BR112017013188B1 - Processos para a preparação de compostos semelhantes à oxatiazina - Google Patents

Abstract

PROCESSO PARA PREPARAR COMPOSTOS SEMELHANTES À OXATIAZINA. A presente invenção se refere a compostos semelhantes à oxatiazina, processos para preparar compostos semelhantes à oxatiazina novos, compostos úteis para a preparação de compostos semelhantes à oxatiazinas e a utilização dos mesmos. São também revelados processos de tratamento de doentes que sofrem de câncer, infecções bacterianas, infecções fúngicas e/ou infecções virais pela administração de compostos semelhantes à oxatiazina. Verificou-se que estes compostos possuíam uma meia-vida significativamente mais longa em comparação com taurolidina e taurultam.

Description

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO Campo de invenção

[0001] A presente invenção se refere a novos compostos, processos para a preparação de novos compostos e utilizações dos mesmos.

Descrição dos Antecedentes da Invenção

[0002] Os compostos semelhantes à oxatiazina são conhecidos a partir da Patente Norte Americana No. 3,202,657 e da Patente Norte Americana No. 3,394,109.

[0003] Na técnica, continua a existir uma necessidade acerca de novos compostos e processos para a produção de tais compostos para fornecer compostos com atividade antimicrobiana e antineoplásica mais potente, com menos toxicidade e efeitos secundários, e uma menor resistência ao tratamento por células microbianas ou tumorais.

Sumário da Invenção

[0004] De acordo com a presente invenção, são descritos novos compostos semelhantes à oxatiazina, processos para a preparação de novos compostos semelhantes à oxatiazina, compostos úteis para produzir compostos semelhantes à oxatiazina e utilizações dos mesmos.

Breve Descrição das Figuras

[0005] A Figura 1 mostra graficamente a atividade antineoplásica de uma modalidade da invenção em um ensaio de citotoxicidade em células LN-229.

[0006] A Figura 2 mostra graficamente a atividade antineoplásica de uma modalidade da invenção em um ensaio de citotoxicidade em células SW480 (adenocarcinoma de cólon humano).

[0007] As Figuras de 3A a 3C mostram a citotoxicidade induzida em grandes quantidades de células de glioma SMA560 de murídeo após tratamento com taurolidina e taurultam (TT). A citotoxicidade foi avaliada após 24 horas (Figura 3A) e 48 horas (Figura 3B) de tratamento. Os valores de EC50 para taurolidina (34,6 µg/mL) e taurultam (19,3 µg/mL) são indicados no painel inferior (Figura 3C). Os dados são apresentados como valores da média ± DP de três experimentos independentes.

[0008] A Figura 4 mostra a citotoxicidade induzida por taurolidina e taurultam (TT) em células tronco tumorais (“CSC”, na sigla em inglês) de glioma SMA560 em murídeos. Os dados são apresentados como valores da média ± DP.

[0009] As Figuras de 5A a 5C mostram a citotoxicidade induzida em células tronco tumorais isoladas a partir de quatro pacientes com glioblastoma multiforme (GBM) (GBM #3, #4, #5 e #6) após tratamento durante 24 horas com taurolidina (Figura 5A), taurultam (TT) (Figura 5B) ou temozolamida (Figura 5C). Os dados são apresentados como valores da média ± DP.

[0010] A Figura 6 mostra o espectro FTIR do composto 2244 feito de acordo com a presente invenção.

[0011] A Figura 7 mostra o espectro FTIR do composto 2250 feito de acordo com a presente invenção.

[0012] A Figura 8 mostra os resultados de um ensaio de toxicidade para esferoides de tumor multicelular pancreático (Panc Tu-1 ou BxPC-3) em que as amostras de controle com taurolidina (500 µM) ou com composto 2250 (1000 µM) foram tratadas durante 48 horas (colunas marcadas A) e tensionadas para testar agregados residuais (colunas marcadas B) para a estabilidade.

[0013] As Figuras 9A e 9B mostram os resultados da análise FACS do conteúdo de culturas de esferoides multicelulares CD133 Panc Tu-1.

[0014] A Figura 10A mostra o volume de tumor MIAPaCa2 mediante tratamento com controle ou taurolidina. A Figura 10B mostra o volume de tumor MIAPaCa2 mediante tratamento com controle ou composto 2250. A Figura 10C mostra o volume de tumor de Panc Tu-1 mediante tratamento com controle ou taurolidina. A Figura 10D mostra o volume de tumor Panc Tu- 1 mediante tratamento com controle ou composto 2250.

[0015] A Figura 11A é um modelo de xenoenxerto de tumores pancreáticos primários (Bo 73) observados durante 15 dias quando tratados com controle, taurolidina ou composto 2250. A Figura 11B é um modelo de xenoenxerto de tumores pancreáticos primários (Bo 70) observados durante 23 dias quando tratados com controle, taurolidina ou composto 2250.

Descrição Detalhada da Invenção

[0016] De acordo com certas modalidades, a presente invenção se refere a compostos semelhantes à oxatiazina, assim como aos derivados dos mesmos e processos e compostos para a preparação de compostos semelhantes à oxatiazina e derivados dos mesmos.

[0017] Os compostos semelhantes à oxatiazina e seus derivados, de acordo com determinadas modalidades da presente invenção, possuem atividades antineoplásicas, atividades antimicrobianas e/ou outras atividades.

[0018] Os processos para a produção de compostos semelhantes à oxatiazina e derivados dos mesmos, de acordo com certas modalidades da presente invenção, fornecem métodos vantajosos para a produção de compostos que possuem atividades antineoplásicas, atividades antimicrobianas e/ou outras atividades. Em certas modalidades, os compostos semelhantes à oxatiazina e os derivados dos mesmos são úteis, inter alia, no tratamento de cânceres e tumores em um indivíduo, tal como um paciente humano. Consequentemente, certas modalidades da presente invenção referem-se também ao tratamento de cânceres e tumores, utilizando os compostos aqui descritos. Os cânceres, tais como os cânceres do sistema nervoso central, incluindo glioblastoma, glioma, neuroblastoma, astrocitoma, meningite carcinomatosa, câncer de cólon, câncer retal, câncer colorretal, câncer de ovário, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, mesotelioma, melanoma, câncer renal, câncer de fígado, câncer de pâncreas, câncer gástrico, câncer de esôfago, câncer de bexiga urinária, câncer de colo do útero, câncer cardíaco, câncer da vesícula biliar, câncer de pele, câncer dos ossos, câncer da cabeça e pescoço, leucemia, linfoma, linfossarcoma, adenocarcinoma, fibrossarcoma, e metástases dos mesmos, por exemplo, são doenças contempladas para o tratamento de acordo com certas modalidades da invenção. Os tumores resistentes à fármacos, por exemplo, um tumor resistente à múltiplos fármacos (“MDR”, na sigla em inglês), são também úteis em certas modalidades utilizando os compostos da invenção, incluindo tumores resistentes à fármacos que são tumores sólidos, tumores não sólidos e linfomas. Atualmente, acredita-se que qualquer célula neoplástica pode ser tratada utilizando-se os métodos aqui descritos.

[0019] As células indicadoras de tumor (também referidas como células tronco tumorais (“CSCs”, na sigla em inglês)) são consideradas como sendo os principais fatores para a formação de metástases e crescimento de tumores após ressecção.

[0020] Em certas modalidades, os compostos da presente invenção são úteis, inter alia, no tratamento de células tronco tumorais em um indivíduo.

[0021] Em certas modalidades, os compostos da presente invenção são úteis, inter alia, no tratamento de células tronco tumorais de glioblastoma em um indivíduo.

[0022] Em certas modalidades, a invenção mata as células tumorais e/ou CSCs, ou inibe o seu crescimento, através de estresse oxidativo, apoptose e/ou inibe o crescimento de novos vasos sanguíneos no local do tumor (anti-angiogênese e anti-tubulogênese). Um mecanismo principal de ação para eliminar células tumorais e/ou CSCs é o estresse oxidativo. De acordo com a invenção, as células tumorais e/ou CSCs também podem ser mortas através de apoptose. Em concentrações sanguíneas mais baixas, os compostos de acordo com a invenção são eficazes na inibição do crescimento de células tumorais através de sua ação anti- angiogênica e sua ação anti-tubulogênica, e estes compostos são assim úteis para o tratamento paliativo.

