, Paenibacillus ou uma combinação das mesmas.
[0248] Métodos e abordagens são comumente utilizados por um perito na arte para determinar e verificar o gênero e a espécie de bactérias. Um método comum fornece DNA cromossômico isolado da bactéria com amplificação de PCR da região de 16s rRNA usando iniciadores universais (ACTCCTACGGGAGGCAGCAGT, SEQ ID NO: 740) e (GGGTTGCGCTCGTTG/AC, SEQ ID NO: 741). Os amplicons de PCR são, então, purificados e sequenciados para identificação correta da cepa bacteriana apropriada, por exemplo, uma cepa específica nos gêneros de Bacillus.
[0249] Protocolos de amostras são geralmente conhecidos por um especialista da técnica para a preparação de DNA cromossômico, transformação de DNA de genes codificando os polipeptídeos usando um plasmídeo, produção dos polipeptídeos em uma bactéria hospedeira, por exemplo, uma cepa Bacillus.
[0250] As cepas Bacillus proporcionadas podem produzir qualquer polipeptídeo de iniciação bioativo, como aqui descrito ou uma combinação do mesmo.
Por exemplo, a cepa pode compreender:
(a) Bacillus aryabhattai CAP53 (NRRL Nº B-50819),
(b) Bacillus aryabhattai CAP56 (NRRL Nº.
B-50817),
(c) Bacillus flexus BT054 (NRRL Nº B-50816),
(d) Paracoccus kondratievae NC35 (NRRL Nº B-50820),
(e) Bacillus mycoides BT155 (NRRL Nº B-50921),
(f) Bacillus nealsonii BOBA57 (NRRL Nº B-50821),
(g) Bacillus mycoides EE118 (NRRL Nº B-50918),
(h) Bacillus subtilis EE148 (NRRL Nº B-50927),
(i) Bacillus mycoides EE141 (NRRL No.
B-50916),
(j) Bacillus mycoides BT46-3 (NRRL No.
B-50922),
(k) Membro da família Bacillus cereus EE128 (NRRL Nº B-
50917),
(l) Paenibacillus massiliensis BT23 (NRRL Nº B-50923),
(m) Membro da família Bacillus cereus EE349 (NRRL Nº B-
50928),
(n) Bacillus subtilis EE218 (NRRL Nº B-50926),
(o) Bacillus megaterium EE281 (NRRL No.B-50925),
(p) Membro da família Bacillus cereus EE-B00377 (NRRL B-
67119);
(q) Bacillus pseudomycoides EE-B00366 (NRRL B-67120),
(r) Bacillus mycoides EE-B00363 (NRRL B-67121),
(s) Bacillus pumilus EE-B00143 (NRRL B-67123),
(t) Bacillus thuringiensis EE-B00184 (NRRL B-67122),
(u) Bacillus mycoides EE116 (NRRL Nº B-50919),
(v) Membro da família Bacillus cereus EE417 (NRRL Nº B- 50974),
(w) Bacillus subtilis EE442 (NRRL Nº B-50975),
(x) Bacillus subtilis EE443 (NRRL Nº B-50976), (y) Membro da família Bacillus cereus EE444 (NRRL Nº B- 50977), (z) Bacillus subtilis EE405 (NRRL Nº B-50978), (aa) membro da família Bacillus cereus EE439 (NRRL Nº. B- 50979), (bb) Bacillus megaterium EE385 (NRRL No. B-50980), (cc) membro da família Bacillus cereus EE387 (NRRL Nº. B- 50981), (dd) Bacillus circulans EE388 (NRRL No. B-50982), (ee) Bacillus thuringiensis EE319 (NRRL Nº. B-50983), (ff) membro da família Bacillus cereus EE377 (NRRL Nº. B- 67119), (gg) Bacillus mycoides EE363 (NRRL Nº. B-67121), (hh) Bacillus pseudomycoides EE366 (NRRL Nº. B-67120); (ii) Bacillus thuringiensis BT013A (NRRL Nº. B-50924); ou qualquer combinação das mesmas. Cada uma dessas cepas foi depositada no United States Department of Agriculture (USDA) Agricultural Research Service (ARS), com o endereço 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 EUA, e são identificadas pelos números de depósito NRRL fornecidos entre parênteses. Cepas (a)-(d) e (g) foram depositadas em 11 de março de 2013. Cepas (e), (g)-(o), (u) e (ii) foram depositadas em 10 de março de 2014. Cepas (v)-(hh) foram depositadas em 10 de setembro de 2014. Cepa (gg) foi depositada em 17 de setembro de 2014. Cepas (p)-(t), (ff), (gg) e (hh) foram depositadas em 19 de agosto de 2015. Bacillus thuringiensis BT013A também é conhecido como Bacillus thuringiensis 4Q7.
[0251] O isolamento e a caracterização dessas cepas são descritos nos Exemplos encontrados dentro de Publicação Internacional
WO/2017/161091, aqui incorporada por referência em sua totalidade. Para facilitar identificação do organismo, a Publicação Internacional WO/2017/161091 A1 também fornece as sequências de RNA ribossômico 16S parciais para cada uma dessas cepas em uma lista de sequência e na Tabela
17.
[0252] Qualquer dos microrganismos recombinantes pode ser usado para superexpressar um polipeptídeo de iniciação bioativo, conforme descrito neste documento para um polipeptídeo associado à flagelina (Tabelas 1-5), um RHPP (Tabelas 11-13), um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina (Tabela 15), um polipeptídeo de serina protease (Tabela 17), um polipeptídeo de ACC desaminase (Tabela 18) ou um polipeptídeo de glucanase, amilase ou quitinase (Tabela 19).
[0253] O microrganismo recombinante pode compreender uma mistura de dois ou mais de qualquer dos microrganismos recombinantes aqui descritos.
[0254] O microrganismo recombinante pode ser inativado.
Inativação resulta em microrganismos que são incapazes de reproduzir.
Inativação de microrganismos pode ser vantajosa, por exemplo, porque ela permite distribuição do microrganismo a uma planta ou um meio de crescimento de planta, embora reduzindo ou eliminando quaisquer efeitos prejudiciais que o microrganismo vivo possa ter em uma planta ou no ambiente.
Os microrganismos recombinantes podem ser inativados por qualquer meio físico ou químico, por exemplo, por tratamento térmico, irradiação gama, irradiação de raios-x, irradiação por UV-A, irradiação por UV-B ou tratamento com um solvente como glutaraldeído, formaldeído, peróxido de hidrogênio, ácido acético, alvejante, clorofórmio ou fenol ou qualquer combinação dos mesmos.
c. INDUTORES
[0255] O composto indutor pode compreender um aminoácido ou isômero do mesmo, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou derivado ou sal do mesmo, um ácido dicarboxílico ou derivado ou sal do mesmo, um benzodiatiazol, uma betaína, uma prolina, um bactericida, um inibidor da calose sintase, um inibidor da succinato desidrogenase, ou sal do mesmo, ou qualquer combinação dos mesmos.
[0256] Aminoácido. A composição pode compreender um aminoácido. Os aminoácidos que podem ser usados nas composições aqui são preferencialmente distintos dos aminoácidos que compreendem os polipeptídeos. Por exemplo, o aminoácido pode ser um aminoácido isolado.
Além disso, o aminoácido pode compreender qualquer isômero ou estereoisômero de qualquer aminoácido. Por exemplo, o aminoácido pode ser um aminoácido D ou L e pode ser um isômero alfa ou beta de um aminoácido.
Os aminoácidos podem ser um aminoácido proteinogênico (por exemplo, canônico) ou não proteinogênico. Aminoácidos particularmente adequados que podem ser usados como compostos indutores incluem cisteína e ácido β-amino butírico (BABA), discutidos abaixo.
[0257] Acido β-amino butírico (BABA) é um isômero do aminoácido ácido aminobutírico com a fórmula química C4H9NO2. BABA é um aminoácido não proteinogênico e não é encontrado em proteínas nativas. Ele pode induzir resistência a doença de planta e também melhora resistência a tensões abióticas quando aplicado às plantas.
[0258] L-cisteína. Cisteína tem sido tradicionalmente considerada ser um aminoácido hidrofílico, baseado principalmente no paralelo químico entre seu grupo sulfidrila e osgrupos hidroxila nas cadeias laterais de outros aminoácidos polares com afórmula HO2CCH(NH2)CH2SH. A cadeia lateral de tiol em cisteína frequentemente participa de reações enzimáticas como um nucleófilo. O tiol é suscetível à oxidação para dar o derivado de dissulfeto cistina, que serve a um papel estrutural importante em muitas proteínas.
Cisteína tem sido tradicionalmente considerada ser um aminoácido hidrofílico, baseado principalmente no paralelo químico entre seu grupo sulfidrila e os grupos hidroxila nas cadeias laterais de outros aminoácidos polares. No entanto, cisteína também é considerada um aminoácido proteinogênico.
Cisteína pode ser fornecida para tratar HLB nas formas de L ou D-cisteína e em qualquer forma que seja fornecida como um análogo de cisteína, ácido ou sal do mesmo. Níveis de L-cisteína na planta têm um efeito multifacetado e modulam respostas de planta a tensão, em parte através da síntese de proteínas antimicrobianas contendo enxofre e manutenção do estado redox celular (Gotor et al., “Signaling in the plant cytosol: cysteine or sulfide?” Amino Acids: 47: 2155–2164, 2015).
[0259] A cisteína incluída nas composições aqui descritas podem ser qualquer análogo, ácido ou sal de cisteína. Por exemplo, as composições podem compreender uma cisteína tendo a forma de L-cisteína, D-cisteína, DL- cisteína, análogos de L-cisteína compreendendo: DL homocisteína, L-cisteína metil éster, L-cisteína etil éster, N-carbamoil cisteína, N-acetilcisteína, L- cisteína sal de sódio, L-cisteína sal monossódico L-cisteína sal dissódico, L- cisteína monocloridrato, L-cisteína cloridrato, L-cisteína etil éster cloridrato, L- cisteína metil éster cloridrato, outras selenocisteínas, seleno-DL-cisteína, N- isobutiril-L-cisteína, N-isobutiril-L-cisteína ou um ácido de cisteína, tal como ácido cisteína sulfínico.
[0260] Ácido benzóico. A composição pode compreender um ácido benzoico substituído ou não substituído. De preferência, o ácido benzoico substituído compreende ácido salicílico ou qualquer derivado, análogo ou sal do mesmo. Por exemplo, a composição pode compreender ácido salicílico.
Outro análogo do ácido salíclico que pode ser usado na composição é o benzotiadiazol, discutido abaixo.
[0261] Benzotiadiazol. A composição pode compreender um benzotiadiazol como o composto indutor. De preferência, o benzotiadiazol compreende S-metil éster do ácido Benzo (1,2,3)-tiadiazol-7-carbotioico (BTH; C8H6N2OS2) disponível comercialmente como fungicida Actigard 50WG (Syngenta). BTH induz resistência adquitida de planta sistêmica e/ou hospedeira e exibe um modo de ação único que imita a resposta de resistência adquirida sistêmica natural (SAR) encontrada na maioria das espécies de plantas. BTH é um análogo do ácido salicílico com estabilidade aumentada que é usado na agricultura como um ativador de resposta imune de planta e é aprovado para aplicação em árvores de citros como irrigação de raízes ou tratamento de irrigação para prevenir HLB. Esse composto indutor de BTH é vantajosamente usado em combinações com peptídeos Flg22 para prevenir e reduzir doenças de citros.
[0262] Ácido dicarboxílico. A composição pode compreender um ácido dicarboxílico. De preferência, o ácido dicarboxílico compreende ácido oxálico. Portanto, a composição pode compreender ácido oxálico.
[0263] Bactericida. A composição pode compreender um bactericida. O bactericida pode compreender estreptomicina, penicilinas, tetraciclinas, oxitetraciclina, casugamicina, ampicilina, óxido de cobre, hidróxido de cobre, sulfeto de cobre, sulfato de cobre, cobre de partículas finas, ácido oxolínico, clorotetraciclina, ácido acético ou qualquer combinação dos mesmos.
De preferência, o bactericida compreende oxitetraciclina.
[0264] Inibidor da calose sintase. A composição pode compreender um inibidor da calose sintase. Calose é um polissacarídeo multifuncional na forma de β-1,3-glucano e algumas ligações β-1,6-glucano que é produzido por uma família de enzimas da calose sintase. Calose é depositada na parede celular para regular vários processos de desenvolvimento e respostas de plantas a tensão abiótica e biótica. Por exemplo, calose é depositada em torno dos plasmodos que conectam células, regulando assim o fluxo entre células. Durante formação de floema, a calose é degradada entre os elementos de tubo de peneira em desenvolvimento, abrindo assim as conexões e permitindo o transporte de carboidratos, principalmente sacarose, na planta. Calose também pode agir como uma barreira física para infecção e é depositada dentro da parede celular em resposta à infecção fúngica e bacteriana. A síntese e a quebra da calose devem ser rigidamente reguladas pela planta. Assim, a degradação da calose é facilitada por β-1,3-endoglucanases de uma família de plantas que ou hidrolisam ou transferem glicosídeos. As bactérias também expressam β-1,3- endoglucanases para degradação de β1,3-glucanos derivados de paredes de células de fungos e plantas. A regulação incorreta da deposição de calose pode ocorrer em resposta à infecção por CLas devido a elevada atividade da calose sintase e/ou diminuída atividade da β-1,3-endoglucanase. Composições compreendendo inibidores da calose sintase podem ajudar a eliminar bloqueios de floema de acúmulo de calose e auxiliar na recuperação em plantas infectadas com HLB ou CLas. Os inibidores da calose sintase podem compreender 2-desoxi-D-glicose (2-DDG), 3-aminobenzamida, 3- metoxibenzamida ou qualquer combinação dos mesmos. De preferência, o inibidor da calose sintase compreende 2-desoxi-D-glicose (2-DDG). 2-DDG é um análogo da glicose não metabolizável. Ele é um inibidor conhecido da calose sintase e quando usado nas composições e nos métodos aqui descritos pode auxiliar na remoção do acúmulo de calose causado por infecção de citros com a bactéria CLas.
[0265] Inibidor da succinato desidrogenase. A composição pode compreender um inibidor da succinato desidrogenase. A succinato desidrogenase é um complexo enzimático metabólico mitocondrial e é parte integrante da respiração celular. Os inibidores da succinato desidrogenase podem ser usados como um fungicida (por exemplo, a composição pode compreender um fungicida compreendendo um inibidor da succinato desidrogenase). O inibidor de succinato desidrogenase pode compreender uma fenil-benzamida, fenil-oxo-etil tiofeno amida, piridinil-etil-benzamida, furan- carboxamida, oxatin-carboxamida, tiazol-carboxamida, pirazol-4-carboxamida, N-ciclopropil-N-benzil- pirazol-carboxamida, N-metoxi-(fenil-etil)-pirazol- carboxamida, piridina-carboxamida ou pirazina-carboxamida, pidiflumetofen, benodanil, flutolanil, mepronil, isofetamida, fluopiram, fenifuram, carboxina, oxicarboxina, tifluzamida, benzovindiflupir, bixafen, fluindapir, fluxapiroxade, furametpir, inpyrfluxam, isopirazam, penflufen, pentiopirade, sedaxano, isoflucipram, pydiflumetofen, boscalide ou piraziflimid ou qualquer combinação, homólogo ou análogo dos mesmos. Por exemplo, o fungicida inibidor da succinato desidrogenase pode compreender uma fenil-benzamida, fenil-oxo-etil tiofeno amida, piridinil-etil-benzamida, furan-carboxamida, oxatin-carboxamida, tiazol-carboxamida, pirazol-4-carboxamida, N-ciclopropil-N-benzil-pirazol- carboxamida, N-metoxi-(fenil-etil)-pirazol-carboxamida, piridina-carboxamida ou pirazina-carboxamida, pidiflumetofen, isofetamid, oxicarboxin, benzovindiflupir, bixen, fluindapir, inpirfluxam, isopirazam, pentiopirad, isoflucipram, pidiflumetofen, piraziflumid ou qualquer combinação dos mesmos. Por exemplo, o inibidor da succinato desidrogenase pode compreender bixafen.
[0266] Betaína. A composição pode compreender uma betaína.
Como utilizado aqui, “betaína" se refere a qualquer betaína, homólogo de betaína ou análogo de betaína. A betaína pode compreender glicina betaína, glicina betaína aldeído, β-alanina betaína, cloridrato de betaína, cetil betaína, prolina betaína, colina-O-sulfato betaína, cocamidopropil betaína, oleil betaína, sulfobetaína, lauril betaína, octil betaína, caprilamidopropil betaína, lauramidopropil betaína, isoestearamidopropil betaína ou uma combinação,
homólogo ou análogo de qualquer um dos mesmos.
[0267] Por exemplo, a betaína pode compreender glicina betaína, glicina betaína aldeído, β-alanina betaína, cloridrato de betaína, cetil betaína, colina-O-sulfato betaína, cocamidopropil betaína, oleil betaína, sulfobetaína, lauril betaína, octil betaína, caprilamidopropil betaína, lauramidopropil betaína, isoestearamidopropil betaína ou uma combinação, homólogo ou análogo de qualquer um dos mesmos.
[0268] Por exemplo, a betaína pode compreender glicina betaína ou cloridrato de betaina.
[0269] A betaína pode ser derivada de uma fonte de planta, tal como trigo (por exemplo germe de trigo ou farelo de trigo) ou uma planta do gênero Beta (por exemplo, Beta vulgaris (beterraba)).
[0270] O homólogo ou análogo de betaína pode compreender ectoína, colina, fosfatidilcolina, acetilcolina, citidina difosfato colina, dimetiletanolamina, cloreto de colina, salicilato de colina, glicerofosfocolina, fosfocolina, uma esfingomielina, bitartrato de colina, propio betaína, deanol betaína, homodeanol betaína, homoglicerol betaína, dietanol homobetaína, trietanol homobetaína ou uma combinação de qualquer uma das mesmas.
[0271] Prolina. A composição pode compreender uma prolina.
Como utilizado aqui, "prolina" se refere a qualquer prolina, análogo de prolina ou homólogo de prolina. A prolina pode compreender L-prolina, D-prolina, hidroxiprolina, derivados de hidroxiprolina, prolina betaína ou uma combinação, derivado, homólogo ou análogo de qualquer uma das mesmas.
[0272] Por exemplo, a prolina pode compreender L-prolina.
[0273] O homólogo ou análogo de prolina pode compreender α- metil-L-Prolina, α-benzil- Lprolina, trans-4-hidroxi-L-prolina, cis-4-hidroxi-L- prolina, trans-3-hidroxi-L-prolina, cis-3-hidroxi-L-prolina, trans-4-amino-L- prolina, 3,4-de-hidro-α-prolina, ácido (2S)-aziridina-2-carboxílico, ácido (2S)-
azetidina-2-carboxílico, ácido L-pipecólico, prolina betaína, 4-oxo-L-prolina, ácido tiazolidina-2-carboxílico, ácido (4R)-tiazolidina-4-carboxílico ou uma combinação de qualquer dos mesmos. Composições compreendendo uma prolina são estabilizadores de proteína eficazes e podem ajudar a prevenir desdobramento da proteína durante períodos de tensão, incluindo biótica e abiótica.
[0274] A menos que especificado de outra forma, cada composto indutor pode compreender de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso, de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 10% em peso, de cerca de 0,001% em peso a cerca de 5% em peso, ou de cerca de 0,001% em peso a cerca de 1% em peso da composição, de acordo com o peso total da composição.
II. COMPOSIÇÕES ESPECÍFICAS EM MODALIDADES
[0275] As composições desta invenção podem compreender qualquer dos polipeptídeos ou polipeptídeos de iniciação bioativa aqui descritos. Além disso, as composições podem consistir essencialmente nos polipeptídeos ou polipeptídeos de iniciação bioativa, conforme descrito neste documento.
[0276] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de iniciação bioativa.
[0277] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 226, 289, 290, 291, 293, 294, 294, 295, 300, 437, 526, 532, 534,
[0278] 536, 538, 540, 571–585 e 587–603. Em alguns casos, a sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 226, 293, 295, 300, 540, 571-579 e 589-590. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226, 590 ou 571. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo ou consistindo em SEQ ID NO: 226.
[0271] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso. O um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro-inverso pode compreender um polipeptídeo de Flg22 retro-inverso, um polipeptídeo de FlgII-28 retro-inverso e/ou um polipeptídeo de Flg15.
[0279] A composição pode compreender pelo menos um polipepíideo de Flg22 retro inverso. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de Flg22 retro inverso pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 376–450, 527, 531, 533, 535, 537 e 539.
[0280] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de FlgII-28 retro-inverso. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de FlgII-28 retro-inverso pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 451-525.
[0281] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de Flg15 retro-inverso. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de Flg15 retro-inverso pode compreender SEQ ID NOs: 529.
[0282] A composição pode compreender pelo menos um RHPP.
Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de RHPP pode compreender qualquer uma de SEQ ID Nos: 604, 607, 608 e 745-755. Por exemplo, a composição pode compreender um RHPP tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 604.
[0283] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de RHPP retro-inverso. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de RHPP retro-inverso pode compreender qualquer uma de SEQ ID NO: 605, 609, 610 e 756–766.
[0284] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina.
[0285] Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de tionina ou tipo tionina pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 620-719. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 620.
Em alguns casos, o pilipeptídeo de tionina ou tipo tionina pode ser fundido a uma sequência de alvo de floema para formar um polipeptídeo fundido. A sequência de floema ou alvo de floema pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 611-619 ou qualquer combinação das mesmas. Em alguns casos, a sequência de floema ou de alvo de floema compreende SEQ ID NO:
611. Em alguns casos, o polipeptídeo de fusão compreendendo um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina e uma sequência de floema ou alvo de floema pode compreender SEQ ID NO: 720.
[0286] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de glucanase. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de glucanase pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-735 e 767-
776. Por exemplo, a composição pode compreender uma β-1,3-glucanase.
Uma sequência de aminoácido da β-1,3-glucanase pode compreender SEQ ID NO: 772 ou 732.
[0287] A composição pode compreender pelo menos uma amilase. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de amilase pode compreender SEQ ID NO: 734 ou SEQ ID NO: 735.
[0288] A composição pode compreender pelo menos uma quitinase. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de quitinase pode compreender SEQ ID NO: 777 ou SEQ ID NO: 778.
[0289] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de serina protease. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de serina protease pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 721, 722 e 794-796. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 722 ou 795. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 794 ou 796.
[0290] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de ACC desaminase. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de ACC desaminase pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 723-730. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de ACC desaminase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 730.
[0291] A composição pode compreender pelo menos dois polipeptídeos bioativos.
[0292] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina associado a flagelina e um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 571 ou 226 e um polipeptídeo de tionina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 620.
[0293] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e um polipeptídeo de RHPP. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 571 ou 226 e um polipeptídeo de RHPP tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 604.
[0294] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e uma serina protease. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 571e uma serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 722. Como outro exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 e uma serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO:
794. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 e uma serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 722. Como outro exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 e uma serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 796. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 e uma serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO:
795.
[0295] A composição composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e uma glucanase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo
SEQ ID NO: 571e uma glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-735. Em alguns casos, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 571 e uma glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 ou qualquer uma de SEQ ID NOs: 767–766. Como outro exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 e uma glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 731- 733 e um polipeptídeo de amilase tendo um sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 734 ou SEQ ID NO: 735. Em alguns casos, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 e uma glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 ou qualquer uma de SEQ ID NOs: 767–766. Em algumas composições, a sequência de aminoácido do polipeptídeo de glucanase pode compreender SEQ ID NO: 772. Em algumas composições, a sequência de aminoácido do polipeptídeo de glucanase (por exemplo, β-1,3- glucanase) pode compreender SEQ ID NO: 732.
[0296] A composição pode compreender glucanase e uma amilase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de glucanase (por exemplo, uma β-1,3-glucanase) tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 731-733 e 767-766 e um polipeptídeo de amilase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 734 ou SEQ ID NO: 735. Em algumas composições, a sequência de aminoácido do polipeptídeo de glucanase pode compreender SEQ ID NO: 772.
Em algumas composições, a sequência de aminoácido do polipeptídeo de glucanase (por exemplo, a β-1,3- glucanase) pode compreender SEQ ID NO:
732.
[0297] A composição pode compreender glucanase e uma quitinase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de glucanase (por exemplo, uma β-1,3-glucanase) tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 731-733 e 767-766 e um polipeptídeo de quitinase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 777 ou SEQ ID NO: 778. Em algumas composições, a sequência de aminoácido do polipeptídeo de glucanase (por exemplo, uma β-1,3-glucanase) pode compreender SEQ ID NO: 772. Em algumas composições, a sequência de aminoácido do polipeptídeo de glucanase (por exemplo, a β-1,3- glucanase) pode compreender SEQ ID NO: 732.
[0298] A composição pode compreender uma glucanase e uma serina protease. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de glucanase (por exemplo, uma β-1,3-glucanase) tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 731-733 e 767-766 e um polipeptídeo de serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 721, SEQ ID NO: 722 ou qualquer uma de SEQ ID NO: 794–796. Em algumas composições, a sequência de aminoácido do polipeptídeo de glucanase (por exemplo, uma β-1,3-glucanase) pode compreender SEQ ID NO: 772. Em algumas composições, a sequência de aminoácido do polipeptídeo de glucanase (por exemplo, a β-1,3- glucanase) pode compreender SEQ ID NO: 732.
[0299] Composições aqui descritas tendo uma glucanase em combinação com uma amilase, quitinase ou serina protease podem compreender ainda pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina.
[0300] Por exemplo, uma composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina, uma β-1,3- endoglucanase e uma amilase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571, uma β-1,3- endoglucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NO: 731-733 e 767-776, e uma amilase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 734 ou 735. Em algumas composições, a sequência de aminoácido do polipeptídeo de glucanase (por exemplo, a β-1,3-glucanase) pode compreender SEQ ID NO: 732 ou 772.
[0301] Alternativamente, a composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma β-1,3- endoglucanase e uma quitinase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571, uma β-1,3- endoglucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NO: 731-733 e 767-776, e uma quitinase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 777 ou SEQ ID NO: 778. Em algumas composições, a sequência de aminoácido do polipeptídeo de glucanase (por exemplo, a β-1,3-glucanase) pode compreender SEQ ID NO: 732 ou 772.
[0302] Alternativamente, a composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma β-1,3- endoglucanase e uma serina protease. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571, uma β-1,3- endoglucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NO: 731-733 e 767-776, e uma serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 721, SEQ ID NO: 722,
ou qualquer uma de SEQ ID NOs: 794–796. Em algumas composições, a sequência de aminoácido do polipeptídeo de glucanase (por exemplo, a β-1,3- glucanase) pode compreender SEQ ID NO: 732 ou 772.
[0303] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e uma amilase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e uma amilase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 734 ou 735.
[0304] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e uma quitinase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e uma quitinase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 777 ou 778.
[0305] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e uma ACC desaminase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e uma ACC desaminase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 730.
[0306] A composição pode compreender um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP) ou um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP) retro inverso e uma glucanase. Por exemplo, a composição pode compreender um RHPP tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 604, 607-608 e 745-756 ou um RI-RHPP compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 605, 609-610 e 757-766 e uma β-1,3-glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 e 767-776.
[0307] A composição pode compreender um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP) ou um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP) retro inverso e uma ACC desaminase. Por exemplo, a composição pode compreender um RHPP tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 604, 607-608 e 745-756 ou um RI-RHPP compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 605, 609-610 e 757- 766 e uma ACC desaminase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 723-730.
[0308] A composição pode compreender um polipeptídeo bioativo e pelo menos um composto indutor.
[0309] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e um inibidor da calose sintase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e um inibidor da calose sintase. O inibidor da calose sintase pode compreender 2-DDG. Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina).
[0310] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e um aminoácido. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e um aminoácido. O aminoácido pode compreender L-cisteína ou ácido β-amino-butírico (BABA). De preferência, o aminoácido compreende ácido β-amino-butírico (BABA). Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina).
[0311] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e um ácido benzoico substituído ou não substituído. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e um ácido benzoico substituído ou não substituído. O ácido benzoico substituído pode compreender ácido salicílico. Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina).
[0312] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e um benzotiadiazol. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e um benzotiadiazol. O benzotiadiazol pode compreender benzo S- metil éster de ácido (1,2,3)-tiadiazol-7-carbotióico, disponível comercialmente como fungicida ACTIGARD 50WG. Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina).
[0313] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e um ácido dicarboxílico. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e um ácido dicarboxílico. O ácido dicarboxílico pode compreender ácido oxálico. Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina).
[0314] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e uma betaína. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e uma betaína. A betaína pode compreender cloridrato de betaína ou glicina betaína. Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina).
[0315] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e uma prolina. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e uma prolina. A prolina pode compreender L-prolina. Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina).
[0316] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e um herbicida. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e um herbicida. O herbicida pode compreender lactofeno. Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina). A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e um bactericida. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e um bactericida. O bactericida pode compreender oxitetraciclina.
[0317] Quando uma composição incluir a forma retro-inversa de um polipeptídeo de iniciação bioativa Flg (por exemplo, RI Bt.4Q7 Flg 22 (SEQ ID NO: 376), o polipeptídeo exibe estabilidade aprimorada e menos degradação ao longo do tempo, proporcionando mais atividade na superfície de membrana de célula de planta, o que intensifica a capacidade de o polipeptídeo ligar ao receptor e ser levado para a planta. Formas retro inversas de tais polipeptídeos de iniciação bioativa associados a Flg são usadas para fornecer estabilidade intensificada da formulação aplicada agricolamente, pelo que o(s) polipeptídeo(s) Flg exibem proteção intensificada de clivagem proteolítica, o que contribui para uma maior atividade geral e vida útil da composição.
[0318] Quando o polipeptídeo compreender um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP), a composição pode ainda compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina. O RHPP pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 604, 607-608 e 745-755. Por exemplo, o RHPP pode compreender SEQ ID NO: 604. A sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 1-525, 532, 534, 536, 538, 540, 571-585, 587 e 590, ou qualquer combinação das mesmas. Por exemplo, o polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina pode compreender qualquer uma de SEQ ID NO: 226 ou
571. Em alguns casos, o RHPP pode compreender SEQ ID NO: 604 e o polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina pode compreender a SEQ ID NO: 226. Em outros casos, o RHPP pode compreender SEQ ID NO: 604 e o polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina pode compreender a SEQ ID NO: 571.
[0319] Os polipeptídeos podem ser formulados em combinação com um polipeptídeo de assistência. Os polipeptídeos de assinatura (SEQ ID NOs: 542-548), triagem de âncora de sinal (SEQ ID NOs: 549- 562) e secreção (SEQ ID NOs: 563-570) podem ser combinados com os polipeptídeos de iniciação bioativa, conforme descrito para direcionar os polipeptídeos/peptídeos (Tabelas 1–5) para a superfície de membrana de célula de planta para ligação e ativação melhoradas dos receptores associados a Flg. Isso significa que para distribuição e ligação eficientes do polipeptídeo a uma planta fornece benefícios de promoção de crescimento, bem como proteção intensificada para a planta ou parte de planta.
[0320] A composição pode compreender um polipeptídeo de glucanase, um polipeptídeo de amilase, um aminoácido e um inibidor da calose sintase. De preferência, o polipeptídeo de glucanase compreende uma β-1,3- endoglucanase. Por exemplo, a composição pode compreender uma β-1,3- endoglucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 ou 767-766 e uma amilase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 734 ou 735. O aminoácido pode compreender L-cisteína. O inibidor da calose sintase pode compreender 2-DDG. A composição pode ainda compreender pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina. O polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina pode ter uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571.
[0321] A composição pode compreender um polipeptídeo de glucanase, um polipeptídeo de quitinase, um aminoácido e um inibidor da calose sintase. De preferência, o polipeptídeo de glucanase compreende uma β-1,3-endoglucanase. Por exemplo, a composição pode compreender uma β- 1,3-endoglucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 ou 767-766 e uma quitinase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 777 ou 778. O aminoácido pode compreender L-cisteína. O inibidor da calose sintase pode compreender 2-DDG. A composição pode ainda compreender pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina. O polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina pode ter uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571.
[0322] A composição pode compreender um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP) ou um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP) retro inverso e uma betaína. Por exemplo, a composição pode compreender um RHPP tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 604, 607-608 e 745-756 ou um RI-RHPP compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 605, 609-610 e 757-766 e uma betaína. A betaína pode compreender cloridrato de betaína ou glicina betaína. Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina).
[0323] A composição pode compreender um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP) ou um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP) retro inverso e uma prolina. Por exemplo, a composição pode compreender um RHPP tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 604, 607-608 e 745-756 ou um RI-RHPP compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 605, 609–610 e 757–766 e uma prolina. A prolina pode compreender L-prolina. Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina).
[0324] A composição pode compreender pelo menos dois compostos indutores.
[0325] A composição pode compreender um bactericida e pelo menos um de: 2-desoxi-D-glicose, BABA, benzotiadiazol e cisteína. Por exemplo, a composição pode compreender um bactericida (isto é, oxitetraciclina) e 2-desoxi-D-glicose.
[0326] A composição pode compreender (A) pelo menos um polipeptídeo e um composto indutor ou (B) pelo menos dois polipeptídeos, opcionalmente, com um composto indutor ou (C) pelo menos dois compostos indutores em que: (a) o polipeptídeo ou os polipeptídeos de (A) ou (B) compreendem: (i) um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 571, 1–375, 526, 528, 530, 532, 534, 536, 538, 540, 541, 572–585, 587 e 589–603; ou (ii) um polipeptídeo de Flg22 retro inverso e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de Flg22 retro inverso compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 376–450, 527, 531, 533, 535, 537 e 539; ou
(iii) um polipeptídeo de FlgII-28 retro inverso e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de FlgII-28 retro inverso compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 451-525 ou 588; ou
(iv) um polipeptídeo de Flg15 retro inverso e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de Flg15 retro inverso compreende SEQ ID NOs:
529 ou 586; ou
(v) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP) e uma sequência de aminoácido do RHPP compreende qualquer uma de SEQ ID Nos:
604, 607, 608 e 745-755; ou
(vi) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso (RI
RHPP) e uma sequência de aminoácido do RI RHPP compreende qualquer uma de SEQ ID NO: 605, 609, 610 e 756-766; ou
(vii) um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de tionina ou tipo tionina compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 620-719; ou
(viii) um polipeptídeo de glucanase e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de glucanase compreende qualquer uma de SEQ
ID NOs: 731-733 e 767-776; ou
(ix) um polipeptídeo de amilase e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de amilase compreende SEQ ID NO: 734 ou 735;
ou
(x) um polipeptídeo de quitinase e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de quitinase compreende SEQ ID NO: 777 ou 778;
ou
(xi) um polipeptídeo de serina protease e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de serina protease compreende SEQ ID NO: 721, 722 ou 794-796; ou
(xii) um polipeptídeo de ACC desaminase e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de ACC desaminase compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 723-730; ou (xiii) qualquer combinação dos mesmos;
[0327] O composto indutor pode compreender um inibidor da calose sintase, ácido beta amino butírico (BABA), uma betaina, uma prolina, ácido salicílico, ácido oxálico, um benzotiazol ou qualquer combinação dos mesmos, quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo de grupos (i)-(v) mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x);
[0328] O composto indutor pode compreender um inibidor da calose sintase, ácido β-amino butírico (BABA), uma betaina, uma prolina, ácido salicílico, ácido oxálico ou qualquer combinação dos mesmos, quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo de grupos (i)-(v) mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0329] O composto indutor pode compreender um inibidor da calose sintase, ácido β-amino butírico (BABA), ácido salicílico, ácido oxálico ou qualquer combinação dos mesmos, quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo de grupos (i)-(v) mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0330] O composto indutor pode compreender um inibidor da calose sintase, ácido β-amino butírico (BABA) ou qualquer combinação dos mesmos, quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo de grupos (i)-(v) mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0331] O composto indutor pode compreender uma betaína ou uma prolina, quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo de grupos (i)-(v) mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0332] O composto indutor pode compreender ácido salicílico ou ácido oxálico, quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo de grupos (i)-(v) mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0333] O composto indutor pode compreender um bactericida, um aminoácido ou isômero do mesmo, um inibidor da calose sintase, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou um derivado do mesmo, um ácido dicarboxílico ou um derivado do mesmo, uma betaína, uma prolina, um benzotiazol ou qualquer combinação dos mesmos quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo de grupos (vi) a (x).
[0334] O composto indutor pode compreender o composto indutor e o composto indutor compreende um inibidor da calose sintase, ácido beta amino butírico (BABA), betaína, uma prolina, ácido salicílico, ácido oxálico, um benzotiazol ou qualquer combinação dos mesmos, quando os dois ou mais polipeptídeos de (B) compreendem polipeptídeos selecionados dos grupos (i)- (v), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0335] O composto indutor pode compreender um inibidor da calose sintase, ácido β-amino butírico (BABA), uma betaína, uma prolina, ácido salicílico, ácido oxálico ou qualquer combinação dos mesmos, quando os dois ou mais polipeptídeos de (B) compreendem polipeptídeos selecionados dos grupos (i)-(v), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0336] O composto indutor pode compreender um inibidor da calose sintase, ácido β-amino butírico (BABA), ácido salicílico, ácido oxálico ou qualquer combinação dos mesmos, quando os dois ou mais polipeptídeos de (B) compreendem polipeptídeos selecionados dos grupos (i)-(v), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0337] O composto indutor pode compreender um inibidor da calose sintase, ácido β-amino butírico (BABA) ou qualquer combinação dos mesmos, quando os dois ou mais polipeptídeos de (B) compreendem polipeptídeos selecionados dos grupos (i)-(v), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0338] O composto indutor pode compreender uma betaina ou uma prolina quando os dois ou mais polipeptídeos de (B) compreendem polipeptídeos selecionados de grupos (i)-(v), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0339] O composto indutor pode compreender ácido salicílico ou ácido oxálico quando os dois ou mais polipeptídeos de (B) compreendem polipeptídeos selecionados de grupos (i)-(v), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0340] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo selecionado de grupos (i) a (x) e pelo menos um composto indutor compreendendo um inibidor da succinato desidrogenase.
[0341] O composto indutor pode compreender um bactericida e pelo menos um de um inibidor da calose sintase, ácido β amino butírico (BABA), uma prolina, um benziotiaozol, ácido salicílico, ácido oxálico, inibidor da succinato desidrogenase, ou uma betaína. O inibidor da succinato desidrogenase pode ser bixafen. O inibidor da calose sintase pode ser 2-DDG.
O bactericida pode ser oxitetraciclina.
[0342] O composto indutor pode compreender um bactericida e pelo menos um de um inibidor da calose sintase, ácido β amino butírico (BABA), uma prolina, uma betaína, ácido salicílico, inibidor da succinato desidrogenase, ou ácido oxálico. O inibidor da succinato desidrogenase pode ser bixafen. O inibidor da calose sintase pode ser 2-DDG. O bactericida pode ser oxitetraciclina.
[0343] O composto indutor pode compreender um bactericida e pelo menos um de um inibidor da calose sintase, ácido β amino butírico (BABA), ácido salicílico, inibidor da succinato desidrogenase, ou ácido oxálico.
O inibidor da succinato desidrogenase pode ser bixafen. O inibidor da calose sintase pode ser 2-DDG. O bactericida pode ser oxitetraciclina.
[0344] O composto indutor pode compreender um bactericida e um inibidor da calose sintase ou ácido β amino butírico (BABA). O inibidor da calose sintase pode ser 2-DDG. O bactericida pode ser oxitetraciclina.
[0345] O composto indutor pode compreender um inibidor da calose sintase e pelo menos um de um ácido beta amino butírico (BABA), um bactericida, um prolina, um benzotiazol, ácido salicílico, ácido oxálico, um inibidor da succinato desidrogenase, ou uma betaína. O inibidor da succinato desidrogenase pode ser bixafen. O inibidor da calose sintase pode ser 2-DDG.
O bactericida pode ser oxitetraciclina.
[0346] Por exemplo, a composição pode compreender (a) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e L-cisteína; ou (b) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e 2-desoxi-D-glicose; ou (c) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma ACC desaminase; ou (d) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e ácido salicílico; ou (e) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e ácido oxálico; ou (f) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e um benzotiadiazol; ou (g) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e BABA; ou (h) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma betaína; ou (i) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma prolina; ou (j) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma serina protease; ou (k) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina; ou (l) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma amilase; ou (m) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma quitinase; ou (n) um bactericida e pelo menos um de: 2-desoxi- D-glicose, BABA, benzotiadiazol ou cisteína; ou (o) uma serina protease; ou (p) um polipéptido de tionina ou tipo tonina; ou (q) uma serina protease e um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina; ou (r) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma glucanase; ou (s) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase, uma amilase; ou (t) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase, uma amilase, 2-DDG; ou (u) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase, uma amilase, 2-DDG e cisteína; ou (v) uma glucanase, uma amilase, 2-DDG e cisteína; ou (w) uma glucanase e uma amilase; ou (x) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase, uma quitinase; ou (y) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase, uma quitinase, 2-DDG; ou (z) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase, uma quitinase, 2-DDG e cisteína; ou (aa) uma glucanase, uma quitinase, 2-DDG e cisteína; ou (bb) uma glucanase e uma quitinase; ou (cc) uma glucanase e uma quitinase; ou (dd) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase e uma serina protease; ou (ee) uma glucanase e um polipeptídeo de RHPP ou polipeptídeo de RHPP retro inverso; ou (ff) um polipeptídeo de RHPP ou polipeptídeo de RHPP retro-inverso e uma betaína; ou (gg) um peptédeo de RHPP ou polipeptídeo de RHPP retro-inverso e uma prolina; ou (hh) um polipeptídeo de RHPP ou polipeptídeo retro-inverso de RHPP e uma ACC desaminase.
[0347] Além disso, qualquer composição (a)-(hh) pode ainda compreender um bactericida. O bactericida pode compreender oxitetraciclina.
[0348] Além disso, qualquer composição (a)-(hh) pode ainda compreender um inibidor da succinato desidrogenase. O inibidor da succinato desidrogenase pode compreender bixafen.
[0349] Outra composição é fornecida, a composição compreendendo bixafen e um polipeptídeo livre (isto é, não ligado a um exosporium de um membro da família Bacillus cereus ou um esporo de membro da família Bacillus cereus intacto). O polipeptídeo livre pode compreender (i) um polipetídeo de flagelina ou associado à flagelina; ou (ii) um polipetídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso; ou (iii) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP); ou (iv) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso (RI RHPP); ou (v) um polipetídeo de tionina ou tipo tionina; ou (vi) um polipeptídeo de glucanase; ou (vii) um polipeptídeo de serina protease; ou (viii) um polipeptídeo de ACC desaminase (1-aminociclopropano- 1-carboxilato desaminase); ou (ix) uma amilase; ou (x) uma quitinase; ou (xi) qualquer combinação dos mesmos.
[0350] A composição pode compreender um polipeptídeo livre compreendendo um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP), um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro-inverso (RI-RHPP), uma quitinase, um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase, uma serina protease ou qualquer combinação dos mesmos.
[0351] A composição pode compreender um polipeptídeo livre em que uma sequência de aminoácido do polipeptídeo livre pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 604, 606, 607 e 745-755 (polipeptídeo promotor de pelo de raiz, RHPP), qualquer uma de SEQ ID NOs: 605 e 756-766
[0352] (polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro-inverso, RI- RHPP), qualquer uma de SEQ ID NOs 226 e 571 (polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina), qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 e 767-778 (glucanase), qualquer uma de SEQ ID NOs: 777 e 778 (quitinases) ou qualquer uma de SEQ ID NOs: 721, 722 e 794-796 (serina proteases).
[0353] A composição pode compreender bixafen e um polipeptídeo livre compreendendo um polipeptídeo promotor de pelo de raiz e uma sequência de aminoácido do RHPP pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 604, 606, 607 e 745-755. Por exemplo, a sequência de aminoácido do RHPP pode compreender SEQ ID NO: 604.
[0354] Como aqui descrito, as composições podem compreender (A) pelo menos um polipeptídeo bioativo e um composto indutor, (B) pelo menos dois polipeptídeos bioativos, opcionalmente com um composto indutor, ou (c) dois compostos indutores. Formulações preferidas são fornecidas,
portanto, para composições compreendendo (a) polipeptídeos sozinhos, (b) polipeptídeo(s) e composto(s) indutor(es) e (c) compostos indutores sozinhos.
Conforme descrito nas seguintes formulações preferidas, "polipeptídeos" incluem "polipeptídeos livres", conforme descrito em algumas composições aqui. Da mesma forma, e conforme definido acima, “bixafen” pode ser considerado um composto indutor.
[0355] Quando as composições compreendem dois ou mais polipeptídeos bioativos, a composição pode compreender de cerca de 0,0000001% em peso a cerca de 95% em peso do(s) polipeptídeo(s), de cerca de 0,01% em peso a cerca de 5% em peso do(s) polipeptídeo(s), ou de 0,005% em peso a cerca de 1% em peso do(s) polipeptídeo(s), ou de 0,005% em peso a cerca de 0,1% em peso do(s) polipeptídeo(s) com base no peso total da composição.
[0356] Quando a composição compreende pelo menos um polipeptídeo de iniciação bioativo e pelo menos um composto indutor, a composição pode compreender de cerca de 0,0000001% em peso a cerca de 95% em peso do polipeptiídeo e de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso do composto indutor, com base no peso total da composição.
Alternativamente, a composição pode compreender de cerca de 0,0000005% em peso a cerca de 10% em peso do(s) polipeptídeo(s) e de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso do composto indutor com base no peso total da composição. Alternativamente, a composição pode compreender de cerca de 0,001% em peso a cerca de 5% em peso do(s) polipeptídeo(s) e de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso do composto indutor com base no peso total da composição. Alternativamente, a composição pode compreender de cerca de 0,005% em peso a cerca de 1% em peso (por exemplo, de cerca de 0,005% em peso a cerca de 0,1% em peso) do(s) polipeptídeo(s) e de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95%
em peso do composto indutor com base no peso total da composição. Em alguns casos, particularmente quando o composto indutor compreende um bactericida, a composição de qualquer uma dessas formulações pode compreender de cerca de 0,001% em peso a cerca de 95% em peso do composto indutor com base no peso total da composição.
[0357] Quando a composição compreende dois ou mais compostos indutores, a composição pode compreender de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso de um primeiro indutor e de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso do segundo indutor com base no peso total da composição. Alternativamente, a composição pode compreender de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso do primeiro indutor e de cerca de 0,001% em peso do segundo indutor com base no peso total da composição. Alternativamente, a composição pode compreender de cerca de 0,001% em peso do primeiro indutor e de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso do segundo indutor com base no peso total da composição. De preferência, o composto indutor compreende de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso da composição, com base no peso total da composição, quando ela compreende um inibidor da calose sintase, um aminoácido, ácido salicílico, ácido oxálico, um betaína, uma prolina, um benzotiadiazol, um inibidor da succinato desidrogenase ou qualquer combinação dos mesmos. De preferência, o composto indutor compreende de cerca de 0,001% em peso a cerca de 95% em peso da composição, com base no peso total da composição, quando o composto indutor compreende um bactericida.
[0358] A composição pode incluir quer um agroquímico ou um transportador, que está associado com o polipeptídeo na natureza.
[0359] O agroquímico pode ser de ocorrência não natural em combinação com o polipeptídeo.
[0360] O agroquímico pode incluir, mas sem limitação, um conservante, um agente tamponante, um agente umectante, um surfactante, um agente de revestimento, um monossacarídeo, um polissacarídeo, um agente abrasivo, um pesticida, um inseticida, um herbicida, um nematicida, um bactericida, um fungicida, um miticida, um fertilizante, um bioestimulante, um corante, um umectante, um osmoprotetor, um antibiótico, um aminoácido, um agente de controle biológico, um osmoproteotr, ou uma combinação dos mesmos.
[0361] Quando a composição inclui um aminoácido, o aminoácido pode ser fornecido separadamente dos aminoácidos que compreendem o polipeptídeo. Por exemplo, um aminoácido isolado pode ser usado.
Aminoácidos adequados incluem quaisquer aminoácidos naturais ou não naturais. Por exemplo, a composição pode compreender cisteína.
[0362] O agroquímico pode compreender um ácido, tal como um ácido que está presente de síntese química de qualquer polipeptídeo aqui descrito. Por exemplo, ácido clorídrico, ácido acético, ou ácido trifluoroacético pode estar presente se o polipeptídeo for sintetizado, tal como por fermentação.
[0363] Quando o agroquímico é um ácido, ele pode compreender de cerca de 0,001 a cerca de 30% em peso, de cerca de 0,01 a cerca de 20% em peso, ou de cerca de 0,1 a cerca de 5% em peso do peso total da composição.
[0364] A menos que especificado de outra forma, cada agroquímico pode compreender de cerca de 0,01 até cerca de 99% em peso, de cerca de 0,1 a cerca de 70% em peso, ou desde cerca de 0,1 a cerca de 60% em peso do peso total da composição.
[0365] Quando a composição inclui um conservante, o conservante pode compreender aqueles baseados em diclorofeno e álcool benzílico hemi formal (PROXEL de ICI ou ACTIDIE RS de Thor Chemie e KATHON MK de Dow Chemical) e derivados de isotiazolinona, tal como alquilisotiazolinonas e benzisotiazolinonas (ACTICIDE MBS de Thor Chemie).
Como exemplos adicionais, conservantes adequados incluem MIT (2-metil-4- isotiazolin-3-ona), BIT (1,2-benzisotiazolin-3-ona, que pode ser obtido de Avecia, Inc. como PROXEL GXL como uma solução em hidróxido de sódio e dipropileno glicol), 5-cloro-2-(4-clorobenzil)-3(2H)-isotiazolona, 5-cloro-2-metil- 2H-isotiazol-3-ona, 5-cloro-2-metil-2H-isotiazol-3-ona, 5-cloro-2-metil-2H- isotiazol-3-ona-cloridrato, 4,5-dicloro-2-ciclo-hexil-4-isotiazolin-3-ona, 4,5- dicloro-2-octil-2H-isotiazol-3-ona, 2-metil-2H-isotiazol-3-ona, complexo de cloreto de 2-metil-2H-isotiazol-3-ona-cálcio, 2-octil-2H-isotiazol-3-ona, álcool benzílico hemiformal ou qualquer combinação dos mesmos.
[0366] Quando a composição inclui um agente de tamponante, o agente de tamponamento pode compreender potássio, ácido fosfórico, um sal fosfato, ácido cítrico, um sal citrato, um sal sulfato, MOPS, ou HEPES. O agente tamponante pode estabilizar o polipeptídeo na composição.
[0367] Quando a composição inclui um agente umectante, o agente umectante pode compreender organossilicones, polioxietoxilatos, polissorbatos, polietilenoglicol e derivados dos mesmos, etoxilatos, óleos de culturas, e polissacarídeos.
[0368] Quando a composição inclui um surfactante, o surfactante pode compreender um óleo de petróleo pesado, um destilado de petróleo pesado, um éster de ácido graxo de poliol, um éster de ácido graxo polietoxilado, um aril alquil polioxietileno glicol, um polioxietilenopolioxipropileno monobutil éter, um alquil amina acetato, um alquil aril sulfonato, um álcool poli- hídrico, um alquil fosfato, um álcool etoxilato, um alquilfenol etoxilato, um alquifenol etoxilato, um poliol alcoxilado, um alquil polietóxi éter, um alquilpolioxietileno glicerol, derivados etoxilados e de óleo de soja, um surfactante à base de organossilicone ou qualquer combinação dos mesmos.
Surfactantes podem ser incluídos em uma faixa de composições, incluindo aquelas para uso foliar.
[0369] Quando a composição inclui um agente de revestimento, o agente de revestimento pode compreender um agente de pegajosidade, polímeros, agentes de enchimento, ou agentes de aumento de volume.
[0370] O agente de pegajosidade pode incluir, mas não está limitado a, carboximetilcelulose e polímeros naturais e sintéticos na forma de pós, grânulos ou látexes, tal como goma arábica, quitina, álcool polivinico e acetato de polivinila, bem como fosfolipídios naturais, tal como cefalinas e lecitinas, e fosfolipídios sintéticos. Agentes de pegajosidade incluem aqueles compostos preferencialmente por um polímero adesivo que pode ser natural ou sintético sem efeito fitotóxico na semente a ser revestida. Agentes de pegajosidade que podem ser incluídos, sejam sozinhos ou em combinação, incluem, por exemplo, poliésteres, poliéter éster, polianidridos, poliéster uretanos, poliéster amidas; acetatos de polivinila; copolímeros de acetato de polivinila; álcoois polivinílicos e tilose; copolímeros de álcool polivinílico; polivinilpirrolidonas; polissacarídeos incluindo amidos, amidos modificados e derivados de amido, dextrinas, maltodextrinas, alginatos, quitosanas e celuloses, ésteres de celulose, éteres de celulose e ésteres éter de celulose incluindo etilceluloses, metilceluloses, hidroximetilceluloses, hidroxipropilceluloses e carboximetilcelulose; gorduras; óleos; proteínas, incluindo caseína, gelatina e zeínas; goma arábica; goma-laca; cloreto de vinilideno e copolímeros de cloreto de vinilideno; lignossulfonatos, em particular lignossulfonatos de cálcio; poliacrilatos, polimetacrilatos e copolímeros acrílicos; polivinilacrilatos; óxido de polietileno; polibutenos, poli-isobutenos, poliestireno, polibutadieno, polietilenoaminas, polietilenamidas; polímeros e copolímeros de acrilamida; acrilato de poli-hidroxietil, monômeros de metilacrilamida; e policloropreno, ou qualquer combinação dos mesmos.
Agentes de pegajosidade podem ser usados em uma faixa de composições, incluindo aqueles para tratamento de sementes.
[0371] Quando a composição inclui um agente de abrasão, o agente de abrasão pode compreender talco, grafite ou uma combinação de ambos.
[0372] Um umectante é uma substância higroscópica que auxilia na retenção de umidade. Quando a composição inclui um umectante, o umectante pode compreender: glicerol, glicerina, um derivado de glicerol (por exemplo, monosterato de glicerol, triacetato de glicerol, triacetina, propileno glicol, hexileno glicol ou butileno glicol), trietileno glicol, tripolipropileno glicol, triacetato de glicerol, sacarose, tagatose, um álcool de açúcar ou um poliol de açúcar (por exemplo, glicerol, sorbitol, xilitol, manitol ou mantitol), um poliol polimérico (por exemplo, polidextrose, um colágeno, um gel de aloe ou aloe vera), ou um alfa hidroxiácido (por exemplo ácido láctico, mel, melaço, quillaia, hexametafosfato de sódio, cloreto de lítio ou ureia). Umectantes sintéticos também podem compreender: butileno glicol e extrato de tremela.
[0373] Quando a composição inclui um pesticida, o pesticida pode compreender um insecticida, um herbicida, um fungicida, um bactericida, um nematicida, um miticida, ou qualquer combinação dos mesmos.
[0374] Quano a composição incljui um inseticida, o inseticida pode compreender clotianindina, imidacloprid, um organofosfato, um carbamato, um piretroide, um acaricida, um alquil ftalato, ácido bórico, um borato, um fluoreto, enxofre, uma uréia substituída haloaromática, um éster de hidrocarboneto, um inseticida de base biológica, ou uma combinação dos mesmos. Por exemplo, o inseticida pode compreender clotianidina ou imidacloprida.
[0375] O agroquímico pode compreender um herbicida. O herbicida pode compreender 2,4-D, 2,4-DB, acetocloro, acifluorfen, alaclor,
ametrina, atrazina, aminopiralida, benefin, bensulfuron, bensulfuron metil bensulida, bentazon, bispiribac sódio, bromacil, bromoxinil, butilato, carfentrazona, clorimuron, ácido 2-clorofenoxi acético, clorsulfuron, chlorimuron etil, cletodim, clomazona, clopiralid, cloransulam, CMPP-P-DMA, cicloato, DCPA, desmedifam, dicamba, diclobenil, diclofop, 2,4-diclorofenol, ácido diclorofenoxiacético, diclorprop, diclorprop-P, diclosulam, diflufenzopir, dimetanamida, sal de dimetil amina de ácido 2,4-diclorofenoxiacético, diquat, diuron, DSMA, endotal, EPTC, etalfluralin, etofumesato, fenoxaprop, fluazifop- P, flucarbazona, flufenacet, flumetsulam, flumiclorac, flumioxazin, fluometuron, fluroxipir, fluorxipir 1-metileptliester, fomesafen, sal de sódio de foresafen, foransulfuron, glufosinato, glufosinato-amônio, glifosato, halossulfuron, halossulfuron-metil, hexazinona, ácido 2-hidroxifenoxi ácido, ácido 4- hidroxifenoxi ácido, imazametabenz, imazamox, imazapic, imazaquin, imazetapir, isoxaben, isoxaflutol, lactofen, linuron, mazapir, MCPA, MCPB, mecoprop, mecrocop-P, mesotriona, metolaclor-s, metribuzina, metsulfuron, metsulfuron-metil, molinato, MSMA, napropamida, naptalam, nicosulfuron, norflurazon, orizalina, oxadiazon, oxifluorfen, paraquat, ácido pelargônico, pendimetalina, fenmedifam, picloram, primisulfuron, prodiamina, prometrina, pronamida, propanil, prossulfuron, pirazon, piritiobac, piroxassulfona, quinclorac, quizalofop, rinsulfuron, setoxidim, siduron, simazina, sulfentrazona, sulfometuron, sulfosulfuron, tebutiuron, terbacil, tiazopir, tifensulfuron, tifensulfuron-metil, tiobencarb, tralcoxidim, trialato, triassulfuron, tribenuron, tribernuron-metol, triclopir, trifluralin, triflussulfuron, ou qualquer combinação dos mesmos.
[0376] Quando a composição inclui um nematicida, o nematicida pode compreender Bacillus firmus, fluopiram, nematicidas antibióticos, tal como abamectina; nematicidas de carbamato, tal como acetoprol, Bacillus chitonosporus, cloropicrina, benclotiaz, benomil, Burholderia cepacia,
carbofurano, carbossulfano e cleotocard; dazomet, DBCP, DCIP, alanicarb, aldicarb, aldoxicarb, oxamil, diamidafos, fenamifos, fostietano, fosfamidon, cadusafos, clorpirifos, diclofention, dimetoato, etoprofos, fensulfotion, fostiazato, harpinas, heterofos, imiciafos, isamidofos, isazofos, metomil, mecarfon, Myrothecium verrucaria, Paecilomyces lilacinus, Pasteuria nishizawae (incluindo esporos dos mesmos), forato, fosfocarb, terbufos, tionazina, triazofos, tioxazafeno, dazomet, 1,2-dicloropropano, 1,3- dicloropropeno, furfural, iodometano, metam, metil brometo, metil isotiocianato, xilenol, pidiflumetofeno ou qualquer combinação dos mesmos. Por exemplo, o nematicida pode compreender cepa Bacillus firmus i-2580, Pasteuria nishizawae (incluindo seus esporos) ou fluopiram.
[0377] Quando a composição inclui um bactericida, o bactericida pode compreender estreptomicina, penicilinas, tetraciclinas, oxitetraciclina, casugamicina, ampicilina, ácido oxolínico, clorotetraciclina, óxido de cobre, hidróxido de cobre, sulfeto de cobre, sulfato de cobre, cobre de partículas finas ou qualquer combinação dos mesmos. Por exemplo, o bactericida pode compreender oxitetraciclina.
[0378] Agentes de controle biológico são amplamente definidos como microrganismos que podem ser usados em vez de pesticidas sintéticos ou fertilizantes. Quando a composição inclui um agente de controle biológico, o agente de controle biológico pode compreender Bacillus thuringiensis, Bacillus megaterium, Bacillus mycoides isolate J, Bacillus methylotrophicus, Bacillus vallismortis, Chromobacterium subtsugae, Delftia acidovorans, Streptomyces lydicus, Streptomyces colombiensis, Streptomyces galbus K61, Penicillium bilaii, Banda de Lupinus albus doce (BLAD), uma cepa Aureobasidium pullalans, uma cepa Bacillus subtilis produtora de lipopeptídeo, uma cepa Bacillus amyloliquefaciens produtora de lipopeptídeo, uma cepa Bacillus firmus ou uma cepa Bacillus pumilus. Como outro exemplo, quando a composição inclui um agente de controle biológico, o agente de controle biológico pode compreender Bacillus subtilis cepa QST713, Bacillus pumulis cepa QST 2808, Aureobasidium pullalans cepa DMS 14940 Aureobasidium pulladans cepa 14941, Penicillium bilaii, Banda de Lupinus albus doce (BLAD) e/ou uma cepa de Aureobasidium pullalans.
[0379] Quando a composição compreende uma osmoprotetor o osmoprotetor pode compreender uma betaína ou uma prolina. A betaína pode compreender cloridrato de betaína ou glicina betaína. A prolina pode compreender L-prolina.
[0380] O agroquímico pode incluir um fungicida. O fungicida pode compreender um fungicida de estrobilurina, um fungicida de triazol, um fungicida de inibidor da succinato desidrogenase, uma laminarina, uma feilamida, um metil benzimidazol carbamato, uma anilino-pirimidina, um fenilpirrol, uma dicarboximida, um carbamato, um piperidinil-tiazol-isoxazolina, um inibidor de desmetilação, um fosfonato, um cobre inorgânico, um enxofre inorgânico, um tiocarbamato, um ditiocarbamato, uma ftalimida, uma cloronitrila ou uma sulfamida.
[0381] O fungicida pode compreender um polipeptídeo de harpina ou tipo harpina. Polipeptídeos de harpina e tipo harpina são descritos na Publicação de Patente US 2019/0023750, aqui incorporada por referência em sua totalidade. Polipeptídeos de harpina ou tipo harpina podem ser derivados de espécies Xanthomonas ou diversos gêneros de bactérias, incluindo Pantoea sesami, Erwinia gerudensis, Pantoea sesami ou Erwinia gerudensis.
Polipeptídeos fungicidas tipo harpina adicionais podem ser derivados da proteína tipo HpaG de comprimento total de Xanthamonas citri.
[0382] Polipeptídeos tipo harpina representativos que podem ser incorporados nas composições aqui como um fungicida são descritos na Tabela 21, abaixo. As harpinas podem ser vantajosamente injetadas em uma planta (isto é, em um tronco de árvore) para gerar uma resposta imune em combinação com os polipeptídeos bioativos e indutores aqui descritos.
