BR112017018637B1 - Composto e seus usos, composição farmacêutica e seus usos e kit para tratamento e prevenção de doenças neoplásicas e não neoplásicas proliferativas - Google Patents

Composto e seus usos, composição farmacêutica e seus usos e kit para tratamento e prevenção de doenças neoplásicas e não neoplásicas proliferativas Download PDF

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Antoine Beret
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Abstract

2,4-DIAMINO-QUINOLINA SUBSTITUÍDOS COMO NOVOS AGENTES ANTICÂNCER. A presente invenção refere-se a novos compostos 2-amino-4-amino-quinolina primário secundário, o seu fabrico, composições farmacêuticas compreendendo-os e sua utilização como medicamentos. Os compostos ativos da presente invenção são úteis para o tratamento e prevenção de doenças proliferativas neoplásicas e não neoplásicas.

Description

Campo de invenção
[001] A presente invenção refere-se aos novos derivados de 2-primários amino-4-secundários amino-quinolina secundários, sua fabricação, composições farmacêuticas compreendendo e sua utilização como medicamentos. Os compostos ativos da presente invenção são úteis para o tratamento e prevenção de doenças neoplásicas e não neoplásicas proliferativas.
Fundamentos da invenção
[002] A descoberta de fármacos de novos agentes anticancerígenos mudou-se recentemente do ensaio baseado em células para uma abordagem in vitro mais focada em proteínas expressas bem caracterizadas, isoladas e transfectadas assistidas de alvos com capacidade para fármaco. Este paradigma de descoberta de fármaco direcionado para proteína(s) está bem descrito na técnica com o grande esforço produzido no campo de descoberta de fármacos do projeto racional de inibidores da quinase humana, permitindo explorar o cinome humano. Na verdade, a quinase humana pode ser mutada e a desregulamentação quinase, geralmente, ocorre na transformação maligna, no crescimento e na evolução final da metástase dos cânceres humanos. Esta implicação de quinase no desenvolvimento e na proliferação de cânceres está bem estabelecida, por exemplo, leucemia, linfoma, câncer de pulmão de células não pequenas, melanoma, cólon, mama, rim, hepatocarcinoma. Hoje em dia, apesar deste grande esforço para atingir disfunções de quinase humana em alguns tipos de câncer, o avanço clínico do uso do inibidor da quinase na terapia anticancerígena não está obviamente associado à cura ou remissão, e vários tipos de câncer parecem permanecer naturalmente resistentes ao uso clínico de inibidores de quinase (por exemplo, carcinoma hepatocelular). Além disso, os inibidores da quinase podem selecionar in vivo algumas cepas mutantes e resistentes ou as células transformadas podem encontrar caminhos igualmente compensadores. Neste contexto, decidimos levar em consideração todo o compartimento celular e um ambiente de cultura celular com o desenvolvimento de um ensaio de triagem celular fenotípica não desejável. Além disso, a compreensão molecular e a descrição molecular da transformação celular, crescimento do câncer e evolução da metástase ainda permanecem em constante desenvolvimento com, por exemplo, a descrição recente do conceito de células tronco de câncer (CSCs) ou células iniciadoras de tumores (TICs). Efeitos inesperados na triagem celular podem sugerir outros alvos ou interações específicas para a descoberta de um novo alvo com capacidade para fármaco. Portanto, o desenvolvimento de novos agentes anticancerígenos ainda continua sendo um desafio único com resultados imprevisíveis e um lugar para a descoberta de compostos novos e inovadores.
[003] Os inventores prepararam uma nova série de diversidade orientada para a biblioteca de compostos 2- primários amino-2-secundários de amino-arilquinolina que foi rastreada contra um painel de linhas celulares de câncer humano (MOLM14, KG-1, MV4-11, A375, HCT116, HepG2, huh-7, MDA-MB-231, CAKI-1, 786-O) e células primárias de câncer derivadas do paciente, permitindo descobrir novos agentes anticancerígenos. Além disso, esta classe de compostos mostra igualmente uma atividade adicional contra células tronco de câncer humano (CSCs) que são amplamente incriminadas na recorrência e a recaída de câncer após terapia anticancerígenos. Uma cavidade descrita no ensaio ALDH na arte foi utilizado como marcador funcional de células de tronco de câncer para descrever a atividade contra CSCs (Greve, B. et al., Cytometry A 2012 (81) 284-293, Liu, S. et al. PLoS One 2013 (25) e81050, Ran, D. et al. Exp. Hematol. 2009 (37) 1423-1434, Cheung, A. M. et al. Leukemia 2007 (21) 1423-1430, Pearce, D.J. et al., Stem Cells 2005 (23) 752760).
[004] Por conseguinte, é um objetivo da presente invenção proporcionar agentes ativos para prevenir ou inibir a proliferação celular numa variedade de organismos e proporcionar métodos para a sua síntese.
[005] É outro objetivo da presente invenção proporcionar uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de agentes ativos da invenção, sozinha, nem em combinação com outros agentes ativos, e um adjuvante, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.
[006] É outro objetivo da presente invenção proporcionar agentes ativos para utilização em terapia.
[007] É outro objetivo da presente invenção proporcionar um método para o tratamento e/ou prevenção de uma doença proliferativa e/ou neoplásica.
[008] É outro objetivo da presente invenção proporcionar um método para inibir o crescimento ou a diferenciação de uma célula tronco de Câncer (CSC), uma célula iniciadora do tumor, uma célula semelhante ao mesenquimal associada ao câncer, uma célula cancerígena mesenquimal ou uma célula mesenquimal.
Sumário da invenção
[009] A presente invenção proporciona o composto de fórmula (I) em que R1 é escolhido de um aril C6-C10 substituído ou não por R9; um anel heteroaril de 5 a 8 membros compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionados de O, N e S substituídos ou não por R9; um heteroaril fundido, como definido, compreendendo de 8 a 13 átomos incluindo 1, 2, 3, 4 heteroátomos selecionados de O, N e S e compreendendo pelo menos 2 átomos de carbono substituídos ou não por R9; Lw é escolhido de um alquil (C1-C10) opcionalmente substituído; um alquil (C1-C10) linear ou ramificado substituído por R4; um cicloalquil (C3-C10) opcionalmente substituído; um cicloalquenil (C5-C10) opcionalmente substituído; um alquenil (C3-C10) opcionalmente substituído; um alquinil (C3-C10) opcionalmente substituído; C=O; SO; SO2; (C=O)-NR8; (C=O)-O; (C=O)-O-alquil(C1-C4); SO2-NR8; NR8; em que R4 é escolhido de H; um alquil (C1-C10) opcionalmente substituído; um alquenil (C3-C10) opcionalmente substituído; um alquinil (C3-C10) opcionalmente substituído; um cicloalquil (C3-C10) opcionalmente substituído; um cicloalquenil (C5-C10) opcionalmente substituído; um cicloalquinil (C8-C10) opcionalmente substituído; um aril (C6-C10) opcionalmente substituído; um anel heteroaril de 5 a 8 membros ou um heteroaril fundido como definido compreendendo de 8 a 13 átomos incluindo 1, 2, 3, 4 heteroátomos selecionados de O, N e S e compreendendo pelo menos 2 átomos de carbono substituídos ou não por um ou mais grupos substituintes selecionados independentemente de hidrogênio, átomo de halogênio, alquil (C1-C10) substituído por um ou mais átomo(s) de halogênios, alcóxi(C1-C10), hidroxil, ciano, nitro, carbóxi, NR8R8', um anel de 4 a 9 membros saturado ou insaturado compreendendo 1, 2 ou até 3 heteroátomos independentemente selecionados a partir de O, N e S; R2 é selecionado de NR5R6; R3 é escolhido de um átomo de hidrogênio; um átomo de halogênio; um alquil(C1-C10) linear ou ramificado substituído ou não por um ou mais átomo(s) de halogênio, hidroxil, alcóxi, -NR5R6; um alquenil (C2-C10); um alquinil (C2-C10); um cicloalquil (C3-C10); um cicloalquenil (C5-C10); um cicloalquinil (C8-C10); um alcóxi (C1-C10); um hidroxil; um nitro; um ciano; um NR5R6; um O-(R7); um (CO)-R7; um (CO)-O- R7; um (CO)-NR5R6; um O-(CO)-R7; um O-(CO)-NR5R6; um NR5-(CO)- R7; um NR5-(CO)-OR7; um NR5-(CO)-NR5R6; um -(O-CH2CH2-)m-OR11; um -(O-CH2CH2-)m-NR11R11'; um SO2-R7; um NR5-SO2-R7; um SO2-NR5R6; um NR5-alquil-(C2-C6)-NR5R6; um aril opcionalmente substituído; um benzil opcionalmente substituído; um heteroaril opcionalmente substituído de um anel de 5 a 8 membros compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionados de O, N e S; um heteroaril fundido opcionalmente substituído, como definido, compreendendo de 8 a 13 átomos incluindo 1, 2, 3, 4 heteroátomos selecionados de O, N e S e compreendendo pelo menos 2 átomos de carbono; um heterociclil opcionalmente substituído de um anel de 4 a 9 membros saturado ou insaturado compreendendo 1, 2 ou até 3 heteroátomos independentemente selecionados a partir de O, N e S; R5 e R6 são escolhidos independentemente de um hidrogênio; um alquil (C1-C10) opcionalmente substituído; um alquenil (C3-C10) opcionalmente substituído; um alquinil (C3-C10) opcionalmente substituído; um cicloalquil (C3-C10) opcionalmente substituído; um cicloalquenil (C5-C10) opcionalmente substituído; um cicloalquinil (C8-C10) opcionalmente substituído; um (CO)-R7; um (CO)-O-R7; um (CO)- NR8R8'; um SO2-R7; um SO2-NR8R8'; um alquil (C1-C10) substituído com NR8R8'; um cicloalquil (C3-C10) substituído com NR8R8'; um aril opcionalmente substituído; um benzil opcionalmente substituído; um anel heteroaril de 5 a 8 membros opcionalmente substituído compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionados de O, N e S; um heterociclil opcionalmente substituído de um anel de 4 a 9 membros saturado ou insaturado compreendendo 1, 2 ou até 3 heteroátomos independentemente selecionados a partir de O, N e S; ou R5 e R6 estão ligados em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados covalentemente para formar um grupo heterocíclico formando um anel de 4 a 9 membros que pode conter 1, 2 ou 3 heteroátomos adicionais selecionados a partir de O, N e S; R7 e R7' são escolhidos independentemente de um hidrogênio; um alquil (C1-C10) opcionalmente substituído; um alquenil (C3-C10) opcionalmente substituído; um alquinil (C3-C10) opcionalmente substituído; um cicloalquil (C3-C10) opcionalmente substituído; um cicloalquenil (C5-C10) opcionalmente substituído; um cicloalquinil (C8-C10) opcionalmente substituído; um alquil C1-C10 linear ou ramificado substituído com NR8R8'; um aril (C6-C10) opcionalmente substituído, um