[0023] Os compostos semelhantes à oxatiazina e os derivados dos mesmos, da presente invenção, são metabolizados muito mais lentamente na corrente sanguínea em comparação à taurolidina e taurultam. Assim, doses mais baixas de tais compostos podem ser administradas a um paciente para obter efeitos semelhantes.

[0024] Verificou-se inesperadamente que, dentro de poucos minutos de exposição à taurolidina, as células tumorais reagem com o início do programa de morte celular através de apoptose como se segue: 1. A ação primária de taurolidina, em relação à célula de tumor, é um aumento de espécies reativas de oxigênio (“ROS”, na sigla em inglês) medida fluorimetricamente. 2. A indução de estresse oxidativo através de taurolidina como a etapa primária é suportada pela descoberta de que a ação antineoplásica de taurolidina pode ser evitada através da adição de um agente redutor, tal como glutationa ou N-acetilcisteína. 3. O dano elevado causado pelas ROS na mitocôndria de células tumorais resulta na perda do seu potencial de membrana e a liberação do fator de indução de apoptose (“AIF”, na sigla em inglês). 4. O AIF é deslocado para o núcleo e inicia a expressão de genes pró-apoptóticos, o que resulta na formação de bolhas de membrana do plasma, na condensação da cromatina e fragmentação do DNA, as marcas de apoptose. 5. Em contraste com as células normais, as células tumorais são muito sensíveis ao estresse oxidativo. Isto explica a ação de taurolidina contra uma ampla variedade de células tumorais, poupando as células normais.

[0025] Os compostos da presente invenção também são úteis, em certas modalidades, no tratamento de infecções microbianas em um indivíduo, tal como um paciente humano. As infecções microbianas que podem ser tratadas de acordo com certas modalidades incluem infecções bacterianas, infecções fúngicas e/ou infecções virais.

[0026] Os pacientes com câncer tendem a ser imunocomprometidos, tornando-os particularmente susceptíveis a infecções microbianas, especialmente durante e/ou após a cirurgia.

[0027] Em certas modalidades, os compostos da invenção são utilizados para o tratamento de glioblastoma em um indivíduo.

[0028] Em certas modalidades, os compostos da invenção são utilizados para o tratamento de S. aureus em um indivíduo.

[0029] Em certas modalidades, os compostos da invenção são utilizados para o tratamento de MRSA em um sujeito.

[0030] Em certas modalidades, os compostos da invenção são utilizados para o tratamento de E. coli em um indivíduo.

[0031] Em certas modalidades, os compostos da invenção são utilizados para o tratamento de H. pylori em um indivíduo, e/ou tratamento de câncer(s) associado(s) com H. pylori em um indivíduo.

[0032] Em certas modalidades, os compostos da invenção são utilizados para o tratamento de HIV em um indivíduo.

[0033] Em certas modalidades, de acordo com a invenção, os compostos de acordo com a fórmula I são utilizados, em que R é H, alquila, ou semelhantes, tais como metila, etila, propila, (por exemplo, isopropila), benzila ou semelhantes.

[0034] Em certas modalidades, o novo composto 2250 (4-dióxido de tetrahidro 1,4,5-oxatiazina ou 1,4,5- oxatiazina-4-dióxido) é preparado e/ou utilizado de acordo com a invenção. Um espectro FTIR para o composto 2250 feito de acordo com a presente invenção é mostrado na Figura 8.

[0035] Em certas modalidades, o novo composto 2245 é preparado e/ou utilizado de acordo com a invenção.

[0036] O composto 2250 previne e trata tumores do estômago, incluindo tumores causados por ou associados com H. pylori, ou tumores em consequência de metástase no estômago.

[0037] A quantidade de compostos necessários depende do tamanho do tumor. Em uma modalidade, a invenção inclui reduzir cirurgicamente o tamanho do tumor e o tratamento com um ou mais dos compostos. O composto pode ser administrado antes, durante ou após a cirurgia para reduzir tumores. Os compostos de acordo com a invenção podem ser administrados através de qualquer método adequado, incluindo, sem limitações, géis, cápsulas, comprimidos, IV, IP e/ou diretamente para o tumor.

[0038] Os géis podem conter, por exemplo, de 2% a 4% (por exemplo, 3%) do composto ativo da invenção, tal como o composto 2250, sozinho ou em combinação com taurolidina / taurultam que também pode ser administrado sozinho e pode ser administrado de forma tópica. Tais géis podem ser utilizados para o tratamento de tumores da pele e da boca, incluindo os tumores de células escamosas da boca e da pele. Tais géis podem também ser utilizados para tratar o câncer de colo do útero ou displasia cervical por serem administrados em um supositório para a vagina, ou por meio de seringa. A invenção pode incluir a combinação de um supositório que transporta um composto ativo.

[0039] As formas de dosagem sólida para administração oral incluem cápsulas, comprimidos, pílulas, pós e grânulos. Em tais formas de dosagem sólida, a composição fornecida é misturada com pelo menos um excipiente inerte farmaceuticamente aceitável e/ou agentes de enchimento ou diluentes (por exemplo, amidos, lactose, sacarose, glicose, manitol, e ácido silícico), ligantes (por exemplo, carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarose e goma arábica), agentes umectantes (por exemplo, glicerol), agentes desintegrantes (por exemplo, Agar, carbonato de cálcio, amido de batata, amido de tapioca, ácido algínico, certos silicatos, e carbonato de sódio), agentes de retardamento de solução (por exemplo, parafina), aceleradores de absorção (por exemplo, compostos de amônio quaternário), agentes umidificantes (por exemplo, álcool cetílico e monoestearato de glicerol), absorventes (por exemplo, caulino e argila de bentonita), e lubrificantes (por exemplo, talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietileno glicóis sólidos, laurilsulfato de sódio), e misturas dos mesmos. No caso de cápsulas, comprimidos e pílulas, a forma de dosagem pode compreender agentes de tamponamento.

[0040] Verificou-se que os compostos da presente divulgação, particularmente o composto 2250, são muito solúveis em água. Em certas modalidades, sem PVP necessário para aumentar a solubilidade. Por exemplo, uma solução de 3,2% de 2250 é isotônica. Esta é uma vantagem inesperada em comparação a taurolidina.

[0041] Os compostos da invenção, tal como o composto 2250 (com ou sem taurolidina e/ou taurultam) são particularmente úteis em oncologia cirúrgica, visto que os compostos não impedem a cicatrização de feridas. A administração de outros fármacos antineoplásicos deve ser adiada por até cinco semanas ou mais após a cirurgia, uma vez que tais fármacos antineoplásicos impedem a cicatrização de feridas e promovem a deiscência de anastomose. Tais problemas podem ser evitados com os compostos da invenção, tal como o composto 2250, que podem ser administrados durante a cirurgia e imediatamente a seguir, sem problemas de cicatrização de feridas ou problemas de vazamento.

[0042] As composições sólidas de um tipo semelhante podem ser utilizadas como agentes de enchimento em cápsulas de gelatina moles e/ou duras usando excipientes, tais como lactose ou açúcar do leite, bem como polietileno glicóis de elevado peso molecular, e semelhantes. As formas de dosagem sólidas de comprimidos, drágeas, cápsulas, pílulas, e grânulos podem ser preparadas com revestimentos e invólucros, tais como revestimentos entéricos e outros revestimentos bem conhecidos na técnica de formulação farmacêutica. Elas podem compreender, opcionalmente, agentes opacificantes e podem ser de uma composição que apenas libere a(s) composição(s) fornecida(s), ou preferivelmente, em certa parte do trato intestinal, opcionalmente, de uma forma retardada. Exemplos de composições de incorporações que podem ser utilizadas incluem substâncias poliméricas e ceras. As composições sólidas de um tipo semelhante podem ser utilizadas como agentes de enchimento em cápsulas de gelatina mole e dura utilizando excipientes, tais como lactose ou açúcar do leite, bem como polietileno glicóis de elevado peso molecular, e semelhantes.