TABELA 21 POLIPEPTÍDEOS DE HARPINA E TIPO HARPIN FUNGICIDAS SEQ ID NO: Aminoácido de Sequência de Peptídeo Tipo harpina (tipo HpaG) SEQ ID NO: 788 Espécie Xanthomonas MW 2.626,35 Da Tipo Harpin (tipo HpaG) SEQ ID NO: 789 Espécie Xanthomonas MW 2.626,35 Da Tipo Harpin (tipo HpaG) SEQ ID NO: 790 Espécie Xanthomonas MW 2.626,35 Da Proteína Tipo HpaG SEQ ID NO: 791 Xanthamonas citri Fração Ativa Homóloga HpaG SEQ ID NO: 792 Pantoea sesami Fração Ativa Homóloga HpaG SEQ ID NO: 793 Erwinia gerudensis
[0383] O fungicida pode compreender acibenzolar-S-metil, aldimorf, alumínio-tris, ametocradin, ampropilfos, ampropolfos potássio, andoprim, anilazina, azaconazol, azoxistrobina, benalaxil, benodanil, benomil, benzamacril, benzamacryl-isobutil, benzovindflupyr, bialafos, binapacril, bifenil, bitertanol, bixafen, blasticidin-S, boscalid, bromuconazol, bupirimato, butiobato, polissulfeto de cálcio, capsimicina, captafol, captan, carbendazim, carvon, quinometionato, clobentiazona, cloroantraniliprol, clorfenazol, cloroneb, cloropicrina, clorotalonil, clozolinato, clozilacon, cresilim metil, cufraneb, cimoxanil, ciproconazol, ciprodinil, ciprofuram, debacarb, diclorofeno,
diclobutrazol, diclofluanid, diclomezina, dicloran, dietofencarb, dimetirimol,
dimetomorfe, dimoxistrobina, diniconazol, diniconazol-M, dinocape,
difenilamina, dipiritiona, ditalinfos, ditianona, dodemorfo, dodina, drazoxolon,
edifenfos, epoxiconazol, etaconazol, etirimol, etridiazol, famoxadona,
fenamidona, fenapanil, fenarimol, fenbuconazol, fenfuram, fenitropan,
fenpiclonil, fenpropidina, fenpropimorfo, acetato de fentina, hidróxido de fentina,
ferbam, ferinzona, fluazinam, fludioxonil, flumetover, fluopiram, fluoromida,
fluoxastrobin fluquinconazol, flurprimidol, flusilazol, flussulfamida, flutolanil,
flutriafol, folpet, fosetil-alumínio, fosetil-sódio, ftalida, fuberidazol, furalaxil,
furametpir, furcarbonil, furconazol, furconazol-cis, furmeciclox, guazatina,
hexaclorobenzeno, hexaconazol, himexazol, imazalil, imibenxonazol,
iminoctadina, iminoctadina albesilato, iminoctadina triacetato, iodocarb,
iprobenfos (IBP), iprodiona, irumamicina, isoprotiolano, isovalediona,
casugamincina, cresoxim-metil, preparações de cobre, tal como: hidróxido de cobre, naftenato de cobre, oxicloreto de cobre, sulfato de cobre, óxido de cobre, oxina-cobre e mistura Bordeaux, mancopper, mancozebe,
mandipropamida, manebe, meferinzona, mefentrifuconazol, mepanipirim,
mepronil, metalaxil, metconazol, metalzxil, metassulfocarbe, metfuroxam,
metiram, metomeclam, metominostrobina, metrafenona, metsulfovax,
mildiocina, miclobutanil, miclozolin, níquel dimetilditiocarbamato, nitrotal-
isopropil, nuarimol, ofurace, oxadixil, oxamocarb, oxatiapiprolina, ácido oxolínico, oxicarboxim, oxifentiin, paclobutrazol, perfurazoato, penconazol,
pencicuron, pentiopirade, fosdifeno, picoxistrobina, pimaricina, piperalina,
polioxina, polioxorima, fosfito de potássio, probenazol, procloraz, procimidona,
propamocarbe, propanosina-sódio, propiconazol, propineb, prototiocinazol,
pidiflumetofen, pirazofos, pirifenox, pirimetanil, piroquilon, piroxifur, quinconazol, quinoxifeno, quintozeno (PCNB), uma estrobilurina, enxofre e preparações de enxofre, tebuconazol, tecloftalam, tecnazeno, tetciclase,
tetraconazol, tiabendazol, ticiofen, tifluzamida, tiofanato-metil tioximid, tolclofos-
metil, tolilfluanida, triadimefon, triadimenol, triazbutil, um triazol, triazóxido,
triclamida, triciclazol, triclopir, tridemorfo, trifloxistrobina, triflumizol, triforina,
uniconazol, validamicina A, vinclozolina, viniconazol, zarilamida, zinebe, ziram e também Dagger G, OK-8705, OK-8801, a-(1,1-dimetiletil)-(3-(2-fenoxietil)-1H-
1,2,4-triazol-1-etanol, a-(2,4-diclorofenil)-[3-fluoro-3-propil-1H--1,2,4-triazol-1-
etanol, a-(2,4-dicloroenil)-[3-metox-a-metil-1H-1,2,4-triazol e-1-etanol, a-(5-
metil-1,3-dioxan-5-il)-[3-[[4-(trifluorometil)-fenil]-metileno]-1H-1,2,4-triazol-1-
etanol, (5RS,6RS)-6-hidroxi-2,2,7,7-tetrametil-5-(1H-1,2,4-triazol-1-il)-3-
octanona, (E)-a-(metoximino)-N-metil-2-fenox-fenilacetamida, 1-isopropil{2-
metil-1-[[[1-(4-metilfenil)-etil]-amino]-carbonil]-propil}carbamato, 1-(2,4-
diclorofenil)-2-(1H-1,2,4-triazol-1-il)-etanona-O-(fenil metil)-oxima, 1-(2-metil-1-
natalenil)-1H-pirrol-2,5-diona, 1-(3,5-diclorofenil)-3-(2-propenil)-2,5-
pirrolidindiona, 1-[(di-iodometil)-sulfonil]-4-metil-benzeno, 1-[[2-(2,4-diclorofenil)-
1,3-dioxolan-2-il]-metil]-1H-imidazol, 1-[[2-(4-clorofenil)-3-feniloxiranil]-metil]-1H-
1,2,4-triazol, 1-[1-[2-[(2,4-diclorofenil)-metoxi]-fenil]-etenil]-1H-imidazol, 1-metil-
5-nonil-2-(fenilmetil)-3-pirroIidinol, 2',6'-dibromo-2-metil-4'-trifluorometoxi-4'-
trifluoro-metil-1,3-tiazol-carboxanilida, 2,2-dicloro-N-[1-(4-clorofenil)-etil]-1-etil-3-
metil-ciclopropanocarboxamida, 2,6-dicloro-5-(metiltio)-4-pirimidinil-tiocianato,
2,6-dicloro-N-(4-trifluorometilbenzil)-benzamida, 2,6-dicloro-N-[[4-(trifluorometl)-
fenil]-metil]-benzamida, 2-(2,3,3-tri-iodo-2-propenil)-2H-tetrazol, 2-[(1-metiletil)-
sulfonil]-5-(triclorometil)-1,3,4-tiadiazol, 2-[[6-desoxi-4-O-(4-0-metil-(3-D-
glicopiranosil)-a-D-glicopiranosil]-amino]-4-metoxi-1H-pirrolo [2,3-d]pirimidina-5-
carbonitrila, 2-aminobutano, 2-bromo-2-(bromometil)-pentanodinitrila, 2-cloro-N-
(2,3-di-hidro-1,1,3-trimetil-1H-inden-4-il)-3-piridinacarboxamida, 2-cloro-N-(2,6-
dimetilfenil)-N-(isotiocianatometil)-acetamida, 2-fenilfenol (OPP), 3,4-dicloro-1- [4-(difluorometoxi)-fenil]-pirrol-2,5-diona, 3,5-dicloro-N-[ciano[(1-metil-2-
propinil)-oxi]-metil]-benzamida, 3-(1,1-dimetilpropil-1-oxo-1H-indeno-2-
carbonitrila, 3-[2-(4-clorofenil)-5-etoxi-3-isoxazolidinil]-piridina, 4-cloro-2-ciano- N,N-dimetil-5-(4-metilfenil)-1H-imidazol-l-sulfonamida, 4-metil-tetrazol[1,5- a]quinazolin-5(4H)-ona, 8-(1,1-dimetiletil)-N-etil-N-propil-1,4- dioxaspiro[4,5]decano-2-metanamina, 8-hidroxiquinolina sulfato, 9H-xanteno-2- [(fenilamino)-carbonil]-9-carboxílico hidrazida, bis-(1-metiletil)-3-metil-4-[(3- metilbenzoil)-oxi]-2,5-tiofenodicarboxilato, cis-1-(4-clorofenil)-2-(1H-1,2,4- triazol-1-il)-ciclo-heptanol, cis-4-[3-[4-(1,1-dimetilpropil)-fenil-2-metilpropil]-2,6- dimetil-morfolina cloridrato, etil [(4-clorofenil)-azo]-cianoacetato, bicarbonato de potássio, sal de metanotetratiol-sódio, metil 1-(2,3-di-hidro-2,2-dimetil-inden-1- il)-1H-imidazol-5-carboxilato, metil N-(2,6-dimetilfenil)-N-(5-isoxazolilcarbonil)- DL-alaninato, metil N-(cloroacetil)-N-(2,6-dimetilfenil)-DL-alaninato, N-(2,3- dicloro-4-hidroxifenil)-1-metil-ciclo-hexanocarboxamida, N-(2,6-dimetil fenil)-2- metoxi-N-(tetra hidro-2-oxo-3-furanil)-acetamida, N-(2,6-dimetil fenil)-2-metoxi- N- (tetra-hidro-2-oxo-3-tienil)-acetamida, N-(2-cloro-4-nitrofenil)-4-metil-3-nitro- benzenossulfonamida, N-(4-ciclo-hexilfenil)-1,4,5,6-tetra-hidro-2-pirimidinamina, N-(4-hexilfenil)-1,4,5,6-tetra-hidro-2-pirimidinamina, N-(5-cloro-2-metilfenil)-2- metoxi-N-(2-oxo-3-oxazolidinil)-acetamida, N-(6-metoxi)-3-piridinil)- ciclopropanocarboxamida, N-[2,2,2-tricloro-1-[(cloroacetil)-amino]-etil]- benzamida, N-[3-cloro-4,5-bis(2-propiniloxi)-fenil]-N’-metoxi-metanimida amida, N-formil-N-hidroxi-DL-alanina-sal de sódio, 0,0-dietil[2-(dipropilamino)-2- oxoetil]-etilfosforamidotioato, 0-metil S-fenil fenilpropilfosforoamidotioato, S- metil 1,2,3-benzotiadiazol-7-carbotioato e espiro[2H]-1-benzopirano-2,1'(3'H)- isobenzofuran]-3'-ona, N-triclorometil)tio-4-ciclo-hexano-1,2-dicarboximida, diamida tetrametiltioperoxidicarbônica, metil N-(2,6-dimetilfenil)-N- (metoxiacetil)-DL-alaninato, 4-(2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-4-il)-1H-pirrol-3- carbonitril, ou qualquer combinação dos mesmos.
[0384] Quando os polipeptídeos são formulados ou aplicados em combinação com fungicidas disponíveis comercialmente, as composições podem proporcionar uma camada extra de proteção para intensificar prevenção ou espalhamento de doença numa planta. A combinação dos polipeptídeos com um fungicida (por exemplo, um fungicida da classe succinato desidrogenase) pode proteger uma planta contra uma infecção fúngica primária ou secundária que pode ocorrer se a planta ficar comprometida ou enfraquecida devido à exposição a tensçao ou doença abiótica.
[0385] O fungicida de estrobilurina pode compreender uma Estrobilurina A, uma Estrobilurina B, uma Estrobilurina C, uma Estrobilurina D, uma Estrobilurina E, uma Estrobilurina F, uma Estrobilurina G, uma Estrobilurina H, uma Azoxistrobina, uma Trifloxistrobina, um Kresoxim metil, uma Fluoxastrobina, Picoxistrobina ou qualquer combinação dos mesmos.
[0386] O fungicida de estrobilurina pode compreender um fungicida de estrobilurina ocorrendo naturalmente, tal como uma Azoxistrobina, uma Trifloxistrobina, um Kresoxim metil, uma Fluoxastrobina, ou qualquer combinação dos mesmos. Por exemplo, o fungicida de estrobilurina pode compreender uma Trifloxistrobina, Fluoxastrobina ou Picoxistrobina. Fungicidas de estrobilurina são usados para controlar uma faixa de doenças fúngicas, incluindo fungos aquáticos, mildio da mdrugada, mildio em pó, fungos das manchas nas folhas e ferrugem, podridão de frutas e ferrugens. Eles são úteis para tratar uma variedade de culturas, incluindo cereais, plantações, frutas, nozes, vegetais, gramados e plantas ornamentais.
[0387] O fungicida de triazol pode compreender protioconazol, imidazol, imidazol, proclorazol, propiconazol, triflumizol, diniconazol, flusilazol, penconazol, hexaconazol, ciproconazol, miclobutanil, tebuconazol, difenoconazol, tetraconazol, fenbuconazol, epoxiconazol, metconazol, fluquinconazol, triticonazol ou qualquer combinação dos mesmos.
[0388] O fungicida inibidor de succinato desidrogenase pode compreender uma fenil-benzamida, fenil-oxo-etil tiofeno amida, piridinil-etil-
benzamida, furan-carboxamida, oxatin-carboxamida, tiazol-carboxamida, pirazol-4-carboxamida, N-ciclopropil-N-benzil- pirazol-carboxamida, N-metoxi- (fenil-etil)-pirazol-carboxamida, piridina-carboxamida ou pirazina-carboxamida, pidiflumetofen, benodanil, flutolanil, mepronil, isofetamida, fluopiram, fenifuram, carboxina, oxicarboxina, tifluzamida, benzovindiflupir, bixafen, fluindapir, fluxapiroxade, furametpir, inpyrfluxam, isopirazam, penflufen, pentiopirade, sedaxano, isoflucipram, pydiflumetofen, boscalide, piraziflimid ou qualquer combinação dos mesmos.
[0389] Por exemplo, o fungicida inibidor da succinato desidrogenase pode compreender uma fenil-benzamida, fenil-oxo-etil tiofeno amida, piridinil-etil-benzamida, furan-carboxamida, oxatin-carboxamida, tiazol- carboxamida, pirazol-4-carboxamida, N-ciclopropil-N-benzil-pirazol- carboxamida, N-metoxi-(fenil-etil)-pirazol-carboxamida, piridina-carboxamida ou pirazina-carboxamida, pidiflumetofen, isofetamid, oxicarboxin, benzovindiflupir, bixen, fluindapir, inpirfluxam, isopirazam, pentiopirad, isoflucipram, pidiflumetofen, piraziflumid ou qualquer combinação dos mesmos.
[0390] Por exemplo, o inibidor da succinato desidrogenase pode compreender bixafen.
[0391] A composição pode compreender um polipeptídeo promotor de pelo de raiz ou um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso e um inibidor de succinato desidrogenase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo promotor de pelo de raiz ou um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 745-766 e um inibidor da succinato desidrogenase. O inibidor da succinato desidrogenase pode compreender bixafen. O polipeptídeo promotor de pelo de raiz ou o polipeptídeo promotor de pelo de raiz retroinverso pode compreender um polipeptídeo livre.
[0392] A composição pode compreender flagelina ou polipeptídeo associado a flagelina ou um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso e um inibidor da succinato desidrogenase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 226, 289, 290, 291, 293, 294, 295, 300, 437, 526, 532, 534, 536, 538, 540, 571–585 e 587–603 ou um polipeptídeo de flagelina retro inverso ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 376-525, 527, 529, 531, 533, 535, 537, 539 ou 588, ou 586 e um inibidor da succinato desidrogenase. O inibidor da succinato desidrogenase pode compreender bixafen. A serina protease pode compreender um polipeptídeo livre.
[0393] A composição pode compreender um inibidor da glucanase e um inibidor da succinato desidrogenase. Por exemplo, a composição pode compreender glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 e 767-776 e um inibidor da succinato desidrogenase. O inibidor da succinato desidrogenase pode compreender bixafen. A glucanase pode compreender um polipeptídeo livre.
[0394] A composição pode compreender uma quitinase e um inibidor da succinato desidrogenase. Por exemplo, a composição pode compreender uma quitinase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 777 ou 778 e um inibidor da succinato desidrogenase. O inibidor da succinato desidrogenase pode compreender bixafen. A quitinase pode compreender um polipeptídeo livre.
[0395] A composição pode compreender uma serina protease e um inibidor da succinato desidrogenase. Por exemplo, a composição pode compreender uma serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 721, 722 e 794-796 e um inibidor da succinato desidrogenase. O inibidor da succinato desidrogenase pode compreender bixafen. A serina protease pode compreender um polipeptídeo livre.
[0396] A composição pode compreender um tionina e um inibidor da succinato desidrogenase. Por exemplo, a composição pode compreender uma tionina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 620-719 e um inibidor da succinato desidrogenase. O inibidor da succinato desidrogenase pode compreender bixafen. O polipeptídeo de tionina ou tipo tionina pode compreender um polipeptídeo livre.
[0397] A composição pode compreender um polipeptídeo de ACC desaminase e um inibidor da succinato desidrogenase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de ACC desaminase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 723-730 e um inibidor da succinato desidrogenase. O inibidor da succinato desidrogenase pode compreender bixafen. A ACC desaminase pode compreender um polipeptídeo livre.
[0398] Os polipeptídeos de iniciação bioativa podem ser distribuídos em combinação com estrobilurinas e fungicidas de triazol, especialmente fluoxastrobina ou trifloxistrobina em combinação com protioconazol. Como um exemplo adicional, os polipeptídeos de iniciação bioativa podem ser administrados em combinação com um fungicida inibidor da succinato desidrogenase (por exemplo, bixafen).
[0399] Além disso, o fungicida pode compreender azoxistrobina, carboxina, difenoconazol, fludioxonil, fluxapiroxade, ipconazol, mefenoxam, piraclostrobina, siltiofame, sedaxane, tirame, triticonazol, ou qualquer combinação dos mesmos.
[0400] Além de fungicidas aplicados a folhas, como aqui descrito, os polipeptídeos de iniciação bioativa podem ser fornecidos em combinação com um fungicida, um inseticida, um nematicida, um bactericida e um acaricida ou qualquer agroquímico que seja um agente biológico.
[0401] O agroquímico pode incluir um fertilizante. O fertilizante pode compreender sulfato de amônio, nitrato de amônio, nitrato de sulfato de amônio, cloreto de amônio, bissulfato de amônio, polissulfeto de amônio, tiossulfato de amônio, amônia aquosa, amônia anidra, polifosfato de amônio, sulfato de alumínio, nitrato de cálcio, cálcio nitrato, sulfato de cálcio, magnesita calcinada, calcário calcítico, óxido de cálcio, nitrato de cálcio, calcário dolomítico, cal hidratada, carbonato de cálcio, fosfato de diamônio, fosfato monoamônio, nitrato de magnésio, sulfato de magnésio, acetato de potássio, nitrato de potássio, cloreto de potássio, sulfato de potássio e magnésio, fosfato de potássio, fosfato de potássio tribásico, sulfato de potássio, nitratos de sódio, calcário magnesiano, magnésia, uréia, uréia-formaldeídos, nitrato de uréia e amônio, uréia revestida com enxofre, uréia revestida com polímero, diureia de isobutilideno, K2SO4–Mg2SO4, cainita, silvinita, cieserita, sais de Epsom, elementar enxofre, marga, conchas de ostras moídas, farinha de peixe, bolos de óleo, esterco de peixe, farinha de sangue, fosfato de rocha, super pho esfatos, escórias, farinhas de ossos, cinzas de madeira, esterco, guano de morcego, turfa, composto, areia verde, farelo de algodão, farelo de penas, farelo de caranguejo, emulsão de peixe, emulsão de peixe, ácido húmico ou qualquier combinação dos mesmos.
[0402] O fertilizante pode compreender um fertilizante líquido ou um fertilizante seco.
[0403] O agroquímico pode compreender um material fertilizante de micronutrientes, o material fertilizante de micronutrientes compreendendo ácido bórico, um borato, uma frita de boro, sulfato de cobre, uma frita de cobre, um quelato de cobre, um deca-hidrato de tetraborato de sódio, sulfato de ferro, óxido de ferro, ferro sulfato de amônio, uma frita de ferro, um quelato de ferro,
um sulfato de manganês, um óxido de manganês, um quelato de manganês, um cloreto de manganês, uma frita de manganês, um molibdato de sódio, ácido molibdânico, um sulfato de zinco, um óxido de zinco, um carbonato de zinco, uma frita de zinco, fosfato de zinco, um quelato de zinco ou qualquer combinação dos mesmos.
[0404] O agroquímico pode compreender um inseticida, o inseticida compreendendo um organofosfato, um carbamato, um piretroide, um acaricida, um alquil ftalato, ácido bórico, um borato, um fluoreto, enxofre, uma ureia substituída haloaromática, um éster de hidrocarboneto, um inseticida de base biológica ou qualquer combinação dos mesmos.
[0405] Quando a composição inclui um bioestimulante, o bioestimulante pode compreender um extrato de alga marinha, um elicitador, um polissacarídeo, um monossacarídeo, um extrato de proteína, um extrato de soja, um ácido húmico, um hormônio vegetal, um regulador de crescimento de planta ou qualquer combinação dos mesmos.
[0406] Uma variedade de corantes pode ser empregada, incluindo cromóforos orgânicos classificados como nitroso, nitro, azo, incluindo monoazo, bisazo e poliazo, difenilmetano, triarilmetano, xanteno, metano, acridina, tiazol, tiazina, indamina, indofenol, azina, oxazina, antraquinona, ftalocianina ou qualquer combinação dos mesmos.
[0407] A composição pode ainda compreender um transportador.
[0408] O transportador da composição pode incluir, mas sem limitação, água, turfa, trigo, farelo, vermiculita, argila, solo pasteurizado, carbonato de cálcio, bicarbonato de cálcio, dolomita, gesso, bentonita, uma argila, um fosfato de rocha, um composto de fósforo, dióxido de titânio, húmus, talco, alginato, carvão ativado ou uma combinação dos mesmos.
[0409] A composição pode estar na forma de uma solução aquosa, uma pasta ou dispersão, uma emulsão, um sólido, tal como um pó ou grânulos, ou qualquer outra forma desejável para aplicar a composição a uma planta ou parte de planta.
[0410] A composição pode compreender uma maioria dos polipeptídeos de iniciação bioativa e/ou compostos indutores com o restante da composição ser de agroquímicos ou transportadoras. Mais especificamente, a composição pode compreender de cerca de 0,00001% a cerca de 95% dos polipeptídeos, de cerca de 0,1 a cerca de 80% em peso dos agroquímicos e de cerca de 5 a cerca de 50% em peso de transportador com base no peso total da composição. Alternativamente, a composição pode compreender de cerca de 0,01 a cerca de 5% em peso dos polipeptídeos, de cerca de 0,2 a cerca de 70% em peso dos agroquímicos e de cerca de 10 a cerca de 30% em peso de transportador com base no peso total da composição, ou a composição pode compreender de cerca de 0,05% em peso a cerca de 1% em peso dos polipeptídeos, de cerca de 30 a cerca de 60% em peso dos agroquímicos e de cerca de 40 a cerca de 69% em peso de transportador com base no peso total da composição. Alternativamente, a composição pode compreender qualquer quantidade detectável dos polipeptídeos e de cerca de 0,1 a cerca de 80% em peso dos agroquímicos e de cerca de 5 a cerca de 50% em peso do transportador, com base no peso total da composição.
[0411] A composição pode compreender uma maioria de agroquímicos ou transportadores com o restante sendo de polipeptídeos e/ou compostos indutores. Mais especificamente, a composição pode compreender 0,0000005% em peso a cerca de 10% em peso do(s) polipeptídeo(s), de cerca de 0,01% a cerca de 99% em peso do agroquímico distinto do composto indutor e de cerca de 1 a cerca de 99,99% em peso de transportador, com base no peso total da composição. Alternativamente, a composição pode compreender de cerca de 0,001% a cerca de 5% do(s) polipeptídeo(s), de cerca de 0,1% a cerca de 70% em peso do agroquímico e de cerca de 25 a cerca de 99,9% em peso de transportador com base no peso total da composição. Ainda mais especificamente, a composição pode compreender de cerca de 0,005% a cerca de 0,1% do(s) polipeptídeo(s), de cerca de 0,1% a cerca de 60% em peso do agroquímico e de cerca de 40 a cerca de 99,8% em peso de transportador com base no peso total da composição.
Alternativamente, a composição pode compreender qualquer quantidade detectável dos polipeptídeos, qualquer quantidade detectável do composto indutor e de cerca de 1 a 99,99% em peso do transportador com base no peso total da composição. Em qualquer dessas composições, a composição pode compreender de cerca de 0,0000001% em peso a cerca de 95% em peso do composto indutor com base no peso total da composição. Por exemplo, a composição pode compreender de cerca de 0,001% em peso a cerca de 95% em peso com base no peso total da composição.
[0412] Ainda mais especificamente, a composição pode compreender de cerca de 0,00001% a cerca de 95% dos polipeptídeos, de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso do composto indutor, de cerca de 0,1 a cerca de 80% em peso dos agroquímicos e de cerca de 5 a cerca de 50% em peso de transportador com base no peso total da composição. Alternativamente, a composição pode compreender de cerca de 0,01 a cerca de 5% em peso dos polipeptídeos, de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso do composto indutor, de cerca de 0,2 a cerca de 70% em peso dos agroquímicos e de cerca de 10 a cerca de 30% em peso de transportador com base no total peso da composição, ou a composição pode compreender de cerca de 0,05% em peso a cerca de 1% em peso dos polipeptídeos, de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso do composto indutor, de cerca de 30 a cerca de 60% em peso dos agroquímicos, e de cerca de 40 a cerca de 69% em peso de transportador com base no peso total da composição. Alternativamente, a composição pode compreender qualquer quantidade detectável dos polipeptídeos e qualquer quantidade detectável do composto indutor e de cerca de 0,1 a cerca de 80% em peso dos agroquímicos e de cerca de 5 a cerca de 50% em peso do transportador, com base no peso total da composição
[0413] Quando a composição compreende dois ou mais compostos indutores, a composição pode compreender de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso de um primeiro indutor e de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso do segundo indutor, de cerca de 0,1 a cerca de 80% em peso dos agroquímicos e de cerca de 5 a cerca de 50% em peso de transportador com base no peso total da composição. Alternativamente, a composição pode compreender de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso do primeiro indutor e de cerca de 0,001% em peso do segundo indutor, de cerca de 0,1 a cerca de 80% em peso dos agroquímicos e de cerca de 5 a cerca de 50% em peso de transportador com base no peso total da composição. Alternativamente, a composição pode compreender de cerca de 0,001% em peso do primeiro indutor e de cerca de 0,000001% em peso do segundo indutor, de cerca de 0,1 a cerca de 80% em peso dos agroquímicos e de cerca de 5 a cerca de 99% em peso de transportador com base no peso total da composição.
[0414] O composto indutor pode compreender de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso da composição com base no peso total da composição. De preferência, o composto indutor compreende de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso da composição com base no peso total da composição quando o composto indutor compreende um inibidor da calose sintase, um aminoácido, ácido salicílico, ácido oxálico, um betaína, uma prolina, um benzotiadiazol ou qualquer combinação dos mesmos. O composto indutor pode compreender de cerca de 0,001% em peso a cerca de 95% em peso com base no peso total da composição. De preferência, o composto indutor compreende de cerca de 0,001% em peso a cerca de 95% em peso com base no peso total da composição, quando o composto indutor compreende um bactericida.
[0415] Polipeptídeos de iniciação bioativa, tal como a flagelina e polipeptídeos associados à flagelina, tionina (família da defensina) ou outros polipeptídeos de iniciação bioativa de promoção ou alteração de crescimento, tal como RHPP, serina proteases, glucanases, amilases, quitinases ou ACC desaminases podem ser fornecidos como composições que podem ser ou aplicadas exogenamente e/ou endogenamente a uma planta ou uma parte de planta e fornecem crescimento de planta intensificado, produtividade e saúde intensificada dessa planta ou parte de planta, conforme descrito em mais detalhes abaixo.
[0416] Os polipeptídeos de iniciação bioativa podem ser adicionados separadamente (em composições individuais) ou em combinação, como uma composição, que são úteis como aplicações para fornecer um benefício para plantas e/ou partes de plantas.
[0417] Em combinação, os polipeptídeos podem ser formulados e distribuídos de uma forma de polipeptídeo purificado quer como uma fusão genética no mesmo vetor recombinante, ou separadamente utilizando diferentes vetores recombinantes.
[0418] Os polipeptídeos de iniciação bioativa, também podem ser criados e distribuídos a uma planta ou parte de planta como polipeptídeos de múltiplos ativos em uma proteína de fusão. Exemplos disso incluem distribuição de múltiplos polipeptídeos associados à flagelina produzidos em série com sítios de clivagem de protease entre cada polipeptídeo como está dentro da habilidade de um versado na técnica. Essas proteínas de fusão podem incluir qualquer combinação dos polipeptídeos de iniciação bioativa como aqui descritos, incluindo polipeptídeos de iniciação bioativa de diferentes classes, tal como combinações de polipeptídeos associados à flagelina com RHPP.
Polipeptídeos de iniciação bioativa também podem ser utilizados como fusões de proteínas para domínios de ligação de plantas, que podem direcionar os polipeptídeos para localizações distintas dentro da planta, onde eles são mais desejados ou necessários para suas atividades serem benéficas.
[0419] Além disso, os polipeptídeos podem ser adicionados às formulações fornecidas numa forma de composto sintético.
[0420] Os polipeptídeos de iniciação bioativa de flagelina e associados à flagelina, conforme descrito neste documento, podem ser fornecidos individualmente ou em combinação contendo pelo menos dois polipeptídeos de iniciação bioativa múltiplos para fornecer uma composição que atenda às necessidades específicas de uma planta em uma ampla faixa de respostas desejadas de hospedeiro e sistemas de cultivo.
IV(A) POLIPEPTÍDEOS ISOLADOS
[0421] Também é fornecido um polipeptídeo (peptídeo) isolado. O polipeptídeo isolado pode permitir iniciação bioativa de uma planta ou uma parte de planta para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou diminuir tensão abiótica na planta ou na parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença, insetos e/ou nematoides e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou parte de planta e/ou mudar arquitetura de planta. O polipeptídeo isolado pode compreender qualquer dos polipeptídeos descritos acima em conexão com as composições aqui descritas.
[0422] Além disso, o polipeptídeo isolado pode compreender um polipeptídeo Promotor de Pelo de Raiz (RHPP). O RHPP pode compreender ou consistir em qualquer uma de SEQ IDs NOs 745-755 (Tabelas 11 e 12, acima). O RHPP também pode compreender ou consistir em um polipeptídeo tendo mais de 70% de identidade de sequência, mais de 75% de identidade de sequência, mais de 80% de identidade de sequência, mais de 85% de identidade de sequência, mais de cerca de 90%, mais de cerca de 91%, mais de cerca de 92%, mais de cerca de 93%, mais de cerca de 94%, mais de cerca de 95%, mais de cerca de 96%, mais de cerca de 97%, mais de cerca de 98% ou mais de cerca de 99% de identidade de sequência para qualquer uma de SEQ ID NOs: 745-755.
[0423] O polipeptídeo isolado pode compreender um polipeptídeo Promotor de Pelo de Raiz retro-inverso (RI-RHPP). O RI-RHPP pode compreender ou consistir em qualquer uma de SEQ ID NOs: 756-766 (Tabela 13). O RI-RHPP também pode compreender ou consistir em um polipeptídeo tendo mais de 70% de identidade de sequência, mais de 75% de identidade de sequência, mais de 80% de identidade de sequência, mais de 85% de identidade de sequência, mais de cerca de 90%, mais de cerca de 91%, mais de cerca de 92%, mais de cerca de 93%, mais de cerca de 94%, mais de cerca de 95%, mais de cerca de 96%, mais de cerca de 97%, mais de cerca de 98% ou mais de cerca de 99% de identidade de sequência para qualquer uma de SEQ ID NOs: 756-766.
[0424] O polipeptídeo isolado pode compreender uma glucanase, uma amilase ou uma quitinase. Por exemplo, o polipeptídeo isolado pode compreender uma β-1,3-glucanase, uma amilase ou uma quitinase. A β-1,3- glucanase pode compreender ou consistir em qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 735 e 767-776 (Tabela 19). A amilase pode compreender ou consistir em qualquer uma de SEQ ID NOs: 734 e 735 (Tabela 19). A quitinase pode compreender ou consistir em SEQ ID NO: 777 ou 778 (Tabela 19). Além disso, a glucanase, amilase ou quitinase pode compreender ou consistir em um polipeptídeo tendo mais de 70% de identidade de sequência, mais de 75% de identidade de sequência, mais de 80% de identidade de sequência, mais de 85% de identidade de sequência, mais de cerca de 90%, mais de cerca de
91%, mais de cerca de 92%, mais de cerca de 93%, mais de cerca de 94%, mais de cerca de 95%, mais de cerca de 96%, mais de cerca de 97%, mais de cerca de 98%, ou mais de cerca de 99% de identidade de sequência para qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 735 e 767-778.
[0425] Por conseguinte, o polipeptídeo isolado pode compreender a sequência de aminoácido de qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 735, 746- 755 e 757-778; ou o polipeptídeo consiste na sequência de aminoácido de qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 735, 745-778.
[0426] A sequência de aminoácido do polipeptídeo isolado pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 747, 758, 767-769, 771, 772, 773, 775 e 778, ou a sequência de aminoácido do polipeptídeo consiste em qualquer uma de SEQ ID NOs: 747, 758, 767-769, 771, 772, 773, 775 e 778
[0427] A sequência de aminoácido do polipeptídeo isolado pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 746-750, 757-761, 767-776 e 778, ou a sequência de aminoácido do polipeptídeo consiste em qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 746-750, 757-761, 767-776 e 778.
[0428] A sequência de aminoácido do polipeptídeo isolado pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 746-755, 757-776 e 778, ou a sequência de aminoácido do polipeptídeo consiste em qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 746–755, 757–776 e 778.
[0429] A sequência de aminoácido do polipeptídeo isolado pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 735, 746-755, 757-778, ou a sequência de aminoácido do polipeptídeo consiste em qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 735, 746–755, 757–778.
IV. APLICAÇÕES
[0430] A composição agrícola, os polipeptídeos isolados e os métodos aqui descritos podem ser usados com qualquer espécie de planta e/ou as sementes da mesma. As composições e os métodos são tipicamente usados com sementes que são agronomicamente importantes.
[0431] A semente pode ser uma semente transgênica da qual uma planta transgênica pode crescer que incorpora um evento transgênico que confere, por exemplo, tolerância a um herbicida particular ou uma combinação de herbicidas, elevada resistência de doença, tolerância intensificada a insectos, seca, tensão e/ou rendimento intensificado.
[0432] A semente pode compreender um traço de reprodução incluindo, por exemplo, um traço de reprodução tolerante a doença.
[0433] Em alguns casos, a semente inclui pelo menos um traço transgênico e pelo menos um traço de reprodução.
[0434] As composições polipeptídicas de iniciação bioativa e os métodos para aplicar os polipeptídeos podem ser utilizados para o tratamento de qualquer tipo de semente adequada incluindo, mas não limitados a, culturas em linha e vegetais. Por exemplo, uma ou mais plantas ou partes de plantas ou as sementes de uma ou mais plantas podem compreender abaca (cânhamo manila) (Musa textilis), alfafa para forragem (Medicago sativa), alfafa para semente (Medicago sativa), amêndoa (Prunus dulcis), sementes de anis (Pimpinella anisum), maçã (Malus sylvestris), damasco (Prunus armeniaca), areca (noz de bétele) (Areca catechu), arracha (Arracacia xanthorrhiza), araruta (Maranta arundinacea), alcachofra (Cynara scparolymus), aspargo (Asparagus officinalis), abacate (Persea americana), bajra (milheto) (Pennisetum americanum), amendoim bambara (Vigna subterranea), banana (Musa paradisiaca), cevada (Hordeum vulgare), feijão, seco, comestível, para grãos (Phaseolus vulgaris), feijão, verde colhido (Phaseolus e Vigna spp.), beterraba, forragem (mangel) (Beta vulgaris), beterraba, vermelha (Beta vulgaris), beterraba, açúcar (Beta vulgaris), beterraba, açúcar para forragem (Beta vulgaris), beterraba, açúcar para sementes (Beta vulgaris), bergamota (Citrus bergamia), noz de bétele (Areca catechu), pimenta preta (Piper nigrum), acácia negra (Acacia mearnsii), amoras de várias espécies (Rubus spp.), mirtilo (Vaccinium spp.), Castanha do Pará (Bertholletia excelsa), fruta-pão (Artocarpus altilis), fava, seca (Vicia faba), fava, verde colhida (Vicia faba), brócolis (Brassica oleracea var. botrytis), milheto (Sorghum bicolor), sorgo vassoura (Sorghum bicolor), couve de Bruxelas (Brassica oleracea var.
gemmifera), trigo sarraceno (Fagopyrum esculentum), repolho, vermelho, branco, Savoy (Brassica oleracea var. capitata), repolho, chinês (Brassica chinensis), repolho, para forragem (Brassica spp.), Cacau (cacau) (Theobroma cacao), melão (Cucumis melo), sementes de cominho (Carum carvi), cardamomo (Elettaria cardamomum), cardo (Cynara cardunculus), alfarroba (Ceratonia siliqua), cenoura, comestível (Daucus carota spp. sativa), cenoura, para forragem (Daucus carota sativa), castanha de caju (Anacardium occidentale), mandioca (mandioca) (Manihot esculenta), feijão de mamona (Ricinus communis), couve-flor (Brassica oleracea var. botrytis), aipo (Apium graveolens var. rapaceum), aipo (Apium graveolens), chuchu (Sechium edule), cereja, todas as variedades (Prunus spp.), castanha (Castanea sativa), grão de bico (ervilha) (Cicer arietinum), chicória (Cichorium intybus), chicória para verduras (Cichorium intybus), chili, seco (todas as variedades) (Capsicum spp.
(annuum)), chili, fresco (todas as variedades) (Capsicum spp. (Annuum)), canela (Cinnamomum verum), citros (todas as variedades, família Rutaceae), cidra (Citrus medica), citronela (Cymbopogon citrates; Cymbopogon nardus), clementina (Citrus reticulata), trevo (Eugenia aromatica ; Syzygium aromaticum), trevo para forragem (todas as variedades) (Trifolium spp.), trevo para semente (todas as variedades) (Trifolium spp.), cacau (cacau) (Theobroma cacao), coco (Cocos nucifera), coco (Colocasia esculenta), café (Coffea spp.), noz de cola, todas as variedades (Cola acuminata), colza (colza) (Brassica napus), milho (maiz), para cereais (Zea mays), milho (maiz), para silagem (Zea mays), milho (maiz), para vegetais (Zea mays), milho para salada
(Valerianella locusta), algodão, todas as variedades (Gossypium spp.), caroço de algodão, todas as variedades (Gossypium spp.), feijão frade, para grãos
(Vigna unguiculata), feijão frade, verde colhido (Vigna unguiculata), oxicoco
(Vaccinium spp.), agrião (Lepidium sativum), pepino (Cucumis sativus),
groselha, todas as variedades (Ribes spp.), pinha (Annona reticulate), dasheen
(Colocasia esculenta), tâmaras (Phoenix dactylifera), árvore coxinha (Moringa oleifera), durra (sorgo) (Sorghum bicolour), trigo duro (Triticum durum), ervilha
(Vigna subterranea), edo (eddoe) (Xanthosoma spp.; Col ocasia spp.), berinjela
(Solanum melongena), endívia (Cichorium endivia), erva-doce (Foeniculum vulgare), feno-grego (Trigonella foenum- graecum), figo (Ficus carica), avelã
(avelã) (Corylus avellana), fique (Furcraea macrophylla), linho para fibra (Linum usitatissimum), linho para sementes oleaginosas (linhaça) (Linum usitatissimum), formio (linho da Nova Zelândia) (Phormium tenax), alho, seco
(Allium sativum), alho, verde (Allium sativum), gerânio (Pelargonium spp.;
Geranium spp.), gengibre (Zingiber officinale), groselha, todas as variedades
(Ribes spp.), cabaça (Lagenaria spp; Cucurbita spp.), ervilha (grão de bico)
(Cicer arietinum), uvas para passas (Vitis vinifera), uvas para uso de mesa
(Vitis vinifera), uvas para vinho (Vitis vinifera), toranja (Citrus paradisi), grama esparto (Lygeum spartum), grama, pomar (Dactylis glomerata), grama, Sudão
(Sorghum bicolor var. sudanense), amendoim (amendoim) (Arachis hypogaea),
goiaba (Psidium guajava), milho-da-índia (sorgo) (Sorghum bicolor), avelã
(avelã) (Corylus avellana), fibra de cânhamo (Cannabis sativa spp. indica),
cânhamo, manila (abaca) (Musa textilis), cânhamo, sol (Crotalaria juncea),
semente de cânhamo, (maconha) (Cannabis sativa), henequen (Agave fourcroydes), hena (Lawsonia inermis), lúpulo (Humulus lupulus), feijão de cavalo (Vicia faba), rábano (Armoracia rusticana), maiz híbrido (Zea mays), índigo (Indigofera tinctoria), jasmim (Jasminum spp.), alcachofra de Jerusalém
(Helianthus tuberosus), jowar (sorgo) (Sorghum bicolor), juta (Corchorus spp.),
couve (Brassica oleracea var. acephala), sumaúma (Ceiba pentandra), kenaf
(Hibiscus cannabinus), kiwi ou fruto de kiwi (Actinidia deliciosa), kohlrabi
(Brassica oleracea var. gongylodes), lavanda (Lavandula spp.), alho-poró
(Allium ampeloprasum; Allium porrum), limão (Citrus limon), capim-limão
(Cymbopogon citratus), lentilha (Lens culinaris), lespedeza, todas as variedades (Lespedeza spp.), alface (Lactuca sativa var. capitata), limão, azedo
(Citrus aurantifolia), limão, doce (Citrus limetta), linhaça (linho para oleaginosas) (Linum usitatissimum), alcaçuz (Glycyrrhiza glabra), lichia (Litchi chinensis), nêspera (Eriobotrya japonica), tremoço, todas as variedades
(Lupinus spp.), Macadâmia (noz de Queensland) (Macadamia spp. ternifolia),
macis (Myristica fragrans), maguey (Agave atrovirens), maiz (milho) (Zea mays), maiz (milho) para silagem (Zea mays), maiz (híbrido) (Zea mays), maiz,
ordinário (Zea mays), tangerina (Citrus reticulata), mangel (beterraba forrageira) (Beta vulgaris), manga (Mangifera indica), mandioca (mandioca)
(Manihot esculenta), maslin (cereais mistos) (mistura de Triticum spp. e Secale cereale), nêspera (Mespilus germanica), melão, exceto melancia (Cucumis melo), vassoura de milheto (Sorghum bicolor), painço, bajra (Pennisetum americanum), junco (Pennisetum americanum), painço, dedo (Eleusine coracana), milheto (Urochola ramosa), foxtail (Setaria italica), milheto, japonês
(Echinochloa esculenta), milheto, pérola (bajra, junco) (Pennisetum americanum), milheto, proso (Panicum miliaceum), hortelã, todas as variedades
(Mentha spp.), amora para fruto, todas as variedades (Morus spp.), amora para bichos-da-seda (Morus alba), cogumelos (Agaricus spp.; Pleurotus spp.;
Volvariella), mostarda (Brassica nigra; Sinapis alba), nectarina (Prunus persica var. nectarina), linho da Nova Zelândia (formio) (Phormium tenax), semente do
Níger (Guizotia abyssinica), noz-moscada (Myristica fragrans), aveia, para forragem (Avena spp.), óleo de palma (Elaeis guineensis), quiabo
(Abelmoschus esculentus), azeitona (Olea europaea), semente de cebola
(Allium cepa), cebola, seca (Allium cepa), cebola, verde (Allium cepa), ópio
(Papaver somniferum), laranja (Citrus sinensis), laranja, amarga (Citrus aurantium), plantas ornamentais (várias), palma palmyra (Borassus flabellifer),
palma (Arecaceae), óleo de palmiste (Elaeis guineensis), palma, óleo (Elaeis guineensis), palma, sagu (Metroxylon sagu), mamão (mamão) (Carica papaya),
pastinaga (Pastinaca sativa), ervilha, comestível seca, para grão (Pisum sativum), ervilha, verde colhida (Pisum sativum), pêssego (Prunus persica),
amendoim (amendoim) (Arachis hypogaea), pêra (Pyrus communis), noz-pecã
(Carya illinoensis), pimenta, negra (Piper nigrum), pimenta, seca (Capsicum spp.), caqui (Diospyros kaki; Diospyros virginiana), feijão boer (Cajanus cajan),
abacaxi (Ananas comosus), noz de pistache (Pistacia vera), banana (Musa sapientum), ameixa (Prunus domestica), romã (Punica granatum), pomelo
(Citrus grandis), semente de papoula (Papaver somniferum), batata (Solamum tuberosum), batata, doce (Ipomoea batatas), ameixa (Prunus domestica),
abóbora, comestível (Cucurbita spp.), abóbora, para forragem (Cucurbita spp.),
pireto (Chrysanthemum cinerariaefolium), quebracho (Aspidosperma spp.), Noz de Queensland (Macadamia spp. ternifolia), marmelo (Cydonia oblonga),
quinino (Cinchona spp.), quinoa (Chenopodium quinoa), rami (Boehmeria nivea), colza (colza) (Brassica napus), framboesa, todas as variedades (Rubus spp.), beterraba vermelha (Beta vulgaris), redtop (Agrostis spp.), ema
(Boehmeria nivea), ruibarbo (Rheum spp.), arroz (Oryza sativa; Oryza glaberrima), rosa (Rose spp.), borracha (Hevea brasiliensis), rutabaga (sueco)
(Brassica napus var. napobrassica), centeio (Secale cereale), semente de azevém (Lolium spp.), cártamo (Carthamus tinctorius), sainfoin (Onobrychis viciifolia), salsify (Tragopogon porrifolius), sapotilha (Achras sapota), satsuma
(tangerina/tangerina) (Citrus reticulata), scorzonera (salsify negro) (Scorzonera hispanica), gergelim (Sesamum indicum), manteiga de karité (noz) (Vitellaria paradoxa), sisal (Agave sisalana), sorgo (Sorghum bicolor), sorgo, vassoura
(Sorghum bicolor), sorgo, durra (Sorghum bicolor), sorgo, milho-da-índia (Sorghum bicolor), sorgo, jowar (Sorghum bicolor), sorgo, doce (Sorghum bicolor), soja (Glycine max), feno de soja (Glycine max), espelta de trigo (Triticum spelta), espinafre (Spinacia oleracea), abóbora (Cucurbita spp.), morango (Fragaria spp.), beterraba sacarina (Beta vulgaris), beterraba sacarina para forragem (Beta vulgaris), beterraba sacarina para semente (Beta vulgaris), cana-de-açúcar para forragem (Saccharum officinarum), cana-de-açúcar para açúcar ou álcool (Saccharum officinarum), cana-de-açúcar para thatching (Saccharum officinarum), girassol para forragem (Helianthus annuus), girassol para sementes oleaginosas (Helianthus annuus), crotalária (Crotalaria juncea), swede (Brassica napus var. napobrassica), swede para forragem (Brassica napus var. napobrassica), swede doce (Zea mays), lima doce (Citrus limetta), pimenta doce (Capsicum annuum), batata doce (Lopmoea batatas), sorgo doce (Sorghum bicolor), tangerina (Citrus reticulata), tannia (Xanthosoma sagittifolium), tapioca (mandioca) (Manihot esculenta), taro (Colocasia esculenta), chá (Camellia sinensis), teff (Eragrostis abyssinica), timóteo (Phleum pratense), tabaco (Nicotiana tabacum) tomate (Lycopersicon esculentum), trifólio (Lotus spp.), triticale, para forragem (híbrido de Triticum aestivum e Secale cereale), árvore de tung (Aleurites spp.; Fordii), nabo, comestível (Brassica rapa), nabo, para forragem (Brassica rapa), urena (juta do Congo) (Urena lobata), baunilha (Vanilla planifolia), ervilhaca, para grãos (Vicia sativa), noz (Juglans spp., especialmente Juglans regia), melancia (Citrullus lanatus), trigo (Triticum aestivum), inhame (Dioscorea spp.) ou erva-mate (Ilex paraguariensis).
[0435] Os polipeptídeos isolados e as composições aqui reveladas também podem ser aplicadas a grama, grama ornamental, flores, plantas ornamentais, árvores, plantas hortícolas, e arbustos.
[0436] Os polipeptídeos isolados e as composições compreendendo os polipeptídeos de iniciação bioativa isolados também são adequados para uso em viveiro, grama e jardim, floricultura, horticultura ou indústria de flores de corte e proporcionam benefícios para produtividade de planta intensificada, proteção de saúde, vigor e longevidade. Por exemplo, eles podem ser aplicados a plantas perenes, anuais, bulbos forçados ou pseudo bulbos, ervas, coberturas de solo, árvores, arbustos, plantas ornamentais (por exemplo, orquídeas, etc.), plantas tropicais, videiras e viveiros.
[0437] Os polipeptídeos isolados e as composições compreendendo os polipeptídeos de iniciação bioativa e/ou compostos indutores aqui descritos são adequados para tratar plantas, partes de plantas e material(is) de propagação de planta, por exemplo, qualquer planta ou parte de planta, tal como sementes, raízes, caules, sistema vascular (por exemplo, floema e xilema), órgãos florais, raízes, enxertos, bulbo, pseudobulbos, rizomas, tubérculos, etc. As composições compreendendo os polipeptídeos de iniciação bioativa e/ou compostos indutores descritos neste documento podem ser aplicadas ao solo circundando a planta (por exemplo, no sulco).
[0438] Os polipeptídeos isolados e as composições de iniciação bioativa podem ser aplicadas como tratamentos de sementes para tratar para numerosas pragas, doenças, deficiência de nutrientes, embora intensificando crescimento e produtividade de planta.
[0439] Composições de cobertura ou revestimento de semente podem ser, por exemplo, uma composição de transportador líquido, uma composição de pasta, ou uma composição em pó aplicada com aditivos convencionais que são fornecidos para fazer o tratamento de semente ter qualidades pegajosas para aderir e revestir as sementes. Aditivos adequados para uma composição de semente compreendem: talcos, grafites, gomas, polímeros estabilizadores, polímeros de revestimento, polímeros de acabamento, agentes de deslizamento para fluxo e plantabilidade de semente,
agentes cosméticos e materiais celulósicos, tal como carboximetil celulose e similares. Os tratamentos de sementes de polipeptídeo de iniciação bioativa podem compreender ainda agentes corantes e outros desses aditivos.
[0440] As composições de iniciação bioativa podem ser aplicadas individualmente como tratamentos de sementes ou em combinação com outros aditivos, tal como fungicidas, inseticidas, inoculantes, reguladores de crescimento de planta, micróbios promotores de crescimento de planta, fertilizantes e intensificadores de fertilizantes, nutrientes de sementes, agentes de controle biológico, antídotos de herbicida e tratamentos de doenças de mudas e com outros tratamentos convencionais de sementes.
[0441] A composição de tratamento de semente, como aqui descrita, pode ser aplicada a sementes em um transportador adequado, tal como água ou um pó, que não é prejudicial às sementes ou ao meio ambiente.
As sementes são, então, plantadas de maneira convencional.
[0442] Tratamentos de sementes preferidos, tal como Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226 ou SEQ ID NO: 571), Ec.Flg22 (SEQ ID NO: 526) e Gm.RHPP (SEQ ID NO: 604) são úteis para intensificar desenvolvimento de muda, diminuir o tempo para germinação, aumentar o número de sementes que germinam e intensificar a capacidade de sobrevivência da muda. Além disso, as composições de tratamento de sementes intensificam a proteção de semente contra doenças de base microbiana que são conhecidas por contatarem a semente ou o solo circundando a semente e espalharem durante o estabelecimento inicial da muda.
[0443] A composição de tratamento de semente pode compreender um polipeptídeo e/ou um composto indutor, como aqui descrito, e um fungicida, um insecticida, um nematicida, um agente de controle biológico, um bioestimulante, um micróbio, ou qualquer combinação dos mesmos.
[0444] A composição de tratamento de semente pode compreender um polipeptídeo e/ou um composto indutor, como descrito aqui, e clotianidina, Bacillus firmus, metalaxil, ou qualquer combinação dos mesmos.
[0445] A composição de tratamento de semente pode compreender um polipeptídeo e/ou um composto indutor, como aqui descrito, clotianidina e fluopiram.
[0446] O tratamento de semente pode compreender um polipeptídeo e/ou um composto indutor, como aqui descrito, metalaxil e fluopiram.
[0447] As composições de iniciação bioativa aqui descritas podem ser aplicadas diretamente à semente como uma solução ou em combinação com outros aditivos disponíveis comercialmente. Soluções contendo o polipeptídeo solúvel em água podem ser pulverizadas ou aplicadas de outra forma à semente como uma pasta de semente ou um embebimento de semente. Materiais sólidos ou secos contendo polipeptídeos de iniciação bioativa solúveis também são úteis para promover germinação, crescimento e proteção eficazes de mudas durante o estabelecimento inicial de mudas.
[0448] As composições de iniciação bioativa descritas aqui podem ser formuladas com um transportador de solubilização, tal como água, tampão (por exemplo, tampão de citrato ou fosfato) e outros agentes de tratamento (por exemplo, álcool, outros solventes) ou qualquer agente solubilizante. Além disso, pequenas quantidades de intensificadores de agentes de secagem, tal como álcoois inferiores, etc., podem ser usadas na composição.
[0449] Surfactantes, emulsificantes e conservantes também podem ser adicionados em níveis pequenos (0,5% p/v ou menos) a fim de intensificar a estabilidade do produto de revestimento de semente.
[0450] Tratamentos de sementes contendo composições de iniciação bioativa neste documento podem ser aplicados usando qualquer maquinaria de tratamento de semente disponível comercialmente ou também podem ser aplicados usando qualquer(quaisquer) método(s) não comercial(ais) aceitável(eis), tal como o uso de seringas ou qualquer outro dispositivo de tratamento de semente. Procedimentos de revestimento de tratamentos de sementes gerais usando polipeptídeos de iniciação bioativa podem ser realizados usando um Wintersteiger HEGE 11 (Wintersteiger AG, Áustria, Alemanha) e aplicados à semente de culturas principais, nomeadamente milho, soja, trigo, arroz e vários vegetais. A capacidade desta maquinaria de tratamento de semente pode acomodar um grande número de diferentes tipos, tamanhos e quantidades de sementes (20–3.000 gramas). A semente é carregada em tigelas da maquinária do tratador de semente. A seleção da tigela depende da quantidade de sementes de tratamento necessária e do tamanho da tigela selecionada: tigela grande de 14,5 l (500–3.000 g de sementes por revestimento); tigela média de 7 l (80-800 g de sementes por revestimento); e tigela pequena de 1 l (20–100 g de sementes por revestimento). Outros sistemas de tratamento de sementes maiores também estão disponíveis.
[0451] A semente é distribuída em direção às periferias radiais das tigelas rotativas via uma aplicação de força centrífuga com o dispositivo de revestimento centrífugo. O disco giratório localizado no fundo da tigela distribui o tratamento de semente uniformemente sobre a semente. Nesse ponto, o ciclo de rotação é iniciado, o que faz as sementes girarem em torno do centro da tigela em um círculo para revestir uniformemente as sementes. O processo de revestimento de tratamento de semente é iniciado após a semente ser uniformemente dispersa em torno do espalhador. O material de amostra de tratamento de semente (tal como um pó, semilíquido, líquido ou uma pasta) pode ser aplicado no disco rotativo quando os discos estão girando dentro das tigelas rotativas usadas para distribuir o tratamento de semente uniformemente para fornecer um revestimento uniforme e cobrir a superfície da semente.
[0452] Um fluxo de ar constante distribuído usando ar comprimido (2 a 6 bars) pode ser fornecido durante revestimento de semente para ajudar no revestimento uniforme das sementes na tigela. A quantidade de tempo para o revestimento da semente depende da quantidade da semente, da viscosidade do tratamento de semente e do tipo da semente usada no tratamento. Uma calculadora de tratamento de semente é usada para ajustar todos os volumes, para a maioria das culturas principais e comercialmente cultivadas, e o tipo de tratamento de sementes sendo aplicado.
[0453] As sementes podem ser revestidas usando uma variedade de métodos incluindo, mas não se limitando a, derramar ou bombear, borrifar ou pulverizar uma solução aquosa contendo os polipeptídeos de iniciação bioativa em ou sobre uma semente, pulverizar ou aplicar em uma camada de sementes seja com o uso ou sem o uso de um sistema transportador.
Dispositivos de mistura adequados incluem tamboreadores, bacias ou tambores de mistura, ou outros dispositivos de aplicação de fluido que incluem bacias ou tambores usados para conter a semente durante revestimento.
[0454] Após a semente ter sido tratada e seca, as sementes são distribuídas para um recipiente de armazenamento maior. Sementes são secas ao ar ou secas com uma corrente de ar contínua que passa sobre as sementes. Sementes são, então, transferidas para um recipiente ou saco separado para transporte, transferência ou armazenamento.
[0455] As composições de iniciação bioativa ou os polipeptídeos isolados podem ainda ser fornecidos para distribuição a uma superfície de planta ou membrana plasmática de planta como um spray foliar ou um tratamento de semente para uma área circundando uma planta ou uma parte de planta.
[0456] As composições de iniciação bioativa ou os polipeptídeos isolados também podem ser fornecidos como uma aplicação de tratamento de semente ou em uma matriz, tal como imobilizada ou impregnada em uma partícula, ou um grânulo, tal como utilizado em um tratamento de transmissão.
[0457] As composições de iniciação bioativa ou os polipeptídeos isolados como aqui descritos podem ser aplicados a plantas e partes de plantas usando uma aplicação exógena como um spray, tratamento de solo, em sulco, tratamento de semente, imersão ou lavagem ou como uma aplicação endógena como uma injeção, inoculação, irrigação, infiltração, etc.
[0458] Os polipeptídeos isolados ou as composições compreendendo polipeptídeos e/ou um composto indutor pode ser aplicados diretamente a uma planta ou à área circundando uma planta ou parte de planta.
[0459] Eles também podem ser fornecidos em um material de matriz que é, então, fornecido a uma planta ou parte de planta.
[0460] As composições contendo os polipeptídeos de iniciação bioativa associados à flagelina e/ou os compostos indutores também podem ser fornecidos para distribuição direta para uma planta, tecidos de plantas ou uma célula de planta por vários métodos de distribuição, por exemplo, injeção, inoculação ou infiltração (por exemplo, infiltração nos estômatos da folha).
Esses polipeptídeos também podem ser fornecidos de uma maneira em que eles possam se mover sistemicamente através de uma planta e influenciar cascatas de sinalização na planta que subsequentemente produzem resultados benéficos e produtivos para a planta ou parte de planta.
[0461] Os polipeptídeos isolados ou a composição de iniciação bioativa aqui descritos, podem ser fornecidos para distribuição direta para uma planta, tecidos vegetais, ou uma célula de planta por uma aplicação endógena.
Por exemplo, os polipeptídeos isolados e/ou as composições de iniciação bioativa podem ser injetados diretamente em uma planta. De preferência, a injeção permite distribuição direta do polipeptídeo isolado ou da composição para o sistema vascular da planta (por exemplo, para o floema ou xilema). Em alguns casos, o polipeptídeo isolado distribuído por injeção direta para o sistema vascular da planta compreende uma glucanase (por exemplo, uma β- 1,3-glucanase).
[0462] Polipeptídeos de iniciação bioativa de Flg retro-inversos, conforme descrito na Tabela 4 ou Tabela 5, podem ser aplicados individualmente ou em combinação com qualquer outra sequência de polipeptídeo de iniciação bioativa de flagelina, associado à flagelina ou outro conforme descrito neste documento. Combinações desses polipeptídeos de iniciação bioativa de flagelina e associados à flagelina RI são úteis como protetores de plantas, bem como intensificadores de promoção de crescimento de planta.
[0463] Os polipeptídeos de assinatura (SEQ ID NO: 542-548; Tabela 6), classificação de âncora de sinal (SEQ ID NO: 549-562, Tabela 7) e assistência de secreção (SEQ ID NOs 563-570; Tabela 8) podem ser usados em combinação com qualquer codificação de flagelina (Tabela 1), sequências conservadas N e/ou C-terminais de flagelinas derivadas de Bacillus (Tabela 2), polipeptídeos associados à flagelina: Flg22 e FlgII-28 (Tabela 3), as formas retro inversas de Flg22 e FlgII-28 (Tabela 4) ou qualquer das outras Flgs (Tabela 5), conforme descrito neste documento.
[0464] Por exemplo, qualquer dos polipeptídeos de iniciação bioativa associados a Flg ou combinações (composições) dos mesmos pode ser fornecido em formulações individuais e aplicado simultaneamente, sequencialmente em formulações separadas ou fornecido como proteína(s) de fusão que contêm as sequências de assistência como descrito nas Tabelas 6–8 e aplicado diretamente ou separadamente a uma planta ou parte de planta.
[0465] Composições compreendendo um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e um composto indutor podem ser usadas para sintomas de doença ou título de patógeno melhorados em uma planta (particularmente em plantas de citros). Por exemplo, composições aqui descritas podem prevenir ou reduzir deposição de calose em ou em torno de plasmodesmos de floema que ocorre em plantas de citros infectadas com Clas.
Elas também podem diminuir queda de fruto causada por tais infecções.
[0466] Composições compreendendo os polipeptídeos de flagelina ou associados à flagelina e um composto indutor aqui descrito também são eficientes na melhora da qualidade e/ou quantidade de suco de plantas de citros.
[0467] Composições aqui descritas também podem ser usadas para melhorar rendimento em uma cultura em linha (por exemplo, soja ou milho).
[0468] Composições compreendendo pelo menos uma prolina, betaína ou uma ACC desaminase também podem reduzir beneficamente a tensão abiótica em uma planta ou parte de planta.
[0469] Composições compreendendo uma glucanase e uma serina protease também podem reduzir beneficamente mofo e/ou prevenir germinação de esporos de fungos em um fruto. Em alguns casos, composições compreendendo uma glucanase e uma serina protease podem ser aplicadas como uma lavagem de frutos ao exterior de um fruto.
[0470] Composições compreendendo oxitetraciclina e 2-desoxi-D- glicose podem aumentar beneficamente rendimento de fruto, tamanho de fruto e qualidade de suco.
[0471] Composições compreendendo um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina (por exemplo, SEQ ID NO: 226) e uma ACC desaminase podem aumentar beneficamente rendimento de uma colheita.
[0472] Composições compreendendo uma β-1,3-glucanase podem melhorar beneficamente saúde e vigor de uma planta (isto é, uma árvore de citros), particularmente quando injetadas no tronco da árvore. A β- 1,3-glucanase pode ser injetada como um polipeptídeo isolado ou como uma composição aqui descrita.
V. MÉTODOS DE USO
[0473] Métodos são fornecidos para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doenças e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta. O método pode compreender aplicar as composições aqui descritas a uma planta, uma parte de planta ou um meio de crescimento de planta do qual a planta será cultivada ou uma rizosfera em uma área circundando a planta ou a parte de planta para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor da planta ou parte de planta e/ou proteger a planta ou parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou parte de planta.
[0474] Outro método é fornecido para aumentar teor de suco e/ou melhorar teor de suco, açúcar ou ácido e/ou melhorar uma razão Brix:ácido de suco obtido de uma planta, o método compreendendo aplicar qualquer composição aqui descrita à planta ou parte de planta, ou meio de crescimento de planta no qual a planta será cultivada, ou uma rizosfera em uma área circundando a planta ou parte de planta para aumentar teor de suco e/ou melhorar teor de suco, açúcar ou ácido ou melhorar uma razão brix:ácido de suco obtido da planta ou parte de planta.
[0475] Métodos usando as composições de iniciação bioativa também são fornecidos para aumentar a produtividade global de planta em um campo, pomar, leito de plantação, viveiro, área florestal, fazenda, gramado, jardim, centro de jardim ou área cultivada. Aplicações e métodos usando as composições de iniciação bioativa também são úteis para aumentar crescimento, saúde e produtividade de planta em diversas culturas (monocotiledôneas e dicotiledôneas), por exemplo, milho, trigo, arroz, cana-de- açúcar, soja, sorgo, batata e uma variedade de vegetais.
[0476] Uma abordagem de "iniciação bioativa" também é fornecida por aplicação direta das composições, as quais podem ser aplicadas seja exogenamente à superfície de uma célula de planta seja endogenamente ao interior de uma planta e/ou uma célula de planta. As composições são fornecidas para distribuição à superfície de planta ou membrana celular de plasma ou ao interior de uma planta, tecido de planta ou célula e são úteis para regular processos de desenvolvimento que resultam em fenótipos de crescimento intensificados, tal como aumentos na biomassa geral, crescimento vegetativo, preenchimento de semente, tamanho de semente e número de sementes que contribuem para o aumento no rendimento total de plantas cultivadas.
[0477] A aplicação dos polipeptídeos de Flg retro inversos fornecidos em formulações agrícolas pode resultar em proteção de planta intensificada contra doenças e tensões abióticas, embora intensificando sinergicamente crescimento, produtividade e rendimento, embora mantendo saúde de planta aumentada com desempenho de planta intensificado por períodos de tempo mais longos.
[0478] A seleção das formas nativas L (Tabela 3) ou retro inversas D (Tabela 4) dos polipeptídeos associados a Flg pode depender do ambiente, da planta/colheita ou da combinação de planta/colheita e meio ambiente. Além disso, a temporização da aplicação de tratamento (por exemplo, uma aplicação de pulverização foliar) durante a estação de crescimento são todas considerações relevantes. Os polipeptídeos de iniciação bioativa de Flg retro inversos têm afinidade de ligação aumentada para membranas de superfície de célula. Devido a essas características, as formas RI dos polipeptídeos de iniciação bioativa de Flg podem ser usadas para melhorar tolerância a tensão abiótica em uma planta ou parte de planta.
[0479] Além disso, as formas retro inversas de RI Ec.Flg22 e RI Bt. 4Q7Flg22 podem ser úteis para estimular o fechamento de estômatos sob condições de seca e tensão térmica e melhorar rendimentos sob essas condições. O controle de fechamento estomático usando polipeptídeo de iniciação bioativa associado a Flg aplicado a uma planta durante períodos de tensão ambiental pode auxiliar na regulação de perda de água e estabilizar pressão de turgescência em uma planta quando condições ambientais são desfavoráveis.