benzil opcionalmente substituído, um anel heteroaromático de 5 a 8 membros opcionalmente substituído compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionados de O, N e S; R8 e R8' são escolhidos independentemente de um hidrogênio; um alquil (C1-C10) opcionalmente substituído; um alquenil (C3-C10) opcionalmente substituído; um alquinil (C3-C10) opcionalmente substituído; um cicloalquil (C3-C10) opcionalmente substituído; um cicloalquenil (C5-C10) opcionalmente substituído; um cicloalquinil (C8-C10) opcionalmente substituído; ou R8 e R8' estão ligados em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados covalentemente para formar um grupo heterocíclico formando um anel de 4 a 9 membros que pode conter 1, 2 ou 3 heteroátomos adicionais selecionados de O, N e S; R9 é selecionado independentemente de um hidrogênio; um átomo de halogênio; um alquil (C1-C10) opcionalmente substituído; um alquil (C1-C10) linear ou ramificado substituído por um ou mais átomos de halogênio, um hidroxil, um alcóxi; um alquenil (C2-C10) opcionalmente substituído; um alquinil (C2-C10) opcionalmente substituído; um cicloalquil (C3-C10) opcionalmente substituído; um cicloalquenil (C5-C10) opcionalmente substituído; um cicloalquinil (C8-C10) opcionalmente substituído; um alcóxi (C1-C10) opcionalmente substituído; um hidroxil; um nitro; um ciano; um NR5R6, um (CO)-R7; um (CO)-O-R7; um (CO)-NR5R6; um O-(CO)-R7; um O-(CO)- NR5R6; um NR5-(CO)-R7; um NR5-(CO)-OR7; um NR5-(CO)-NR5R6; um SO2-R7; um NR5-SO2-R7; um SO2-NR5R6; um alquil (C1-C10) substituído com NR5R6; um NR5-(C2-C10)-alquil-NR5R6; um -(O- CH2CH2-)m-OR11; um -(O-CH2CH2-)m-NR11R11'; um aril (C6-C10) opcionalmente substituído; um benzil opcionalmente substituído; um anel heteroaril de 5 a 8 membros opcionalmente substituído compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionados de O, N e S; um grupo heterociclil opcionalmente substituído que forma um anel de 4 a 9 membros que pode conter 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionados de O, N e S; um -NR5R10; a -O-R10; R10 é escolhido independentemente de um hidrogênio; um (C6-C12)-aril substituído ou não por R12; um benzil substituído ou não por R12; um heteroaril de um anel de 5 a 8 membros compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionados de O, N e S substituídos ou não por R12; um heteroaril fundido definido como compreendendo de 8 a 13 átomos incluindo 1, 2, 3, 4 heteroátomos selecionados de O, N e S e compreendendo pelo menos 2 átomos de carbono substituídos ou não por R12; um heterociclil formando um anel de 4 a 9 membros que pode conter 0, 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionados de O, N e S substituídos ou não por R12; R11 e R11' são independentemente escolhidos a partir de um átomo de hidrogênio; um alquil (C2-C10) opcionalmente substituído; um alquenil (C3-C10) opcionalmente substituído; um alquinil (C3-C10) opcionalmente substituído; um cicloalquil (C3-C10) opcionalmente substituído; um cicloalquenil (C5-C10) opcionalmente substituído; um cicloalquinil (C8-C10) opcionalmente substituído; um alquil (C2-C10) linear ou ramificado substituído ou não por um ou mais átomos de halogênio; ou R11 e R11' estão ligados em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados covalentemente para formar um grupo heterocíclico formando um anel saturado ou insaturado de 4 a 9 membros que pode conter 1, 2 ou 3 heteroátomos adicionais selecionados a partir de O, N e S; R12 é escolhido de um átomo de hidrogênio; um átomo de halogênio; um alquil (C1-C10) linear ou ramificado substituído ou não por um ou mais átomos de halogênio, hidroxil, alcóxi, NR11R11'; um alquenil (C2-C10); um alquinil (C2-C10); um cicloalquil (C3-C10); um cicloalquenil (C5-C10); um cicloalquinil (C8-C10); um alcóxi (C1-C10); um hidroxil; um nitro; um ciano; um NR11R11'; um O-(R7); um (CO)-R7; um (CO)- O-R7; um (CO)-NR11R11'; um O-(CO)-R7; um O-(CO)-NR11R11'; um NR11-(CO)-R7; um NR11-(CO)-OR11'; um NR11-(CO)-NR11R11'; um -(O- CH2CH2-)m-OR11; um -(O-CH2CH2-)m-NR11R11'; um SO2-R7; um NR5-SO2- R7; um SO2-NR11R11'; um NR11-alquil-(C2-C6)-NR11R11'; um aril opcionalmente substituído; um benzil opcionalmente substituído; um heteroaril opcionalmente substituído de um anel de 5 a 8 membros compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionados de O, N e S; um heteroaril fundido opcionalmente substituído, como definido, compreendendo de 8 a 13 átomos incluindo 1, 2, 3, 4 heteroátomos selecionados de O, N e S e compreendendo pelo menos 2 átomos de carbono; um heterociclil opcionalmente substituído de um anel de 4 a 9 membros saturado ou insaturado compreendendo 1, 2 ou até 3 heteroátomos independentemente selecionados a partir de O, N e S; n pode representar um inteiro igual que pode ter qualquer um dos valores 0, 1, 2, 3 ou 4; m pode representar um inteiro igual que pode ter qualquer um dos valores 1, 2 ou 3; w pode representar um inteiro igual que pode ter qualquer um dos valores 0 ou 1; em que o termo "opcionalmente substituído" significa opcionalmente substituído com um ou mais substituintes escolhidos independentemente de um átomo de halogênio, um alquil (C1-C10) linear ou ramificado substituído ou não por um ou mais átomos de halogênio, um alqenil (C2-C10) linear ou ramificado substituído ou não por um ou mais átomos de halogênio, um alquinil (C2-C10) linear ou ramificado substituído ou não por um ou mais átomos de halogênio, um (C3-C10) cicloalquil substituído ou não por um ou mais átomos de halogênio, um cicloalquenil (C5-C10) substituído ou não por um ou mais átomos de halogênio, um cicloalquinil (C8-C10) substituído ou não por um ou mais átomos de halogênio, um alcóxi (C1-C10), um hidroxil, um ciano, um nitro, um NR8R8' (com R8 e R8' como descrito acima); e qualquer sal farmaceuticamente aceitável, solvato, isômeros, estereoisômeros ou misturas de estereoisômeros, solvatos ou pró-fármacos destes.
[0010] Em algumas modalidades específicas, a invenção proporciona um composto escolhido entre: 2-(4-clorofenilamino)-4-(4-terc-butilaminopiperidin- 1-il)-quinolina de fórmula (Ia) (1-5) 2-(4-clorobenzilamino)-4-(4-terc-butilaminopiperidin- 1-il) -quinolina de fórmula (Ib) (2-2) 2-[3-metil-4-(pirimidin-2-ilamino)fenilamino]-4-(4- terc-butilaminopiperidin-1-il)-quinolina (3-4) de fórmula 2-{4-[4-(piridin-3-il)-2-pirimidinamino]-3-metil- fenilamino}-4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)-quinolina (4-2) de fórmula (Identidade) ou um seu sal, solvato ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável.
[0011] Em algumas outras modalidades específicas, a invenção proporciona um composto escolhido a partir de sal cloridrato de 2-(4-clorofenilamino)-4-(4-terc- butilaminopiperidin-1-il)-quinolina (1-6), sal cloridrato de 2-(4-clorobenzilamino)-4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)- quinolina (2-3), sal cloridrato de 2-[3-metil-4-(pirimidin- 2-ilamino)fenilamino]-4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)- quinolina (3-5), sal cloridrato de 2-{4-[4-(piridin-3-il)- 2-pirimidinamino]-3-metil-fenilamino}-4-(4-terc- butilaminopiperidin-1-il)-quinolina (4-3).
[0012] Noutro aspecto, a invenção proporciona uma composição farmacêutica que pode compreender uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com o acima, ou um sal, solvato ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável deste, e um adjuvante, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.
[0013] Em algumas modalidades particulares, a composição farmacêutica da invenção pode ainda compreender um ou mais agentes antineoplásicos.
[0014] Em algumas modalidades particulares, a composição farmacêutica de acordo com o acima pode compreender uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da invenção que pode ser formulada ou co-formulada em nanopartículas.
[0015] Em algumas modalidades específicas da composição farmacêutica da invenção, as nanopartículas podem compreender uma composição lisossomal biodegradável.
[0016] Em algumas modalidades específicas da composição farmacêutica da invenção, as nanopartículas podem compreender um polímero ou copolímero biocompatível.
[0017] Em algumas modalidades específicas da composição farmacêutica da invenção, as nanopartículas podem ser associadas covalentemente ou não covalentemente com um polietileno glicol (PEG).
[0018] Em algumas modalidades específicas da composição farmacêutica da invenção, as nanopartículas podem ter um tamanho médio de cerca de 80 a cerca de 600 nm.
[0019] Em algumas modalidades específicas da composição farmacêutica da invenção, a nanopartícula pode ser uma nanopartícula direcionada contendo um motivo de sinalização.
[0020] Em algumas modalidades específicas, as nanopartículas podem compreender uma composição biologicamente biodegradável.
[0021] Em algumas modalidades específicas particulares, o polímero pode ser baseado em ácido Poli(DL- lático-co-glicólico) que pode ter um peso molecular de 7 a 240 kDa; ou um copolímero de ácido polilático (PLA) e ácido poliglicólico (PGA), onde a razão molecular pode estar entre 95:5 e 50:50.
[0022] Em algumas modalidades específicas da composição farmacêutica da invenção, as nanopartículas podem compreender um item escolhido a partir de nanopartículas PLGA, nanopartículas PLGA-PEG (bloco tipo AB, BA, ABA ou BAB, onde A = PLGA e B = PEG) e nanopartículas direcionadas.
[0023] Em algumas modalidades específicas da composição farmacêutica da invenção, as nanopartículas podem compreender um item escolhido a partir de lipossomas.
[0024] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica da invenção pode ser adequada para liberação lenta ou prolongada.
[0025] Em algumas modalidades específicas, a composição farmacêutica da invenção pode ser adequada para administração oral, parentérica, ocular, transdérmica, nasal ou para inalação.
[0026] Em algumas modalidades específicas da composição farmacêutica da invenção, o composto ativo da invenção pode ser associado com pelo menos um agente anticancerígeno terapeuticamente ativo.
[0027] Em alguma modalidade específica, a composição farmacêutica da invenção pode compreender uma combinação de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção e uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais agentes antineoplásicos, em que os componentes constituindo referida combinação podem ser de uso simultâneo, separado ou sequencial na terapia do câncer.