[0043] Em certas modalidades, as cápsulas podem compreender uma formulação de excipiente que contém um ou mais de hidroxipropilmetilcelulose (HPMC), gelatina e gelatina de peixe. Em certas modalidades, uma cápsula pode compreender o composto 2250 em combinação com taurolidina e/ou taurultam. A cápsula pode, opcionalmente, compreender ainda um ou mais de licopeno, ácido elágico (polifenol), curcumina, piperina, delfinidina, resveratrol, isotiocianatos, tais como sulforafano, capsaicina e piperlongumina.

[0044] Os compostos ativos da invenção, tal como o composto 2250, podem ser combinados com compostos, tais como a gencitabina. Esta combinação pode ser utilizada para tratar cânceres, tais como o câncer de pâncreas. Taurolidina e/ou taurultam também podem ser combinados com gencitabina no tratamento de, por exemplo, câncer de pâncreas.

[0045] Em algumas modalidades, um produto nutricional de profilaxia e tratamento de câncer pode conter de 100 mg a 500 mg de composto 2250 por si só ou em combinação com 100 mg a 500 mg de taurolidina e/ou taurultam e um ou mais de licopeno, por exemplo, de 20 mg a 200 mg, ácido elágico (polifenol), curcumina, piperina (de 20 mg a 200 mg), delfinidina, resveratrol, isotiocianatos, tais como o sulforafano, capsaicina e piperlongumina.

[0046] Foi inesperadamente descoberto que os compostos podem ser administrados durante a cirurgia e imediatamente após a cirurgia, uma vez que os compostos não inibem a cicatrização de feridas, como outros agentes de quimioterapia.

[0047] Foi inesperadamente descoberto que taurolidina, taurultam, e compostos semelhantes à oxatiazina e derivados dos mesmos matam as células tronco tumorais, o que é muito incomum e talvez desconhecido dentre os agentes de quimioterapia. Os agentes de quimioterapia típicos, se eficazes contra as células tronco tumorais, geralmente são eficazes apenas em doses muito elevadas, e são extremamente tóxicos para os pacientes humanos.

[0048] Foi inesperadamente descoberto que as doses mais baixas de taurolidina e/ou taurultam matou células tronco tumorais quando necessário para eliminar as células tumorais.

[0049] Foi inesperadamente descoberto que os compostos semelhantes à oxatiazina e os derivados dos mesmos têm uma meia-vida no sangue humano que é significativamente mais longa do que a meia-vida de taurolidina e taurultam. Consequentemente, estes compostos são apagados menos rapidamente a partir da corrente sanguínea dos doentes, atrasando assim eficazmente a redução de potência do fármaco causada por mecanismos de depuração do organismo.

[0050] Foi inesperadamente descoberto que certos compostos semelhantes à oxatiazina e os derivados dos mesmos têm reduzida sensação de ardor quando aplicados diretamente no tecido, ao contrário do efeito observado em doentes tratados com taurolidina.

[0051] Foi inesperadamente descoberto que certos compostos semelhantes à oxatiazina e os derivados dos mesmos têm uma combinação particularmente vantajosa de propriedades, incluindo elevada solubilidade em água, vias de administração versátil incluindo via oral e i.v., estabilidade e meia-vida estendidas, e reduzido efeito colateral de sensação de queimadura.

[0052] Assim, a meia-vida do composto 2250 é maior do que 24 horas no sangue humano, o que é significativamente maior do que a meia-vida de taurolidina, o qual se verificou ser inferior a 30 minutos, utilizando o mesmo teste.

[0053] Em uma modalidade, a invenção inclui o tratamento de um paciente com a administração do composto 2250, resultando em uma concentração de linha de base do composto 2250 no sangue cerca de 5 minutos após a administração. O método envolve a manutenção da concentração do composto 2250 no sangue do paciente, concentração a qual é cerca de 80% da concentração no sangue de linha de base durante cerca de 20 horas.

[0054] Em uma modalidade, a invenção inclui a manutenção de uma concentração no sangue de um composto antineoplásico em um paciente que é cerca de 80% da concentração de linha de base no sangue do paciente durante cerca de 20 horas através da administração de uma dosagem diária de composto 2250 uma vez por dia para manter a concentração no sangue que é 80% da concentração de linha de base no sangue.

[0055] A dosagem diária pode ser de cerca de 0,1 g a cerca de 100 g, por exemplo, cerca de 5 g a cerca de 30 g. A dosagem diária pode ser administrada sob a forma de uma composição administrável por via oral. A dosagem diária pode ser administrada sob a forma de uma cápsula, um comprimido, ou uma solução farmaceuticamente aceitável. A dosagem diária pode ser administrada sob uma forma que contém o composto 2250 em uma concentração de cerca de 0,01% a cerca de 3% em peso. A dosagem diária pode ser administrada sob uma forma que contém o composto 2250 em uma concentração de cerca de 0,01 µg/mL a cerca de 1000 µg/mL. A dosagem diária pode ser administrada sob uma forma que contém um ou mais agentes solubilizantes, por exemplo, polióis.

[0056] Em algumas modalidades, os compostos são administrados em composições com uma concentração de cerca de 0,01 µg/mL a cerca de 1000 µg/mL. Em algumas modalidades, os compostos são administrados em composições com uma concentração de cerca de 1 µg/mL a cerca de 100 µg/mL. Em algumas modalidades, os compostos são administrados em composições com uma concentração de cerca de 10 µg/mL a cerca de 50 µg/mL. A composição também pode compreender cerca de 0,01 µg/mL a cerca de 1000 µg/mL, cerca de 1 µg/mL a cerca de 100 µg/mL, ou cerca de 10 µg/mL a cerca de 50 µg/mL de taurolidina e/ou taurultam.

[0057] Em algumas modalidades, os compostos são administrados em composições com uma concentração de cerca de 0,01% a cerca de 3%. Em algumas modalidades, os compostos são administrados em composições com uma concentração de cerca de 0,1% a cerca de 2,5%. Em algumas modalidades, os compostos são administrados em composições com uma concentração de cerca de 1% a cerca de 2%. A composição pode, adicionalmente, conter cerca de 0,01% a cerca de 3%, cerca de 0,1% a cerca de 2,5%, ou cerca de 1% a cerca de 2% taurolidina e/ou taurultam.

[0058] Em uma modalidade, os compostos semelhantes à oxatiazina e derivados dos mesmos podem ser administrados como co-terapia com taurolidina e/ou taurultam para eliminar as células tronco tumorais. De acordo com tal modalidade, foi inesperadamente descoberto que a co-terapia necessita de uma dose mais baixa do fármaco para eliminar as células tronco tumorais em comparação a quantidade necessária para eliminar as células tumorais normais.

[0059] Em certas modalidades, os compostos semelhantes à oxatiazina e derivados dos mesmos podem ser administrados com vitamina D3, o que resulta no aumento dos efeitos antitumorais dos compostos.

[0060] Em uma modalidade, o composto é administrado ao indivíduo em uma dose diária total de cerca de 0,1 g a cerca de 100 g, cerca de 1 g a cerca de 80 g, cerca de 2 g a cerca de 50 g, ou cerca de 5 g a cerca de 30 g.

[0061] As quantidades de dosagem eficazes dos compostos são unidades de dosagem dentro da faixa de cerca de 0,1 mg/kg a 1.000 mg/kg por dia, preferivelmente de 150 mg/kg a 450 mg/kg por dia, e mais preferivelmente de 300 mg/kg a 450 mg/kg por dia.