[0480] Nos métodos para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta, a composição compreende preferencialmente (A) pelo menos um polipeptídeo de iniciação bioativa e um composto indutor ou (B) pelo menos dois polipeptídeos de iniciação bioativa, opcionalmente, com um composto indutor em que: o polipeptídeo ou os polipeptídeos de (A) ou (B) compreendem: (i) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina; ou (ii) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso (iii) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP); ou (iv) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso (RI RHPP); ou (v) um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina; ou (vi) um polipeptídeo de glucanase; ou (vii) um polipeptídeo de serina protease; ou (viii) um polipeptídeo de ACC desaminase (1-aminociclopropano-1-carboxilato desaminase); ou (ix) uma amilase; ou (x) uma quitinase; ou (xi) qualquer combinação dos mesmos, com as condições de que: (1) o composto indutor compreende um inibidor da calose sintase, ácido β amino butírico (BABA), uma betaína, uma prolina, um benzotiazol, ácido salicílico, ácido oxálico, um inibidor da succinato desidrogenase ou qualquer combinação dos mesmos quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo dos grupos (i)-(v), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x); e (2) o composto indutor compreende um bactericida, um aminoácido ou isômero do mesmo, um inibidor da calose sintase, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou derivado do mesmo, um ácido dicarboxílico ou um derivado do mesmo, uma betaína, um inibidor da succinato desidrogenase ou qualquer combinação dos mesmos quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo de grupos (vi) a (x); e (3) a composição compreende o composto indutor e o composto indutor compreende um inibidor da calose sintase, ácido beta amino butírico (BABA), uma betaína, uma prolina, um benzotiazol, ácido salicíclico, ácido oxálico, um inibidor da succinato desidrogenase ou qualquer combinação dos mesmos quando os dois ou mais polipeptídeos de (B) compreendem polipeptídeos selecionados dos grupos (i)-(v), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0481] Nos métodos para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta, a composição pode compreender um composto indutor compreendendo um inibidor da calose sintase, ácido β-amino butírico (BABA), uma betaína, uma prolina, ácido salicílico, ácido oxálico, um inibidor da succinato desidrogenase ou qualquer combinação dos mesmos quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo dos grupos (i)-(v), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0482] Nos métodos para aumentar crescimento, rendimento,
saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta, a composição pode compreender um composto indutor compreendendo um inibidor da calose sintase, ácido β-amino butírico (BABA), ácido salicílico, ácido oxálico, um inibidor da succinato desidrogenase ou qualquer combinação dos mesmos quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo dos grupos (i)- (v), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0483] Nos métodos para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta, a composição pode compreender um composto indutor compreendendo um inibidor da calose sintase, ácido β-amino butírico (BABA), um inibidor da succinato desidrogenase ou qualquer combinação dos mesmos quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo dos grupos (i)-(v), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0484] Nos métodos para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta, a composição pode compreender um composto indutor compreendendo uma betaína ou uma prolina quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo dos grupos (i)-(v), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0485] Nos métodos para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta, a composição pode compreender um composto indutor compreendendo ácido salicílico ou ácido oxálico quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo dos grupos (i)-(v), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0486] Alternativamente, nos métodos para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta, a composição pode compreender um composto indutor compreendendo um inibidor da calose sintase, ácido β-amino butírico (BABA), uma betaína, uma prolina, ácido salicílico, ácido oxálico, um inibidor da succinato desidrogenase ou qualquer combinação dos mesmos quando os dois ou mais polipeptídeos de (B) compreendem polipeptídeos selecionados dos grupos (i)-(v), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0487] Alternativamente, nos métodos para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta, a composição pode compreender um composto indutor compreendendo um inibidor da calose sintase, ácido β-amino butírico (BABA), um ácido salicílico, ácido oxálico, um inibidor da succinato desidrogenase ou qualquer combinação dos mesmos quando os dois ou mais polipeptídeos de (B) compreendem polipeptídeos selecionados dos grupos (i)-(v), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0488] Alternativamente, nos métodos para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta, a composição pode compreender um composto indutor compreendendo um inibidor da calose sintase, ácido β-aminobutírico (BABA), ou qualquer combinação dos mesmos quando os dois ou mais polipeptídeos de (A) compreendem polipeptídeos selecionados dos grupos (i)-(v), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0489] Alternativamente, nos métodos para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta, a composição pode compreender um composto indutor compreendendo uma betaína ou uma prolina quando os dois ou mais polipeptídeos de (B) compreendem polipeptídeos selecionados dos grupos (i)-(v), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0490] Alternativamente, nos métodos para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta, a composição pode compreender um composto indutor compreendendo ácido salicílico ou ácido oxálico quando os dois ou mais polipeptídeos de (B) compreendem polipeptídeos selecionados dos grupos (i)-(v), mas não polipeptídeos selecionados dos grupos (vi) a (x).
[0491] Alternativamente, nos métodos para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta, a composição pode compreender um polipeptídeo selecionado dos grupos (i) a (x) e pelo menos um composto indutor compreendendo um inibidor da succinato desidrogenase.
[0492] Alternativamente, nos métodos para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta, a composição pode compreender um inibidor da calose sintase e pelo menos um composto indutor compreendendo um bactericida, um aminoácido, ácido benzoico substituído ou não substituído ou derivado ou sal do mesmo, um ácido dicarboxílico ou derivado ou sal do mesmo, uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol, um inibidor da succinato desidrogenase ou qualquer combinação dos mesmos. De preferência, o inibidor da calose sintase é 2- DDG. O bactericida pode ser oxitetraciclina. O ácido benzoico substituído pode ser ácido salicílico. O ácido dicarboxílico pode ser ácido oxálico.
[0493] Alternativamente, nos métodos para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta, a composição pode compreender um bactericida e pelo menos um composto indutor compreendendo um ácido β-aminobutírico (BABA), uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol, ácido salicílico, ácido oxálico, um inibidor da succinato desidrogenase ou qualquer combinação dos mesmos. O bactericida pode ser oxitetraciclina.
[0494] Alternativamente, nos métodos para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta, a composição pode compreender um bactericida e pelo menos um composto de um inibidor da succinato desidrogenase, ácido β amino butírico (BABA), uma prolina, uma betaína, ácido salicílico, um inibidor da succinato desidrogenase ou ácido oxálico. O inibidor da calose sintase pode ser 2-DDG.
O bactericida pode ser oxitetraciclina.
[0495] Alternativamente, nos métodos para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta, a composição pode compreender um bactericida e pelo menos um composto de um inibidor da succinato desidrogenase, ácido β amino butírico (BABA), ácido salicílico, uma succinato desidrogenase ou ácido oxálico. O inibidor da calose sintase pode ser 2-DDG. O bactericida pode ser oxitetraciclina. A succinato desidrogenase pode ser bixafen.
[0496] Alternativamente, nos métodos para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta, a composição pode compreender um bactericida e um inibidor da calose sintase, ou ácido β amino butírico (BABA). O inibidor da calose sintase pode ser 2-DDG. O bactericida pode ser oxitetraciclina.
[0497] Alternativamente, nos métodos para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou parte de planta, o método pode compreender apliar um polipeptídeo isolado à planta ou parte de planta.
O polipeptídeo isolado pode compreender uma β-1,3-glucanase. De preferência, quando o polipeptídeo isolado compreende uma β-1,3-glucanase, o peptídeo é injetado em um tronco de uma planta. O polipeptídeo isolado pode compreender um RHPP, um RHPP retro-inverso, uma glucanase, uma quitinase e/ou uma amilase como aqui descrito. Por exemplo, o polipeptídeo isolado pode compreender um RHPP tendo uma sequência de aminoácido compreendendo ou consistindo em qualquer uma de SEQ ID NOs: 745-755, ou um RHPP retro inverso tendo uma sequência de aminoácido compreendendo ou consistindo em qualquer uma de SEQ ID NOs: 756-766, uma β-1,3- glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 732 e 767-776, uma quitinase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 777 e 778 ou uma amilase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo ou consistindo em SEQ ID NO: 735.
[0498] Nos métodos para aumentar teor de suco e/ou melhorar uma razão Brix:ácido de suco obtido de uma planta a composição pode compreender (A) pelo menos um polipeptídeo e um composto indutor; (B) pelo menos dois polipeptídeos, opcionalmente, com um composto indutor; ou (C) um inibidor da calose sintase e pelo menos um de um composto indutor compreendendo um bactericida, um aminoácido ou isômero do mesmo, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou derivado ou sal do mesmo, um ácido dicarboxílico ou derivado ou sal do mesmo, um benzotiadiazol, uma betaína, uma prolina ou qualquer combinação dos mesmos; ou (D) um bactericida e pelo menos um de um composto indutor selecionado de um aminoácido ou isômero do mesmo, um inibidor da calose sintase, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou derivado do mesmo, um ácido dicarboxílico ou um seu derivado, uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol ou qualquer combinação dos mesmos; em que: o polipeptídeo ou os polipeptídeos de (A) ou (B) compreendem: (i) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina; ou (ii) um um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso (iii) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP); ou (iv) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso (RI RHPP); ou (v) um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina; ou (vi) um polipeptídeo de glucanase; ou (vii) um polipéptido da serina protease; ou (viii) um polipeptídeo da ACC desaminase (1-aminociclopropano-1-carboxilato desaminase); ou (ix) uma amilase; ou (x) uma quitinase; ou (xi) qualquer combinação dos mesmos.
[0499] Além disso, nos métodos para aumentar teor de suco e/ou melhorar uma razão Brix:ácido de suco obtido de uma planta, o método pode compreender aplicar um polipeptídeo isolado à planta ou parte de planta. O polipeptídeo isolado pode compreender uma β-1,3-glucanase. De preferência, quando o polipeptídeo isolado compreende uma β-1,3-glucanase, o peptídeo é injetado em um tronco de uma planta. O polipeptídeo isolado pode compreender um RHPP, um RHPP retro-inverso, uma glucanase, uma quitinase e/ou uma amilase como aqui descrito. Por exemplo, o polipeptídeo isolado pode compreender um RHPP tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 745-755, ou um RHPP retro- inverso tendo uma sequência de aminoácido compreendendo ou consistindo em qualquer uma de SEQ ID NOs: 756–766, uma β-1,3-glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 732 e 767-776, uma quitinase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 777 e 778 ou um amilase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo ou consistindo em SEQ ID NO: 735.
MÉTODOS PARA AUMENTAR CRESCIMENTO, VIGOR DE UMA PLANTA E/OU PROTEGER A PLANTA DE UMA DOENÇA:
[0500] Nos métodos para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doenças e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta os seguintes polipeptídeos isolados ou composições podem ser usados.
[0501] Qualquer polipeptídeo isolado aqui descrito (por exemplo, um RHPP isolado ou RI-RHPP ou uma glucanase isolada, amilase e/ou quitinase) pode ser utilizado neste método. Por exemplo, um RHPP ou RI- RHPP isolado tendo uma sequência de aminoácido compreendendo ou consistindo em qualquer uma de SEQ ID NOs: 745-766 pode ser usado neste método. Alternativamente, uma glucanase, amilase ou quitinase isolada tendo uma sequência de aminoácido compreendendo ou consistindo em qualquer uma de SEQ ID NOs: 732 e 767-778 pode ser usada neste método. Por exemplo, o polipeptídeo isolado pode compreender uma glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo ou consistindo em qualquer uma de SEQ ID NO: 732 e 767-776. Como outro exemplo, o polipeptídeo isolado pode compreender uma amilase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo ou consistindo em SEQ ID NO: 735. Como outro exemplo, o polipeptídeo isolado pode compreender uma quitinase compreendendo ou consistindo em SEQ ID NO: 777 ou SEQ ID NO: 778. Em alguns casos, uma β- 1,3-glucanase (incluindo β-1,3-glucanases não especificamente identificadas aqui) pode ser usada neste método. De preferência, a β-1,3-glucanase é aplicada endogenamente (por exemplo, injetada) na planta.
[0502] Uma composição compreendendo bixafen e um polipeptídeo livre (isto é, não ligado a um exosporo de um membro da família Bacillus cereus ou um esporo membro da família Bacillus cereus intacto) pode ser usada. O polipeptídeo livre pode compreender (i) um polipetídeo de flagelina ou associado à flagelina; ou (ii) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso; ou (iii) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP); ou (iv) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso (RI RHPP); ou (v) um polipetídeo de tionina ou tipo tionina; ou (vi) um polipeptídeo de glucanase; ou (vii) um polipeptídeo de serina protease; ou (viii) um polipeptídeo de ACC desaminase (1-aminociclopropano-1-carboxilato desaminase); ou (ix) uma amilase; ou (x) uma quitinase; ou (xi) qualquer combinação dos mesmos.
[0503] A composição pode compreender um polipeptídeo livre compreendendo um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP), um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro-inverso (RI-RHPP), uma quitinase, um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase, uma serina protease ou qualquer combinação dos mesmos.
[0504] A composição pode compreender um polipeptídeo livre em que uma sequência de aminoácido do polipeptídeo livre pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 604, 606, 607 e 745-755 (polipeptídeo promotor de pelo de raiz, RHPP), qualquer uma de SEQ ID NOs: 605 e 756-766 (polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro-inverso, RI-RHPP), qualquer uma de SEQ ID NOs 226 e 571(polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina), qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 e 767-778 (glucanase), qualquer uma de SEQ ID NOs: 777 e 778 (quitinases) ou qualquer uma de SEQ ID NOs: 721, 722 e 794-796 (serina proteases).
[0505] A composição pode compreender bixafen e um polipeptídeo livre compreendendo um polipeptídeo promotor de pelo de raiz e uma sequência de aminoácido do RHPP pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 604, 606, 607 e 745-755. Por exemplo, a sequência de aminoácido do RHPP pode compreender SEQ ID NO: 604.
[0506] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de iniciação bioativa.
[0507] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina de (i). Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 226, 289, 290, 291, 293, 294, 294, 295, 300, 437, 532, 534, 534, 536, 538, 540, 571–58 e 589–603. Em alguns casos, a sequência de aminoácido da flagelina ou do polipeptídeo associado à flagelina compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 226, 293,
295, 300, 540, 571-579 e 589-590. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226.
[0508] A composição pode compreender pelo menos um um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso. O um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro-inverso pode compreender um polipeptídeo de Flg22 retro-inverso, um polipeptídeo de FlgII- 28 retro-inverso e/ou um polipeptídeo de Flg15.
[0509] A composição pode compreender pelo menos um polipepíideo de Flg22 retro inverso. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de Flg22 retro inverso pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 376–450, 527, 531, 533, 535, 537 e 539.
[0510] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de FlgII-28 retro-inverso. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo FlgII-28 retro-inverso pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 451-525 ou 588.
[0511] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de Flg15 retro-inverso. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de Flg15 retro-inverso pode compreender SEQ ID NOs: 529 ou
586.
[0512] A composição pode compreender pelo menos um RHPP.
Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de RHPP pode compreender qualquer uma de SEQ ID Nos: 604, 607, 608 e 745-755. Por exemplo, a composição pode compreender um RHPP tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 604.
[0513] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de RHPP retro-inverso. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de RHPP retro-inverso pode compreender qualquer uma de SEQ ID NO: 605, 609, 610 e 756–766.
[0514] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de tionina ou tipo tionina pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 620-719. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 620. Em alguns casos, o pilipeptídeo de tionina ou tipo tionina pode ser fundido a uma sequência de alvo de floema para formar um polipeptídeo fundido. A sequência de floema ou alvo de floema pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 611-619 ou qualquer combinação das mesmas. Em alguns casos, a sequência de floema ou de alvo de floema compreende SEQ ID NO: 611. Em alguns casos, o polipeptídeo de fusão compreendendo um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina e uma sequência de floema ou alvo de floema pode compreender SEQ ID NO: 720.
[0515] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de glucanase. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de glucanase pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-735 e 767-
776. A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de amilase.
Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de amilase pode compreender SEQ ID NO: 734 ou SEQ ID NO: 735. A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de quitinase. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de quitinase pode compreender SEQ ID NO: 777 ou SEQ ID NO:
778. Em alguns casos, a composição pode compreender duas ou mais glucanases (por exemplo, -1,3-glucanases), amilases ou quitinases. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de glucanase (por exemplo, um -1,3- glucanase) tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 731-733 e 767-776 e uma amilase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 734 ou SEQ ID NO:
735. Alternativamente, a composição pode compreender uma glucanase (por exemplo, uma β-1,3-glucanase) e uma quitinase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 777 ou SEQ ID NO: 778. De preferência, a composição pode compreender uma β-1,3-glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 772.
[0516] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de serina protease. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de serina protease pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 721, 722 e 794-796. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 722 ou 795. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 794 ou 796.
[0517] A composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de ACC desaminase. Uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de ACC desaminase pode compreender qualquer uma de SEQ ID NOs: 723-730. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de ACC desaminase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 730.
[0518] A composição pode compreender pelo menos dois polipeptídeos bioativos.
[0519] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina associado a flagelina e um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo
SEQ ID NO: 571 e um polipeptídeo de tionina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 620.
[0520] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e um polipeptídeo de RHPP. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 571 e um polipeptídeo de RHPP tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 604.
[0521] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e uma serina protease. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e uma serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 721, 722 e 794-796.
[0522] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e uma glucanase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e uma glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 e 767-776. Em alguns casos, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e uma glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 732 ou 772.
[0523] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e uma amilase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e uma amilase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 734 ou 735.
[0524] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e uma quitinase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e uma quitinase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 777 ou 778.
[0525] A composição pode compreender uma glucanase e uma amilase, ou uma glucanase e quitinase. Por exemplo, a composição pode compreender uma β-1,3-endoglucanase e uma amilase. Por exemplo, a composição pode compreender uma β-1,3-endoglucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NO: 731- 733 e 767-776 e uma amilase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 734 ou SEQ ID NO: 735. Como um exemplo adicional, a composição pode compreender uma β-1,3-endoglucanase e uma quitinase. Por exemplo, a composição pode compreender uma β-1,3- endoglucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NO: 731-733 e 767-776 e uma quitinase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 777 ou SEQ ID NO: 778.
[0526] [0515] Composições aqui descritas tendo uma glucanase em combinação com uma amilase ou uma quitinase podem compreender ainda pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina. Por exemplo, uma composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina, uma β-1,3-endoglucanase e uma amilase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571, uma β-1,3-endoglucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NO: 731-733 e 767-776, e uma amilase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 734 ou 735. Como um exemplo adicional, uma composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina, uma β-1,3-endoglucanase e uma quitinase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571, uma β-1,3- endoglucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NO: 731-733 e 767-776, e uma quitinase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 777 or SEQ ID NO: 778
[0527] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e uma ACC desaminase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e uma ACC desaminase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 730.
[0528] A composição pode compreender um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP) ou um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP) retro inverso e uma glucanase. Por exemplo, a composição pode compreender um RHPP tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 745-756 ou um RI-RHPP compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 757-766 e uma β-1,3-glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 731- 733 e 767-776.
[0529] A composição pode compreender um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP) ou um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP) retro-inverso e uma ACC desaminase. Por exemplo, a composição pode compreender um RHPP tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 745-756 ou um RI-RHPP compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 757-766 e uma ACC Desaminas tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 723–730.
[0530] A composição pode compreender uma glucanase e uma serina protease. Por exemplo, a composição pode compreender uma glucanase (por exemplo, uma β-1,3-glucanase) tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 e 767-776 e uma serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 721, 722 e 794-796. Por exemplo, a composição pode compreender uma glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 772 ou 732 e uma serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 722 e 794-796. A composição pode compreender um polipeptídeo bioativo e pelo menos um composto indutor.
[0531] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e um inibidor da calose sintase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e um inibidor da calose sintase. O inibidor da calose sintase pode compreender 2-desoxi-D-glicose (2-DDG). Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina).
[0532] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e um aminoácido. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e um aminoácido. O aminoácido pode compreender L-cisteína ou ácido β-amino-butírico (BABA). De preferência, o aminoácido compreende ácido β-amino-butírico (BABA). Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina).
[0533] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e um ácido benzoico substituído ou não substituído. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e um ácido benzoico substituído ou não substituído. O ácido benzoico substituído pode compreender ácido salicílico. Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina).
[0534] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e um benzotiadiazol. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e um benzotiadiazol. O benzotiadiazol pode compreender benzo S- metil éster de ácido (1,2,3)-tiadiazol-7-carbotióico, disponível comercialmente como fungicida ACTIGARD 50WG. Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina).
[0535] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e um ácido dicarboxílico. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e um ácido dicarboxílico. O ácido dicarboxílico pode compreender ácido oxálico. Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina).
[0536] A composição pode compreender uma flagelina ou um polipeptídeo associado à flagelina e uma betaína. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e uma betaína. A betaína pode compreender cloridrato de betaína ou glicina betaína.
Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina).
[0537] A composição pode compreender uma flagelina ou um polipeptídeo associado à flagelina e uma prolina. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e uma prolina. A prolina pode compreender L-prolina. Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina).
[0538] A composição pode compreender uma flagelina ou um polipeptídeo associado à flagelina e um herbicida. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e um herbicida. O herbicida pode compreender lactofeno. Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina).
[0539] A composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e um inibidor da succinato desidrogenase.
Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e um inibidor da succinato desidrogenase. O inibidor da succinato desidrogenase pode compreender bixafen.
[0540] A composição pode compreender uma flagelina ou um polipeptídeo associado à flagelina e um bactericida. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571 e um bactericida. O bactericida pode compreender oxitetraciclina.
[0541] A composição pode compreender um polipeptídeo promotor de pelo de raiz ou um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso e um inibidor de succinato desidrogenase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo promotor de pelo de raiz ou um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 745-766 e um inibidor da succinato desidrogenase. O inibidor da succinato desidrogenase pode compreender bixafen. O polipeptídeo promotor de pelo de raiz ou o polipeptídeo promotor de pelo de raiz retroinverso pode compreender um polipeptídeo livre.
[0542] A composição pode compreender flagelina ou polipeptídeo associado a flagelina ou um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso e um inibidor da succinato desidrogenase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 226, 289, 290, 291, 293, 294, 295, 300, 437, 526, 532, 534, 536, 538, 540, 571–585 e 587–603 ou um polipeptídeo de flagelina retro inverso ou associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 376-525, 527, 529, 531, 533, 535, 537, 539 ou 588, ou 586 e um inibidor da succinato desidrogenase. O inibidor da succinato desidrogenase pode compreender bixafen. A serina protease pode compreender um polipeptídeo livre.
[0543] A composição pode compreender um inibidor da glucanase e um inibidor da succinato desidrogenase. Por exemplo, a composição pode compreender glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 e 767-776 e um inibidor da succinato desidrogenase. O inibidor da succinato desidrogenase pode compreender bixafen. A glucanase pode compreender um polipeptídeo livre.
[0544] A composição pode compreender uma quitinase e um inibidor da succinato desidrogenase. Por exemplo, a composição pode compreender uma quitinase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 777 ou 778 e um inibidor da succinato desidrogenase. O inibidor da succinato desidrogenase pode compreender bixafen. A quitinase pode compreender um polipeptídeo livre.
[0545] A composição pode compreender uma serina protease e um inibidor da succinato desidrogenase. Por exemplo, a composição pode compreender uma serina protease tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 721, 722 e 794-796 e um inibidor da succinato desidrogenase. O inibidor da succinato desidrogenase pode compreender bixafen. A serina protease pode compreender um polipeptídeo livre.
[0546] A composição pode compreender um tionina e um inibidor da succinato desidrogenase. Por exemplo, a composição pode compreender uma tionina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 620-719 e um inibidor da succinato desidrogenase. O inibidor da succinato desidrogenase pode compreender bixafen. O polipeptídeo de tionina ou tipo tionina pode compreender um polipeptídeo livre.
[0547] A composição pode compreender um polipeptídeo de ACC desaminase e um inibidor da succinato desidrogenase. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de ACC desaminase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 723-730 e um inibidor da succinato desidrogenase. O inibidor da succinato desidrogenase pode compreender bixafen. A ACC desaminase pode compreender um polipeptídeo livre.
[0548] A composição pode compreender uma amilase e um inibidor da succinato desidrogenase. Por exemplo, a composição pode compreender uma amilase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs 734 e 735 e um inibidor da succinato desidrogenase. O inibidor da succinato desidrogenase pode compreender bixafen. A amilase pode compreender um polipeptídeo livre.
[0549] A composição pode compreender um polipeptídeo promotor de pelo de raiz ou um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso e uma betaína. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP) tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 604, 607, 608 e 745-756 ou um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso (RI-RHPP) compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 605, 757-766 e uma betaína. A betaína pode compreender cloridrato de betaína ou glicina betaína.
Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina).
[0550] A composição pode compreender um polipeptídeo promotor de pelo de raiz ou um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso e uma prolina. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP) tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 604, 607, 608 e 745-756 ou um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso (RI-RHPP) compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 605 e 757-766 e uma prolina.
[0551] A prolina pode compreender L-prolina. Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina).
[0552] Qualquer composição particularmente aqui descrita é eficaz no tratamento de plantas ou partes de plantas de citros e doenças de citros. Elas também podem ser empregadas como em tratamentos de sulcos ou foliares para melhorar rendimento de uma árvore. Elas também podem ser empregadas como em tratamentos de sulcos ou foliares para aumentar rendimento de cultura (por exemplo, em culturas em linha).
[0553] Por exemplo, os métodos de tratamento de uma doença de planta em uma planta em necessidade dos mesmos podem compreender administrar à planta por injeção de tronco, um spray foliar, uma rega de solo ou uma aplicação de tratamento de semente, uma composição que compreende um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e pelo menos um composto indutor compreendendo ácido β-aminobutírico (BABA) ou um sal do mesmo, 2-desoxi-D-glicose (2-DDG) ou um sal do mesmo, ácido salicílico (SA) ou um sal do mesmo; e ácido oxálico (OA) ou um sal do mesmo, L-cisteína e um análogo de L-cisteína e um ácido ou um sal do mesmo, uma proteína antimicrobiana compreendendo um peptídeo de tionina ou um tipo tionina ou qualquer combinação dos mesmos. Opcionalmente, a composição pode compreender ainda um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina). O polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina pode ser um polipeptídeo Flg22 (por exemplo, um polipeptídeo tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571).
[0554] A doença pode compreender esverdeamento do citro da Ásia, doença de Huanglonging (HLB), ferrugem da soja da Ásia, podridão do caule de Sclerotinia (ou mofo branco), mancha foliar de Pseudomonas, ou queima foliar de Cercospora.
[0555] Nos métodos, a composição pode ser aplicada imediatamente antes da formação floral ou na fase pré-floração.
[0556] O crescimento pode compreender meritemas apicais de raiz e florais, produção de órgãos florais, desenvolvimento de fruto, produção de fruto, número de órgãos florais, tamanho de órgãos florais, ou uma combinação dos mesmos.
[0557] Nos métodos, proteger a planta ou a parte de planta de doença pode compreender tratamento profilático, tratamento, prevenção e diminuição da progressão da doença sobre ou na planta ou parte de planta.
[0558] A doença pode compreender doença de esverdeamento de citro Asiática (HLB), doença de cancro de Citro, queima foliar de Cercospora ou uma bactéria causando doença.
[0559] A bactéria causando a doença pode incluir ferrugem bacteriana da folha, estria bacteriana da folha, podridão do caule bacteriana, mancha bacteriana da folha, queimadura da folha bacteriana, podridão do topo bacteriano, faixa bacteriana, mancha do chocolate, murchidão e mancha bacteriana de Goss, mancha Holcus, bainha da folha roxa, podridão da semente, ferrugem da semente, doença de Stewart (murchidão bacteriana), atrofia do milho, Fire Blight, doença de Pierce, clorose variegada do citro, cancro do citro, serovares de Pseudomonas syringae, ou uma combinação dos mesmos.
[0560] Os métodos podem ainda compreender prevenir ou reduzir deposição da calose no ou em torno do plasmodesmata do floema em uma árvore infectada com Canditus (Ca.) Liberibacter
[0561] Os métodos podem ainda compreender diminuir queda de fruto de uma planta infectada com uma doença. Por exemplo, a doença pode compreender uma infecção por Canditus (Ca.) Liberibacter e/ou Huanglongbing (HLB).
[0562] Nos métodos, o polipeptídeo, a composição, ou o microrganismo recombinante pode ser aplicado exogenamente à planta, à parte de planta, ou ao meio de crescimento de planta.
[0563] Nos métodos, o polipeptídeo, a composição, ou o microrganismo recombinante pode ser aplicado endogenamente à planta ou a parte de planta. Por exemplo, o polipeptídeo, a composição ou o microrganismo recombinante podem ser aplicados ao sistema vascular da planta (por exemplo, via injeção em um tronco, caule, raiz ou videira de uma planta).
[0564] A parte de planta pode incluir uma célula de planta, uma folha, um galho, um tronco, uma videira, um tecido de planta (isto é, xilema ou floema), um caule, uma flor, uma folhagem, um órgão floral, um fruto, pólen, um vegetal, um tubérculo, um rizoma, um cormo, um bulbo, um pseudobulbo, uma vagem, uma raiz, uma bola de raiz, um haste de raiz, um rebento ou uma semente.
[0565] Nos métodos, o polipeptídeo isolado ou a composição pode ser aplicada a uma superfície da planta, uma folhagem da planta ou uma superfície de uma semente da planta.
[0566] Nos métodos, o polipeptídeo isolado ou a composição pode ser aplicada à superfície da semente e a planta ou a parte de planta é crescida da semente.
[0567] Nos métodos, o polipeptídeo isolado ou a composição pode ser injetada num ramo, tronco, caule, vasculatura, raiz, ou videira da planta.
[0568] Nos métodos, o polipeptídeo isolado ou a composição pode ser aplicada como uma aplicação foliar.
[0569] Nos métodos, o polipeptídeo isolado ou a composição pode ser injetada em um ramo, tronco, caule, videira, ou raiz da planta.
[0570] Nos métodos em que uma composição compreendendo um polipeptídeo e um composto indutor, ou dois polipeptídeos ou dois compostos indutores são usados; a composição pode ser preparada em duas composições separadas para permitir aplicação separada (por exemplo, sequencial) dos dois componentes. Isto é, os métodos podem compreender aplicar sequencialmente um ou mais componentes da composição à planta ou parte de planta. Por exemplo, o método pode compreender aplicar sequencialmente um ou mais dos polipeptídeos da composição e um ou mais dos compostos indutores da composição à planta ou à parte de planta.
[0571] As aplicações sequenciais podem ser feitas dentro de 100 horas, dentro de 72 horas, dentro de 48 horas, dentro de 24 horas, dentro de 12 horas ou dentro de 4 horas.
[0572] Por exemplo, uma composição compreendendo um polipeptídeo (por exemplo, um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina) e um indutor (por exemplo, um inibidor da calose sintase) podem ser preparados como duas composições separadas e administradas separadamente (por exemplo, sequencialmente) à planta ou parte de planta.
Alternativamente, as composições podem ser combinadas e aplicadas ao mesmo tempo.
[0573] A planta pode ser uma planta frutífera ou planta vegetal e o método fornece elevado rendimento de frutos ou vegetais.
[0574] A planta pode ser uma árvore ou uma videira.
[0575] A planta pode ser uma cultura em linha (por exemplo, milho ou soja)
[0576] A planta pode ser uma planta de citro (por exemplo, uma árvore de citro).
[0577] A planta pode ser uma planta de citro e o método reduz sintomas de doença na planta de citro. Por exemplo, os sintomas da doença melhorados podem compreender uma redução no título do patógeno (isto é, um título bacteriano), conforme descrito abaixo.
MÉTODOS PARA QUANTIFICAR TÍTULO DE CLAS EM UMA PLANTA DE CITRO INFECTADA
[0578] A presença dos títulos bacterianos de CLas nas árvores de citros infectadas com HLB pode ser determinada com métodos quantitativos de reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) usando iniciadores específicos para confirmar a presença da doença (Li, W.B., Hartung, J.S. e Levy, L. 2008 “Optimized quantification of unculturable ‘Candidatus Liberibacter spp.’ In host plants using real-time PCR”, Plant Disease 92: 854–861). A extração de DNA e a análise quantitativa de PCR (qPCR) nessas folhas foram realizadas em Southern Gardens Citrus (Clewiston, Flórida) usando conjunto de iniciador de HLB direcionando o DNA 16S da bactéria C. liberibacter 5’»3’ (direto): HLB como TCGAGCGCGTATGCAATACG; (SEQ ID NO: 742, direto) HLBr: GCGTTATCCCGTAGAAAAAGGTAG (SEQ ID NO: 743, reverso); HLBpc (sonda): AGACGGFTGAGTAACGCG (SEQ ID NO: 744), onde "F" representa um marcador de corante repórter fluorescente intercalado na sequência de sonda]. Quarenta ciclos de qPCR foram conduzidos e o sinal fluorescente que é proporcional à quantidade de dsDNA em solução foi medido. A análise qPCR permite a detecção da bactéria CLas no tecido de citro. Os valores de limiar de ciclo (Ct) da análise qPCR foram obtidos para cada tratamento. A medição Ct é equivalente ao número de ciclos de PCR necessários para produzir um nível de limiar relativo. Como na prática comum dentro do campo de biologia molecular, a mudança no valor Ct é relatada para indicar a quantidade relativa de DNA de CLas seja em amostras tratadas versus não tratadas ou em amostras tratadas em um ponto no tempo versus outro tempo. Quanto mais alto o valor Ct, maior ou mais eficaz o efeito de tratamento, o que é indicado pela redução/eliminação da bactéria CLas da árvore. Uma redução percentual na carga bacteriana pode ser computada como: % de redução na amostra ao longo do tempo = (1 - 2 [Ct (tempo inicial)-Ct(tempo posterior)]) ∗ 100% ou % de redução na amostra tratada vs.
controle = (1 - 2[Ct (amostra de controle) -Ct(amostra tratada)])∗100%
MÉTODOS PARA MELHORAR A QUALIDADE E QUANTIDADE DE SUCO OBTIDO DE UMA PLANTA
[0579] O método também pode compreender aumentar rendimento de fruto e/ou melhorar a qualidade e/ou quantidade de suco obtido de uma planta. A qualidade de suco é tipicamente expressa em termos de açúcar (Brix) e teor de ácido. Uma medida particularmente útil da qualidade de suco é a razão dos dois (por exemplo, uma razão Brix:ácido). Métodos para obter uma razão Brix:ácido são descritos na técnica (JBT Food Tech Laboratory Manual, "Procedures for Analysis of Citrus Products, Sixth edition).
Os métodos, portanto, podem compreender aumentar teor de suco e/ou melhorar o teor de açúcar ou ácido e/ou melhorar uma razão Brix:ácido em um suco obtido de uma planta de citro ou parte de planta.
[0580] Qualquer polipeptídeo isolado aqui descrito (por exemplo, um RHPP isolado ou RI-RHPP ou uma glucanase isolada, amilase e/ou quitinase) pode ser utilizado neste método. Por exemplo, um RHPP ou RI- RHPP isolado tendo uma sequência de aminoácido compreendendo ou consistindo em qualquer uma de SEQ ID NOs: 745-766 pode ser usado neste método. Alternativamente, uma glucanase, amilase ou quitinase isolada tendo uma sequência de aminoácido compreendendo ou consistindo em qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 735 e 767-778 pode ser usada neste método. Por exemplo, o polipeptídeo isolado pode compreender uma glucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo ou consistindo em qualquer uma de SEQ ID NO: 732 e 767-776. Como outro exemplo, o polipeptídeo isolado pode compreender uma amilase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo ou consistindo em SEQ ID NO: 735. Como outro exemplo, o polipeptídeo isolado pode compreender uma quitinase compreendendo ou consistindo em SEQ ID NO: 777 ou SEQ ID NO: 778.
[0581] Qualquer composição compreendendo pelo menos um polipeptídeo, como aqui descrita, pode ser utilizada neste método. Por exemplo, a composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina (por exemplo, tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NO: 571, 1–375, 526, 528, 530, 532, 534, 536, 538, 540, 541, 572-585, 587 e 589-603) ou pelo menos um um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro-inverso (por exemplo, tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NO: 376-525, 527, 529, 531, 533, 535, 537, 539 ou 588, ou 586); ou pelo menos um polipeptídeo RHPP (por exemplo, tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 604, 607, 608 e 745-756), ou pelo menos um polipeptídeo RI-RHPP (por exemplo, tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs:605, 609, 610 e 757-766), ou pelo menos um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina (por exemplo, tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 620-719), ou pelo menos uma serina protease (por exemplo, tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 721-722 e 794-796), ou pelo menos uma glucanase (por exemplo, tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-735 e 767-776), ou pelo menos uma ACC desaminase (por exemplo, tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 723-730), conforme descrito neste documento.
[0582] Qualquer composição compreendendo pelo menos um polipeptídeo livre, como aqui descrita, pode ser utilizada neste método. Por exemplo, a composição pode compreender pelo menos um polipeptídeo livre compreendendo um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina (por exemplo, tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NO: 571, 1–375, 526, 528, 530, 532, 534, 536, 538, 540, 541, 572- 585, 587 e 589-603) ou pelo menos um polipeptídeo livre compreendendo uma um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso (por exemplo, tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NO: 376-525, 527, 529, 531, 533, 535, 537, 539 ou 588 ou 586); ou pelo menos um polipeptídeo livre compreendendo um polipeptídeo RHPP (por exemplo, tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 604, 607, 608 e 745-756), ou pelo menos um polipeptídeo livre compreendendo um polipeptídeo RI-RHPP (por exemplo, tendo um sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 605, 609, 610 e 757-766), ou pelo menos um polipeptídeo livre compreendendo um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina (por exemplo, tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 620-719), ou pelo menos um polipeptídeo livre compreendendo uma serina protease (por exemplo, tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 721-722 e 794-796), ou pelo menos um polipeptídeo livre compreendendo uma glucanase (por exemplo, tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-735 e 767- 776), ou pelo menos um polipeptídeo livre compreendendo uma ACC desaminase (por exemplo, tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 723-730) conforme descrito neste documento
[0583] Nos métodos de melhorar quantidade e/ou qualidade de suco, a composição também pode compreender qualquer indutor aqui descrito.
Indutores adequados que podem ser usados em combinação ou com um polipeptídeo para melhorar quantidade de suco incluem um inibidor da calose sintase, um bactericida, um aminoácido ou isômero do mesmo, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou derivado ou sal do mesmo, um ácido dicarboxílico ou derivado ou sal do mesmo, um benzotiadiazol, uma betaína, uma prolina, um inibidor da succinato desidrogenase (por exemplo, bixafen) ou qualquer combinação dos mesmos.
[0584] Nos métodos de melhorar quantidade e/ou qualidade de suco, a planta pode ser uma árvore ou uma videira. A planta também pode ser uma planta de citro (por exemplo, uma árvore de citro).
[0585] A planta de citro pode compreender uma laranja, um limão, uma lima, uma tangerina, um kumquat, um tangelo, ou qualquer variedade, híbrido ou cruzamento da mesma.
[0586] A planta pode ser uma cultura em linha. Por exemplo, a cultura em linha pode ser milho ou soja.
[0587] Nos métodos em que uma composição compreendendo um polipeptídeo e um composto indutor, ou dois polipeptídeos ou dois compostos indutores são usados; a composição pode ser preparada em duas composições separadas para permitir aplicação separada (por exemplo, sequencial) dos dois componentes. Isto é, os métodos podem compreender aplicar sequencialmente um ou mais componentes da composição à planta ou parte de planta. Por exemplo, o método pode compreender aplicar sequencialmente um ou mais dos polipeptídeos da composição e um ou mais dos compostos indutores da composição à planta ou à parte de planta.
As aplicações sequenciais podem ser feitas dentro de 100 horas, dentro de 72 horas, dentro de 48 horas, dentro de 24 horas, dentro de 12 horas ou dentro de 4 horas.
[0588] Por exemplo, uma composição compreendendo um polipeptídeo (por exemplo, um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina) e um indutor (por exemplo, um inibidor da calose sintase) podem ser preparados como duas composições separadas e administradas separadamente (por exemplo, sequencialmente) à planta ou parte de planta.
Alternativamente, as composições podem ser combinadas e aplicadas ao mesmo tempo.
[0589] Métodos também são fornecidos compreendendo aplicar à planta ou parte de planta uma segunda composição, em que a segunda composição compreende qualquer polipeptídeo aqui descrito e/ou qualquer composto indutor aqui descrito.
[0590] Nos métodos, os polipeptídeos isolados ou as composições podem ser aplicadas exogenamente ou endogenamente à planta ou parte de planta. Quando aplicado endogenamente, o polipeptídeo isolado (por exemplo, uma β-1,3-glucanase) ou a composição pode ser injetado em um tronco, raiz ou caule da planta. A injeção pode ser realizada para assegurar distribuição do polipeptídeo isolado ou da composição diretamente para o sistema vascular da planta ou parte de planta - isto é, para o xilema e/ou floema da planta ou parte de planta.
[0591] Em métodos onde as composições são aplicadas duas ou mais vezes durante uma estação de crescimento, a primeira aplicação pode ocorrer no ou antes do estágio V2 de desenvolvimento e as aplicações subsequentes podem ocorrer antes de a planta florescer. Por exemplo, a primeira aplicação pode ocorrer como tratamentos de uma semente, em/ou antes do estágio VE de desenvolvimento, no ou antes do estágio V1 de desenvolvimento, no ou antes do estágio V2 de desenvolvimento, no ou antes do estágio V3 de desenvolvimento, no ou antes do estágio V4 de desenvolvimento, no ou antes do estágio V5 de desenvolvimento, no ou antes do estágio V6 de desenvolvimento, no ou antes do estágio V7 de desenvolvimento, no ou antes do estágio V8 de desenvolvimento, no ou antes do estágio V9 de desenvolvimento, no ou antes do estágio V10 de desenvolvimento, no ou antes do estágio V11 de desenvolvimento, no ou antes do estágio V12 de desenvolvimento, no ou antes o estágio V13 de desenvolvimento, no ou antes do estágio V14 de desenvolvimento, no ou antes do estágio V15 de desenvolvimento, no ou antes do estágio VT de desenvolvimento, no ou antes do estágio R1 de desenvolvimento, no ou antes do estágio R2 de desenvolvimento, no ou antes do estágio R3 de desenvolvimento, no ou antes do estágio R4 de desenvolvimento, no ou antes do estágio R5 de desenvolvimento, no ou antes do estágio R5 de desenvolvimento, no ou antes do estágio R6 de desenvolvimento, no ou antes do estágio R7 de desenvolvimento, ou no ou antes do estágio R8 de desenvolvimento. A título de exemplo, a primeira aplicação pode ocorrer no ou antes do estágio de germinação, no ou antes do estágio de muda, no ou antes do estágio de cultivo, no ou antes do estágio de alongamento de caule, no ou antes do estágio de iniciação, no ou antes do estágio de crescimento. Por exemplo, onde a escala de estágio de crescimento de Feekes é usada para identificar o estágio de crescimento de uma safra de cereal, a primeira aplicação pode ocorrer no ou antes do estágio 1, no ou antes do estágio 2, no ou antes do estágio 3, no ou antes do estágio 4, no ou antes do estágio 5, no ou antes do estágio 6, no ou antes do estágio 7, no ou antes do estágio 8, no ou antes do estágio 9, no ou antes do estágio 10, no ou antes do estágio 10.1, no ou antes do estágio 10.2, no ou antes do estágio 10.3, no ou antes do estágio 10.4, ou no ou antes do estágio 10.5.
TENSÃO ABIÓTICA
[0592] Tensão abiótica causa perda significativa de safra e pode resultar em grandes reduções em produção de safra e potencial de rendimento.
Os polipeptídeos de iniciação bioativa e as composições como aqui descritos podem ser usados como agentes de iniciação química para aumentar tolerância de uma planta a uma ou mais tensões abióticas. Assim, os polipeptídeos de flagelina, polipeptídeos associados à flagelina de Flg22 ou FlgII-28 derivados de espécies Bacillus, Flg15 e Flg22 derivados de E. coli e outros organismos (Tabela 5) e os polipeptídeos RHPP derivados de Glycine max (Tabelas 11 a 13) são úteis para aumentar a tolerância de uma planta, grupo de plantas, campo de plantas e/ou partes de plantas a tensão abiótica. Os polipeptídeos e as composições como aqui descritas conferem tolerância a tensão abiótica a uma planta ou parte de planta. A tolerância a tensão abiótica conferida a uma planta ou parte de planta é para tensões abióticas que incluem, mas não estão limitadas a: tensão de temperatura, tensão de radiação, tensão de seca, tensão de frio, tensão de sal, tensão osmótica, deficiência de nutriente ou alta tensão de metal e tensão de água que resulta de déficit de água, inundação ou anoxia. A iniciação química usando os polipeptídeos de iniciação bioativa e as composições aqui descritas é aplicada a uma planta ou parte de planta oferecendo uma abordagem versátil para proteger a planta ou parte de planta contra tensões abióticas individuais, múltiplas ou combinadas.
[0593] Os polipeptídeos e as composições como aqui descritas são eficazes para proteger uma planta contra tensionadores abióticos quando aplicados como uma aplicação foliar acima do solo a uma planta, uma parte de planta, uma raiz da planta, uma semente de planta, um meio de crescimento de planta ou à área circundando uma planta ou a área circundando uma semente de planta. Por exemplo, para árvores, uma ou mais aplicações podem ser aplicadas em diferentes temporizações de crescimento de árvores, incluindo temporizações antes, durante ou depois de descargas; antes, durante ou depois de frutificação; ou antes ou depois de colheita de fruto.
[0594] Os métodos aqui descritos inicial quimicamente a planta para proteção contra tensão(ões) abiótica(s) de tal forma que a planta já preparou e iniciou mecanismos de defesa que podem ser ativados mais rápido e aumentar tolerância a uma tensão abiótica ou múltiplos tensores ocorrendo simultaneamente ou em tempos diferentes durante a estação de crescimento.
[0595] As formas retro inversas dos polipeptídeos Flg22, conforme descrito neste documento, podem ser aplicadas externamente como uma aplicação de pulverização foliar (ou usando outros métodos de aplicação também, por exemplo, como uma rega de raiz) durante tempos de excessiva tensão de calor, água e seca e ser usadas para proteger uma planta contra tensão de seca, calor e/ou outras tensões abióticas que podem afetar a abertura e oscilação estomática que comumente ocorrem com perda de transpiração através de uma planta.
[0596] Nos métodos, a composição compreende, de preferência, pelo menos, uma de uma prolina, uma betaina, uma ACC desaminase ou qualquer combinação das mesmas. Além disso, a composição pode compreender um ou mais polipeptídeos de iniciação bioativa. Por exemplo, a composição pode compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e pelo menos uma de uma prolina, uma betaína ou uma ACC desaminase. A tensão abiótica pode compreender tensão de calor, tensão de temperatura, tensão de radiação, tensão de seca, tensão de frio, tensão de sal, tensão de deficiência de nutriente, tensão de metal alta, tensão de água, tensão osmótica qualquer combinação das mesmas.
EQUILIBRANDO RESPOSTA IMUNE COM CRESCIMENTO E DESENVOLVIMENTO DE PLANTA
[0597] Embora respostas imunes possam fornecer proteção de plantas de ataque de patógeno, respostas imunes excessivas podem ter impactos negativos no crescimento de planta. Portanto, equilibrar imunidade intensificada ou prevenção e proteção de doença em uma planta com uma resposta de promoção de crescimento elevada é uma combinação desejada para otimizar saúde de planta.
[0598] Polipeptídeos de iniciação bioativa que são úteis para intensificar respostas imunes como aqui descritas podem ser combinados com polipeptídeos que fornecem impactos positivos em crescimento e produtividade de planta. As combinações de polipeptídeos são selecionadas especificamente por seus modos distintos de ação/regulação quando aplicados a uma planta ou parte de planta. No entanto, alguns dos polipeptídeos de iniciação bioativa (peptídeos Flg, tal como Flg22, Flg15 e FlgII-28) são percebidos por proteínas tipo receptoras, seguidos por um processo que inicia sua entrada e seu transporte na planta, o que resulta em resultados funcionais, enquanto outros são levados para a planta por absorção ativa. Por exemplo, os polipeptídeos associados a Flg, tal como Flg22, Flg15 e FlgII-28, são percebidos por uma cinase receptora rica em leucina localizada na superfície da membrana plasmática e envolvem uma via de sinalização complexa envolvida nas respostas disparadas por patógeno levando à imunidade, resistência a doença ou prevenção de doença (Kutschmar et al. “PSKα promotes root growth in Arabidopsis,” New Phytologist 181: 820–831, 2009).
[0599] Os polipeptídeos de iniciação bioativa como aqui descritos, tal como polipeptídeos de Flg22 e tioninas podem agir como elicitadores e exibir atividade antimicrobiana (por exemplo, atividade antipesticida; bacterianas, fúngicas ou virais). Combinações específicas de polipeptídeos são fornecidas, por exemplo, a combinação de polipeptídeos de iniciação bioativa de flagelina ou associados à flagelina são úteis para prevenir e proteger plantas de doenças patogênicas e servem a uma utilidade dupla quando elas são aplicadas juntas com aqueles outros polipeptídeos, por exemplo, RHPP, serina proteases, glucanases e/ou ACC desaminases, que intensificam crescimento e produtividade de planta em uma planta, parte de planta e/ou campo de plantas.
[0600] As composições de iniciação bioativa descritas neste documento podem ser aplicadas exogenamente como um spray foliar, em tratamento de sulco, aplicação de solo, tratamento de semente, rega ou lavagem ou endogenamente a uma planta para estimular tanto a capacidade de resposta imune quanto características de crescimento da planta que coletivamente resultam em desempenho de rendimento melhorado. Elas também podem fornecer proteção e benefícios de crescimento para as diferentes partes da planta (por exemplo, folhas, raízes, tubérculos, rebentos, rizomas, bulbos, pseudobulbos, flores, frutos, frutos e meristemas de crescimento).
[0601] Qualquer uma de composições de iniciação bioativa, conforme descrito neste documento, pode ser aplicada uma ou mais vezes a uma planta seja em combinação ou individualmente para intensificar crescimento e produtividade de uma planta. Múltiplas aplicações podem ser aplicadas para promover benefícios de rendimento ao longo da estação de crescimento com aplicações adaptadas às condições do ambiente, por exemplo, se um período de clima quente e seco for esperado durante a estação de crescimento, um spray adicional de polipeptídeos de iniciação bioativa que promovem crescimento sob tensão abiótica pode aliviar impactos negativos para a planta. Além disso, qualquer dos componentes individuais de uma composição pode ser dividido em composições separadas para aplicação separada na planta ou parte de planta. Por exemplo, quando uma composição compreende um indutor e um polipeptídeo, a aplicação da "composição" à planta ou parte de planta não requer administração simultânea. Em vez disso, o indutor e o polipeptídeo podem ser aplicados separadamente de acordo com o conhecimento na técnica.
[0602] Por exemplo, os métodos aqui compreendem aplicar uma composição compreendendo um polipeptídeo e um indutor. Em certos casos, o indutor pode ser aplicado separadamente (por exemplo, antes ou depois) da composição. Por exemplo, quando o indutor compreende um bactericida (por exemplo, oxitetraciclina), o indutor pode ser aplicado antes ou depois da composição compreendendo o polipeptídeo.
DOENÇA BACTERIANA
[0603] Métodos de usar as composições de iniciação bioativa, tal como aquelas contendo os polipeptídeos associados à flagelina ou os polipeptídeos tipo tionina, sozinhos ou em combinação com um composto indutor, conforme descrito neste documento, são úteis para a prevenção, o tratamento e o controle de doenças bacterianas em milho e particularmente úteis para o tratamento de doença de estria foliar bacteriana em milho causada por Xanthomonas vasicola pv. vasculorum, também conhecido como Xanthomnas campestris pv. vasculorum.
[0604] Pesquisas indicam que a doença de estria foliar bacteriana se espalhou e pode ser amplamente distribuída por todo o Cinturão do Milho dos Estados Unidos (Indiana Ocidental, Illinois, Iowa, Missouri, Nebraska Oriental e Kansas Oriental). Propagação da doença é mais prevalente onde milho é plantado em milho em práticas de rotação de cultura. A doença de estria foliar bacteriana pode causar infecção em sementes de milho dentado (campo), milho de pipoca e doce. Os sintomas em milho incluem estrias amarelas estreitas a castanhas e estrias amarelas castanhas entre as nervuras das folhas. Lesões geralmente se desenvolvem em folhas de plantas mais baixas ou mais velhas e inicialmente se espalham para as folhas mais altas ou mais novas na planta. Descoloração amarela também pode estar presente em torno das lesões.
[0605] A doença de estria foliar bacteriana de milho sobrevive presumivelmente em detritos de hospedeiro previamente infectado. Exudatos bacterianos encontrados em superfícies de tecidos foliares infectados podem servir como inóculos secundários. A bactéria é espalhada pelo vento, respingos de chuva e, possivelmente, por água de irrigação. O patógeno penetra nas folhas de milho através de aberturas naturais, tal como estômatos, que podem resultar em um padrão de faixas de lesões ocorrendo através das folhas.
Colonização de tecidos foliares aparentemente é restringida por nervuras principais.
[0606] Como a doença é causada por um patógeno bacteriano, o uso atual de bactericidas é problemático para controlá-la. Por exemplo, a maioria dos bactericidas age como produtos de contato e não são sistêmicos e,
assim, não serão absorvidos ou levados para a planta via outros mecanismos.
Tratamentos bactericidas podem exigir aplicações repetidas, pois o bactericida pode ser lavado com chuva ou vento, assim tornando-os antieconômicos ou impraticáveis para uso em algumas culturas de milho.
[0607] Práticas atuais de gerenciamento de doença até o momento recomendam práticas de rotação de cultura (tal como milho, soja e depois de volta ao milho) e a implementação de práticas de sanitização, tal como limpar equipamentos entre uso no campo para retardar progressão da doença.
[0608] Aplicações foliares de composições de iniciação bioativa descritas neste documento que contêm os polipeptídeos Flg (Tabelas 4-5) e de tionina (Tabela 15) ou combinações das duas classes fornecem uma abordagem alternativa para tratar a doença. Aplicações foliares com essas composições de iniciação bioativa fornecidas como um spray na superfície da folha de qualquer de plantas assintomáticas ou sintomáticas fornecem um meio para prevenir, tratar e controlar a doença de estria foliar bacteriana em milho.
[0609] Alternativamente, composições de iniciação bioativa aqui descritas que contêm polipeptídeos de iniciação bioativa de flagellina e tionina ou combinações dos mesmos podem ser úteis para a prevenção, o tratamento e o controle de outras doenças bacterianas que infectam milho (Tabela 22). As composições podem compreender um composto indutor.
TABELA 22. BACTÉRIAS QUE CAUSAM DOENÇAS EM PLANTAS Colheita(s) Nome da doença Bactérias que causam doenças Milho Mancha bacteriana das folhas e Pseudomonas avenae subsp. avenae podridão do caule Milho Mancha bacteriana da folha Xanthomonas campestris pv. holcicola Milho Raia de folha bacteriana Xanthomonas vasicola spp., Xanthamonas vasicola pv. holcicola Milho Podridão do caule bacteriana Enterobacter dissolvens; Erwinia dissolvens
Colheita(s) Nome da doença Bactérias que causam doenças Milho Podridão bacteriana do caule e Erwinia carotovora subsp. superior carotovora Erwinia chrysanthemi pv. zeae
Milho Faixa bacteriana Pseudomonas andropogonis Milho Mancha de chocolate Pseudomonas syringae pv. coronafaciens Milho Murcha e ferrugem bacteriana de Clavibacter michiganensis subsp.
Goss (sardas e murcha nas nebraskensis; Corynebacterium folhas) michiganense pv. nebraskense
Milho Mancha foliar de Holcus Pseudomonas syringae pv. syringae van Hall
Milho Bainha de folha roxa Hemiparasitic bacteria Milho Podridão de sementes-mancha de Bacillus subtilis mudas Milho Doença de Stewart (murcha Pantoea stewartii bacteriana de Stewart) Milho Atrofia do milho Spiroplasma kunkelii (achapparramiento, atrofia de maiz, atrofia de milho Mesa Central ou Rio Grande) Citro Esverdeamento do citro; Candidatus liberibacter asiaticus Huanglongbing Citro Cancro do citro Xanthomonas citrii
Kiwi Doença de PSA kiwi Pseudomonas syringae pv. actinidae
Árvores floridas Fireblight Erwinia amylovora (macieira, pereira, amendoeira, ameixa, cerejeira) e plantas ornamentais Videiras, oliveiras, Doença de Pierce, queimadura Xylella fastidiosa foliar bacteriana Vegetais frutíferos, Mancha bacteriana da folha, Pseudomonas syringae spp., videiras, frutas de doença da mancha bacteriana, pseudomonas syringae pv. tomato, caroço, maçã, podridão do cacho, explosão Pseudomonas syringae pv. brássicas de pera, bacteriana da flor, mancha da Lachrymans 2, Pseudomonas syringae vegetais, bolha, explosão bacteriana pv. syringae, Pseudomonas syringae nogueiras, pv. maculicola pimentões, tomate Banana Doença de sangue Ralstonia syzygii subsp.celebesenis
Caju Mancha da folha e fruto Xanthamonas spp., Xanthamonas bacteriana, mancha da folha e noz campestris pv. mangiferaeindicae, bacteriana Xanthomonas citri pv. anacardii)
Colheita(s) Nome da doença Bactérias que causam doenças Citro Citrus variegated chlorosis (CVC) Xylella fastidiosa Tomate, pimentão Mancha bacteriana da folha Xanthomonas spp., Xanthamonas campestris pv. vesicatoria Nozes Praga das nozes Xanthomonas arboricola pv. juglandis Vegetais com Mancha bacteriana da folha, Xanthamonas spp., Xanthamonas folhas verdes, mancha bacteriana campestris pv. vesicatoria alface, tomate, pimentão
[0610] Em alternativa, composições de iniciação bioativa e/ou polipeptídeos isolados aqui descritos podem ser úteis para a prevenção, o tratamento e o controle de doenças fúngicas que infectam uma ampla variedade de plantas, tal como aquelas listadas na Tabela 23 abaixo.
TABELA 23. DOENÇAS FÚNGICAS EM PLANTAS Colheita(s) Nome da doença Fungo Causador de Doença kiwi, uvas, frutas cítricas Mofo fuliginoso Espécies Cladosporium e Alternaria soja Mancha foliar em olho de sapo Cercospora sojina soja Ferrugem das folhas de Cercospora kikuchii Cercospora; Cercosporiose, mancha roxa de semente soja Ferrugem asiática da soja Phakopsora pachyrhizi; Phakopsora meibomiae soja Mancha de alvo Corynespora cassicola soja Mildio em pó Erysiphe diffusa soja Podridão marrom septoria Septoria glycines soja Cancro do caule da soja Diaporthe spp., Diaporthe fasoleorum soja Vagem de Phomopsis, praga da Phomopsis spp., Diaporthe spp. semente, decaimento de semente soja Apodrecimento do carvão Macrophomina phaseolina soja Ferrugem da bainha das folhas, Thanatephorus cucumeris mela
Colheita(s) Nome da doença Fungo Causador de Doença leguminosas, soja, Mofo branco, podridão do caule de Sclerotinia sclerotiorum canola, vegetais de Sclerotinia folhas verdes, vegetais de frutificação milho Mancha cinzenta da folha Cercospora zeae-maydis; Cercospora zeina
Milho, soja Aspergillus, podridão Aspergillus Aspergillus spp., Aspergillus flavus, Aspergillus sojae milho Mancha Phaeosphaeria Phaeosphaeria maydis grama Mancha de dólar Sclerotinia homoeocarpa citro Mancha preta do citro Guignardia citricarpa; Phyllosticta citricarpa citro, amêndoa Podridão da raiz de Phytopthora; Phytopthora spp.
Podridão do pé de Phytopthora; Phytophthora citrophthora; Podridão da coroa de Phytopthora Phytopthora parasitica,
citro Podridão negra do citro Alternaria citri citro Queda de fruta pós-floração Colletotrichum acutatum; Colletotrichum gloeosporioides grama Mancha cinzenta da folha Pyricularia grisea amêndoa, pêssego, Podridão marrom; praga das flores Monilinia laxa cereja, damasco, ameixa, nectarina, ameixa, frutas de caroço amêndoa, damasco, Furo de tiro; doença do corineum; Wilsonomyces carpophilus nectarina, pêssego, mancha de goma ameixa cereja, frutas de caroço batata, colheita de Mofo branco Sclerotinia sclerotiorum leguminosas, canola canola, colza Perna preta Leptosphaeria maculans folhas verdes Mancha foliar de Cercospora Cercospora spp. soja Síndrome de morte súbita Fusarium virguliforme; Fusarium brasilense; Fusarium solani spp. milho, soja, vegetais de Morte da muda de Rhizoctonia, Rhizoctonia solani; Rhizoctonia folhas verdes, grãos, amortecimento, podridão da raiz, spp. frutificação, vegetais, podridão da semente batata milho, soja, vegetais de Morte da muda de Pythium, Pythium spp., Pythium folhas verdes, grãos, amortecimento, podridão da raiz, sylvaticum, frutificação, vegetais podridão da semente, podridão do caule
Colheita(s) Nome da doença Fungo Causador de Doença milho, soja, vegetais de Morte da muda de Fusarium, Fusarium spp., Fusarium folhas verdes, grãos, amortecimento, podridão da raiz, graminearum, Fusarium frutificação, vegetais podridão da semente, moniliforme podridão do caule beterrabas Mancha foliar de Cercospora Cercospora spp. videira, pimenta, tomate, Mildio em pó Erysiphe spp., Erysiphe necator, cucurbitáceas, lúpulo Oidium lycopersicum, Leveillula taurica, Podosphaeria macularis vegetais com folhas Míldio Peronospora spp., Bremia verdes lactucae trigo, cevada, aveia, Morte da cabeça de Fusarium, Fusarium spp., Fusarium triticale sarna graminearum batata, tomate Morte precoce Alternaria solani batata Morte tardia Phytopthora infestans árvores frutíferas, Podridão da raiz de Phytopthora, Phytopthora spp. nogueiras, vinhas podridão da coroa milho, soja, grãos, Murcha de muda de Phytopthora, Phytopthora spp. vegetais de folhas podridão de raiz, podridão, podridão verdes, do caule vegetais frutíferos banana Murcha de Fusarium, doença do Fusarium oxysporum; Fusarium Panamá, doença do Panamá raça oxysporum f. sp. tropical 4 Cubense banana Sigatoka negra, doença da faixa de Mycosphaerella fijiensis; folha preta Pseudocercospora fijiensis banana Sigatoka Amarela Pseudocercospora musicola arroz Brusone do arroz, pescoço podre de Magnaporthe oryzae; arroz, ferrugem da muda de arroz, Magnaporthe grisea doença por pitting, Mancha de Johnson arroz Morte da bainha do arroz Rhizoctonia solani arroz Podridão de muda Pythium spp. lúpulo Míldio Pseudoperonospora humuli legumes, vegetais de Mofo cinza Bortrytis spp., Bortrytis cinerea folhas verdes, videira, morango milho, trigo Ferrugem, ferrugem de polimento.
Puccinia spp., Puccinia Ferrugem do sul polysora, Puccinia sorghi, Puccinia recondita trigo, vegetais frutíferos Mancha salpicada de folhas, Septoria spp. mancha de Septoria, mancha Stagonospora nodorum, mancha Septoria tritici
Colheita(s) Nome da doença Fungo Causador de Doença algodão, cucurbitáceas Mancha alvo, mancha foliar de Corynespora spp., Corynespora Corynespora, ferrugem de cassiicola Corynespora cucurbitáceas Ferrugem do caule pegajoso Didymella bryoniae milho Mancha foliar do milho do sul Cochliobolus heterostrophus milho Mancha das folhas do milho do Setosphaeria turcica, norte Exserohilum turcicum milho, soja, vegetais de Antracnose, ferrugem foliar de Colletotrichum spp., folhas verdes, vegetais Antracnose, podridão do caule de Colletotrichum graminicola, frutíferos, legumes, Antracnose, matança superior, die- Colletotrichum truncatum cucurbitáceas, árvores back frutíferas, nozes, grãos grama Mancha marrom Rhizoctonia spp., Rhizoctonia solani girassol Míldio Plasmopara halstedii café Ferrugem do café, ferrugem da Hemileia vastatrix folha do café café Mancha da folha de Cercospora Cercospora spp. videira Doença da vassoura de bruxa Moniliopthora perniciosa, maçã Mancha de Alternaria, mancha foliar Alternaria mali maçã Mancha foliar de Glomerella e Colletotrichum spp. podridão do fruto, podridão amarga cacau Doença da vassoura de bruxa Moniliopthora perniciosa, Moniliopthora roreri cacau Doença da vagem preta, cancro do Phytopthora spp., Phytopthora caule do cacau, praga de muda, megakarya, Phytopthora praga de viveiro palmivora, Phytopthora capsici cacau Antracnose Colletotrichum aeschynomenes caju Antracnose, praga da Antracnose Glomerella cingulata, Colletotrichum spp. caju Mildio em pó Erysiphe quericcola coco Doença de sangria do caule Chalara paradoxa, Theilanopsis paradoxa, Ceratocystis paradoxa coco Podridão da extremidade do caule Pestalotiopsis adusta, pós-colheita Lasiodiplodia spp. videira Antracnose Elsinoë ampelina, Sphaceloma ampelinum videira Botrytis, Noble rot Botrytis cinereal, Bortryotinia fuckeliana videira Míldio Plasmopara viticola videira Mildio em pó Erysiphe necator, Uncinula necator
Colheita(s) Nome da doença Fungo Causador de Doença videira Ferrugem da folha da uva Phakopsora euvitis Videira Podridão azeda de verão Aspergillus niger, Alternaria spp, Cladosporium herbarum, Rhizopus arrhizus, Penicillium spp. manga Antracnose Glomerella cingulata, Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum karstii manga Declínio repentino da manga, Ceratocystis fimbriata murchar repentino manga Doença de malformação da manga Fusarium sterilihyphosum manga Mildio em pó Oidium mangiferae manga Podridão da extremidade do caule Dothiorella dominicana, Phomopsis spp., Botryodiplodia theobromae, Lasiodiplodia theobromae Manga Sarna de manga Elsinoë mangiferae Manga Mofo Fuliginoso Meliola mangiferae, Capnodium mangiferae, Capnodium ramosum, Tricospermum acerinum amendoeiras, nozes Apodrecimento de casca Rhizophus stolofiner, Monilinia spp. maçã Doença da sarna da maçã, mancha Venturia inaequalis preta maçã Mildio em pó Podosphaeria leucotricha frutas de caroço Folha de pêssego Taphrina deformans vegetais de folhas Mancha de folha de alface Cercopsora spp., Cercospora verdes, alface lactucae-sativae vegetais de folhas Míldio Bremia lactucae verdes, alface grama Mofo de neve, mancha de Fusarium Microdochium nivale
DOENÇA DA FERRUGEM FOLIAR DE CERCOSPORA DA SOJA
[0611] Cercospora é um patógeno fúngico que causa a doença Cercospora da ferrugem foliar de soja. Ferrugem foliar de Cercospora, também referida como a doença da mancha da semente roxa infecta tanto as folhas quanto as sementes da soja. Infecção de sementes de soja de Cercospora diminui a aparência e a qualidade de sementes. O organismo causal da ferrugem foliar de Cercospora é Cercospora kikuchii, que hiberna em resíduo de soja e em revestimentos de sementes. A propagação da doença ocorre quando os esporos do fungo são espalhados para plantas de soja de resíduos infectados, ervas daninhas ou outras plantas de soja infectadas. Espalhamento de doença e desenvolvimento de sintoma são acelerados durante períodos de clima quente e úmido. O desenvolvimento de sintoma geralmente começa após floração e aparece como lesões circulares em folhas de soja, como mancha marrom-avermelhadas a roxas que podem se fundir para formar lesões. Os sintomas são aparentes no dossel superior, geralmente nas três ou quatro folhas trifolioladas superiores. As plantas de soja infectadas exibem sintomas de piora à medida que a cultura amadurece e pode ocorrer desfolhamento prematuro das folhas afetadas durante o enchimento do fruto. O desenvolvimento de sintoma de Cercospora também pode aparecer como lesões em caules, pecíolos das folhas e vagens. Sementes são infectadas por meio da fixação à vagem. Sementes infectadas de Cercospora apresentam uma descoloração roxa, que pode aparecer como manchas ou manchas cobrindo todo o revestimento de semente. Outras doenças de Cercospora de soja é uma mancha foliar de Frogeye causada por Cercospora sojina que pode causar queda prematura da folha e perda de rendimento.