[0028] Em modalidades específicas da composição farmacêutica da invenção, o agente antineoplásico pode ser escolhido do grupo que consiste em everolimus, cloroquina, hidroxicloroquina, trabectedina, abraxane, TLK 286, AV-299, DN-101, pazopanibe, GSK690693, RTA 744, ON 0910.Na, AZD 6244 (ARRY-142886), AMN-107, TKI-258, GSK461364, AZD 1152, enzastaurina, vandetanibe, ARQ-197, MK-0457, MLN8054, PHA- 739358, R-763, AT-9263, pemetrexede, erlotinibe. dasatanibe, nilotinibe, decatanibe, panitumumabe, amrubicina, oregovomabe, Lep-etu, nolatrexede, azd2171, batabulina, ofatumumabe, zanolimumabe, edotecarina, tetrandrme, rubitecan, tesmilifena, oblimersen, ticilimumabe, ipilimumabe, gossipol, Bio 111, 131-I-TM-601, ALT-110, BIO 140, CC 8490, cilengitida, gimatecan. IL13-PE38QQR, TNO 1001, IPdR1 KRX-0402, lucantona, LY 317615, neuradiabe, vitespan, Rta 744, Sdx 102, talampanel, atrasentan, Xr 311, romidepsina, ADS-100380, sunitinibe, 5-fluorouracil, vorinostate, etoposido, gemcitabina, doxorrubicina, irinotecano, doxorrubicina lipossomal, 5'-desoxi-5- fluorouridina, vincristina, temozolomida, ZK-304709, seliciclibe, PD0325901, AZD-6244, capecitabina, ácido L- glutâmico, sal de hepta-hidratado de N-[4-[2-(2-amino-4,7- dihidro-4-oxo-1H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)etil]benzoil] -dissódico, camptotecina, irinotecano marcado com PEG, tamoxifeno, citrato de toremifeno, anastrazol, exemestano, letrozol, DES(dietilstilbestrol), estradiol, estrogênio, estrogênio conjugado, bevacizumabe, IMC-1C11, CHIR-258, 3[5 - (metilsulfonilpiperadinometil) - indolil] - quinolona, vatalanibe, AG-013736, AVE-0005, o sal de acetato de acetato [D-Ser(But)6, Azgly10](piro-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)- Leu-Arg-Pro-Azgly-NH2, acetato de goserelina, acetato de leuprolida, pamoato de triptorelina, acetato de medroxiprogesterona, caproato de hidroxiprogesterona, acetato de megestrol, raloxifeno, bicalutamida, flutamida, nilutamida, acetato de megestrol, CP-724714; TAK-165, HKI- 272, erlotinibe, lapatanibe, canertinibe, anticorpo ABX-EGF, erbitux, EKB-569, PKI-166, GW-572016, lonafamibe, BMS- 214662, tipifarnibe; amifostina, NVP-LAQ824, suberoil analida de ácido hidroxâmico, ácido valpróico, tricostatina A, FK-228, SU11248, sorafenibe, KRN951, aminoglutetimida, arnsacrina, anagrelida, L-asparaginase, vacina Bacillus Calmette-Guerin (BCG), bleomicina, buserelina, busulfan, carboplatina, carmustina, clorambucil, cisplatina, cladribina, clodronato, ciproterona, citarabina, dacarbazina, dactinomicina, daunorubicina, dietilesttilbestrol, epirrubicina, fludarabina, fludrocortisona, fluoximeterona, flutamida, gemcitabina, gleevec, hidroxiureia, idarubicina, ifosfamida, imatinibe, leuprolida, levamisol, lomustina, meclorometamina, melfalano, 6-mercaptopurina, mesna, metotrexato, mitomicina, mitotano, mitoxantrona, nilutamida, octreotida, oxaliplatina, pamidronato, pentostatina, plicamicina, porfimer, procarbazina, raltitrexede, rituximabe, estreptozocina, teniposídeo, testosterona, talidomida, tioguanina, tiotepa, tretinoína, vindesina, ácido 13-cis- retinóico, mostarda de fenilalanina, mostarda de uracil, estramustina, altretamina, floxuridina, 5-deo-oxiridina, citosina arabinosídeo, 6-mecaptopurina, desoxicoformicina, calcitriol, valrubicina, mitramicina, vinblastina, vinorelbina, topotecano, razoxina, marimastat, COL-3, neovastat, BMS-275291, esqualamina, endostatina, SU5416, SU6668, EMD121974 interleucina-12, 1M862, angiostatina, vitaxina, droloxifeno, idoxifeno, espironolactona, finasterida, cimitidina, trastuzumabe, dentilicina diftitox, gefitinibe, bortezimibe, paclitaxel, irinotecano, topotecano, doxorubicina, docetaxel, vinorelbina, bevacizumabe (anticorpo monoclonal) e erbitux, paclitaxel isento de cremoforo, epitolona B, BMS-247550, BMS-310705, droloxifeno, 4-hidroxitaxifeno, pipendoxifeno, ERA-923, arzoxifeno, fulvestrant, acolbifeno, lasofoxifeno, idoxifeno, TSE-424, HMR-3339, ZK186619, PTK787/ZK 222584, VX-745, PD 184352, rapamicina, 40-O-(2-hidroxietil)- rapamicina, temsirolimus, AP-23573, RAD001, ABT-578, BC-210, LY294002, LY292223, LY292696, LY293684, LY293646, wortmanin, ZM336372, L-779,450, PEG-filgrastim, darbepoetina, eritropoietina, fator estimulador de colônias de granulócitos, zolendronato, prednisona, cetuximabe, fator estimulante de colônias de macrófagos de granulócitos, histrelina, interferon alfa-2a peguilado, interferon alfa- 2a, interferon alfa-2b peguilado, interferon alfa-2b, azacitidina, PEG-L-asparaginase, lenalidomida, gemtuzumabe, hidrocortisona, interleucina-11, dexrazoxano, alemtuzumabe, ácido todo transretinóico, cetoconazol, interleucina-2, megestrol, mostarda de nitrogênio, metilprednisolona, ibritgumomabe tiuxetano, androgênios, decitabina, hexametilmelamina, bexaroteno, tositumomabe, trióxido de arsênio, cortisona, editronato, mitotano, ciclosporina, daunorubicina lipossomal, Edwina-asparaginase, estrôncio 89, casopitante, netupitante, um antagonistas dos receptores NK- 1, palonosetron, aprepitante, difenidramina, hidroxizina, metoclopramida, lorazepam, alprazolam, haloperidol, droperidol, dronabinol, dexametasona, metilprednisolona, proclorperazina, granisetron, ondansetron, dolasetron, tropisetron, pegfilgrastim, epoetina alfa e darbepoetina alfa, ipilumumabe, vemurafenibe, inibidor de FLT-3, um inibidor de VEGFR, um inibidor de EGFR TK, um inibidor de aurora quinase, um modulador de PIK-1, um inibidor de Bcl- 2, um inibidor de HDAC, um inibidor de c-MET, um inibidor de PARP, um inibidor de Cdk, um inibidor de EGFR TK, um inibidor de IGFR-TK, um anticorpo anti-HGF, inibidores de PI3- quinase, um inibidor de mTOR, um inibidor de AKT, um inibidor de JAK/STAT, um inibidor de ponto de controle-1 ou 2, um inibidor de quinase de adesão focal, um inibidor de quinase quinase de Map (MEK), um anticorpo de retentor de VEGF e suas misturas.
[0029] Noutro aspecto, a invenção proporciona um método para o tratamento e/ou prevenção de uma doença proliferativa e/ou neoplásica, que pode compreender a etapa da administração de uma quantidade terapeuticamente ativa de um composto da invenção ou uma composição farmacêutica compreendendo o mesmo, para um ser humano ou animal que dele necessite.
[0030] Noutro aspecto, a invenção proporciona um método para inibir o crescimento ou a diferenciação de uma célula tronco de câncer (CSC), uma célula iniciadora de tumor, uma célula semelhante ao mesenquimal associada ao câncer, uma célula cancerígena mesenquimal ou uma célula mesenquimal que pode compreender a etapa de administração de uma quantidade terapeuticamente ativa de um composto da invenção, ou uma composição farmacêutica compreendendo o mesmo, a um ser humano ou a um animal que dele necessite.
[0031] Noutro aspecto, a invenção proporciona um composto para o tratamento e/ou prevenção de uma doença proliferativa e/ou neoplásica.
[0032] Noutro aspecto, a invenção proporciona um composto para inibir o crescimento ou a diferenciação de uma célula tronco de câncer (CSC), uma célula iniciadora do tumor, uma célula semelhante ao mesenquimal associada ao câncer, uma célula cancerígena mesenquimal ou uma célula mesenquimal.
Breve descrição dos desenhos
[0033] As características e vantagens acima e outras da invenção serão mais facilmente evidentes através dos seguintes exemplos, e com referência aos desenhos anexos, em que:
[0034] A Figura 1 mostra a diminuição das células de população de ALDH+ em células derivadas em pacientes com CRC (CPP19, CPP30 e CPP45) quando tratadas pelo composto 2-3 (ensaio AldefluorTM);
[0035] A Figura 2 mostra a inibição, pelo composto 2-3, da formação de tumorosfera de células derivadas do paciente (CRC) com câncer colorretal metastático hepático;
[0036] A Figura 3 mostra os espectros de 1HRMN do composto 1-6 em DMSO-d6;
[0037] A Figura 4 mostra os espectros de 1HRMN do composto 2-3 em DMSO-d6;
[0038] A Figura 5 mostra os espectros de 1HRMN do composto 3-5 em DMSO-d6;
[0039] A Figura 6 mostra os espectros de 1HRMN do composto 4-3 em DMSO-d6;
Descrição detalhada
[0040] Na presente descrição, o termo "alquil", sozinho ou em combinação com outros grupos, refere-se a um radical hidrocarboneto alifático saturado monovalente de cadeia linear ou ramificada de um a vinte átomos de carbono, de preferência, um a dezesseis átomos de carbono, mais preferencialmente, um a dez átomos de carbono átomos. O termo "alquil inferior", sozinho ou em combinação, significa um grupo alquil de cadeia linear ou ramificada com 1 a 6 átomos de carbono ("alquil C1-C6"), de preferência, um grupo alquil de cadeia linear ou ramificada com 1 a 5 átomos de carbono ("alquil-C1-C5") e, particularmente, preferido um grupo alquil de cadeia linear ou ramificada com 1 a 3 átomos de carbono ("alquil-C1-C3"). Exemplos de grupos alquil inferior de cadeia linear e ramificada são metil, etil, propil, isopropil, butil, isobutil, terc-butil, os pentil isomérico, hexil isomérico, de preferência, metil e etil e propil e isopropil e metil mais preferido.
[0041] O termo "alcóxi inferior" refere-se ao grupo R'-O-, em que R' é alquil inferior e o termo "alquil inferior" tem o significado anteriormente dado. Exemplos de grupos alcóxi inferiores são metóxi, etóxi, n-propóxi, isoprópoxi, n-butóxi, isobutóxi, sec-butóxi e terc-butóxi, de preferência, metóxi e etóxi e isopropóxi e terc-butóxi mais preferidos, metóxi e etóxi.
[0042] O termo "alquenil inferior" significa um resíduo de hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada compreendendo uma ligação olefínica e 2 a 6 átomos de carbono ("alquenil C2-C6"), de preferência, 2 a 5 átomos de carbono ("alquenil C2-C5"), particularmente preferido de 2 a 4 átomos de carbono ("alquenil C2-C4"). Exemplos de grupos alquenil inferiores são etenil, 1-propenil, 2-propenil, isopropenil, 1-butenil, 2-butenil, isobutenil, 1-pentenil, 2-pentenil, 3- pentenil, isopentenil. Exemplos preferidos são 2-propenil, 2-butenil e isopentenil.
[0043] O termo "alquinil inferior" significa um resíduo de hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada compreendendo uma ligação de alquino e 2 a 6 átomos de carbono ("alquinil C2-C6"), de preferência, 2 a 5 átomos de carbono ("alquinil C2-C5"), particularmente preferido de 2 a 4 átomos de carbono ("alquinil C2-C4"). Exemplos de grupos alquinil são etinil, 1-propinil, 2-propinil, 1-butinil, 3- butinil, 4-butinilo 1-but-2-ino, 1-pentinil, pent-2-in-1-il, pent-3-in-1-il, pent-4-in-1-il, pent-2-in-3-il. Os exemplos preferidos são propin-1-il, propen-3-il, butin-1-il, butin- 3-il, butin-4-il, but-2-in-1-il.
[0044] O termo "halogênio" refere-se a flúor, cloro, bromo e iodo, sendo preferido o flúor, o cloro e o bromo.
[0045] O termo "cicloalquil" designa um grupo carbocíclico saturado contendo de 3 a 7 átomos de carbono "cicloalquil C3-C7"), tal como ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil ou cicloheptil. Os grupos de cicloalquil preferidos são ciclopropil, ciclopentil e ciclohexil.
[0046] O termo "grupo heterocíclico" significa um grupo monocíclico totalmente saturado ou insaturado, mas não totalmente insaturado, por exemplo 3 a 7 membros ou sistemas de anel bicíclicos fundidos com 7 a 11 membros que possuem pelo menos um heteroátomo escolhido entre o átomo de oxigênio, o átomo de nitrogênio ou o átomo de enxofre. Cada anel do grupo heterocíclico pode ter pelo menos um heteroátomo escolhido a partir de átomos de nitrogênio, átomos de oxigênio e/ou átomos de enxofre. Os grupos heterocíclicos preferidos são pirrolidina, piperidina, piperazina, tetrahidrofurano, bis-tetrahidrofurano e morfolina.
[0047] O termo "carboxil" significa o grupo -COOH.
[0048] O termo "heteroaril", em geral, refere-se a um anel aromático de 5 ou 11 membros que compreende pelo menos um heteroátomo e pode, além disso, compreender um, dois, três ou quatro átomos escolhidos entre nitrogênio, oxigênio e/ou enxofre, tais como piridil, pirazinil, pirimidinil, piridazinil, 2-oxo-1,2-di-hidropiridinil, oxadiazolil, isoxazolil, tiadiazolil, triazolil, tetrazolil, pirazolil, imidazolil, tiofenil, furanil, oxazolil, isotiazolil e tiazolil. O termo "heteroaril" refere-se ainda a grupos aromáticos ou parcialmente insaturados bicíclicos compreendendo dois anéis de 5 ou 6 membros, em que um ou ambos os anéis podem conter um, dois, três ou quatro átomos escolhidos entre o nitrogênio, o oxigênio ou o enxofre, tais como quinolinil, isoquinolinil, cinolinil, pirazolil, imidazolil, tiazolil, tiofenil, furanil, oxazolil, isotiazolil, pirazolo[1,5-a]piridil, imidazo[1,2-a]piridil, quinoxalinil, quinazolil, benzotiazolil, benzotriazolil, 1H- benzo[d]imidazol, benzo[d]isoxazolil, benzo[d]isotiazolil, benzo[c]isoxazolil, benzo[c]isotiazolil, indolil, isoindolinil, 6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,4-b]piridinil, 2,3- dihidro-1H-pirrolo[3,4-c]piridinil, 6,7-dihidro-5H- pirrolo[3,4-d]pirimidinil, purinil, indazolil, indolizinil, imidazo[1,2-a]piridinil, imidazo[1,5-a]piridinil, imidazo[1,5-a]pirazinil, imidazo[1,2-a]pirazinil, 1H- imidazo[4,5-b]pirazinil, pirazolo[1,5-a]piridinil, pirrolo[1,2-a]pirimidinil, pirrolo[1,2-a]pirazinil, pirrolo[1,2-c]pirimidinil, oxazolo[4,5-b]piridinil, oxazolo[4,5-c]piridinil, oxazolo[5,4-c]piridinil, oxazolo[5,4-b]piridinil, tiazolo[4,5-b]piridinil, tiazolo[4,5-c]piridinil, tiazolo[5,4-c]piridinil, tiazolo[5,4-b]piridinil, oxazolo[5,4-d]pirimidinil, oxazolo[4,5-d]pirimidinil, tiazol [5,4-d]pirimidinil, tiazolo[4,5-d]pirimidinil, oxazolo[4,5-b]pirazinil, tiazolo[4,5-b]pirazinil, isoxazolo[4,5-b]pirazinil, isotiazolo[4,5-b]pirazinil, isoxazolo[4,5-d]pirimidinil, isotiazolo[4,5-d]pirimidinil, isoxazolo[5,4-d]pirimidinil, isotiazolo[5,4-d]pirimidinil, isoxazolo[5,4-b]piridinil, isotiazolo[5,4-c]pirimidinil, isoxazolo[5,4-c]piridinil, isotiazolo[4,5-c]piridinil, isoxazolo[4,5-c]piridinil, isoxazolo[4,5-b]piridinil, isoxazolo[4,3-d]pirimidinil, istiazolo[4,3-d]pirimidinil, isoxazolo[3,4-d]pirimidinil, isotiazolo[3,4-d]pirimidinil, pirido[2,3-d]pirimidinil, pirido[3,4-d]pirimidinil, pirido[4,3-d]pirimidinil, pirido[3,2-d]pirimidinil, pirido[2,3-b]pirazinil, pirido[3,4-b]pirazinil, [1,2,3]triazolo[4,5-b]piridinil, [1,2,3]triazolo[4,5-c]piridinil, 3H-[1,2,3]triazolo[4,5- d]pirimidinil. Os grupos heteroaril preferidos são piridil, tiozolil, isotiazolil, oxazolil, isoxazolil, quinozolinil e pirazinil.