[0062] Tal como aqui utilizado, o termo “puro” se refere a uma substância que é pelo menos cerca de 80% livre de impurezas e contaminantes. Em algumas modalidades, o termo “puro” se refere a uma substância que é pelo menos cerca de 90% livre de impurezas e contaminantes. Em certas modalidades, o termo “puro” se refere a uma substância que é pelo menos cerca de 95% livre de impurezas e contaminantes. Em algumas modalidades, o termo “puro” se refere a uma substância que é pelo menos cerca de 99% livre de impurezas e contaminantes. Em algumas modalidades, o termo “puro” se refere a uma substância que é pelo menos cerca de 99,5% livre de impurezas e contaminantes.

[0063] Em certas modalidades, os compostos, as composições e os métodos da presente invenção englobam a utilização de compostos micronizados. Em algumas modalidades, o termo “micronizado”, tal como aqui utilizado, se refere a um tamanho de partícula na faixa de cerca de 0,005 mícron a 100 micra. Em certas modalidades, o termo “micronizado”, tal como aqui utilizado, se refere a um tamanho de partícula na faixa de cerca de 0,5 mícron a 50 micra. Em certas modalidades, o termo “micronizado”, tal como aqui utilizado, se refere a um tamanho de partícula na faixa de cerca de 1 mícron a 25 micra. Por exemplo, o tamanho de partículas do fármaco pode ser de cerca de 1 mícron, 5 micra, 10 micra, 15 micra, 20 micra, ou 25 micra.

[0064] Em certas modalidades, os compostos, composições e métodos da presente invenção englobam a utilização de nanopartículas. Tal como aqui utilizado, o termo “nanopartícula” se refere a qualquer partícula com um diâmetro inferior a 1.000 nanômetros (nm). Em algumas modalidades, uma nanopartícula tem um diâmetro inferior a 300 nm. Em algumas modalidades, uma nanopartícula tem um diâmetro inferior a 100 nm. Em algumas modalidades, uma nanopartícula tem um diâmetro inferior a 50 nm, por exemplo, entre cerca de 1 nm e 50 nm. As formulações adequadas para injeção ou infusão podem compreender uma solução isotônica contendo um ou mais agentes solubilizantes, por exemplo, polióis, tais como glicose, com o intuito de fornecer soluções com concentração de composto aumentada. Tais soluções são descritas no Documento EP 253662B1. A solução pode ser tornada isotônica com solução de Ringer ou solução de Ringer lactato. A concentração do composto em tais soluções pode ser na faixa de 1 g/litro a 60 g/litro.

[0065] Em certas modalidades, os compostos exemplificativos e os processos para a fabricação de compostos da invenção incluem:

[0066] Os compostos podem estar na forma cristalina, por exemplo, após a cristalização e/ou recristalização em álcool, cetona, éster, ou uma combinação dos mesmos. Por exemplo, os compostos da presente invenção podem ser cristalizados e/ou recristalizados a partir de um álcool, tal como etanol.

[0067] Os compostos exemplificativos da invenção incluem:

[0068] Verificou-se que, quando utilizado sob a forma de nanopartículas, os compostos da invenção reivindicada atingem níveis sanguíneos mais elevados. Em uma modalidade, a presente invenção inclui o composto 2250 sozinho ou em combinação com taurolidina e/ou taurultam. Por exemplo, a presente invenção inclui as nanopartículas dos compostos da presente invenção encapsuladas em cápsulas.

[0069] Em certas modalidades, a invenção também se refere aos derivados dos referidos compostos que contenham, por exemplo, atividade tal como aqui descrita dos referidos compostos, por exemplo, pelo menos 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 100%, ou mais, da referida atividade.

[0070] Em certas modalidades, a invenção também se refere a composições contendo os compostos aqui descritos, incluindo soluções farmaceuticamente aceitáveis dos referidos compostos, bem como composições administráveis por via oral, tais como cápsulas e comprimidos, contendo as referidas composições.

[0071] Em certas modalidades, os compostos da presente invenção podem ser administrados a um indivíduo ou paciente através de quaisquer meios adequados, por exemplo, em solução, por exemplo, localmente, sistemicamente, tal como por infusão intravenosa, ou semelhante.

[0072] Síntese de 2250sublima em vácuo a ~ 70°C - 80°C.

[0073] Matérias-primas: Ácido isetiônico, Sulfato de carbila, Taurina, Taurinamida, Cisteína, ácido isetiônico, inter alia. Síntese 1 I. a) Ácido isetiônico via Sulfato de carbila b) Ácido isetiônico via Taurina

[0074] Síntese bioquímica via Cisteína, Taurina Síntese química • Óxido de etileno com bissulfito II. Amida isetiônica Etapas alternativas possíveis de síntese química para 2250 a) Ácido sulfâmico b) Paraformaldeído, Hexametilenotetramina (Hexamina, Formina, Urotropina) Várias etapas alternativas de síntese para

[0075] Síntese de isetionato sódico a partir de óxido de etileno + hidrogenosulfito sódico II. Reação de Amina com Sulfato de carbila Protocolos sintéticos exemplificativos I. Síntese de 2244

[0076] 2,15 g de 1907 puro foram dissolvidas em 100 mL de éster etílico-ácido acético, e catalisados usando 0,5 g de paládio em carvão ativado. A solução foi hidrogenada em temperatura ambiente e pressão atmosférica. A hidrogenação estava completa após cerca de 15 horas e a quantidade absorvida de hidrogênio foi de 450 mL.

[0077] A hidrogenação foi evacuada três vezes, cada vez com nitrogênio, e, em seguida, a mistura reacional foi filtrada através de um auxiliar de filtração (diatomito). A solução de acetato de etila incolor límpida foi concentrada e seca em um evaporador rotativo. Rendimento: 1,25 g, que foi inoculado com 2244 cristalizado. Ponto de fusão: 42°C a 44°C. IV: corresponde ao 2244, 99,3% puro. II. Síntese de 2244

[0078] 5 g (0,023 mol) de 2264/1907 foram fervidos em 50 mL de HCl concentrado durante 3 horas sob refluxo, em seguida, deixadas arrefecer até à temperatura ambiente e separadas com 30 mL de diclorometano em um funil separador. A fase aquosa foi evaporada em um evaporador rotativo e seca. Um óleo amarelo que cristalizou lentamente permanece após a semeadura com cristais de 2244. IV corresponde à substância 2244. Recristalizado a partir de acetato de etila. 0,7 g obtido (24%). Ponto de fusão: 44°C a 45°C IV corresponde à substância de referência. III. Síntese de 2244

[0079] 230 mg de 2269 foram dissolvidos em 2 mL de NaOH (1N) e submetidos a refluxo em ebulição com um condensador de refluxo durante 15 minutos. A solução límpida foi arrefecida a 20°C e acidificada com ácido clorídrico. O precipitado resultante foi separado através de filtragem sob vácuo e seco. Rendimento: 110 mg. Ponto de fusão: 114°C a 116°C. IV mostrou 99% de ácido benzoico como subproduto.

[0080] A solução ácida foi concentrada até secar em um evaporador rotativo e o sólido foi fervido com éster acético. A solução de acetato de etila foi filtrada e concentrada até se obter secura sob vácuo. Peso: 110 mg.

[0081] O óleo foi contaminado com óleo e o pico de IV para 2244 (amida de ácido isetiônico) era impuro.

[0082] Os 110 mg foram recristalizados a partir de éster acético. Rendimento: 65 mg. Ponto de fusão: 43°C a 45°C IV correspondeu a 52% de 2244. III. Síntese de 2244

[0083] em que Ph é um grupo fenil.

[0084] 1,15 g de 2269 foi dissolvido em 10 mL de NaOH (1N) e submetido a refluxo em ebulição durante 15 minutos.

[0085] A solução límpida foi arrefecida a 20°C e acidificada com ácido clorídrico. O precipitado resultante foi separado por filtração sob vácuo e seco. Rendimento: 0,5 mg. Ponto de fusão: 14°C a 16°C.

[0086] IV mostrou 82% de subproduto de ácido benzoico como substância de controle. A hidrólise não está completa.

