BR112017014414B1

BR112017014414B1 - Formulação farmacêutica

Info

Publication number: BR112017014414B1
Application number: BR112017014414-0A
Authority: BR
Inventors: Michael Joseph Edouard Boonen; Claude Peerboom
Original assignee: UCB Biopharma SRL
Priority date: 2015-02-09
Filing date: 2016-02-05
Publication date: 2024-01-23
Also published as: CA2973423A1; CA2973423C; CN107249571B; EP3256154A1; EP3256154B1; US10039826B2; IL253177B; DK3256154T5; EA035719B1; HRP20192222T1; MX2017009827A; AU2016218074A1; MY183068A; EA201791716A1; AU2016218074B2; JP2018505894A; BR112017014414A2; HUE047860T2; IL253177A0; JP6784683B2

Abstract

a presente invenção diz respeito a uma formulação farmacêutica nova, em particular a uma formulação farmacêutica compreendendo uma proteína, mais particularmente um anticorpo como um ingrediente ativo.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[0001] A presente invenção pertence ao campo das formulações farmacêuticas. Mais especificamente, ela se refere a uma formulação farmacêutica compreendendo uma proteína, tal como um anticorpo.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[0002] Anticorpos, como outros agentes terapêuticos de proteína, são moléculas grandes e complexas e são inerentemente instáveis quando armazenadas por um período de tempo, tanto química quanto fisicamente, resultando potencialmente em uma redução ou perda da atividade. Instabilidade química típica pode resultar em desamidação, hidrólise, oxidação, beta-eliminação ou trocas de dissulfeto. Instabilidade física pode resultar em desnaturação, agregação ou precipitação.

[0003] Portanto, para armazenamento, transporte, manuseio e administração, formulações farmacêuticas de anticorpos e outras proteínas têm que minimizar quaisquer dos fenômenos anteriores. Anticorpos podem ser formulados na forma seca com congelamento, isto é, liofilizada para reconstituição em um solvente pouco antes da administração, ou anticorpos podem ser formulados na forma líquida, tal como em uma solução aquosa. Formulações de anticorpos secas com congelamento tendem a ser mais estáveis, uma vez que a água é tanto um reagente quanto um solvente que facilita a transferência dos reagentes e é, assim, crítica para muitas vias de degradação química que levam à instabilidade da proteína (Andya, J. D., Hsu, C. C., & Shire, S. J. (2003). Mechanisms of aggregate formation and carbohydrate excipient stabilization of lyophilized humanized monoclonal antobody formulations. AAPS. PharmSci. 5, E10). Entretanto, a despeito da tendência de ser menos estável, o interesse foi recentemente focado em formulações líquidas de anticorpos e outras proteínas, uma vez que estas são mais fáceis e mais convenientes para o paciente e para o profissional de saúde manusear e administrar em comparação com as formulações secas com congelamento. Formulações líquidas não precisam ser reconstituídas e podem ser administradas com preparo mínimo. Entretanto, a estabilização de proteínas nas formulações líquidas para evitar ou minimizar reações indesejadas, tal como agregação, precipitação ou degradação continua um desafio particular. Agregação é um problema particular. Moléculas de proteína individuais grudam fisicamente um as nas outras, resultando, por exemplo, na formação de matéria ou precipitado insolúvel, que pode não mais ser ativo e ainda causar reações imunológicas indesejadas mediante administração. Adicionalmente, um problema principal causado pela formação de agregado é que, durante a administração, a formulação farmacêutica pode bloquear seringas ou bombas.

[0004] Os caminhos físicos sugeridos de degradação para formação de agregado e partícula são frequentemente descritos como resultante de uma combinação de efeitos de estabilidade conformacional e coloidal. A estabilidade conformacional é a diferença de energia livre entre o estado dobrado nativo e estado não dobrado em condições fisiológicas e, como tal, mede a propensão de um anticorpo de desdobrar. O desdobramento é frequentemente responsável pela taxa de agregação geral. Estabilidade coloidal se refere à propensão de auto-repulsão das moléculas no estado nativo, principalmente devido às cargas não específicas localizadas na área da superfície da molécula.

[0005] Agregação e degradação de proteína durante o armazenamento em longo prazo são geralmente estimadas determinando os níveis de espécies de alto peso molecular (HMWS) presentes na formulação depois de um dado período de armazenamento, tipicamente usando cromatografia de exclusão por tamanho (SEC). Algumas vezes, estes eventos podem resultar em precipitação, que é visível pelo observador.

[0006] De maneira a ser úteis, formulações líquidas farmacêuticas de anticorpos e outros produtos terapêuticos de proteína precisam ser estáveis em longo prazo, e minimizar as reações anteriores de maneira a conter a quantidade correta de ingrediente farmacêutico na forma ativa.

[0007] Consequentemente, vários estabilizantes foram explorados na técnica para ajudar a diminuir as taxas de degradação de anticorpos por meio de um mecanismo de exclusão preferido, levando a uma camada de água em excesso que circunda o anticorpo e forçando a proteína a adquirir um estado mais compacto para minimizar sua área de superfície. Estabilizantes incluem certos açúcares, polióis, aminoácidos, sais e polímeros, tal como polietileno glicol. Geralmente, um estabilizante preferido é escolhido para uma dada formulação, embora ocasionalmente uma combinação de estabilizantes possa ser usada.

[0008] Tipicamente, estabilizantes de aminoácido foram empregados em formulações de anticorpo líquidas para injeção, como uma alternativa aos açúcares, e geralmente formulados a um pH inferior para otimizar a estabilidade do anticorpo. Além do mais, glicina é uma escolha frequente de agente de volume em produtos secos por congelamento onde compostos cristalizáveis são necessários para agir provendo a textura apropriada de maneira a evitar os problemas de volume e consistência aparentes com a formulação, tal como colapso durante o processo de secagem primário. Um agente de volume cristalino agiria como uma carga aumentando a densidade do produto sólido e evitando qualquer risco de perda de estrutura. Um agente de volume cristalino também provê composições homogêneas, densas, é fácil de reconstituir e tem uma alta temperatura eutética permitindo alta temperatura de sublimação durante a secagem primária do processo de liofilização. Neste contexto, glicina é usada devido as suas propriedades de cristalização, isto é, crioprotetoras, entretanto, uma vez cristalizada, ela não tem mais capacidades de estabilização e, portanto, geralmente um agente de estabilização adicional é adicionado a uma formulação como esta.