[0049] O termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" refere-se aos sais que retêm a eficácia biológica e propriedades das bases livres ou ácidos livres, que não são biologicamente ou de outra forma indesejáveis. Os sais são formados com ácidos inorgânicos, tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e semelhantes, de preferência, ácido clorídrico e ácidos orgânicos tais como ácido acético, ácido propiônico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malônico, ácido salicílico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzóico, ácido glutárico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido málico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido p-toluenossulfônico, ácido benzenossulfônico, N- acetilcisteína e semelhantes. Além disso, estes sais podem ser preparados a partir da adição de uma base inorgânica ou uma base orgânica ao ácido livre. Os sais derivados de uma base inorgânica incluem, mas não estão limitados a, os sais de sódio, potássio, lítio, amônio, cálcio, magnésio e semelhantes. Os sais derivados de bases orgânicas incluem, mas não estão limitados a, sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas incluindo aminas substituídas ocorrendo naturalmente, aminas cíclicas e resinas básicas de troca iônica, tais como isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina, etanolamina, lisina, arginina, N-etilpiperidina, piperidina, resinas de poliamina e semelhantes. Os compostos de fórmula I também podem estar presentes na forma de zwitterions.
[0050] Os sais farmaceuticamente aceitáveis particularmente preferidos dos compostos de fórmula I são os sais cloridrato.
[0051] Os compostos de fórmula I também podem ser solvatados, por exemplo, hidratado. A solvatação pode ser efetuada no curso do processo de fabricação ou pode ocorrer, por exemplo, como consequência das propriedades higroscópicas de um composto inicialmente anidro de fórmula I ou II (hidratação). O termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" também inclui solvatos fisiologicamente aceitáveis.
[0052] Os "isômeros" são compostos que possuem fórmulas moleculares idênticas, mas que diferem na natureza ou na sequência de ligação de seus átomos ou na disposição dos seus átomos no espaço. Os isômeros que diferem na disposição de seus átomos no espaço são denominados "estereoisômeros". Os estereoisômeros que não são imagens espelhados um do outro são denominados "diastereoisômeros", e os estereoisômeros que são imagens espelhadas não superponíveis são denominados "enantiômeros", ou às vezes isômeros ópticos.
[0053] Tal como aqui utilizado, os termos "indivíduo" ou "paciente" são utilizados de forma intercambiável. Tal como aqui utilizado, os termos "indivíduo" e "indivíduos" referem-se a um animal (por exemplo, aves, répteis e mamíferos), de preferência, um mamífero que inclui um não-primata (por exemplo, um camelo, burro, zebra, vaca, porco, cavalo, cabra, ovelha, gato, cão, rato e camundongo) e um primata (por exemplo, um macaco, um chimpanzé e um humano), e mais preferencialmente um ser humano.
[0054] Tal como aqui utilizado, os termos "terapias" e "terapia" podem se referir a qualquer(quaisquer) protocolo(s), método(s), composições, formulações e/ou agentes que podem ser utilizados na prevenção, tratamento, gestão, ou melhoria de uma doença, incluindo infecções virais ou bacterianas ou sintomas associados, câncer, etc. Em certas modalidades, os termos "terapias" e "terapia" referem-se a terapia biológica, terapia de suporte e/ou outras terapias úteis no tratamento, gestão, prevenção ou melhoria das diferentes doenças conhecidas pelos especialistas na técnica.
[0055] O termo "uma quantidade terapeuticamente eficaz" de um composto significa uma quantidade de composto que é eficaz para prevenir, aliviar ou melhorar os sintomas da doença ou prolongar a sobrevivência do indivíduo a ser tratado. A determinação de uma quantidade terapeuticamente eficaz está dentro da habilidade na técnica. A quantidade ou a dosagem terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com esta invenção pode variar dentro de limites amplos e pode ser determinada de uma maneira conhecida na técnica. Essa dosagem será ajustada aos requisitos individuais em cada caso particular, incluindo o(s) composto(s) específico(s) a ser(serem) administrado(s), a via de administração, a condição a ser tratada, bem como o paciente a ser tratado. Em geral, no caso de administração oral ou parentérica em seres humanos adultos pesando aproximadamente 70 kg, uma dosagem diária de 0,1 mg a 5 g, de preferência, de cerca de 0,1 mg a 1 g, mais preferencialmente, de 0,5 mg a 500 mg, e mais preferencialmente, de cerca de 1 mg a 300 mg, deve ser apropriada, embora o limite superior possa ser excedido quando indicado. A dosagem diária pode ser administrada como uma dose única ou em doses divididas, ou para administração parenteral, pode ser administrada como infusão contínua.
[0056] O termo "veículo farmaceuticamente aceitável" pretende incluir qualquer material compatível com administração farmacêutica incluindo solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotônicos e retardadores de absorção e outros materiais e compostos compatíveis com a administração farmacêutica. Exceto na medida em que qualquer meio ou agente convencional seja incompatível com o composto ativo, são contempladas as suas utilizações nas composições da invenção. Os compostos ativos suplementares também podem ser incorporados nas composições. Estas composições podem ser preparadas por aplicação de técnicas conhecidas na técnica, tal como descrito em Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (Tenth Edition) 2014, Edited by Loyd Allen, Howard C. Ansel, publicado por Wolters Kluwer Health and Remington: The Science and Pratice of Pharmacy (Twenty-second Edition) 2012, editado por Loyd V. Allen, publicado by Pharmaceutical Press, cada um dos quais é incorporado aqui por referência.
[0057] Tal como aqui utilizado, os termos "tratar", "tratamento" e "tratando" referem-se no contexto da administração de uma(s) terapia(s) a um indivíduo para tratar uma infecção viral, referem-se a um, dois, três, quatro, cinco ou mais dos seguintes efeitos resultantes da administração de uma terapia ou uma combinação de terapias: (i) redução ou melhora da gravidade de uma doença e/ou um sintoma associado a ela; (ii) a redução da duração de uma doença e/ou um sintoma associado a ela; (iii) a regressão de uma doença e/ou um sintoma associado a ela; (iv) redução do título de um patógeno; (v) a redução da falha orgânica associada a uma doença; (vi) redução da internação de um indivíduo; (vii) redução do tempo de hospitalização; (viii) o aumento da sobrevivência de um indivíduo; (ix) a eliminação de uma infecção; (x) a inibição da progressão de uma infecção e/ou um sintoma associado a ela; (xi) a prevenção da propagação de um vírus a partir de uma célula, tecido ou sujeito a outra célula, tecido ou indivíduo; e/ou (xii) o aprimoramento ou a melhoria do efeito terapêutico de outra terapia.
[0058] Um "pró-fármaco" significa um composto que sofre conversão no composto da invenção dentro de um sistema biológico. Um pró-fármaco é um derivado químico inativo ou menos ativo do que o próprio fármaco. Após administração e difusão no corpo, o derivado de pró-fármaco sofre um ou mais processos metabólicos que liberam o fármaco ativo. A conversão do pró-fármaco para o fármaco, geralmente, é realizada sob o controle de processos enzimáticos (geralmente por meios metabólicos, por exemplo, hidrólise, redução ou oxidação) e menos frequentemente por reações químicas clássicas durante sua difusão no corpo. A ligação entre o veículo e o fármaco pode ser, entre outros, éster, amida, carbonato, carbamato, imina, acetal, éter (por exemplo, conjugação de glucoro), função oxidável e sistema molecular, função redutível e sistema molecular redutível, função fotoativada e sistema molecular fotoativado. Por exemplo, um pró-fármaco de éster de um composto contendo um grupo hidroxil pode ser conversível por hidrólise in vivo na molécula original. Os ésteres adequados dos compostos da invenção contendo um grupo hidroxil são, por exemplo, acetatos, citratos, lactatos, tartratos, malonatos, oxalatos, salicilatos, propionatos, succinatos, fumaratos, maleatos, metileno-bis-β-hidroxinaftoatos, gestisatos, isetionatos, di-p-toluoiltartratos, metanossulfonatos, etanossulfonatos, benzenossulfonatos, p-toluenossulfonatos, ciclohexilsulfamatos e quinatos. Como outro exemplo, um pró- fármaco éster do composto da invenção contendo um grupo carbóxi pode ser conversível por hidrólise in vivo na molécula original (Exemplos de pró-fármacos de ésteres são descritos por F.J. Leinweber, Drug Metab. Res. 1987, (18) pp379, aqui incorporado por referência). Da mesma forma, um pró-fármaco de acil de um composto contendo um grupo amino pode ser conversível por hidrólise in vivo na molécula original (exemplos de pró-fármacos para estes e outros grupos funcionais, incluindo amina, álcool, são descritos em Prodrugs: Challenges and Rewards (Parts 1 e 2), Ed V. Stella, R. Borchardt et al., Springer, 2007, and Prodrugs and Targeted Delivery: Towards Better ADME Properties Ed. J. Rautio, Seies Ed. R. Mannhold, H. Kubinyl, G. Folkers. Wiley- VCH 2011, cada um dos quais é incorporado aqui por referência).
[0059] Um sistema de veículo de pró-fármaco é, geralmente, utilizado para aumentar a solubilidade em água ou lipídios, reduzir a toxicidade, aumentar a estabilidade química e biológica de um composto sensível, aumentar o tempo de circulação no corpo (T1/2), aumentar a exposição total ao fármaco (AUC) e distribuição de órgãos (perfil PK-PD) e segmentação específica do site. Material e métodos relativos aos exemplos 1, 2, 3 e 4
[0060] Reagentes e solventes foram obtidos de fornecedores comerciais e foram utilizados sem purificação adicional. O cloreto de metileno seco foi seco e destilado sobre CaCl2 e armazenado sobre peneiras moleculares 4Â sob argônio. O tetrahidrofurano foi seco sobre cetil de sódio/benzofenona sob argônio e destilado antes da utilização. As purificações de cromatografia rápida foram realizadas no gel de sílica Merck (40-63 μM ou 15-40 μM) como a fase estacionária.
[0061] Os espectros de RMN foram registrados em Bruker Avance 300 MHz. Cromatografia líquida analítica de ultra alto desempenho - análise de massa (UHPLC-MS): UPLC Waters Acquity, UV DAD, acoplado a um espectrômetro de massa tandem quadripolar Waters Quattro Premier XE.
[0062] Coluna Acquity UPLC BEH C18 (2,1 x 50 mm) 1,7 μm, fase móvel: A H2O + 0,1% de TFA, B: MeCN + 0,1% de TFA. As condições de eluição compreendiam um gradiente linear (minuto/% B): 0/5% B, 4/98% B, taxa de fluxo 0,4 ml/min. 1. Exemplo 1: Preparação de sal cloridrato de 2-(4- clorofenilamino)-4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)- quinolina (1-6). Preparação do intermediário 4-terc-butilaminopiperidina (1- 1.1. Síntese de 1—benzil-4—terc-butilaminopiperidina (1-1)
[0063] A uma solução de N-Benzil-4-piperidinona (60,0 g, 314 mmol) em 500 ml de tolueno seco e terc- butilamina (135 ml, 1280 mmol) foi adicionada gota a gota a T <15°C, uma solução de tetracloreto de titânio (23,0 ml, 210 mmol) em 250 ml de tolueno seco. A mistura resultante foi agitada à TA durante 20h e depois filtrada através de uma almofada Celite®. A solução de tolueno foi transferida para um reator de hidrogenação de alta pressão e adicionou- se o catalisador de dióxido de platino (160 mg, 0,70 mmol). O hidrogênio foi introduzido no reator a uma pressão de 5 bar (200 KPa) e a reação prosseguiu à TA durante 2 dias. Em seguida, a mistura resultante foi diluída com uma solução aquosa de 2M de NaOH (400 ml) e filtrada através de uma almofada Celite®. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com tolueno. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 filtradas e concentradas sob pressão reduzida para dar 68,05 g (rendimento 88%) de um óleo cor de laranja correspondente a 1-Benzil-4-terc- butilaminopiperidina.