[0612] Aplicações foliares de composições de iniciação bioativa contendo polipeptídeos de flagelina ou associados à flagelina (Tabelas 4-5) e um composto indutor fornecem uma abordagem alternativa para tratar a doença. Aplicações foliares com essas composições de iniciação bioativa fornecidas como um spray à superfície da folha de plantas sejam plantas assintomáticas ou sintomáticas fornecem um meio para prevenir, tratar e controlar ferrugem das folhas de Cercospora em soja. Aplicações foliares de Flg22 derivadas de Bacillus thuringiensis, particularmente em altas taxas de uso (por exemplo, 4,0 Fl. oz/Ac), podem fornecer um meio para gerenciar desenvolvimento de sintoma inicial e fornecer plantas de soja mais saudáveis mais vigorosas cultivadas em locais de campo que foram impactados por
Cercospora.
[0613] Composições específicas que podem ser úteis para tratar ou reduzir os sintomas de Cercospora podem compreender um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO 226, 571, 587 ou 590; um polipeptídeo RHPP tendo uma sequência compreendendo SEQ ID NO: 604; ou uma combinação de um polipeptídeo associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs 226, 587 e 590 e um polipeptídeo de RHPP tendo a sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 604. As composições podem compreender ainda um composto indutor.
O composto indutor pode compreender ácido β-aminobutírico, um inibidor da calose sintase, ácido salicílico, ácido oxálico ou qualquer combinação dos mesmos. Por exemplo, o composto indutor pode compreender ácido β- aminobutírico ou um inibidor da calose sintase. O inibidor da calose sintase pode compreender 2-DDG.
[0614] Por exemplo, uma combinação útil de polipeptídeos de iniciação bioativa para tratar ou reduzir os sintomas de Cercospora em uma planta ou parte de planta é um polipeptídeo de flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 sozinha ou em combinação com um polipeptídeo de RHPP tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 604. As composições podem compreender ainda um composto indutor. O composto indutor pode compreender ácido β- aminobutírico, um inibidor da calose sintase, ácido salicílico, ácido oxálico ou qualquer combinação dos mesmos. Por exemplo, o composto indutor pode compreender ácido β-aminobutírico ou um inibidor da calose sintase. O inibidor da calose sintase pode compreender 2-DDG. Tratamentos adicionais podem compreender ainda um fungicida em combinação com esses polipeptídeos de iniciação bioativa.
DOENÇA DA FERRUGEM DA SOJA ASIÁTICA
[0615] Ferrugem da soja asiática é uma doença fúngica causada por Phakopsora pachyrhizi. Sua etiologia e seus sintomas são semelhantes a Cercospora e às combinações de polipeptídeo de iniciação bioativa úteis para tratá-la também são semelhantes. Especificamente, combinações de polipeptídeos de iniciação bioativa que podem ser úteis para tratar ou reduzir os sintomas da ferrugem da soja da Ásia incluem: um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO 226, 571, 587 ou 590; um polipeptídeo RHPP tendo uma sequência compreendendo SEQ ID NO: 604; ou uma combinação de um polipeptídeo associado à flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs 587, 571 e 572 e um polipeptídeo de RHPP tendo a sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 604. As composições podem compreender ainda um composto indutor.
[0605] Por exemplo, uma combinação útil de polipeptídeos de iniciação bioativa para tratar ou reduzir os sintomas de ferrugem da soja da Ásia em uma planta ou parte de planta é um polipeptídeo de flagelina tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 sozinha ou em combinação com um polipeptídeo de RHPP tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 604. As composições podem compreender ainda um composto indutor. O composto indutor pode compreender ácido β-aminobutírico, um inibidor da calose sintase, ácido salicílico, ácido oxálico ou qualquer combinação dos mesmos. Por exemplo, o composto indutor pode compreender ácido β-aminobutírico ou um inibidor da calose sintase. O inibidor da calose sintase pode compreender 2-DDG. Tratamentos adicionais podem compreender ainda um fungicida em combinação com esses polipeptídeos de iniciação bioativa.
MANCHA HOLCUS
[0616] Mancha Holcus é uma doença bacteriana causada por Pseudomanas Syringae pv. actinidae. Métodos são descritos neste documento para usar polipeptídeos de flagelina ou associados à flagelina para restringir crescimento de P. Syringae e, assim, prevenir ou tratar a doença da mancha de Holcus em uma planta ou uma parte de planta. Composições compreendendo polipeptídeos de flagelina ou associados à flagelina tendo sequências de aminoácidos compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 226, 540, 587, 571 e 572 ou qualquer combinação das mesmas são úteis para o tratamento de P. Syringae. As composições podem compreender ainda um composto indutor. O composto indutor pode compreender ácido β-aminobutírico, um inibidor da calose sintase, ácido salicílico, ácido oxálico ou qualquer combinação dos mesmos. Por exemplo, o composto indutor pode compreender ácido β-aminobutírico ou um inibidor da calose sintase. O inibidor da calose sintase pode compreender 2-DDG.
DOENÇA DA PODRIDÃO DO CAULE DE SCLEROTINIA (MOFO BRANCO)
[0617] Sclerotinia sclerotiorum é um fungo patogênico de planta que provoca uma doença causada por mofo branco. Ele é também conhecido como podridão do algodão, podridão mole de água, podridão do caule, gota, podridão da flor da coroa. Sintomas de diagnósticos da podridão branca incluem estruturas pretas em repouso conhecidas como escleródios e crescimentos confusos brancos de micélio na planta infectada. Os escleródios, por sua vez, produzem um corpo frutífero que produz esporos em um saco.
Esclerotinia pode afetar plantas herbáceas suculentas, particularmente frutas e vegetais, ou tecido juvenil em plantas ornamentais lenhosas. Ela também pode afetar legumes ou plantas tuberosas como batata. Mofo branco pode afetar um hospedeiro em qualquer estágio de crescimento, incluindo mudas, plantas maduras e produtos colhidos. É geralmente encontrado em tecidos com alto teor de água e proximidade íntima ao solo. Lesões não tratadas, lesões de marrom claro a escuro, no caule na linha do solo, são cobertas por um crescimento micelial branco e fofo. Isso afeta o xilema, o que leva à clorose, murcha, queda de folhas e morte. Mofo branco também pode ocorrer em fruto no campo ou em armazenamento e é caracterizado por micélio fúngico branco que cobre a fruta e seu subsequente decaimento. Composições compreendendo polipeptídeos de flagelina ou associados à flagelina tendo sequências de aminoácidos compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 226, 540, 571, 587 e 590 são úteis para o tratamento de Sclerotinia sclerotiorum. As composições podem compreender ainda um composto indutor.
O composto indutor pode compreender ácido β-aminobutírico, um inibidor da calose sintase, ácido salicílico, ácido oxálico ou qualquer combinação dos mesmos. Por exemplo, o composto indutor pode compreender ácido β- aminobutírico ou um inibidor da calose sintase. O inibidor da calose sintase pode compreender 2-DDG.
MANCHA FOLIAR DE PSEUDOMONAS
[0618] Pseudomonas syringae pv. actinidiae (PSA) é um patógeno de planta devastador causando cancro bacteriano de plantas de kiwi de polpa verde (Actinidiae deliciosa) e de polpa amarela (Actinidiae chinesis) em todas as zonas de produção de kiwi, causando severas perdas de colheita na Nova Zelândia, China e Itália. Só na Nova Zelândia, as perdas cumulativas de receita para o biovar mais devastador PSA-V são preditas se aproximarem de $740 milhões de Dólares da Nova Zelândia até 2025 (Agribusiness and Economics Research Institute of Lincoln University “The Costs of Psa-V to the New Zealand Kiwifruit Industry and the Wider Community”; May 2012). PSA-V coloniza as superfícies externas e internas da planta de kiwi e pode se espalhar pelos tecidos do xilema e do floema. Sintomas de doença de PSA-V em kiwi incluem mancha foliar bacteriana, cancro bacteriano do tronco, exudatos vermelhos, podridão das flores, descoloração de galhos e, finalmente, dieback das vinhas do kiwi. O método padrão de controle para PSA-V atualmente aplicações foliares frequentes de cobre metálico em videiras de kiwi que é predito levar à seleção da forma resistente a cobre do patógeno e à perda de controle da doença. Novos métodos de controle são urgentemente necessários.
[0619] Composições compreendendo uma Flagelina ou peptídeos associados à flagelina tendo sequências de aminoácidos compreendendo a SEQ ID NO: 226, 540, 752 e/ou 571 são úteis para o tratamento de Pseudomanas syringae, particularmente em kiwis. As composições podem compreender ainda um composto indutor. O composto indutor pode compreender ácido β-aminobutírico, um inibidor da calose sintase, ácido salicílico, ácido oxálico ou qualquer combinação dos mesmos. Por exemplo, o composto indutor pode compreender ácido β-aminobutírico ou um inibidor da calose sintase. O inibidor da calose sintase pode compreender 2-DDG.
DOENÇA DO ESVERDEAMENTO DO CITRO ASIÁTICA (HUANGLONGING)
[0620] As composições aqui descritas são particularmente adequadas para tratar Doença do Esverdeamento do Citro Asiática (Huanglonging). Os métodos descritos neste documento incorporam uma abordagem diferente para combater doença e, adicionalmente, fornecer benefícios de aumentar a produtividade geral de uma planta. Esta abordagem é especificamente dirigida a fornecer aplicações exógenas ou endógenas das composições compreendendo um polipeptídeo e/ou composto indutor conforme descrito neste documento para combater doenças em plantas.
[0621] As composições compreendendo um polipeptídeo e/ou composto indutor, como aqui descritas, são úteis para a prevenção, o tratamento e o controle de esverdeamento de citro asiático também referido como doença Huanglonging (HLB), uma doença devastadora para citros. A doença HLB é amplamente distribuída e foi encontrada na maioria dos locais comerciais e residenciais em todos os condados que têm pomares comerciais de citros.
[0622] Métodos são descritos neste documento para usar composições compreendendo um polipeptídeo bioativo descrito neste documento em combinação com um composto indutor para prevenir o espalhamento de e no tratamento da doença HLB. Por exemplo, o método pode compreender usar um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina em combinação com 2-DDG, ácido β-aminobutírico, benzotiazol, oxitetraciclina, cisteína, betaína, ácido salicílico, ácido oxálico ou qualquer combinação dos mesmos para prevenir o espalhamento de e no tratamento da doença HLB.
[0623] Doença de esverdeamento de citro asiático é transmitida pelo psilídeo do citro asiático, Diaphorina citri ou o psilídeo do citro de duas manchas, Trioza erytreae Del Guercio, que são ambas caracterizadas como insetos hemípteros sugadores de seiva na família Psyllidae e foram implicadas no espalhamento de esverdeamento do citro, uma doença causada por uma bactéria de inibição de floema altamente fastidiosa, Candidatus Liberibacter asiaticus (Halbert, S.E. e Manjunath, K.L., “Asian citrus psyllids Sternorrhyncha: Psyllidae and greening disease of citrus: A literature review and assessment of risk in Florida,” Florida Entomologist 87: 330–353, 2004). Esverdeamento do citro asiático ou doença de Huanglongbing é considerada fatal para uma árvore de citro, uma vez que ela seja infectada.
[0624] Os primeiros sintomas da doença em folhas são o amarelamento de veias e uma clorose assimétrica conhecida como mancha manchada, que é o sintoma de mais diagnóstico da doença. As árvores infectadas são raquíticas e esparsamente foliadas, com manchas manchadas aparecendo na folhagem. Os primeiros sintomas de amarelamento podem aparecer em um único ramo ou galho e, com a progressão de doença, o amarelamento pode se espalhar por toda a árvore. Árvores afetadas podem apresentar morte de galhos e queda de fruto. Frutos são frequentemente em número reduzido, pequenos, deformados ou tortos e não conseguem colorir adequadamente, permanecendo verdes no final e exibindo uma mancha amarela logo abaixo do pedúnculo (haste) em uma fruta cortada.
[0625] A doença de esverdeamento de citro asiático pode também ser transmitida de enxerto quando porta-enxertos de citros são selecionados e enxertado em variedades de rebentos.
[0626] Gerenciamento de doença de esverdeamento de citro tem se mostrado difícil e, portanto, métodos atuais para controle de HLB adotaram uma abordagem de gerenciamento de doença e praga integrada de múltiplas camadas usando 1) a implementação de viveiros livres de doenças e porta- enxertos usados em enxertia, 2) o uso de pesticidas e inseticidas sistêmicos para controlar o vetor psilídeo, 3) o uso de agentes de controle biológico, tal como antibióticos., 4) o uso de insetos benéficos, tal como vespas parasíticas que atacam o psilídeo e 5) criação de novo germoplasma de citro com resistência elevada à bactéria causadora do esverdeamento de citro (Candidatus Liberibacter spp.). O uso de medidas culturais e regulatórias para prevenir a propagação da doença também é parte da abordagem de manejo integrado. Muitos aspectos envolvidos no manejo do esverdeamento dos citros são onerosos tanto monetariamente quanto em relação às perdas na produção de citros.
[0627] A aplicação intervinal de um polipeptídeo de tionina ou mistura de polipeptídeos de tionina pode ser distribuída diretamente para o floema (por exemplo, células do floema incluindo seiva do floema, células companheiras do floema e elementos de tubo de peneira do floema) onde Candidatus Liberibacter pode residir.
[0628] As tioninas podem ser produzidas usando um sistema de expressão onde elas podem ser fundidas a sequência(s) de alvo de (Tabela 14) e, então, exclusivamente distribuídas na mesma vizinhança onde as bactérias podem residir na planta de citro.
[0629] Os polipeptídeos de iniciação bioativa de tionina dirigidos a floema são úteis para tratar plantas de citros para prevenir, reduzir ou eliminar o espalhamento da doença do esverdeamento de citro asiático ou Huanglonging (HLB) direcionando diretamente a bactéria, Candidatus Liberibacter asiaticus.
[0630] Essas tioninas direcionadas a floema podem ser distribuídas por injeção para o floema de um arbusto ou uma árvore.
Adicionalmente, elas podem ser distribuídas por pulverização, lavagem ou adição como um embebimento ou uma rega no solo ou na área circundando uma planta.
[0631] Qualquer das sequências de direcionamento de floema (Tabela 14; SEQ ID NOs: 611-619) pode ser usada em combinações com polipeptídeos de tionina e tipo tionina (Tabela 15; SEQ ID NOs: 620-719).
[0632] A bactéria que causa HLB, Candidatus Liberibacter asiaticus, é difícil de isolar e cultivar. A fim de testar tioninas individuais e tioninas com as sequências de alvo de floema para determinar se elas são úteis para o tratamento da doença de HLB, Agrobacterium tumefaciens pode ser usado como um organismo modelo para testar a eficácia na redução do título de célula ou crescimento de Agrobacterium antes de usar a tionina ou as combinações de tionina em uma configuração de pomar.
[0633] Os métodos de "iniciação de peptídeo" fornecidos neste documento com os polipeptídeos de tionina e/ou tipo tionina (Tabela 15) também podem ser usados em combinação com polipeptídeos de flagelina e associados à flagelina (Tabelas 1-5). As combinações dos polipeptídeos de iniciação bioativa de tionina e associados à flagelina podem ser usadas para pré-tratar profilaticamente uma planta de citros aplicando o polipeptídeo de iniciação bioativa ou uma composição contendo o polipeptídeo antes do início ou aparecimento de quaisquer sintomas relativos à infecção nos arbustos ou nas árvores de citros. Esse pré-tratamento aumenta a resistência ao patógeno da doença que causa esverdeamento de citros (Candidatus Liberibacter spp.).
[0634] As tioninas fornecidas em combinação com os polipeptídeos de iniciação bioativa associados à flagelina proporcionam uma abordagem mais abrangente para prevenção e gerenciamento de doença. Os polipeptídeos de iniciação bioativa de tionina e associados à flagelina usam dois modos distintos de ação para prevenir doenças e o espalhamento de doença.
[0635] As combinações de polipeptídeos de iniciação bioativa de tionina-flagelina também podem ser usadas com qualquer outra abordagem de gerenciamento integrada para controle de doença prescrita para HLB incluindo, mas sem limitação, (1) o uso de estoque de viveiro livre de doença e/ou porta- enxertos para enxerto, (2) o uso de pesticidas e/ou inseticidas sistêmicos para controlar o psilídeo causador de doença, (3) o uso de agentes de controle biológico, tal como injeções de antibióticos ou insetos parasíticos que controlam o psilídeo, (4) criação de novas variedades de germoplasma de citro com elevada resistência às bactérias responsáveis por doença de esverdeamento de citro asiático, (5) controle de plantas parasíticas (por exemplo, enfraquecimento) que podem espalhar a doença, ou (6) qualquer combinação dos mesmos.
[0636] Uma versão sintética de um polipeptídeo de alvo de floema (SEQ ID NO: 611) é particularmente útil no direcionamento de polipeptídeos antimicrobianos para o tubo de peneira de floema e células companheiras e pode ser útil para tratar várias doenças bacterianas de plantas, tal como listra foliar bacteriana, esverdeamento do citro asiático ou Huanglonging e cancro do citro.
[0637] Além disso, polipeptídeos de flagelina ou associados à flagelina são úteis para tratar esverdeamento de citro asiático, especialmente quando usados em combinação com um bactericida. Por exemplo, polipeptídeos de flagelina ou associados à flagelina tendo sequências de aminoácidos compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 226, 571 podem ser usados. De preferência, o bactericida compreende oxitetraciclina.
[0638] Outras composições que são úteis contra estas doenças incluem “misturas de recuperação de enzima” compreendendo uma β-1,3- endoglucanase, uma α-amilase, uma L-cisteína e 2-DDG com ou sem um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina. Por exemplo, uma composição adequada pode compreender uma β-1,3-endoglucanase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 e 767-766 e uma α-amilase tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 734 ou 735, uma L-cisteína e 2-DDG. A composição pode compreender ainda um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina. O polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina pode ter uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226 ou 571.
CANCRO DO CITRO
[0639] Métodos de “iniciação de peptídeo" foram desenvolvidos para uso com as composições compreendendo um polipeptídeo e/ou composto indutor, conforme descrito neste documento, para tratar profilaticamente plantas de citros antes de quaisquer sintomas visíveis da doença de cancro do citro ou como um tratamento uma vez que o início dos sintomas da doença se tornam aparentes.
[0640] Cancro do citro ocorre principalmente em climas tropicais e subtropicais e foi relatado ocorrer em mais de trinta países, incluindo espalhamento de infecção relatado na Ásia, África, Ilhas do Oceano Pacífico e Índico, América do Sul, Austrália, Argentina, Uruguai, Paraguai, Brasil e Estados Unidos. Cancro do citro é uma doença causada pela bactéria Xanthomonas axonopodis pv. citri ou pv. aurantifolii (também conhecida como Xanthomonas citri subsp. citri) que infecta folhagem, fruto e caules jovens.
Sintomas de infecção de cancro do citro em folhas e fruto dos arbustos/das árvores de citros podem resultar em manchas de folhas, lesões de folhas, desfolhamento, morte, deformação de fruto, manchas na casca do fruto, queda prematura de fruto e formação de cancro em folhas e frutos. Sintomas de diagnósticos de cancro do citro incluem um halo amarelo característico que circunda as lesões foliares e uma margem embebida em água que se desenvolve em torno do tecido necrótico nas folhas da planta de citro. O patógeno do cancro de citro pode se espalhar pelo transporte de frutas, plantas e equipamentos infectados. Dispersão também pode ser facilitada pelo vento e pela chuva. Sistemas de irrigação aérea também podem facilitar movimento do patógeno causador do cancro de citro. Caules infectados podem alojar a bactéria causadora do cancro do citro (Xanthomonas axonopodis pv. citri) nas lesões do caule para transmissão a outras plantas de citros. Insetos, tal como o bicho-mineiro asiático (Phyllocnistis citrella), também disseminam a doença.
[0641] Em geral, plantas de citros suscetíveis à doença do cancro de citro incluem laranja, laranja doce, toranja, pumelo, tangerina tangerina, limão, lima, lima ácida, lima palestina doce, tangerina, tangelo, laranja azeda, limão áspero, cidra, calamondina, laranja trifoliata e kumquat. Em todo o mundo, milhões de dólares são gastos anualmente em programas de prevenção, saneamento, exclusão, quarentena e erradicação para controlar cancro do citro (Gottwald T.R. “Citrus Canker,” The American Phytopathological Society, The Plant Health Instructor 2000/atualizado em 2005). Tratamento para a doença incluiu aplicação de antibióticos ou desinfetantes, o uso de sprays bactericidas à base de cobre e aplicações de pesticidas para o controle do bicho-mineiro da folha asiático.
[0642] As composições compreendendo um polipeptídeo e/ou composto indutor como aqui descrito podem ser aplicadas a uma planta de citros ou parte de planta de citro (por exemplo, porta-enxerto, copa, folhas, raízes, caules, frutos e folhagem) usando métodos de aplicação que podem compreender: pulverização, inoculação, injeção, embebimento, infiltração, lavagem, imersão e/ou fornecida ao solo circundante como um tratamento em sulco.
[0643] Os métodos são fornecidos usando as composições compreendendo um polipeptídeo e/ou composto indutor conforme descrito neste documento para pré-tratar plantas de citros ou partes de plantas de citros (por exemplo, raiz, copa, folhas, raízes, caules, frutos e folhagem) antes de qualquer ocorrência visível de sintomas. Eles também são úteis para fornecer um aumento na resistência ao patógeno do cancro de citro, resultando em uma redução em sintomas da doença.
[0644] Adicionalmente, os métodos de uso das composições compreendendo um polipeptídeo e/ou composto indutor, conforme descrito neste documento, são úteis para tratar plantas de citros ou partes de plantas de citros (por exemplo, raiz, copa, folhas, raízes, caules, frutos e folhagem) logo no início precoce de sintomas da doença do cancro de citro ou quando os sintomas da doença se tornam aparentes.
[0645] Aplicação das composições compreendendo um polipeptídeo e/ou composto indutor como aqui descrito para tratar plantas de citros para prevenir, reduzir ou eliminar o espalhamento da doença do cancro do citro pode ser distribuída injetando o floema de um arbusto, uma árvore ou uma videira; e/ou por pulverização, lavagem, adição como um embebimento ou uma rega ao solo ou à área de solo circundando uma planta ou fornecida em sulco.
[0646] As composições compreendendo um polipeptídeo e/ou composto indutor, como descrito aqui podem ser aplicadas como um tratamento foliar ou spray ou como uma injecção e são úteis para a prevenção de infestação de plantas de citros de insetos, tal como o bicho-mineiro da folha asiático (Phyllocnistis citrella), que foram identificadas na disseminação da bactéria (Xanthomonas axonopodis pv. citri) que causa a doença do cancro do citro.
MOFO FULIGINOSO
[0647] Infecção por fungo fuliginoso pode ocorrer em superfícies de plantas incluindo frutas, folhas ou outras partes de planta expostas a vários fungos Ascomycete, tal como espécies Cladosporium e Alternaria. Sintomas incluem manchas escuras e áreas manchadas na superfície da planta ou parte de planta, com possível crescimento de mofo visível, incluindo manchas filamentosas ou carregadas de esporos. Frutas incluindo, mas não se limitando a, kiwis, laranjas, uvas, bem como pecã e nogueira, e plantas ornamentais são particularmente suscetíveis a crescimento de mofo fuliginoso. Essas manchas são principalmente um problema cosmético, mas reduzem a comercialização das frutas. Crescimento de fungo é frequentemente causado por insetos sugadores que se alimentam de frutas ou outras partes de plantas e, em seguida, excretam secreções açucaradas conhecidas como melada nas superfícies de plantas. Os fungos são, então, capazes de colonizar as superfícies com melada disponível. Estima-se que mofo fuliginoso resulte em uma perda de produção de $50 milhões para a indústria de kiwis da Nova Zelândia anualmente. Embora mofo fuliginoso possa ser lavado da fruta após colheita, limitações de processamento tornam inviável aplicar produtos líquidos a frutas depois de elas serem colhidas. Assim, há necessidade de tratamentos que possam ser aplicados pré-colheita para remover mofo fuliginoso de frutas ou impedi-lo de crescer. Composições compreendendo um polipeptídeo e/ou composto indutor como aqui descrito podem ser aplicadas como um tratamento foliar ou spray ou lavagem de fruta para prevenção ou crescimento de fungo fuliginoso ou remoção de mofo fuliginoso. Por exemplo, glucanases (SEQ ID NO: 731-733 e 767-776), quitinases (SEQ ID NO: 777-778) e serina proteases (SEQ ID NO: 721, 722 e 794-796) são úteis para a redução crescimento de mofo fuliginoso em kiwis.
PLANTAS DE CITROS
[0648] Qualquer dos métodos aqui descritos para fornecer saúde de planta melhorada, tolerância a doença ou aplicações de tratamento de doença para tratar ou prevenir esverdeamento do citro asiático (HLB) ou cancro do citro são adequados para uso com quaisquer plantas de citros e arbustos/árvores.
[0649] As composições compreendendo um polipeptídeo e/ou composto indutor, como aqui descritas, podem ser aplicadas a qualquer arbusto e/ou árvore de citro e a qualquer planta de híbrido de citro ou não híbrido de citro agronomicamente importante e são úteis para tratar profilaticamente o citro para prevenir o início de uma infecção ou fornecer tratamento após uma infecção ter ocorrido.
[0650] [0640] Espécies de plantas de citros para uso dos métodos descritos neste documento podem compreender qualquer planta do gênero Citrus, família Ruttaceae e incluem, mas não estão limitadas a: Laranja doce também conhecida como Hamlin ou laranja Valencia (Citrus sinensis, Citrus maxima × Citrus reticulata), Laranja Bergamot (Citrus bergamia, Citrus limetta × Citrus aurantium), Laranja Amarga, Laranja Amarga ou Laranja Seville (Citrus aurantium, Citrus maxima × Citrus reticulata), Blood Orange (Citrus sinensis), Orangelo ou Chironja (Citrus paradisi × Citrus sinensis), Tangerina (Citrus reticulate), Laranja Trifoliata (Citrus trifoliata), Laranja Tachibana (Citrus tachibana), Alemow (Citrus macrophylla), Clementina (Citrus clementina),
Laranja Cereja (Citrus kinokuni), Limão (Citrus limon, ou híbridos com Citrus maxima × Citrus medica) ou Citrus limonia,, Laranja selvagem indiana (Citrus indica), Limão Imperial (Citrus limon, Citrus medica × Citrus paradisi), Lima
(Citrus latifoli, Citrus auranti folia), Limão Meyer (Citrus meyeri); híbridos de
Citrus × meyeri com Citrus maxima, Citrus medica, Citrus paradisi e/ou Citrus sinensis), Limão Rough (Citrus jambhiri), Limão Volkamer (Citrus volkameriana), Limão Ponderosa (Citrus limon x Citrus medica), Key Lime
(Citrus aurantiifolia), Kaffir Lime (Citrus hystrix ou Mauritius papeda), Sweet
Lemon, Sweet Lime ou Mosambi (Citrus limetta), Limão da Pérsia ou Limão
Tahiti (Citrus latifolia), Palestine Sweet Lime (Citrus limettioides), Winged Lime
(Citrus longispina), Australian Finger Lime (Citrus australasica), Australian
Round Lime (Citrus australis), Australian Desert ou Outback Lime (Citrus glauca), Mount White Lime (Citrus garrawayae), Jambola (Citrus grandis),
Kakadu Lime ou Humpty Doo Lime (Citrus gracilis), Russel River Lime (Citrus inodora), New Guinea Wild Lime (Citrus warburgiana), Brown River Finger Lime
(Citrus wintersii), Mandarin Lime (Citrus limonia; (híbridos com Citrus reticulata
× Citrus maxima × Citrus medica), Carabao Lime (Citrus pennivesiculata),
Blood Lime (Citrus australasica x Citrus limonia) Limeberry (Triphasia brassii,
Triphasia grandifolia, Triphasia trifolia), Limão híbrido ou Lumia (Citrus medica x Citrus limon), Omani Lime (Citrus aurantiifolia, Citrus medica x Citrus micrantha), Sour Lime ou Nimbuka (Citrus acida), Toranja (Citrus paradisi;
Citrus maxima × Citrus × sinensis), Tangerina (Citrus tangerina), Tangelo
(Citrus tangelo; Citrus reticulata × Citrus maxima ou Citrus paradisi), Minneola
Tangelo (Citrus reticulata × Citrus paradisi), Orangelo (Citrus paradisi × Citrus sinensis), Tangor (Citrus nobilis; Citrus reticulata × Citrus sinensis), Pummelo ou Pomelo (Citrus maxima ou Citrus retkulata), Citron (Citrus medica),
Mountain Citron (Citrus halimii), Kumquat (Citrus japonica ou espécies
Fortunella), Kumquat híbridos (Calamondin, Fortunella japonica; Citranqequat,
Citrus ichangensis; Limequat, Citrofortunella floridana); Orangequat, híbrido entre espécies Satsuma mandarin x Citrus japonica ou Fortunella; Procimequat,
Fortunella hirdsiie; Sunquat, híbrido entre espécies Citrus meyeri e Citrus japonica ou Fortunella; Yuzuquat, híbrido entre Citrus ichangensis e Fortunella margarita), Papedas (Citrus halimii, Citrus indica, Citrus macroptera, Citrus micrantha), Ichang Papeda (Citrus ichangensis), Celebes Papeda (Citrus celebica), Khasi Papeda (Citrus latipes), Papeda Melanésia (Citrus macroptera), Ichang Lemon (Citrus ichangensis × Citrus maxima), Yuzu (Citrus ichangensis × Citrus reticulata), Cam sành (Citrus reticulata x Citrus maxima),
Kabosu (Citrus sphaerocarpa), Sudachi (Citrus sudachi), Alemow (Citrus macrophylla), Biasong (Citrus micrantha), Samuyao (Citrus micrantha), Kalpi
(Citrus webberi), Mikan (Citrus unshiu), Hyuganatsu (Citrus tamurana),
Manyshanyegan (Citrus mangshanensis), Lush (Citrus crenatifolia), Amanatsu ou Natsumikan (Citrus natsudaidai), Kinnow (Citrus nobilis × Citrus deliciosa),
Kiyomi (Citrus sinensis × Citrus unshiu), Oroblanco (Citrus maxima × Citrus paradisi), Ugli (Citrus reticulata × Citrus maxima e/ou Citrus × paradisi),
Calamondin (Citrus reticulata × Citrus japonica), Chinotto (Citrus myrtifolia,
Citrus aurantium ou Citrus pumila), Cleopatra Mandarin (Citrus reshni), Daidai
(Citrus aurantium ou Citrus daidai), Laraha (Citrus aurantium), Satsuma (Citrus unshiu), Naartjie (Citrus reticulata × Citrus nobilis), Rangpur (Citrus limonia; ou híbrido com Citrus sinensis x Citrus maxima × Citrus reticulata), Djeruk Limau
(Citrus amblycarpa), Iyokan, anadomikan (Citrus iyo), Odichukuthi (Citrus odichukuthi), Ougonkan (Citrus flaviculpus), Pompia (Citrus monstruosa),
Tangerina (Citrus tangerine), Taiwan tangerina (Citrus depressa), Shonan gold
(Citrus flaviculpus ou Citrus unshiu), Sunki (Citrus sunki), Mangshanyen (Citrus mangshanensis, Citrus nobilis), Clymenia (Clymenia platypoda, Clymenia polyandra), Jabara (Citrus jabara), Mandora (Mandora cyprus), Melogold (Citrus grandis x Citrus paradisii/Citrus maxima/Citrus grandis), Shangjuan (Citrus ichangensis x Citrus maxima), Nanfengmiju (Citrus reticulata) e Shīkwāsaī (Citrus depressa)
[0651] As composições compreendendo um polipeptídeo e/ou composto indutor, como descrito aqui podem ser aplicadas a qualquer planta de citro, arbusto/árvore utilizada para fins medicinais ou cosméticos/de saúde e de beleza, tal como Bergamot Orange (Citrus bergamia), Laranja Azeda ou Amarga (Citrus aurantium), Laranja Doce (Citrus macrophylla),Key Lime (Citrus aurantiifolia), Toranja (Citrus paradisi), Citron (Citrus medica), Mandarin Orange a(Citrus reticulate), Limão (Citrus limon ou híbridos com Citrus medica × Citrus maxima, Citrus limonia, Citrus medica × Citrus maxima × Citrus medica), Limão Doce (Citrus limetta),Kaffir Lime, (Citrus hystrix ou Mauritius papeda), Limão híbrido ou Lumia (Citrus medica x Citrus limon, Omani Lime (Citrus aurantiifolia, Citrus medica × Citrus micrantha), Jambola (Citrus grandis), Kakadu Lime ou Humpty Doo Lime (Citrus gracilis), Pomelo (Citrus maxima), Tangor (Citrus nobilis) e Sour Lime ou Nimbuka (Citrus acida).
[0652] Híbridos de citros importantes exemplares para produção de frutas são: Laranja Doce (Citrus sinensis), Laranja amarga (Citrus aurantium), Toranja (Citrus paradisi), Limão (Citrus limon), Limão da Pérsia (Citrus latifolia), Key Lime (Citrus aurantiifolia), Tangerina (Citrus tangerine) e Rangpur (Citrus limonia).
[0653] Além disso, qualquer das composições compreendendo um polipeptídeo e/ou composto indutor como aqui descrito pode ser aplicada a qualquer planta de citro, arbusto/árvore usada como um porta - enxerto e/ou um germoplasma de copa. Os métodos são particularmente úteis para porta-enxertos comumente usados em enxertos de citros para intensificar os méritos das variedades de copa, que podem incluir tolerância à seca, geada, doença ou organismos de solo (por exemplo, nematoides). Tais plantas de citros que fornecem porta-enxertos úteis incluem: Laranja Amarga ou Ácida (Citrus aurantium), Laranja Doce (Citrus macrophylla), Laranja Trifoliata (Poncirus trifoliata), Limão Rough (Citrus jambhiri), Limão Volkamer (Citrus volkameriana), Alemow (Citrus macrophylla), Cleopatra Mandarin (Citrus reshini), Citrumelo (híbridos com espécies x citroncirus), Grapefruit (Citrus paradisi), Rangpure Lime (Citrus limonia), Palestine Sweet Lime (Citrus limettioides) e Troyer Citrange (Citrus sinensis × Poncirus trifoliata ou Citrus sinensis × Citrus trifoliata) e Citrange (Citrus sinensis × Poncirus trifoliata ou C. sinensis × C. trifoliata).
Variedades de citros também podem ser recombinantes, engenheiradas para expressar adicionalmente níveis mais altos de defensinas, peptídeos antimicrobianos ou partícula de vírus recombinante.
EXEMPLOS
[0654] Os seguintes exemplos não limitativos são fornecidos para ilustrar ainda mais a presente invenção.
EXEMPLOS 1–5: USO DE PEPTÍDEOS DE FLAGELINA EM COMBINAÇÃO COM OUTROS
INDUTORES PARA PREVENIR E TRATAR DOENÇA DE CITRO
[0655] Exemplos 1-5 descrevem o uso de várias composições na prevenção e no tratamento de doenças de citro. Para facilidade de referência, as composições testadas, seu modo de administração e taxa de uso de aplicação são descritos na Tabela 24 abaixo. Observe que algumas composições (por exemplo, composição 6) são descritas como tendo duas partes (Parte A e Parte B). Como será descrito nos exemplos, essas duas partes foram aplicadas simultaneamente ou sequencialmente dependendo do teste.
TABELA 24. COMPOSIÇÕES PARA A PREVENÇÃO E O TRATAMENTO DE DOENÇAS
DOS CITROS Composição Nº: Formulação Método de Tratamento Taxa de Uso de Aplicação Mililitros por árvore (mL/árvore) ou Onça fluida/acre (Fl. oz/Ac) Composição de Bt.4Q7Flg22Syn01 Injeção de tronco 2,75 mL/árvore (0,33 mg) Citro 1 (SEQ ID NO: 571) 120 ppm Tampão de Sódio Fosfato 10 mM, pH 5,7 Composição de Oxitetraciclina-HCl Injeção de tronco 20 mL/árvore (0,9278 g por Citro 2 (48,6 mg/mL de árvore) solução em água) Composição de Oxitetraciclina-HCl Injeção de tronco 20 mL/árvore (0,4818 g por Citro 3 (24,1 mg/mL de árvore) solução em água) Composição de Peptídeo tipo Injeção de tronco 80 mL/árvore Citro 4 tionina (SEQ ID NO: 620) (filtrado de caldo de fermentação) Composição de Serine Protease 2 Injeção de tronco 20 mL/árvore Citro 5 Bacillus subtilis (SEQ ID NO: 795) (filtrado de caldo de fermentação)
Composição Nº: Formulação Método de Tratamento Taxa de Uso de Aplicação Mililitros por árvore (mL/árvore) ou Onça fluida/acre (Fl. oz/Ac)
Composição de Parte A Injeção de tronco 2,75 mL/árvore (0,33 Citro 6 Bt.4Q7Flg22Syn01 mg/árvore) (SEQ ID NO: 571) 120 ppm Tampão de Sódio Fosfato 10 mM, pH 5,7 Parte B Injeção de tronco 20 mL/árvore (0,4818 g por Oxitetraciclina-HCl árvore) (24,1 mg/mL de solução em água)
Composição de Parte A Pulverização foliar 3,0 mL/árvore (0,36 Citro 7 Bt.4Q7Flg22Syn01 mg/árvore) em um volume (SEQ ID NO: 571) de transportador de spray de 120 ppm 3 L de água + 0,1% v/v de Tampão de Sódio surfactante não iônico Fosfato 10 mM, pH (alquil fenil etoxilato) 5,7
Parte B Injeção de tronco 20 mL/árvore Oxitetraciclina-HCl (0,4818 g por árvore) (24,1 mg/mL de solução em água) Composição de Parte A Pulverização foliar 12,0 mL/árvore (1,44 Citro 8 Bt.4Q7Flg22Syn01 mg/árvore) em um volume (SEQ ID NO: 571) de transportador de spray de 120 ppm 3 L de água + 0,1% v/v de Tampão de Sódio surfactante não iônico Fosfato 10 mM, pH (alquil fenil etoxilato) 5,7 Parte B Injeção de tronco 20 mL/árvore (0,4818 g por Oxitetraciclina-HCl árvore) (24,1 mg/mL de solução em água) Composição de Parte A Injeção de tronco 2,75 mL/árvore (0,33 Citro 9 Bt.4Q7Flg22Syn01 mg/árvore) (SEQ ID NO: 571) 120 ppm Tampão de Sódio Fosfato 10 mM, pH 5,7 Parte B Injeção de tronco 20 mL/árvore (62,86 mg por L-Cisteína árvore) (3,143 mg/mL de solução em água)
Composição Nº: Formulação Método de Tratamento Taxa de Uso de Aplicação Mililitros por árvore (mL/árvore) ou Onça fluida/acre (Fl. oz/Ac)
Composição de Parte A Injeção de tronco 2,75 mL/árvore (0,33 Citro 10 Bt.4Q7Flg22- mg/árvore) Syn01 (SEQ ID NO: 571) 120 ppm Tampão de Sódio Fosfato 10 mM, pH 5,7 Parte B Injeção de tronco 20 mL/árvore (111,1 mg por 2-Desoxi-D- árvore) Glicose (2-DDG) (solução 5,56 mg/mL em água) Composição de Parte A Injeção de tronco 2,75 mL/árvore (0,33 Citro 11 Bt.4Q7Flg22- mg/árvore) Syn01 (SEQ ID NO: 571) 120 ppm Tampão de Sódio Fosfato 10 mM, pH 5,7 Parte B Injeção de tronco 20 mL/árvore (2 g por Ácido β- árvore) aminobutírico (BABA) (100 mg/mL de solução em água) Composição de Parte A Injeção de tronco 2,75 mL/árvore (0,33 Citro 12 Bt.4Q7Flg22Syn01 mg/árvore) (SEQ ID NO: 571) 120 ppm Tampão de Sódio Fosfato 10 mM, pH 5,7 Parte B Injeção de tronco 20 mL/árvore (1 g por ACTIGARD WG árvore) (Ingrediente ativo: 50% Acibenzolar- S-metil: Benzo (1,2,3) tiadiazol- 7-ácido carbotioico-S-metil éster; BTH) (50 mg/mL de solução em água)
Composição Nº: Formulação Método de Tratamento Taxa de Uso de Aplicação Mililitros por árvore (mL/árvore) ou Onça fluida/acre (Fl. oz/Ac)
Composição de Parte A Injeção de tronco 2,75 mL/árvore (0,33 Citro 13 Bt.4Q7Flg22Syn01 mg/árvore) (SEQ ID NO: 571) 120 ppm Tampão de Sódio Fosfato 10 mM, pH 5,7
Parte B Injeção de tronco 20 mL/árvore Serine Protease 2 Bacillus subtilis (SEQ ID NO: 795) (filtrado de caldo de fermentação)
Composição de Parte A Injeção de tronco 2,75 mL/árvore (0,33 Citro 14 Bt.4Q7Flg22Syn01 mg/árvore) (SEQ ID NO: 571) 120 ppm Tampão de Sódio Fosfato 10 mM, pH 5,7
Parte B Injeção de tronco 80 mL/árvore Peptídeo tipo tionina (SEQ ID NO: 620) (filtrado de caldo de fermentação)
Composição de Parte A Injeção de tronco 20 mL/árvore (62,86 mg por Citro 15 L-Cisteína árvore) (3,143 mg/mL de solução em água) Parte B Injeção de tronco 20 mL/árvore (0,9278 g por Oxitetraciclina-HCl árvore) (48,6 mg/mL de solução em água) Composição de Parte A Injeção de tronco 20 mL/árvore (111,1 mg por Citro 16 2-Desoxi-D- árvore) Glicose (2-DDG) (solução 5,56 mg/mL em água) Parte B Injeção de tronco 20 mL/árvore (0,4818 g por Oxitetraciclina-HCl árvore) (24,1 mg/mL de solução em água)
Composição Nº: Formulação Método de Tratamento Taxa de Uso de Aplicação Mililitros por árvore (mL/árvore) ou Onça fluida/acre (Fl. oz/Ac)
Composição de Parte A Injeção de tronco 20 mL/árvore (2 g por Citro 17 Ácido β- árvore) aminobutírico (BABA) (100 mg/mL de solução em água) Parte B Injeção de tronco 20 mL/árvore (0,4818 g por Oxitetraciclina-HCl árvore) (24,1 mg/mL de solução em água)
Composição de Parte A Injeção de tronco 20 mL/árvore Citro ACTIGARD WG (1 g por árvore) 18 (Ingrediente Ativo: 50% de Acibenzolar-S- metil: Benzo (1,2,3) tiadiazol-7- ácido carbotioico- S-metil éster; BTH) (50 mg/mL de solução em água) Parte B Injeção de tronco 20 mL/árvore (0,9278 g por Oxitetraciclina-HCl árvore) (48,6 mg/mL de solução em água) Composição de Parte A Injeção de tronco 20 mL/árvore Citro 19 Serine Protease 2 Bacillus subtilis (SEQ ID NO: 795) (filtrado de caldo de fermentação) Parte B Injeção de tronco 20 mL/árvore (0,4818 g por Oxitetraciclina-HCl árvore) (24,1 mg/mL de solução em água) Composição de Parte A Injeção de tronco 80 mL/árvore Citro 20 Peptídeo tipo tionina (SEQ ID NO: 620) (filtrado de caldo de fermentação) Parte B Injeção de tronco 20 mL/árvore (0,9278 g por Oxitetraciclina-HCl árvore) (48,6 mg/mL de solução em água)
Composição Nº: Formulação Método de Tratamento Taxa de Uso de Aplicação Mililitros por árvore (mL/árvore) ou Onça fluida/acre (Fl. oz/Ac) Composição de Bt.4Q7Flg22- Pulverização foliar 3,0 mL/árvore (0,36 mg) em Citro 21 Syn01 (SEQ ID um spray NO: 571) 120 ppm volume transportador de 3 L Tampão de Sódio de água + 0,1% v/v de Fosfato 10 mM, pH surfactante não iônico (alquil 5,7 fenol etoxilato) Composição de Parte A Pulverização foliar 12,0 mL/árvore (1,44 mg) Citro 22 Bt.4Q7Flg22Syn01 em um spray (SEQ ID NO: 571) volume transportador de 3 L 120 ppm de água + 0,1% v/v de Tampão de Sódio surfactante não iônico (alquil Fosfato 10 mM, pH fenol 5,7 etoxilato) Composição de Bt.4Q7Flg22 (SEQ Injeção de tronco 2,75 mL/árvore (0,33 mg) Citro 23 ID NO: 226) 120 ppm Tampão de Sódio Fosfato 10 mM, pH 5,7 EXEMPLO 1: TRATAMENTO DE ÁRVORES DE CITROS INFECTADAS COM CANDIDATUS LIBERIBACTER ASIATICUS (CLAS) COM COMBINAÇÕES DE PEPTÍDEO DE FLG22 - ELEVADO RENDIMENTO DE FRUTO - LARANJA HAMLIN: MELVIN GROVE, FLÓRIDA
[0656] Árvores foram tratadas em três locais separados em locais da Flórida que foram selecionados devido a uma alta prevalência da Doenla de Esverdeamento do Citro (Huanglongbing) causada pelo patógeno bacteriano Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas). Laranjeiras Hamlin de cinco anos de idade (Citrus sinensis) foram tratadas em um pomar comercial localizado no centro da Flórida (condado de Okeechobee), laranjeiras Vernia de 6 anos de idade em porta-enxerto Swingle foram tratadas em Lake Wales, FL (condado de Polk), e Laranjeiras Valencia de 9 anos de idade foram tratadas em Eustis, FL (Lake County). Tratamentos de composição de citros foram aplicados conforme listado na Tabela 24 acima usando um dispositivo de injeção de baixa pressão, BRANDT ENTREE (BRANDT) para injeção de tronco ou um pulverizador de mochila pressurizado com CO2 que produzia uma névoa fina para pulverização foliar. Composições foliares de Bt.4Q7Flg22 foram diluídas em água com um surfactante não iônico (alquil fenol etoxilado; 0,1% v/v do volume do tanque de pulverização) e uniformemente aplicadas à copa da árvore a uma taxa de pulverização de 3 Litros (L) por árvore.
[0657] Blocos de árvores recebendo um tratamento foliar foram espaçados na área de experimento com uma folga (árvore pulada) entre blocos de tratamento para evitar desvio de tratamento para blocos de tratamento vizinhos. Tratamentos foram aplicados durante o início da manhã ou o final da noite durante um período de vento fraco (< 5 mph), e as condições foram tais que todos os tratamentos de pulverização secos em folhas dentro de um período de 4 horas. Tratamentos de combinação descritos na Tabela 25 foram ou coinjetados na mesma garrafa BRANDT ENTREE (Composição de Citros 6 e 9–20) ou aplicados separadamente como uma injeção de oxitetraciclina seguida por um tratamento foliar de Bt.4Q7Flg22Syn01 no mesmo dia (Composição de Citro 7 e 8). Para todos os tratamentos, foram utilizadas 10 árvores por tratamento, separadas em dois blocos replicados de cinco árvores cada. Composições de citros 1–6 e 9–22 foram aplicadas nos bosques de Okeechobee, Polk, FL e Lake County, FL, enquanto as Composições de Citros 7 e 8 foram aplicadas apenas no bosque de Okeechobee, FL sozinhos.
[0658] Para avaliar os efeitos das Composições de Citros 1–23 no rendimento e na qualidade de fruto, laranjas Hamlin (Okeechobee County, FL) foram colhidas 8,5 meses após tratamento e as laranjas Vernia (Polk County, FL) e Valencia (Lake County, FL) serão colhidas aproximadamente 10-11 meses após tratamento. Todos os frutos com um diâmetro maior ou igual a 1,6 polegadas (40 mm) foram escolhidos manualmente e coletados para cada árvore. A “Contagem de Frutos” e o “Peso dos Frutos” totais (em quilogramas) por árvore individual foram medidos e registrados. Árvores com peso total de fruto maior que 200%, ou menor que 50% do peso mediano do fruto para o experimento (todos os tratamentos incluídos) foram consideradas fora da faixa e removidas do conjunto de dados. Tamanho de fruto foi avaliado como 1) “Peso Médio por Fruto” em gramas (peso total de fruto dividido pela contagem total de fruto por árvore = peso médio por fruto) e 2) “Diâmetro Médio de Fruto” em milímetros. Para medições de diâmetro, medidores digitais até precisão de 0,1 mm foram usados para medir 10 frutos aleatórios de cada árvore, para um total de 100 frutos por tratamento (10 árvores com 10 frutos cada). Os medidores foram posicionados perpendiculares à flor do fruto e extremidades de caule e o diâmetro foi medido no ponto mais largo do fruto. Um dos sintomas do esverdeamento de citros é elevada queda de frutos antes da colheita; portanto, o número de frutos não apodrecidos recém-caídos foi contado para cada árvore. A porcentagem (%) de queda de fruto foi calculada como o número de frutos caídos antes da colheita dividido pelo total de frutos (caídos e colhidos) para cada árvore. O rendimento médio, o diâmetro médio de fruto e a% de queda de fruto para cada uma das composições testadas são descritos na Tabela 25 abaixo.
[0659] Resultados de colheita de laranjeiras ‘Valencia' (Tabela 25) indicaram que injeções de tronco de composições de polipeptídeo de flagelina incluindo Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) ou Bt.4Q7Flg22Syn01 (SEQ ID NO: 571) foram eficazes para aumentar o número de frutos colhidos por árvore e o tamanho médio dos frutos (peso e diâmetro), resultando em 33% e 26% de rendimento elevado total (kg) por árvore, respectivamente.
TABELA 25. INJEÇÃO DE TRONCO DE BT.4Q7FLG22SYN01 (SEQ ID NO: 571) E BT.4Q7FLG22 (SEQ ID NO: 226) AUMENTA RENDIMENTO DE 'VERNIA' EM RELAÇÃO
A UM CONTROLE NÃO TRATADO Tratamento* Rendimento Rendimento Peso de Diâmetro % Médio (kg de Médio Fruto Médio Médio Queda fruta por (Contagem de Calculado (mm) de Fruto árvore) Frutos por Árvore) Sem tratamento 53,5 345,0 155,2 66,7 3,0 Composição de Citro 1 67,3 408,1 164,9 69,6 2,2 (126%) (118%) (106%) (104% (73%) Composição 23 71,0 445,1 159,6 69,4 1,3 (133%) (129%) (103%) (104%) (43%) *Composições de citros, rota de administração e dosagem são descritas na Tabela 24.
[0660] Em seguida, tratamentos de combinação de ativadores imunes injetados no tronco (BABA, BTH), inibidor da calose sintase 2-DDG, L- cisteína de amino ácido proteinogênico e filtrados de fermentação contendo os compostos antimicrobianos da Serina Protease 2 (SP2) (SEQ ID NO : 795) e tionina (SEQ ID NO: 620) foram coinjetados com Bt.4Q7Flg22Syn01 (SEQ ID NO: 571) para avaliar se tratamentos de combinação aumentariam ainda mais o rendimento. Rendimento médio, diâmetro médio do fruto e % de queda do fruto para cada uma das composições testadas são descritos na Tabela 26 abaixo.
TABELA 26. INJEÇÃO DE TRONCO DE TRATAMENTOS DE COMBINAÇÃO DE FLG22- SYN01 AUMENTOU RENDIMENTO DE FRUTO 'HAMLIN' EM RELAÇÃO A FLG22-SYN01
SOZINHO Tratamento* Rendimento Médio Diâmetro Médio Queda de Fruto (Contagem de Frutos por de Fruto (mm) (%) Árvore) (em relação à (Relativo à Composição 1) Composição 1) Composição de Citro 1 63,8 frutos/árvore 60,9 mm 10,5% Composição de Citro 9 70,8 frutos/árvore 66,6 mm 7,21% (111%) (109%) (-3,3%) Composição de Citro 10 78,6 frutos/árvore 63,2 mm 10,8% (123%) (104%) (+0,3%) Composição de Citro 11 98,3 frutos/árvore 64,8 mm 4,5% (154%) (107%) (-6,0%) Composição de Citro 12 107,8 frutos/árvore 66,6 mm 6,3% (169%) (109%) (-4,2%) Composição de Citro 13 72,5 frutos/árvore 69,1 mm 1,4% (114%) (113%) (-9,1%) Composição de Citro 14 98,9 frutos/árvore 63,3 mm 5,7% (155%) (104%) (-4,8%) *Composições de citros, rota de administração e doses são descritas na Tabela 24.
[0661] Os resultados de rendimento indicam que Bt.4Q7Flg22Syn01 (SEQ ID NO: 571) é compatível com todos os tratamentos de coinjeção testados e que os tratamentos de combinação aumentam o número de frutos colhidos por árvore em relação a injeção de Bt.4Q7Flg22Syn01 sozinho, bem como aumentam o tamanho médio do fruto (diâmetro, mm) e ou reduz ou permanece inalterada a queda de fruto antes da colheita em relação a injeção de Bt.4Q7Flg22Syn01 sozinho. Em um experimento separado, compatibilidade (aditiva ou sinérgica) foi testada usando um tratamento de combinação para tratamento de Bt.4Q7Flg22Syn01 (injeção de tronco e/ou spray foliar) com uma injeção de tronco de oxitetraciclina antibiótica. Uma dose baixa de oxitetraciclina (0,45g/árvore) foi administrada ao mesmo tempo que tratamento de Bt.4Q7Flg22Syn01.
TABELA 27. INJEÇÃO DE TRONCO DE BT.4Q7FLG22SYN01 (SEQ ID NO: 571) OU PULVERIZAÇÃO FOLIAR AUMENTOU RENDIMENTO DE FRUTO 'HAMLIN' EM ÁRVORES
COINJETADAS COM OXITETRACICLINA EM RELAÇÃO À OXITETRACICLINA SOZINHA Tratamento Rendimento Médio Peso de Fruto Médio Queda de Fruto (%); (kg de fruta por Calculado (g) (Relativo à árvore) (Relativo à Composição de Citro (Em relação à Composição de Citro 3) Composição de Citro 3) 3) Composição de Citro 12,65 kg/árvore 148,9 g 6,1% 3 Composição de Citro 13,25 kg/árvore 152,5 5,8% 6 (105%) (102%) (-0,3%) Composição de Citro 16,01 kg/árvore 145,2 6,3% 7 (127%) (98%) (+0,2%) Composição de Citro 14,03 kg/árvore 145,3 3,5% 8 (111%) (98%) (-2,6%) MÉDIA para +14,1% -0,8% -0,9% Composições 6, 7 e 8 em relação à Composição 3 *Composições de citros, rota de administração e doses são descritas na Tabela 24.
[0662] Os resultados na Tabela 27 acima indicaram que cotratamento de laranjeiras 'Hamlin' com Bt.4Q7Flg22Syn01 (SEQ ID NO: 571) e injeção de oxitetracilina aumentam rendimento (kg por árvore), enquanto o tamanho e a queda de fruto permanecem relativamente inalterados. Espera-se que um programa de manejo de citros que inclua coinjeção de Flg22 com oxitetracilina forneça em média 14,1% de aumento no rendimento em relação à injeção de oxitetraciclina sozinha (Tabela 27).
[0663] Tratamentos de coinjecção de oxitetraciclina (0,45 g ou 0,90 g) com qualquer de Baba, BTH, 2-DDG, L-cisteína, BTH (ACTIGARD WG), ou filtrados de fermentação contendo serina protease 2 ou tionina foram em seguida testados quanto à capacidade para aumentar rendimento 'Hamlin' e/ou diminuir queda de fruto. Os resultados estão resumidos nas Tabelas 28 (rendimento) e 29 (queda de fruto) abaixo.
TABELA 28. INJEÇÃO DE TRONCO DE TRATAMENTOS DE COMBINAÇÃO DE OXITETRACICLINA AUMENTOU RENDIMENTO DE FRUTO 'HAMLIN' EM RELAÇÃO À
OXITETRACICLINA SOZINHA Tratamento Rendimento Médio (kg de Mudança em Rendimento em fruta por árvore) relação à Composição de Citro 2 ou 3 (%) Composição de Citro 2 11,98 kg/árvore ---- Composição de Citro 3 12,65 kg/árvore ---- Composição de Citro 17 15,90 kg/árvore +25,7% em relação a Composição 3 Composição de Citro 15 16,5 kg/árvore +37,7% em relação a Composição 2 Composição de Citro 18 15,18 kg/árvore +26,7% em relação a Composição 2 * Composições de Citros, rota de aplicação e doses são descritas na Tabela 24.
TABELA 29. INJEÇÃO DE TRONCO DE TRATAMENTOS DE COMBINAÇÃO DE
OXITETRACICLINA DIMINUIU QUEDA DE FRUTOS EM RELAÇÃO À OXITETRACICLINA
SOZINHA Tratamento Queda de Fruto Média Mudança em Queda de Fruto em (porcentagem de fruto total) relação à Composição de Citro 2 ou 3 (%) Composição de Citro 2 4,7% ---- Composição de Citro 3 6,1% ---- Composição de Citro 16 3,3% 2,8% de diminuição em relação à Composição 3 Composição de Citro 19 4,3% 1,8% de diminuição em relação à Composição 3 Composição de Citro 20 3,5% 1,2% de diminuição em relação à Composição 2 * Composições de Citros, rota de aplicação e doses são descritas na Tabela 24.
[0664] Em comparação com árvores injetadas com oxitetraciclina sozinha, rendimento elevado e queda de fruto diminuída foram observados para coinjeção de oxitetraciclina e um composto indutor ou polipeptídeo bioativo. Total elevado de kg/árvore foi observado quando oxitetraciclina foi combinada com ativadores imunes BABA ou BTH (ACTIGARD WG) ou L- cisteína; queda de fruto reduzida foi observada quando oxitetraciclina foi combinada com Tionina (SEQ ID NO: 620), Serina Protease 2 (SEQ ID NO: 795) ou o inibidor da calose sintase 2-DDG. Esses tratamentos poderiam ser combinados ainda com um polipeptídeo bioativo, tal como Flg22.
EXEMPLO 2: TRATAMENTO DE ÁRVORES DE CITROS INFECTADAS COM CANDIDATUS LIBERIBACTER ASIATICUS COM COMBINAÇÕES DE FLG22 AUMENTA QUALIDADE DE
FRUTO
[0665] Conforme descrito no Exemplo 1, laranjas das variedades 'Hamlin', 'Vernia' e "Valencia’ foram colhidas de experimentos concebidos para testar a eficácia de tratamentos de combinação de pepetídeo Bt.4Q7Flg22Syn01 e oxitetraciclina para elevado rendimento e qualidade de fruto. Os experimentos foram organizados com 10 árvores por tratamento, com dois blocos replicados de cinco árvores cada. Na época da colheita, foram coletados dois frutos representativos por árvore.
[0666] Para análise de qualidade de suco, um conjunto de laranjas consistiu em 10 frutos no total, cada um correspondendo a uma amostragem de 5 árvores do mesmo tratamento experimental. O conjunto de 10 laranjas foi pesado (grama; g) e, então, espremido em conjunto. Laranjas foram imageadas como um conjunto de frutas inteiras e depois cortadas ao meio de modo que o pedicelo e o estilete fossem uma parte de metades separadas e a metade interna da fruta se assemelhasse a cunhas em uma roda. Após imageamento da fruta cortada pela metade, cada metade foi espremida até que nenhum endocarpo permanecesse. O suco de todas as frutas do conjunto foi coado para remover polpa bruta e, em seguida, combinado e medido para volume de suco (mL) e massa (g). Volume médio de suco por fruta (mL), peso médio da fruta (g) e % do teor de suco (g de suco em conjunto/g compreendendo a fruta inteira no conjunto) foram calculados e registrados. O suco bruto foi coado por uma peneira de malha e amostras foram retidas para análise de Brix e acidez (1 mL e 5 mL, respectivamente).
[0667] Valores de Brix corrigido para ácido (Brixc) de suco foram obtidos da fruta espremida (espremida) seguindo os padrões mínimos do USDA para métodos analíticos de laboratório Brix. Um Refratômetro MA871 (Milwaukee Instruments) foi usado para análise Brix. Para análise de Brix, 1 mL do suco coado de cada conjunto foi centrifugado a 13.300 xg por 30 segundos para peletizar a polpa. 100 µL de água destilada foram usados para zerar o instrumento, e 100 µL de cada um dos padrões de 12,5% Brix e 25% Brix feitos com sacarose (Acros Organics, Bélgica) foram usados para verificar a calibração entre as passagens. Um volume de 100 µL de cada amostra foi lido quanto ao conteúdo Brix e registrado. A temperatura foi registrada usando a saída no medidor de análise Brix. (Manual do Laboratório JBT FoodTech, “Procedures for Analysis of Citrus Products, Sixth Edition). Para determinação de teor de ácido cítrico (%CA), 5 mL de suco coado foram diluídos 10 vezes em água destilada. A amostra diluída foi titulada até pH 8,10 usando um Minititulador de Acidez Titulável HI 84532 e Medidor de pH para Suco de Fruta (Hanna Instruments). A faixa baixa de ácido cítrico foi registrada do valor “% CA” exibido. A curva de pH padrão foi ajustada com padrões fornecidos em pH 4,01, pH 7,01 e pH 8,20. A temperatura foi registrada usando a saída de temperatura exibida da sonda de temperatura. Após coletar valores de Brix e dados de acidez, a razão brix para acidez da fruta (Brix:CA) foi calculada.
Valores elevados de Brix e Brix:CA são indicativos de uma fruta de qualidade mais alta com elevado teor de açúcar em relação ao teor de ácido. Os resultados são descritos na Tabela 30 abaixo.
TABELA 30. TRATAMENTOS DE COMBINAÇÃO DE INJEÇÃO DE TRONCO DE BT.4Q7FLG22SYN01 (SEQ ID NO: 571) COM COMPOSTOS INDUTORES AUMENTARAM A QUALIDADE DE RENDIMENTO DE FRUTA 'HAMLIN' Tratamento Teor de Suco (%) Valor Brix Sem tratamento 43% 9,2 Composição de Citro 1 46% 9,4 Composição de Citro 9 42% 9,8 Composição de Citro 10 45% 9,3 Composição de Citro 11 47% 9,6 Composição de Citro 12 36% 9,7 Composição de Citro 13 47% 9,3 Composição de Citro 14 52% 9,9 * Composições de Citros, rota de aplicação e doses são descritas na Tabela 24.
[0668] Além de aumentar rendimento (ver Exemplo 1), tratamentos de combinação com árvores injetadas com Bt.4Q7Flg22Syn01 melhoram o teor de suco. Em comparação com a fruta de controle não tratada com um teor de suco medido de 43%, árvores tratadas com Bt.4Q7Flg22Syn01 produziram fruta com 46% de teor de suco. Coinjeção de 2-DDG, BABA, SP2 e tionina (Composição 14) com Bt.4Q7Flg22Syn01 aumentou o teor de suco em 2–9%. Valores de Brix também são melhorados em comparação com o controle não tratado (Brix = 9,2) ou em comparação com Bt.4Q7Flg22Syn01 sozinho (9,4) e para todas as combinações testadas. O maior aumento em Brix foi observado para Bt.4Q7Flg22Syn01 em combinação com tionina (SEQ ID
NO: 620), com um valor de Brix de 9,9.
EXEMPLO 3: TRATAMENTO DE ÁRVORES DE CITROS INFECTADAS COM CANDIDATUS
LIBERIBACTER ASIATICUS COM COMPOSIÇÕES DE ENZIMA PROMOTORA DE RECUPERAÇÃO PARA RESTAURAR SAÚDE DE PLANTA E AUMENTAR RENDIMENTO DE FRUTA
[0669] É aqui descrito um método para promover recuperação de árvore dos sintomas da Doença do Esverdeamento do Citro ou HLB usando uma abordagem multifacetada para 1) alertar a planta para a presença de bactérias patogênicas usando injeção de tronco ou aplicação foliar de um peptídeo Flg22 de Bacillus thuringiensis, 2) limpar o excesso de calose e polímeros de amido da vasculatura da planta através da injeção de enzimas degradantes de calose e amido e/ou do inibidor da síntese de calose 2-DDG, e 3) melhorar a saúde da planta através da distribuição de aminoácido L-cisteína contendo enxofre.
[0670] Árvores foram injetadas em três locais separados de pomares de citros que tinham uma alta prevalência de doença HLB. As árvores de tratamento incluíram toranja 'Ruby Red' de 10 anos (Citrus x paradisi) localizada em um pomar comercial localizado no centro da Flórida (Condado de Okeechobee) e laranjeiras 'Valencia' (Citrus sinesis) de 8 a 10 anos de idade localizadas em dois locais, um bosque em Eustis, Flórida (Condado de Lake) e um bosque no centro da Flórida (Condado de Okeechobee). Individualizações e combinações de tratamentos de citros na Tabela 31 abaixo foram injetadas usando um dispositivo de injeção de baixa pressão, BRANDT ENTREE (BRANDT) no tronco das árvores de citros usando os métodos descritos anteriormente no Exemplo 1. Para todos os tratamentos, foram utilizadas 10 árvores por tratamento, separadas em dois blocos replicados de cinco árvores cada. Para avaliar os efeitos dos tratamentos de recuperação de citros no rendimento e na qualidade dos frutos, toranja 'Ruby Red' foi colhida 20 meses após tratamento, e as laranjas 'Valencia' (Condados de Okeechobee e Lake) foram colhidas aproximadamente 22 meses após tratamento. Frutos foram colhidos e avaliados de acordo com as mesmas métricas de “Contagem de Fruto” total e “Peso de Fruto”, “Peso Médio por Fruto”, “Diâmetro Médio de Fruto” e “% de Queda” conforme descrito no Exemplo 1, “Brix corrigido para ácido (Brix c)”, “% de Ácido Cítrico”, “% de Teor de Suco”, conforme descrito no Exemplo 2, com exceção de um conjunto de toranja que consistia em 25 frutos totais, amostrados como 5 frutos cada de 5 árvores. Um conjunto de 25 toranjas foi avaliado por bloco de tratamento replicado, para um total de dois conjuntos por tratamento.