[0009] A escolha do estabilizante também é impactada por seus respectivos perfis de risco, tais como efeitos possíveis na glicose sanguínea e seu efeito na função renal. Com relação a isto, sacarose, quando administrada por meio de injeção intravenosa, não pode ser hidrolisada e, portanto, não afeta os níveis de glicose sanguíneos. Entretanto, produtos de anticorpo intravenoso foram associados com disfunção renal, falha renal aguda e nefrose osmótica, onde formulações estabilizadas com açúcar, e particularmente sacarose, possuem o maior risco de falha renal aguda devido à nefrose osmótica. Sacarose é um dissacarídeo composto dos monossacarídeos glicose e frutose e, comparada com outros osmólitos orgânicos, sacarose é um estabilizante de proteína de força intermediária (Street T.O. et al., A molecular mechanism for osmolyte-induced protein stability. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2006; 103(38):13997-14002).

[0010] Adicionalmente, formulações normalmente contêm excipientes adicionais, tais como agentes tamponantes, agentes tensoativos ou agentes de volume (tipicamente presentes em formulações secas com congelamento).

[0011] US 8.632.778 descreve uma formulação líquida contendo um anticorpo PM-1 humanizado em um tampão de histidina, contendo glicina e sendo livre de açúcar.

[0012] US 2004/0033228 descreve uma formulação líquida compreendendo um anticorpo, manitol e polissorbato em um tampão de citrato ou fosfato.

[0013] US 6.372.716 descreve uma formulação seca com congelamento contendo fator IX em um tampão de histidina contendo glicina e sacarose.

[0014] Embora anticorpos tenham uma estrutura geral similar, eles diferem na composição do aminoácido e seu padrão de glicosilação, bem como possíveis modificações pós-translacionais, tais como variantes de carga e glicosilação. Estas diferenças podem resultar em interações alteradas com outros componentes que afetará a estabilidade em longo prazo da formulação resultante, que consequentemente também precisará de otimização.

[0015] Com a tendência para aumentar a concentração de proteína nas formulações, para permitir menores volumes de administração, os problemas com relação à agregação e precipitação da proteína ficam mais evidentes. Tendo em conta o exposto anteriormente, permanece uma necessidade na técnica de prover formulações líquidas farmacêuticas melhoradas adicionais de anticorpos com agregação e precipitação de proteína reduzidas depois do armazenamento em longo prazo.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0016] A presente invenção aborda a necessidade identificada anteriormente provendo uma formulação líquida inédita compreendendo uma proteína terapêutica como ingrediente ativo, particularmente um anticorpo. Um efeito de estabilização diferencial foi atualmente surpreendentemente observado entre estabilizantes com relação à aparência dos agregados solúveis, comparados aos agregados (precipitados) insolúveis grandes em uma formulação farmacêutica líquida. Esta descoberta surpreendente levou a uma formulação farmacêutica nova que apresenta agregação e precipitação de proteínas reduzidas depois do armazenamento em longo prazo. De uma maneira mais específica, a invenção provê adicionalmente uma formulação líquida compreendendo um anticorpo que se liga especificamente ao CSF1R como um ingrediente ativo.

[0017] Em uma primeira modalidade, a invenção provê uma formulação farmacêutica líquida compreendendo um anticorpo como um ingrediente ativo, glicina e sacarose.

[0018] Em uma segunda modalidade, a formulação farmacêutica líquida de acordo com a primeira modalidade da invenção compreende glicina a uma concentração de 20 mM a 200 mM. Em uma outra modalidade da formulação farmacêutica líquida da invenção, o concentração de glicina é de 50 mM a 200 mM, de 75 mM a 175 mM, preferivelmente de 100 mM a 150 mM, ou 125 mM.

[0019] Em uma terceira modalidade, a formulação farmacêutica líquida de acordo com a primeira ou segunda modalidade da invenção compreende sacarose a uma concentração de 20 mM a 200 mM. Em uma outra modalidade da formulação farmacêutica líquida da invenção, a concentração de sacarose é 50 mM a 200 mM, 75 mM a 175 mM, preferivelmente 100 mM a 150 mM, ou 125 mM.

[0020] Em uma quarta modalidade, a formulação farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das modalidades da invenção compreende pelo menos 50 mg/mL de anticorpo, preferivelmente 50 mg/mL a 300 mg/mL ou 50 mg/mL a 250 mg/mL ou 50 mg/mL a 200 mg/mL ou 50 mg/mL a 150 mg/mL ou 50 mg/mL a 100 mg/mL.

[0021] Em uma modalidade particular adicional, a formulação farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das modalidades da invenção compreende 40 mg/mL a 80 mg/mL de anticorpo, alternativamente 40 mg/mL a 60 mg/mL de anticorpo.

[0022] Em uma quinta modalidade, a formulação farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das modalidades da invenção adicionalmente compreende um agente tensoativo. Versados estão cientes da escolha dos agentes tensoativos disponíveis para uso na formulação líquida de acordo com qualquer uma das modalidades da invenção, tais como, mas sem limitações, polissorbato 80, polissorbato 20, lecitina, poloxâmero (por exemplo, poloxâmero 188), dodecil sulfato de sódio (SDS), lauril sulfato de sódio, octil glicosídeo de sódio, lauril-, miristil-, linoleil- ou estearil-sulfobetaina, lauril-, miristil-, linoleil- ou estearil-sarcosina, linoleil-, miristil- ou cetil-betaina, lauroamidopropil-, cocamidopropil-, linoleamidopropil-, miristamidopropil-, palmidopropil- ou isostearamidopropil-betaina, miristamidopropil-, palmidopropil- ou isostearamidopropil-dimetilamina, metil cocoil taurato de sódio ou metil oleil taurato de dissódio, polietil glicol, polipropil glicol e copolímeros de etileno e propileno glicol. Em uma modalidade particular adicional da invenção, a formulação farmacêutica líquida compreende polissorbato 80.

[0023] Em uma sexta modalidade, a formulação líquida da invenção compreende 0,01% a 10% de Polissorbato 80. A quantidade de agente tensoativo pode ser ajustada de acordo com a proteína particular e conteúdos da formulação. Portanto, em uma modalidade adicional, a formulação da invenção compreende 0,01% a 5% de Polissorbato 80, 0,01 a 1% de Polissorbato 80, 0,01 a 0,1% de Polissorbato 80, preferivelmente 0,02 a 0,1% ou 0,05% de Polissorbato 80.