[0064] Massa: (ES+) C16H26N2 requer 246; encontrado 247 [M + H]
[0065] 1HRMN (300 MHz, CDCl3) 1.2. Síntese de 4-terc-butilaminopiperidina (1-2)
[0066] Em um reator químico de hidrogênio e em uma solução desgastada com nitrogênio de 1-Benzil-4-terc- butilaminopiperidina (68,05 g, 276 mmol) em 700 ml de metanol foi adicionado sob nitrogênio Paládio em 10% em peso de pó de carbono, 50% molhado (29,40 g, 13,81 mmol, 5% molar). O hidrogênio foi introduzido no reator a uma pressão de 3 bar (300 Kpa) e a reação prosseguiu à TA durante 2 dias. Em seguida, a mistura resultante foi filtrada através de uma almofada Celite® e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer 38,86 g (rendimento 90%) de um sólido amarelo correspondente a 4-terc-butilaminopiperidina.
[0067] Mass: (ES+) C9H2ON2 requer 156; encontrado 157 [M + H]
[0068] 1HRMN (300 MHz, CDCl3) 1.3. Síntese de 2,4-dicloroquinolina (1-3)
[0069] Ao quinolina-2,4-diol (50,0 g, 310 mmol) foi adicionado gota a gota em 0°C cloreto de fosforil (250 ml, 2682 mmol). A mistura resultante foi agitada e aquecida sob refluxo durante a noite. Em seguida, a mistura foi resfriada, concentrada sob pressão reduzida e co-evaporada duas vezes com 500 ml de tolueno. O resíduo foi, então, retomado com DCM (500 ml) e lavado com água fria. A camada aquosa foi extraída com DCM e as camadas orgânicas combinadas foram combinadas e secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer um sólido castanho (57,0 g, rendimento 93%) correspondente a 2,4-dicloroquinolina.
[0070] Mass: (ES+) C9H5C12N requer 197; encontrado 198 [M + H]
[0071] 1HRMN (300 MHz, CDCl3) 1.4. Síntese de 2-(4-clorofenilamino)-4-cloroquinolina (1-4)
[0072] Para uma solução, sob nitrogênio gasoso, de 2,4-dicloroquinolina (2,00 g, 10,1 mmol) em THF seco (20 ml) foi adicionada 4-cloroanilina (1,45 g, 11,1 mmol) e K2CO3 (3,91 g, 28,3 mmol). A mistura resultante foi desgaseificada 5 minutos com nitrogênio, então, Xantphos (590 mg, 1,01 mmol) e Pd(OAc)2 (120 mg, 0,5 mmol) foram adicionados e a mistura reacional foi aquecida sob refluxo durante 2 h. A mistura reacional foi, então, resfriada até à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dividido entre água e AcOEt e a camada aquosa foi extraída com AcOEt. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer um óleo amarelo. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash (gradiente de ciclohexano/AcOEt de 7/3 a 0/10) para fornecer 2,13 g (rendimento 73%) de um sólido amarelo correspondente a 2-(4-clorofenilamino)-4- cloroquinolina.
[0073] Massa: (ES+) C15H10C12N2 requer 288; encontrado 289 [M + H]
[0074] 1HRMN (300 MHz, CDCl3) 1.1 .Síntese de 2- (4-clorofenilamino) -4- (4-terc- butilaminopiperidin-1-il)-quinolina (1-5)
[0075] A uma solução de 2-(4-clorofenilamino)-4- cloroquinolina (1,00 g, 3,46 mmol) e 4-(terc-butilamino)- piperidina (684 mg, 4,38 mmol) em 5 ml de NMP foi adicionada N,N-Diisopropiletilamina (0,947 ml, 5,47 mmol) e a mistura foi aquecida durante 24 horas a 140°C. Em seguida, a mistura reacional foi resfriada, diluída com uma solução aquosa de 1N de NaOH e a mistura resultante foi extraída com AcOEt. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer um líquido castanho. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash (gradiente ciclohexano/AcOEt de 8/2 a 2/8) para fornecer um sólido amarelado. Este sólido foi recristalizado a partir de MeCN para fornecer 1,19 g (rendimento 84%) de um sólido branco correspondente a 2-(4- clorofenilamino)-4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)- quinolina.
[0076] HPLC-MS: tr = 1,24 min, (ES+) C24H29ClN4 requer 408; encontrado 409 [M + H], 353 [M-tBu + H]
[0077] 1HRMN (300 MHz, CDCl3) 1.6 . Síntese de sal cloridrato de 2-(4-clorofenilamino)-4- (4-terc-butilaminopiperidin-1-il)-quinolina (1-6)
[0078] A uma suspensão de 2-(4-clorofenilamino)-4- (4-terc-butilaminopiperidin-1-il)-quinolina (440 mg, 1,1 mmol) em 4 ml de EtOH adicionou-se gota a gota 371 μL de uma solução 7,25 M de HCl em EtOH. O sólido foi dissolvido e a mistura foi agitada 20 minutos à TA. Em seguida, a solução resultante foi concentrada até cerca do meio volume sob pressão reduzida e foram adicionados 6 ml de éter. A mistura resultante foi agitada 1h em temperatura ambiente para obter um sólido branco que foi removido por filtração, enxaguado com éter e seco sob vácuo a 45°C para fornecer 401 mg (rendimento 85%) de um sólido branco correspondente a 2-(4- clorofenilamino)-4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)- quinolina.
[0079] HPLC-MS: tr = 1,21 min, (ES+) C24H29ClN4 requer 408; encontrado 409 [M + H], 353 [M-tBu + H]
[0080] 1HRMN (300 MHz, CD3OD)
[0081] 13C RMN (75 MHz, CD3OD) 2. Exemplo 2: Preparação de sal cloridrato de 2-(4- clorobenzilamino)-4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)- quinolina (2-3) 2.1 Síntese de 2-(4-clorobenzilamino)-4-cloroquinolina
[0082] A uma solução sob nitrogênio gasoso de 2,4- 1) dicloroquinolina (1,00 g, 5,05 mmol) em THF seco (10 ml) adicionou-se 4-clorobenzilamina (1,46 g, 10,1 mmol) e t- BuONa (1,36 g, 14,1 mmol). A mistura resultante foi desgaseificada 5 min com nitrogênio, depois, adicionou-se Xantphos (295 mg, 0,51 mmol) e Pd(OAc)2 (58 mg, 0,25 mmol) e a mistura reacional foi aquecida sob refluxo durante 2 h. A mistura reacional foi, então, resfriada até à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dividido entre salmoura e AcOEt e a camada aquosa foi extraída com AcOEt. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer um óleo castanho. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash (gradiente ciclohexano/DCM de 5/5 a 0/10) para fornecer 897 mg (rendimento 59%) de um sólido castanho correspondente a 2- (4-clorobenzilamino)-4-cloroquinolina.
[0083] Massa: (ES+) C16H12C12N2 requer 302; encontrado 303 [M + H]
[0084] 1HRMN (300 MHz, CDCl3) 2.2 Síntese de 2- (4-clorobenzilamino) -4- (4-terc- butilaminopiperidin-1-il) -quinolina (2-2)
[0085] A uma solução de 2-(4-clorobenzilamino)-4- cloroquinolina (1,05 g, 3,46 mmol) e 4-(terc-butilamino)- piperidina (0,684 g, 4,38 mmol) em 5 ml de NMP adicionou-se N,N-di-isopropiletilamina (0,947 ml, 5,47 mmol) e a mistura foi aquecida durante 22 h a 140°C. Em seguida, a mistura reacional foi resfriada, diluída com uma solução aquosa de 1N de NaOH e a mistura resultante foi extraída com AcOEt. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer um óleo amarelo. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash (gradiente de ciclo-hexano/AcOEt de 8/2 a 0/10) para fornecer um sólido amarelo. Este sólido foi recristalizado a partir de MeCN para fornecer 904 mg (rendimento 62%) de um sólido branco correspondente a 2-(4- clorobenzilamino)-4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)- quinolina.
[0086] HPLC-MS: tr = 1,30 min, (ES+) C25H31ClN4 requer 422; encontrado 423 [M + H], 368 [M-tBu + H]
[0087] 1HRMN (300 MHz, CDCl3) 2.3 Síntese de sal cloridrato de 2-(4-clorobenzilamino)-4- (4-terc-butilaminopiperidin-1-il)-quinolina (2-3)
[0088] A uma suspensão de 2-(4-clorobenzilamino)-4- (4-terc-butilaminopiperidin-1-il)-quinolina (450 mg, 1,06 mmol) em 2,5 ml de EtOH adicionou-se gota a gota 400 μL de uma solução 7M de HCl em EtOH. O sólido foi dissolvido e a mistura foi agitada 3h à TA. Em seguida, a solução resultante foi concentrada sob pressão reduzida e éter foi adicionado. A mistura resultante foi agitada e triturada à temperatura ambiente para se obter um sólido amarelado que foi removido por filtração, enxaguado com éter e seco sob vácuo. O sólido amarelado foi dissolvido em água pura e, depois, foi liofilizado para fornecer 401 mg (rendimento 94%) de um sólido branco correspondente a sal de cloridrato de 2-(4- clorobenzilamino)-4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)- quinolina.
[0089] HPLC-MS: tr = 1,31 min, (ES+) C25H31ClN4 requer 422; encontrado 423 [M + H], 369 [M-tBu + H]
[0090] 1HRMN (300 MHz, DMSO-d6) 3. Exemplo 3: Preparação de sal cloridrato de 2-[3-metil-4- (pirimidin-2-ilamino)fenilamino]-4-(4-terc- butilaminopiperidin-1-il)-quinolina (3-5) 3.1. Síntese de 2-metil-N1-(pirimidin-2-il)-N4-(terc- butiloxicarbonil)-benzeno-1,4-diamina (3-1) CI BINAP, Pd(OAc)2 H <VNH2 X K2CO3 BOC-NXX\ + N^N THF.Δ BOC.NJCX Nθ H Rendimento 33% H 3-1
[0091] Uma solução de 2-metil-N4-(terc- butiloxicarbonil)-benzeno-1,4-diamina (2,40 g, 10,8 mmol), 2-cloropirimidina (0,78 g, 6,5 mmol) e K2CO3 (2,24 g, 16,2 mmol) em THF seco (48 ml) foi desgaseificado com nitrogênio durante 15 minutos. Em seguida, adicionou-se Pd(OAc)2 (58 mg, 0,26 mmol) e ligante BINAP (320 mg, 0,52 mmol) e a mistura reacional foi desgaseificada uma segunda vez durante 20 minutos. A mistura reacional foi, finalmente, aquecida sob refluxo durante 1h. A mistura reacional foi, então, resfriada até à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dividido entre água e AcOEt e a camada aquosa foi extraída com AcOEt. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash (gradiente ciclohexano/AcOEt de 10/0 a 7/3) para fornecer 650 mg (rendimento 33%) de um sólido castanho correspondente a 2- metil-N1-(pirimidin-2-il)-N4-(terc-butiloxicarbonil)- benzeno-1,4-diamina.
[0092] HPLC-MS: tr = 2,06 min, (ES+) C16H2ON4O2 requer 300; encontrado 301 [M + H]
[0093] 1HRMN (300 MHz, CD3OD) 3.1 Síntese de 2-metil-N1- (pirimidin-2-il) -benzeno-1,4- diamina (3-2)
[0094] A 2-metil-N1-(pirimidin-2-il)-N4-(terc- butiloxicarbonil)-benzeno-1,4-diamina (1,18 g, 3,93 mmol) foi adicionada gota a gota à TA uma solução de 3M de HCl em metanol (15 ml). Em seguida, a mistura reacional foi agitada durante 1h à TA. A reação foi, então, concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi dividido entre DCM e uma solução aquosa de 1M de NaOH e a camada aquosa foi extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 787 mg (rendimento 98%) de um óleo amarelo correspondente a 2-metil-N1-(pirimidin-2-il)benzeno-1,4-diamina.