[0087] A solução ácida foi concentrada até secar em um evaporador rotativo e o sólido foi fervido com éster acético. A solução de acetato de etila foi filtrada e concentrada até à secura sob vácuo. Peso: 0,8 g.

[0088] O óleo foi contaminado com óleo e o pico de IV para 2244 (amida de ácido isetiônico) era impuro.

[0089] O peso total (0,8 g) foi recristalizado a partir de éster acético. Rendimento: 160 mg, ponto de fusão: 43°C a 45°C. IV correspondeu a 26% de 2244. V. Síntese de 2244

[0090] 215 g 0,1 mol de 2264 e 1000 mL de ácido clorídrico concentrado (cerca de 36%) foram cozidos juntos durante 30 minutos sob refluxo. O 2264 foi redissolvido e havia uma camada oleosa. A mistura reacional foi deixada arrefecer e transferida para um funil separador, onde o óleo foi separado da fase aquosa. A solução aquosa ácida, em que deve ser redissolvido amida de ácido isetiônico (2244), foi concentrada a 50°C em um evaporador rotativo quase até à secura. O resíduo oleoso amarelo foi colocado durante a noite em refrigerador e 32,3 g de cristais claros foram removidos por filtração sob vácuo. Ponto de fusão de 43°C a 45°C.

[0091] IV: oxigênio contendo picos nos seguintes números de onda 655,82 cm-1, 729,12 cm-1, 844,85 cm-1, 898,86 cm-1, 947,08 cm-1, 1.003,02 cm-1, 1.060,88 cm-1, 1.134,18 cm- 1, 1.236,41 cm-1, 1.288,49 cm-1, 1.317,43 cm-1, 1.408,08 cm-1, 1.572,04 cm-1, 3.105,5 cm-1, 3.209,66 cm-1, 3.313,82 cm-1, e 3.427,62 cm-1, tal como mostrado na Figura 7.

[0092] O licor mãe foi concentrado até à secura completa. VI. Síntese de 2244

[0093] 21,5 g 0,1 mol de 2264 e 100 mL de ácido 2264 e 100 mL de ácido clorídrico concentrado (aproximadamente 36%) foram cozidos juntos durante 30 minutos sob refluxo. Uma camada oleosa formada e a mistura reacional foram deixadas arrefecer em um funil separador onde o óleo foi separado da fase aquosa. A solução aquosa ácida na qual amida de ácido isetiônico (2244) foi dissolvida e agitada duas vezes com cloreto de metileno, o cloreto de metileno foi separado, e a solução de água ácida foi concentrada em um evaporador rotativo a 50°C até à secura. O resíduo oleoso amarelo foi colocado durante a noite no refrigerador e obteve-se 12,3 g de óleo. Ponto de fusão: 41°C a 43°C. A análise do produto mostrou correspondência de 99,8% de 2244 por IV.

[0094] Experimento de destilação: 12,3 g foram destilados sob alto vácuo: Temperatura interna: 190°C a 210°C Temperatura externa: 183°C a 186°C Vácuo: 0,1 mm Peso: 9,3 g de um óleo que era sólido à temperatura ambiente, Ponto de fusão: 43°C a 45°C. VII. Síntese de 2244

[0095] 2,0 g de composto puro 1907 foram dissolvidos em 200 mL de éster acético, 0,5 g de paládio / carbono ativado foi adicionado e a mistura foi submetida à autoclavagem a 100°C e hidrogenada a 50°C. Após 6 horas de tempo de execução, a mistura reacional foi deixada arrefecer durante a noite e, em seguida, filtrada e concentrada até à secura sob vácuo.

[0096] Peso: 1,7 g de óleo - CH2Cl2 adicionado e agitado, em seguida, deixado em repouso - em seguida, filtrado por sucção resultando em um sólido cristalino com peso: 0,6 g, ponto de fusão de aproximadamente 40°C.

[0097] Para a análise, foi adicionado 0,2 g de éster acético duas vezes para cristalizar. Ponto de fusão 43°C a 44°C. VIII. Síntese de 2244

[0098] 2,15 g de 1907 puro foram dissolvidos em 100 mL de éster etílico-ácido acético, em seguida, adicionado a 0,5 g de paládio / carbono ativado. Em seguida, a mistura foi hidrogenada à temperatura ambiente e pressão atmosférica. A hidrogenação foi terminada após cerca de 15 horas.

[0099] A quantidade de hidrogênio absorvida foi de aproximadamente 450 mL. O hidrogênio foi então evacuado 3 vezes e inundado com nitrogênio, e, em seguida, cada mistura racional foi filtrada através de diatomito (celite). A solução incolor de acetato de etila foi evaporada até à secura em um evaporador rotativo. Peso: 1,25 g de óleo que cristalizou após semeadura com cristais de 2244. Ponto de fusão: 42°C a 44°C. IV: corresponde a 99,3% de 2244. IX. Síntese de 2250

[0100] 1,2 g de 2245 puro foi dissolvido em 150 mL de ácido acético puramente redissolvido a 60°C.

[0101] 0,3 g de paládio em carvão ativado foi adicionado e agitado a 75°C e a mistura foi hidrogenada sob pressão atmosférica.

[0102] A hidrogenação foi interrompida ao fim de 7 dias. A quantidade absorvida de hidrogênio foi de aproximadamente 480 mL.

[0103] O hidrogênio foi evacuado e purgado 3 vezes com nitrogênio.

[0104] Em seguida, a mistura reacional foi filtrada a 70°C através de um auxiliar de filtração (diatomito).

[0105] A solução de ácido acético glacial quente límpida foi arrefecida até à temperatura ambiente e os cristais brancos foram filtrados por sucção. Peso: 0,74 g, Ponto de fusão: 225°C a 227°C IV: 2245 corresponde à matéria-prima

[0106] O licor mãe foi concentrado em um evaporador rotativo até à secura. Peso: 0,38 g de material impuro foi extraído com acetato de etila.

[0107] A solução foi concentrada.

[0108] Porção solúvel de acetato de etila: substância semissólida obtida por sublimação;

[0109] Obteve-se 0,15 g de substância semissólida que foi recristalizada a partir de algumas gotas de água. Rendimento: 70 mg, Ponto de fusão: 95°C a 98°C IV correspondeu a 98% de 2250. X. Síntese em uma etapa com elevado rendimento de 2- benziléter etano-sulfonato de sódio

[0110] 10,5 g 2-bromoetanosulfonato de sódio foram adicionados a uma solução de 110 mL de álcool benzílico e 1,15 g de benzilóxido de sódio.

[0111] Em seguida, a mistura foi levada à ebulição sob refluxo quatro vezes. A mistura foi então concentrada sob vácuo até à secura e em seguida fervida com álcool etílico três vezes. O álcool foi filtrado e concentrado até à secura.

[0112] O rendimento foi de 9,8 g, confirmado por UV e IV.

[0113] Cristais puros foram obtidos por ebulição do 2-benziléter etanossulfonato de sódio resultante em álcool etílico, filtrado, em seguida, com arrefecimento da solução para cristalizar os cristais puros de 2-benziléter etanossulfonato de sódio para fora da solução. XI. Síntese de 2250

[0114] 6,3 g de vinilsulfonamida (a partir de 2258); 50 mL de ácido fórmico concentrado; e 1,1 g de paraformaldeído foram combinados durante 2 horas sob refluxo para produzir o composto 2250. Em seguida, a solução ácida límpida foi concentrada em um evaporador rotativo até à secura. Resíduo: 5,9 g de amarelo pálido, xarope semelhante a mel. IV: Mistura de vinilsulfonamida e 2250

[0115] 2 gramas foram sublimados e alguns cristais foram obtidos. Sublimar semissólido: IV: corresponde a 98% de 2250. XII. Síntese de vinilsulfonamida

[0116] Cloreto formil isetiônico foi colocado em 50 mL de clorofórmio, postos em um frasco de sulfonação de 350 mL e arrefecido para -10°C. Em seguida, gás amoníaco a 25% foi introduzido. Após a introdução do gás amoníaco, verificou-se que o peso do clorofórmio/NH3 era de 5 g. A partir de -3°C a 2°C, a mistura foi agitada lentamente.