[0024] A formulação farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das modalidades da invenção pode conter um agente de tamponamento para manter um pH constante durante o armazenamento e administração. Existem muitos agentes de tamponamento usados no campo das formulações líquidas farmacêuticas, tais como, mas sem limitações, citrato, fosfato, lactato, histidina, glutamato, maleato, tartrato ou succinato. Uma espécie de tampão preferida é tipicamente selecionada entre aquelas com um pKa que é próximo (+/-1 unidade de pH) ao pH preferido para estabilidade da proteína ideal, de maneira a manter a alta capacidade de tamponamento e é associada com a estabilidade demonstrada máxima observada para uma proteína particular quando colocada em uma série de várias espécies de tampão. As faixas de pH adequadas de uma formulação são geralmente escolhidas daquelas associadas com a estabilidade demonstrada máxima observada para uma proteína particular quando colocada em uma série de formulações de vários pHs.

[0025] Em uma modalidade particular da invenção, a formulação farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das modalidades da invenção compreende citrato, preferivelmente uma concentração de citrato de 10 mM a 100 mM, 10 mM a 80 mM, 10 mM a 60 mM, 25 mM a 60 mM, preferivelmente 40 mM a 60 mM ou 50 mM.

[0026] Em uma modalidade particular adicional, a formulação farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das modalidades da invenção tem um pH de 4 a 7, preferivelmente 4 a 6, preferivelmente 4,5 a 5,5 ou 5.

[0027] Na sétima modalidade da formulação farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das modalidades da invenção, o anticorpo especificamente se liga ao receptor do fator estimulante de colônia-1 (CSF1R).

[0028] Em uma oitava modalidade da formulação farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das modalidades da invenção, o anticorpo especificamente se liga a CSF1R humano.

[0029] Em uma nona modalidade da formulação farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das modalidades da invenção, o anticorpo neutraliza CSF1R.

[0030] Em uma décima modalidade da formulação farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das modalidades da invenção, o anticorpo é um anticorpo humanizado ou de humano.

[0031] Em uma décima primeira modalidade da formulação farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das modalidades da invenção, o anticorpo compreende (a) uma cadeia leve compreendendo CDR1, CDR2 e CDR3 conforme definido em SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 e SEQ ID NO: 3, respectivamente e (b) uma cadeia pesada compreendendo CDR1, CDR2 e CDR3 conforme definido em SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 6, respectivamente.

[0032] Em uma décima segunda modalidade da formulação farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das modalidades da invenção, o anticorpo compreende uma cadeia leve variável conforme definido em SEQ ID NO: 7 ou 8 e uma cadeia pesada variável conforme definido em SEQ ID NO: 11 ou 12.

[0033] Em uma modalidade adicional da formulação farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das modalidades da invenção, o anticorpo compreende uma cadeia leve conforme definido em SEQ ID NO: 9 ou 10 e uma cadeia pesada conforme definido em SEQ ID NO: 13 ou 14.

[0034] Em uma décima terceira modalidade, a formulação farmacêutica líquida da invenção compreende 40 mM a 60 mM de tampão de citrato a pH 5, 100 mM a 150 mM de glicina, 100 mM a 150 mM de sacarose e 0,02% a 0,1% de Polissorbato 80.

[0035] Em uma modalidade particular adicional, a formulação farmacêutica líquida de acordo com a invenção compreende pelo menos 50 mg/mL de anticorpo, 50 mM de tampão de citrato a pH 5, 125 mM de glicina, 125 mM de sacarose e 0,05% de Polissorbato 80, em que o anticorpo é um anticorpo anti-CSF1R.

[0036] Em uma outra modalidade da formulação farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das modalidades da invenção, uma formulação farmacêutica estável apresenta um aumento igual ou menor que 10%, preferivelmente igual ou menor que 5%, mais preferivelmente igual ou menor que 3,5% em espécies de alto peso molecular (HMWS) medido depois de três meses de armazenamento a cerca de 35°C. Alternativamente, uma formulação farmacêutica estável apresenta um aumento igual ou menor que 1,2%, preferivelmente igual ou menor que 1,05%, em espécies de alto peso molecular (HMWS) em cada caso medido depois de 3 meses de armazenamento a cerca de 25°C. Preferivelmente, a quantidade de HMWS na formulação é preferivelmente medida por cromatografia de exclusão por tamanho.

[0037] Em uma modalidade adicional, a invenção provê um método para tratar um mamífero, particularmente um indivíduo humano, compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente efetiva da formulação farmacêutica líquida de qualquer uma das modalidades aqui descritas compreendendo um anticorpo que se liga especificamente a CSF1R, tal como um anticorpo com uma cadeia leve conforme definido em SEQ ID NO: 9 ou 10 e uma cadeia pesada conforme definido em SEQ ID NO: 13 ou 14, como um ingrediente ativo a um mamífero, particularmente um indivíduo humano, em que o mamífero, particularmente um indivíduo humano, tem um distúrbio que pode ser aliviado por meio de tratamento com tal anticorpo que se liga especificamente a CSF1R, por meio do que o distúrbio é câncer, tais como, por exemplo, leucemia e linfoma não Hodgkin, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide aguda adulta, carcinoma adrenocortical, astrocitoma, carcinoma da célula basal, câncer do duto biliar, câncer de bexiga, câncer ósseo, tais como osteossarcoma e histiocitoma fibroso maligno, glioma, ependimoma, meduloblastoma, câncer de mama, adenomas brônquicos, câncer cervical, leucemia linfocítica crônica, leucemia mielogenosa crônica, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer endometrial, câncer esofageal, família de tumores de Ewing, tumor da célula de germinação extracraniana, tumor da célula de germinação extragonadal, câncer do duto biliar extra-hepático, retinoblastoma, câncer da vesícula biliar, câncer gástrico (estômago), tumor carcinoide gastrointestinal, tumor estromal gastrointestinal (GIST), tumor da célula de germinação, tumor tronfoblástico gestacional, leucemia de célula capilar, câncer de cabeça e pescoço, câncer hepatocelular (fígado), linfoma, tais como linfoma de Hodgkin, linfoma de Burkitt, linfoma de célula T cutâneo, tais como fungoides de micose e síndrome de Sezary, câncer hipofaringeal, melanoma, tais como melanoma intraocular, sarcoma de Kaposi, câncer renal (célula renal), câncer laringeal, câncer dos lábios e cavidade oral, câncer de pulmão, tal como câncer de pulmão de célula não pequena ou câncer de pulmão de célula pequena, macroglobulinemia de Waldenstrom, carcinoma da célula de Merkel, mesotelioma, câncer de boca, mieloma múltiplo, síndromes mielodisplásticas, câncer nasofaringeal, neuroblastoma, câncer orofaringeal, câncer de ovário, câncer pancreático, câncer da paratireoide, câncer peniano, câncer faringeal, feocromocitoma, pineoblastoma e tumores neuroectodermais primitivos supratentoriais, tumor pituitário, neoplasma da célula do plasma, blastoma pleuropulmonar, câncer de próstata, câncer retal, rabdomiossarcoma, câncer da glândula salivar, sarcoma, câncer testicular, câncer de garganta, timoma, câncer da tireoide, câncer uretral ou tumor de Wilms.