TABELA 31. SEQUÊNCIAS DE ENZIMAS E PEPTÍDEOS PARA TRATAMENTOS DE INJEÇÃO
DE TRONCO DE CITROS Tratamento Nº: Ingrediente Ativo (Sequência Método de Quantidade de ou Número CAS) Tratamento Ingrediente Ativo por árvore Recuperação de β-1,3-endoglucanase de Hordium Injeção de tronco 660 - 2.640 Citro vulgare Unidades de enzima Tratamento 1 (SEQ ID NO: 731) por árvore Citros β-1,3-endoglucanase de Injeção de tronco 660 - 2.640 Tratamento de Paenibacillus Unidades de enzima Recuperação 2 (SEQ ID NO: 732) por árvore Recuperação de Amilase (amyE) Injeção de tronco 660 Unidades de Citro de Bacillus licheniformis enzima por árvore Tratamento 4 (SEQ ID NO: 735) Tratamento de Bt.4Q7Flg22 Injeção de Tronco 0,33 - 3,3 mg por Recuperação de de Bacillus thuringiensis ou Pulverização árvore Citros 5 cepa 4Q7 Foliar SEQ ID NO: 226 Tratamento de L-cisteína (CAS 52-90-4) Injeção de tronco 0,266 mg por árvore Recuperação de Citros 6 Citros 2-Desoxi-D-Glicose (2-DDG; CAS Injeção de tronco 111,1 mg por árvore Tratamento de 154-17-6) recuperação 7
TABELA 32. INJEÇÃO DE TRONCO DE COMPOSIÇÕES DE RECUPERAÇÃO AUMENTOU RENDIMENTO DE FRUTO DE ‘TORANJA' EM RELAÇÃO ÀS ÁRVORES NÃO TRATADAS Tratamento Rendimento Médio (kg por árvore) (Em relação a não tratado) Sem tratamento 34,6 --- Bt.4Q7Flg22 37,2 (SEQ ID NO: 226) (108%) 0,33 mg/árvore) B-1,3-Endoglucanase de Cevada (SEQ ID NO: 731) 38,7 (2.600 U/árvore) (112%) Mistura de Enzima de Recuperação 35,1 B-1,3-Endoglucanase de Cevada (SEQ ID NO: 731) (660 (102%) U/árvore) + Amilase de Bacillus licheniformis (SEQ ID NO: 735) (660 U/árvore) + Cisteína (0,27 mg/árvore)
[0671] Resultados de colheita de experimentos de toranja 'Ruby Red' replicados (Tabela 32) indicaram que tratamentos de injeção de tronco individuais para ativar o sistema imune da planta, degradar polissacarídeos em e em torno de elementos de tubo de peneira e fornecer aminoácidos essenciais para respostas de defesa sustentadas (L-cisteína) levam a elevado rendimento de fruto. Injeção de Bt.4Q7Flg22 em 0,33 mg por árvore aumentou o rendimento em 2,6 kg por árvore em comparação com o controle não tratado, enquanto a enzima degradante de calose β,1-3-endoglucanase de cevada aumentou o rendimento em 4,1 kg por árvore. Uma Mistura de Enzimas de Recuperação incluindo β,1-3-endoglucanase, Amilase de degradação de amido e L-Cisteína aumentou o rendimento em 0,5 kg por árvore, o que foi equivalente a um aumento de 2% em comparação com o controle não tratado.
TABELA 33. INJEÇÃO DE TRONCO DE COMPOSIÇÕES DE RECUPERAÇÃO AUMENTOU QUANTIDADE DE SUCO DE ‘TORANJA' EM RELAÇÃO ÀS ÁRVORES NÃO TRATADAS Tratamento Diâmetro de Volume de Suco Teor de Razão Brix:CA Fruto Médio Médio por fruto Suco Médio (mm) (em relação (mL) (%) ao não tratado) (Relativo a não tratado Sem tratamento 82,17 134,9 59% 8,90 --- --- Bt.4Q7Flg22 85,03 163,6 68% 9,24 (SEQ ID NO: 226) (103%) (121%) 0,33 mg/árvore) Mistura de Enzima de 87,68 156,7 59% 8,51 Recuperação B-1,3- (107%) (116%) Endoglucanase Hordeum vulgare (SEQ ID NO: 731) (660 U/árvore) + Amilase de Bacillus licheniformis (SEQ ID NO: 735) (660 U/árvore) + Cisteína (0,27 mg/árvore)
[0672] Avaliações de qualidade de fruto da toranja 'Ruby Red' colhida em dezembro de 2018 indicam que Bt.4Q7Flg22 (0,33 mg por árvore) aumentou tamanho de fruto, volume de suco,% de teor de suco e razão Brixc para Ácido cítrico (Brix:CA) em relação ao controle não tratado. A injeção de Mistura de Enzima de Recuperação aumentou tamanho de fruto geral e volume de suco em relação ao controle não tratado (Tabela 33).
EXEMPLO 4: PRODUÇÃO DE ESPÉCIES DE OXIGÊNIO REATIVAS (ROS) DE UM PEPTÍDEO FLG22 COM COMPOSTOS INDUTORES PARA USO NO TRATAMENTO DE
DOENÇAS DE CITRO
[0673] Combinações de Flg22 com compostos indutores que foram usados para restaurar saúde de planta e aumentar rendimento de fruto em árvores de citros infectadas com HLB pela restrição de crescimento bacteriano CLas e pela redução de polissacarídeos de calose bloqueadores de floema foram examinadas posteriormente quanto a ativação do sistema imune da planta usando em ensaios de espécies de oxigênio reativas (ROS). Para testar a compatibilidade entre combinações de peptídeos Flg22 com compostos indutores, misturas de tanque entre Bt.4Q7Flg22 nativo (SEQ ID NO: 226) e L-
Cisteína ou 2-Desoxi-D-Glicose (2-DDG) foram testadas quanto à capacidade de intensificar produção de ROS induzida por Flg22. Combinações de Flg22 com compostos indutores nos ensaios de atividade de ROS foram selecionadas para modelar coinjeção das árvores de citros usadas para laranjas Hamlin (Exemplos 1 a 2). Concentrações de combinação de
Bt.4Q7Flg22 com compostos indutores, L-cisteína ou 2-Desoxi-D-glicose (2-
DDG) foram combinadas com volumes de injeção usados para a injeção de laranjas Hamlin na Tabela 30, de modo que as taxas de injeção por árvore fossem calculadas usando a suposição que o teor de floema é de 1 L em volume.
Concentrações finais para Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID Nº: 226) (0,12 ppm);
L-cisteína (0,06 g/L) e 2-DDG (0,1 g/L) foram usadas nos ensaios de atividade de ROS.
Tecidos de planta frescos de folhas de soja (variedade MorSoyXtra
38X52) foram cortados em amostras uniformes e flutuados em 150 μL de água estéril em uma placa branca de 96 poços de baixa luminescência.
Para amostras de soja, folhas trifoliadas totalmente expandidas foram removidas de plantas de estágio V1-V3. Discos de folhas (12,6 mm2) foram cortados de lâminas de folha usando um furador de cortiça limpo afiado de 4 mm de diâmetro.
Discos foram cortados ao meio usando uma lâmina de barbear limpa e cada metade de disco foi colocada em um poço individual da placa de 96 poços.
A placa foi colocada sob luzes de crescimento que tinham ciclos de 16 horas de luz/8 horas de escuro a uma temperatura consistente de 22°C.
Após
18–24 horas, a água foi removida de cada poço da placa de 96 poços.
Amostras de tecido de planta foram tratadas com uma solução de elicitação de
100 µL contendo 34 µg/mL de luminol, 20 µg/mL de peroxidase de rábano e a concentração indicada de Bt.4Q7 Flg22 (SEQ ID NO: 226) sozinho ou em combinação com L-Cisteína ou 2-DDG. O reconhecimento do polipeptídeo Flg22 pelo tecido de planta resultou em ativação de sinalização imune e na produção de espécies de oxigênio reativas apoplásticas (ROS). Na presença de ROS (H2O2), a peroxidase de rábano catalisou a oxidação de luminol e a produção de luz visível. Unidades de luz relativa (RLUs) foram registradas com um luminômetro SpectraMaxL usando uma integração de 0,5 s e intervalos de 2,0 min. ao longo de um curso de tempo de 40 minutos. Para análise de dados, o valor de RLU médio de 14,5 min. pós-tratamento é relatado (n=4 amostras por tratamento).
TABELA 34. ENSAIOS DE ATIVIDADE ROS DE PEPTÍDEO BT.4Q7FLG22 USADO EM
COMBINAÇÃO COM COMPOSTOS INDUTORES Tratamento Unidades de Luz Relativas Mudança em Vezes (n=4 amostras de folhas por 14,5 min. pós-tratamento em relação a tratamento) Tratamento A Sem tratamento 516 0,028 X Tratamento A 18.456 1X Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226); 0,12ppm Tampão Fosfato 10µM Tratamento B 17.183 0,93 X Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226); 0,12ppm Tampão Fosfato 10µM + 2-desoxi-D-glicose CAS 154-17-6 0,1 g/L Tratamento C 39.018 2,11 X Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226); 0,12ppm Tampão Fosfato 10µM + L-Cisteína CAS 136743-62-9 0,06 g/L
[0674] Resultados de ensaio de atividade de ROS (Tabela 34) indicaram que o composto indutor, 2-DDG, que é usado como um inibidor da calose sintase, fornecido em combinação com o peptídeo Bt.4Q7Flg22 (Tratamento B) resultou em uma resposta de ROS semelhante à saída de resposta do peptídeo Bt.4Q7Flg22 sozinho (Tratamento A). Este era um resultado esperado, pois 2-DDG usado para reduzir o teor de calose no floema não contribuiu diretamente para aumentar a resposta de ROS, mas também não impediu a resposta do peptídeo Bt.4Q7Flg22 e, portanto, foi considerado compatível. No entanto, o composto indutor, L-Cisteína fornecido em combinação com o peptídeo Bt.4Q7Flg22 (Tratamento C) induziu e contribuiu para a produção de ROS em tecido foliar de soja e resultou em um aumento de mais de 2 vezes (2,11X) na produção de ROS. O aumento na atividade de ROS para a combinação de L-cisteína e Bt.4Q7Flg22 fornece um indicador de ativação do sistema imune de planta.
EXEMPLO 5: PRODUÇÃO DE ESPÉCIES DE OXIGÊNIO REATIVAS (ROS) DE UM PEPTÍDEO FLG22 COM OSMOPROTETORES PARA USO NO TRATAMENTO DE DOENÇA
DE CITRO OU MELHORIA NO RENDIMENTO EM CULTURAS EM LINHA
[0675] Em um estudo separado, a compatibilidade entre Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226; Composição 1) e formulações que fornecem osmoproteção de planta elevada foi testada quanto a produção de espécies de oxigênio reativas (ROS) e é ainda descrita na Tabela 35 abaixo. As concentrações de produto no ensaio de ROS foram selecionadas para modelar cotratamento de Bt.4Q7Flg22 (Composição 1) e composições osmoprotetoras em um volume de transportador de 10 galões por acre para aplicação foliar em plantações. A produção de ROS foi medida em soja (variedade MorSoyXtra 38X52) usando os mesmos métodos descritos anteriormente no Exemplo 4. As amostras de tecido de planta foram tratadas com uma solução de elicitação de 100 µL contendo 34 µg/mL de luminol, 20 µg/mL de peroxidase de rábano e a concentração indicada de Bt.4Q7Flg22 sozinho (Tratamento A) ou em combinação com osmoprotetor (Tratamentos B, C e D) contendo betaína e/ou L-prolina. Unidades de luz relativa (RLUs) foram registradas com um luminômetro SpectraMaxL usando uma integração de 0,5 s e intervalos de 2,0 min. ao longo de um curso de tempo de 40 minutos. Para análise de dados, a RLU total média ao longo de um curso de tempo de 40 minutos é relatada (n=4 amostras por tratamento) na Tabela 35.
TABELA 35. ENSAIOS DE ATIVIDADE DE ROS COM BT.4Q7FLG22 E
OSMOPROTETORES Tratamento Unidades de Luz Relativas Mudança em Vezes Totais Médias em relação a Tratamento A Controle não Tratado 40.372 0,01 Tratamento A 275.142 1 Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 0,12 ppm (Composição 1) Tampão de Fosfato 0,01mM PROXEL BC conservante: 1 µM (BIT) Tratamento B 308.932 1,12 X Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 0,12 ppm Tampão de Fosfato 0,01mM PROXEL BC conservante: 1 µM (BIT) + Osmoprotetor 0,25% [Betaína-HCl 83,49 mM 3,3% Fosfato de Potássio Tribásico 37,9% Surfactante não iônico (alquil fenol etoxilato); Conservante PROXEL BD20: 6,4 mM (BIT)] Tratamento C 323.822 1,18 X Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 0,12 ppm Tampão de Fosfato 0,01mM PROXEL BC conservante: 1 µM (BIT) + Osmoprotetor 0,25% [L-Prolina 163,88 mM 3,3% Fosfato de Potássio Tribásico 37,9% surfactante não iônico (alquil fenol etoxilato); PROXEL BD20 conservante: 6,4 mM (BIT)]
Tratamento Unidades de Luz Relativas Mudança em Vezes Totais Médias em relação a Tratamento A Tratamento D 287.127 1,04 X Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 0,12 ppm Tampão de Fosfato 0,01mM Proxel™ BC conservante: 1 µM (BIT) + Osmoprotetor 0,25% [Betaína-HCl 83,49 mM L-Prolina 163,88 mM 3,3% Fosfato de Potássio Tribásico 37,9% surfactante não iônico (alquil fenol etoxilato); PROXEL BD20 conservante: 6,4 mM (BIT)]
[0676] Resultados do ensaio de atividade de ROS indicaram que combinações formuladas com osmoprotetores (Tratamentos B, C e D) são compatíveis com a produção induzida por Bt.4Q7Flg22 de ROS em tecidos foliares de soja, o que é um indicador de ativação do sistema imune de planta.
Cotratamento de tecido foliar de soja com Bt.4Q7Flg22 com os osmoprotetores conforme descrito nos tratamentos B, C e aumentou a produção de ROS 1,04 a 1,18 vezes acima do Bt.4Q7Flg22 (Tratamento A) sozinho.
EXEMPLOS 6-9: COMPOSIÇÕES FOLIARES DE PEPTÍDEOS FLG22 USADOS EM
COMBINAÇÕES COM OSMOPROTETORES E ACC DESAMINASE PARA AUMENTAR RENDIMENTO CULTIVOS EM LINHA, MILHO E SOJA
[0677] Nos exemplos a seguir, uma série de composições de tratamento compreendendo uma combinação de um peptídeo Flg22, osmoprotetor e/ou ACC desaminase foi testada em plantações em linha (milho e soja) para medir seu efeito no rendimento. Para facilidade de referência, as composições usadas e o método de aplicação/a taxa de uso são resumidos na Tabela 36 abaixo.
Composição Nº: Formulação Método de Taxa de Uso de Tratamento Aplicação Onça fluida/acre (Fl. oz/Ac) Colheita em Linha Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: Pulverização foliar 4,0 oz/Ac Composição 1 226) 20 ppm Tampão de Fosfato de Sódio 1,67 mM, pH 5,7 Conservante PROXELBC: 330,7 µM (BIT); 53,5 µM (CMIT); 26,1 µM (MIT) Colheita em Linha Osmoprotetor Pulverização foliar 3,2 oz/Ac Composição 2 Betaína-HCl 83,49 mM 3,3% Fosfato de Potássio Tribásico 37,9% de surfactante não iônico (alquil fenol etoxilato) conservante PROXEL BD20: 6,38 mM (BIT) Composição de ACC Deaminase [SEQ ID Pulverização foliar 8,0 oz/Ac Colheita em Linha NO: 730] 3 Filtrado de caldo de fermentação com enzima imobilizada conservante [PROXELBC: 330,7 µM (BIT); 53,5 µM (CMIT); 26,1 µM (MIT) Composição de Osmoprotetor Pulverização foliar 3,2 oz/Ac Colheita em Linha Prolina 163,88 mM 4 3,3% Fosfato de Potássio Tribásico 40 mM de Ácido Fosfórico 37,9% de surfactante não iônico (alquil fenol etoxilato) Conservante PROXEL BD20: 6,38 mM (BIT) TABELA 36. COMPOSIÇÕES DE TRATAMENTOS DE CULTURA EM LINHA EXEMPLO 6: APLICAÇÃO FOLIAR DE BT.4Q7FLG22 (SEQ ID NO: 1) (COMPOSIÇÃO 1) EM COMBINAÇÃO COM OSMOPROTETOR (COMPOSIÇÃO 2) PARA MILHO V4-V7
[0678] Tratamentos foliares com Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226)
(Composição de Linha 1), em combinação com Osmoprotetor (Composição em Linha 2), foram conduzidos para determinar se efeitos sinérgicos resultaram da combinação dos tratamentos. Impacto de rendimento de aplicações de pulverização foliar de Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (Composição em Linha 1) fornecidas em tratamentos de combinação com um Osmoprotetor (Composição em Linha 2) foi avaliado em plantas de milho (híbridos: DKC 60-88 RIB e DKC 58-08 RIB) no estágio V4-V7 de desenvolvimento.
[0679] Ensaios replicados foram conduzidos em 10 localizações em todo o meio-oeste dos EUA (IL, IA, NE), testando dois híbridos por localização. Os canteiros de sementes de campo em cada localização foram preparados usando métodos de lavoura convencionais ou de conservação para plantios de milho. Fertilizante foi aplicado conforme recomendado pelas práticas agrícolas convencionais e permaneceu consistente entre as localizações do meio-oeste dos EUA. Herbicidas foram aplicados para controle de plantas daninhas e suplementados com cultivo quando necessário. Terrenos de quatro fileiras, 17,5 pés (5,3 metros) de comprimento foram plantados em todas as localizações. Semente de milho foi plantada de 1,5 a 2 polegadas (3,8 a 5,1 cm) de profundidade, para assegurar desenvolvimento normal de raiz, de
28.000 a 36.000 plantas por acre com larguras de fileira de 30 polegadas (76,2 cm) - espaçamento de semente de aproximadamente 1,6 a 1,8 sementes por pé. Cada híbrido foi cultivado em pelo menos três terrenos separados (replicatas) por tratamento em cada localização para levar em conta variabilidade de campo. Terrenos foram mantidos usando as práticas de produção do produtor individual.
[0680] Polipeptídeo de iniciação bioativa Bt.4Q7Flg22 nativo (SEQ ID NO: 226) (Composição 1) foi quimicamente sintetizado via síntese de peptídeo de fase sólida e formulado em taxa de uso de 4 Fl. oz/Ac (292,1 mL/hectare, Ha). A concentração final no tanque de pulverização foi de 42 ppb após diluição na taxa de transportador de 15 galões de água/Ac, GPA (37,85 L/Ha). Polipeptídeo de iniciação bioativa Bt.4Q7Flg22 nativo (SEQ ID NO: 226) (Composição 1) foi aplicado sozinho e em combinação com Osmoprotetor (Composição 2). Osmoprotetor (Composição 2) foi formulado a uma taxa de uso de 3,2 Fl. oz/Ac (233,7 mL/Hectare, Ha). A combinação foi aplicada no estágio V4-V7 de desenvolvimento com um surfactante não iônico a 0,067% v/v (concentração final em tanque de pulverização).
[0681] Rendimento de milho em alqueires por acre (Bu/Ac) foi relatado em todas as localizações como um rendimento médio de cada replicata do tratamento através de cada híbrido. O efeito do Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (Composição 1) em combinação com Osmoprotetor (Composição 2) foi normalizado para o rendimento médio para os gráficos de controle de surfactante para as 10 localizações (Tabela 37). Adicionalmente, a taxa de ganho foi calculada: a porcentagem de localizações de teste nas quais um tratamento tem uma vantagem de rendimento sobre outros tratamentos (neste caso, em comparação com as plantas de controle de surfactante).
[0682] Tratamento foliar Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (Composição 1) em combinação com Osmoprotetor (Composição 2) proporcionou benefícios de rendimento sobre as plantas de milho de controle tratadas com surfactante com um aumento médio de +8,70 Bu/Ac (546 kg/Ha) observados através de 10 localizações com uma taxa de ganho de 60% sobre o controle de surfactante. O tratamento de combinação de Bt.4Q7Flg22 com o Osmoprotetor resultou em aumentos de rendimento em milho maiores que os aumentos de aditivos desses tratamentos aplicados individualmente (Tabela 37).
TABELA 37. TRATAMENTO FOLIAR DE MILHO COM BT.4Q7FLG22 (COMPOSIÇÃO 1), EM COMBINAÇÃO COM OSMOPROTETOR (COMPOSIÇÃO 2) PARA AUMENTAR
RENDIMENTO EM MILHO Tratamento - Milho Taxa de Uso de Rendimento Total Aumento Bu/Ac Aplicação Fl. oz/Ac Médio Bu/Ac (10 Médio em localizações) comparação com Controle Controle de Surfactante - 223,21 - Bt.4Q7Flg22 4,0 224,67 +1,42 (Composição 1) Osmoprotetor 3,2 229,53 +6,32 (Composição 2) Bt.4Q7Flg22 4,0 231,91 +8,70 (Composição 1) + Osmoprotetor 3,2 (Composição 2) EXEMPLO 7: APLICAÇÃO FOLIAR DE BT.4Q7FLG22 (COMPOSIÇÃO 1) EM COMBINAÇÃO COM ACC DESAMINASE (COMPOSIÇÃO 3) PARA MILHO V4-V7
[0683] Tratamentos foliares com Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (Composição 1), em combinação com ACC Desaminase (Composição 3), foram conduzidos para determinar se efeitos sinérgicos resultaram da combinação dos tratamentos. Impacto de rendimento de aplicação de spray foliar de Bt.4Q7Flg22 em combinação com ACC Desaminase (Composição 3) foi avaliado em plantas de milho (híbridos: DKC 60-88 RIB, DKC 58-08 RIB e DKC 64-35 RIB) no estágio V4-V7 de desenvolvimento.
[0684] Experimentos replicados foram conduzidos em 12 localizações em todo o meio-oeste dos EUA (IL, IA, NE). As plantas de milho foram cultivadas conforme descrito no Exemplo 6.
[0685] Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (Composição 1) foi preparado e aplicado como no Exemplo 6, sozinho e em combinação com ACC Desaminase (Composição 3). ACC Desaminase (Composição 3) foi formulada a 8 Fl. oz/Ac (584,2 mL/Hectare, Ha) de taxa de uso. A combinação foi aplicada no estágio V4-V7 de desenvolvimento com um surfactante não iônico a 0,1% v/v (concentração final em tanque de pulverização).
[0686] Rendimento de milho em alqueires por acre (Bu/Ac) e a taxa de ganho foram calculados como para o Exemplo 6.
[0687] Tratamento foliar de Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (Composição 1) em combinação com ACC Desaminase (SEQ ID NO: 730) (Composição 3) proporcionou benefícios de rendimento sobre as plantas de milho de controle não tratadas com um aumento médio de +10,64 Bu/Ac (667,9 kg/Ha) observado através de 12 localizações com uma taxa de ganho de 75% sobre o controle de surfactante. Os tratamentos de combinação de Bt.4Q7Flg22 e ACC desaminase resultaram em um aumento sinérgico em rendimento maior que os tratamentos foliares individuais com Bt.4Q7Flg22 (+4,37 Bu/Ac) e ACC desaminase (+1,06 Bu/Ac), (Tabela 38).
TABELA 38. TRATAMENTO FOLIAR DE MILHO COM BT.4Q7FLG22 (SEQ ID NO: 226) (COMPOSIÇÃO 1), EM COMBINAÇÃO COM ACC DESAMINASE (COMPOSIÇÃO 3) PARA
AUMENTAR RENDIMENTO EM MILHO Tratamento - Milho Taxa de Uso de Rendimento Total Aumento Bu/Ac Aplicação Fl. oz/Ac Médio Bu/Ac (12 Médio em localizações) comparação com Controle Controle de Surfactante - 225,51 - Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 4,0 229,88 +4,37 226) (Composição 1) ACC Deaminase (SEQ ID 8,0 226,57 +1,06 NO: 730) (Composição 3) Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 4,0 226) 236,15 +10,64 (Composição 1) 8,0 + ACC Deaminase (SEQ ID NO: 730) (Composição 3)
EXEMPLO 8: APLICAÇÃO FOLIAR DE BT.4Q7FLG22 (COMPOSIÇÃO 1) EM COMBINAÇÃO COM OSMOPROTETOR (COMPOSIÇÃO 2) PARA SOJA V3-V6
[0688] Tratamentos foliares com Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (Composição 1), em combinação com Osmoprotetor (Composição 2), foram conduzidos para determinar se efeitos sinérgicos resultaram da combinação dos tratamentos. O impacto de rendimento da aplicação de pulverização foliar foi avaliado em plantas de soja (variedades: AG35X7, AG41X8, AG27X7 e AG30X6), no estágio V3-V6 de desenvolvimento.
[0689] Experimentos replicados foram conduzidos em 14 localizações em todo o meio-oeste dos EUA (IL, IA, NE). As variedades de sementes de soja foram plantadas com 1,5 a 2 polegadas (3,8 a 5,1 cm) de profundidade para assegurar desenvolvimento normal de raiz. Semente de soja foi plantada em aproximadamente numa média de 150.000 plantas por acre, com larguras de fileiras de 30 polegadas (76,2 cm) espaçamento de sementes de fileiras de aproximadamente 7 a 8 sementes por pé (0,3 metro). Terrenos foram mantidos usando as práticas de produção do produtor individual.
[0690] Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (Composição 1) foi aplicado sozinho e em combinação com Osmoprotetor (Composição 2) como para o Exemplo 6. A combinação foi aplicada no estágio V3-V6 de desenvolvimento com um surfactante não iônico a 0,067% v/v (concentração final em tanque de pulverização).
[0691] Rendimento da soja em alqueires por acre (Bu/Ac) e a taxa de ganho foram calculados como para o Exemplo 6.
[0692] Tratamento foliar Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (Composição 1) em combinação com Osmoprotetor (Composição 2) proporcionou benefícios de rendimento sobre as plantas de soja de controle tratadas com surfactante com um aumento médio de +1,94 Bu/Ac (126,4 kg/Ha) observados através de 14 localizações com uma taxa de ganho de 86%
sobre o controle de surfactante. O tratamento de combinação de Bt.4Q7Flg22 (Composição 1) com o Osmoprotetor (Composição 2) resultou em elevado rendimento da soja em relação aos tratamentos de Bt.4Q7Flg22 ou Osmoprotetores aplicados sozinhos (Tabela 39).
TABELA 39. TRATAMENTO FOLIAR DE SOJA COM BT.4Q7FLG22 (COMPOSIÇÃO 1), EM COMBINAÇÃO COM OSMOPROTETOR (COMPOSIÇÃO 2) PARA AUMENTAR RENDIMENTO
EM SOJA Tratamento - Soja Taxa de Uso de Rendimento Total Aumento Bu/Ac Aplicação Fl. Médio Bu/Ac (14 Médio em oz/Ac localizações) comparação com Controle Controle de Surfactante - 64,69 - Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 4,0 64,97 +0,29 226) (Composição 1) Osmoprotetor 3,2 65,97 +1,28 (Composição 2) Bt.4Q7Flg22 4,0 64,05 +1,94 (SEQ ID NO: 226) (Composição 1) + 3,2 Osmoprotetor (Composição 2) EXEMPLO 9: APLICAÇÃO FOLIAR DE BT.4Q7FLG22 (COMPOSIÇÃO 1) EM COMBINAÇÃO COM UM HERBICIDA PARA SOJA V3-V6
[0693] Aplicações foliares usando Bt.4Q7Flg22 nativo (SEQ ID NO: 226) (Composição 1), em combinação com um herbicida de amplo controle de ervas daninhas com o ingrediente ativo lactofen (24% p/v) foram conduzidas para determinar se a aplicação do peptídeo de Bt.4Q7Flg22 com um herbicida usado para amplo controle de ervas daninhas e proteção contra infecção de mofo branco poderia fornecer uma vantagem de rendimento benéfica em comparação com aquela obtida do herbicida sozinho. Impacto de rendimento de aplicação de pulverização foliar de Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (Composição 1) em combinação com lactofen foi determinado em plantas de soja (variedades: AG35X7, AG41X8) no estágio V3-V6 de desenvolvimento.
Ensaios de soja replicados de grande escala foram conduzidos em 4 localizações no meio-oeste dos EUA (KS, MO, IL), com plantio como no Exemplo 8.
TABELA 40. TRATAMENTO FOLIAR DE SOJA COM BT.4Q7FLG22 (COMPOSIÇÃO 1), EM
COMBINAÇÃO COM UM HERBICIDA PARA AUMENTAR RENDIMENTO EM SOJA Tratamento - Soja Taxa de Uso de Rendimento Aumento Bu/Ac Médio Aplicação Fl. oz/Ac Total Médio em Comparação com Bu/Ac (4 Herbicida Sozinho localizações) Lactofen (24% p/v) 10 66,10 - Herbicida Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO:226) 4 67,73 +1,62 + Lactofen (24% p/v) Herbicida 10
[0694] Tratamento foliar de Bt.4Q7Flg22 (Composição 1) fornecido em combinação com um herbicida de amplo controle de ervas daninhas com o ingrediente ativo lactofen aumentou rendimento +1,62 Bu/Ac (109 kg/Ha) f em comparação com o tratamento de herbicida aplicado sozinho (Tabela 40), indicando que tratamento de Bt.4Q7Flg22 é compatível com lactofen. Fornecidos juntos, Bt.4Q7Flg22 e lactofen seriam esperados melhorar resistência de soja melhorada a mofo branco.
EXEMPLO 10: EFEITOS ADITIVOS E SINÉRGICOS ENTRE FLAGELINAS E MISTURA DE ENZIMA DE RECUPERAÇÃO.
[0695] Para testar para efeitos aditivos e/ou sinérgicos entre as combinações de Bt.4Q7Flg22 e a Mistura de Enzima de Recuperação (Tabela de Composição 41), experimentos serão estabelecidos em laranjeiras Navel, Hamlin e/ou Valencia de 5 a 10 anos de idade e árvores de toranja Rubi red.
Dez árvores serão tratadas para cada composição (descrita na Tabela 41), dispostas em dois blocos replicados de 5 árvores cada, usando métodos descritos no Exemplo 1 para injeção de árvore e pulverização foliar. A fruta será colhida e a qualidade da fruta avaliada conforme descrito no Exemplo 1 e Exemplo 2.
TABELA 41. EFEITOS SINÉRGICOS ENTRE COMBINAÇÕES DE BT.4Q7FLG22 E AS
MISTURAS DE ENZIMA DE RECUPERAÇÃO Composição Nº: Formulação Método de Tratamento Taxa de Uso de Aplicação Mililitros por árvore (mL/árvore) ou Onça fluida/acre (Fl. oz/Ac) Sem tratamento --- --- --- Composição de Bt.4Q7Flg22 Pulverização Foliar ou 0,33 mg/árvore Citro 1 (SEQ ID NO: 226) Injeção de tronco Composição de Bt.4Q7Flg22 Pulverização Foliar ou 0,33 mg/árvore Citro 2 (SEQ ID NO: 226) Injeção de tronco L-Cisteína Injeção de tronco 60 mg/árvore B-1,3-Endoglucanase Injeção de tronco 500 U/árvore Composição de Bt.4Q7Flg22 Pulverização Foliar ou 0,33 mg/árvore Citro 3 (SEQ ID NO: 226) Injeção de tronco L-Cisteína Injeção de tronco 60 mg/árvore Amilase Injeção de tronco 500 U/árvore Composição de Bt.4Q7Flg22 Pulverização Foliar ou 0,33 mg/árvore Citro 4 (SEQ ID NO: 226) Injeção de tronco L-Cisteína Injeção de tronco 60 mg/árvore 2-DDG Injeção de tronco 100 mg/árvore Composição de Bt.4Q7Flg22 Pulverização Foliar ou 0,33 mg/árvore Citro 5 (SEQ ID NO: 226) Injeção de tronco L-Cisteína Injeção de tronco 60 mg/árvore B-1,3-Endoglucanase Injeção de tronco 500 U/árvore Amilase Injeção de tronco 500 U/árvore Composição de L-Cisteína Injeção de tronco 60 mg/árvore Citro 6 B-1,3-Endoglucanase Injeção de tronco 500 U/árvore Amilase Injeção de tronco 500 U/árvore 2-DDG Injeção de tronco 100 mg/árvore
Composição Nº: Formulação Método de Tratamento Taxa de Uso de Aplicação Mililitros por árvore (mL/árvore) ou Onça fluida/acre (Fl. oz/Ac) Composição de Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID Pulverização Foliar ou 0,33 mg/árvore Citro 7 NO: 226) Injeção de Tronco L-Cisteína Injeção de tronco 60 mg/árvore B-1,3-Endoglucanase Injeção de tronco 500 U/árvore Amilase Injeção de tronco 500 U/árvore 2-DDG Injeção de tronco 100 mg/árvore EXEMPLOS 11-12:
[0696] Nos Exemplos a seguir 11-12, uma série de composições de tratamento compreendendo uma combinação de um peptídeo Flg22, osmoprotetor e/ou ACC desaminase foi testada em plantações em linha (milho e soja) para medir seu efeito no rendimento. Para facilidade de referência, as composições utilizadas são as mesmas composições como descritas na Tabela 42 para composições 1, 3, 5 e 7. As composições usadas, o método de aplicação e as taxas de uso estão resumidos na Tabela 42 abaixo.
TABELA 42. COMPOSIÇÕES DE TRATAMENTOS DE CULTURA EM LINHA PARA
APLICAÇÃO DE MILHO E SOJA Composição Nº: Formulação Método de Taxa de Uso de Tratamento Aplicação Onça fluida/acre (Fl. oz/Ac) Composição de Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: Pulverização 4,0 oz/Ac Foliar ou Colheita em Linha 226) 20 ppm Foliar ou 4,0 oz/Ac em Sulco 1 Tampão de Fosfato de Sódio 1,67 Tratamento Em mM, pH 5,7 Sulco Conservante PROXELBC: 330,7 µM (BIT); 53,5 µM (CMIT); 26,1 µM (MIT) Composição de ACC Deaminase [SEQ ID NO: Tratamento em 8 oz/Ac Em Sulco Colheita em Linha 730] sulco 3 Filtrado de caldo de fermentação com enzima imobilizada Conservante PROXELBC: 330,7 µM (BIT); 53,5 µM (CMIT); 26,1 µM (MIT)
Composição Nº: Formulação Método de Taxa de Uso de Tratamento Aplicação Onça fluida/acre (Fl. oz/Ac) Composição de Osmoprotetor Pulverização 3,2 oz/Ac Foliar Colheita em Linha Betaína-HCl 83,49 mM foliar 5 L-prolina 163,88 mM 3,3% Fosfato de Potássio Tribásico 37,9% de surfactante não iônico (alquil fenol etoxilato) conservante PROXEL BD20: 6,38 mM (BIT) Composição de Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: Tratamento de 0,14 fl oz/semente Colheita em Linha 226) 48 ppm Sementes unitária 6 Tampão de Fosfato de Sódio 4 mM, pH 5,7 Conservante PROXELBC: 330,7 µM (BIT); 53,5 µM (CMIT); 26,1 µM (MIT) Composição de ACC Deaminase [SEQ ID NO: Tratamento de 30 mU/semente unitária Colheita em Linha 730] Sementes 7 Lisado de célula bacteriana com enzima livre EXEMPLO 11: APLICAÇÃO FOLIAR DE PEPTÍDEO DE BT.4Q7FLG22 (SEQ ID NO: 226)
EM COMBINAÇÃO COM OSMOPROTETORES PARA AUMENTAR RENDIMENTO DE SOJA
[0697] A aplicação foliar de peptídeo Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) e uma formulação osmoprotetora com dois ingredientes ativos, L-Prolina e Betaína, foram aplicadas à soja como um spray foliar para testar o potencial para o tratamento combinado para aumentar rendimento de grão.
[0698] Experimentos replicados foram conduzidos em 11 locais em todo o meio-oeste dos EUA (MN, IL, IA, MO), nas seguintes variedades de soja, AG2733, AG3931, P21a28x e P40a47x, com uma variedade por local.
Sementes de soja foram plantadas e terrenos de teste estabelecidos como para o Exemplo 8.
[0699] Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (Tabela 42; Composição de Cultivo em Linha 1) foi aplicado sozinho e em combinação com a formulação Osmoprotetora (Tabela 42; Composição de Cultivo em Linha 5), no estágio de desenvolvimento R2 de soja com um surfactante não iônico a 0,067% v/v (concentração final em tanque de pulverização). O rendimento de soja em alqueires por acre (Bu/Ac) foi relatado para cada replicata experimental e mudança média em Bu/Ac e taxa de ganho (Tabela 43) foi calculada em todos os locais, conforme descrito no Exemplo 6.
TABELA 43. TRATAMENTO FOLIAR DE SOJA COM BT.4Q7FLG22 (SEQ ID NO: 226) E
OSMOPROTETORES AUMENTOU RENDIMENTO EM SOJA Tratamento - Soja Método de Taxa de Uso de Rendimento Aumento Bu/Ac Tratamento Aplicação Fl. Total Médio Médio em oz/Ac Bu/Ac (11 comparação com sítios) Controle Controle não Tratado - - 65,16 - Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID Pulverização 4,0 66,60 +1,44 NO: 226) foliar (Composição de Colheita em Linha 1) Osmoprotetor Pulverização 3,2 67,82 +2,66 (Composição de foliar Colheita em Linha 5) Bt.4Q7Flg22 Pulverização 4,0 68,16 +3,00 (SEQ ID NO: 226) foliar (Composição de Colheita em Linha 1) + Osmoprotetor 3,2 (Composição de Colheita em Linha 5)
[0700] Tratamento foliar de Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (Composição de Cultivo em Linha 1) em combinação com Osmoprotetor (Composição de Cultivo em Linha 5) proporcionou benefícios de rendimento sobre as plantas de soja de controle não tratadas com uma média de +3,00 Bu/Ac através dos 11 locais, com 73% taxa de ganho sobre o controle não tratado. O rendimento observado para o tratamento de combinação ultrapassou o rendimento para cada composição sozinha, +1,44 Bu/Ac e +2,66 Bu/Ac para a Composição de Cultivo em Linha 1 e 5, respectivamente, demonstrando benefício aumentado para combinações do peptídeo bioativo fornecido com um osmoprotetor incluindo uma betaína ou prolina durante estágios reprodutivos (este exemplo) e estágios vegetativos (Exemplo 8).
EXEMPLO 12: TRATAMENTO EM SULCO OU SEMENTE DE MILHO COM BT.4Q7FLG22 (SEQ ID NO: 226) EM COMBINAÇÃO COM ACC DESAMINASE (SEQ ID NO: 730)
PARA AUMENTAR RENDIMENTO
[0701] Em tratamentos de sulco com Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (Composição de Cultivo em Linha 1), em combinação com ACC desaminase (SEQ ID NO: 730) (Composição de Cultivo em Linha 3), foram conduzidos para determinar se efeitos sinérgicos ou aditivos resultaram da combinação dos tratamentos. O impacto de rendimento de combinação em tratamentos de sulco foi avaliado em plantas de milho, híbridas P1197.
[0702] Experimentos replicados foram conduzidos em 4 localizações em todo o meio-oeste dos EUA (KS, MO, IL). Os canteiros de sementes de campo em cada localização foram preparados usando métodos de lavoura convencionais ou de conservação para plantios de milho.
Fertilizante foi aplicado conforme recomendado pelas práticas agrícolas convencionais e permaneceu consistente entre as localizações do meio-oeste dos EUA. Um tratamento de base de fertilizante 10-34-0 à taxa de 2,5 galões por acre foi aplicado junto com todos os tratamentos, incluindo o tratamento de controle. Herbicidas foram aplicados para controle de ervas daninhas. Terrenos de quatro fileiras, 39 pés (11,9 metros) de comprimento foram plantados em todas as localizações. Semente de milho foi plantada com 1,75 a 2,25 polegadas (4,4 a 5,7 cm) de profundidade, para assegurar desenvolvimento normal de raiz, de 30.000 a 35.000 plantas por acre com largura de fileira de 30 polegadas (76,2 cm). Três terrenos separados (replicatas) por tratamento foram cultivados em cada localização, para levar em conta variabilidade do campo.
Terrenos foram mantidos usando as práticas de produção do produtor individual.
[0703] Polipeptídeo de iniciação bioativa de Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (Composição de Cultivo em Linha 1) ou ACC desaminase (Composição de Cultivo em Linha 3) foram aplicados isoladamente ou em combinação nas taxas indicadas na Tabela 42. Rendimento de milho em alqueires por acre (Bu/Ac) foi relatada para cada replicata experimental e a mudança média em Bu/Ac e taxa de ganho em relação ao controle de fertilizante de base foram calculadas em todos os locais, conforme descrito no Exemplo 6.
[0704] Em tratamento de sulco com Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (Composição de Cultivo em Linha 1) ou ACC desaminase (Composição de Cultivo em Linha 3) proporcionou benefícios de rendimento sobre as plantas de milho de controle com uma média de +1,39 Bu/Ac ou + +2,18 Bu/Ac, respectivamente (Tabela 44). Tratamento combinado resultou em um efeito aditivo, com um aumento observado de +3,62 Bu/Ac em rendimento em comparação com o controle, com uma taxa de ganho de 75% observada sobre as plantas de controle. O tratamento de combinação Bt.4Q7Flg22 com a ACC desaminase resultou em aumentos de rendimento em milho maiores que os aumentos desses tratamentos aplicados individualmente.
TABELA 44. EM TRATAMENTO DE SULCO DE MILHO COM BT.4Q7FLG22 (SEQ ID NO: 226) EM COMBINAÇÃO COM ACC DESAMINASE PARA AUMENTAR RENDIMENTO Tratamento - Sulco de Milho Método de Taxa de Uso Rendimento Aumento Bu/Ac Tratamento de Aplicação Total Médio Médio em fl. oz/Ac Bu/Ac (4 comparação com sítios) Controle Base - - 219,26 - (Fertilizante 10-34-0; 2,5 galões por acre) Base + Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID (Em Sulco) 4 220,65 +1,39 NO: 226) (Composição de Colheita em Linha 1)
Tratamento - Sulco de Milho Método de Taxa de Uso Rendimento Aumento Bu/Ac Tratamento de Aplicação Total Médio Médio em fl. oz/Ac Bu/Ac (4 comparação com sítios) Controle Base + ACC Desaminase (Em Sulco) 8 221,44 +2,18 [SEQ ID NO: 730] Filtrado de caldo de fermentação com enzima imobilizada (Composição de Colheita em Linha 3) Base + Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID (Em Sulco) 4 222,88 +3,62 NO: 226) (Composição de Colheita em Linha 1) + ACC Deaminase [SEQ ID NO: 8 730] Filtrado de caldo de fermentação com enzima imobilizada (Composição de Colheita em Linha 3)
[0705] Ensaios foram estabelecidos para testar ainda mais as aplicações de tratamento de semente de combinação de ACC desaminase (ACCD) (SEQ ID NO: 730) e Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) a milho para aumentar rendimento. Para esses experimentos, ACC desaminase (SEQ ID NO: 730) foi expressa e purificada, e a atividade enzimática foi determinada.
CLONAGEM E EXPRESSÃO DE CONSTRUTO DE EXPRESSÃO DE ENZIMA LIVRE DE PET28A-ACCD.
[0706] O plasmídeo pET28a-ACCD foi criado por clonagem In Fusion. Iniciadores de PCR de inserção e específicos de vetor foram usados para amplificar o vetor pET28a e as sequências de inserção de desaminase ACC com extremidades sobrepostas. Os produtos de PCR foram digeridos com a enzima de restrição DpnI por 1 hora a 37 oC. Após purificação, 20 ng de cada fragmento de DNA foram combinados com In Fusion Premix (In Fusion Cloning Kit, Takara) e incubados por 15 minutos a 50oC para criar a sequência de plasmídeo. Esse plasmídeo foi, então, transformado em células competentes de E. coli Stellar (Takara) por tratamento de choque térmico a 42 oC seguido por recuperação a 37oC em caldo Luria-Bertani (LB) e plaqueamento em placas de ágar LB-ampilicina. As placas foram incubadas a 37oC durante a noite. A sequência de construto para colônias transformantes foi confirmada por PCR e sequenciamento. O construto pET28a-ACCD foi, então, isolado das células de E. coli Stellar usando o Sistema de Purificação de DNA Wizard SV Plus Minipreps (Promega) e transformado em E. coli BL21 via eletroporação em uma cubeta 1 mM com os seguintes parâmetros: 2,35 kV, 200 ohms e 25 µFD.
Transformantes foram selecionados em placas de LB-canamicina e a sequência do construto foi verificada.
[0707] Para expressar a enzima livre ACC-desaminase em E. coli BL21, células foram cultivadas em meios de autoindução de LB contendo lactose e uma pequena concentração de glicose. Após depleção inicial da glicose, as células foram, então, induzidas automaticamente pela lactose na cultura. Lise celular foi realizada com reagente Bugbuster (Millipore Sigma).
Células lisadas foram dialisadas contra salina tamponada com fosfato.
Expressão de proteína foi verificada por eletroforese de gel de poliacrilamida.
DETERMINAÇÃO DE ATIVIDADE DA ENZIMA ACC DESAMINASE
[0708] Atividade da enzima ACCD foi determinada por um ensaio acoplado à lactato desidrogenase (LDH). Essa enzima converte 1- aminociclopropano carboxilato (ACC) em α-cetobutirato que, por sua vez, pode ser reduzido com NADH por LDH. O consumo de NADH foi monitorado por absorbância UV-VIS a 340 nm. A atividade de enzima de ACC desaminase foi, então, determinada com base na mudança de absorbância, após subtração do fundo.
TRATAMENTO DE SEMENTE DE MILHO COM UMA COMPOSIÇÃO DE ACC DESAMINASE E FLG22
[0709] Sementes de milho de dois híbridos, Beck's 6127 BHMF e
6127 DVMF, foram tratadas com Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (Composição de Cultivo em Linha 6), ACC desaminase (SEQ ID NO: 730) (Composição de Cultivo em Linha 7), ou uma combinação dos dois peptídeos bioativos em uma pasta de tratamento de semente padrão nas taxas indicadas na Tabela 42. A pasta padrão continha um fungicida, inseticida, bactérias benéficas, corante e finalizador de semente (Protioconazol 76,8 g/L, Metalazyl 61,4 g/L, Penflufen 38,4 g/L (0,031 mg ai/semente), Clotiandina (40,3%) com cepa Bacillus firmus I-1582 (8,10%) (0,6 mg ai/semente), cepa Bacillus thuringiensis EX297512 (91,04% de bactérias e transportador) (3 fl oz/unidade) Peridium Quality 1006 (5 fl oz/cwt) e Corante Vermelho Pro-Ized (normal) (0,5 fl oz/cwt). Tratamentos de sementes foram aplicados usando um Wintersteiger HEGE II (Wintersteiger AG, Áustria, Alemanha).
[0710] A semente foi plantada em 7 sítios no meio-oeste dos EUA (IL, IN), e cada localização foi preparada usando métodos de lavoura convencionais ou de conservação para plantio de milho. Terrenos de duas linhas foram plantados a 17,5 pés de comprimento em todas as localizações. Semente de milho foi plantada com 1,75 a 2,25 polegadas (4,4 a 5,7 cm) de profundidade, para assegurar desenvolvimento normal de raiz, de 30.000 a 35.000 plantas por acre com largura de fileira de 30 polegadas (76,2 cm). Três terrenos separados (replicatas) por tratamento foram cultivados em cada localização, para levar em conta variabilidade do campo. Terrenos foram mantidos usando as práticas de produção do produtor individual. Produção de milho em alqueires por acre (Bu/Ac) foi relatada para cada replicata experimental e a mudança média em Bu/Ac e taxa de ganho em relação ao controle de tratamento de semente de base foram calculadas em todas as localizações, conforme descrito no Exemplo
6.
[0711] Tratamento de semente com Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (Composição de Cultivo em Linha 6) ou ACC desaminase (Composição de Cultivo em Linha 7) proporcionou benefícios de rendimento sobre as plantas de milho de controle com uma média de +6,44 Bu/Ac ou + 7,16 Bu/Ac, respectivamente (Tabela 45). Tratamento combinado resultou em benefício elevado, com um aumento observado de +9,16 Bu/Ac em rendimento em comparação com o controle de tratamento de semente e uma taxa de ganho de 71% observada sobre as plantas de controle. O tratamento de combinação Bt.4Q7Flg22 com ACC desaminase resultou em aumentos de rendimento em milho maiores que os aumentos desses tratamentos aplicados individualmente.
TABELA 45. TRATAMENTO DE SEMENTE DE MILHO COM ENZIMA LIVRE DE ACC
DESAMINASE EM COMBINAÇÃO COM BT. 4Q7FLG22 PARA AUMENTAR RENDIMENTO EM MILHO Tratamento - Tratamento Método de Taxa de Uso da Rendimento Aumento Bu/Ac de Semente de Milho Tratamento Aplicação por Total Médio Médio em unidade de Bu/Ac (7 sítios) comparação milho com Controle Controle de Tratamento- - - 200,65 - Base de Sementes Base + Bt.4Q7Flg22 (SEQ Tratamento 0,14 fl oz 207,09 +6,44 ID NO: 226) de Sementes (Composição de Colheita em Linha 6)
Tratamento - Tratamento Método de Taxa de Uso da Rendimento Aumento Bu/Ac de Semente de Milho Tratamento Aplicação por Total Médio Médio em unidade de Bu/Ac (7 sítios) comparação milho com Controle Base + ACC Desaminase Tratamento 30 mU 207,81 +7,16 [SEQ ID NO: 730] de Sementes Lisado de célula bacteriana com enzima livre (Composição de Colheita em Linha 7) Base + Bt.4Q7Flg22 (SEQ Tratamento 0,14 fl oz 209,81 +9,16 ID NO: 226) de Sementes (Composição de Colheita em Linha 6) + ACC Deaminase [SEQ ID 30 mU NO: 730] Lisado de célula bacteriana com enzima livre (Composição de Colheita em Linha 7) EXEMPLO 13: TRATAMENTO COM GM RHPP OU VARIANTES DE PEPTÍDEO RHPP
AUMENTA PELO DA RAIZ E COMPRIMENTOS LATERAIS DA RAIZ
[0701] Gm RHPP (SEQ ID NO: 604) e variantes de peptídeo tipo RHPP (SEQ ID NOs: 608, 607 e 745-755) foram testados quanto à capacidade de promover alongamento de pelo de raiz e alongamento de raiz lateral. Para avaliar mudanças de arquitetura de raiz, sementes de mostarda de campo (Brassica rapa) foram esterilizadas na superfície e depois adicionadas a garrafas contendo peptídeo 10 µM em cultura de líquido Murashige e Skoog com 0,25g/L de hidrato de ácido 2-(N-Morpholino) etanossfulônico (pH 5,8). Mudas de mostarda do campo foram cultivadas em garrafas de cultura de líquido por aproximadamente três dias. Após três dias, raízes de mudas foram coradas com azul de metileno 0,1% em etanol 70% e, em seguida, fotografadas usando um microscópio digital Dino-lite. Comprimentos de pelos de raiz e raízes laterais foram quantificados em software FIJI usando a “ferramenta de medida de linha”.
TABELA 46. TRATAMENTO DE CULTURA DE LÍQUIDO COM GM RHPP OU VARIANTES DE
RHPP PROMOVE ALONGAMENTO DE PELOS DE RAIZ E DAS RAÍZES LATERAIS EM MUDAS DE MOSTARDA DO CAMPO CULTIVADAS EM CULTURA DE LÍQUIDO (BRASSICA RAPA) Tratamento: Experimento A: Comprimento de Experimento B: Comprimento Pelo de Raiz Médio Médio de Três Raízes Laterais Mais Por Planta (mm) Longas Por Planta (mm) Controle não 0,137 0,632 Tratado - - (UTC) GmRHPP 0,172 0,971 SEQ ID NO: 604 (125% de UTC) (154% de UTC) (10µM) RHPP-Gm1 SEQ ID 0,185 1,034 NO: 608 (135% de UTC) (164% de UTC) (10µM) RHPP-Gm2 0,169 0,953 SEQ ID NO: 607 (123% de UTC) (151% de UTC) (10µM) RHPP-Pp 0,145 0,853 SEQ ID NO: 745 (105% de UTC) (135% de UTC) (10µM) RHPP-Mc 0,165 0,822 SEQ ID NO: 746 (120% de UTC) (130% de UTC) (10µM) RHPP-Bd 0,137 0,959 SEQ ID NO: 747 (99% de UTC) (152% de UTC) (10µM) RHPP-Va 0,151 0,929 SEQ ID NO: 748 (110% de UTC) (147% de UTC) (10µM) RHPP-Ls 0,182 1,058 SEQ ID NO: 749 (132% de UTC) (168% de UTC) (10µM) RHPP-Vr 0,147 - SEQ ID NO: 750 (107% de UTC) - (10µM)
Tratamento: Experimento A: Comprimento de Experimento B: Comprimento Pelo de Raiz Médio Médio de Três Raízes Laterais Mais Por Planta (mm) Longas Por Planta (mm) Syn01 RHPP SEQ 0,154 0,964 ID NO: 751 (112% de UTC) (153%) (10µM) Syn02 RHPP SEQ 0,150 0,932 ID NO: 752 (10µM) (109% de UTC) (148% de UTC) Syn03 RHPP 0,153 0,954 SEQ ID NO: 753 (112% de UTC) (151% de UTC) (10µM) Syn04 RHPP SEQ 0,164 - ID NO: 754 (120% de UTC) - (10µM) Syn05 RHPP SEQ 0,152 0,932 ID NO: 755 (111% de UTC) (147% de UTC) (10µM)
[0712] Resultados (Tabela 46) indicam que GmRHPP (SEQ ID NO: 604) e quase todas as variantes de peptídeo RHPP testadas (SEQ ID NOs: 607, 608, 745, 746, 748, 749, 750, 751, 752, 753, 754, 755) aumentaram comprimento de pelo de raiz médio em comparação com controle não tratado.
A única exceção foi RHPP-Bd (SEQ ID NO: 747) que não melhorou o alongamento de pelo de raiz. Tratamento com peptídeos RHPP-Gm1, RHPP-Ls e GmRHPP se correlaciona aos maiores aumentos em comprimento de pelo de raiz em relação ao controle (+35%, +32% e +25%, respectivamente). Elevado comprimento de pelo de raiz lateral médio em comparação com controle não tratado foi observado para mudas tratadas com GmRHPP (SEQ ID NO: 604) ou todas as variantes de peptídeo de RHPP testadas (SEQ ID NOs: 607, 608, 745, 746, 747, 748, 749, 750, 751, 752, 753, 754, 755). Tratamento com peptídeos de RHPP-Ls, RHPP-Gm1 e GmRHPP se correlacionaram com os maiores aumentos em comprimento de raiz lateral médio em relação ao controle (+68%, +64% e +54%, respectivamente). Peptídeos de RHPP e tipo RHPP podem ser usados para estimular crescimento de raiz de plantas cultivadas no solo,
hidropônicas ou aeropônicas, para melhorar atualização de nutriente e aumentar biomassa. Peptídeos de RHPP e tipo RHPP podem ser usados em combinação com outros peptídeos bioativos para estimular crescimento de raiz, embora também reduzindo tensão abiótica e biótica e aumentando rendimento.
EXEMPLO 14: APLICAÇÃO FOLIAR DE GM.RHPP EM COMBINAÇÃO COM FUNGICIDAS FOLIARES CONTENDO UM INIBIDOR DA SUCCINATO DESIDROGENASE (SDHI) FORNECE
PROTEÇÃO DE PLANTA INTENSIFICADA CONTRA PHAKOPSORA PACHYRHIZI
[0713] Em janeiro de 2019, experimentos de campo replicados foram realizados em três locais no Paraguai (Capitan Meza, Capitan Miranda, Natalio) usando uma aplicação foliar compreendendo um peptídeo Gm.RHPP e um fungicida de amplo espectro Cripton XPro (12,5% Bixafen, 17,5% Protioconazol, 15% Trifloxistrobina) com três modos de ação. Cripton XPro é um fungicida foliar disponível comercialmente para tratamento preventivo e curativo da Ferrugem da Soja Asiática (ASR) causada por Phakopsora pachyrhizi quando aplicado como spray foliar seguindo a recomendação no rótulo da amostra a uma taxa de uso de 6,84 onças fluidas por acre (Fl. oz/Ac) (500 mL/hectare). Devido a evolver rapidamente resistência de P. pachyrhizi e outros patógenos a fungicidas da classe triazol, novos modos de ação são necessários para estender a eficácia de fungicidas químicos e promover resistência e rendimento de cultura. Bixafen é um exemplo de um grupo de atividade de inibidor da succinato desidrogenase (SDHI) altamente eficaz da classe pirazol carboxamida, que interrompe produção de energia de células fúngicas. Experimentos foram estabelecidos para testar cotratamento de plantas com a formulação Cripton XPro de bixafen e peptídeos bioativos, tal como Gm.RHPP (SEQ ID NO: 604), para controle de ASR.
[0714] Começando no estágio R1 de desenvolvimento, plantas de soja receberam três aplicações foliares das composições descritas na Tabela 47 com um intervalo de 10-14 dias entre aplicações. Aplicações foliares foram aplicadas à soja, com quatro terrenos de replicata (3x 10 metros, 30m2; 6 fileiras) por tratamento em cada local independente (total de 12 replicatas por tratamento) as plantas tornaram-se naturalmente infectadas com P. pachyrhizi através de pressão ambiental e os terrenos foram classificados quanto a severidade de infecção (folhagem afetada 0-100%) para 10 plantas dentro de cada terreno no estágio R6 final do desenvolvimento da soja com orientação de Godoy et al (1997; Journal of plant disease and protection 104: 336-345).
Aproximadamente no estágio R7 de desenvolvimento, as plantas de soja foram avaliadas quanto a desfoliação (0–100% desfolhadas). A severidade de doença, desfolhamento e resultados de rendimento são fornecidos na Tabela
47.
TABELA 47. RENDIMENTO E SEVERIDADE DE SINTOMAS DA DOENÇA DA FERRUGEM
ASIÁTICA DA SOJA APÓS APLICAÇÃO FOLIAR DE FUNGICIDA SDHI E COMPOSIÇÕES DE GM.RHPP NO PARAGUAI Tratamento Taxa de Uso da Escores de Porcentagem Rendimento Foliar Aplicação em Doença da de Desfoliação (kg/Ha) Fluido Ferrugem da Soja (% de (Comparações Onças/Acre Asiática folhagem) Abaixo) Mililitros/hectare (% Severidade) (Comparações (Comparações Abaixo) Abaixo) Sem tratamento n/a 75,0% 90,0% 1.269 Controle (UTC) - - - Fungicida Cripton 6,84 Fl oz/Ac 500 26,7% 46,7% 2.039 XPro mL/Ha (-48,3% para UTC) (-43,3% para (+770 kg para UTC) UTC) Fungicida Cripton 6,84 Fl oz/Ac 500 20,0% 35,0% 2.603 XPro mL/Ha (-55,0% para UTC) (-55,0% para (+1.334 para + + (-6,7% para UTC) UTC) (+564 para Gm.RHPP (SEQ 4,11 Fl oz/Ac 300 CriptonXPro) (-11,7% para Cripton XPro) ID NO: 604) mL/Ha Cripton XPro)
[0715] Aplicação foliar de Gm.RHPP em combinação com o fungicida Cripton XPro durante fases de desenvolvimento reprodutivo de soja forneceu elevada protecção contra ASR em comparação com o Controle não Tratado ou Cripton XPro sozinho. Tratamento de combinação com Gm.RHPP + Cripton XPro diminuiu os escores de severidade de doença ASR para 27% do controle não Tratado e 75% de Cripton XPro. Tratamento de combinação com Gm.RHPP + Cripton XPro diminuiu as porcentagens de desfoliação para 39% do controle não Tratado e 75% de Cripton XPro. Tratamento de combinação com Gm.RHPP + Cripton XPro aumentou o rendimento para 205% do controle não Tratado e 127% de Cripton XPro. Com base nesses resultados, um programa de gerenciamento de doença da soja que incluiu Gm.RHPP seria esperado reduzir sintomas de ASR foliar e desfoliação, aumentando assim o preenchimento e o rendimento de grão em comparação com o fungicida padrão sozinho.
EXEMPLO 15: INJEÇÃO DE TRONCO DE OXITETRACICLINA + BACILLUS SUBTILIS SERINA PROTEASE 2 AUMENTA RENDIMENTO DE FRUTO EM ÁRVORES DE CITROS
INFECTADAS COM CLAS
[0716] Como descrito no Exemplo 1, tratamentos de oxitetraciclina de coinjecção (0,48 g, ou 0,93 g) com filtrado de fermentação contendo Serina Protease 2 (BsSP2) (SEQ ID NO: 795) foram testados quanto à capacidade de aumentar rendimento de laranja 'Hamlin' e/ou diminuir queda de frutas. Experimentos foram organizados com 10 árvores por tratamento, com dois blocos replicados de cinco árvores cada em Okeechobee County, FL. Os resultados são resumidos na Tabela 48 abaixo.
TABELA 48. INJEÇÃO NO TRONCO DE COMBINAÇÃO DE OXITETRACICLINA COM BSSP2 AUMENTOU RENDIMENTO DE FRUTA 'HAMLIN' EM RELAÇÃO À OXITETRACICLINA
SOZINHA Rendimento Médio (kg Rendimento Médio Tratamento de fruta por árvore) (Contagem de Frutos por Árvore) Composição de Citro 3 Oxitetraciclina-HCl 12,65 84,75 (24,1 mg/mL); injeção 20 mL/árvore (0,48 --- --- g/árvore) Composição de Citro 19 Oxitetraciclina-HCl 15,68 105,00 (24,1 mg/mL); injeção 20 mL/árvore (0,48 (124% em relação a (124% em relação a g/árvore) Composição 3) Composição 3) + BsSP2 (SEQ ID NO: 795); injeção de 20 mL/árvore
[0717] Resultados indicam que um programa de gerenciamento de citros que incluiu coinjeção de oxitetraciclina com BsSP2 seria esperado fornecer, em média, um aumento de 24% em rendimento em relação à oxitetraciclina sozinha (Tabela 48).
EXEMPLO 16: INJEÇÃO DE TRONCO DE OXITETRACICLINA E 2-DESOXI-D-GLICOSE
AUMENTA RENDIMENTO DE FRUTA E QUALIDADE DE SUCO E REDUZ QUEDA DE FRUTO EM ÁRVORES DE CITROS INFECTADAS COM CLAS
[0718] Conforme descrito no Exemplo 1, laranjas das variedades 'Vernia' e 'Valencia' foram colhidas de experimentos concebidos para testar a eficácia de tratamentos de coinjeção de oxitetraciclina (0,48 g ou 0,93 g) com 2-Desoxi-D-Glicose (2-DDG), com relação ao rendimento de laranja, qualidade de fruto e/ou qualidade de suco. Os experimentos foram organizados com 10 árvores por tratamento, com dois blocos replicados de cinco árvores cada. No momento da colheita, duas frutas representativas foram coletadas por árvore para avaliação da qualidade da fruta e do suco, conforme descrito no Exemplo
1. Os resultados estão resumidos nas Tabelas 49, 50 e 51 abaixo.
TABELA 49. INJEÇÃO NO TRONCO DE OXITETRACICLINA (0,93 G POR ÁRVORE) EM COMBINAÇÃO COM 2-DESOXI- D-GLICOSE AUMENTOU PRODUÇÃO DE FRUTA 'VERNIA' E 'VALENCIA' EM RELAÇÃO A
CONTROLE NÃO TRATADO Tratamento Rendimento Rendimento Peso Médio Médio (kg de fruta Médio Calculado por por árvore) (Contagem de Fruta (g) Frutos por Árvore) Vernia Controle não tratado (UTC) 50,88 327,2 157,93 Composição de Citro 24 57,35 368,4 151,67 Oxitetraciclina-HCl (24,1 mg/mL); (113% de UTC) (113% de UTC) (96% de UTC) injeção de 20 mL/árvore (0,93g/árvore) + 2-DDG (solução 5,56 mg/mL em água); injeção de 20 mL/árvore (111,1 mg/árvore) Valencia Controle não tratado (UTC) 37,05 239,4 157,92 Composição de Citro 24 47,17 279,9 168,33 Oxitetraciclina-HCl (48,6 mg/mL); (127% de UTC) (117% de UTC) (107% de UTC) injeção de 20 mL/árvore (0,93 g/árvore) + 2-DDG (solução 5,56 mg/mL em água); injeção de 20 mL/árvore (111,1 mg/árvore)
[0719] Elevado rendimento (kg/árvore) foi observado após coinjeção de oxitetraciclina e 2-DDG em relação ao controle não tratado.
Elevado rendimento total foi devido em parte ao elevado número de frutos por árvore (Vernia e Valencia) e ao elevado tamanho de fruto (Valencia).