[0095] Massa: (ES+) C11H12N4 requer 200; encontrado 201 [M + H]
[0096] 1HRMN (300 MHz, CD3OD) 3.2 Síntese de 2- [4- (2-pirimidinilamino) -3-metil- fenilamino] -4-cloroquinolina (3-3)
[0097] Uma solução de 2-metil-N1-(pirimidin-2- il)benzeno-1,4-diamina (771 mg, 3,85 mmol), 2,4- dicloroquinolina (693 mg, 3,5 mmol) e K2CO3 (1,35 g, 9,80 mmol) em THF seco (7 ml) foi desgaseificado com nitrogênio durante 20 minutos. Em seguida, adicionou-se Pd(OAc)2 (47 mg, 0,21 mmol) e ligante XantPhos (61 mg, 0,10 mmol) e a mistura reacional foi desgaseificada uma segunda vez durante 20 minutos. A mistura reacional foi, finalmente, aquecida sob refluxo durante 4h. A mistura reacional foi, então, resfriada até à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dividido entre água e AcOEt e a camada aquosa foi extraída com AcOEt. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash (gradiente ciclohexano/AcOEt de 10/0 a 5/5) para fornecer 520 mg (rendimento 41%) de um sólido amarelo correspondente a 2-[4- (2-pirimidinilamino)-3-metil-fenilamino]-4-cloroquinolina.
[0098] Massa: (ES+) C20H16ClN5 requer 361; encontrado 362 [M + H] 3.3 Síntese de 2-[4-(2-pirimidinilamino)-3-metil- fenilamino]-4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)-quinolina (3-4)
[0099] A uma solução de 2-[4-(2-pirimidinilamino)- 3-metil-fenilamino]-4-cloroquinolina (350 mg, 0,97 mmol) em NMP (1,5 ml) adicionou-se 4-terc-butilaminopiperidina (760 mg, 4,80 mmol). A solução resultante foi aquecida durante 30 minutos a 200°C num forno de micro-ondas de laboratório. Em seguida, a mistura resultante foi resfriada e dividida entre água e AcOEt e a camada aquosa foi extraída com AcOEt. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash (gradiente ciclohexano/AcOEt de 10/0 a 5/5) para fornecer 75 mg (rendimento 16%) de um sólido castanho correspondente a 2- [4-(2-pirimidinilamino)-3-metil-fenilamino]-4-(4-terc- butilaminopiperidin-1-il)-quinolina.
[00100] HPLC-MS: tr = 1,15 min, (ES+) C29H35N7 requer 481; encontrado 482 [M + H], 426 [M-tBu + H] 3.4 Síntese de sal cloridrato de 2-[4-(2-pirimidinilamino)- 3-metil-fenilamino]-4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)- quinolina (3-5)
[00101] Adicionou-se gota a gota uma solução 3,0 M de HCl em EtOH (290 μL) a 2-[4-(2-pirimidinilamino)-3-metil- fenilamino]-4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)-quinolina (75 mg, 0,16 mmol). A mistura resultante foi filtrada e evaporada sob pressão reduzida para fornecer 80 mg (rendimento 93%) de um sólido amarelado correspondente a 2- [4-(2-pirimidinilamino)-3-metil-fenilamino]-4-(4-terc- butilaminopiperidin-1-il)-quinolina.
[00102] HPLC-MS: tr = 1,15 min, (ES+) C29H35N7 requer 481; encontrado 482 [M + H], 426 [M-tBu + H]
[00103] 1HRMN (300 MHz, CD3OD + algumas gotas de DMSO- d6) 4. Exemplo 4: Preparação do sal cloridrato de 2-[3-metil-4- (pirimidin-2-ilamino)fenilamino]-4-(4-terc- butilaminopiperidin-1-il)-quinolina (4-3) 4.1 Síntese de 2-{4-[4-(piridin-3-il)-2-pirimidinamino]-3- metil-fenilamino}-4-cloroquinolina (4-1)
[00104] Uma solução de 2-metil-N1-[4-(piridina-3-il)- pirimidin-2-il]benzeno-1,4-diamina (1,18 g, 4,26 mmol), 2,4- dicloroquinolina (767 mg, 3,87 mmol) em THF seco (11,9 ml) adicionou-se K2CO3 (2,7 g, 19,0 mmol) e a mistura reacional foi desgaseificada com nitrogênio durante 15 minutos. Em seguida, adicionou-se o ligante XantPhos (226 mg, 0,387 mmol) e Pd(OAc)2 (44 mg, 0,19 mmol) e a mistura reacional foi desgaseificada uma segunda vez durante 15 minutos. A mistura reacional foi, finalmente, aquecida sob refluxo durante a noite. A mistura reacional foi, então, resfriada até à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dividido entre água e AcOEt e a camada aquosa foi extraída com AcOEt. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash (gradiente de ciclo-hexano/AcOEt de 10/0 a 0/10) para fornecer 1,08 g (rendimento de 64%) de um sólido castanho correspondente a 2-{4-[4-(piridin-3-il)-2-pirimidinamino]- 3-metil-fenilamino}-4-cloroquinolina.
[00105] Massa: (ES+) C25H19ClN6 requer 438; encontrado 439 [M + H]
[00106] 1HRMN (300 MHz, CD3OD) 4.2 Síntese de 2- {4- [4- (piridin-3-il) -2-pirimidinamino] -3-metil-fenilamino} -4- (4-terc-butilaminopiperidin-1-il) -quinolina (4-2)
[00107] A uma solução de 2-{4-[4-(piridin-3-il)-2- pirimidinamino]-3-metil-fenilamino}-4-cloroquinolina (1,0 g, 2,28 mmol) em NMP (10 ml) foi adicionada 4-terc- butilaminopiperidina (1,8 g, 11,0 mmol). A solução resultante foi aquecida durante 90 minutos a 200°C num forno de micro-ondas de laboratório. A mistura resultante foi dividida entre água e AcOEt e a camada aquosa foi extraída com AcOEt. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash (a partir de AcOEt/DCM 3/2 e depois DCM/MeOH 9/1) para fornecer 1,01 g de um sólido amarelo que foi recristalizado a partir de EtOH para dar 550 mg (rendimento 43%) de um sólido branco correspondendo a 2-{4-[4-(piridin-3-il)-2-pirimidinamino]- 3-metil-fenilamino}-4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)- quinolina.
[00108] HPLC-MS: tr = 1,20 min, (ES+) C34H38N8 requer 558; encontrado 559 [M + H], 503 [M-tBu + H]
[00109] 1HRMN (300 MHz, DMSO-d6) 4.3 Síntese de sal cloridrato de 2-{4-[4-(piridin-3-il)-2- pirimidinamino]-3-metil-fenilamino}-4-(4-terc- butilaminopiperidin-1-il)-quinolina (4-3)
[00110] A uma suspensão de 2-{4-[4-(piridin-3-il)-2- pirimidinamino]-3-metil-fenilamino}-4-(4-terc- butilaminopiperidin-1-il)-quinolina em EtOH (5,5 ml) adicionou-se, gota a gota, uma solução 3,0 M de HCl em EtOH (4 ml). O sólido amarelo formado foi removido por filtração e depois triturado com ciclohexano. A suspensão foi filtrada para fornecer 505 mg (rendimento 77%) de um sólido branco correspondente a 2-{4-[4-(piridin-3-il)-2-pirimidinamino]- 3-metilfenilamino}-4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)- quinolina.
[00111] HPLC-MS: tr = 1,22 min, (ES+) C34H38N8 requer 558; encontrado 559 [M + H], 503 [M-tBu + H]
[00112] 1HRMN (300 MHz, CD3OD + algumas gotas de DMSO- d6) 13C RMN (125 MHz, CD3OD) 5. Exemplo 5: Perfil de atividade dos compostos 1-6, 2-3, 35 e 4-3 em MOLM-14, KG-1, MV4-11, A375, HCT-116, HepG2, Huh- 7, MRC-5, MDA-MB-231, linhas celulares ARPE-19 e células PBMC
[00113] Cultura celular: Todas as linhas celulares foram mantidas em meio contendo 1% de penicilina- estreptomicina (Dutscher, P06-07100) e 10% de soro bovino fetal (Gibco, W3387L), exceto 20% para a linha celular KG-1 e PBMC, e cultivadas em 37°C com 5% de CO2.
[00114] As linhas celulares de HepG2, Huh7, HCT-116, MDA-MB-231 e A375 foram cultivadas em meio de Eagle modificado por Dulbecco (Dutscher, L0103).
[00115] A linha celular KG-1 e MV4-11 foi mantida no meio Dulbecco modificado por Iscove (Dutscher, L0190).
[00116] A linha celular MOLM-14 foi mantida em meio alfa MEM (Gibco, 22561-021).
[00117] O PBMC foi mantido em meio RPMI 1640 (Dutscher, L0498).
[00118] A linha celular MRC-5 foi mantida em MEM (Dutscher, L0416).
[00119] A linha celular ARPE-19 foi cultivada em DMEM: meio F12 (Dutscher, L0093).
[00120] Ensaio de viabilidade celular: a viabilidade celular foi medida usando o ensaio de viabilidade de células luminescentes CellTiter-Glo® conforme descrito pelo fabricante (Promega, Ref G7571) usando um luminômetro Infinite F200Pro (Tecan). Resumidamente, para células aderentes, as células foram plaqueadas em placas de 96 cavidades (branca com fundo transparente) em 90 μL de meio por cavidade e foram deixadas crescer durante a noite antes do ensaio. Para células que crescem em suspensão, as células foram plaqueadas em placas de 96 cavidades imediatamente antes do ensaio. O número de células semeadas por cavidade é indicado na tabela 1 abaixo: Tabela 1: Número de células semeadas por cavidade para ensaios de viabilidade celular
[00121] Os compostos foram adicionados em concentrações diferentes para cada cavidade e as culturas de células foram incubadas durante 72 h. O veículo (H2O) foi utilizado como controle, e todos os compostos foram testados em uma porcentagem constante de H2O. Após a adição de 100 μL de CellTiter-Glo®, a luminescência foi medida usando um Infinite F200Pro (Tecan). Os valores de EC50 foram determinados como a dose do composto requerido para reduzir os valores luminescentes para 50% do sinal obtido para culturas de células não tratadas. Os dados experimentais foram analisados usando um programa de computador, Graphpad Prism v5 (GraphPad Software, Inc. La Jolla, CA).
[00122] Todos os experimentos foram pelo menos feitos em duplicado e repetidos em dois tempos independentes. Tabela 2: Ensaio de inibição de crescimento da linha celular MOLM-14 na presença do composto 1-6, 2-3, 3-5, 4-3 Tabela 3: Ensaio de inibição de crescimento das linhas celulares MOLM-14, KG-1, MV4-11 e PBMC na presença do composto 2-3 Tabela 4 : Ensaio de inibição de crescimento das linhas celulares A375, HCT- 116, HepG2 e Huh-7 na presença do composto 2-3 Tabela 5 : Ensaio de inibição de crescimento das linhas celulares MRC-5, MDA-MB-231 e ARPE-19 na presença do composto 2-3 Tabela 6: Ensaio de inibição de crescimento das linhas celulares MOLM-14, A375, HCT-116 e HepG2 na presença do composto 4-3 6. Exemplo 6: Análise do compartimento ALDH+ na linha celular MOLM-14
[00123] A linha celular MOLM-14 foi cultivada em meio alfa MEM suplementado com 10% v/v de sêmen bovino fetal, 1% de penicilina-estreptomicina e mantido a 37°C com 5% de CO2. Foram plaqueadas 10000 células em placas de 96 cavidades imediatamente antes do ensaio.
[00124] Cada composto foi adicionado em diferentes concentrações (combinações de seis concentrações) a cada cavidade e as culturas de células foram incubadas durante 72 h. O veículo (H2O) foi utilizado como controle, e todos os compostos foram testados em uma porcentagem constante de veículo. O crescimento celular foi medido utilizando o ensaio de viabilidade de células luminescentes CellTiter-Glo® conforme descrito pelo fabricante (Promega, Ref G7571 Madison, WI, EUA) utilizando um leitor de placas Centro (Berthold, França).
[00125] Em cada experiência, cada ponto representa a média de triplicados na cultura celular.
[00126] Os dados experimentais são analisados utilizando um programa de computador, Graphpad Prism v5 (GraphPad Software, Inc. La Jolla, CA) e os valores de EC50 foram determinados como a dose de composto necessária para reduzir os valores de absorvância para 50% do sinal obtido para a célula tratada no veículo culturas.