[0038] Em uma outra modalidade adicional, o distúrbio que pode ser aliviado por meio do tratamento com um anticorpo que se liga especificamente a CSF1R é uma doença fibrótica, tal como, por exemplo, fibrose pulmonar, tais como fibrose pulmonar idiopática e fibrose cística, fibrose renal, incluindo atrofia tubular e fibrose intersticial, fibrose do fígado, cirrose do fígado, colangite esclerosante primária, cirrose biliar primária, fibrose endomiocardial, fibrose mediastinal, mielofibrosis, fibrose retroperitoneal, fibrose massiva progressiva, fibrose sistêmica nefrogênica, doença de Crohn, queloide, infarto do miocárdio, escleroderma, esclerose sistêmica e artofibrose.

[0039] A formulação farmacêutica líquida da invenção é adequadamente administrada ao paciente de uma única vez ou durante uma série de tratamentos e pode ser administrada ao paciente a qualquer momento do diagnóstico em diante; ela pode ser administrada como o único tratamento ou em conjunto com outros medicamentos ou terapias úteis no tratamento das condições, conforme descrito aqui antes;

[0040] A molécula de anticorpo pode ser o único ingrediente ativo na composição farmacêutica líquida. Alternativamente, o anticorpo pode ser administrado em combinação, por exemplo, simultânea, sequencial ou separadamente, com um ou mais outros ingredientes terapeuticamente ativos. Desta maneira, a molécula de anticorpo na composição farmacêutica líquida pode ser acompanhada por outros ingredientes ativos incluindo outros ingredientes do anticorpo, por exemplo, família do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR, HER-2), receptores do fator de crescimento endotelial vascular (VEGFR), anticorpos do receptor do fator de crescimento derivado de plaqueta (PDGFR) ou ingredientes de não anticorpo, tais como imatinib, dasatinib, nioltinib, basutinib, gefitinib, erlotinib, temsirolimus, vandetanib, vemurafenib, crizotinib, vorinostat, romidepsin, bortezomib, sorafenib, sunitinib, pazopanib, regorafenib, cabozantinib, Perfenidona, esteroides ou outras moléculas de medicamento. Em uma modalidade específica, a composição farmacêutica líquida da invenção compreende um anticorpo que se liga especificamente a CSF1R como um primeiro ingrediente ativo e adicionalmente compreende um segundo ingrediente ativo.

[0041] Ingrediente ativo da forma aqui empregada se refere a um ingrediente com um efeito farmacológico, tal como um efeito terapêutico, a uma dose relevante.

[0042] As composições farmacêuticas adequadamente compreendem uma quantidade terapeuticamente efetiva de anticorpo. O termo “quantidade terapeuticamente efetiva” da forma aqui usada se refere a uma quantidade de um agente terapêutico necessária para tratar, aliviar ou prevenir uma doença ou condição alvejada ou apresentar um efeito terapêutico, farmacológico ou preventivo detectável. Para qualquer anticorpo, a quantidade terapeuticamente efetiva pode ser estimada inicialmente tanto em ensaios de cultura celular quanto em modelos de animal, normalmente em roedores, coelhos, cães, porcos ou primatas. O modelo de animal também pode ser usado para determinar a faixa de concentração e via de administração apropriadas. Tal informação pode, então, ser usada para determinar doses e vias úteis para administração em humanos.

[0043] A quantidade terapeuticamente efetiva precisa para um indivíduo humano dependerá da severidade do estado da doença, da saúde geral do indivíduo, da idade, peso e gênero do indivíduo, dieta, tempo e frequência de administração, combinação(s) do medicamento, sensibilidades à reação e tolerância/resposta à terapia. Esta quantidade pode ser determinada por experimentação de rotina e é de julgamento do médico. Geralmente, uma quantidade terapeuticamente efetiva de anticorpo será de 0,01 mg/kg a 500 mg/kg, por exemplo, 0,1 mg/kg a 200 mg/kg, tal como 100 mg/kg.

[0044] Composições farmacêuticas podem ser convenientemente apresentadas em formas de dose unitária contendo uma quantidade predeterminada de um agente ativo da invenção por dose.

[0045] Para o tratamento das doenças apresentadas, a dosagem apropriada variará dependendo, por exemplo, do anticorpo particular a ser empregado, do indivíduo tratado, do modo de administração e da natureza e severidade da condição que está sendo tratada. Em uma modalidade particular, a formulação farmacêutica líquida da invenção é administrada por via intravenosa ou subcutânea. Quando administrada por meio de injeção intravenosa, ela pode ser administrada como uma injeção de bolo ou como uma infusão contínua. A formulação farmacêutica de acordo com qualquer uma das modalidades da invenção também pode ser administrada por injeção intramuscular. A formulação farmacêutica pode ser injetada usando uma seringa, um dispositivo de injeção, tal como um autoinjetor, um dispositivo sem agulha, um implante e um adesivo. A formulação da invenção também pode ser administrada por meio de inalação usando um dispositivo de inalação contendo a dita formulação para tal dispensação, por exemplo, usando um nebulizador ou inalador de líquido.

[0046] O processo para a produção de moléculas de anticorpo tipicamente compreende cultivar uma célula hospedeira contendo um vetor que codifica a sequência de anticorpos em condições adequadas para levar à expressão da proteína a partir do DNA que codifica a molécula de anticorpo da presente invenção, e isolar a molécula de anticorpo.