TABELA 50. INJEÇÃO NO TRONCO DE OXITETRACICLINA (0,48 G POR ÁRVORE) EM COMBINAÇÃO COM 2-DESOXI-D-GLICOSE AUMENTOU RENDIMENTO DE FRUTA 'VERNIA'
EM RELAÇÃO A CONTROLE NÃO TRATADO E OXITETRACICLINA SOZINHA Tratamento Rendimento Rendimento Peso Médio Diâmetro Queda de Médio (kg de Médio Calculado Médio (mm) Fruta Média fruta por (Contagem por Fruta (porcentagem árvore) de Frutos (g) do total por Árvore) de fruta) Controle não tratado 51,33 325,2 162,56 65,64 3,58% (UTC) --- --- --- --- --- Composição de Citro 3 55,17 309,6 178,36 63,33 4,61% Oxitetraciclina-HCl (107% de (95% de (110% de (96% de (∆ + 1,04% (24,1 mg / mL); injeção UTC) UTC) UTC) UTC) para UTC) de 20 --- --- --- --- --- mL/árvore (0,48 g/árvore) Composição de Citro 72,56 478,0 172,4 70,17 3,24% 24 Oxitetraciclina-HCl (141% de (147% de (106% de (107% de (∆ -0,34% (24,1 mg/mL); injeção UTC) UTC) UTC) UTC) para UTC) de 20 132% 154% 97% (111% (∆ -1,37% mL/árvore (0,48 em relação à em relação à em relação em relação à para a g/árvore) Composição Composição à Composição Composição + 2-DDG (5,56 mg/mL 3) 3) Composição 3) 3) de solução em água); 3) injeção de 20 mL/árvore (111,1 mg/árvores
[0720] Elevado rendimento (em comparação com plantas que não foram tratadas ou foram tratadas com oxitetraciclina) foi observado para coinjeção de oxitetraciclina e 2-DDG. Os resultados indicam que um programa de gerenciamento de citros que incluía coinjeção de oxitetraciclina com 2-DDG poderia fornecer, em média, um aumento de 27% em rendimento, aumento de 26% em contagem de frutos e aumento de 2,9% em tamanho de fruto em relação a não tratado (Tabela 49 e Tabela 50). A Tabela 50 acima indica um aumento de 11% no diâmetro de fruto em relação à injeção de oxitetraciclina sozinha, acoplado a uma diminuição de 1,37% em queda de fruto, o que contribui para elevado rendimento.
[0721] Tratamento de coinjeção de oxitetraciclina (0,93 g) com 2- DDG foi testado quanto à capacidade de aumentar a qualidade de suco de
'Vernia' e ‘Valencia'. Os resultados são resumidos na Tabela 51 abaixo.
TABELA 51. INJEÇÃO NO TRONCO DE COMBINAÇÃO DE OXITETRACICLINA COM 2- DESOXI-D-GLICOSE AUMENTOU QUALIDADE DE SUCO DE 'VERNIA' E 'VALENCIA' EM
RELAÇÃO À OXITETRACICLINA SOZINHA Tratamento Valor Brix Razão Brix:CA ‘Vernia’ Composição de Citro 2 Oxitetraciclina-HCl 9,40 19,58 (48,6 mg/mL); injeção 20 mL/árvore (0,93 g/árvore) --- --- Composição de Citro 24 Oxitetraciclina-HCl 9,90 18,68 (48,6 mg/mL); injeção 20 mL/árvore (0,93 g/árvore) (+0,50 em relação a (-0,90 em relação + 2-DDG (solução 5,56 mg/mL em água); injeção de Composição 2) a 20 Composição 2) mL/árvore (111,1 mg/árvore) ‘Valencia’ Composição de Citro 2 Oxitetraciclina-HCl 11,73 10,30 (48,6 mg/mL); injeção 20 mL/árvore (0,93 g/árvore) --- --- Composição de Citro 16 Oxitetraciclina-HCl 12,30 12,42 (48,6 mg/mL); injeção 20 mL/árvore (0,93 g/árvore) (+0,58 em relação a (+2,12 em relação + 2-DDG (solução 5,56 mg/mL em água); injeção de Composição 2) a 20 mL/árvore (62,9 mg/árvore) Composição 2)
[0722] Elevado rendimento (em comparação com plantas que não foram tratadas ou foram tratadas com oxitetraciclina) foi observado para tratamentos coinjetados com oxitetraciclina e 2-DDG. Resultados indicam que um programa de gerenciamento de citros que incluía coinjeção de oxitetraciclina com 2-DDG seria esperado fornecer, em média, um aumento de +0,54 em Brix e um aumento de +0,61 em Razão Brix:CA em relação à injeção de oxitetraciclina sozinha (Tabela 51; média dos resultados de qualidade de suco Valencia e Vernia).
EXEMPLO 17: DEGRADAÇÃO DE POLISSACARÍDEO DE TRATAMENTOS DE ENZIMA DE
RECUPERAÇÃO COM COMPOSTOS INDUTORES PARA USO NO TRATAMENTO DE DOENÇAS DE CITROS
[0723] Combinações de composições de recuperação que foram usadas para restaurar saúde de planta e aumentar rendimento de fruto em árvores de citros infectadas com HLB pela redução de polissacarídeos de calose bloqueadores de floema foram examinadas posteriormente quanto à degradação de polímeros de glucano β-1,3 ligados em ensaios cinéticos. Para demonstrar atividade enzimática, várias β-1,3-D-glucanases (SEQ ID NO: 731, 732, 768, 770, 772, 773, 774, 775, 776) foram testados para atividade em β- 1,3-glucano de Euglena gracilis (Tabela 52) e duas α-amilases (SEQ ID NO: 734, 735) foram testadas quanto à atividade em amido.
[0724] Quantidades de 0,05 g de β-1,3-glucano (resíduos de glicose não ramificada β-1,3 ligados) de Euglena gracilis pesadas e dissolvidas em 8,75 mL de hidróxido de sódio NaOH 2,5 M (CAS#1310-73-2) e diluídas até 10 mL em ácido acético glacial (64-19-7) para trazer o pH para 7. Para cada enzima, 8,0 µL de preparação de enzima foram adicionados, em duplicata, a uma placa de 96 poços, contendo 52 µL de tampão de citrato 50 mM, pH 4,9, ou 300 nL de preparação de enzima diluída em 59,7 µL de tampão citrato 50 mM, pH 4,9, foram adicionados, em duplicata, a uma placa de 96 poços. 80 µL de 5 g/L de β-1,3-glucano de Euglena gracilis em 87,5 g/L de hidróxido de sódio, pH 7 foram adicionados a cada poço e mantidos a uma temperatura consistente de 37°C. Após 30 a 60 minutos, 120 µL de solução de coloração contendo 10 g/L de ácido 3,5-dinitrossalicílico (CAS# 609-99-4), 10 g/L de NaOH (CAS# 1310-73-2), 0,5 g/L Na2SO4 (CAS# 7757-82-6), 2,0 g/L de Fenol (CAS# 108-95-2), 182 g/L de tartarato de potássio sódio (CAS# 6381-59-5) e 0,18 g/L de glicose (CAS# 50-99-7) foram adicionados a cada poço da placa de 96 poços. Com a adição de calor (10 minutos a 99,9°C), a redução do ácido
3,5-dinotrossalicílico para ácido 3-amino-5-nitrossalicílico pela glicose liberada resultou em uma mudança máxima de absorbância da mistura de reação de 375 nm para 540 nm. Absorbâncias a 540 nm (A540) de 200 µL de mistura de reação foram registradas com um espectrofotômetro BioTek. Para análise de dados, o valor A540nm médio 30 ou 60 min. pós-tratamento é relatado (n=2–3 amostras por tratamento) na Tabela 52.
TABELA 52. ENSAIOS DE ATIVIDADE DE GLUCANASE DE Β-1,3-D-GLUCANASES EM Β- 1,3-GLUCANO DE EUGLENA GRACILIS Tratamento A540 Branco subtraído (n=2 replicatas por tratamento) 30 min. pós- A540 tratamento Branco (tratamento simulado) 0,381 0,000 β-1,3-D-glucanase (BglH) de 1,042 0,662 Paenibacillus spp. (SEQ ID NO: 732) β-1,3-D-glucanase (HvGii) de Hordeum 0,426 0,045 vulgare (SEQ ID NO: 731) β-1,3-D-glucanase (LamA1) de 0,448 0,067 Paenibacillus sp. CCRC17245 (SEQ ID NO: 768) β-1,3-D-glucanase (CsPr2) de Citrus 0,394 0,014 sinensis (SEQ ID NO: 770) β-1,3-D-glucanase (DK-1) de 1,284 0,903 Cellulosimicrobium cellulans .DK-1 (SEQ ID NO: 772) β-1,3-D-glucanase (QLK1) de cepa 0,687 0,307 Kitasatospora phosalacinea SYBCQL (SEQ ID NO: 773) β-1,3-D-glucanase (17-W) de 0,734 0,353 Streptomyces sp. SYBC17 (SEQ ID NO: 774) β-1,3-D-glucanase (BglS27) de 0,882 0,501 Streptomyces sp. S27 (SEQ ID NO: 775) β-1,3-D-glucanase (BglM) de Paenibacillus sp 0,716 0,336 IAM1165 (SEQ ID NO: 776)
[0725] Resultados de ensaio de atividade da glucanase (Tabela 52) indicaram que glucanases de várias fontes, incluindo plantas, bactérias gram-negativas e bactérias gram-positivas, têm atividade em β-1,3-glucano de Euglena gracilis, um polímero não ramificado de resíduos de glicose ligados por ligações β-1,3 glicosídicas. Euglena gracilis, um eucarionte, produz um glucano predito ter uma estrutura semelhante à calose encontrada no floema de uma árvore de citros.
[0726] Para testar a compatibilidade entre β-1,3-D-glucanase em uma mistura de enzima de recuperação, uma mistura de tanque de β-1,3-D- glucanase de Hordeum vulgare (SEQ ID NO: 731), L-Cisteína (Tratamento D) e α-amilase de Bacillus licheniformis (Tratamento C) SEQ ID NO: 735) foi comparada (Tabela 53) com β-1,3-D-glucanase sozinha (Tratamento A). A combinação de β-1,3-D- glucanase com L-Cisteína e α-amilase (Tratamento B) foi avaliada para atividade de glucanase que foi especificamente selecionada para modelar coinjeção da mistura de enzima de recuperação em árvores de citros usadas para toranja Ruby Red e laranjas Valencia (Exemplos 3 e 20).
Concentrações de combinação de β-1,3-D-glucanase de Hordeum vulgare com L-Cisteína e α-amilase foram combinadas com concentrações de injeção conforme usadas para a injeção de toranja Ruby Red e laranjas Valencia na Tabela 53. Concentrações finais para β-1,3-D-glucanase de Hordeum vulgare (SEQ ID NO: 731) (33 U/mL); L-cisteína (0,0133 mg/mL) e α-amilase de Bacillus licheniformis (SEQ ID NO: 735) (33 U/mL) em tampão de citrato 50 mM, pH 4,9 foram usadas nos ensaios de atividade de glucanase.
TABELA 53. ENSAIOS DE ATIVIDADE DE GLUCANASE DE Β-1,3-D-GLUCANASE DE
HORDEUM VULGARE USADOS EM COMBINAÇÃO COM COMPOSTOS DE CITROS DE
RECUPERAÇÃO Tratamento A540 Branco Mudança (n=3 replicatas por tratamento) 60 min. pós- subtraído em relação a tratamento A540 Tratamento A Branco (apenas tampão) 0,414 0,000 0,000 X
Tratamento A540 Branco Mudança (n=3 replicatas por tratamento) 60 min. pós- subtraído em relação a tratamento A540 Tratamento A Tratamento A 0,522 0,108 1,0 X β-1,3-D-glucanase de Hordeum vulgare (SEQ ID NO: 731), 33 U/mL Tratamento B 0,514 0,101 0,93X β-1,3-D-glucanase de Hordeum vulgare (SEQ ID NO: 731), 33 U/mL + α-amilase de Bacillus licheniformis (SEQ ID NO: 735), 33 U/mL + L-Cisteína CAS 136743-62-9 0,013 mg/mL Tratamento C 0,383 -0,031 -0,29 X α-amilase de Bacillus licheniformis (SEQ ID NO: 735), 33 U/mL Tratamento D 0,373 -0,041 -0,38 X L-Cisteína CAS 136743-62-9 0,013 mg/mL
[0727] Resultados de ensaio de atividade de glucanase (Tabela 53) indicaram que L-Cisteína, um composto indutor, e α-amilase, um degradador de amido, fornecidos em combinação com a β-1,3-D-glucanase (Tratamento B) resultou em uma resposta de glucanase que foi semelhante à saída de resposta de β-1,3-D-glucanase sozinha (Tratamento A). Além disso, L-Cisteína e α-amilase fornecidas isoladamente (Tratamentos C e D) e em combinação com a β-1,3-D-glucanase (Tratamento B) não mostrou atividade adicional de glucanase sintetizando glicose ou degradando glucanos, mas também não prejudicou significativamente a resposta da β-1,3-D-glucanase e, portanto, são compatíveis na mistura de de enzima de recuperação.
[0728] Para os dados da Tabela 54 abaixo, uma quantidade de 0,1 g de amido (resíduos de glicose não ramificada α-1,4 ligados) de Solanum tuberosum foi suspensa em 1,0 mL de Salina Tamponada com Fosfato (PBS) 10x à temperatura ambiente, pH 6,9 e, então, dissolvida em 9 mL de água fervente. Para Tratamentos A-D, 0,165 nL de preparação de enzima diluída em 1x PBS, pH 6,9 foi adicionado, em triplicata, a uma placa de 96 poços. Para
Tratamentos E–G, 9,4 nL de preparação de enzima em 1x PBS, pH 6,9 foram adicionados, em triplicata, a uma placa de 96 poços. 40 µL de 10 g/L de amido em 1x PBS, pH 6,9 foram adicionados a cada poço e mantidos a uma temperatura consistente de 37°C. Após 10 minutos, 60 µL de solução de coloração contendo 10 g/L de ácido 3,5-dinitrossalicílico (CAS# 609-99-4), 10 g/L de NaOH (CAS# 1310-73-2), 0,5 g/L de Na2SO4 (CAS# 7757-82-6), 2,0 g/L de Fenol (CAS# 108-95-2) e 182 g/L de tartarato de potássio sódio (CAS# 6381-59-5) foram adicionados a cada poço da placa de 96 poços. Com a adição de calor (10 minutos a 99,9°C), a redução do ácido 3,5-dinotrossalicílico para ácido 3-amino-5-nitrossalicílico pela glicose liberada resultou em uma mudança máxima de absorbância da mistura de reação de 375 nm para 540 nm. Absorbâncias a 540 nm (A540) de 100 µL da mistura de reação foram registradas com um espectrofotômetro BioTek. Para análise de dados, o valor médio de A540nm 10 minutos pós-tratamento é relatado (n=2–3 amostras por tratamento).
TABELA 54. ENSAIOS DE ATIVIDADE DE AMILASE DE Β-AMILASE DE BACILLUS
LICHENIFORMIS USADOS EM COMBINAÇÃO COM COMPOSTOS DE CITROS DE
RECUPERAÇÃO Tratamento A540 Branco subtraído Mudança (n=2-3 replicatas por tratamento) 10 min. pós- A540 em relação a tratamento Tratamento A Branco (apenas tampão) 0,184 0,000 0,000 X Tratamento A 0,590 0,406 1,0 X α-amilase de Bacillus licheniformis (SEQ ID NO: 735), 33 U/mL Tratamento B 0,659 0,475 1,17 X β-1,3-D-glucanase de Hordeum vulgare (SEQ ID NO: 731), 33 U/mL + α-amilase de Bacillus licheniformis (SEQ ID NO: 735), 33 U/mL + L-Cisteína CAS 136743-62-9 0,013 mg/mL
Tratamento A540 Branco subtraído Mudança (n=2-3 replicatas por tratamento) 10 min. pós- A540 em relação a tratamento Tratamento A Tratamento C 0,214 0,030 0,07 X β-1,3-D-glucanase de Hordeum vulgare (SEQ ID NO: 731), 33 U/mL Tratamento D 0,207 0,023 0,06 X L-Cisteína CAS 136743-62-9 0,013 mg/mL Tratamento E 0,374 0,190 1,0 X α-amilase de Bacillus subtilis 168 (SEQ ID NO: 734), 60 U/mL + sobrenadante de célula de Bacillus subtilis 168 Tratamento F 0,465 0,281 1,48 X α-amilase de Bacillus subtilis 168 (SEQ ID NO: 734), 60 U/mL + 2-DDG CAS 154-17-6 (6,94 mg/mL) + sobrenadante de célula de Bacillus subtilis 168 Tratamento G 0,257 0,073 0,38 X 2-DDG CAS 154-17-6 6,94 mg/mL + sobrenadante de célula de Bacillus subtilis 168
[0729] Resultados do ensaio de atividade da amilase (Tabela 54) indicaram que L-Cisteína, um composto indutor, e β-1,3-D-glucanase, um degradador de calose, fornecido em combinação com a α-amilase (Tratamento B) resultou em uma elevada resposta da atividade da amilase que foi semelhante à saída de resposta da α-amilase e 2-DDG (Tratamento F). Além disso, L-Cisteína e β-1,3-D-glucanase, fornecidos sozinhos (Tratamentos C e D) e em combinação com a α-amilase (Tratamento B) não mostrou atividade de amilase significativa sintetizando glicose ou degradando amido, mas também não impediu a resposta da α-amilase e são, portanto, considerados compatíveis (Tabela 54).
[0730] Resultados do ensaio de atividade da amilase (Tabela 54) indicaram que 2-DDG, que é usado como um inibidor da calose sintase, fornecido em combinação com α-amilase (Tratamento F), não mostrou atividade de amilase adicional significativa além das adições dos Tratamentos
E e G (p=0,23) (Tratamento G é um açúcar redutor que age no ácido 3,5- dinitrossalicílico, mas não tem atividade enzimática em amido ou outros polissacarídeos). Isto era um resultado esperado, pois 2-DDG, usado para reduzir o teor de calose no floema, não sintetiza glicose ou degrada amido, mas também não impediu a resposta (atividade) da α-amilase e, portanto, é compatível com esta mistura de enzima de recuperação.
[0731] Exemplo 4 (Tabela 34) demonstra como a L-cisteína cisteína auxilia outros ativos a ativar o sistema imune de planta fora da atividade de glucanase e amilase. A Mistura de Enzima de Recuperação descrita no Exemplo 10 (Tabela 42) e Exemplo 17 (Tabelas 53 e 54), descreve uma abordagem sinérgica combinatória para limpar a acumulação de calose (um polímero de β-1,3 glucano) e amido (um polímero de α-1,4-glicose) em floema de citros para melhorar transporte de nutrientes ao mesmo tempo que ajuda a induzir ativação do sistema imune para combater uma infecção por Clas.
EXEMPLO 18: DEGRADAÇÃO DE POLISSACARÍDEO DE Β-1,3-ENDOGLUCANASE PARA
USO NO TRATAMENTO DE DOENÇA FÚNGICA
[0732] Combinações de composições de recuperação que foram usadas para restaurar saúde de planta e aumentar rendimento de fruto em árvores de citros infectadas com HLB pela redução de polissacarídeos de calose bloqueadores de floema foram examinadas posteriormente quanto à degradação de polímeros de glucano β-1,3 ligados em ensaios cinéticos. Para demonstrar atividade enzimática, várias β-1,3-D-glucanases (SEQ ID NO: 731, 732, 767, 772, 773, 774, 775, 776) foram testadas quanto à atividade em carboximetil-pachyman (CM-pachyman) (CAS 69552-83-6), derivado de um 1,3-β-D-glucano do esclerócio de Poria cocos, um fungo que apodrece madeira (Tabela 55). CM-pachyman foi carboximetilado com ácido cloroacético para aumentar a solubilidade em soluções aquosas.
[0733] Uma quantidade de 0,125 g de CM-pachyman de Poria cocos foi dissolvida em 23,5 mL de água, a 90°C e diluída para 25 mL em 0,5 M de tampão de citrato de sódio, pH 4,9. Para cada enzima, 5,0 µL da preparação enzimática foram adicionados, em duplicata, a uma placa de 96 poços, contendo 55 µL de tampão citrato 50 mM, pH 4,9. 80 µL de 5 g/L de CM-pachyman de Poria cocos em tampão de citrato 50 mM, pH 4,9 foram adicionados a cada poço e mantidos a uma temperatura consistente de 37°C.
Após 30 minutos, 120 µL de solução de coloração contendo 10 g/L de ácido 3,5-dinitrossalicílico (CAS# 609- 99-4), 10 g/L de NaOH (CAS# 1310-73-2), 0,5 g/L de Na2SO4 (CAS# 7757-82-6), 2,0 g/L de Fenol (CAS# 108-95-2), 182 g/L de tartarato de potássio sódio (CAS# 6381-59-5) e 0,18 g/L de glicose (CAS# 50-99-7) foram adicionados a cada poço da placa de 96 poços. Com a adição de calor (10 minutos a 99,9°C), a redução do ácido 3,5-dinotrossalicílico para ácido 3-amino-5-nitrossalicílico pela glicose liberada resultou em uma mudança máxima de absorbância da mistura de reação de 375 nm para 540 nm.
Absorbâncias a 540 nm (A540) de 200 µL da mistura de reação foram registradas com um espectrofotômetro BioTek. Para análise de dados, o valor A540nm médio 30 min. pós-tratamento é relatado (n=2 amostras por tratamento).
TABELA 55. ENSAIOS DE ATIVIDADE DE GLUCANASE DE Β-1,3-D-GLUCANASES EM CM-PACHYMAN DE PORIA COCOS Tratamento A540 Branco subtraído A540 (n=2 replicatas por tratamento) 30 min. pós-tratamento Branco (tratamento simulado) 0,350 0,000 -1,3-D-glucanase (HvGii) de Hordeum 0,626 0,276 vulgare (SEQ ID NO: 731) β-1,3-D-glucanase (BglH) de 0,765 0,415 Paenibacillus spp. (SEQ ID NO: 732)
Tratamento A540 Branco subtraído A540 (n=2 replicatas por tratamento) 30 min. pós-tratamento β-1,3-D-glucanase (LamA1) de 0,402 0,052 Paenibacillus sp. CCRC17245 (SEQ ID NO: 767) β-1,3-D-glucanase (DK-1) de 0,853 0,503 Cellulosimicrobium cellulans .DK-1 (SEQ ID NO: 772) β-1,3-D-glucanase (QLK1) de cepa 0,592 0,242 Kitasatospora phosalacinea SYBCQL (SEQ ID NO: 773) β-1,3-D-glucanase (17-W) de 0,556 0,206 Streptomyces sp. SYBC17 (SEQ ID NO: 774) β-1,3-D-glucanase (BglS27) de 0,637 0,287 Streptomyces sp. S27 (SEQ ID NO: 775) β-1,3-D-glucanase (BglM) de Paenibacillus 0,705 0,268 sp IAM1165 (SEQ ID NO: 776)
[0734] Resultados do ensaio de atividade de glucanase (Tabela 55) indicaram que glucanases de várias fontes (β-1,3-D-glucanase listada como SEQ ID Nos: 731, 732, 767, 772, 773, 774, 775 e 776) que incluem glucanases de bactérias gram-negativas e bactérias gram-positivas, têm atividade em CM- pachyman de Poria cocos, um polímero não ramificado de resíduos de glicose ligados por ligações β-1,3 glicosídicas com glucanases de SEQ ID Nos: 732 e 772 tendo as atividades mais altas. Polissacarídeos, incluindo polímeros β-1,3 ligados são um componente chave de paredes celulares de fungos e qualquer das enzimas acima demonstrando atividade degradando polissacarídeos à base de glicose β-1,3 ligados teria atividade na parede celular de fungo e levariam à lise de patógenos fúngicos.
EXEMPLO 19: INJEÇÃO DE TRONCO DE COMPOSIÇÕES ENZIMÁTICAS PROMOTORAS
DE RECUPERAÇÃO AUMENTAM RENDIMENTO DE FRUTA E QUALIDADE DE SUCO EM ÁRVORES DE CITROS INFECTADAS COM CLAS
[0735] Tratamentos como anteriormente descritos no Exemplo 3; B -1,3-Endoglucanase de cevada SEQ ID NO: 731 (Tratamento 1) e Bt.4Q7Flg22 de Bacillus thurigiensis SEQ ID NO: 226 (Tratamento 5)
aumentaram rendimento de fruto (kg/árvore), conforme descrito na Tabela 56.
Qualidade de fruto e qualidade de suco de laranjas ‘Valencia' são descritas na Tabela 57.
TABELA 56. INJEÇÃO DE TRONCO DE COMPOSIÇÕES DE RECUPERAÇÃO AUMENTOU RENDIMENTO DE FRUTAS ‘TORANJA' E ‘VALENCIA' EM RELAÇÃO ÀS ÁRVORES NÃO
TRATADAS Rendimento médio (kg por árvore) (em relação a não Tratado) Tratamento ‘Vermelho ruby’ ‘Valencia’ Média de 2 sítios Sem tratamento 34,6 40,3 --- --- --- Bt.4Q7Flg22 37,2 48,1 (SEQ ID NO: 226) (0,33 mg/árvore) (108%) (119%) (113%) B-1,3-Endoglucanase 38,7 54,8 de Cevada (SEQ ID NO: 731) (2.660 (112%) (136%) (124%) U/árvore) L-Cisteína 34,8 42,3 (0,27 mg/árvore) (101%) (105%) (103%) Mistura de Enzima de 35,1 46,8 Recuperação (109%) B-1,3-Endoglucanase de Cevada (102%) (116%) (SEQ ID NO: 731) (660 U/árvore) + Amilase de Bacillus licheniformis (SEQ ID NO: 735) (660 U/árvore) + Cisteína (0,27 mg/árvore)
[0736] Para comparação direta do tratamento resultados entre toranja ('Ruby Red') e laranja ('Valencia') são referenciados na Tabela 56 acima. Resultados de colheita de experimentos de toranja 'Ruby Red' replicados e descritos individualmente na Tabela 32 indicaram que tratamentos de injeção de tronco individuais para ativar o sistema imune da planta, degradar polissacarídeos em e em torno de elementos de tubo de peneira e fornecer aminoácidos essenciais para respostas de defesa sustentadas (L- cisteína) resultaram em elevado rendimento de fruto. Tabela 56 fornece um sumário dos resultados de colheita de experimentos de toranja “Ruby Red” e experimentos de laranja 'Valencia' e uma média de 2 locais para cada variedade de citros. Em árvores 'Valencia', injeção de Bt.4Q7Flg22 a 0,33 mg por árvore aumentou o rendimento 7,8 kg por árvore em comparação com o controle não tratado (média combinada de 113%), enquanto a enzima degradante da calose β-1-3-endoglucanase de Cevada aumentou o rendimento 14,5 kg por árvore (média de 124% em relação ao controle). Injeção de L- Cisteína a 0,27 por árvore aumentou o rendimento +2,0 kg (média de 103%).
Uma Mistura de Enzima de Recuperação incluindo β,1-3-endoglucanase, Amilase de degradação de amido e L-Cisteína aumentou o rendimento 6,5 kg por árvore em comparação com o controle não tratado (média de 109%) e um programa de gerenciamento de citros incluindo injeção de um ou mais desses componentes em uma faixa de concentrações, seria esperado melhorar a saúde e o rendimento de árvore.
TABELA 57. INJEÇÃO DE TRONCO DE COMPOSIÇÕES DE RECUPERAÇÃO AUMENTOU TAMANHO DE FRUTA ‘VALENCIA' E QUALIDADE DE SUCO EM RELAÇÃO ÀS ÁRVORES
NÃO TRATADAS Tratamento Diâmetro de Fruto Médio (mm) Razão Brix:CA (em relação ao não tratado) (Em relação a não tratado) Sem tratamento 60,13 11,25 Bt.4Q7Flg22 60,72 12,11 (SEQ ID NO: 226) (0,33 (101%) (+0,86) mg/árvore) Tratamento 5 B-1,3-Endoglucanase de 62,76 12,01 Cevada (SEQ ID NO: 731) (104%) (+0,76) (660 U/árvore) Tratamento 1 L-Cisteína 62,52 12,76 (0,27 mg/árvore) (104%) (+1,51)
Tratamento Diâmetro de Fruto Médio (mm) Razão Brix:CA (em relação ao não tratado) (Em relação a não tratado) Mistura de Enzima de 65,57 12,89 Recuperação (109%) (+1,63) B-1,3-Endoglucanase Hordeum vulgare (SEQ ID NO: 731) (660 U/árvore) + Amilase de Bacillus licheniformis (SEQ ID NO: 735) (660 U/árvore) + Cisteína (0,27 mg/árvore)
[0737] Avaliações de qualidade de fruta das laranjas 'Valencia' colhidas na primavera de 2019 indicam que injeção de tronco de Bt.4Q7Flg22 (0,33 mg por árvore), a enzima degradante de calose β,1 -3- endoglucanase de Cevada, L-cisteína, um aminoácido essencial para respostas de defesa sustentadas, e a Mistura de Enzima de Recuperação aumentou o tamanho do fruto e a razão Brixc para Ácido Cítrico (Brix:CA) em relação ao controle não tratado (Tabela 57). De acordo com a Food and Agriculture Organization of the United Nations (FAO), Brix:CA deveria ser de 10-14, com uma meta ideal de 12 para laranjas. Injeção de tronco de Bt.4Q7Flg22, β,1-3-endoglucanase de Cevada, L-cisteína e a Mistura de Enzima de Recuperação resultou em uma razão Brix:CA próxima do valor de alvo para qualidade de fruta.
EXEMPLOS: 20-24:
[0738] Nos Exemplos 20-24, uma série de composições de tratamento foram testadas por injeção de árvore de citro ou pulverização foliar para medir seu efeito em rendimento e qualidade de fruto. Para facilidade de referência, as composições usadas e o método de aplicação e a taxa de uso estão resumidos na Tabela 58 abaixo.
TABELA 58. COMPOSIÇÕES PARA A PREVENÇÃO E O TRATAMENTO DE DOENÇAS DOS
CITROS Composição Formulação Método de Taxa de Uso de # de Nº: Tratamento Aplicação Aplicações (Temporização) Composição de Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: Injeção de 6,875 mL/árvore 1 Aplicação Citros 25 226) 48 ppm tronco (0,33 mg) (Primavera Tampão de Fosfato de 2019) Sódio 4 mM, pH 5,7 Composição de Parte A Injeção de 6,875 mL/árvore 1 Aplicação Citros 26 Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: tronco (0,33 mg) (Primavera 226) 48 ppm 2019) Tampão de Fosfato de Sódio 4 mM, pH 5,7 Parte B Injeção de 2640 Unidades -1,3-endoglucanase de tronco de Enzima por Hordeum vulgare (SEQ ID árvore NO: 731) Composição de Amilase (amyE) Injeção de 92 Unidades de 1 Aplicação Citro de Bacillus subtilis 168 tronco Enzima por (Primavera 27 (SEQ ID NO: 734) árvore 2019) Composição de Parte A Injeção de 92 Unidades de 1 Aplicação Citro 28 Amilase (amyE) tronco Enzima por (Primavera de Bacillus subtilis 168 árvore 2019) (SEQ ID NO: 734) Parte B Injeção de 1,0 mL/árvore 2-Desoxi-D-Glicose (2- tronco (111,1 mg por DDG) (111,1 mg/mL árvore) solução em água) Composição de Parte A Injeção de 1,0 mL/árvore 1 Aplicação Citro 29 2-Desoxi-D-Glicose (2- tronco (111,1 mg por (Primavera DDG) (111,1 mg/mL árvore) 2019) solução em água)
Composição Formulação Método de Taxa de Uso de # de Nº: Tratamento Aplicação Aplicações (Temporização) Parte B Oxitetraciclina-HCl Injeção de 9,3 mL/árvore (94,5 mg/mL de solução em tronco (0,875 g por água) árvore) Composição de Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: Pulverização 12,0 mL/árvore 1 Aplicação Citros 30 226) 120 ppm foliar (1,44 mg) (Primavera Tampão de Sódio Fosfato 2019) 10 mM, pH 5,7 Composição de Parte A Pulverização 12,0 mL/árvore 2 Aplicações Citros 31 Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: foliar (1,44 mg) (Primavera 2019 226) 120 ppm e Outono 2019) Tampão de Sódio Fosfato 10 mM, pH 5,7 Parte B "Osmoprotetor 1" Pulverização 4,21 mL/árvore 12,8 g/L de Betaína HCl + foliar 3,3% (p/v) de fosfato de potássio tribásico Composição de Gm.RHPP (SEQ ID NO: Pulverização 3,0 mL/árvore 1 Aplicação Citro 32 604) foliar (1,5 mg) (Primavera 500 ppm em água 2019) Composição de -1,3-endoglucanase (DK- Injeção de 2.625 Unidades 1 Aplicação Citros 33 1) tronco de Enzima (Outono 2019) de Cellulosimicrobium por árvore cellulans (SEQ ID NO: 760)
[0739] Para os Exemplos 20–24, árvores foram tratadas em três locais separados na Flórida que foram selecionados devido a uma alta prevalência de HLB (ver Exemplos 1, 2, 3). Árvores de toranja Ruby Red de cinco anos de idade (Citrus paradisi) e laranjeiras Hamlin de 5 anos de idade (Citrus sinesis) foram tratadas em Lake Wales, FL (Polk County), e laranjeiras Valencia de 10 anos de idade foram tratadas em Eustis, FL (Condado de Lake). Tratamentos de composição de citros foram aplicados conforme listado na
Tabela 58 usando um dispositivo de injeção de baixa pressão, BRANDT ENTREE para injeção de tronco com métodos descritos no Exemplo 1, ou um pulverizador de mochila pressurizado com CO2 que produzia uma névoa fina para pulverização foliar. Composições foliares diluídas em água com um surfactante não iônico (alquil fenol etoxilato; 0,1% v/v do volume de tanque de pulverização) e aplicadas uniformemente na copa da árvore a uma taxa de pulverização de 3 litros (L) por árvore. Blocos de árvores recebendo um tratamento foliar foram espaçados na área de experimento com uma folga ou uma árvore pulada entre blocos de tratamento para evitar desvio de tratamento para blocos de tratamento vizinhos. Tratamentos foram aplicados durante um período de vento fraco (< 5 mph), e as condições foram tais que todos os tratamentos de pulverização secos em folhas dentro de um período de 4 horas.
Tratamentos de combinação descritos na Tabela 58 com duas partes (A e B) foram coinjetados na mesma bolsa BRANDT ENTREE (Composições de Citros 26, 28 ou 29) ou misturados em tanque no mesmo tanque de tratamento foliar (Composição de Citros 31). Para todos os tratamentos, foram utilizadas 10 árvores por tratamento por local, separadas em dois blocos replicados de cinco árvores cada.
[0740] Para avaliar os efeitos das Composições de Citros 25–33 no título bacteriano CLas, amostras de folhas foram coletadas antes da aplicação (T0) e 8 semanas pós-aplicação (T8) e processadas para PCR quantitativa (qPCR) na Southern Gardens Citrus (Clewiston, FL). Para análise de qPCR, 10 folhas foram coletadas por árvore, distribuídas aleatoriamente sobre a copa da árvore da lavagem endurecida mais recente. Nervuras médias de folhas foram isoladas de cada conjunto de 10 folhas e combinadas em uma única amostra para extração de DNA e análise de qPCR conforme descrito anteriormente no parágrafo [0566] (Métodos para quantificar Título de CLas em uma Planta de Citros Infectada). Valores de Ct para cada amostra de árvore foram usados para calcular o título de CLas por 100 mg de tecido foliar.
Resultados de título de CLas estão resumidos nas Tabelas 60, 65 e 70.
Amostras de folhas foram coletadas novamente em agosto de 2019 em 15 semanas (T15; laranjas Valencia) ou 18 semanas (T18; laranjas Hamlin e toranja Ruby Red) pós-aplicação para análise de teor de nutrientes no University of Florida Institute of Food and Agriculture Sciences (UF IFAS) Extension (Gainesville, FL). Duas amostras foram analisadas por tratamento em cada local, com uma única amostra consistindo em 20 folhas selecionadas aleatoriamente de cada bloco de tratamento (5 árvores por bloco x 4 folhas por árvore = 20 folhas). Um painel completo de nutrientes foi relatado pela UF IFAS Extension, incluindo nitrogênio, fósforo, potássio, ferro, cálcio, cobre, manganês, magnésio, boro e zinco. Teor de nutriente médio selecionado em cada local (N=2 blocos de árvore por tratamento) são relatados nas Tabelas 61, 64, 66, 71 e 72.
[0741] Para avaliar rendimento e qualidade de fruto, laranjas Hamlin e Toranja Ruby Red (Polk County, FL) foram colhidas 7,5 meses pós- tratamento. Todos os frutos com diâmetro maior ou igual a 1,6 polegadas (40 mm) foram colhidos manualmente e coletados para cada árvore. O “Peso de Fruto” total (em quilogramas) por árvore individual foi medido e registrado.
Árvores com peso de fruto total menor ou maior que 2 desvios padrão (2STDEV) da média de experimento foram consideradas ser fora da curva e removidas do conjunto de dados. Tamanho de fruto foi avaliado como o "Peso Médio por Fruto" em gramas (peso de 20 frutos aleatórios por árvore, dividido por 20) e "Diâmetro de Fruto Médio" em milímetros, conforme descrito no Exemplo 1. A “Contagem de Fruto Média” por árvore foi avaliada como o “Peso de Fruto” total dividido pelo “Peso Médio por Fruto”. “Queda de Fruto” foi avaliada como para o Exemplo 1. A qualidade de fruto foi avaliada como para o Exemplo 2, com a exceção de que um conjunto de frutos consistia em 15 frutos no total, cada um correspondendo a uma amostragem de 3 frutos de 5 árvores do mesmo bloco de tratamento experimental. Cada conjunto de 15 frutos foi pesado (grama; g) e depois espremido junto. Rendimento médio,% de queda de fruto, tamanho de fruto e qualidade de suco para cada uma das composições testadas são descritos nos Exemplos 20–24.
EXEMPLOS 20: INJEÇÃO DE TRONCO DE OXITETRACICLINA E 2-DESOXI-D-GLICOSE AUMENTA RENDIMENTO DE FRUTO EM TORANJA 'RUBY RED' E LARANJA 'HAMLIN'
[0742] Resultados de colheita de experimentos replicados de toranja Ruby Red e laranja Hamlin (Tabela 59) indicam que injeção de tronco de Oxitetraciclina-HCl e 2-Desoxi-D-Glicose (2-DDG) juntos aumentou rendimento em 8,5% (kg de fruta fresca) em média em comparação com o controle não tratado. Junto com resultados de rendimento no Exemplo 16 (Tabela 49) para Composição de Citros 24, coinjeção de Oxitetraciclina-HCl e 2-DDG resultou em um aumento médio em rendimento de 14% ao longo de 4 experimentos independentes (Tabela 49: aumento de 13% no rendimento em Laranja 'Vernia' e um aumento de 27% no rendimento de laranja Valencia; Tabela 59: 8% em toranja Ruby Red 'e 9% em laranja 'Hamlin').
TABELA 59. INJEÇÃO NO TRONCO DE OXITETRACICLINA E 2-DESOXI-D-GLICOSE
AUMENTOU RENDIMENTO DE FRUTAS FRESCAS EM CITROS Tratamento Rendimento, kg em média de fruta por árvore (em relação ao controle) Toranja 'Ruby Red' Laranja 'Hamlin' Média Controle não Tratado 32,57 kg 49,4 kg --- Composição de Citro 29 35,20 kg (+8%) 53,8 kg (+9%) 2-Desoxi-D-Glicose (111,1 (+8,5%) mg/árvore) + Oxitetraciclina-HCl (0,875 g/árvore)
EXEMPLOS 21: INJEÇÃO DE TRONCO DE BT.4Q7FLG22 + Β-1,3 ENDOGLUCANASE REDUZ TÍTULO BACTERIANO, MELHORA TEOR DE NUTRIENTES E AUMENTA RENDIMENTO
EM CITROS
[0743] Resultados de qPCR de experimentos de laranja 'Valencia' replicados (Tabela 60) indicam que tratamentos de injeção para ativar o sistema imune da planta e degradar polissacarídeos em e em torno dos elementos de tubo de peneira levam a níveis de título bacteriano CLas 26 diminuídos semanas após aplicação. A injeção de Bt.4Q7Flg22 a 0,33 mg por árvore diminuiu títulos bacterianos em 20% em relação ao controle não tratado, enquanto a combinação incluindo injeção de Bt.4Q7Flg22 junto com a enzima degradadora de calose β,1-3-endoglucanase de Cevada diminuiu títulos bacterianos em 97% em relação ao controle não tratado.
TABELA 60. INJEÇÃO NO TRONCO DE BT.4Q7FLG22 E Β-1,3-ENDOGLUCANASE DIMINUIU TÍTULOS BACTERIANOS DE CLAS EM TORANJA ‘VERMELHO RUBY' INFECTADA COM HLB 26 SEMANAS APÓS APLICAÇÃO Tratamento Título CLas Médio Mudança em Vezes em (número de cópias por 100 mg de Título CLas (T26/T0) tecido foliar) Pré-aplicação 26 semanas após T0 Aplicação (T26) Controle não Tratado 6,23 x 106 7,13 x 106 1,14x Composição de Citros 25 2,51 x 106 2,01 x 106 0,80x Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (0,33 mg/árvore) Composição de Citros 26 3,09 x 105 9,04 x 103 0,03x Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (0,33 mg/árvore) + B-1,3-Endoglucanase de Cevada (SEQ ID NO: 731) (2.660 U/árvore)
[0744] Resultados da análise de nutrientes de experimentos replicados de laranja 'Valencia' e 'Hamlin' (Tabela 61) indicam que coinjeção de
Bt.4Q7Flg22 e β,1-3-endoglucanase aumentaram os níveis de manganês.
Manganês é um micronutriente importante envolvido em metabolismo e fotossíntese em árvores cítricas e a deficiência de manganês pode causar redução de rendimento, tamanho de fruto e crescimento de árvore. Injeção de Bt.4Q7Flg22 a 0,33 mg por árvore aumentou níveis de manganês em uma média de 120% em relação ao controle não tratado, enquanto a combinação incluindo injeção de Bt.4Q7Flg22 junto com a enzima degradante da calose β,1-3-endoglucanase de cevada aumentou os níveis foliares de manganês em uma média de 136% em relação ao controle não tratado.
TABELA 61. INJEÇÃO NO TRONCO DE COMPOSIÇÕES DE RECUPERAÇÃO AUMENTOU NÍVEIS DE MANGANÊS EM LARANJAS 'VALENCIA' E 'HAMLIN' DEFICIENTES EM
MANGANÊS EM RELAÇÃO AO CONTROLE Tratamento Manganês (ppm) (em relação ao não tratado) ‘Valencia’ 'Hamlin' Média Controle não Tratado 6,32 14,18 --- --- --- Composição de Citros 25 Bt.4Q7Flg22 7,54 17,05 (SEQ ID NO: 226) (0,33 mg/árvore) (119%) (120%) (120%) Composição de Citros 26 Bt.4Q7Flg22 9,27 17,62 (SEQ ID NO: 226) (0,33 mg/árvore) (147%) (124%) (136%) + β-1,3-Endoglucanase de Cevada (SEQ ID NO: 731) (2.660 U/árvore)
[0745] Resultados de colheita de experimentos replicados de toranja Vermelho Ruby (Tabela 62) indicam que a injeção no tronco de Bt4Q7Flg22 sozinho na Primavera de 2019 aumentou o rendimento em 14,4% em relação ao controle não tratado. Em um programa de gerenciamento de doenças de citros, incluindo injeção no tronco de Bt4Q7Flg22 (Primavera de 2019) e aplicação foliar (Outono de 2019), o rendimento ainda foi aumentado para 39,7% em relação ao controle não tratado. Injeção no tronco de -1,3- Endoglucanase de C. cellulans para degradar polissacarídeos em e em torno dos elementos do tubo de peneira aumentou o rendimento em 22,4% em relação ao controle não tratado. Com base na redução sinérgica nos títulos de CLas (Tabela 60), tratamentos de combinação entre Bt4Q7Flg22 (Injeção foliar e/ou no Tronco) e -1,3-Endoglucanase (Injeção no Tronco) são preditos fornecerem aumento de rendimento aditivo ou sinérgico e melhora na saúde da árvore.
TABELA 62. INJEÇÃO DE TRONCO DE BT4Q7FLG22 OU Β-1,3-ENDOGLUCANASE
AUMENTOU RENDIMENTO DE FRUTO FRESCO EM ÁRVORES DE TORANJA VERMELHO
RUBY EM RELAÇÃO AO CONTROLE Tratamento Rendimento, kg em média de fruta por árvore (em relação ao controle) Controle não Tratado 32,57 kg Composição de Citros 25 Bt.4Q7Flg22 37,27 kg (SEQ ID NO: 226) (+14,4%) (0,33 mg/árvore) Aplicação na primavera de 2019 Composição de Citros 25 45,49 kg Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (0,33 mg/árvore) (+39,7%) Aplicação na primavera de 2019 + Composição de Citros 30 Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (12 mL/árvore) Aplicação no outono de 2019 Composição de Citros 33 39,85 kg β-1,3-endoglucanase (DK-1) de (+22,4%) Cellulosimicrobium cellulans (SEQ ID NO: 760) (2.625 U/árvore) Aplicação no outono de 2019
[0746] Resultados da qualidade de fruta de experimentos replicados de toranja Vermelho Ruby (Tabela 63) indicam que injeção no tronco de Bt.4Q7Flg22 e β-1,3-Endoglucanase de cevada aumenta tamanho de fruto, conforme medido por um aumento de 11,4% no diâmetro de fruto em relação ao controle e 5,4% de aumento em relação a injeção no trono de Bt.4Q7Flg22 sozinho. Frutos maiores fornecem mais valor para o produtor, com uma caixa de frutas com 40 contagens para Bt.4Q7Flg22 e cotratamento de β-1,3-
Endoglucanase tendo valor mais alto por caixa que a caixa de 56 contagens para Bt.4Q7Flg22 sozinho ou caixa de 64 contagens para o controle não tratado.
TABELA 63. INJEÇÃO NO TRONCO DE BT.4Q7FLG22, SOZINHO OU COM Β-1,3-
ENDOGLUCANASE MELHOROU QUALIDADE DE FRUTO EM ÁRVORES DE TORANJA RUBI
RED EM RELAÇÃO AO CONTROLE Tratamento Diâmetro médio do fruto, mm Contagem de Caixa (em relação ao controle) (Frutos por caixa) Controle não Tratado 89,6 64 contagens Composição de Citros 25 94,7 Bt.4Q7Flg22 56-contagem (SEQ ID NO: 226) (0,33 mg/árvore) (+5,7%) Composição de Citros 26 99,8 Bt.4Q7Flg22 40 contagens + B-1,3-Endoglucanase de Barley (+11,4%) (SEQ ID NO: 731) (2.660 U/árvore) EXEMPLO 22: INJEÇÃO NO TRONCO DE COMPOSIÇÕES DE ENZIMA DE RECUPERAÇÃO
MELHORA TEOR DE MICRONUTRIENTES DA FOLHA
[0747] Resultados da análise de nutrientes de experimentos replicados de toranja ‘Vermelho Ruby' e laranja 'Valencia' e 'Hamlin' (Tabela 64) indicam que tratamentos de injeção degradam polissacarídeos dentro e em torno dos elementos de tubo de peneira e diminuem a produção desses polissacarídeos levam a elevados níveis de ferro e zinco. Ferro é um micronutriente importante envolvido na produção de clorofila em árvores de citros e deficiência de ferro pode causar morte de folhas, rendimento reduzido e qualidade de fruto e suco. Zinco é um micronutriente importante envolvido em metabolismo, fotossíntese e regulação de crescimento de árvores de citros e deficiência de zinco, uma deficiência generalizada de nutrientes nos citros, pode causar floração reduzida, frutificação, tamanho de fruto, qualidade de fruto e teor de suco. Injeção no tronco de Amilase degradadora de amido de
Bacillus subtilis 168 a 92 U por árvore aumentou níveis de ferro e zinco em uma média de 102% e 105% em relação ao controle não tratado, respectivamente, embora a combinação incluindo injeção de Amilase juntamente com 2-DDG, um inibidor da calose sintase, aumentou níveis foliares de ferro e zinco em uma média de 122% e 126% em relação ao controle não tratado, respectivamente.
TABELA 64. INJEÇÃO NO TRONCO DE COMPOSIÇÕES DE RECUPERAÇÃO AUMENTOU
NÍVEIS DE FERRO E ZINCO EM FOLHAS DE CITROS DEFICIENTES EM NUTRIENTES E
MELHOROU A QUALIDADE DE FRUTO DE CITROS EM RELAÇÃO AO CONTROLE Teor de ferro (ppm), Folhas (em relação ao não Tratamento tratado) ‘Vermelho ‘Valencia’ 'Hamlin' Média ruby’ Controle não Tratado 47,52 45,71 57,64 --- --- --- --- Composição de Citros 27 Amilase 56,39 38,70 59,40 (amyE) (102%) de Bacillus subtilis 168 (SEQ ID (119%) (85%) (103%) NO: 734) (92 U/árvore) Composição de Citros 28 Amilase 69,83 50,68 62,75 (amyE) (122%) de Bacillus subtilis 168 (SEQ ID (147%) (111%) (109%) NO: 734) (92 U/árvore) + 2-desoxi-D-glicose (2-DDG) 5,6 mg/mL (111,1 mg/árvore)
Teor de Zinco (ppm), Folhas (em relação ao não Tratamento tratado) ‘Vermelho ‘Valencia’ 'Hamlin' Média ruby’ Controle não Tratado 63,4 10,82 12,87 --- --- --- --- Composição de Citros 27 Amilase 60,37 11,51 14,57 (amyE) (105%) de Bacillus subtilis 168 (SEQ ID (95%) (106%) (113%) NO: 734) (92 U/árvore) Composição de Citros 28 Amilase 71,18 12,10 19,94 (amyE) (126%) de Bacillus subtilis 168 (SEQ ID (112%) (112%) (155%) NO: 734) (92 U/árvore) + 2-desoxi-D-glicose (2-DDG) 5,6 mg/mL (111,1 mg/árvore) Peso de fruto médio, gramas (em relação ao não tratado) ‘Vermelho ruby’ 'Hamlin' Média Tratamento Controle não Tratado 297,3 155,8 Composição de Citros 27 299,8 170,6 (+5%) Amilase (amyE) de Bacillus subtilis 168 (SEQ ID NO: 734) (+1%) (+9%) (92 U/árvore) Composição de Citros 28 Amilase 306,1 215,2 (amyE) (+3%) (38%) (+21%) de Bacillus subtilis 168 (SEQ ID NO: 734) (92 U/árvore) + 2-desoxi-D-glicose (2-DDG) 5,6 mg/mL (111,1 mg/árvore)
[0748] Níveis elevados de micronutrientes de ferro e zinco em folhas amostradas de árvores injetadas com Amylase e 2-DDG foram preditos terem um impacto positivo na qualidade de fruto na colheita. Frutos Toranja 'Ruby Red' e 'Hamlin ”foram colhidos de árvores não tratadas, injetadas com Amilase e injetadas com Amilase + 2-DDG. Resultados de qualidade de fruto (Tabela 64) indicam que injeção no tronco de tratamentos para degradar polissacarídeos dentro e em torno de elementos de tubo de peneira e diminuir a produção desses polissacarídeos levam a elevado peso de fruto, conforme medido por um aumento médio de 5% da aplicação de amilase degradadora de amido de Bacillus subtilis 168 a 92 U por árvore. Injeção de amilase junto com
2-DDG, um inibidor da calose sintase, aumentou o peso de fruto em média 21% em relação ao controle.
EXEMPLO 23: A APLICAÇÃO FOLIAR DE BT4Q7FLG22 E OSMOPROTETORES DIMINUI TÍTULO BACTERIANO, MELHORA O TEOR DE NUTRIENTES E AUMENTA RENDIMENTO EM
CITROS
[0749] Resultados de qPCR de experimentos replicados de laranja 'Valencia' (Tabela 65) indicam que tratamentos foliares para ativar o sistema imune da planta e proteger a planta de tensão abiótica levam à títulos bacterianos de CLas diminuídos. Ao longo do curso de tempo de 8 semanas, títulos bacterianos de CLas no controle não tratado aumentaram 491% em comparação com os níveis iniciais, ao passo que títulos bacterianos em árvores tratadas com pulverizaão de Bt.4Q7Flg22 foram reduzidos em 16% em comparação com níveis iniciais. Um efeito sinérgico foi observado quanto a tratamento com ambos Bt.4Q7Flg22 + Osmoprotetor 1, para o qual uma redução de 90% em títulos de CLas foi observada em comparação com os títulos bacterianos iniciais.
[0750] Osmoprotetor 1 (Composição de citros 31) contém Betaína, também conhecida como trimetilglicina, que é um aminoácido de ocorrência natural que é utilizado pelas plantas para manter pressão osmótica dentro de células. Betaína aplicada foliarmente é absorvida pelas plantas através do estoma e é utilizada por plantas para manter um gradiente osmótico para manter água dentro dos tecidos e para minimizar a perda de vapor de água durante transpiração. Osmoprotetor 1 também contém adicionalmente potássio, que é um micronutriente essencial para crescimento da planta e necessário para formação de flores e frutos. Potássio aplicado foliarmente também é usado pela planta para ajudar a fechar o estoma sob condições estressantes, tal como seca ou tensão de calor, e auxilia na movimentação de nutrientes pela planta através de regulação e assistência em osmose.
TABELA 65. APLICAÇÃO FOLIAR DE COMPOSIÇÕES DE CITROS INCLUINDO BT4Q7FLG22 E OSMOPROTETORES DIMINUIU TÍTULOS BACTERIANOS CLAS EM 'VALENCIA' INFECTADA COM HLB 8 SEMANAS APÓS APLICAÇÃO EM RELAÇÃO AO
CONTROLE Título CLas Médio Mudança em Vezes Tratamento (número de cópias por 100 mg de em tecido foliar) Título CLas Pré-aplicação (T0) 8 Semanas Após (T8/T0) Aplicação (T8) Controle não Tratado 6,06 x 105 3,58 x 106 5,91x Composição de Citros 30 1,85 x 105 1,56 x 105 0,84x Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (12 mL/árvore) Composição de Citros 31 1,08 x 106 1,04 x 105 0,10x Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (12 mL/árvore) + Osmoprotetor 1 (4,21 mL/árvore)
[0751] Resultados de análise de nutrientes de experimentos replicados de citros (Tabela 66) indicam que tratamentos foliares para ativar o sistema imune da planta e proteger a planta de tensão abiótica levam a elevados níveis de cálcio. Cálcio é um nutriente essencial que tem papéis importantes em divisão celular, desenvolvimento de raízes, crescimento de plantas e no rendimento de frutos em árvores de citros. Em média, pulverização de Bt.4Q7Flg22 a 12 mL/árvore aumentou os níveis de cálcio em 0,8% em relação ao controle, embora a combinação incluindo Bt.4Q7Flg22 e Osmoprotetor 1 aumentou níveis foliares de cálcio em 4,6% em relação ao controle.
TABELA 66. APLICAÇÃO FOLIAR DE COMPOSIÇÕES DE CITROS INCLUINDO BT4Q7FLG22 E OSMOPROTETOR AUMENTOU NÍVEIS DE CÁLCIO EM ÁRVORES DE
CITROS EM RELAÇÃO AO CONTROLE Tratamento % de cálcio (p/p) (em relação ao controle) Laranja 'Hamlin' Toranja ‘Rubi Red' Média Controle de Surfactante 2,53 2,20 2,37 --- --- --- Composição de Citros 30 2,64 2,14 2,39 Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (104,3%) (97,3%) (100,8%) (12 mL/árvore) Composição de Citros 31 2,71 2,25 2,48 Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (107,1%) (102,3% (104,6%) (12 mL/árvore) + Osmoprotetor 1 (4,21 mL/árvore)
[0752] Resultados da colheita de experimentos replicados de laranja Hamlin e toranja Vermelho Ruby (Tabela 67) indicam que tratamento foliar de Bt.4Q7Flg22 e Osmoprotetores leva a elevado rendimento por árvore (kg de fruta fresca). Em média, o cotratamento com Bt.4Q7Flg22 (12 mL/árvore) e Osmoprotetor 1 aumentaram rendimento em 21% em relação às árvores de controle e 10% em relação a Bt.4Q7Flg22 (12 mL/árvore) sozinho.
Assim, tratamentos de combinação de Bt.4Q7Flg22 e Osmoprotetores são preditos promoverem elevado rendimento aditivo ou sinérgico.
TABELA 67. APLICAÇÃO FOLIAR DE BT.4Q7FLG22 E OSMOPROTETORES
AUMENTARAM O RENDIMENTO DE FRUTO FRESCO EM ÁRVORES DE LARANJA HAMLIN E
TORANJA RUBI RED EM RELAÇÃO AO CONTROLE Rendimento, Média de libras de frutos por Tratamento árvore (em relação ao controle) Laranja Toranja Média Hamlin Rubi Red Controle de Surfactante 39,31kg 50,75 kg --- --- --- Composição de Citros 30 45,62 kg 53,32 kg (+11%) Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (+16%) (+5%) (12 mL/árvore) Composição de Citros 31 51,57 kg 56,53 kg (+21%) Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (+31%) (+11%) (12 mL/árvore) + Osmoprotetor 1 (4,21 mL/árvore)
[0753] Resultados de qualidade de fruto de experimentos replicados de laranja Hamlin e toranja Rubi Red (Tabela 68) indicam que rendimento elevado (Tabela 68) após tratamento foliar com Bt.4Q7Flg22 e Osmoprotetor 1 é devido em parte a elevado tamanho de fruto (diâmetro e peso) e retenção de fruto (contagem de frutos colhidos mais alta, frutos caídos pré-colheita reduzidos) em comparação com o controle.
TABELA 68. APLICAÇÃO FOLIAR DE BT.4Q7FLG22 E OSMOPROTETOR MELHORARAM
QUALIDADE E RETENÇÃO DE FRUTO EM ÁRVORES DE LARANJA HAMLIN E TORANJAS
RUBI RED EM RELAÇÃO AO CONTROLE Diâmetro médio do fruto, mm (em Peso médio do fruto, gramas (em Tratamento relação ao controle) relação ao controle) Laranja Toranja Média Laranja Toranja Média Hamlin Rubi Red Hamlin Rubi Red Controle de 66,4 91,3 --- 144,5 329,0 --- Surfactante Citro 69,0 95,6 166,1 341,0 Composição 31 (+4.3%) (+9,3%) Bt.4Q7Flg22 (+3,9%) (+4,7%) (+14,9%) (+3,6%) (SEQ ID NO: 226) (12 mL/árvore) + Osmoprotetor 1 (4,21 mL/árvore) Contagem Média de Fruto por % Média de Queda de Fruto (em Tratamento Árvore (em relação ao controle) relação ao controle) Laranja Toranja Média Laranja Toranja Média Hamlin Rubi Red Hamlin Rubi Red Tensoativo 271 151 --- 6,0% 11,7% --- Controle Citro 314 165 --- 4,2% 10,4% --- Composição 31 Bt.4Q7Flg22 (+15,9%) (+9,3%) (+12,6%) (-29,1%) (-10,4%) (-19,7%) (SEQ ID NO: 226) (12 mL/árvore) + Osmoprotetor 1 (4,21 mL/árvore)
[0754] Resultados de qualidade de suco de experimentos replicados de laranja Hamlin e toranja Rubi Red (Tabela 69) indicam que tratamento foliar de Bt.4Q7Flg22 e Osmoprotetor 1 levam a um aumento do volume médio de suco por fruta, Razão Brixc:Ácido cítrico e libras-sólidos por árvore. A Razão é um indicador de bom sabor e alta qualidade de suco. De acordo com padrões USDA, a Razão ideal varia de 15,0–20,5 para suco de laranja e de 7,0–16,0 para suco de toranja. Na indústria de citros, uma Razão mais alta é aceita para dar um suco de melhor sabor. Em média em comparação com o controle, tratamento foliar combinado de Bt4Q7Flg22 e Osmoprotetor 1 aumenta o volume de suco por fruta em 33%, Razão Brixc:Ácido cítrico em 10% e libras-sólidos por árvore em 25%.
TABELA 69. APLICAÇÃO FOLIAR DE BT.4Q7FLG22 E OSMOPROTETOR MELHOROU QUALIDADE E RENDIMENTO DE SUCO EM ÁRVORES DE TORANJAS ‘VERMELHO RUBY'
EM RELAÇÃO AO CONTROLE Tratamento Volume de Suco Médio por Fruta, mL (em relação ao controle) Laranja Hamlin Toranja Vermelha Média Rubi Controle de Surfactante 45 mL 110 mL --- Composição de Citros 31 55 mL 159,2 mL (+45%) (+33%) Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: (+22%) 226) (12 mL/árvore) + Osmoprotetor 1 (4,21 mL/árvore) Tratamento Brixc médio: Razão de Ácido Média de libras-sólidos por Cítrico (em relação a controle) árvore (em relação ao controle) Laranja Toranja Média Laranja Toranja Média Hamlin Rubi Red Hamlin Rubi Red Controle de Surfactante 17,2 5,9 --- 2,49 3,42 --- Composição de Citros 31 17,9 6,9 3,13 4,24 Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: (+4%) (+17%) (+10%) (+26%) (+24%) (+25%) 226) (12 mL/árvore) + Osmoprotetor 1 (4,21 mL/árvore) EXEMPLO 24: APLICAÇÃO FOLIAR DE GMRHPP MELHORA SAÚDE E RENDIMENTO DE
ÁRVORES DE CITROS
[0755] Resultados de qPCR de experimentos replicados de laranja Valencia (Tabela 70) indicam que tratamento foliar de GmRHPP leva à diminuição do título bacteriano de CLas 8 semanas após a aplicação. Ao longo do curso de tempo de 8 semanas, os títulos bacterianos CLas em árvores de controle não tratadas aumentaram 491% em comparação com níveis iniciais, ao passo que os títulos bacterianos em árvores tratadas com GmRHPP foram reduzidos em 17% em comparação com níveis iniciais.
TABELA 70. APLICAÇÃO FOLIAR DE GMRHPP DIMINUIU TÍTULOS BACTERIANOS DE CLAS EM VALENCIA INFECTADA COM HLB 8 SEMANAS APÓS APLICAÇÃO EM RELAÇÃO
AOS CONTROLES Tratamento Título CLas Médio Mudança em (número de cópias por 100 mg de Vezes em Título tecido foliar) CLas (T8/T0) Pré-aplicação T0 8 Semanas Após Aplicação (T8) Controle não Tratado 6,06 x 105 3,58 x 106 5,91 Composição de Citros 33 7,44 x 105 6,17 x 105 0,83 GmRHPP (SEQ ID NO: 604) (1,5 mg/árvore) (3,0 mL/árvore)
[0756] Resultados de análise de nutriente de experimentos replicados de laranja Valencia e toranja Rubi Red (Tabela 71) indicam que tratamento foliar com GmRHPP leva a níveis de ferro elevados nas folhas.
Ferro é um micronutriente importante necessário para produção de clorofila em folhas e deficiência de ferro pode causar a morte das folhas de citros, rendimento reduzido e qualidade de fruto e suco reduzidos. GmRHPP pulverizado a uma taxa de 3,0 mL/árvore por árvore aumentou os níveis de ferro foliares em uma média de 28% em relação ao não tratado.
TABELA 71. APLICAÇÃO FOLIAR DE GMRHPP AUMENTOU NÍVEIS DE FERRO EM
ÁRVORES DE LARANJA VALENCIA E TORANJA VERMELHO RUBY DE BAIXO FERRO EM
RELAÇÃO AO CONTROLE Ferro, ppm (em relação a não tratado) Tratamento Laranja Toranja Média Hamlin Rubi Red Controle não Tratado 40,14 42,17 41,17 --- --- --- Composição de Citros 33 48,09 57,56 52,83 GmRHPP (SEQ ID NO: 604) (120%) (136%) (128%) (3,0 mL/árvore)
[0757] Resultados de análise de nutrientes de experimentos replicados de laranja Valencia e Hamlin e toranja Vermelho Ruby (Tabela 72) indicam que tratamento foliar de GmRHPP leva a elevados níveis de boro nas folhas. Boro é um micronutriente importante envolvido em metabolismo, crescimento, transporte de nutriente, floração, frutificação e regulação hormonal de árvores de citros. Deficiência de boro, que está associada a HLB, pode causar clorose e desfolhamento foliar, rendimento reduzido e tamanho e qualidade de fruto reduzidos. Pulverização de GmRHPP a 3,0 mL/árvore por árvore aumentou níveis deboro foliares em uma média de 12% em relação ao não tratado em três experimentos.
TABELA 72. APLICAÇÃO FOLIAR DE GMRHPP AUMENTOU NÍVEIS DE BORO EM ÁRVORES DE LARANJA VALENCIA, LARANJA HAMLIN E TORANJA RUBY RED EM
RELAÇÃO AO CONTROLE Boro, ppm (em relação a não tratado) Tratamento Laranja Laranja Toranja Média Hamlin Hamlin Rubi Red Controle não Tratado 104,61 106,75 80,26 97,21 --- --- --- --- Composição de Citros 33 119,31 123,79 84,48 109,19 GmRHPP (SEQ ID NO: 604) (114%) (116%) (105%) (112%) (3,0 mL/árvore)
[0758] Resultados da colheita de experimentos replicados de laranja Hamlin e toranja Vermelho Ruby (Tabela 73) indicam que tratamento foliar de GmRHPP leva a elevado rendimento por árvore (kg de fruta fresca).
Em média, árvores tratadas com GmRHPP aumentam rendimento em 13,9% em relação às árvores de controle tratadas apenas com controle de surfactante.