[0117] Para 9,0 g de 2249 destilado, 20 mL de clorofórmio foi adicionado gota a gota. NH4Cl precipitou-se imediatamente.

[0118] Em seguida, o cloreto de amônio foi separado por filtração sob vácuo e a solução de clorofórmio clara foi concentrada em um evaporador rotativo até secar. Rendimento: 6,3 g de óleo transparente, fino. IV: corresponde a 96% de CH2=CH-SO2-NH2 (vinilsulfonamida). XIII. Síntese de 2261

[0119] 300 g (1,26 mol) de 2260 foram passados para um frasco multi-tubular de 750 mL com agitador KPG.

[0120] 415 mL de tricloroetileno + oxicloreto de fósforo (densidade corresponde a cerca de 1,47 em 10% POCI3) e 150 mL de oxicloreto de fósforo e 5,7 ml de DMF foram aquecidos a 105°C enquanto se agitava. A mistura foi deixada reagir durante 5 horas.

[0121] O sólido foi filtrado por vácuo e o líquido foi destilado sob vácuo produzido por bomba de água. O bolo de filtração foi lavado com acetato de etila. Depois de destilar tricloroetileno e oxicloreto de fósforo, o acetato lavado foi transferido para um balão e também destilado.

[0122] 250 g (1,07 mol - 85%) de um líquido amarelo foram recolhidos. IV corresponde a 2261. XIV. Síntese de 2250 e 2255: XV. Novos esquemas de síntese para o composto 2250 e compostos relacionados: Matérias-primas: Ácido 3-hidroxipropano-1 sulfônico Ácido 3-hidroxipropano-y-sultona sulfônico(1,3- propanossultona)Ácido 3-hidroxipropano-2 sulfônicoÁcido 2-hidroxipropano-1 sulfônicoCompostos (tetrahidro dióxido de oxatiazina): Intermediários químicos

[0123] Grupo protetor: cloreto de benzila

[0124] Grupo de proteção: cloroformiato de benzila XVI. Síntese de compostos precursors Síntese:

[0125] 83,9 g de ácido vinilsulfônico sódico foram adicionados a uma solução de 400 mL de álcool benzílico e 0,5 g de sódio (quantidade catalítica) foi adicionado. A mistura foi aquecida com agitação a 150°C e a maior parte do ácido vinilsulfônico sódico passou para a solução. Após 3 horas, a mistura foi deixada a arrefecer durante a noite e um sólido espesso se cristalizou. Este sólido foi filtrado sob vácuo e, em seguida, suspenso em álcool etílico, filtrado sob vazio e seco. Rendimento: 94,0 g, IV: corresponde ao composto desejado (61,2% puro). XVII. Síntese de 1905

[0126] 60 gramas de ácido vinilsulfônico sódico foram adicionados a uma solução de 1.000 mL de álcool benzílico e 0,5 g de sódio. Em seguida, toda a mistura foi agitada sob refluxo e aquecida. Após aproximadamente 3 horas, o excesso de álcool benzílico foi destilado e removido por vácuo e o resto foi fervido com álcool. A solução de álcool foi filtrada, concentrada, cristalizada até 1/2, obteve-se 37,3 g de uma substância amarelada semelhante a algodão.

[0127] O procedimento foi também repetido com 250 g de ácido vinilsulfônico sódico e 2 litros de álcool benzílico, processados como anteriormente e cerca de 208 g foi cristalizado.

[0128] O procedimento foi também repetido com 100 g de ácido vinilsulfônico sódico e 1 litro de álcool benzílico, processados como acima e cerca de 105 g foi cristalizado.

[0129] O procedimento foi também repetido com 200 g de ácido vinilsulfônico sódico, processados como acima e cerca de 130 g foi cristalizado. XVIII. Síntese de 1906

[0130] 6,7 g de 1905 (recristalizado) foram adicionados a 50 mL de cloreto de tionila e 1 mL de dimetilformamida. O sal de sódio dissolveu-se imediatamente e a mistura foi aquecida a 40-50°C, deixada repousar durante a noite a 20°C e aspirada até a concentração. Rendimento: 9,8 g, que foi adicionado a 50 mL de NaOH 2N e bem agitado. A solução de NaOH foi lavada com CHCl3 e, em seguida, agitada com HCl concentrado para precipitar e capturada com Na2SO4, em seguida, seca e destilada.

[0131] O processo foi repetido com 208 g de 1905 misturado com 1.000 mL de cloreto de tionila e 10 mL de dimetil formamida. A mistura foi submetida a refluxo e o cloreto de tionila excessivo foi removido por destilação até secar. O rendimento foi de 250 g, o qual foi processado como acima. XIX. Síntese de 1907

[0132] 9,8 g de 1906 foram dissolvidos em clorofórmio (CHCI3) (turvo) e concentrado para uma porção de 150 mL de amônia concentrada em água e agitado. A agitação foi continuada durante 3 horas com aquecimento de 40°C a 50°C. Em seguida, a mistura foi seca sob vácuo e concentrada. Rendimento: 3,1 g de óleo escuro

[0133] Os 3,1 g de óleo escuro foram adicionados a 50 mL de NaOH 2N e bem agitados. A solução de NaOH foi lavada com CHCl3 e, em seguida, agitada com HCl concentrado para precipitar e capturada com Na2SO4, em seguida, seca e destila. Rendimento: Óleo 2,5 g.

[0134] Para a análise, uma amostra de 0,5 g foi condensada a uma temperatura de 160°C, tornada sólida e cristalizada 3 vezes a partir de acetato de etila / benzeno. Ponto de fusão: 75°C a 76°C Fórmula molecular: C9H13NO3S PM: 215,2 Calculado: C = 50,23%, H = 6,09%, N = 6,51%, S = 14,86% Real: C = 50,14%, H = 6,15%, N = 6,35%, S = 14,79% XX. Síntese de 1908

[0135] 1,2 g de 1907 foi dissolvido em 200 mL de acetato de etila e 0,4 g de Pd/carvão ativado foi adicionado. A mistura foi hidrogenada em autoclave hidrogenada a 100 e a 50°C durante 4 horas. A mistura foi deixada sob pressão durante um fim de semana à temperatura ambiente. Em seguida, a solução de acetato de etila foi filtrada e seca sob vácuo. Rendimento: 1,1 g de óleo. XXI. Síntese de 1908

[0136]2 gramas de 1907 foram dissolvidos em 200 mL de acetato de etila e 0,5 g de Pd / paládio / carvão ativado foi adicionado. A mistura foi hidrogenada em autoclave de alta pressão a 100 e a 50°C. Após 6 horas, a mistura reacional foi deixada arrefecer durante a noite, depois filtrada e destilada sob vácuo até a secura para originar um óleo residual. Rendimento: 1,7 g de óleo.

[0137] CH2Cl2 foi adicionado, agitado e deixado repousar, cristalizado, e separado por sucção sob vácuo. Peso: 0,6 g, ponto de fusão cerca de 40°C.

[0138] Análise: 0,2 g recristalizado duas vezes a partir de acetato de etila. Ponto de fusão: 43°C a 44°C Fórmula molecular: C2H7NO3S Peso molecular: 125 Calculado: C = 19,22%, H = 5,65%, N = 11,21%, S = 25,65% Real: C = 19,20%, H = 5,67%, N = 11,07%, S = 25,73% XXII. Síntese de 1909

[0139] 19,9 gramas de 1906 foram dissolvidos em 100 mL de clorofórmio e adicionados em uma solução de 23 g de benzilamina pura e 200 mL de clorofórmio puro. Imediatamente, o cloridrato benzilamina foi precipitado e a mistura reacional tornou-se quente. A mistura foi, em seguida, submetida a refluxo e o composto de cloridrato foi separado por sucção e o licor-mãe de CHCl3 claro foi colocado em vácuo para secagem. Rendimento: 27 g de óleo amarelo claro que lentamente se tornou sólido.