[0047] A molécula de anticorpo pode compreender somente um polipeptídeo de cadeia pesada ou leve, em cujo caso somente uma sequência que codifica polipeptídeos de cadeia pesada ou cadeia leve precisa ser usada para transfectar as células hospedeiras. Para a produção de produtos compreendendo tanto cadeias pesada quanto leve, a linha celular pode ser transfectada com dois vetores, um primeiro vetor que codifica um polipeptídeo de cadeia leve e um segundo vetor que codifica um polipeptídeo de cadeia pesada. Alternativamente, um único vetor pode ser usado, o vetor incluindo sequências que codificam polipeptídeos de cadeia leve e cadeia pesada.

[0048] Um anticorpo ou fragmento de anticorpo que pode ser fabricado de acordo com escalas industriais pode ser produzido cultivando células hospedeiras eucarióticas transfectadas com um ou mais vetores de expressão que codificam o fragmento do anticorpo recombinante. As células hospedeiras são preferivelmente células de mamíferos, mais preferivelmente células de Ovário de Hamster Chinês (CHO).

[0049] Células de mamíferos podem ser cultivadas em qualquer meio que suportará seu crescimento e expressão da proteína recombinante, preferivelmente o meio é um meio definido quimicamente que é livre de produtos derivados de animal, tais como soro de animal e peptona. Existem diferentes meios de cultura celular disponíveis aos versados na técnica compreendendo diferentes combinações de vitaminas, aminoácidos, hormônios, fatores de crescimento, íons, tampões, nucleosídeos, glicose ou uma fonte de energia equivalente, presentes em concentrações apropriadas para possibilitar o crescimento celular e produção de proteína. Os componentes de meios de cultura celular adicionais podem ser incluídos no meio de cultura celular em concentrações apropriadas em diferentes momentos durante um ciclo de cultura celular que seria conhecido por um versado na técnica.

[0050] A cultura celular de mamífero pode acontecer em qualquer recipiente adequado, tal como um frasco de agitação ou um biorreator, que pode ou não ser operado em um modo de alimentação em batelada dependendo da escala de produção necessária. Estes biorreatores podem ser tanto reatores de tanque agitado quanto ou suspensos no ar. Vários biorreatores em grande escala são disponíveis com uma capacidade de mais que 1.000 L a 50.000 L, preferivelmente entre 5.000 L e 20.000 L ou a 10.000 L. Alternativamente, biorreatores de uma menor escala, tais como entre 2 L e 100 L também podem ser usados para fabricar um anticorpo ou fragmento do anticorpo.

[0051] Um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é tipicamente encontrado no sobrenadante de uma cultura de célula hospedeira de mamífero, tipicamente uma cultura celular de CHO. Para processos de cultura de CHO em que a proteína de interesse, tal como um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é secretada no sobrenadante, o dito sobrenadante é coletado por métodos conhecidos na técnica, tipicamente por centrifugação.

[0052] Portanto, o método de produção de anticorpo compreende uma etapa de centrifugação e recuperação do sobrenadante depois da cultura celular e antes da purificação da proteína. Em uma modalidade particular adicional, a dita centrifugação é centrifugação contínua. Para evitar dúvidas, sobrenadante denota o líquido que fica acima das células sedimentadas resultantes da centrifugação da cultura celular.

[0053] Alternativamente, células hospedeiras são células procarióticas, preferivelmente bactérias gram negativas. Mais preferivelmente, as células hospedeiras são células de E. coli. Células hospedeiras procarióticas para expressão de proteína são bem conhecidas na técnica (Terpe, K. (2006). Um resumo dos sistemas de expressão bacteriana para produção heteróloga de proteína: de fundamentos molecular e bioquímico para sistemas comerciais. Appl Microbiol Biotechnol 72, 211-222.). As células hospedeiras são células recombinantes que foram geneticamente modificadas para produzir a proteína de interesse, tal como um fragmento do anticorpo. As células hospedeiras de E. coli recombinante podem ser derivadas de qualquer cepa de E. coli adequado incluindo de MC4100, TG1, TG2, DHB4, DH5α, DH1, BL21, K12, XL1Blue e JM109. Um exemplo é a cepa W3110 de E. coli (ATCC 27,325), uma cepa de hospedeiro comumente usada para fermentações de proteína recombinante. Fragmentos do anticorpo também podem ser produzidos cultivando cepas de E. coli modificadas, por exemplo, mutantes metabólicos ou cepas de E. coli deficientes em protease.

[0054] Um fragmento do anticorpo que pode ser purificado de acordo com os métodos da presente invenção é tipicamente encontrado em qualquer do periplasma da célula hospedeira de E. coli ou no sobrenadante da cultura de célula hospedeira, dependendo da natureza da proteína, da escala de produção e da cepa de E. coli usada. Os métodos para alvejar proteínas para estes compartimentos são bem conhecidos na técnica (Makrides,S.C. (1996). Estratégias para alcançar expressão de alto nível dos genes em Escherichia coli. Microbiol Rev 60, 512-538.). Exemplos de sequências de sinais adequadas para direcionar proteínas ao periplasma de E. coli incluem as sequências de sinais PhoA, OmpA, OmpT, LamB e OmpF de E. coli. Proteínas podem ser alvejadas para o sobrenadante dependendo dos caminhos secretórios naturais ou pela indução de vazamento limitado da membrana externa para causar secreção da proteína, cujos exemplos são o uso do líder pelB, o líder da proteína A, a coexpressão da proteína de liberação de bacteriocina, a proteína de liberação de bacteriocina induzida por mitomicina junto com a adição de glicina ao meio de cultura e a coexpressão do gene kil para permeabilização da membrana. Mais preferivelmente, a proteína recombinante é expressa no periplasma da E. coli hospedeira.

[0055] A expressão da proteína recombinante nas células hospedeiras de E. coli também pode estar sob o controle de um sistema indutível, por meio do que a expressão do anticorpo recombinante em E. coli está sob controle de um promotor indutível. Muitos promotores indutíveis adequados para uso em E. coli são bem conhecidos na técnica e, dependendo da expressão do promotor da proteína recombinante, podem ser induzidos fatores variados, tal como temperatura ou a concentração de uma substância particular no meio de crescimento. Exemplos de promotores indutíveis incluem os promotores lac, tac e trc de E.coli que são indutíveis com lactose ou o análogo de lactose não hidrolisável, isopropil-b-D-1- tiogalactopiranosídeo (IPTG) e os promotores phoA, trp e araBAD que são induzidos por fosfato, triptofano e L-arabinose, respectivamente. Expressão pode ser induzida, por exemplo, pela adição de um indutor ou uma mudança na temperatura, onde a indução depende da temperatura. Onde a indução da expressão da proteína recombinante é alcançada pela adição de um indutor à cultura, o indutor pode ser adicionado por qualquer método adequado dependendo do sistema de fermentação e o indutor, por exemplo, por adições de doses únicas ou múltiplas ou por uma adição gradual do indutor através de uma alimentação. Percebe-se que pode haver um atraso entre a adição do indutor e a indução real da expressão da proteína, por exemplo, onde o indutor é lactose, pode haver um atraso antes de ocorrer indução da expressão de proteína, enquanto que qualquer fonte de carbono pré-existente é utilizada antes da lactose.