TABELA 73. APLICAÇÃO FOLIAR DE GMRHPP AUMENTOU RENDIMENTO DE FRUTO
FRESCO EM ÁRVORES DE LARANJA HAMLIN E TORANJA VERMELHO RUBY EM RELAÇÃO
AO CONTROLE Tratamento Rendimento, kg em média de fruta por árvore (em relação ao controle) Laranja Toranja Média Hamlin Rubi Red Controle de Surfactante 39,31 kg 50,75 kg --- Composição de Citros 33 46,05 kg 56,18 kg GmRHPP (SEQ ID NO: 604) (+17,1%) (+10,7%) (+13,9%) (3,0 mL/árvore)
[0759] Resultados de colheita de experimentos replicados de laranja Hamlin e toranja Rubi Red (Tabela 74) indicam que tratamento foliar de GmRHPP leva a elevada contagem de frutos por árvore e diminuição de queda de frutos. Em média, árvores tratadas com GmRHPP retêm 19% mais frutos na colheita, com uma diminuição observada de 22% na queda de frutos em relação às árvores de controle tratadas apenas com o controle de surfactante.
TABELA 74. APLICAÇÃO FOLIAR DE GMRHPP MELHOROU RETENÇÃO DE FRUTO EM
ÁRVORES DE LARANJA HAMLIN E TORANJA VERMELHO RUBY EM RELAÇÃO AO
CONTROLE Tratamento Rendimento, contagem média Queda de fruta,% média (em de frutos por árvore relação ao controle) (em relação ao controle) Laranja Toranja Média Laranja Toranja Média Hamlin Rubi Red Hamlin Rubi Red Controle de Surfactante 271 151 --- 6,0% 11,7% --- Composição de Citros 33 297 193 --- 5,2% 8,2% --- GmRHPP (SEQ ID NO: (+10%) (+28%) (+19%) (-14%) (-30%) (-22%) 604) (3,0 mL/árvore)
[0760] Resultados de qualidade de fruto de experimentos replicados de laranja Hamlin e toranja Vermelho Ruby (Tabela 75) indicam que tratamento foliar de GmRHPP não teve nenhum efeito sobre o tamanho do fruto e leva a elevado peso de fruto (densidade). Em média, frutos colhidos de árvores tratadas com GmRHPP pesam 6,2% a mais do que frutos colhidos de árvores de controle tratadas apenas com surfactante.
TABELA 75. APLICAÇÃO FOLIAR DE GM RHPP MELHOROU QUALIDADE DE FRUTO EM
ÁRVORES DE LARANJA HAMLIN EM RELAÇÃO AO CONTROLE Tratamento Diâmetro médio do fruto, Peso médio da fruta, gramas mm (em relação ao controle) (em relação ao controle) Controle de Surfactante 66,4 144,5 Composição de Citros 33 65,9 153,3 GmRHPP (SEQ ID NO: 604) (-0,7%) (+6,1%) (3,0 mL/árvore)
[0761] Resultados de qualidade de suco de experimentos replicados de laranja Hamlin e toranja Vermelho Ruby (Tabela 76) indicam que tratamento foliar de GmRHPP leva a uma elevada razão Brixc:Áido Cítrico e elevadas libras-sólidos por árvore. Em média, o suco colhido de árvores de citros tratadas com GmRHPP produzem 13,5% mais açúcar total que árvores de controle tratadas apenas com surfactante.
TABELA 76. APLICAÇÃO FOLIAR DE GM RHPP MELHOROU QUALIDADE DE SUCO E
RENDIMENTO EM ÁRVORES DE LARANJA HAMLIN E ÁRVORES DE TORANJA RUBY RED
EM RELAÇÃO AO CONTROLE Tratamento Brixc médio: Razão de Ácido Média de libras-sólidos por Cítrico árvore (em relação ao controle) (em relação ao controle) Laranja Toranja Média Laranja Toranja Média Hamlin Rubi Red Hamlin Rubi Red Controle de Surfactante 17,2 5,9 --- 2,49 3,42 --- Composição de Citros 33 17,9 6,9 2,97 3,71 GmRHPP (SEQ ID NO: 604) (+4%) (+16%) (+10%) (+19%) (+8%) (+13,5%) (3,0 mL/árvore) EXEMPLO 25: APLICAÇÃO DE ENZIMAS QUITINASE E GLUCANASE PARA PREVENÇÃO DO CRESCIMENTO DE MOFO FULIGINOSO (FUNGOS ASCOMYCETE) EM KIWIS
[0762] Enzimas β-1,3-D-glucanases (SEQ ID NO: 732 e SEQ ID NO: 772) e endoquitinase (SEQ ID NO: 777) foram investigadas quanto à sua capacidade para prevenir crescimento de mofo fuliginoso em kiwis. O fungo ascomiceto Cladosporium cladosporioides foi cultivado em ágar V8 (um meio contendo esterol que permite o crescimento e a visualização de características morfológicas do fungo) por 6 dias no escuro para induzir esporulação. Kiwis (Actinidia deliciosa) foram marcados para designar áreas para tratamentos de pulverização e inoculação com o fungo. Tratamentos enzimáticos compreendendo: -1,3 endoglucanase (espécie Paenibacillus; SEQ ID NO: 732), -1,3 endoglucanase (Cellulosimicrobium cellulans DK1; SEQ ID NO: 772) e endoquitinase (Bacillus thuringiensis ChiC; SEQ ID NO: 767) foram usados em aplicações de pulverização. Tratamentos por spray foram preparados com 0,1% de surfactante não iônico (alquil fenol etoxilato) e ajustados para formulações enzimáticas finais consistindo em 10% (v/v) ou 33% (v/v) usando água. Os tratamentos de pulverização de enzima foram comparados a um controle apenas de surfactante não iônico 0,1% (o mesmo descrito acima sem adição de enzima). Para cada tratamento, 3 kiwis foram colocados em uma toalha de papel e as áreas marcadas foram pulverizadas quatro vezes com cada um dos tratamentos. A fruta foi, então, deixada secar antes de aplicar os esporos do mofo.
[0763] Um aplicador de algodão estéril foi mergulhado em caldo V8 e usado para coletar os esporos de mofo C. cladosporioides molde da placa de ágar V8. Esporos de mofo foram, então, aplicados ao kiwi tratado com as enzimas e o controle de surfactante conforme descrito acima. Um volume de 40 µL de caldo V8 contendo os esporos de mofo foi aplicado a 6 pontos marcados em cada um de 3 kiwis. Os esporos foram espalhados nos esporos marcados para cada fruta. Cada tratamento também foi comparado a um controle sem mofo. Para cada tratamento, os 3 kiwis foram colocados em um saco Ziplock com as manchas de esporos voltadas para cima e incubados em uma câmara de crescimento com 60% de umidade, um ciclo de luz natural e ~25°C por 6 dias.
[0764] Após 6 dias, imagens de cada kiwi foram tiradas. Cada fruta foi avaliada quanto à descoloração escurecida ou crescimento de mofo óbvio (manchas difusas, filamentosas ou carregadas de esporos) dentro das 6 manchas em comparação com os arredores não inoculados. Nos 6 pontos designados em cada kiwi, o crescimento de mofo foi determinado para um total de N=18 pontos por tratamento.
[0765] No primeiro experimento (Tabela 78), β-1,3-endoglucanase (SEQ ID NO: 732) e endoquitinase (SEQ ID NO: 777) foram expressos como enzimas imobilizadas em uma matriz de proteína. O tratamento com β-1,3- endoglucanase (SEQ ID NO: 732) reduziu o crescimento de mofo para 61%, em relação ao controle apenas com surfactante, enquanto endoquitinase (SEQ ID NO: 778) reduziu o crescimento para 83% do controle. O tratamento combinado com ambas as enzimas β-1,3-endoglucanase (SEQ ID NO: 732) e endoquitinase (SEQ ID NO: 777) resultou em crescimento de mofo reduzido até 78% do controle. No segundo experimento (Tabela 79), uma β-1,3- endoglucanase (SEQ ID NO: 772) foi expressa como uma enzima livre e combinada com endoquitinase (SEQ ID NO: 777) expressa como uma enzima imobilizada. Neste experimento, a β-1,3-endoglucanase (SEQ ID NO: 772) aplicada sozinha reduziu crescimento de mofo em 85% em comparação com o tratamento de controle de surfactante. A combinação de enzima livre β-1,3- endoglucanase (SEQ ID NO: 772) e endoquitinase imobilizada (SEQ ID NO: 777 reduziu crescimento de mofo para 29% do controle. Assim, o tratamento de combinação de enzima livre -1,3-endoglucanase (SEQ ID NO: 772) e endoquitinase imobilizada (SEQ ID NO: 777) teve um benefício geral maior em redução de crescimento de mofo que o tratamento com a enzima β-1,3- endoglucanase (SEQ ID NO: 760) quando aplicada sozinha.
TABELA 78. APLICAÇÃO DE ENZIMA IMOBILIZADA PARA PREVENÇÃO DE CRESCIMENTO
DE MOFO FULIGINOSO EM FRUTA KIWI Tratamento (taxa de pulverização Manchas de Porcentagem de de 10%) crescimento de mofo crescimento de mofo em observadas (de 18 relação ao controle apenas inoculadas) de surfactante Controle apenas de surfactante 18 - Controle negativo (sem mofo) 0 0% Enzima imobilizada de β-1,3- 11 61% endoglucanase (bglH) Paenibacillus (SEQ ID NO: 732) Enzima imobilizada de Endoquitinase 15 83% (ChiC) Bacillus thuringiensis (SEQ ID NO: 777)) Enzima imobilizada de β-1,3- 14 78% endoglucanase (bglH) Paenibacillus (SEQ ID NO: 732) + Enzima imobilizada de Endoquitinase (ChiC) Bacillus thuringiensis (SEQ ID NO: 777) TABELA 79. APLICAÇÃO DE ENZIMAS LIVRES PARA PREVENÇÃO DE CRESCIMENTO DE
MOFO FULIGINOSO EM FRUTA KIWI Tratamento (taxa de pulverização de Manchas de Porcentagem de 33%) crescimento de mofo crescimento de mofo em observadas (de 18 relação ao controle (apenas inoculadas) mofo) Controle apenas de surfactante 14 - β-1,3-endoglucanase (DK-1) 12 85% Cellulosimicrobium cellulans (SEQ ID NO: 772) β-1,3-endoglucanase (DK-1) 4 29% Cellulosimicrobium cellulans (SEQ ID NO: 772) + Endoquitinase (ChiC) Enzima imobilizada de Bacillus thuringiensis (SEQ ID NO: 777)
EXEMPLO 26: APLICAÇÃO FOLIAR DE FLG22-PSA E SERINA PROTEASE EM KIWIS PROTEGE PLANTAS DE PSEUDOMONAS SYRINGAE PV. ACTINIDIAE (PSA-V)
[0766] Pseudomonas syringae pv. actinidiae (PSA) é um patógeno de planta devastador causando cancro bacteriano de plantas de kiwi de polpa verde (Actinidiae deliciosa) e de polpa amarela (Actinidiae chinesis) em todas as zonas de produção de kiwi, causando severas perdas de colheita na Nova Zelândia, China e Itália. PSA-V coloniza as superfícies externas e internas da planta de kiwi formando biofilmes que promovem virulência e podem se espalhar pelos tecidos do xilema e do floema. Sintomas de doença de PSA-V em kiwi incluem mancha foliar bacteriana, cancro bacteriano do tronco, exudatos vermelhos, podridão das flores, descoloração de galhos e, finalmente, dieback das vinhas do kiwi. O método padrão de controle para PSA-V atualmente emprega aplicações foliares frequentes de cobre metálico em videiras de kiwi que é predito levar à seleção da forma resistente a cobre do patógeno e à perda de controle da doença. Novos métodos de controle são urgentemente necessários. Para avaliar a eficácia de Flg22-PSA (SEQ ID NO: 540) e Serina Protease 2 de Bacillus subtilis (SEQ ID NO: 795) para controle de PSA-V, um experimento de doença de kiwi em vasos foi conduzido na área de Bay of Plenty de Te Puka, Nova Zelândia. Flg22-PSA (SEQ ID NO: 540) ativa o sistema imune inato do kiwi para restringir crescimento bacteriano e progressão de sintomas, e Serina Protease 2 (SEQ ID NO: 795) interrompe formação de biofilme, diminuindo assim virulência bacteriana. Hidróxido de cobre foi incluído no experimento como um padrão comparativo da indústria para controle de PSA-V. Antes da inoculação, plantas “Hayward” Actinidiae deliciosa de kiwi em vaso livres de sintomas de PSA-V foram distribuídas uniformemente entre 6 grupos de tratamento (Tabela 80), com 12 plantas em vasos por grupo. Tratamentos foram aplicados conforme descrito na Tabela 80, com aplicações de Flg22-PSA (SEQ ID NO: 540) antes da inoculação com PSA-V para iniciação de defesas de planta e aplicações de Serina Protease 2 (SEQ ID NO: 795) 48 horas após inoculação para prevenção da formação de biofilme de PSA-V e quebra de biofilmes existentes. Todos os tratamentos foram aplicados com surfactante não iônico para penetração da cutícula foliar através do estoma.
TABELA 80. TRATAMENTOS APLICADOS A EXPERIMENTO DE KIWI EM VASO Tratamento Formulação Foliar* Diluição do produto Temporização Inóculo para aplicação em spray 1 Não infectado (sem PSA-V) --- --- Nenhuma 2 Sem tratamento --- --- PSA-V 3 ChampION++TM (46,1% 0,9 g 1 dia antes PSA-V Hidróxido de cobre; 30% ChampION++TM Inoculação cobre metálico /L água com PSA-V equivalente) 4 Flg22-PSA (SEQ ID NO: 4 mL/L de água 1 dia antes da PSA-V 540) 100 µM; inoculação Tampão de Sódio Fosfato 10 com PSA- mM, pH 5,7 V 5 Serine Protease 2 [SEQ ID 20 mL/L de água Pós PSA-V NO: 795] inoculação em Filtrado de caldo de plantas fermentação com enzima secas imobilizada 6 Flg22-PSA (SEQ ID NO: 4 mL/L de água 1 dia antes da PSA-V 540) 100 µM; inoculação Tampão de Sódio Fosfato 10 + com PSA-V mM, pH 5,7 20 mL/L de água + + Pós- Serine Protease 2 [SEQ ID inoculação em NO: 795] plantas secas Filtrado de caldo de fermentação com enzima imobilizada * As composições foliares continham 0,1% (v/v) de conservante Proxel™ BC, uma dispersão aquosa de uma mistura de 1,2-benzisotiazolina (BIT) 330,7 mM, 5-cloro-2-metil-4- isoltiazolina-3-ona (CMIT) 53,5 mM e 2-metil-4-isotiazolin-3-ona (MIT) 26,1 mM. Composições foliares foram diluídas até as concentrações indicadas em água (g/L de água ou mL/L de água) com 0,05% (v/v) de surfactante não iônico Contact Xcel TM (980 g/L de álcool etoxilado linear). Os produtos diluídos foram aplicados em gotículas finas com um pulverizador de mochila pressurizado em toda a copa de cada planta, até que esteja completamente coberta
[0767] 24 horas após os tratamentos iniciais, todas as plantas,
exceto para os controles não infectados, foram pulverizadas com 1 x 10 8 cfu/mL de inóculo de PSA-V usando um pulverizador pressurizado portátil de
5L dirigido para a parte inferior das folhas até completamente cobertas.
O controle não infectado foi pulverizado apenas com água.
Plantas envasadas foram, então, transportadas para Pukehina e colocadas em uma área com nebulização aérea por 48 horas para simular condições ambientais para infecção por PSA-V, com plantas de controle não infectadas separadas de plantas infectadas.
Após 48 horas, um subconjunto de plantas foi, então,
removido da área de nebulização e deixado secar brevemente antes da aplicação de Serina Protease 2 (SEQ ID NO: 795). Após os tratamentos finais,
todas as plantas foram movidas para seu sítio de experimento externo final,
posições aleatórias em Pukehina.
A temperatura média diária no sítio de experimento era de 20,75°C com uma precipitação total de 277 mm ao longo de 34 dias.
Adicionalmente, cada planta foi regada duas vezes por dia por duas horas de cada vez por irrigação por gotejamento.
Condições ambientais foram favoráveis à progressão de sintomas da doença PSA-V.
Plantas foram monitoradas visualmente durante todo o período de experimento para avaliações de doença de PSA-V, com o mesmo avaliador registrando a% da área foliar coberta de manchas em 6 dias após inoculação (6 DAI), 16 DAI, 23
DAI e 29 DAI.
Adicionalmente, cada planta foi avaliada quanto a efeitos de fitotoxicidade de tratamento em 29 DAI em uma escala de 0 a 10, com 0 = sem fitotoxicidade em folha e 10 = sintomas de fitotoxicidade em folha muito severos.
Os escores de doença médios em 6, 16, 23 e 29 DAI e o escore de fitotoxicidade em 29 DAI são relatados nas Tabelas 81 e 81 para cada tratamento (n=12 plantas por tratamento). Valores P foram calculados para cada tratamento vs. o controle não tratado.
TABELA 81. APLICAÇÕES FOLIARES DE FLG22-PSA E SERINA PROTEASE 2 REDUZEM SIGNIFICATIVAMENTE SINTOMAS DA DOENÇA PSA-V EM PLANTAS DE KIWI Grupo de tratamento Folhagem Afetada (% de área de superfície foliar); #/Formulação foliar valores p vs. controle não tratado 6 DAI 16 DAI 23 DAI 29 DAI Tratamento 1 0,00% 1,66% 7,89% 18,14% Plantas não infectadas Tratamento 2 15,12% 40,36% 54,64% 67,82% Controle não Tratado Tratamento 3 3,23% 12,48% 16,57% 25,20% ChampION++TM (p<0,001) (p<0,001) (p<0,001) (p<0,001) Tratamento 4 7,31% 29,41% 45,97% 61,91% Flg22-PSA (SEQ ID NO: 540) (p<0,001) (p=0,013) (p=0,085) (p=0,190) Tratamento 5 3,28% 20,26% 42,76% 64,90% Serine Protease 2 (SEQ ID NO: (p<0,001) (p<0,001) (p=0,019) (p=512) 795) Tratamento 6 5,85% 20,01% 35,51% 53,52% Flg22-PSA (SEQ ID NO: 540) (p<0,001) (p<0,001) (p<0,001) (p=0,002) + Serine Protease 2 (SEQ ID NO: 722)
[0768] A aplicação de Flg22-PSA (SEQ ID NO: 540) ou Serina Protease 2 (SEQ ID NO: 795) por si só reduziu significativamente sintomas de mancha foliar de PSA-V (P<0,1; intervalo de confiança de 90%) em 6, 16 e 23 DAI em comparação com o controle não tratado. Combinação de pré- tratamento de Flg22-PSA e tratamento pós-inóculo de Serina Protease 2 diminuiu ainda mais a severidade da mancha foliar em comparação com qualquer tratamento sozinho em 16, 23 e 29 DAI e prolonga o período de proteção significativa para 29 DAI (35,4% menos mancha foliar em comparação com controle não tratado; P=0,002). Em conclusão, Flg22-PSA e Serina Protease 2 podem ser usados como tratamentos autônomos e em combinação com outros tratamentos que visam restringir o crescimento de patógeno.
Embora o padrão da indústria ChampION++TM, que é o tratamento contendo cobre usado atualmente para tratar PSA, cause fitotoxicidade de folha suave (escore AVE = 1,6), nenhuma fitotoxicidade significativa foi observada para Tratamentos 4-6 (Tabela 82).
TABELA 82. APLICAÇÕES FOLIARES DE FLG22-PSA E SERINA PROTEASE 2 NÃO
CAUSAM FITOTOXICIDADE FOLIAR DE PLANTAS DE KIWI Grupo de tratamento #/Formulação Escore de Fitotoxicidade Médio foliar (0–10); 29 DAI Tratamento 1 0,0 (±0,0) Plantas não infectadas Tratamento 2 0,0 (±0,0) Controle não Tratado Tratamento 3 1,6 (±0,9) ChampION++TM Tratamento 4 0,1 (±0,3) Flg22-PSA (SEQ ID NO: 540) Tratamento 5 0,0 (±0,0) Serine Protease 2 (SEQ ID NO: 795) Tratamento 6 0,0 (±0,0) Flg22-PSA (SEQ ID NO: 540) + Serina Protease 2 (SEQ ID NO: 795)
[0769] Em vista do acima, será visto que os vários objetos da invenção são alcançados e outros resultados vantajosos são alcançados.
[0770] Como várias mudanças poderiam ser feitas nos polipeptídeos, organismos recombinantes, métodos e sementes acima sem afastamento do escopo da invenção, pretende-se que toda a matéria contida na descrição acima seja interpretada como ilustrativa e não em um sentido limitante.
MODALIDADES
[0771] Para ilustração adicional, modalidades adicionais não limitativas da presente divulgação são estabelecidas abaixo.
[0772] Modalidade 1 é uma composição para iniciação bioativa de uma planta ou uma parte de planta para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta e/ou melhorar a qualidade de uma fruta, suco obtido de uma fruta ou uma colheita obtida de uma planta ou parte de planta, caracterizada pelo fato de que a composição compreende (A) pelo menos um polipeptídeo de iniciação bioativo e um composto indutor; ou (B) pelo menos dois polipeptídeos de iniciação bioativos, opcionalmente, com um composto indutor; (C) um inibidor da calose sintase e pelo menos um composto indutor compreendendo um bactericida, um aminoácido, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou derivado ou sal do mesmo, um ácido dicarboxílico ou derivado ou sal do mesmo, uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol ou qualquer combinação dos mesmos; ou (D) um bactericida e pelo menos um composto indutor compreendendo ácido β amino butírico (BABA), uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol, ácido salicílico, ácido oxálico ou qualquer combinação dos mesmos, em que: o polipeptídeo ou os polipeptídeos de (A) ou (B) compreendem: (i) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina; ou (ii) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso (iii) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP); ou (iv) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso (RI
RHPP); ou (v) uma tionina ou um polipeptídeo tipo tionina; ou (vi) um polipeptídeo de glucanase; ou (vii) um polipeptídeo de serina protease; ou (viii) um polipeptídeo ACC desaminase (1-aminociclopropano-1- carboxilato desaminase); ou (ix) uma amilase; ou (x) uma quitinase; ou (xi) qualquer combinação dos mesmos; com as condições de que: o composto indutor compreende um inibidor da calose sintase, ácido β-amino butírico (BABA), uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol, ácido salicílico, ácido oxálico ou qualquer combinação dos mesmos quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo de grupos (i)-(v) mas não polipeptídeos dos grupos (vi) a (x); e o composto indutor compreende um bactericida, um aminoácido ou isômero do mesmo, um inibidor da calose sintase, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou um derivado do mesmo, um ácido dicarboxílico ou um derivado do mesmo, uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol ou qualquer combinação dos mesmos quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo dos grupos (vi) para (x); e a composição compreende o composto indutor e o composto indutor compreende um inibidor da calose sintase, ácido β-amino butírico (BABA), uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol, ácido salicílico, ácido oxálico ou qualquer combinação dos mesmos quando os dois ou mais polipeptídeos de (B) compreendem polipeptídeos dos grupos (i)-(v), mas não polipeptídeos dos grupos (vi) a (x).
[0773] Modalidade 2 é um peptídeo isolado para iniciação bioativa de uma planta ou parte da planta para aumentar o crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e / ou vigor de uma planta ou parte da planta e / ou diminuir o estresse abiótico no planta ou parte da planta e / ou protege a planta ou parte da planta de doenças, insetos e / ou nematóides e / ou aumenta a resposta imune inata da planta ou da parte da planta e / ou altera a arquitetura da planta, em que o peptídeo compreende a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOs: 732, 735, 746-755 e 757-778; ou o peptídeo consiste na sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOs: 732, 735, 745-778.
[0774] Modalidade 3 é um peptídeo da modalidade 2, em que a sequência de aminoácido do peptídeo compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 747, 758, 767-769, 771, 772, 773, 775 e 778; ou a sequência de aminoácido do peptídeo consiste em qualquer uma de SEQ ID NOs: 747, 758, 767–769, 771, 772, 773, 775 e 778.
[0775] Modalidade 4 é um peptídeo da modalidade 2, em que a sequência de aminoácido do peptídeo compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 746-750, 757-761, 767-776 e 778; ou a sequência de aminoácido do peptídeo consiste em qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 746-750, 757-761, 767-776 e 778.
[0776] Modalidade 5 é um peptídeo da modalidade 2, em que a sequência de aminoácido do peptídeo compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 746-755, 757-776 e 778 ou a sequência de aminoácido do peptídeo consiste em qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 746-755, 757-776 e 778.
[0777] Modalidade 6 é um peptídeo da modalidade 2, em que a sequência de aminoácido do peptídeo compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 735, 746-755, 757-778 ou a sequência de aminoácido do peptídeo consiste em qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 735, 746-755, 757-778.
[0778] Modalidade 7 é uma composição para iniciação bioativa de uma planta ou uma parte de planta para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta e/ou melhorar a qualidade de uma fruta, suco obtido de uma fruta ou uma colheita obtida de uma planta ou parte de planta, em que a composição compreende bixafen e pelo menos um polipeptídeo livre compreendendo: (i) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina; ou (ii) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso (iii) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP); ou (iv) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso (RI RHPP); ou (v) uma tionina ou um polipeptídeo tipo tionina; ou (vi) um polipeptídeo de glucanase; ou (vii) um polipeptídeo de serina protease; ou (viii) um polipeptídeo ACC desaminase (1-aminociclopropano-1- carboxilato desaminase); ou (ix) uma amilase; ou (x) uma quitinase; ou (xi) qualquer combinação dos mesmos; em que o polipeptídeo livre não está ligado a um exosporium de um membro da família Bacillus cereus ou um esporo do membro da família Bacillus cereus intacto.
[0779] Modalidade 8 é uma composição da modalidade 7, em que o polipeptídeo livre compreende o polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP), o polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro-inverso (RI-RHPP), a quitinase, o pilipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, a glucanase, a serina protease ou qualquer combinação dos mesmos.
Modalidade 9 é uma composição da modalidade 8 em que uma sequência de aminoácido do polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP) compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 604, 606, 607 e 745-755; uma sequência de aminoácido do polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro-inverso de raiz compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 605 e 756-766; uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende qualquer uma de SEQ ID NO: 226 ou 571; uma sequência de aminoácido da glucanase compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 e 767-778; uma sequência de aminoácido da quitinase compreende SEQ ID NO: 777 ou 778; e/ou uma sequência de aminoácido da serina protease compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 721, 722 e 794-796.
Modalidade 10 é uma composição de qualquer uma das modalidades 7 a 9, em que o polipeptídeo livre compreende o polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP).
[0780] Modalidade 11 é um método para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou parte de planta e/ou proteger a planta ou parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta, o método compreendendo aplicar uma composição ou um peptídeo isolado a uma planta, parte de planta ou um meio de crescimento de planta no qual a planta ou parte de planta será cultivada, ou uma rizosfera em uma área circundando a planta ou parte de planta para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e ou vigor da planta ou parte de planta e/ou proteger a planta ou parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou parte de planta, em que o peptídeo isolado compreende: uma β-1,3 glucanase e a β-1,3 glucanase é injetada no tronco da planta cítrica; ou o polipeptídeo isolado de qualquer uma das modalidades 2 a
6; e a composição compreende: uma β-1,3 glucanase, ou a composição da modalidade 1 ou de qualquer uma das modalidades 7 a 10.
[0781] Modalidade 12 é um método para aumentar teor de suco e/ou melhorar teor de suco, açúcar ou ácido e/ou melhorar uma razão Brix:ácido de suco obtido de uma planta, o método caracterizado pelo fato de que compreende aplicar uma composição ou um polipeptídeo isolado à planta ou parte de planta, ou meio de crescimento de planta no qual a planta será cultivada, ou uma rizosfera em uma área circundando a planta ou parte de planta para aumentar teor de suco e/ou melhorar o teor de suco, açúcar ou ácido e/ou melhorar uma razão brix:ácido do suco obtido da planta ou parte de planta, em que o polipeptídeo isolado compreende: uma β-1,3,glucanase e a β- 1,3 glucanase é injetada no tronco da planta; ou o polipeptídeo isolado de qualquer uma das modalidades 2 a 6; e a composição compreende a composição de qualquer uma das modalidades 7 a 9 ou (A) pelo menos um polipeptídeo e um composto indutor; (B) pelo menos dois polipeptídeos, opcionalmente, com um composto indutor; (C) um inibidor da calose sintase e pelo menos um de um composto indutor compreendendo um bactericida, um aminoácido ou isômero do mesmo, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou derivado ou sal do mesmo, um ácido dicarboxílico ou derivado ou sal do mesmo, um benzotiadiazol, uma betaína, uma prolina ou qualquer combinação das mesmas; ou (D) um bactericida e pelo menos um de um composto indutor compreendendo um aminoácido ou isômero do mesmo, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou derivado ou sal do mesmo, um ácido dicarboxílico ou derivado ou sal do mesmo, um benzotiadiazol, uma betaína, um prolina ou qualquer combinação das mesmas, em que: o polipeptídeo ou os polipeptídeos de (A) ou (B) compreendem: (i) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina; ou (ii) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso (iii) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP); ou (iv) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso (RI RHPP); ou (v) uma tionina ou um polipeptídeo tipo tionina; ou (vi) um polipeptídeo de glucanase; ou (vii) um polipeptídeo de serina protease; ou (viii) um polipeptídeo ACC desaminase (1-aminociclopropano-1- carboxilato desaminase); (ix) uma amilase; ou (x) uma quitinase; ou (xi) qualquer combinação das mesmas.
[0782] Modalidade 13 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 12, em que a composição compreende pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, pelo menos uma proteína de ligação a pelo de raiz, pelo menos uma tionina ou polipeptídeo tipo tionina, pelo menos um polipeptídeo de glucanase, pelo menos um polipeptídeo de serina protease, pelo menos um polipeptídeo de ACC desaminase, pelo menos uma amilase, pelo menos uma quitinase ou qualquer combinação dos mesmos.
[0783] Modalidade 14 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 8, em que a composição compreende pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina.
[0784] Modalidade 15 é uma composição ou um método da modaliade 14, em que o polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina é modificado quimicamente em seu N ou C terminal. Modalidade 16 é uma composição ou um método das modalidades 14 ou 15, em que o polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina é modificado via reticulação ou ciclização.
[0785] Modalidade 17 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 14 a 16, em que o polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina é de uma bactéria do gênero Bacillus, uma Lysinibacillus, uma Paenibacillus, uma Aneurinibacillus ou qualquer combinação das mesmas.
Modalidade 18 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 14 a 17, em que uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 226, 1–225, 227–375, 526, 528, 530, 532, 534, 536, 538, 540, 541, 571– 585, 587 e 589–603.
[0786] Modalidade 19 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 14 a 18, em que uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 1-75, ou qualquer combinação das mesmas.
[0787] Modalidade 20 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 14 a 19, em que o polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende um polipeptídeo truncado N-terminal e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo truncado N-terminal compreende SEQ ID NO: 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 109, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154,156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 172, 174, 176, 178, 180, 182,184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 208, 210, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 224, 590, ou qualquer combinação das mesmas.
[0788] Modalidade 21 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 14 a 20, em que o polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende um polipeptídeo C-terminal truncado e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo C-terminal truncado compreende
SEQ ID NO: 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 167, 169, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 201, 203, 205, 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225 ou qualquer combinação das mesmas.
[0789] Modalidade 22 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 14 a 21, em que a sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 226, 289, 290, 291, 293, 294, 295, 300, 437, 526, 532, 534, 536, 538,
[0790] 540, 571-585 e 587-603 ou qualquer combinação das mesmas.
[0791] Modalidade 23 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 14 a 22, em que a sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 226, 293, 295, 300, 540, 571–579 e 589–590, ou qualquer combinação dos mesmos.
[0792] Modalidade 24 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 14 a 23, em que a sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende a SEQ ID NO: 226, 571 ou qualquer combinação das mesmas.
[0793] Modalidade 25 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 14 a 24, em que uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 591–603.
[0794] Modalidade 26 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 14 a 25, em que a sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 226-300, ou qualquer combinação das mesmas.
[0795] Modalidade 27 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 14 a 26, em que a sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende SEQ ID NO:
226.
[0796] Modalidade 28 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 14 a 26, em que a sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 301-375 e 587 ou qualquer combinação das mesmas.
[0797] Modalidade 29 é uma composição ou um método da modalidade 28, em que a sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende SEQ ID NO: 301.
[0798] Modalidade 30 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 14 a 29, em que o polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina é incorporado em um polipeptídeo não flagelina ou associado à flagelina ou proteína de comprimento total, em que a incorporação do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina resulta em elevada atividade de iniciação bioativa no polipeptídeo não flagelina ou associado à flagelina ou proteína de comprimento total.
[0799] Modalidade 31 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 30, em que a composição compreende pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso.
[0800] Modalidade 32 é uma composição ou um método da modalidade 31, em que a composição compreende pelo menos um polipeptídeo Flg22 retro inverso.
[0801] Modalidade 33 é uma composição ou um método da modalidade 32, em que uma sequência de aminoácido do polipeptídeo Flg22 retro inverso compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 376-450, 527, 531,
533, 535, 537 e 539.
[0802] Modalidade 34 é uma composição ou um método de qualquer uma de modalidades 31 a 33, em que a composição compreende pelo menos um polipeptídeo FlgII-28 retro inverso.
[0803] Modalidade 35 é uma composição ou um método da modalidade 34, em que uma sequência de aminoácido do polipeptídeo FlgII-28 retro inverso compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 451-525 ou 588.
[0804] Modalidade 36 é uma composição ou um método de qualquer uma de modalidades 31 a 35, em que a composição compreende pelo menos um polipeptídeo Flg15 retro inverso.
[0805] Modalidade 37 é uma composição ou um método da modalidade 36, em que uma sequência de aminoácido do polipeptídeo FlgII-28 retro inverso compreende SEQ ID NOs: 529 ou 586.
[0806] Modalidade 38 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 37, em que a composição compreende pelo menos um RHPP.
[0807] Modalidade 39 é uma composição ou um método da modalidade 38 em que uma sequência de aminoácido do RHPP compreende qualquer uma de SEQ ID Nos: 604, 607, 608 e 745-755.
[0808] Modalidade 40 é uma composição ou um método da modalidade 38 ou 39, em que a sequência de aminoácido do RHPP compreende SEQ ID NO: 604.
[0809] Modalidade 41 é uma composição ou um método da modalidade 1 e 7 a 40, em que a composição compreende pelo menos um RHPP RI.
[0810] Modalidade 42 é uma composição ou um método da modalidade 41 em que uma sequência de aminoácido do RHPP RI compreende qualquer uma de SEQ ID Nos: 605, 609, 610 e 756-766.
[0811] Modalidade 43 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 42, em que a composição compreende pelo menos um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina.
[0812] Modalidade 44 é uma composição ou um método da modalidade 43, em que uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de tionina ou tipo tionina compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 620-719.
[0813] Modalidade 45 é uma composição ou um método da modalidade 43 ou 44, em que a sequência de aminoácido do polipeptídeo de tionina ou tipo tionina compreende SEQ ID NO: 620.
[0814] Modalidade 46 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 43 a 45, em que o polipeptídeo de tionina ou tipo tionina é fundido a uma sequência de direcionamento de floema para formar um polipeptídeo de fusão.
[0815] Modalidade 47 é uma composição ou um método da modalidade 46 em que uma sequência de aminoácido do floema ou uma sequência de alvo de floema compreende qualquer uma de SEQ ID NO: 611- 619 ou qualquer combinação das mesmas.
[0816] Modalidade 48 é uma composição ou um método da modalidade 46 ou 47, em que a sequência de aminoácido do floema ou sequência de alvo de floema compreende a SEQ ID NO: 611.
[0817] Modalidade 49 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 46 a 48, em que o polipeptídeo de fusão tem uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 720.
[0818] Modalidade 50 é uma composição ou um método das modalidades 1 e 7 a 49, em que a composição compreende pelo menos um polipeptídeo de glucanase.
[0819] Modalidade 51 é uma composição ou um método da modalidade 50, em que uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de glucanase compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 e 767-776.
[0820] Modalidade 52 é uma composição ou um método da modalidade 50 ou 51, em que pelo menos um polipeptídeo de glucanase compreende uma β-1,3-glucanase.
[0821] Modalidade 53 é uma composição ou um método da modalidade 52, em que a sequência de aminoácido do polipeptídeo de β-1,3- glucanase compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 e 767-776.
[0822] Modalidade 54 é uma composição ou um método da modalidade 53, em que a sequência de aminoácido do polipeptídeo de β-1,3- glucanase compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733.
[0823] Modalidade 55 é uma composição ou um método da modalidade 53, em que a sequência de aminoácido do polipeptídeo de β-1,3- glucanase compreende a SEQ ID NO: 732.
[0824] Modalidade 56 é uma composição ou um método da modalidade 53, em que a sequência de aminoácido da β-1,3-glucanase compreende SEQ ID NO: 772.
[0825] Modalidade 57 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 56, em que a composição compreende pelo menos um polipeptídeo de quitinase.
[0826] Modalidade 58 é uma composição ou um método da modalidade 57, em que uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de quitinase compreende SEQ ID 777 ou SEQ ID NO: 778.
[0827] Modalidade 59 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 58, em que a composição compreende pelo menos um polipeptídeo de amilase.
[0828] Modalidade 60 é uma composição ou um método da modalidade 59, em que a sequência de aminoácido do polipeptídeo de amilase compreende SEQ ID NO: 734 ou SEQ ID NO: 735.
[0829] Modalidade 61 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 50 a 60, em que a composição compreende pelo menos dois polipeptídeos de glucanase, amilase e/ou quitinase.
[0830] Modalidade 62 é uma composição ou um método da modalidade 61, em que a composição compreende uma β-1,3 glucanase e uma amilase.
[0831] Modalidade 63 é uma composição ou um método da modalidade 61, em que a composição compreende uma β-1,3-glucanase e uma quitinase.
[0832] Modalidade 64 é uma composição ou um método das modalidades 1 e 7 a 63, em que a composição compreende pelo menos um polipeptídeo de serina protease.
[0833] Modalidade 65 é uma composição ou um método da modalidade 64 em que uma sequência do polipeptídeo de serina protease compreende qualquer uma de SEQ ID Nos: 721, 722 ou 794-796.
[0834] Modalidade 66 é uma composição ou um método da modalidade 64 ou 65, em que a sequência de aminoácido do polipeptídeo de serina protease compreende SEQ ID NO: 722 ou 795.
[0835] Modalidade 67 é uma composição ou um método da modalidade 64 ou 65, em que a sequência de aminoácido do polipeptídeo de serina protease compreende SEQ ID NO: 794 ou 796.
[0836] Modalidade 68 é uma composição ou um método da modalidade 1 e 7 a 67, em que a composição compreende pelo menos um polipeptídeo de ACC desaminase.
[0837] Modalidade 69 é uma composição ou um método da modalidade 68 em que uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de ACC desaminase compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 723-730.
[0838] Modalidade 70 é uma composição ou um método da modalidade 69, em que a sequência de aminoácido da ACC desaminase compreende SEQ ID NO: 730.
[0839] Modalidade 71 é uma composição ou um método de qualquer uma de modalidades 1 e 7 a 70, em que a composição compreende um polipeptídeo compreendendo ainda uma sequência de núcleo.
[0840] Modalidade 72 é uma composição ou um método da modalidade 71, em que a sequência de núcleo compreende qualquer uma de SEQ IDs 591-603.
[0841] Modalidade 73 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 a 7 a 72, em que pelo menos um do polipeptídeo de (A) ou dos polipeptídeos de (B) compreende um polipeptídeo que contém uma modificação química; é uma variante tendo uma inserção, deleção, inversão, repetição, duplicação, extensão ou substituição de aminoácido dentro do aminoácido; é parte de uma proteína de fusão; ou contém uma sequência de reconhecimento de protease.
[0842] Modalidade 74 é uma composição ou um método da modalidade 73, em que a modificação química compreende acetilação, adição de ácido, acilação, ADP-ribosilação, adição de aldeído, adição de alquilamida, amidação, aminação, biotinilação, adição de carbamato, adição de clorometil cetona, fixação covalente de um nucleotídeo ou derivado de nucleotídeo, reticulação, ciclização, formação de ligação dissulfeto, desmetilação, adição de éster, formação de reticulações covalentes, formação de ligações dissulfeto cisteína-cisteína, formação de piroglutamato, formilação, gama-carboxilação, glicosilação, formação de âncora de GPI, adição de hidrazida, adição de ácido hidroxâmico, hidroxilação, iodação, adição de lipídio, metilação, miristoilação, oxidação, PEGuilação, processamento proteolítico, fosforilação, prenilação, palmitoilação, adição de um marcador de purificação, adição de piroglutamil, racemização, selenoilação, adição de sulfonamida, sulfatação, adição mediada por RNA de transferência de aminoácidos a proteínas, ubiquitinação ou adição de ureia.
[0843] Modalidade 75 é uma composição ou um método da modalidade 73 ou 74, em que a modificação química compreende uma modificação N terminal ou uma modificação C terminal.
[0844] Modalidade 76 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 73 a 75, em que a modificação química compreende acetilação, amidação, reticulação ou ciclização.
[0845] Modalidade 77 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 73 a 76, em que a substituição de aminoácido dentro do aminoácido da variante compreende a substituição de um β- aminoácido, um D-aminoácido ou um aminoácido não natural.
[0846] Modalidade 78 é uma composição ou um método de qualquer uma de modalidades 73 a 77, em que a composição compreende o polipeptídeo de fusão.
[0847] Modalidade 79 é uma composição ou um método da modalidade 78, em que o polipeptídeo de fusão compreende um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina ou um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro-inverso e um polipeptídeo de assistência.
[0848] Modalidade 80 é uma composição ou um método da modalidade 79, em que o polipeptídeo de assistência compreende um polipeptídeo de assinatura e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de assinatura compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 542-548, ou qualquer combinação das mesmas.
[0849] Modalidade 81 é uma composição ou um método da modalidade 80, em que o polipeptídeo de assistência compreende um polipeptídeo de assinatura e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de assinatura compreende SEQ ID NO: 542.
[0850] Modalidade 82 é uma composição ou um método da modalidade 79, em que o polipeptídeo de assistência compreende um polipeptídeo de triagem de âncora de sinal e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de triagem de âncora de sinal compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 549-562, ou qualquer combinação das mesmas.
[0851] Modalidade 83 é uma composição ou um método da modalidade 82, em que o polipeptídeo de assistência compreende um polipeptídeo de triagem de âncora de sinal e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de triagem de âncora de sinal compreende SEQ ID NO: 549.
[0852] Modalidade 84 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 83, em que a composição compreende um polipeptídeo compreendendo ainda uma sequência de núcleo compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs: 591-603, e em que a inclusão da sequência de núcleo no polipeptídeo aumenta a atividade de iniciação bioativa da composição.
[0853] Modalidade 85 é uma composição ou um método de qualquer uma de modalidades 1 e 7 a 84, em que a composição compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 70% de identidade para qualquer uma de SEQ ID NOs. 1–735, 745–787 e 794–797 e a composição tem atividade de iniciação bioativa.
[0854] Modalidade 86 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 85, em que a composição compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 75% de identidade para qualquer uma de SEQ ID NOs. 1–735, 745–787 e 794–797 e a composição tem atividade de iniciação bioativa.
[0855] Modalidade 87 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 86, em que a composição compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 80% de identidade para qualquer uma de SEQ ID NOs. 1–735, 745–787 e 794–797 e a composição tem atividade de iniciação bioativa.
[0856] Modalidade 88 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 87, em que a composição compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 85% de identidade para qualquer uma de SEQ ID NOs. 1–735, 745–787 e 794–797 e a composição tem atividade de iniciação bioativa.
[0857] Modalidade 89 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 88, em que a composição compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 90% de identidade para qualquer uma de SEQ ID NOs. 1–735, 745–787 e 794–797 e a composição tem atividade de iniciação bioativa.
[0858] Modalidade 90 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 89, em que a composição compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 95% de identidade para qualquer uma de SEQ ID NOs. 1–735, 745–787 e 794–797 e a composição tem atividade de iniciação bioativa.
[0859] Modalidade 91 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 90, em que a composição compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 98% de identidade para qualquer uma de SEQ ID NOs. 1–735, 745–787 e 794–797 e a composição tem atividade de iniciação bioativa.
[0860] Modalidade 92 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 91, em que a composição compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 99% de identidade para qualquer uma de SEQ ID NOs. 1–735, 745–787 e 794–797 e a composição tem atividade de iniciação bioativa.
[0861] Modalidade 93 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 92, em que a composição compreende ainda um aminoácido ou isômero do mesmo, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou derivado ou sal do mesmo, um ácido dicarboxílico ou derivado ou sal do mesmo, um benzodiatiazol, uma betaína, uma prolina, um bactericida, um inibidor da calose sintase ou qualquer combinação dos mesmos.
[0862] Modalidade 94 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 93, em que a composição compreende um aminoácido e o aminoácido compreende cisteína, ácido β-amino butírico (BABA) ou combinações dos mesmos.
[0863] Modalidade 95 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 94, em que a composição compreende um ácido benzoico substituído e o ácido benzoico substituído compreende ácido salicílico ou derivados ou sais do mesmo.
[0864] Modalidade 96 é uma composição ou um método de qualquer uma de modalidades 1 e 7 a 95, em que a composição compreende ácido dicarboxílico e o ácido dicarboxílico compreende ácido oxálico ou derivados ou sais do mesmo.
[0865] Modalidade 97 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 96, em que a composição compreende um benzodiatiazol.
[0866] Modalidade 98 é uma composição ou um método da modalidade 97, em que o benzotiazol compreende S-metil éster de ácido benzo (1,2,3)-tiadiazol-7-carbotioico.
[0867] Modalidade 99 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 98, em que a composição compreende uma betaína, um homólogo de betaína ou análogo de betaína.
[0868] Modalidade 100 é uma composição ou um método da modalidade 99, em que a betaína compreende glicina betaína, glicina betaína aldeído, β-alanina betaína, cloridrato de betaína, cetil betaína, prolina betaína, colina-O-sulfato de betaína, cocaamidopropil betaína, oleil betaína, sulfobetaína, laurilbetaína, octilbetaína, caprilamidopropilbetaína, lauramidopropilbetaína, isoestearamidopropilbetaína ou uma combinação, homólogo ou análogo de qualquer dos mesmos.
[0869] Modalidade 101 é uma composição ou um método da modalidade 9100, em que a betaína compreende glicina betaína, glicina betaína aldeído, β-alanina betaína, cloridrato de betaína, cetil betaína, colina-O- sulfato de betaína, cocaamidopropil betaína, oleil betaína, sulfobetaína, laurilbetaína, octilbetaína, caprilamidopropilbetaína, lauramidopropilbetaína, isoestearamidopropilbetaína ou uma combinação, homólogo ou análogo de qualquer dos mesmos.
[0870] Modalidade 102 é uma composição ou um método da modalidade 101, em que a betaína compreende cloridrato de betaína ou glicina betaína.
[0871] Modalidade 103 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 99 a 102, em que a betaína pode ser derivada de uma fonte de planta.
[0872] Modalidade 104 é uma composição ou um método da modalidade 99, em que o homólogo de betaína ou análogo de betaína em que o homólogo ou análogo de betaína compreende ectoína, colina, fosfatidilcolina, acetilcolina, citidina difosfato colina, dimetiletanolamina, cloreto de colina, salicilato de colina, glicerofosfocolina, fosfocolina, uma esfingomielina, bitartrato de colina, propio betaína, deanol betaína, homodeanol betaína, homoglicerol betaína, dietanol homobetaína, trietanol homobetaína ou uma combinação dos mesmos.
[0873] Modalidade 105 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 104, em que a composição compreende uma prolina, homólogo de prolina ou análogo de prolina.
[0874] Modalidade 106 é uma composição ou um método da modalidade 105, em que a prolina compreende L-prolina, D-prolina, hidroxiprolina, derivados de hidroxiprolina, prolina betaína ou uma combinação, um derivado, um homólogo ou um análogo de qualquer dos mesmos.
[0875] Modalidade 107 é uma composição ou um método da modalidade 106, em que a prolina compreende L-prolina.
[0876] Modalidade 108 é uma composição ou um método da modalidade 105, em que o homólogo ou análogo de prolina compreende α- metil-L-prolina, α-benzil-Lprolina, trans-4-hidroxi-L-prolina, cis-4-hidroxi-L- prolina, trans-3-hidroxi-L-prolina, cis-3-hidroxi-L-prolina, trans-4-amino-L- prolina, 3,4-de-hidro-α-prolina, ácido (2S)-aziridina-2-carboxílico, ácido (2S)- azetidina-2-carboxílico, ácido L-pipecólico, prolina betaína, 4-oxo-L-prolina, ácido tiazolidina-2-carboxílico, ácido (4R)-tiazolidina-4-carboxílico ou uma combinação de qualquer dos mesmos.
[0877] Modalidade 109 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 108, em que a composição compreende um bactericida.
[0878] Modalidade 110 é uma composição ou um método da modalidade 109, em que o bactericida compreende óxido de cobre, hidróxido de cobre, sulfeto de cobre, sulfato de cobre, cobre de partículas finas, oxitetraciclina ou uma combinação de qualquer dos mesmos.
[0879] Modalidade 111 é uma composição ou um método da modalidade 109 ou 110, em que o bactericida compreende oxitetraciclina.
[0880] Modalidade 112 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 111, em que a composição compreende um inibidor da calose sintase e o inibidor da calose sintase compreende 2-
desoxi-D-glicose.
[0881] Modalidade 113 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 112, em que a composição compreende um inibidor da calose sintase e um aminoácido.
[0882] Modalidade 114 é uma composição ou um método da modalidade 113, em que o inibidor da calose sintase compreende 2-desoxi-D- glicose e o aminoácido compreende L-cisteína.
[0883] Modalidade 115 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 114, em que a composição compreende: (a) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e L- cisteína; ou (b) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e 2- desoxi-D-glicose; ou (c) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma ACC desaminase; ou (d) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e ácido salicílico; ou (e) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e ácido oxálico; ou (f) um polipeptídeo associado à flagelina ou flagelina e um benzotiadiazol; ou (g) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e BABA; ou (h) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma betaína; ou (i) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma prolina; ou
(j) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma serina protease; ou
(k) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina; ou
(l) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma amilase; ou
(m) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma quitinase; ou
(n) um bactericida e pelo menos um de: 2-desoxi-D-glicose,
BABA, benzotiadiazol ou cisteína; ou
(o) uma serina protease; ou
(p) um polipeptídeo de tionina ou tipo tonina; ou
(q) uma serina protease e um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina; ou
(r) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma glucanase; ou
(s) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma glucanase e uma amilase; ou
(t) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase, uma amilase e 2-desoxi-D-glicose; ou
(u) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase, uma amilase, 2-desoxi-D-glicose e cisteína; ou
(v) uma glucanase, uma amilase, 2-desoxi-D-glicose e cisteína; ou
(w) um polipeptídeo de glucanase e uma amilase; ou
(x) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase e uma quitinase; ou
(y) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase, uma quitinase, 2-desoxi-D-glicose; ou (z) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase, uma quitinase, 2-desoxi-D-glicose e cisteína; ou (aa) uma glucanase, uma quitinase, 2-desoxi-D-glicose e cisteína; ou (bb) uma glucanase e uma quitinase; ou (cc) uma glucanase e uma serina protease; ou (dd) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase e uma serina protease; ou (ee) uma glucanase e um peptídeo RHPP ou peptídeo retro- inverso RHPP; ou (ff) um peptídeo RHPP ou peptídeo retro-inverso RHPP e uma betaína; (gg) um peptídeo RHPP ou peptídeo retro-inverso RHPP e uma prolina; (hh) um peptídeo RHPP ou peptídeo retro-inverso RHPP e uma ACC desaminase.
[0884] Modalidade 116 é uma composição ou um método da modalidade 115, em que a composição compreende ainda um bactericida
[0885] Modalidade 117 é uma composição ou um método da modalidade 116, em que o bactericida compreende oxitetraciclina.
[0886] Modalidade 118 é uma composição ou um método de qualquer uma de modalidades 115 a 117, em que a glucanase em composições (r)-(ee) compreende pelo menos uma β-1,3-glucanase.
[0887] Modalidade 119 é uma composição ou um método da modalidade 118, em que a sequência de aminoácido da β-1,3-glucanase compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 e 767-776.
[0888] Modalidade 120 é uma composição ou um método da modalidade 119, em que a sequência de aminoácido da β-1,3-glucanase compreende SEQ ID NO: 772.
[0889] Modalidade 121 é uma composição ou um método da modalidade 119, em que a sequência de aminoácido da β-1,3-glucanase compreende SEQ ID NO: 732.
[0890] Modalidade 122 é uma composição ou um método da modalidade 115, em que a composição compreende oxitetraciclina e 2-desoxi- D-glicose.
[0891] Modalidade 123 é uma composição ou um método de qualquer uma de modalidades 1 e 7 a 122, em que a composição compreende ainda um inibidor de succinato desidrogenase.
[0892] Modalidade 124 é uma composição ou um método da modalidade 123, em que o inibidor da succinato desidrogenase compreende bixafen.
[0893] Modalidade 125 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 124, em que a composição compreende de cerca de 0,0000005% em peso a cerca de 10% em peso do(s) polipeptídeo(s), com base no peso total da composição.
[0894] Modalidade 126 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 125, em que a composição compreende de cerca de 0,001% em peso a cerca de 5% em peso do(s) polipeptídeo(s), com base no peso total da composição.
[0895] Modalidade 127 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 126, em que a composição compreende de cerca de 0,005% em peso a cerca de 0,1% em peso do(s) polipeptídeo(s), com base no peso total da composição.
[0896] Modalidade 128 é uma composição ou um método de qualquer uma de modalidades 122 a 127, em que a composição compreende ainda de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso do composto indutor, com base no peso total da composição.
[0897] Modalidade 129 é uma composição ou um método da modalidade 128, em que a composição compreende de cerca de 0,001% em peso a cerca de 95% em peso do composto indutor, com base no peso total da composição.
[0898] Modalidade 130 é uma composição ou um método de qualquer uma de modalidades 1 e 7 a 129, em que a composição compreende dois ou mais compostos indutores e a composição compreende de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% do primeiro composto indutor e de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% do segundo composto indutor, com base no peso total da composição.
[0899] Modalidade 131 é uma composição ou um método da modalidade 130, em que a composição compreende de cerca de 0,001% em peso a cerca de 95% em peso de pelo menos um composto indutor, com base no peso total da composição.
[0900] Modalidade 132 é uma composição ou um método da modalidade 130 ou 131, em que a composição compreende de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso, com base no peso total da composição, de um composto indutor compreendendo um inibidor da calose sintase, um aminoácido, ácido salicílico, ácido oxálico, uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol, um inibidor de succinato desidrogenase ou qualquer combinação dos mesmos.
[0901] Modalidade 133 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 130 a 132, em que a composição compreende de cerca de 0,001% em peso a cerca de 95% em peso, com base no peso total da composição, de um composto indutor que compreende um bactericida.
[0902] Modalidade 134 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 1 e 7 a 133, compreendendo ainda um agroquímico ou transportador.
[0903] ] Modalidade 135 é uma composição ou um método da modalidade 134 em que o agroquímico compreende um antibiótico, um biopesticida, um conservante, um agente tamponante, um agente umectante, um surfactante, um agente de revestimento, um monossacarídeo, um polissacarídeo, um agente abrasivo, um pesticida, um inseticida, um herbicida, um nematicida, um bactericida, um fungicida, um miticida, um fertilizante, um bioestimulante, um osmoprotetor, um corante, um umectante, um aminoácido, um agente de controle biológico ou uma combinação dos mesmos.
[0904] Modalidade 136 é uma composição ou um método da modalidade 135, em que o conservante compreende diclorofeno, álcool benzílico hemi formal, um derivado de isotiazolinona, uma alquilisotiazolinona, uma benzisotiazolinona, MIT (2-metil-4-isotiazolin-3-ona), BIT (1,2- benzisotiazolin-3-ona), 5-cloro-2-(4-clorobenzil)-3(2H)-isotiazolona, 5-cloro-2- metil-2H-isotiazol-3-ona, 5-cloro-2-metil-2H-isotiazol-3-ona, 5-cloro-2-metil-2H- isotiazol-3-ona-cloridrato, 4,5-dicloro-2-ciclo-hexil-4-isotiazolin-3-ona, 4,5- dicloro-2-octil-2H-isotiazol-3-ona, 2-metil-2H-isotiazol-3-ona, complexo 2-metil- 2H-isotiazol-3-ona-cloreto de cálcio, 2-octil-2H-isotiazol-3-ona ou qualquer combinação dos mesmos.
[0905] Modalidade 137 é uma composição ou um método da modalidade 135 ou 136, em que o agente tamponante compreende potássio, ácido fosfórico, um sal fosfato, ácido cítrico, um sal citrato, um sal sulfato, MOPS, HEPES ou qualquer combinação dos mesmos.
[0906] Modalidade 138 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 135 a 137, em que o agente umectante compreende um organossilicone, um polioxietoxilato, um polissorbato, um polietilenoglicol ou derivado do mesmo, um etoxilato, um óleo de colheita, um óleo de semente metilado, um polissacarídeo ou qualquer combinação dos mesmos.
[0907] Modalidade 139 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 135 a 138, em que o surfactante compreende um óleo de petróleo pesado, um destilado de petróleo pesado, um éster de ácido graxo de poliol, um éster de ácido graxo polietoxilado, um aril alquil polioxietileno glicol, um acetato de alquil amina, um alquil aril sulfonato, um álcool poli-hídrico, um alquil fosfato, um álcool etoxilato, um alquilfenol etoxilato, polióis alcoxilados, alquil polietoxi éteres, derivados de óleo de soja etoxilados, polioxiIetilenopolioxipropileno monobutil éter, um derivado de organossilicone, ou qualquer combinação dos mesmos.
[0908] Modalidade 140 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 135 a 139, em que o agente de revestimento compreende um agente de pegajosidade, um polímero, um agente de enchimento, um agente de aumento de volume ou qualquer combinação dos mesmos.
[0909] Modalidade 141 é uma composição ou um método da modalidade 140, em que o agente de pegajosidade compreende carboximetilcelulose, um polímero natural, um polímero sintético, goma arábica, quitina, álcool polivinílico, acetato de polivinila, um fosfolipídeo natural, uma cefalina, uma lecitina, um fosfolipídeo sintético, um poliéster, um poliéter éster, um polianidrido, um poliéster uretano, um poliéster amida; um acetato de polivinila; um copolímero de acetato de polivinila; tilose; um copolímero de álcool polivinílico; uma polivinilpirolidona; um polissacarídeo, um amido, um amido modificado, um derivado de amido, uma dextrina, uma maltodextrina, um alginato, uma quitosana, uma celulose, um éster de celulose, um éter de celulose, um éter de celulose, etilcelulose, metilcelulose, hidroximetilcelulose, hidroxipropilcelulose, carboximetilcelulose; uma gordura; um óleo; uma proteína, caseína, gelatina, zeína; uma goma-laca; cloreto de vinilideno, um copolímero de cloreto de vinilideno; um lignossulfonato, lignossulfonato de cálcio; um poliacrilato, um polimetacrilato, um copolímero acrílico; um polivinilacrilato; um óxido de polietileno; um polibuteno, um poli-isobuteno, poliestireno, polibutadieno, uma polietilenoamina, uma polietilenamida; um polímero de acrilamida ou copolímero; um poli-hidroxietil acrilato, uma metilacrilamida; policloropreno, ou qualquer combinação dos mesmos.
[0910] Modalidade 142 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 135 a 141, em que o agente de abrasão compreende talco, grafite ou uma combinação dos mesmos.
[0911] Modalidade 143 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 135 a 142, em que o pesticida compreende inseticida, um herbicida, um fungicida, um bactericida, um nematicida, um miticida, um agente de controle biológico ou qualquer combinação dos mesmos.
[0912] Modalidade 144 é uma composição ou um método da modalidade 143, em que o inseticida compreende clotianidina, imidacloprida, um organofosfato, um carbamato, um piretroide, um acaricida, um alquil ftalato, ácido bórico, um borato, um fluoreto, um enxofre, uma ureia substituída haloaromática, um éster de hidrocarboneto, um inseticida de base biológica ou qualquer combinação dos mesmos.
[0913] Modalidade 145 é uma composição ou um método da modalidade 144, em que o herbicida compreende 2,4-D, 2,4-DB, acetocloro, acifluorfen, alaclor, ametrina, atrazina, aminopiralida, benefin, bensulfuron, bensulfuron metil, bensulida, bentazon, bispiribac sódio, bromacil, bromoxinil, butilato, carfentrazona, clorimuron, ácido 2-clorofenoxi acético, clorsulfuron, chlorimuron etil, cletodim, clomazona, clopiralid, cloransulam, CMPP-P_DMA, cicloato, DCPA, desmedifam, dicamba, diclobenil, diclofop, 2,4-diclorofenol,
ácido diclorofenoxiacético, diclorprop, diclorprop-P, diclosulam, diflufenzopir, dimetanamida, sal de dimetil amina de ácido 2,4-diclorofenoxiacético, diquat, diuron, DSMA, endothall, EPTC, etalfluralin, etofumesato, fenoxaprop, fluazifop- P, flucarbazona, flufenacet, flumetsulam, flumiclorac, flumioxazin, fluometuron, fluroxipir, fluorxipir 1-metileptliester, fomesafen, sal de sódio de foresafen, foramsulfuron, glufosinato, glufosinato-amônio, glifosato, halosulfuron, halosulfuron-metil, hexazinona, 2-hidroxifenoxi ácido acético, 4-hidroxifenoxi ácido acético, imazametabenz, imazamox, imazapic, imazaquin, imazetapir, isoxaben, isoxaflutol, lactofen, linuron, mazapir, MCPA, MCPB, mecoprop, mecrocop-P, mesotriona, metolacloro-s, metribuzina, metsulfuron, metsulfuron- metil, molinato, MSMA, napropamida, naptalam, nicosulfuron, norflurazon, orizalina, oxadiazon, oxifluorfen, paraquat, ácido pelargônico, pendimetalina, fenmedifam, picloram, primisulfuron, prodiamina, prometrina, pronamida, propanil, prosulfuron, pirazon, piritiobac, piroxassulfona, quinclorac, quizalofop, rinsulfuron, setoxidim, siduron, simazina, sulfentrazona, sulfometuron, sulfosulfuron, tebutiuron, terbacil, tiazopir, tifensulfuron, tifensulfuron-metil, tiobencarbe, tralcoxidim, trialato, triassulfuron, tribenuron, tribernuron-metil, triclopir, trifluralina, triflussulfuron ou qualquer combinação dos mesmos.
[0914] Modalidade 146 é uma composição ou um método da modalidade 145 em que o herbicida compreende lactofen.
[0915] Modalidade 147 é uma composição ou um método da modalidade 144, em que o nematicida compreende Bacillus firmus, fluopiram, um nematicida antibiótico, abamectina, um nematicida de carbamato, acetoprol, Bacillus chitonosporus, cloropicrina, benclotiaz, benomil, Burholderia cepacia, carbofuran, carbossulfan, cleotocard, dazomete, DBCP, DCIP, alanicarb, aldicarb, aldoxicarb, oxamil, diamidafos, fenamifos, fostietan, fosfamidon, cadusafos, clorpirifos, diclofention, dimetoato, etoprofos, fensulfotion, fostiazato, harpins, heterofos, imiciafos, isamidofos, isazofos, metomil,
mecarfon, Myrothecium verrucaria, Paecilomyces lilacinus, Pasteuria nishizawae, forato, fosfocarbe, terbufos, tionazina, tioxazafen, triazofos, dazomet, 1,2-dicloropropano, 1,3-dicloropropeno, furfural, iodometano, metam, metil brometo, metil isotiocianato, xilenol, pidiflumetofeno ou qualquer combinação dos mesmos.
[0916] Modalidade 148 é uma composição ou um método da modalidade 144, em que o bactericida compreende estreptomicina, uma penicilina, uma tetraciclina, uma oxitetracilina, uma ampicilina, um ácido oxolínico, casugamicina, clorotetraciclina, óxido de cobre, hidróxido de cobre, sulfeto de cobre, sulfato de cobre, cobre de partículas finas ou qualquer combinação dos mesmos.
[0917] Modalidade 149 é uma composição ou um método da modalidade 148, em que o bactericida compreende oxitetraciclina.
[0918] Modalidade 150 é uma composição ou método da modalidade 144, em que o agente de controle biológico compreende Bacillus thuringiensis, Bacillus megaterium, Bacillus mycoides isolate J, Bacillus methylotrophicus, Bacillus vallismortis, Chromobacterium subtsugae, Delftia acidovorans, Streptomyces lydicus, Streptomyces colombiensis, Streptomyces galbus K61, Penicillium bilaii, Banda de Lupinus albus doce (BLAD), uma cepa Aureobasidium pullulans, uma cepa Bacillus subtilis produtora de lipopeptídeo, uma cepa Bacillus amyloliquefaciens produtora de lipopeptídeo, uma cepa Bacillus firmus ou uma cepa Bacillus pumilus.
[0919] Modalidade 151 é uma composição ou um método da modalidade 144 em que o agente de controle biológico compreende Bacillus subtilis cepa QST713, Bacillus pumulis cepa QST 2808, Aureobasidium pullalans cepa DMS 14940 Aureobasidium pullulans cepa 14941, Penicillium bilaii, Banda de Lupinus albus doce (BLAD) e/ou uma cepa de Aureobasidium pullulans.