[00127] A análise do compartimento de aldeído desidrogenase (ALDH) e o alto nível de atividade da atividade de aldeído desidrogenase (ALDH+) foi utilizada para detectar células iniciadoras de tumores (células tronco cancerosas, CSC). O teste do kit AldefluorTM (StemCell Technologies, 01700) permitiu avaliar a atividade de fármacos em células CSC como em uma linhagem celular de leucemia mieloide aguda MOLM-14 (ref: Storms, R.W., Trujillo, A.P., Springer, J.B., Shah, L. Colvin, O.M., Ludeman, S.M. e Smith, C. (1999). Isolamento de progenitores hematopoiéticos humanos primitivos com base na atividade da aldeído desidrogenase. Procedimentos da Academia Nacional de Ciências, 96(16), 9118-9123). O ensaio do kit AldefluorTM foi utilizado de acordo com o procedimento descrito pelo fabricante. Resumidamente, a linha celular MOLM-14 foi cultivada em meio alfa MEM suplementado com 10% v/v de sêmen de bovino fetal, 1% de penicilina-estreptomicina e mantido a 37°C com 5% de CO2. Foram utilizadas 5.105 células neste ensaio. Cada composto foi adicionado em diferentes concentrações (ver tabela 8), e as culturas de células foram incubadas durante 72 h. O veículo (H2O) foi utilizado como controle, e todos os compostos foram testados em uma porcentagem constante de veículo. As células obtidas a partir da cultura celular foram incubadas durante 45 minutos a 37°C com um ensaio tampão AldefluorTM contendo o BodipyTM-aminoacetaldeído, um substrato ALDH aldeído fluorescente. ALDH converte o substrato fluorescente BAAA para o ácido BodipyTM- aminoacético (BAA) que é retido na célula. Um inibidor de efluxo ativo está presente no tampão de ensaio AdelfluorTM de modo a evitar o efluxo ativo da célula do produto de substrato ALDH dependente de BAA convertida. O sinal fluorescente é diretamente proporcional à atividade ALDH nas células e é medido por citometria de fluxo. Um controle negativo é usado para medir o nível de fluorescência do fundo. Para tal fim, utilizou-se 4-(N,N-dietilamino)- benzaldeído (DEAB) como inibidor seletivo de ALDH. Uma contagem de células de viabilidade foi realizada usando Kit para marcação de célula morta fixadas em vermelho LIVE/DEAD® Fixable Far Red Dead Cell Stain Kit (Invitrogen). Os dados experimentais são analisados utilizando um programa de computador, Graphpad Prism v5 (GraphPad Software, Inc. La Jolla, CA) e os valores de EC50 foram determinados como a dose de composto necessária para reduzir os valores de absorvância para 50% do sinal obtido para a célula tratada no veículo culturas. Tabela 7: Ensaio de inibição de crescimento da linha celular MOLM-14 na presença de Citarabin e composto 2-3 Tabela 8: diminuição da população ALDH na linha celular MOLM- 14 pelo composto 2-3 usando o ensaio do kit AldefluorTM 7. Exemplo 7: Ensaio de inibição de crescimento (EC50, μM) da linha celular Hep3B-Luc na presença do composto 2-3
[00128] Antes do tratamento composto, o composto foi dissolvido em H2O para se obter uma solução de reserva 10 mM. As soluções de trabalho (concentrações finais de 5 vezes) foram, então, preparadas com meio MEM (Gibco, 1128319) contendo 10% de soro de bovino fetal (Gibco, 10099141).
[00129] Ao realizar o ensaio, o teste de resposta a dose da Doxorrubicina na linha de células BEL-7402 (carcinoma hepatocelular primário humano) será usado como controle interno em cada placa de ensaio para o ensaio. O meio MEM suplementado com 5% de H2O (5x) será adicionado nas células como um controle negativo. A concentração final de H2O foi de 1% em cada cavidade.
[00130] A linha celular de Hep3B-Luc (linhagem celular de carcinoma de fígado humano transfectado com luciferase para modelo de tumor ortotópico) foi cultivada em meio MEM suplementado com 10% v/v de Soro de Bovino Fetal (FBS), 1% de Penicilina-Estreptomicina e mantido a 37°C com 5% de CO2. 800 células foram plaqueadas em um fundo branco claro de 384 cavidades (Corning, 3707).
[00131] Procedimento de ensaio: as células na fase logarítmica são coletadas e contadas. As suspensões de células são adicionadas a cada cavidade de placa de 384 cavidades a 800 células por cavidade (volume total 40 μl). As cavidades de margem são preenchidas com tampão PBS. O composto de teste em várias concentrações é adicionado em duplicados (adicionar 10 μl de soluções de composto 5x à placa). A placa de ensaio é incubada durante 72 h em incubadora de CO2 a 37°C/5%. A viabilidade celular foi medida utilizando o ensaio de viabilidade de células luminescentes CellTiter-Glo® conforme descrito pelo fabricante (Promega, Ref G7571). Após a adição de 100 μL de solução CellTiter- Glo® reactifs, a luminescência foi medida usando um luminômetro PHERAstar Plus. Os dados foram registrados pela PHERAstar Plus, a aquisição e a análise de dados foram realizadas usando o programa Microsoft Excel e o software GraphPad Prism v.6. Tabela 9: Ensaio de inibição do crescimento da linha celular Hep3B-Luc na presença do composto 2-3 8. Exemplo 8: Ensaio de inibição de crescimento (EC50, μM) de linhas de células CAKI-1 e 786-O na presença do composto 2-3
[00132] Cultura celular: as linhas celulares de CAKI- 1 e 786-O foram mantidas em meio RPMI 1640 (Dutscher, L0498) contendo 1% de penicilina-estreptomicina (Dutscher, P06-07100) e 10% de soro de bovino fetal (Gibco, W3387L) e cultivadas em 37°C com 5% de CO2.
[00133] Medidas de viabilidade celular: a viabilidade celular foi medida utilizando o ensaio de viabilidade de células luminescentes CellTiter-Glo® conforme descrito pelo fabricante (Promega, Ref G7571) usando um luminômetro Infinite F200Pro (Tecan). Resumidamente, as células foram plaqueadas em placas de 96 cavidades (branco com fundo transparente) em 90 μL de meio por cavidade e foram deixadas a crescer durante a noite antes do ensaio. O número de células semeadas por cavidade é indicado na tabela abaixo: Tabela 10: Número de células semeadas por cavidade para ensaios de viabilidade de células CAKI-1 e 786-O
[00134] Os compostos 2-3 e dois compostos de referência (Sorafenibe e Sunitinibe) foram adicionados em diferentes concentrações a cada cavidade e as culturas de células foram incubadas durante 72 h. Para análise de composto 2-3, utilizou-se H2O como controle negativo (= não tratado) e todas as concentrações foram testadas em uma porcentagem constante de H2O. Para a análise de Sorafenibe e Sunitinibe, o DMSO foi usado como controle negativo (= não tratado) e todas as concentrações foram testadas em uma porcentagem constante de DMSO. 72h após incubação de compostos, foram adicionados 100 μL de CellTiter-Glo® a cada cavidade e a luminescência foi medida usando um Infinite F200Pro (Tecan). Os valores de EC50 foram determinados como a dose do composto requerido para reduzir os valores luminescentes para 50% do sinal obtido para culturas de células não tratadas. Os dados experimentais foram analisados usando um programa de computador, Graphpad Prism v5 (GraphPad Software, Inc. La Jolla, CA). Todas as experiências foram realizadas pelo menos em triplicado e repetidas ao menos três vezes independentes. Tabela 11: Ensaio de inibição de crescimento da linha celular CAKI-1 na presença do composto 2-3 e Sorafenibe, Sunitinibe como controles Tabela 12: Ensaio de inibição de crescimento da linha celular 786-O na presença do composto 2-3 e Sorafenibe, Sunitinibe como controles 9. Exemplo 9: efeito in vitro do composto 2-3 sobre células de câncer de cólon metastático hepático e subpopulação de células tronco de câncer de cólon
[00135] O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro a atividade citotóxica do composto 2-3 contra células derivadas de câncer de cólon metastático hepático recém- isoladas de pacientes e mais especificamente sobre a subpopulação de CSCs. Poucos métodos estão atualmente disponíveis para rastrear in vitro os CSCs. Por exemplo, a atividade de aldeído desidrogenase (ALDH) pode ser usada como marcador para identificar células-tronco humanas cancerosas em câncer de cólon. Além disso, a CSC pode ser enriquecida cultivando células em suspensão em um meio isento de soro suplementado com fatores de crescimento. Em tais condições, apenas CSCs cresceram como clones tridimensionais multicelulares chamados de "tumorosferas". Ao aproveitar a capacidade formadora de tumorosfera, podemos, então, estimar a quantidade de CSC na amostra e, assim, avaliar o efeito de uma dada molécula sobre a capacidade dos CSC de se auto renovar. Cultura de células tumorais derivadas do paciente
[00136] As células de metástase hepática derivadas do paciente (CPP19, 30, 36 e CPP45- ver tabela 1 para descrições clínicas) foram mantidas em DMEM completo (Gibco) com 10% de FBS. As células foram obtidas a partir de biópsias fornecidas por CHU-Carémeau (Nimes, França) dentro de um protocolo aprovado. Os consentimentos informados assinados foram obtidos de pacientes antes da aquisição de amostras de acordo com todos os aspectos éticos e legais. Os tumores foram lavados, picados em fragmentos (<2mm3) e digeridos com liberase H (0,26U/mL, Roche) ressuspensas em Accumax (Sigma- Aldrich). Após 2 horas a 37°C, a suspensão celular foi filtrada através de uma malha de 40 μm para obter uma única suspensão celular e plaqueada em meio DMEM, suplementada com FBS, glutamina, antibióticos e aminoácidos não essenciais. Quando se formou uma monocamada de células tumorais derivadas do paciente, as células foram separadas usando tripsina/EDTA e ressuspensas em DMEM com FBS a 10% (para células aderentes) ou meio M11 definido (para formação de esfera). As células foram cultivadas numa atmosfera umidificada a 37°C e 5% de CO2. Ensaios de toxicidade in vitro
[00137] As células foram plaqueadas a 104 células por cavidade em placas de cavidade P96 em DMEM com FBS a 10%. Após 24 horas, as células foram tratadas com o composto 2-3 e a viabilidade celular foi avaliada 72 horas pós-tratamento pelo Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente CellTiter- Glo® (Promega). A EC50 foi calculada usando GraphPad Prism Software v6 (Graphpad Software, Inc La Jolla, CA).