[0140] Os 27 g foram dissolvidos em cerca de 20 mL de acetato de etila e n-hexano (q.s.) foi adicionado de modo que a solução se tornasse quase turva. A mistura foi posta de lado durante a noite no frio e se cristalizou. Rendimento: 9,2 g, ponto de fusão: 50°C a 53°C

[0141] Para a análise, 1 g de N-hexano foi recristalizado três vezes. Ponto de fusão 56°C a 57°C. XXIII. Síntese de 2260

[0142] 0,675 mol de sal sódico de ácido isetiônico (100,0 g) e cloreto de benzila 2,02 mols (233 mL) foram misturados em um frasco multi-tubular de 750 mL com agitador KPG. A mistura foi aquecida com temperatura interna de 70°C (95°C de temperatura externa) e, em seguida trietilamina (120 mL) foi adicionada gota a gota durante uma hora e a temperatura externa foi aumentada para 125°C e mantida. Subsequentemente, a temperatura externa foi aumentada para 140°C, e a temperatura interna subiu para 130°C. Um sólido se agrupou no agitador, mas voltou para suspensão. Vapores de ácido clorídrico emergiram.

[0143] 30 mL de trietilamina foi adicionada gota a gota e, em seguida, feita reagir durante por mais 1,5 hora. Uma suspensão amarelada viscosa se formou. O produto foi deixado a arrefecer até 50°C de temperatura interna, em seguida, foram adicionados 300 mL de água, agitados vigorosamente durante 20 minutos e a mistura foi transferida para um funil de separação de 2 litros. Em seguida, o frasco foi lavado com 100 mL de água.

[0144] As fases aquosas combinadas foram lavadas duas vezes com 280 mL de diclorometano.

[0145] A fase aquosa foi mantida a 40°C, enquanto KCl foi adicionado à solução até à saturação (cerca de 130 g de KCl). A mistura foi filtrada e armazenada durante a noite em refrigerador.

[0146] O sólido restante foi extraído e seco, resultando em 30,85 g, rendimento de 17,9%. IV: ligação OH está presente, semelhante ao precursor.

[0147] O licor-mãe foi novamente tratado com KCl e armazenado (35°C a 40°C) durante a noite em refrigerador.

[0148] O sólido a partir da segunda precipitação com KCl foi removido por filtragem e seco, resultando em 60,0 g = 34,9% e IV corresponde ao produto desejado. Sólido 1: foi fervido com 150 mL de EtOH e filtrado enquanto quente.

[0149] Através de repetidas precipitações com KCl, ebulição e cristalização, 32 g do produto foram obtidos com um rendimento de 19%. XXIV. Síntese de 2256

[0150] 40g de cloridrato de taurinamida, 18g de nitrito de sódio e 300 mL de água destilada foram fervidos em conjunto sob refluxo, até que nenhum gás adicional fosse criado. A solução amarela clara foi em seguida arrefecida a 50°C.

[0151] 30 mL de NaOH 1N foram adicionados a 10,5 g de acetaldeído. A solução amarela clara foi deixada durante o fim de semana sob vácuo para secar. O resultado foi um resíduo avermelhado semelhante a mel com peso de 37,6 g, o qual foi extraído com álcool etílico. A solução de álcool foi filtrada e concentrada em um evaporador rotativo até secar. O resíduo de óleo denso resultante foi dissolvido com acetato de etila. A solução de acetato de etila foi filtrada e concentrada.

[0152] Isto resultou em 30,7 g de um óleo denso de cor semelhante à ferrugem. A partir do óleo denso, cristais brancos foram isolados. O ponto de fusão é de cerca de 114°C a 116°C.

[0153] O espectro de IV confirmou que o composto resultante tem a estrutura do composto 2256:

[0154] Em certas modalidades, um aparelho de sublimação, composto de material de vidro de laboratório conhecido na técnica, pode ser usado em uma técnica de sublimação para purificar os compostos de acordo com a invenção. Em certas modalidades, um recipiente de sublimação é aquecido sob vácuo e sob pressão reduzida. O composto volatiliza e condensa-se como um composto purificado sobre uma superfície arrefecida, deixando impurezas de resíduos não voláteis para trás. Esta superfície arrefecida frequentemente assume a forma de um dedo frio. Após o aquecimento cessar e o vácuo ser liberado, o composto sublimado pode ser recolhido a partir da superfície arrefecida.

[0155] Em uma modalidade, os derivados substituídos composto 2250 podem ser preparados. Derivados substituídos de composto 2250 incluem:

[0156] Em que R pode ser H ou alquila ou arila. Em certas modalidades, R é um C1 a C6 alquila. Em certas modalidades, R é metila.

[0157] Em certas modalidades, derivados de composto 2250 são preparados de acordo com o seguinte esquema de reação:

[0158] Em uma modalidade, esta divulgação inclui um modo de eliminação de células tronco tumorais através da administração, a um indivíduo em necessidade, de uma quantidade eficaz para eliminar células troco tumorais contendo taurolidina, taurultam, ou uma mistura dos mesmos. A quantidade eficaz para eliminar células troco tumorais de taurolidina e/ou taurultam é menor do que uma quantidade de taurolidina e/ou taurultam necessária para eliminar células tumorais.

[0159] Em algumas modalidades, taurolidina, taurultam, ou uma mistura dos mesmos é administrada em uma composição para eliminar células tronco tumorais com uma concentração de cerca de 0,01 µg/mL a cerca de 500 µg/mL. Em algumas modalidades, taurolidina, taurultam, ou uma mistura dos mesmos é administrada em uma composição para eliminar células tronco tumorais com uma concentração de cerca de 0,1 µg/mL a cerca de 100 µg/mL. Em algumas modalidades, taurolidina, taurultam, ou uma mistura dos mesmos é administrada em uma composição para eliminar células tronco tumorais com uma concentração de cerca de 10 µg/mL a cerca de 50 µg/mL. Taurolidina é eficaz para eliminar células tronco tumorais em cultura de tecidos in vitro a 0,01 µg/mL.

[0160] Em algumas modalidades, taurolidina, taurultam, ou uma mistura dos mesmos é administrada em uma composição para eliminar células tronco tumorais com uma concentração de cerca de 0,001% a cerca de 2%. Em algumas modalidades, taurolidina, taurultam, ou uma sua mistura dos mesmos é administrada em uma composição para eliminar células tronco tumorais com uma concentração de cerca de 0,01% a cerca de 1,5%. Em algumas modalidades, taurolidina, taurultam, ou uma mistura dos mesmos é administrada em uma composição para eliminar células tronco tumorais com uma concentração de cerca de 0,1% a cerca de 1%.

[0161] Em uma modalidade, taurolidina, taurultam, ou uma mistura dos mesmos é administrada para eliminar células tronco tumorais, a um indivíduo em necessidade, em uma dose diária total de cerca de 0,01 g a cerca de 50 g, cerca de 0,1 g a cerca de 30 g, cerca de 0,5 g a cerca de 10 g, ou cerca de 1 g a cerca de 5 g.

[0162] A dosagem eficaz de taurolidina, taurultam, ou uma mistura dos mesmos para eliminar células tronco tumorais são unidades de dosagem dentro da faixa de cerca de 0,01 mg/kg por dia a 500 mg/kg por dia, preferivelmente de 1 mg/kg por dia a 100 mg/kg por dia, e mais preferivelmente de 5 mg/kg por dia a 50 mg/kg por dia.

[0163] Em outra modalidade, esta divulgação inclui um modo de eliminar células tronco tumorais através da administração, a um indivíduo em necessidade, de um composto selecionado dentre os seguintes compostos: , em que cada R é independentemente H, alquila, ou arila, , que podem ser utilizados com taurolidina e/ou taurultam. Tal técnica proporciona um modo para eliminar células tronco tumorais utilizando pelo menos dois compostos que possuem meias-vidas diferentes, e, desse modo ampliam os efeitos farmacocinéticos obtidos. Em uma modalidade, o composto 2250 pode ser usado em combinação com taurolidina e/ou taurultam.