[0920] Modalidade 152 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 135 a 151, em que o agroquímico compreende um fertilizante e o fertilizante compreende sulfato de amônio, nitrato de amônio, nitrato de sulfato de amônio, cloreto de amônio, bissulfato de amônio, polissulfeto de amônio, tiossulfato de amônio, amônia aquosa, amônia anidra, polifosfato de amônio, sulfato de alumínio, nitrato de cálcio, nitrato de cálcio e amônio, sulfato de cálcio, magnesita calcinada, calcário calcítico, óxido de cálcio, nitrato de cálcio, calcário dolomítico, cal hidratada, carbonato de cálcio, fosfato de diamônio, fosfato monoamônico, nitrato de magnésio, sulfato de magnésio, acetato de potássio, nitrato de potássio, cloreto de potássio, sulfato de magnésio potássio, fosfato de potássio, fosfato de potássio tribásico, sulfato de potássio, nitratos de sódio, calcário magnésio, magnésia, ureia, ureia- formaldeídos, nitrato de ureia amônio, ureia revestida com enxofre, ureia revestida com polímero, isobutililideno diureia, K2SO4–Mg2SO4, cainita, silvinita, cieserita, sais de Epsom, enxofre elementar, marga, moída conchas de ostras, farinha de peixe, bolos de óleo, esterco de peixe, farinha de sangue, fosfato de rocha, super fosfatos, escória, farinha de ossos, cinzas de madeira, estrume, guano de morcego, musgo de turfa, composto, areia verde, farinha de semente de algodão, farinha de penas, refeição de caranguejo, emulsão de peixe, ácido húmico ou qualquer combinação dos mesmos.
[0921] Modalidade 153 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 135 a 152, em que o fertilizante compreende ácido bórico, um borato, uma frita de boro, sulfato de cobre, uma frita de cobre, um quelato de cobre, um decahidrato de tetraborato de sódio, sulfato de ferro, óxido de ferro, ferro sulfato de amônio, uma frita de ferro, um quelato de ferro, um sulfato de manganês, um óxido de manganês, um quelato de manganês, um cloreto de manganês, uma frita de manganês, um molibdato de sódio, ácido molibdânico, um sulfato de zinco, um óxido de zinco, um carbonato de zinco,
uma frita de zinco, fosfato de zinco, um quelato de zinco ou qualquer combinação dos mesmos.
[0922] Modalidade 154 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 135 a 153, em que o bioestimulante compreende um extrato de alga marinha, um elicitador, um polissacarídeo, um monossacarídeo, um extrato de proteína, um extrato de soja, um ácido húmico, um hormônio de planta, um regulador de crescimento de planta ou qualquer combinação dos mesmos.
[0923] Modalidade 155 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 135 a 154, em que o aminoácido compreende cisteína.
[0924] Modalidade 156 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 135 a 155, em que o osmoprotetor compreende uma betaína.
[0925] Modalidade 157 é uma composição ou um método da modalidade 156, em que a betaína compreende cloridrato de betaína ou glicina betaína.
[0926] Modalidade 158 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 135 a 157, em que o osmoprotetor compreende uma prolina.
[0927] Modalidade 159 é uma composição ou um método da modalidade 158, em que a prolina compreende L-prolina.
[0928] Modalidade 160 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 135 a 159, compreendendo ainda um fungicida.
[0929] Modalidade 161 é uma composição ou um método da modalidade 160 em que o fungicida compreende um fungicida de estrobilurina, um fungicida de triazol, um fungicida inibidor de succinato desidrogenase, um polipeptídeo harpin ou tipo harpin, uma laminarina, uma feilamida, um carbamato de metil benzimidazol, uma anilino-pirimidina, um fenilpirrol, uma dicarboximida, um carbamato, uma piperidinil-tiazol-isoxazolina, um inibidor de desmetilação, um fosfonato, um cobre inorgânico, um enxofre inorgânico, um tiocarbamato, um ditiocarbamato, uma ftalimida, uma cloronitrila ou uma sulfamida.
[0930] Modalidade 162 é uma composição ou um método da modalidade 161, em que o fungicida compreende um fungicida de estrobilurina, um fungicida de triazol ou um fungicida inibidor de succinato desidrogenase.
[0931] Modalidade 163 é uma composição ou um método da modalidade 162, em que o fungicida de estrobilurina compreende uma Estrobilurina A, uma Estrobilurina B, uma Estrobilurina C, uma Estrobilurina D, uma Estrobilurina E, uma Estrobilurina F, uma Estrobilurina G, uma Estrobilurina H, uma Azoxistrobina, uma Trifloxistrobina, um Kresoxim metil, uma Fluoxastrobina, uma Picoxistrobina ou qualquer combinação dos mesmos.
[0932] Modalidade 164 é uma composição ou um método da modalidade 163, em que o fungicida de estrobilurina compreende uma Azoxistrobina, uma Trifloxistrobina, um Kresoxim metil, uma Fluoxastrobina, uma Picoxistrobina, uma piraclostrobina ou qualquer combinação dos mesmos.
[0933] Modalidade 165 é uma composição ou um método da modalidade 164, em que o fungicida de estrobilurina compreende uma Trifloxistrobina.
[0934] Modalidade 166 é uma composição ou um método da modalidade 164, em que o fungicida de estrobilurina compreende uma fluoxastrobina.
[0935] Modalidade 167 é uma composição ou um método de qualquer uma de modalidades 162 a 166, em que o fungicida de triazol compreende protioconazol, imidazol, imidazol, proclorazol, propiconazol, triflumizol, diniconazol, flusilazol, penconazol, hexaconazol, ciproconazol,
miclobutanil, tebuconazol, difenoconazol, tetraconazol, fenbuconazol, epoxiconazol, metconazol, fluquinconazol, triticonazol ou qualquer combinação dos mesmos.
[0936] Modalidade 168 é uma composição ou um método da modalidade 167, em que o fungicida de triazol compreende protioconazol.
[0937] Modalidade 169 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 162 a 166, em que o fungicida inibidor da succinato desidrogenase compreende uma fenil-benzamida, fenil-oxo-etil tiofeno amida, piridinil-etil-benzamida, furan-carboxamida, oxatin-carboxamida, tiazol-carboxamida, pirazol-4-carboxamida, N-ciclopropil-N-benzil-pirazol- carboxamida, N-metoxi-(fenil-etil)-pirazol-carboxamida, piridina-carboxamida ou pirazina-carboxamida, pidiflumetofen, benodanil, flutolanil, mepronil, isofetamid, fluopiram, fenfuram, carboxin, oxicarboxin, tifluzamida, benzovindiflupir, bixafen, fluindapir, fluxapiroxade, furametpir, inpirfluxam, isopirazam, penflufen, petiopirad, sedaxane, isoflucipram, pidiflumetofen, boscalid, piraziflumid ou qualquer combinação dos mesmos.
[0938] A modalidade 170 é uma composição ou método de qualquer uma de modalidades 162 a 169, em que o fungicida inibidor da succinato desidrogenase compreende fenil-benzamida, fenil-oxo-etil tiofeno amida, piridinil-etil-benzamida, furano-carboxamida, oxatina carboxamida, tiazol-carboxamida, pirazol-4-carboxamida, N-ciclopropil-N-benzil-pirazol- carboxamida, N-metoxi- (fenil-etil) -pirazol-carboxamida, piridina-carboxamida ou pirazina-carboxamida, piriflumetofen, isofetamidofen, oxicarboxina, benzovindiflupir, bixafen, fluindapir, inpirfluxam, isopirazam, pentiopirade, isoflucipram, piriflumetofeno, piraziflumid ou qualquer combinação dos mesmos.
[0939] Modalidade 171 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 162 a 170, em que o fungicida inibidor da succinato desidrogenase compreende bixafen.
[0940] Modalidade 172 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 135 a 171, em que o umectante compreende glicerol, glicerina, um derivado de glicerol, triacetato de glicerol, triacetina, propileno glicol, hexileno glicol, butileno glicol, trietileno glicol, tripolipropileno glicol, triacetato de glicerila, sacarose, tagatose, um álcool de açúcar, um poliol de açúcar, sorbitol, xilitol, manitol, mantitol, um poliol polimérico, polidextrose, colágeno, aloe, gel de aloe vera, um alfa hidroxiácido, mel, melaço, quillaia, sódio hexametafosfato, cloreto de lítio, ureia, butileno glicol ou extrato de tremela.
[0941] Modalidade 173 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 135 a 172, em que o transportador compreende água, turfa, trigo, farelo, vermiculita, argila, solo pasteurizado, carbonato de cálcio, bicarbonato de cálcio, dolomita, gesso, bentonita, uma argila, um fosfato de rocha, um composto de fósforo, dióxido de titânio, húmus, talco, alginato, carvão ativado ou uma combinação dos mesmos.
[0942] Modalidade 174 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 135 a 173, em que a composição compreende de cerca de 0,0000005% em peso a cerca de 10% em peso do(s) polipeptídeo(s), de cerca de 0,01% a cerca de 99% em peso do agroquímico distinto do composto indutor e de cerca de 1 a cerca de 99,99% em peso de transportador com base no peso total da composição.
[0943] Modalidade 175 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 135 a 174, em que a composição compreende de cerca de 0,001% a cerca de 5% do(s) polipeptídeo(s), de cerca de 0,1% a cerca de 70% em peso do agroquímico e de cerca de 25 a cerca de 99,9% em peso de transportador com base no peso total da composição.
[0944] Modalidade 176 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 135 a 175, em que a composição compreende de cerca de 0,005% a cerca de 0,1% do(s) polipeptídeo(s), de cerca de 0,1% a cerca de 60% em peso do agroquímico e de cerca de 40 a cerca de 99,8% em peso de transportador com base no peso total da composição.
[0945] Modalidade 177 é uma composição ou um método de qualquer uma de modalidades 174 a 176, em que a composição compreende de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso do composto indutor.
[0946] Modalidade 178 é uma composição ou um método da modalidade 177, em que a composição compreende de cerca de 0,001% em peso a cerca de 95% em peso do composto indutor.
[0947] Modalidade 179 é uma composição ou um método de qualquer uma das modalidades 135 a 178, em que a composição compreende pelo menos dois compostos indutores e em que a composição compreende de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso do primeiro composto indutor, de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso do segundo composto indutor, de cerca de 0,01% a cerca de 80% em peso do agroquímico distinto do composto indutor e de cerca de 5 a cerca de 99% em peso de transportador com base no peso total da composição.
[0948] Modalidade 180 é uma composição ou um método da modalidade 179, em que a composição compreende cerca de 0,001% em peso a cerca de 95% em peso de pelo menos um composto indutor.
[0949] Modalidade 181 é uma composição ou um método das modalidades 179 ou 180, em que a composição compreende de cerca de 0,000001% em peso a 95% em peso de um composto indutor compreendendo um inibidor da calose sintase, um aminoácido, ácido salicílico, ácido oxálico, uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol, um inibidor da succinato desidrogenase ou qualquer combinação dos mesmos.
[0950] Modalidade 182 é uma composição ou um método das modalidades 179 a 181, em que a composição compreende de cerca de 0,001% em peso a cerca de 95% em peso de um composto indutor compreendendo um bactericida.
[0951] Modalidade 183 é um método da modalidade 11 ou 12 compreendendo aplicar o polipeptídeo isolado de qualquer uma das modalidades 2 a 6 à planta ou parte de planta.
[0952] Modalidade 184 é um método das modalidades 11 ou 12 compreendendo aplicar o polipeptídeo isolado compreendendo a β-1,3, glucanase à planta ou parte de planta.
[0953] Modalidade 185 é um método de qualquer uma das modalidades 11 e 13 a 184, em que a doença a ser tratada compreende uma doença bacteriana ou uma doença fúngica.
[0954] Modalidade 186 é um método de qualquer uma das modalidades 11 e 13 a 185, em que a doença a ser tratada compreende Huanglongbing (HLB), infecções por Canditus (Ca.) Liberibacter, doença asiática dos citros, ferrugem asiática da soja, podridão do caule de Sclerotinia, bolor fuliginoso, doença de Canker dos citros, ferrugem das folhas de Cercospora, uma bactéria que causa doença ou um fungo que causa doença.
[0955] Modalidade 187 é um método da modalidade 186, em que a bactéria causando doença compreende ferrugem bacteriana da folha, podridão bacteriana do caule, mancha bacteriana da folha, queimadura da folha bacteriana, podridão do topo bacteriana, faixa bacteriana, mancha de chocolate, murcha e ferrugem bacteriana de Goss, mancha de Holcus, bainha roxa da folha, podridão da semente, ferrugem das mudas, doença de Stewart (murcha bacteriana), enfezamento do milho, Fire Blight, doença de Pierce, clorose variegada dos citros, estria bacteriana da folha, doença do ponto bacteriano, podridão do cacho, explosão da flor bacteriana, mancha da bolha,
explosão bacteriana, ferrugem da noz, doença do sangue da banana, cancro dos citros, serovares de Pseudomonas syringae, ou uma combinação dos mesmos.
[0956] Modalidade 188 é um método da modalidade 18, em que a doença a ser tratada compreende um fungo causando doença selecionada do grupo consistindo em Mancha de alternaria, Antracnose, Praga da antracnose, Praga da folha de antracnose, Podridão do caule de antracnose, Doença da sarna da maçã, Ferrugem asiática da soja, Podridão de aspergillus, Aspergillus, podridão amarga, doença da raia da folha preta, Perna preta, Doença da vagem preta, Sigatoka preta, Mancha preta, Mancha da flor, Botrytis, Mancha marrom, Podridão marrom, Mancha da folha de cercospora, Mancha da folha de Cercospora, Cercosporiose, Podridão do carvão, Podridão negra do citro, Mancha negra do citro, cancro do caule do cacau, ferrugem da folha do café, Ferrugem do café, Mancha do Corynespora, Mancha foliar de Corynespora, doença de corineum, podridão da coroa, amortecimento, die-back, Mancha do dólar, Míldio Downy, Mancha precoce, Mancha foliar do olho de sapo, Podridão da fruta, Mancha da cabeça de Fusarium, Mancha de Fusarium, Mancha de mudas de Fusarium, Murcha de Fusarium, Mancha da folha de Glomerella, Ferrugem da folha da uva, Mancha cinzenta da folha, Bolor cinzento, Mancha gomosa, Mancha gomosa do caule, Podridão da casca, Mancha Johnson, Mancha tardia, Mancha da bainha da folha, mancha da folha, Mancha da folha da alface, Doença de malformação da manga, Crosta da manga, Declínio repentino da manga, mela, podridão nobre, ferrugem das folhas do milho do norte, ferrugem do viveiro, doença do Panamá, doença do Panamá raça tropical 4, Ondulação da folha do pêssego, mancha de Phaeosphaeria, vagem de Phomopsis, podridão da coroa de Phytopthora, podridão do pé de Phytopthora, podridão da raiz de Phytopthora, murcha de muda de Phytopthora, doença pitting, ferrugem de polimento, queda de fruto pós-
floração, podridão pós-colheita da extremidade do caule, Mildio em pó, mancha roxa de semente, ferrugem de mudas de Pythium, ferrugem de mudas de Rhizoctonia, Crosta de arroz, pescoço podre de arroz, ferrugem de mudas de arroz, ferrugem de bainha de arroz, podridão de raiz, Ferrugem, sarna, podridão do caule de Sclerotinia, ferrugem da semente, decadência da semente, podridão da semente, ferrugem da muda, podridão da muda, podridão marrom da Septoria, Mancha da folha da Septoria, Mancha tritici Septoria, Buraco de tiro, Bolor da neve, Bolor de fuligem, Podridão das folhas do milho do sul, cancro do caule da soja, mancha da folha salpicada, mancha de Stagonospora nodorum, podridão do caule, doença de sangria do caule, podridão do caule, podridão da extremidade do caule, síndrome da morte súbita, murcha repentina, podridão azeda de verão, mancha-alvo, top-kill, mofo branco, Doença da vassoura de bruxa, amarelo sigatoka e uma combinação de qualquer uma das mesmas.
[0957] Modalidade 189 é um método de qualquer uma das modalidades 185 a 188 compreendendo aplicar uma glucanase e uma serina protease à planta, à parte de planta ou ao meio de planta.
[0958] Modalidade 190 é um método de qualquer uma das modalidades 185 a 189 compreendendo aplicar a composição como uma lavagem de fruta ao exterior de uma fruta da planta e o método compreende ainda reduzir mofo e/ou prevenir germinação de esporo de fungo na fruta.
[0959] Modalidade 191 é um método da modalidade 185 a 189, em que a planta compreende um kiwi ou uma planta de laranja.
[0960] Modalidade 192 é um método de qualquer uma das modalidades 11 e 13 a 191, em que proteger a planta ou a parte de planta de doença compreende tratamento profilático, tratamento, prevenção e progressão de doença diminuída sobre ou na planta ou parte de planta.
[0961] Modalidade 193 é um método de qualquer uma das modalidades 11 a 192, compreendendo ainda prevenir ou reduzir deposição de calose em ou em torno dos plasmodesmos de floema em uma árvore infectada com Canditus (Ca.) Liberibacter.
[0962] Modalidade 194 é um método de qualquer uma das modalidades 11 a 193, em que o método compreende ainda diminuir queda de fruto de uma planta infectada com uma doença.
[0963] Modalidade 195 é um método da modalidade 194, em que a doença compreende uma infecção por Canditus (Ca.) Liberibacter e/ou Huanglongbing (HLB).
[0964] Modalidade 196 é um método de qualquer uma das modalidades 11 a 195, em que a composição compreende uma prolina, uma betaína, uma ACC desaminase ou qualquer combinação das mesmas e o método compreende ainda reduzir tensão abiótica na planta ou parte de planta.
[0965] Modalidade 197 é um método de qualquer uma das modalidades 11 a 196, em que a composição compreende oxitetraciclina e 2- DGG e o método compreende ainda aumentar rendimento de fruta, tamanho de fruta e qualidade de suco.
[0966] Modalidade 198 é um método de qualquer uma das modalidades 11 a 197, em que a composição compreende um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma ACC desaminase e o método compreende aumentar rendimento de uma colheita.
[0967] Modalidade 199 é um método da modalidade 198, em que o polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina tem uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 226.
[0968] Modalidade 200 é um método de qualquer uma das modalidades 11 a 199, em que o polipeptídeo isolado ou a composição é aplicada exogenamente à planta, à parte de planta ou ao meio de crescimento da planta.
[0969] Modalidade 201 é um método de qualquer uma das modalidades 11 a 200, em que o polipeptídeo isolado ou a composição é aplicada endogenamente à planta ou à parte de planta.
[0970] Modalidade 202 é um método de qualquer uma das modalidades 11 a 201, em que o método compreende aplicar sequencialmente um ou mais componentes da composição à planta ou à parte de planta.
[0971] Modalidade 203 é um método da modalidade 202, em que o método compreende aplicar sequencialmente um ou mais dos polipeptídeos da composição e um ou mais dos compostos indutores da composição à planta ou à parte de planta.
[0972] Modalidade 204 é um método da modalidade 202 ou 203, em que as aplicações sequenciais são feitas dentro de 100 horas, dentro de 72 horas, dentro de 48 horas, dentro de 24 horas, dentro de 12 horas ou dentro de 4 horas.
[0973] Modalidade 205 é um método de qualquer uma das modalidades 202 a 204, em que as aplicações sequenciais são aplicadas exogenamente à planta, à parte de planta ou ao meio de crescimento de planta.
[0974] Modalidade 206 é um método de qualquer uma das modalidades 202 a 205, em que as aplicações sequenciais são aplicadas endogenamente à planta ou à parte de planta.
[0975] Modalidade 207 é um método de qualquer uma das modalidades 11 a 206, em que a parte de planta compreende umaa parte de planta compreende uma célula, uma folha, um galho, um tronco, um caule, uma flor, uma folhagem, um órgão floral, uma fruta, pólen, um vegetal, um tubérculo, um cormo, um bulbo, um pseudobulbo, um vagem, uma raiz, uma bola de raiz, um estoque de raiz, um rebento, uma semente, um sistema vascular, uma vasculatura ou uma videira.
[0976] Modalidade 208 é um método de qualquer uma das modalidades 11 a 207, em que o peptídeo isolado ou a composição é aplicada a uma superfície da planta, uma folhagem da planta, ao solo em torno da planta ou uma superfície de uma semente da planta.
[0977] Modalidade 209 é um método da modalidade 208, em que o peptídeo isolado ou a composição é aplicada à superfície da semente e a planta ou a parte de planta é cultivada a partir da semente.
[0978] Modalidade 210 é um método de qualquer uma das modalidades 11 a 209, em que o peptídeo isolado ou a composição é aplicada como uma aplicação foliar.
[0979] Modalidade 211 é um método de qualquer uma das modalidades 11 a 210, em que o peptídeo isolado ou a composição é injetada em um galho, tronco, caule, sistema vascular ou raiz da planta.
[0980] Modalidade 212 é um método da modalidade 211, em que o peptídeo isolado é injetado no tronco ou no sistema vascular da planta.
[0981] Modalidade 213 é um método de qualquer uma das modalidades 11 a 212, em que a planta é uma árvore ou uma videira.
[0982] Modalidade 214 é um método de qualquer uma das modalidades 11 a 213, em que a planta é uma planta frutífera ou planta de vegetal e o método fornece elevado rendimento de frutas ou vegetais.
[0983] Modalidade 215 é um método de qualquer uma das modalidades 11 a 214, em que a planta é uma planta cítrica e o método reduz sintomas de doença na planta cítrica e/ou aumenta rendimento de fruto e/ou melhora a qualidade e/ou quantidade do suco obtido do fruto da planta.
[0984] Modalidade 216 é um método de qualquer uma das modalidades 11 a 215, em que a planta compreende uma planta cítrica, uma laranja, um limão, uma lima, uma toranja, uma tangerina, um pomelo, uma tangerina, um kumquat, um tangelo, ou qualquer variedade, híbrido ou cruzamento dos mesmos.
[0985] Modalidade 217 é um método de qualquer uma das modalidades 11 a 216, em que a planta compreende uma árvore cítrica.
[0986] Modalidade 218 é um método de qualquer uma das modalidades 11 a 217, em que a planta é uma cultura em linha.
[0987] Modalidade 219 é um método da modalidade 218, em que a cultura em linha compreende milho ou soja.
[0988] Modalidade 220 é uma semente revestida com a composição de qualquer uma das modalidades 1, 7–10 e 13 a 182 ou o peptídeo de qualquer uma das modalidades 2 a 6.

Claims (50)

REIVINDICAÇÕES
1. COMPOSIÇÃO PARA INICIAÇÃO BIOATIVA DE UMA PLANTA ou uma parte de planta para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta e/ou melhorar a qualidade de uma fruta, suco obtido de uma fruta ou uma colheita obtida de uma planta ou parte de planta, caracterizada pelo fato de que a composição compreende (A) pelo menos um polipeptídeo de iniciação bioativo e um composto indutor; ou (B) pelo menos dois polipeptídeos de iniciação bioativos, opcionalmente, com um composto indutor; (C) um inibidor da calose sintase e pelo menos um composto indutor compreendendo um bactericida, um aminoácido, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou derivado ou sal do mesmo, um ácido dicarboxílico ou derivado ou sal do mesmo, uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol ou qualquer combinação dos mesmos; ou (D) um bactericida e pelo menos um composto indutor compreendendo ácido β amino butírico (BABA), uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol, ácido salicílico, ácido oxálico ou qualquer combinação dos mesmos, em que: o polipeptídeo ou os polipeptídeos de (A) ou (B) compreendem: (i) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina; ou (ii) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso (iii) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP); ou (iv) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso (RI RHPP); ou (v) uma tionina ou um polipeptídeo tipo tionina; ou (vi) um polipeptídeo de glucanase; ou (vii) um polipeptídeo de serina protease; ou
(viii) um polipeptídeo ACC desaminase (1-aminociclopropano-1- carboxilato desaminase); ou (ix) uma amilase; ou (x) uma quitinase; ou (xi) qualquer combinação dos mesmos; com as condições de que: o composto indutor compreende um inibidor da calose sintase, ácido β-amino butírico (BABA), uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol, ácido salicílico, ácido oxálico ou qualquer combinação dos mesmos quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo de grupos (i)-(v) mas não polipeptídeos dos grupos (vi) a (x); e o composto indutor compreende um bactericida, um aminoácido ou isômero do mesmo, um inibidor da calose sintase, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou um derivado do mesmo, um ácido dicarboxílico ou um derivado do mesmo, uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol ou qualquer combinação dos mesmos quando o polipeptídeo de (A) compreende qualquer polipeptídeo dos grupos (vi) a (x); e a composição compreende o composto indutor e o composto indutor compreende um inibidor da calose sintase, ácido β-amino butírico (BABA), uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol, ácido salicílico, ácido oxálico ou qualquer combinação dos mesmos quando os dois ou mais polipeptídeos de (B) compreendem polipeptídeos dos grupos (i)-(v), mas não polipeptídeos dos grupos (vi) a (x).
2. PEPTÍDEO ISOLADO para iniciação bioativa de uma planta ou uma parte de planta para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou diminuir tensão abiótica na planta ou na parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença, insetos e/ou nematoides e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou da parte de planta e/ou mudar a arquitetura de planta, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende a sequência de aminoácido de qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 735, 746-755 e 757-778; ou o peptídeo consiste na sequência de aminoácido de qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 735, 745-778.
3. PEPTÍDEO ISOLADO, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que: (a) a sequência de aminoácido do peptídeo compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 747, 758, 767-769, 771, 772, 773, 775 e 778; ou a sequência de aminoácido do peptídeo consiste em qualquer uma de SEQ ID NOs: 747, 758, 767-769, 771, 772, 773, 775 e 778; ou (b) a sequência de aminoácido do peptídeo compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 746-750, 757-761, 767-776 e 778; ou a sequência de aminoácido do peptídeo consiste em qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 746-750, 757-761, 767-776 e 778; ou (c) a sequência de aminoácido do peptídeo compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 746-755, 757-776 e 778 ou a sequência de aminoácido do peptídeo consiste em qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 746- 755, 757-776 e 778; ou (d) a sequência de aminoácido do peptídeo compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 735, 746 - 755, 757-778 ou a sequência de aminoácido do peptídeo consiste em qualquer uma de SEQ ID NOs: 732, 735, 746-755, 757–778.
4. COMPOSIÇÃO PARA INICIAÇÃO BIOATIVA DE UMA PLANTA ou uma parte de planta para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta ou uma parte de planta e/ou proteger a planta ou a parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou a parte de planta e/ou melhorar a qualidade de uma fruta, suco obtido de uma fruta ou uma colheita obtida de uma planta ou parte de planta, caracterizada pelo fato de que a composição compreende bixafen e pelo menos um polipeptídeo livre compreendendo: (i) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina; ou (ii) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso (iii) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP); ou (iv) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso (RI RHPP); ou (v) uma tionina ou um polipeptídeo tipo tionina; ou (vi) um polipeptídeo de glucanase; ou (vii) um polipeptídeo de serina protease; ou (viii) um polipeptídeo ACC desaminase (1-aminociclopropano-1- carboxilato desaminase); ou (ix) uma amilase; ou (x) uma quitinase; ou (xi) qualquer combinação dos mesmos; em que o polipeptídeo livre não está ligado a um exosporium de um membro da família Bacillus cereus ou um esporo do membro da família Bacillus cereus intacto.
5. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que o polipeptídeo livre compreende: o polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP) e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP) compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 604, 606, 607 e 745-755; e/ou o polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso (RI-RHPP) e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro-inverso compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 605 e 756-766; e/ou a quitinase e uma sequência de aminoácido da quitinase compreende SEQ ID NO: 777 ou 778; e/ou o polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina compreende qualquer de SEQ ID NO: 226 ou 571 e/ou a glucanase e uma sequência de aminoácido da glucanase compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 e 767-778 e/ou a serina protease e uma sequência de aminoácido da serina protease compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 721, 722 e 794-796.
6. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 4 ou 5, caracterizada pelo fato de que o polipeptídeo livre compreende o polipeptídeo promotor de pelo de raiz.
7. MÉTODO PARA AUMENTAR CRESCIMENTO, RENDIMENTO, SAÚDE, LONGEVIDADE, PRODUTIVIDADE E/OU VIGOR DE UMA PLANTA ou parte de planta e/ou proteger a planta ou parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou parte de planta, o método caracterizado pelo fato de que compreende aplicar uma composição ou um peptídeo isolado a uma planta, parte de planta ou um meio de crescimento de planta no qual a planta ou parte de planta será cultivada, ou uma rizosfera em uma área circundando a planta ou parte de planta para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor da planta ou parte de planta e/ou proteger a planta ou parte de planta de doença e/ou aumentar a resposta imune inata da planta ou parte de planta em que o peptídeo isolado compreende: uma β-1,3 glucanase e a β-1,3 glucanase é injetada no tronco da planta cítrica; ou o polipeptídeo isolado de qualquer uma das reivindicações 2 ou 3; e a composição compreende: uma β-1,3 glucanase, ou a composição de qualquer uma das reivindicações 1 e 4–6.
8. MÉTODO PARA AUMENTAR TEOR DE SUCO e/ou melhorar teor de suco, açúcar ou ácido e/ou melhorar uma razão Brix:ácido de suco obtido de uma planta, o método caracterizado pelo fato de que compreende aplicar uma composição ou um polipeptídeo isolado à planta ou parte de planta, ou meio de crescimento de planta no qual a planta será cultivada, ou uma rizosfera em uma área circundando a planta ou parte de planta para aumentar teor de suco e/ou melhorar o teor de suco, açúcar ou ácido e/ou melhorar uma razão brix:ácido do suco obtido da planta ou parte de planta, em que o polipeptídeo isolado compreende: uma β-1,3,glucanase e a β-
1,3 glucanase é injetada no tronco da planta; ou o polipeptídeo isolado de qualquer uma das reivindicações 2 a 3; e a composição compreende a composição de qualquer uma das reivindicações 4 a 6 ou (A) pelo menos um polipeptídeo e um composto indutor; (B) pelo menos dois polipeptídeos,
opcionalmente, com um composto indutor; (C) um inibidor da calose sintase e pelo menos um de um composto indutor compreendendo um bactericida, um aminoácido ou isômero do mesmo, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou derivado ou sal do mesmo, um ácido dicarboxílico ou derivado ou sal do mesmo, um benzotiadiazol, uma betaína, uma prolina ou qualquer combinação das mesmas; ou (D) um bactericida e pelo menos um de um composto indutor compreendendo um aminoácido ou isômero do mesmo, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou derivado ou sal do mesmo,
um ácido dicarboxílico ou derivado ou sal do mesmo, um benzotiadiazol, uma betaína, um prolina ou qualquer combinação das mesmas, em que: o polipeptídeo ou os polipeptídeos de (A) ou (B) compreendem:
(i) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina; ou
(ii) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina retro inverso
(iii) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz (RHPP); ou
(iv) um polipeptídeo promotor de pelo de raiz retro inverso (RI RHPP); ou
(v) uma tionina ou um polipeptídeo tipo tionina; ou
(vi) um polipeptídeo de glucanase; ou (vii) um polipeptídeo de serina protease; ou (viii) um polipeptídeo ACC desaminase (1-aminociclopropano-1- carboxilato desaminase); (ix) uma amilase; ou (x) uma quitinase; ou (xi) qualquer combinação das mesmas.
9. MÉTODO OU COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 4 a 8, caracterizado pelo fato de que a composição compreende pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, pelo menos uma proteína de ligação a pelo de raiz, pelo menos uma tionina ou polipeptídeo tipo tionina, pelo menos um polipeptídeo de glucanase, pelo menos um polipeptídeo de serina protease, pelo menos um polipeptídeo de ACC desaminase, pelo menos uma amilase, pelo menos uma quitinase ou qualquer combinação dos mesmos.
10. MÉTODO OU COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 4 a 9, caracterizado pelo fato de que a composição compreende pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e em que: (a) o polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina é modificado quimicamente em seu terminal N ou C; e/ou (b) o polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina é modificado via reticulação ou ciclização; e/ou (c) o polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina é de uma bactéria Bacillus, uma Lysinibacillus, uma Paenibacillus, uma Aneurinibacillus ou qualquer combinação dos mesmos; e/ou (d) uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 226, 1–
225, 227–375, 526, 528, 530, 532, 534, 536, 538, 540, 541, 571–585, 587 e
589–603; e/ou
(e) uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 1-75, ou qualquer combinação das mesmas; e/ou
(f) o polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende um polipeptídeo N-terminal truncado e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo N-terminal truncado compreende SEQ ID NO: 76,
78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106,108, 109, 110,
112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142,
144, 146, 148, 150, 152, 154,156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 172, 174,
176, 178, 180, 182,184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206,
208, 210, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 224, 590, ou qualquer combinação dos mesmos; e/ou
(g) o polipeptíeo de flagelina ou associado à flagelina compreende um polipeptídeo C-terminal truncado e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo C-terminal truncado compreende SEQ ID NO: 77,
79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113,
115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 141, 143, 145, 147,
149, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 167, 169, 171, 173, 175, 177, 179,
181, 183, 185, 187, 189, 191, 201, 203, 205, 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219,
221, 223, 225 ou qualquer combinação dos mesmos; e/ou
(h) a sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 226, 289,
290, 291, 293, 294, 295, 300, 437, 526, 532, 534, 536, 538, 540, 571-585 e 587-603 ou qualquer combinação dos mesmos; e/ou
(i) a sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 226, 293, 295, 300, 540, 571-579 e 589-590 ou qualquer combinação dos mesmos; e/ou (j) a sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 591-603; e/ou (k) a sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 226-300, ou qualquer combinação das mesmas; e/ou (l) a sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 301-375 e 587 ou qualquer combinação das mesmas.
11. MÉTODO OU COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende SEQ ID NO: 226, 571 ou qualquer combinação das mesmas; e/ou a sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende SEQ ID NO: 301; e/ou o polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina é incorporado em um polipeptídeo não flagelina ou associado à flagelina ou proteína de comprimento total, em que a incorporação do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina resulta em elevada atividade de iniciação bioativa no polipeptídeo não flagelina ou associado à flagelina ou proteína de comprimento total.
12. MÉTODO OU COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 4 a 11, caracterizado pelo fato de que a composição compreende pelo menos um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina retro inverso e: (a) a composição compreende pelo menos um polipeptídeo Flg22 retro inverso e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo Flg22 retro inverso compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 376-450, 527, 531, 533, 535, 537 e 539; e/ou (b) a composição compreende pelo menos um polipeptídeo FlgII-28 retro inverso e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo FlgII-28 retro inverso compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 451-525 ou 588; e/ou (c) a composição compreende pelo menos um polipeptídeo Flg15 retro inverso e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo Flg15 retro inverso compreende SEQ ID NOs: 529 ou 586.
13. MÉTODO OU COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 4 a 12, caracterizado pelo fato de que: (a) a composição compreende pelo menos um RHPP e uma sequência de aminoácido do RHPP compreende qualquer uma de SEQ ID Nos: 604, 607, 608 e 745-755; e/ou (b) a composição compreende pelo menos um RI-RHPP e uma sequência de aminoácido do RI RHPP compreende qualquer uma de SEQ ID NO: 605, 609, 610 e 756-766; e/ou (c) a composição compreende pelo menos um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de tionina ou tipo tionina compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 620-719; e/ou (d) a composição compreende pelo menos um polipeptídeo de glucanase e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de glucanase compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 e 767-776; e/ou (e) a composição compreende pelo menos um polipeptídeo de quitinase e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de quitinase compreende SEQ ID 777 ou SEQ ID NO: 778; e/ou (f) a composição compreende pelo menos um polipeptídeo de amilase e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de amilase compreende SEQ ID NO: 734 ou SEQ ID NO: 735; e/ou (g) a composição compreende pelo menos um polipeptídeo de serina protease e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de serina protease compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 721, 722 ou 794-796; e/ou (h) a composição compreende pelo menos um polipeptídeo de ACC desaminase e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de ACC desaminase compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 723-730
14. MÉTODO OU COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que: (a) a composição compreende pelo menos um RHPP e uma sequência de aminoácido do RHPP compreende SEQ ID Nos: 604; e/ou (b) a composição compreende um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina e o polipeptídeo de tionina ou tipo tionina é fundido a uma sequência de alvo de floema para formar um polipeptídeo de fusão e uma sequência de aminoácido da sequência de alvo de floema compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 611-619 ou qualquer combinação das mesmas; e/ou (c) a composição compreende o polipeptídeo de serina protease e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de serina protease compreende qualquer uma de 722 e 794-796; e/ou (d) a composição compreende a ACC desaminase e uma sequência de aminoácido da ACC desaminase compreende SEQ ID NO: 730.
15. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o polipetídeo de tionina ou tipo tionina é fundido a uma sequência de alvo de floema tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 611 para formar um polipeptídeo de fusão tendo uma sequência de aminoácido compreendendo SEQ ID NO: 720.
16. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que a composição compreende dois ou mais polipeptídeos de glucanase, quitinase e/ou amilase e: (a) a composição compreende uma glucanase e uma amilase e uma sequência de aminoácido da glucanase compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 e 767-776 e uma sequência de aminoácido da amilase compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 734 e 735; ou (b) a composição compreende uma glucanase e uma quitinase e uma sequência de aminoácido da glucanase compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 e 767-776 e uma sequência de aminoácido da quitinase compreende SEQ ID NO: 777 ou 778.
17. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que a glucanase compreende uma β-1,3-glucanase.
18. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 4 a 17, caracterizado pelo fato de que pelo menos um dos polipeptídeos de A ou dos polipeptídeos de B compreende um polipeptídeo que (a) contém uma modificação química compreendendo acetilação, adição de ácido, acilação, ADP-ribosilação, adição de aldeído, adição de alquilamida, amidação, aminação, biotinilação, adição de carbamato, adição de clorometil cetona, fixação covalente de um nucleotídeo ou derivado de nucleotídeo, reticulação, ciclização, formação de ligação dissulfeto, desmetilação, adição de éster, formação de reticulações covalentes, formação de ligações dissulfeto cisteína-cisteína, formação de piroglutamato, formilação, gama-carboxilação, glicosilação, formação de âncora GPI, adição de hidrazida, adição de ácido hidroxâmico, hidroxilação, iodação, adição de lipídeo, metilação, miristoilação, oxidação, PEGuilação, processamento proteolítico,
fosforilação, prenilação, palmitoilação, adição de um marcador de purificação, adição de piroglutamil, racemização, selenoilação, adição de sulfonamida, sulfatação, adição de aminoácidos mediada por RNA de transferência para proteínas, ubiquitinação ou adição de ureia; (b) é uma variante tendo uma inserção, deleção, inversão, repetição, duplicação, extensão ou substituição de aminoácido dentro do aminoácido; (c) é parte de uma proteína de fusão; ou (d) contém uma sequência de reconhecimento de protease; ou (e) compreende ainda uma sequência núcleo.
19. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO de 18, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo contém uma modificação química compreendendo: (a) uma modificação N-terminal ou uma modificação C- terminal; ou (b) acetilação, amidação, reticulação ou ciclização; ou (c) uma substituição de aminoácido dentro do aminoácido da variante compreendendo substituição de um β-aminoácido, um D-aminoácido ou um aminoácido não natural.
20. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a composição compreende um polipeptídeo de fusão e: (a) o polipeptídeo de fusão compreende um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina ou um polipeptídeo deflagelina ou associado a flagelina retro-inverso e um polipeptídeo de assistência compreendendo um polipeptídeo de assinatura e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de assinatura compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 542-548, ou qualquer combinação das mesmas; ou (b) o polipeptídeo de fusão compreende um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina ou um polipeptídeo de flagelina ou associado a flagelina retro-inverso e um polipeptídeo de assistência compreendendo um polipeptídeo de triagem de âncora de sinal e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de triagem de âncora de sinal compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 549-562, ou qualquer combinação das mesmas.
21. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo compreende uma sequência de núcleo e uma sequência de aminoácido da sequência de núcleo compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 591-603 e em que a inclusão da sequência de núcleo no polipeptídeo aumenta a atividade de iniciação bioativa da composição.
22. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 4 a 21, caracterizado pelo fato de que a composição compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade para qualquer uma de SEQ ID NOs: 1–735, 745–787 e 794–797 e a composição tem atividadede inicação bioativa.
23. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 4 a 22, caracterizado pelo fato de que a composição compreende ainda um aminoácido ou isômero do mesmo, um ácido benzoico substituído ou não substituído ou derivado ou sal do mesmo, um ácido dicarboxílico ou derivado ou sal do mesmo, um benzodiatiazol, uma betaína, um homólogo de betaína, um análogo de betaína, uma prolina, homólogo de prolina, análogo de prolina, um bactericida, um inibidor da calose sintase ou qualquer combinação dos mesmos.
24. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que a composição compreende:
(a) um aminoácido e o aminoácido compreende cisteína, ácido β-amino butírico (BABA) ou combinações dos mesmos; e/ou
(b) um ácido benzoico substituído e o ácido benzoico substituído compreende ácido salicílico ou derivados ou sais do mesmo; e/ou
(c) um ácido dicarboxílico e o ácido dicarboxílico compreende ácido oxálico ou derivados ou sais do mesmo; e/ou
(d) um benzotiadiazol e o benzodiatiazol compreende benzo
(1,2,3)-tiadiazol-7-ácido carbotioico-S-metil éster; e/ou
(e) uma betaína e a betaína compreende glicina betaína,
glicina betaína aldeído, β-alanina betaína, cloridrato de betaína, cetil betaína,
prolina betaína, colina O-sulfato betaína, cocoamidopropil betaína, oleil betaína,
sulfobetaína, lauril betaína, octil betaína, caprilamidopropil betaína,
lauramidopropil betaína, isoestearamidopropil betaína ou uma combinação,
homólogo ou análogo de qualquer dos mesmos; e/ou
(f) um homólogo de betaína ou análogo de betaína em que o homólogo ou análogo de betaína compreende ectoína, colina, fosfatidilcolina,
acetilcolina, citidina difosfato colina, dimetiletanolamina, cloreto de colina,
salicilato de colina, glicerofosfocolina, fosfocolina, uma esfingomielina, bitartrato de colina, propio betaína, deanol betaína, homodeanol betaína, homoglicerol betaína, dietanol homobetaína, trietanol homobetaína ou uma combinação de qualquer um dos mesmos; e/ou
(g) uma prolina e a prolina compreende L-prolina, D-prolina,
hidroxiprolina, derivados de hidroxiprolina, prolina betaína ou uma combinação,
derivado, homólogo ou análogo de qualquer dos mesmos; e/ou
(h) um homólogo de prolina ou análogo de prolina e o homólogo de prolina ou análogo de prolina compreende α-metil-L-prolina, α- benzil-Lprolina, trans-4-hidroxi-L-prolina, cis-4-hidroxi-L- prolina, trans-3-hidroxi-
L-prolina, cis-3- hidroxi-L-prolina, trans-4-amino-L-prolina, 3,4- de-hidro-α-
prolina, ácido (2S)-aziridina-2-carboxílico, ácido (2S)-azetidina-2-carboxílico, ácido L- pipecólico, prolina betaína, 4-oxo-L-prolina, ácido tiazolidina-2- carboxílico, ácido (4R)- tiazolidina-4-carboxílico ou uma combinação de qualquer um dos mesmos; e/ou (i) um bactericida e o bactericida compreende óxido de cobre, hidróxido de cobre, sulfeto de cobre, sulfato de cobre, cobre de partículas finas, oxitetraciclina ou uma combinação de qualquer um dos mesmos; e/ou (j) um inibidor da calose sintase e o inibidor da calose sintase compreende 2-desoxi-D-glicose; e/ou (k) qualquer combinação das mesmas.
25. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 24, caracterizada pelo fato de que a composição compreende: (a) uma betaína e (i) a betaína compreende cloridrato de betaína ou glicina betaína ou (ii) a betaína é derivada de uma fonte de planta; ou (b) um bactericida e o bactericida compreende oxitetraciclina; ou (c) um inibidor da calose sintase compreendendo 2-desoxi-D- glucaose e um aminoácido compreendendo L-cisteína.
26. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 4 a 25, caracterizado pelo fato de que a composição compreende: (a) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e L- cisteína; ou (b) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e 2- desoxi-D-glicose; ou (c) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma ACC desaminase; ou
(d) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e ácido salicílico; ou
(e) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e ácido oxálico; ou
(f) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e um benzotiadiazol; ou
(g) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e
BABA; ou
(h) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma betaína; ou
(i) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma prolina; ou
(j) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma serina protease; ou
(k) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina; ou
(l) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma amilase; ou
(m) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma quitinase; ou
(n) um bactericida e pelo menos um de: 2-desoxi-D-glicose,
BABA, benzotiadiazol ou cisteína; ou
(o) uma serina protease; ou
(p) um polipeptídeo de tionina ou tipo tonina; ou
(q) uma serina protease e um polipeptídeo de tionina ou tipo tionina; ou (r) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma glucanase; ou
(s) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma glucanase e uma amilase; ou
(t) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase, uma amilase e 2-desoxi-
D-glicose; ou
(u) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase, uma amilase, 2-desoxi-D-glicose e cisteína; ou
(v) uma glucanase, uma amilase, 2-desoxi-D-glicose e cisteína; ou
(w) um polipeptídeo de glucanase e uma amilase; ou
(x) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase e uma quitinase; ou
(y) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase, uma quitinase, 2-desoxi-D-glicose; ou
(z) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase, uma quitinase, 2-desoxi-D-glicose e cisteína; ou
(aa) uma glucanase, uma quitinase, 2-desoxi-D-glicose e cisteína;
ou
(bb) uma glucanase e uma quitinase; ou
(cc) uma glucanase e uma serina protease; ou
(dd) um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina, uma glucanase e uma serina protease; ou
(ee) uma glucanase e um peptídeo RHPP ou peptídeo retro-
inverso RHPP; ou
(ff) um peptídeo RHPP ou peptídeo retro-inverso RHPP e uma betaína; ou (gg) um peptídeo RHPP ou peptídeo retro-inverso RHPP e uma prolina; ou
(hh) um peptídeo RHPP ou peptídeo retro-inverso RHPP e uma ACC desaminase.
27. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que (a) a composição compreende ainda um bactericida; e/ou (b) a glucanase nas composições (r)-(ee) compreende pelo menos uma β-1,3-glucanase e a sequência de aminoácido da β-1,3-glucanase compreende qualquer uma de SEQ ID NOs: 731-733 e 767- 776; ou (c) a composição compreende oxitetraciclina e 2-desoxi-D- glicose.
28. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que o bactericida compreende oxitetraciclina e/ou a sequência de aminoácido da β-1,3-glucanase compreende SEQ ID NO: 732 ou 772.
29. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 4 a 28, caracterizado pelo fato de que a composição compreende ainda um inibidor de succinato desidrogenase.
30. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o inibidor da succinato desidrogenase compreende bixafen.
31. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 4 a 30, caracterizado pelo fato de que a composição compreende: (a) pelo menos um polipeptídeo e a composição compreende de cerca de 0,0000005% em peso a cerca de 10% em peso, de cerca de 0,001% em peso a cerca de 5% em peso, ou de cerca de 0,005% em peso a cerca de 0,1% em peso do polipeptídeo com base no peso total da composição; e/ou
(b) pelo menos um composto indutor e a composição compreendem de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso, ou de cerca de 0,001% em peso a cerca de 95% em peso do composto indutor com base no peso total da composição; e/ou (c) dois ou mais compostos indutores e a composição compreende cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% do primeiro composto indutor e de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% do segundo composto indutor.
32. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo fato de que a composição compreende: (a) de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso, com base no peso total da composição, de um composto indutor compreendendo um inibidor da calose sintase, um aminoácido, ácido salicílico, ácido oxálico, uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol, um inibidor de succinato desidrogenase ou qualquer combinação dos mesmos; e/ou (b) de cerca de 0,001% em peso a cerca de 95% em peso, com base no peso total da composição, de um composto indutor compreendendo um bactericida.
33. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 4 a 32, caracterizado pelo fato de que a composição compreende ainda um agroquímico e/ou transportador.
34. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que (a) o agroquímico compreende um antibiótico, um biopesticida, um conservante, um agente tamponante, um agente umectante, um surfactante, um agente de revestimento, um monossacarídeo, um polissacarídeo, um agente abrasivo, um pesticida, um inseticida, um herbicida,
um nematicida, um bactericida, um fungicida, um miticida, um fertilizante, um bioestimulante, um osmoprotetor, um corante, um umectante, um aminoácido, um agente de controle biológico ou uma combinação dos mesmos; e/ou (b) o transportador compreende água, turfa, trigo, farelo, vermiculita, argila, solo pasteurizado, carbonato de cálcio, bicarbonato de cálcio, dolomita, gesso, bentonita, uma argila, um fosfato de rocha, um composto de fósforo, dióxido de titânio, húmus, talco, alginato, carvão ativado ou uma combinação dos mesmos.
35. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com a reivindicação 33 ou 34, caracterizado pelo fato de que a composição compreende: (a) de cerca de 0,0000005% em peso a cerca de 10% em peso do(s) polipeptídeo(s), de cerca de 0,01% a cerca de 99% em peso do agroquímico distinto do composto indutor e de cerca de 1 a cerca de 99,99% em peso de transportador com base no peso total da composição; ou (b) de cerca de 0,001% a cerca de 5% do(s) polipeptídeo(s), de cerca de 0,1% a cerca de 70% em peso do agroquímico e de cerca de 25 a cerca de 99,9% em peso de transportador com base no peso total da composição; ou (c) de cerca de 0,005% a cerca de 0,1% do(s) polipeptídeo(s), de cerca de 0,1% a cerca de 60% em peso do agroquímico e de cerca de 40 a cerca de 99,8% em peso de transportador com base no peso total da composição.
36. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato de que a composição compreende ainda de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso ou de cerca de 0,001% em peso a cerca de 95% em peso com base no peso total da composição de pelo menos um composto indutor.
37. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pelo fato de que a composição compreende pelo menos dois compostos indutores e em que a composição compreende de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso do primeiro composto indutor, de cerca de 0,000001% em peso a cerca de 95% em peso do segundo composto indutor, de cerca de 0,01% a cerca de 80% em peso do agroquímico distinto do composto indutor e de cerca de 5 a cerca de 99% em peso de transportador com base no peso total da composição.
38. COMPOSIÇÃO OU MÉTODO, de acordo com a reivindicação 36 ou 37, caracterizado pelo fato de que a composição compreende: (a) de cerca de 0,000001% em peso a 95% em peso de um composto indutor compreendendo um inibidor da calose sintase, um aminoácido, ácido salicílico, ácido oxálico, uma betaína, uma prolina, um benzotiadiazol, um inibidor de succinato desidrogenase ou qualquer combinação dos mesmos; e/ou (b) de cerca de 0,001% em peso a cerca de 95% em peso de um composto indutor compreendendo um bactericida.
39. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 ou 8, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) aplicar o polipeptídeo isolado das reivindicações 2 ou 3 à planta ou parte de planta; ou (b) aplicar o polipeptídeo isolado compreendendo a β-1,3, glucanase à planta ou parte de planta.
40. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 e 9 a 39, caracterizado pelo fato de que a doença a ser tratada compreende Huanglongbing (HLB), infecções por Canditus (Ca.) Liberibacter, doença asiática dos citros, ferrugem asiática da soja, podridão do caule de
Sclerotinia, bolor fuliginoso, doença de Canker dos citros, ferrugem das folhas de Cercospora, uma bactéria que causa doença ou um fungo que causa doença
41. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que (a) a bactéria que causa doença compreende ferrugem bacteriana da folha, podridão bacteriana do caule, mancha bacteriana da folha, queimadura da folha bacteriana, podridão do topo bacteriana, faixa bacteriana, mancha de chocolate, murcha e ferrugem bacteriana de Goss, mancha de Holcus, bainha roxa da folha, podridão da semente, ferrugem das mudas, doença de Stewart (murcha bacteriana), enfezamento do milho, Fire Blight, doença de Pierce, clorose variegada dos citros, estria bacteriana da folha, doença do ponto bacteriano, podridão do cacho, explosão da flor bacteriana, mancha da bolha, explosão bacteriana, ferrugem da noz, doença do sangue da banana, cancro cítrico, Pseudomonas syringae ou uma combinação das mesmas.
(b) o fungo causando doença compreende Mancha de alternaria, Antracnose, Praga da antracnose, Praga da folha de antracnose, Podridão do caule de antracnose, Doença da sarna da maçã, Ferrugem asiática da soja, Podridão de aspergillus, Aspergillus, podridão amarga, doença da raia da folha preta, Perna preta, Doença da vagem preta, Sigatoka preta, Mancha preta, Mancha da flor, Botrytis, Mancha marrom, Podridão marrom, Mancha da folha de cercospora, Mancha da folha de Cercospora, Cercosporiose, Podridão do carvão, Podridão negra do citro, Mancha negra do citro, cancro do caule do cacau, ferrugem da folha do café, Ferrugem do café, Mancha do Corynespora, Mancha foliar de Corynespora, doença de corineum, podridão da coroa, amortecimento, die-back, Mancha do dólar, Míldio Downy, Mancha precoce, Mancha foliar do olho de sapo, Podridão da fruta, Mancha da cabeça de Fusarium, Mancha de Fusarium, Mancha de mudas de Fusarium, Murcha de Fusarium, Mancha da folha de Glomerella, Ferrugem da folha da uva, Mancha cinzenta da folha, Bolor cinzento, Mancha gomosa, Mancha gomosa do caule, Podridão da casca, Mancha Johnson, Mancha tardia, Mancha da bainha da folha, mancha da folha, Mancha da folha da alface, Doença de malformação da manga, Crosta da manga, Declínio repentino da manga, mela, podridão nobre, ferrugem das folhas do milho do norte, ferrugem do viveiro, doença do Panamá, doença do Panamá raça tropical 4, Ondulação da folha do pêssego, mancha de Phaeosphaeria, vagem de Phomopsis, podridão da coroa de Phytopthora, podridão do pé de Phytopthora, podridão da raiz de Phytopthora, murcha de muda de Phytopthora, doença pitting, ferrugem de polimento, queda de fruto pós-floração, podridão pós-colheita da extremidade do caule, Mildio em pó, mancha roxa de semente, ferrugem de mudas de Pythium, ferrugem de mudas de Rhizoctonia, Crosta de arroz, pescoço podre de arroz, ferrugem de mudas de arroz, ferrugem de bainha de arroz, podridão de raiz, Ferrugem, sarna, podridão do caule de Sclerotinia, ferrugem da semente, decadência da semente, podridão da semente, ferrugem da muda, podridão da muda, podridão marrom da Septoria, Mancha da folha da Septoria, Mancha tritici Septoria, Buraco de tiro, Bolor da neve, Bolor de fuligem, Podridão das folhas do milho do sul, cancro do caule da soja, mancha da folha salpicada, mancha de Stagonospora nodorum, podridão do caule, doença de sangria do caule, podridão do caule, podridão da extremidade do caule, síndrome da morte súbita, murcha repentina, podridão azeda de verão, mancha-alvo, top-kill, mofo branco, Doença da vassoura de bruxa, amarelo sigatoka ou uma combinação de qualquer uma das mesmas.
42. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 40 ou 41, caracterizado pelo fato de que o método compreende: (a) aplicar uma glucanase e uma serina protease à planta,
parte de planta ou meio de planta; (b) aplicar a composição como uma lavagem de fruto ao exterior de um fruto da planta e o método compreende ainda reduzir mofo e/ou prevenir germinação de esporo de fungo no fruto;
43. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 e 9 a 42, caracterizado pelo fato de que proteger a planta ou parte de planta contra doença compreende tratamento profilático, tratamento, prevenção e progressão de doença diminuída sobreou na planta ou parte de planta.
44. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 43, caracterizado pelo fato de que compreende ainda: (a) prevenir ou reduzir deposição de calose no ou em torno do plasmodesmata do floema em uma árvore infectada com Canditus (Ca.) Liberibacter; (b) diminuir queda de fruto de uma planta infectada com uma doença; (c) reduzir tensão abiótica na planta ou parte de planta e a composição compreende uma prolina, uma betaína, uma ACC desaminase ou qualquer combinação das mesmas; (d) aumentar produtividade de fruto, tamanho de fruto e qualidade de suco e a composição compreende oxitetraciclina e 2-DGG; (e) aumentar rendimento de uma colheita e a composição compreende um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma ACC desaminase.
45. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que o método compreende: (a) diminuir queda de fruto de uma planta infectada com uma doença e a doença compreende infecção por Canditus (Ca.) Liberibacter e/ou
Huanglongbing (HLB); ou (b) aumentr rendimento de uma colheita e a composição compreende ACC desaminase e um polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina e uma sequência de aminoácido do polipeptídeo de flagelina ou associado à flagelina compreende SEQ ID NO: 226.
46. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 45, caracterizado pelo fato de que: (a) o polipeptídeo isolado ou a composição é aplicada exogenamente à planta, à parte de planta ou ao meio de crescimento de planta; e/ou (b) o polipeptídeo isolado ou a composição é aplicada endogenamente à planta ou à parte de planta; e/ou (c) aplicar sequencialmente um ou mais componentes da composição à planta ou parte de planta.
47. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo fato de que (a) o método compreende aplicar sequencialmente um ou mais dos polipeptídeos da composição e um ou mais dos compostos indutores da composição para a planta ou parte de planta; e/ou (b) as aplicações sequenciais são feitas dentro de 100 horas, dentro de 72 horas, dentro de 48 horas, dentro de 24 horas, dentro de 12 horas ou dentro de 4 horas; e/ou (c) as aplicações sequenciais são aplicadas exogenamente à planta, à parte de planta ou ao meio de crescimento de planta; e/ou (d) as aplicações sequenciais são aplicadas endogenamente à planta ou à parte de planta.
48. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 47, caracterizado pelo fato de que:
(a) a parte de planta compreende uma célula, uma folha, um galho, um tronco, um caule, uma flor, uma folhagem, um órgão floral, uma fruta, pólen, um vegetal, um tubérculo, um cormo, um bulbo, um pseudobulbo, um vagem, uma raiz, uma bola de raiz, um estoque de raiz, um rebento, uma semente, um sistema vascular, uma vasculatura ou uma videira; (b) o peptídeo isolado ou a composição é aplicada a uma superfície da planta, uma folhagem da planta, ao solo em torno da planta ou uma superfície de uma semente da planta; (c) o peptídeo isolado ou a composição é aplicada à superfície de uma semente e a planta ou parte de planta é cultivada da semente; (d) o peptídeo isolado ou a composição é aplicada como uma aplicação foliar; (e) o peptídeo isolado ou a composição é injetada em um ramo, tronco, caule, sistema vascular ou raiz da planta; ou (f) o peptídeo isolado ou a composição é injetada em um tronco ou sistema vascular da planta.
49. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 48, caracterizado pelo fato de que: (a) a planta é uma árvore ou videira; e/ou (b) a planta é uma planta frutífera ou planta vegetal e o método fornece elevado rendimento de frutos ou vegetais; e/ou (c) a planta é uma planta cítrica e o método reduz sintomas de doença na planta cítrica e/ou aumenta rendimento de fruto e/ou melhora a qualidade e/ou quantidade do suco obtido do fruto da planta; e/ou (d) a planta compreende uma árvore cítrica, uma laranja, um limão, uma lima, uma toranja, uma tangerina, um pomelo, uma tangerina, um kumquat, um tangelo, um kiwi ou qualquer variedade, híbrido ou cruzamento dos mesmos; e/ou
(e) a planta é uma cultura em linha; e/ou (f) a planta compreende milho ou soja.
50. SEMENTE, caracterizada pelo fato de que é revestida com a composição de qualquer uma das reivindicações 1, 4–6 e 9-38 ou o peptídeo de qualquer uma das reivindicações 2 e 3.
BR112021014467-6A 2019-01-23 2020-01-22 Composições para iniciação bioativa de uma planta, peptídeo isolado, método para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta, método para aumentar teor de suco e semente BR112021014467A2 (pt)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962796010P 2019-01-23 2019-01-23
US62/796,010 2019-01-23
PCT/US2020/014591 WO2020154387A1 (en) 2019-01-23 2020-01-22 Compositions for treating citrus disease and promoting yield increase in row crops

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BR112021014467A2 true BR112021014467A2 (pt) 2021-09-21

Family

ID=71735800

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BR112021014467-6A BR112021014467A2 (pt) 2019-01-23 2020-01-22 Composições para iniciação bioativa de uma planta, peptídeo isolado, método para aumentar crescimento, rendimento, saúde, longevidade, produtividade e/ou vigor de uma planta, método para aumentar teor de suco e semente

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20200255851A1 (pt)
EP (1) EP3914068A4 (pt)
CN (1) CN113395898A (pt)
AR (1) AR119678A1 (pt)
AU (1) AU2020210909A1 (pt)
BR (1) BR112021014467A2 (pt)
CL (1) CL2021001911A1 (pt)
CO (1) CO2021010989A2 (pt)
IL (1) IL285081A (pt)
MX (1) MX2021008773A (pt)
WO (1) WO2020154387A1 (pt)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112760237B (zh) * 2020-12-08 2021-10-26 广东省农业科学院果树研究所 一株对柑橘木虱具强致病力的枝状枝孢霉菌株及其应用
US20230134724A1 (en) * 2021-11-01 2023-05-04 Thomas D. Johnson Antimicrobial compositions and methods for treating plant diseases
CN114527179B (zh) * 2021-12-31 2024-03-05 西安理工大学 一种花状核壳结构的多元复合硫化物纳米粉体及制备方法
WO2023225459A2 (en) 2022-05-14 2023-11-23 Novozymes A/S Compositions and methods for preventing, treating, supressing and/or eliminating phytopathogenic infestations and infections
WO2023240208A1 (en) * 2022-06-09 2023-12-14 Invaio Sciences, Inc. Controlling citrus greening in citrus plants using oxytetracycline
CN115820686B (zh) * 2022-08-22 2023-09-12 西南大学 一种柑橘CsGSTU18基因及其应用
CN115536465B (zh) * 2022-10-08 2023-07-18 广东石油化工学院 一种荔枝种植用生物肥料及其制备方法
CN115960777B (zh) * 2022-12-06 2023-09-12 江苏省中国科学院植物研究所 一株假真菌样芽孢杆菌及其在蔬菜疫病防治中的应用
CN116376929A (zh) * 2023-03-21 2023-07-04 安徽农业大学 Cs-miR397a靶定CsLAC1基因在调控茶树轮斑病菌敏感性中的应用
CN116920007A (zh) * 2023-08-04 2023-10-24 上海应用技术大学 一种低共熔溶剂提取莴苣叶黄酮的方法
CN117770261A (zh) * 2023-12-26 2024-03-29 山东福瑞达生物科技有限公司 一种四氢嘧啶在促进苹果果实着色上的应用
CN117859751A (zh) * 2023-12-29 2024-04-12 华中农业大学 1-羟基-2-哌啶羧酸在防治柑橘黄龙病或/和青霉病中的应用

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5631007A (en) * 1990-03-12 1997-05-20 Ciba-Geigy Corporation Anti-pathogenically effective compositions comprising lytic peptides and hydrolytic enzymes
DE102004024184A1 (de) * 2004-05-13 2006-01-26 Basf Plant Science Gmbh Neue Nukleinsäuresequenzen und deren Verwendung in Verfahren zum Erreichen einer Pathogenresistenz in Pflanzen
CA2918709C (en) * 2013-07-22 2021-07-13 Sumitomo Chemical Company, Limited Plant fungal disease control composition and its use
BR122023020910A2 (pt) * 2014-09-17 2024-01-30 Spogen Biotech Inc Método para fornecimento de proteínas ou peptídeos a um animal
AR107895A1 (es) * 2016-03-16 2018-06-28 Spogen Biotech Inc Métodos para promover la salud de las plantas usando enzimas libres y microorganismos que sobreexpresan enzimas
CA3069733A1 (en) * 2017-07-20 2019-01-24 Spogen Biotech Inc. Bioactive polypeptides for improvements in plant protection, growth and productivity
CN110590917B (zh) * 2019-10-15 2021-04-16 成都绿信诺生物科技有限公司 一种提高植物抗病性的铜绿假单胞菌鞭毛蛋白及其编码基因和应用

Also Published As

Publication number Publication date
EP3914068A4 (en) 2023-04-19
IL285081A (en) 2021-09-30
CL2021001911A1 (es) 2022-01-14
EP3914068A1 (en) 2021-12-01
CN113395898A (zh) 2021-09-14
AR119678A1 (es) 2022-01-05
AU2020210909A1 (en) 2021-09-16
US20200255851A1 (en) 2020-08-13
CO2021010989A2 (es) 2021-08-30
MX2021008773A (es) 2021-11-12
WO2020154387A1 (en) 2020-07-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11046735B2 (en) Bioactive polypeptides for improvements in plant protection, growth and productivity
US20200255851A1 (en) Compositions for treating citrus disease and promoting yield increase in row crops
JP6923437B2 (ja) 組換えバチルス細胞および別の生物農薬を含む組成物
KR102667703B1 (ko) 재조합 바실루스 세포 및 살진균제를 포함하는 조성물
BR112020004812A2 (pt) métodos e composições para o controle biológico de patógenos de plantas
EA022116B1 (ru) Пестицидные смеси, включающие изоксазолиновые производные и инсектицид
TWI714542B (zh) 殺線蟲組合物及其用途
WO2013102189A1 (en) Method for increasing plant yield, and yield improving compositions
EA030236B1 (ru) Тройные фунгицидные и пестицидные смеси
US20120077673A1 (en) Fungicidal Compositions and Methods of Use
TWI694769B (zh) 殺線蟲劑組合物及其用途
RU2772730C2 (ru) Биоактивные полипептиды для улучшения защиты, роста и продуктивности растения
RU2772730C9 (ru) Биоактивные полипептиды для улучшения защиты, роста и продуктивности растения
EA030020B1 (ru) Двойные фунгицидные смеси
AU2015271938B2 (en) Fungicidal compositions and methods of use
BR112019020809A2 (pt) composições agrícolas, kits, composições ou kits e métodos para aumentar a produtividade de cultura de uma planta