[0056] Células hospedeiras de cultura de E. coli (fermentações) podem ser cultivadas em qualquer meio que suportará o crescimento de E. coli e expressão da proteína recombinante. O meio pode ser qualquer meio definido quimicamente, tal como, por exemplo, descrito em Durany O, et al. (2004). Estudos da expressão de fuculose-1-fosfato aldolase recombinante em Escherichia coli. Process Biochem 39, 1677-1684.

[0057] A cultura das células hospedeiras de E. coli pode acontecer em qualquer recipiente adequado, tal como um frasco de agitação ou um fermentador, dependendo da escala de produção necessária. Vários fermentadores de grande escala são disponíveis com uma capacidade de mais que 1.000 litros até cerca de 100.000 litros. Preferivelmente, fermentadores de 1.000 a 50.000 litros são usados, mais preferivelmente 1.000 a 25.000, 20.000, 15.000, 12.000 ou 10.000 litros. Fermentadores em escala menor também podem ser usados com uma capacidade entre 0,5 e 1.000 litros.

[0058] A fermentação de E. coli pode ser realizada em qualquer sistema adequado, por exemplo, modo contínuo, em batelada ou alimentado de batelada, dependendo da proteína e dos rendimentos necessários. O modo de batelada pode ser usado com pequenas adições de nutrientes ou indutores, onde necessário. Alternativamente, uma cultura alimentada por batelada pode ser usada e as culturas cresceram na pré-indução do modo de batelada na taxa de crescimento específica máxima que pode ser contínua usando os nutrientes inicialmente presentes no fermentador e um ou mais regimes de alimentação de nutriente usados para controlar a taxa de crescimento até que a fermentação seja completa. O modo alimentado em batelada também pode ser usado pré-indução para controlar o metabolismo das células hospedeiras de E. coli e permitir que densidades celulares superiores sejam alcançadas.

[0059] Se desejado, a célula hospedeira pode ser submetida a coleta do meio de fermentação, por exemplo, células hospedeiras podem ser coletadas da amostra por centrifugação, filtração ou por concentração. Neste caso, o processo tipicamente compreende uma etapa de centrifugação e recuperação celular antes da extração da proteína.

[0060] Para processos de fermentação por E. coli, em que a proteína de interesse, tal como um fragmento do anticorpo, é encontrada no espaço periplásmico da célula hospedeira, é necessário liberar a proteína da célula hospedeira. A liberação pode ser alcançada por qualquer método adequado, tal como lise celular por tratamento mecânico ou por pressão, tratamento de descongelamento-congelamento, choque osmótico, agentes de extração ou tratamento térmico. Tais métodos de extração para a liberação da proteína são bem conhecidos na técnica. Portanto, em uma modalidade particular, o processo de produção compreende uma etapa de extração adicional antes da purificação da proteína.

[0061] O termo "anticorpo" ou "anticorpos" da forma aqui usada se refere a anticorpos monoclonais ou policlonais. O termo "anticorpo" ou "anticorpos" da forma aqui usada inclui, mas sem limitações, anticorpos recombinantes que são gerados por tecnologias recombinantes conhecidas na técnica. "Anticorpo" ou "anticorpos" incluem anticorpos' de qualquer espécie, em particular de espécie de mamífero, incluindo anticorpos com duas cadeias pesadas essencialmente completas e duas essencialmente completas leves, anticorpos humanos de qualquer isotipo, incluindo IgA1, IgA2, IgD, IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgG4 IgE e IgM e variantes modificadas dos mesmos, anticorpos primatas não humanos, por exemplo, de chimpanzés, babuínos, rhesus ou macaco cinomolgo, anticorpos de roedores, por exemplo, de camundongo, rato ou coelho; anticorpos de cabra ou cavalo e anticorpos de camelideos (por exemplo, de camelos ou lhamas, tal como NanobodiesTM) e derivados dos mesmos ou de espécies de pássaro, tais como anticorpos de galinha ou de espécies de peixe, tais como anticorpos de tubarão. O termo "anticorpo" ou "anticorpos" também se refere a " anticorpos quiméricos" nos quais uma primeira porção de pelo menos uma sequência de anticorpos de cadeia pesada e/ou leve é de uma primeira espécie e uma segunda porção da sequência de anticorpos de cadeia pesada e/ou leve é de uma segunda espécie. Anticorpos quiméricos de interesse aqui incluem anticorpos "primatizados" compreendendo sequências que se ligam ao antígeno de domínio variável derivadas de um primata não humano (por exemplo, Old World Monkey, tal como babuíno, rhesus ou macaco cinomolgo) e sequências de região constante de humano. Anticorpos "humanizados" são anticorpos quiméricos que contêm uma sequência derivada de anticorpos não humanos. Para a maior parte, anticorpos humanizados são anticorpos de humanos (anticorpo do receptor) nos quais resíduos de uma região hipervariável do receptor são substituídos por resíduos de uma região hipervariável [ou região que determina complementariedade (CDR)] de uma espécie não humana (anticorpo do doador), tais como camundongo, rato, coelho, galinha ou primata não humano, tendo a especificidade, afinidade e atividade desejadas. Na maioria dos casos, resíduos do anticorpo humano (receptor) fora do CDR; isto é, na região do quadro (FR), são adicionalmente substituídos por resíduos não humanos correspondentes. Além do mais, anticorpos humanizados podem compreender resíduos que não são encontrados no anticorpo do receptor ou no anticorpo do doador. Estas modificações são feitas para refinar adicionalmente o desempenho do anticorpo. A humanização reduz a imunogenicidade dos anticorpos não humanos em humanos, facilitando assim a aplicação dos anticorpos para o tratamento da doença humana. Anticorpos humanizados e várias tecnologias diferentes para gerá-las são bem conhecidos na técnica. O termo "anticorpo" ou "anticorpos" também se refere a anticorpos humanos, que podem ser gerados como uma alternativa à humanização. Por exemplo, é possível produzir animais transgênicos (por exemplo, camundongos) que são capazes, mediante imunização, de produzir um repertório completo de anticorpos humanos na ausência da produção de anticorpos de murino endógenos. Por exemplo, foi descoberto que a deleção homozigota do gene da região de união (JH) de cadeia pesada do anticorpo gene em camundongos mutantes quiméricos e da linha de germinação resulta na inibição completa da produção do anticorpo endógeno. A transferência do arranjo do gene de imunoglobulina da linha de germinação humana em tais camundongos mutantes da linha de germinação resultará na produção de anticorpos humanos com especificidade contra um antígeno particular mediante imunização do animal transgênico que carrega os genes de imunoglobulina da linha de germinação humana com o dito antígeno. Tecnologias para produzir tais animais transgênicos e tecnologias para isolar e produzir os anticorpos humanos a partir de tais animais transgênicos são conhecidas na técnica. Alternativamente, no animal transgênico; por exemplo, camundongo, somente os genes de imunoglobulina que codificam para as regiões variáveis do anticorpo do camundongo são substituídos com sequências do gene da imunoglobulina variável humana correspondente. Os genes de imunoglobulina da linha de germinação de camundongo que codificam para as regiões constantes do anticorpo permanecem inalteradas. Desta maneira, as funções efetoras do anticorpo no sistema imune do camundongo transgênico e, consequentemente, o desenvolvimento da célula B, são essencialmente inalteradas, o que pode levar a uma resposta do anticorpo melhorada mediante desafio antigênico in vivo. Uma vez que os genes que codificam para um anticorpo particular de interesse foram isolados de tais animais transgênicos, os genes que codificam para as regiões constantes podem ser substituídos por genes de região constante de humanos de maneira a obter um anticorpo completamente humano. Outros métodos para obter fragmentos dos anticorpos de anticorpos humanos in vitro são baseados nas tecnologias de apresentação, tal como tecnologia de apresentação de fago ou de apresentação de ribossomo, em que bibliotecas de DNA recombinantes são usadas que são tanto geradas, pelo menos em parte, artificialmente quanto de repertórios do gene de domínio variável de imunoglobulina (V) dos doadores. Tecnologias de apresentação de fago e ribossomo para gerar anticorpos humanos são bem conhecidas na técnica. Anticorpos humanos também podem ser gerados de células B de humanos isoladas que são imunizadas ex vivo com um antígeno de interesse e subsequentemente fundidos para gerar hibridomas que podem, então, ser selecionados para o anticorpo humano ideal. O termo “anticorpo” ou “anticorpos”, da forma aqui usada, também se refere a um anticorpo aglicosilado.