[00138] Ensaio AldefluorTM e classificação celular celular ativada por fluorescência (FACS)
[00139] O ensaio AldefluorTM (Stem Cell Technologies, 01700) foi realizado de acordo com as instruções do fabricante (Stem Cell Technologies). As células ALDHpositiva foram identificadas comparando a mesma amostra com e sem o inibidor de ALDH dietilaminobenzaldeído (DEAB). Barreira FACS de ALDH atividade foi estabelecida em 0,1% em presença de DEAB. As células foram analisadas usando MacsQuant e os dados analisados usando o software Cyflogic. As células CPP36 não foram utilizadas nessas análises devido ao alto perfil de autofluorescência celular. Ensaios de formação de esferas
[00140] A avaliação da Esfera de Formação de Células foi determinada após o plaqueamento de 500 células/cavidade de 200 μL em meio M11 em cavidades P96 em placas de fixação ultrabaixas (Corning). M11 é meio DMEM/F12 (1:1) (Gibco), suplementado com N2, 3 mM de Glutamina, Glicose 0,6%, insulina 4 μg/ml (Sigma-Aldrich), hBasic-FGF 10 ng/ml (R & D Systems) e HEGF 20 ng/ml (R & D Systems). O tamanho da esfera superior a 50 μm foi contado após 10 dias e representado em número de esferas por campo de imagem. As células CPP45 não foram utilizadas nessas análises devido à sua incapacidade de formar tumorosferas. Análise estatística
[00141] Para cada experiência, os dados são mostrados como S.E.M médio de três experimentos independentes. GraphPad Prism Software v6 (Graphpad Software, Inc La Jolla, CA) foi utilizado para análise de dados, ou seja, testes t de estudantes. Tabela 13: Características clínicas do paciente com câncer de cólon • Avaliação in vitro da citotoxicidade do composto 2-3 em células derivadas do paciente com câncer colorretal metastático hepático (CRC)
[00142] O Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente CellTiter-Glo®, conforme descrito pelo fabricante (Promega, Ref G7571), foi utilizado para determinar a citotoxicidade do composto 2-3 em células derivadas de pacientes com CRC metastático hepático. A viabilidade celular de células de controle não tratadas é fixada em 100%. As células foram primeiro plaqueadas a uma densidade de 10000 células/100μL por cavidade em placas de P96 e incubadas numa atmosfera umidificada com 5% de CO2 a 37°C durante 24 horas. As células foram então incubadas com solvente (0,1% de DMSO, células de controle não tratadas) ou concentração crescente do composto 2-3. Após 72 horas de incubação em concentrações variando de 0,1 a 30 μM, o composto 2-3 demonstrou atividades citotóxicas dose-resposta contra quatro diferentes células derivadas do paciente CRC estabelecidas a partir de biópsias recentes de metástases hepáticas (Tabela 14). Tabela 14: Ensaio de inibição do crescimento em células derivadas do paciente de CRC metastático hepático na presença do composto 2-3 • Avaliação in vitro do composto 2-3 em células positivas para AldefluorTM a partir de células derivadas de pacientes com CRC metastático hepático
[00143] As células foram primeiro plaqueadas a uma densidade de 250000 células/1000 μL por cavidade em placas P96 e incubadas numa atmosfera umidificada com 5% de CO2 a 37°C durante 24 horas. As células foram, então, incubadas com solvente (0,1% de DMSO) ou concentração crescente do composto 2-3 durante 72 horas. As células foram tripsinizadas, coletadas e lavadas. As partículas acelulares e as células mortas foram excluídas com base em baixa dispersão de luz e positividade da mancha de células mortas de Sytox (Life Technologies) usando um citômetro de fluxo MACSQuant (Miltenyi biotec). A percentagem de células ALDHbright foi, então, quantificada utilizando o ensaio AldefluorTM (Stemcell Technologies, 01700). O inibidor de ALDH, dietilaminobenzaldeído (DEAB), foi adicionado para garantir a identificação precisa de células positivas para ALDH. Quando DEAB inibidor ALDH foi aplicado, a fluorescência foi reduzida (deslocada para a esquerda) e uma barreira foi desenhada para delinear o limite superior dessas células. Esta barreira foi usada para selecionar a subpopulação ALDH de alta coloração. Como mostrado, após 72 horas de incubação em concentrações variando de 1 a 3 μM, o composto 2-3 demonstra uma atividade citotóxica significante (p <0,001) e resposta à dose contra a subpopulação celular positiva de AldefluorTM em três células derivadas do paciente CRC diferentes estabelecido a partir de biópsias recentes de metástases hepáticas (Figura 1). • Composto 2-3 bloqueia a formação de tumorosfera de células derivadas de pacientes com CRC metastático hepático.
[00144] A formação de tumorosfera in vitro é amplamente utilizada para identificar a presença de células tronco de câncer (CSCs) em tumores sólidos ou populações de células heterogêneas, uma vez que apenas essas células têm a capacidade de se auto renovar. Utilizamos esse ensaio como uma medida funcional da frequência e viabilidade do CSC e examinamos a capacidade das células derivadas do paciente de metástase hepática para formar tumorosferas após o tratamento com o composto 2-3. Para este fim, as células foram, primeiramente, cultivadas em um balão de cultura de tecidos com meio DMEM completo com soro bovino fetal (FBS) como monocamada até chegarem perto da confluência. As células foram tripsinizadas, coletadas, lavadas para remover o FBS e passadas através de um filtro de células de malha de 40 μm. A suspensão de célula única foi, então, cultivada com meio CSC (isto é, meio M11) consistindo em DMEM-F12 suplementado com EGF 20 ng/ml, suplemento bFGF e N2 a 20 ng/ml (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) em placa de fixação ultra baixa P96 cavidades (Corning Life Sciences, Tewksbury, MA). As células foram plaqueadas a uma densidade de 500 células/100μL por cavidade e incubadas numa atmosfera umidificada com 5% de CO2 a 37°C. Para determinar o efeito do composto 2-3 sobre a eficiência de formação de tumorosfera e o tamanho da esfera, o composto 2-3 foi adicionado a duas concentrações (0,3 μM ou 3 μM) 24 horas após o plaqueamento num volume final de 200 μL de M11. Dez dias depois, as placas foram examinadas para a formação de tumorosfera (> 50 μm) usando um microscópio invertido. Imagens de contraste de fase foram tiradas e tamanho e número de esfera foram medidos manualmente e contados a partir das imagens usando o ImageJ. Conforme mostrado na figura 2, o composto 2-3 induziu uma diminuição drástica e dependente da dose na formação de tumorosfera nas três células derivadas do paciente CRC testadas isoladas de metástases hepáticas (CPP19, CPP30 e CPP36). De fato, a eficiência de formação de tumorosfera foi significativamente suprimida por 3 μM do composto 2-3. Em contraste, o tamanho dos tumores fosfores não foi diminuído estatisticamente pelo tratamento, exceto em 3 μm em células CPP19 (p = 0,02). Exemplo 10: Ensaio de inibição de crescimento (EC50, μM) de células derivadas do carcinoma hepatocelular (HCC) na presença do composto 2-3
[00145] As células derivadas do carcinoma hepatocelular do paciente (HCC) foram obtidas após consentimento informado por escrito sob a aprovação do conselho de revisão institucional CrownBio e sob a estrita conformidade da declaração de Helsinki sobre pesquisa médica envolvendo seres humanos.
[00146] As células do carcinoma hepatocelular (HCC) derivadas do paciente foram mantidas em meio, respectivamente, descritas na tabela 15, contendo 1% de penicilina-estreptomicina (Life Technologies, 15070-063), com suplementos para cultura celular primária (PCS) contendo hidrocortisona (50 nM), Fator de crescimento epidérmico (20 ng/ml), fator de crescimento de β-fibroblasto (10 ng/ml), suplemento (1X) de meio líquido ITS heparina (2 μg/ml) e aminoácido não-essencial (NEAA, 0,01 mM, 1X). A célula primária foi cultivada em uma atmosfera umidificada (95% de umidade relativa) com 5% de CO2 a 37°C. Tabela 15: Meio de cultivo e condição de cultura para células de carcinoma hepatocelular derivado do paciente (HCC)
[00147] O ensaio de inibição do crescimento celular foi realizado como descrito anteriormente no exemplo 5 utilizando o ensaio de viabilidade de células luminescentes CellTiter-Glo® como descrito pelo fabricante (Promega, Ref G7571). O número de células semeadas por cavidade (em Microplacas tratadas com TC de poliestireno preto e fundo claro de 96 cavidades, Cat # 3340, Corning®) é descrito na tabela 16. Foi colocado um adesivo preto de fundo (Cat # 6005189, Perkin Elmer) até a parte inferior de cada placa antes de gravar a luminosidade CellTiter-Glo®. Tabela 16: Número de células semeadas por cavidade para Ensaios de viabilidade de células derivadas do paciente HCC
[00148] Os dados experimentais são analisados usando um programa de computador, Graphpad Prism V 5.0 (GraphPad Software, Inc. La Jolla, CA) e os valores de EC50 foram determinados como a dose do composto necessário para reduzir os valores de absorvância para 50% do sinal obtido para o veículo tratado culturas de células e foram uma média de pelo menos três experiências independentes.
[00149] Após 72 horas de incubação, o composto 2-3 demonstrou atividades citotóxicas dose-resposta contra oito células derivadas diferentes pacientes HCC (ver tabela 17). Tabela 17: Ensaio de inibição do crescimento em células derivadas do paciente de Carcinoma Hepatocelular (HCC) na presença do composto 2-3, Sorafenibe e Cisplatina

Claims (19)

1. Composto caracterizado por ser de fórmula (I) em que R1 é um aril C6-C10 substituído ou não substituído por R9; Lw é um alquil (C1-C10) que é não substituído ou substituído por um alquil (C1-C10); R2 é NR5R6; R3 é um átomo de hidrogênio; R5 e R6 são escolhidos independentemente de um hidrogênio; um alquil (C1-C10) que é não substituído ou substituído por um alquil (C1-C10); R9 é selecionado independentemente de um hidrogênio; ou um -NR5R10; R10 é escolhido independentemente de um hidrogênio; ou um heteroaril de um anel de 5 a 8 membros compreendendo 1, 2 ou 3 átomo(s) de nitrogênio substituído(s) ou não por R12; R12 é escolhido de um átomo de hidrogênio; ou um heteroaril de um anel de 5 a 8 membros compreendendo 1, 2 ou 3 átomo(s) de nitrogênio; n é um inteiro igual que é 4; m pode representar um inteiro igual que pode ter qualquer um dos valores 1 ou 2; w pode representar um inteiro igual que pode ter qualquer um dos valores 0 ou 1; e qualquer sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ser escolhido entre 2-(4-clorofenilamino)- 4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)-quinolina (1-5); 2-(4- clorobenzilamino)-4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)- quinolina (2-2); 2-[3-metil-4-(pirimidin-2- ilamino)fenilamino]-4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)- quinolina (3-4); 2-{4-[4-(piridin-3-il)-2-pirimidinamino]- 3-metil-fenilamino}-4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)- quinolina (4-2) ou uma sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ser escolhido entre o sal de cloridrato de 2-(4-clorofenilamino)-4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)- quinolina (1-6); sal de cloridrato de 2-(4- clorobenzilamino)-4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)- quinolina (2-3); sal de cloridrato de 2-[3-metil-4- (pirimidin-2-ilamino)fenilamino]-4-(4-terc- butilaminopiperidin-1-il)-quinolina (3-5); sal de cloridrato de 2-{4-[4-(piridin-3-il)-2-pirimidinamino]-3-metil- fenilamino}-4-(4-terc-butilaminopiperidin-1-il)-quinolina (4-3).
4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado por ser para uso em terapia.
5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado por ser para uso como uma substância terapeuticamente ativa para o tratamento e/ou prevenção de uma doença proliferativa e/ou neoplásica.
6. Composto, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a doença proliferativa e/ou neoplásica é escolhida do grupo que consiste em: adenocarcinoma; carcinoma de rim; carcinoma hepatocelular; carcinoma colorretal; adenocarcinoma de mama; câncer de pulmão; uma leucemia (por exemplo, leucemia mieloide aguda, leucemia mielogênica aguda, leucemia linfocítica aguda, leucemia promielocítica aguda (APL), leucemia linfoblástica aguda de células T, leucemia de células T adultas, leucemia basofílica, leucemia eosinofílica, leucemia granulocítica, leucemia de células pilosas, leucemia leucopênica, leucemia linfática, leucemia linfoblástica, leucemia linfocítica, leucemia megacariocítica, leucemia micromieloblástica, leucemia monocítica, leucemia neutrofílica e leucemia de células tronco); um linfoma maligno, um melanoma maligno; um sarcoma; câncer hepático; câncer de cólon; câncer de cólon metastático; câncer colorretal metastático hepático e um tipo misto de neoplasia.
7. Composição farmacêutica caracterizada por compreender uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um adjuvante, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável deste.
8. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que a quantidade terapeuticamente eficaz do composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3, é formulada ou co- formulada em nanopartículas.
9. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que as nanopartículas compreendem uma composição polimérica biodegradável.
10. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que o polímero é baseado em poli(ácido DL-lático-co-glicólico) tendo um peso molecular de 7 a 240 kDa; ou um copolímero de ácido polilático (PLA) e ácido poliglicólico (PGA) onde a razão molecular está entre 95:5 e 50:50.
11. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que as nanopartículas compreendem uma composição lisosomal biodegradável.
12. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que as nanopartículas compreendem um polímero ou copolímero biocompatível.
13. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que as nanopartículas compreendem uma formulação lipossomal.
14. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 13, caracterizada pelo fato de que as nanopartículas estão associadas de forma covalente ou não covalente com um polietilenoglicol (PEG).
15. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 14, caracterizada pelo fato de que as nanopartículas têm um tamanho médio de cerca de 80 a cerca de 600 nm.
16. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 15, caracterizada por ser adequada para administração oral, parentérica, ocular, transdérmica, nasal ou para inalação.
17. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que as nanopartículas compreendem um item escolhido a partir de nanoparticulas de PLGA, nanopartículas PLGA-PEG (bloco tipo AB, BA, ABA ou BAB, onde A = PLGA e B = PEG) e nanoparticulas específicas.
18. Uso de uma quantidade terapeuticamente ativa de um composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3, ou de uma composição farmacêutica, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 7 a 17, caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento para o tratamento e/ou prevenção de uma doença proliferativa e/ou neoplásica, em um ser humano ou animal que dele necessite.
19. Kit caracterizado por compreender uma composição farmacêutica, confome definida em qualquer uma das reivindicações 7 a 17, e as intruções para seu uso.
BR112017018637-3A 2014-10-31 2015-10-26 Composto e seus usos, composição farmacêutica e seus usos e kit para tratamento e prevenção de doenças neoplásicas e não neoplásicas proliferativas BR112017018637B1 (pt)

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