[0062] O termo "anticorpo" ou "anticorpos" da forma aqui usada não somente se refere a anticorpos não truncados de qualquer espécie, incluindo de humano (por exemplo, IgG) e outras espécies de mamífero, mas também se refere a um fragmento do anticorpo. Um fragmento de um anticorpo compreende pelo menos um domínio de imunoglobulina de cadeia pesada ou leve conhecido na técnica e se liga a um ou mais antígeno(s). Exemplos de fragmentos do anticorpo de acordo com a invenção incluem fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 e Fv e scFv; bem como diacorpos, triacorpos, tetracorpos, minicorpos, anticorpos do domínio (dAbs), tais como fragmentos de sdAbs, VHH e VNAR, anticorpos de cadeia única, anticorpos biespecíficos, triespecíficos, tetraespecíficos ou multiespecífico formados de fragmentos do anticorpo ou anticorpos incluindo, mas sem limitações, os construtos de Fab-Fv ou Fab-Fv-Fv. Os fragmentos do anticorpo definidos anteriormente são conhecidos na técnica.

[0063] O termo “neutraliza” da forma aqui usada se refere a um anticorpo que inibe ou substancialmente reduz o efeito biológico da molécula à qual ele especificamente se liga. Portanto, a expressão “o anticorpo neutraliza CSF1R” se refere a um anticorpo que especificamente se liga a CSF1R e inibe ou substancialmente reduz o efeito biológico que resulta da ligação deste receptor a pelo menos um de seus ligantes biológicos. Um tipo particular de anticorpo que neutraliza CSF1R bloqueia ou substancialmente reduz a ligação de pelo menos um dos ligantes biológicos ao CSF1R.

[0064] O termo “receptor do fator estimulante de colônia-1” ou “CSF1R” da forma aqui usada se refere a uma quinase de tirosina-proteína que age como receptor de superfície celular para CSF1 e interleucina 34 (IL34) e exerce um papel essencial na regulação da sobrevivência, proliferação e diferenciação de células precursoras hematopoiéticas, especialmente fagócitos mononucleares, tais como macrófagos e monócitos. Ele promove a liberação de quimiocinas proinflamatórias em resposta a IL34 e CSF1 e, portanto, exerce um papel importante na imunidade inata e em processos inflamatórios. CSF1R também exerce um papel importante na regulação da proliferação e diferenciação do osteoclasto, na regulação da ressorção óssea e é necessário para o desenvolvimento normal dos ossos e dentes. CSF1R é necessário para a fertilidade normal de machos e fêmeas e para o desenvolvimento normal de dutos de leite e estruturas acinares na glândula mamária durante a gravidez. Ele também promove a reorganização do citoesqueleto de actina, regula a formação de nesgas da membrana, adesão celular e migração celular e promove a invasão de células de câncer.

[0065] CSF1 é uma citocina que controla a produção, diferenciação e função dos macrófagos e CSF1R medeia a maioria, se não todos, os efeitos biológicos desta citocina.

[0066] O termo “Ab969.g2” da forma aqui usada significa um anticorpo que se liga especificamente a CSF1-R e compreende (a) uma cadeia leve compreendendo CDR1, CDR2 e CDR3 conforme definido em SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 e SEQ ID NO: 3, respectivamente e (b) uma cadeia pesada compreendendo CDR1, CDR2 e CDR3 conforme definido em SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 6, respectivamente. Este anticorpo Ab969.g2 foi previamente descrito em PCT/EP2014/068050.

[0067] O termo “que especificamente se liga a CSF1R”, “especificamente se ligando a CSF1R” e equivalentes, da forma aqui usada quando se referindo a um anticorpo, significa que o anticorpo se ligará a CSF1R com afinidade e especificidade suficientes para alcançar um efeito biologicamente significativo. O anticorpo selecionado normalmente terá uma afinidade de ligação para CSF1R, por exemplo, o anticorpo pode ser ligar a CSF1R com um valor Kd entre 100 nM e 1 pM. As afinidades do anticorpo podem ser determinadas por um ensaio de bases de ressonância de plásmon de superfície, tais como o ensaio BIAcore; ensaio imunoabsorvente ligado à enzima (ELISA); e ensaios de competição (por exemplo, RIA’s), por exemplo. No significado da presente invenção, um anticorpo que especificamente se liga a CSF1R também pode ser ligar a uma outra molécula; tal como a título de um exemplo não limitante no caso de um anticorpo biespecífico.

EXEMPLOS Exemplo 1

[0068] Diferentes formulações farmacêuticas de anticorpo Ab969.g2 a uma concentração de 50 mg/mL foram preparadas. Inúmeros estabilizantes foram selecionados incluindo sacarose, trealose, manitol, sorbitol, glicina, cloreto de sódio, prolina, alanina de maneira a investigar seu efeito na estabilidade da proteína mediante o armazenamento.

[0069] Normalmente, um estabilizante é testado por formulação, mas durante o esforço de seleção da formulação, 21 das 110 formulações testadas incluíram combinações de dois estabilizantes (por exemplo, glicina e cloreto de sódio em 7 formulações, sacarose e cloreto de sódio em 7 formulações, sacarose e glicina em 7 formulações). As 110 formulações foram submetidas a 3 meses de armazenamentos a 5°C, 25°C e 35°C de maneira a estimar as propriedades de estabilidade da formulação.

[0070] Todas as formulações foram analisadas recém-preparadas e depois de 1 mês, 2 meses e 3 meses de armazenamento a 5°C, 25°C ou 35°C e usando múltiplos métodos analíticos (observação visual, pH, concentração, espalhamento da luz dinâmico, cromatografia de exclusão por tamanho, variantes de carga, cromatografia de fase reversa). Ao final dos 3 meses de estudo, pareceu que os analíticos críticos capazes de discriminar entre todas as 110 formulações foram observação visual (se precipitação visual tiver ocorrido) e o aumento nos níveis de agregados ou espécies de alto peso molecular (HMWS) por cromatografia de exclusão por tamanho (SEC). Somente 13 formulações das 110 testadas foram solúveis (sem precipitado visível) em todos os pontos de tempo em temperaturas de armazenamento críticas de 5°C e 25°C. Entre aquelas 13 formulações solúveis, a que contém estabilizantes 125 mM de glicina e 125 mM de sacarose em tampão de citrato apresentou o menor aumento em HMWS medido por SEC.

[0071] O efeito sinergístico de sacarose e glicina combinados na formulação pode ser entendido comparando os dados analíticos críticos obtidos para as formulações de estabilizante único (tanto 250 mM de glicina quanto 250 mM de sacarose) àqueles obtidos para a formulação de estabilizante combinada.

[0072] A formulação a base de glicina mostrou precipitação depois de 2 meses de armazenamento a 25°C e foi, portanto, descontinuada (ver Tabela 1), enquanto que as formulações de sacarose ou sacarose+glicina permaneceram em solução depois de 3 meses armazenamento em todas as condições, mostrando que a sacarose usada como um estabilizante único ou combinado reduz o risco de precipitação visual. Tabela 1: Aparência visual depois de 2 meses de armazenamento

[0073] Uma outra consideração importante além da precipitação ao se descobrir uma formulação apropriada é a formação das espécies de alto peso molecular (HMWS) devido à degradação e agregação do anticorpo que não são visíveis ao olho nu. A presença de HMWS nas formulações é determinada usando cromatografia de exclusão por tamanho (SEC).

[0074] Tipicamente, considera-se que um nível de até 5% de HMWS nas condições de armazenamento em longo prazo consideradas do produto de medicamento é considerado atende as considerações de liberação e estabilidade e é, portanto, aceitável.

[0075] O aumento de HMWS determinado por SEC depois de 2 meses ou 3 meses é provido respectivamente nas tabelas 2 e 3 a seguir, mostrando que a glicina usada como um estabilizante único ou combinado reduz a taxa de aumento de HMWS por SEC. Tabela 2: Aumento de HMWS determinado por SEC depois de 2 meses de armazenamento Tabela 3: Aumento de HMWS determinado por SEC depois de 3 meses de armazenamento

[0076] Conforme pode ser visto a partir dos resultados anteriores, a formulação compreendendo uma combinação de sacarose e glicina mostra o menor aumento de HMWS, provendo uma vida em prateleira esperada aproximadamente 35% maior que a formulação compreendendo sacarose somente. Combinada com a ausência de precipitação visível com o tempo para todas as condições de armazenamento testadas, surpreendentemente foi descoberto que esta combinação de estabilizantes é benéfica para uso nas formulações de proteína líquidas, mais particularmente para formulações líquidas de anticorpo.

Claims

1. Formulação farmacêutica líquida, caracterizada pelo fato de que compreende um anticorpo como um ingrediente ativo e glicina e sacarose, em que o anticorpo especificamente se liga ao receptor do fator-1 estimulante de colônia (CSF1R) e em que o anticorpo compreende: a) uma cadeia leve compreendendo CDR1, CDR2 e CDR3 conforme definido em SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 e SEQ ID NO: 3, respectivamente; e b) uma cadeia pesada compreendendo CDR1, CDR2 e CDR3 conforme definido em SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 6, respectivamente.

2. Formulação farmacêutica líquida de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende glicina a uma concentração de 20 mM a 200 mM.

3. Formulação farmacêutica líquida de acordo com as reivindicações 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que compreende sacarose a uma concentração de 20 mM a 200 mM.

4. Formulação farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos 50 mg/mL de anticorpo.

5. Formulação farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que compreende um agente tensoativo.

6. Formulação farmacêutica líquida de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que compreende 0,01 % a 10% de Polissorbato 80.

7. Formulação farmacêutica líquida de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o anticorpo especificamente se liga a CSF1R de humano.

8. Formulação farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que o anticorpo neutraliza CSF1R.

9. Formulação farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo humanizado ou de humano.

10. Formulação farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia leve variável conforme definido em SEQ ID NO: 7 e uma cadeia pesada variável conforme definido em SEQ ID NO: 11.

11. Formulação farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada pelo fato de que compreende: - 40 a 60 mM de tampão de citrato a pH 5; - 100 a 150 mM de glicina; - 100 a 150 mM de sacarose; e - 0,02 a 0,1% de Polissorbato 80.