Exemplos Exemplo 1 Atividade antineoplásica do composto 2250 Introdução

[0164] Com base no reconhecimento de taurolidina como um poderoso agente antineoplásico, o análogo de 2250 foi sintetizado pela Geistlich Pharma.

Material e métodos

[0165] Produtos químicos: A solução do composto 2250 e taurolidina a 2% foram fornecidas pela Geistlich Pharma AG, Wolhusen, cessionária da presente invenção.

[0166] Linhas celulares: A linha celular de glioma humano LN-229 foi usada como anteriormente descrito (Rodak et al., 2005), bem como a linha celular de adenocarcinoma de colón humano SW480.

[0167] Ensaio de citotoxicidade: As células LN-229 dissociadas foram semeadas em placas de 96 poços a uma densidade de 104 células por poço em 100 µL de meio de cultura. Cerca de 24 horas mais tarde, quando as células atingiram 70% a 80% de confluência, o meio foi alterado e o tratamento com o composto # 2250 (de 4,0 µg/mL a 1.000 µg/mL), taurolidina (de 4,0 µg/mL a 1000 µg/mL) ou meio padrão, foi iniciado. Culturas em triplicado foram preparadas para cada amostra. Após 24 horas de incubação a 25°C, as células viáveis aderentes remanescentes foram coradas utilizando violeta cristal, tal como descrito (Rodack et al., 2005). A viabilidade celular foi determinada medindo-se a absorbância a 540 nm. Os resultados são expressos como taxa de eliminação dada pela diferença entre 100% das células e o percentual de células sobreviventes. Os valores EC50 correspondem à concentração que induz 50% de morte celular.

Resultados

[0168] Controle positivo: Após incubação das células de glioblastoma humano (LN-229) durante 24 horas com taurolidina, uma citotoxicidade dependente da concentração foi determinada (Tabela 1, Figura 1) com um EC50 = 45 µg/mL, um valor que corresponde aos resultados anteriores obtidos com esta linha celular (Rodack et al., 2005).

[0169] Ensaio de 2250: Quando 2250 foi incubado sob as mesmas condições experimentais que taurolidina, observou- se uma perda dependente de concentração semelhante a viabilidade celular. A concentração de metade do máximo para induzir a morte celular foi CE50 = 50 µg/µL (Tabela 1, Figura 1).

[0170] Os resultados para citotoxicidades das células SW480 são mostrados na Figura 2.

Discussão

[0171] O composto 2250 representa uma nova via na pesquisa para novos agentes antineoplásicos semelhantes à taurolidina. Biologicamente, o composto é tão potente como taurolidina. Quimicamente, o composto apresenta características muito diferentes de taurolidina. Através da substituição de um grupo NH por um éter-oxigênio, a estrutura de anel duplo de taurolidina é evitada. O composto 2250 é uma estrutura anelar única e um análogo estrutural próximo de taurultam.

[0172] Mecanicamente, os resultados mostram que a atividade antineoplásica de taurolidina é improvável que seja devido à formação de um derivado de metoxi, uma vez que 2250 é desprovido de um grupo metoxi. O composto provoca formação de bolhas de células tumorais.

Sumário

[0173] O composto 2250 apresenta atividade antineoplásica potente in vitro, tal como determinado para as células de glioblastoma humano (linha celular NL-229). A sua potência (EC50 = 45 µg/mL) é comparável à taurolidina (EC50 = 50 µg/mL) como testado na mesma linha celular. Tabela 1: Citotoxicidade de 2250 e taurolidina contra células de glioblastoma LL-229. Os valores foram medidos em triplicado e o OD é a absorbância a 540 nm, ± desvio padrão (DP). Valores elevados correspondem à viabilidade celular elevada.

Exemplo 2

[0174] O novo composto 2250 (dióxido de tetrahidro 1,4,5- oxatiazina-4) foi testado e verificou-se que este possui um nível muito elevado de atividade antibacteriana contra Staphylococcus aureus e Escherichia coli. A atividade antibacteriana contra Staphylococcus aureus é cerca de duas vezes tão elevada quanto taurultam.

Exemplo 3

[0175] Em testes de placa de impacto, o composto 2250 foi testado e era altamente ativo contra linhas de MRSA 188, 189, 193, 194 e 195.

[0176] Ao exibir uma combinação de antimicrobianos e atividade antineoplásica, o composto 2250 é particularmente apropriado para a oncologia cirúrgica.

Exemplo 4

[0177] Cada um dos compostos aqui identificados como composto 2250, 2255, 2245, A1, A3, B1, B2 ou B3 é testado contra linhas celulares de cânceres aqui identificados, e verificou-se que estes são ativos contra tais linhas celulares.

Exemplo 5

[0178] Cada um dos compostos aqui identificados como composto 2250, 2255, 2245, A1, A3, B1, B2 ou B3 é administrado a pacientes identificados com câncer, e verificou-se que estes são eficazes no tratamento de tais cânceres e seguros para uso em pacientes. Cada um destes compostos é administrado com vitamina D3, um derivado, metabolito ou análogo do mesmo e a combinação é aumenta os efeitos antitumorais dos compostos.

Exemplo 6

[0179] A meia-vida do composto 2250 em sangue fresco humano foi medido a 37°C in vitro por GC, PYE Unicam Série 204 FID. Valor da linha de base: 49,0 ppm Depois de 1 hora: 50,6 ppm Depois de 2 horas: 47,6 ppm Depois de 20 horas: 38,6 a 39,0 ppm.

[0180] Assim, a meia-vida do composto 2250 é expressivo após 24 horas no sangue humano, o que é significativamente maior do que a meia-vida de taurolidina, que se verificou ser inferior a 30 minutos, utilizando o mesmo teste.

Exemplo 7

[0181] As amostras de tecido a partir de gliomas WHO de alto grau IV a partir de pacientes recentemente diagnosticados (idade média de 54 ± 10 anos) foram trituradas mecanicamente, digeridas enzimaticamente e as células dissociadas foram filtradas. As células tumorais isoladas foram cultivadas como células em massa. As células tronco tumorais (CSCs) foram isoladas pela formação de neuroesferas sob condições de neuroesferas (usando meio Neurobasal) a partir de linhas celulares de glioma SMA560 de murídeo, ou a partir de células frescas de glioblastoma humanas isoladas.

Ensaio de citotoxicidade

[0182] Massas de células tumorais de glioma foram cultivadas e incubadas com taurolidina ou taurultam durante 24 horas ou 48 horas, tal como descrito anteriormente (Rodak et al., J. Neurosurg. 102, 1055-1068, 2005). As CSCs foram cultivadas durante 7 dias e subsequentemente expostas a taurolidina, taurultam ou temozolamida durante 24 horas. O número de células aderentes remanescentes foi corado (violeta de cristal ou azul de Alamar) e quantificado por meio de medições de absorbância (540 nm). A sobrevivência celular foi expressa como o percentual de células sobreviventes em relação ao número de células sobreviventes nas culturas de controle não tratadas. Os resultados são dados como a taxa percentual de morte ou CE50 como a dose necessária para metade do máximo de citotoxicidade.

Resultados Citotoxicidade de taurolidina e taurultam contra células cancerosas e células tronco tumorais a partir de camundongo

[0183] A linha celular SMA560 de glioma de camundongo foi utilizada para fornecer as massas de células tumorais e CSCs. Após a incubação das massas de células SMA560 com várias concentrações de taurolidina e taurultam (6,25 µg/mL, 12,5 µg/mL, 25 µg/mL, 50 µg/mL, 100 µg/mL e 200 µg/mL), a citotoxicidade foi determinada após 24 horas e 48 horas de incubação. Para ambos, taurolidina e taurultam, uma clara citotoxicidade dependente da dose foi encontrada com nenhuma grande diferença na potência entre os instantes de tempo de 24 horas e 48 horas de incubação (Figuras 3A e 3B). O valor de CE50 foi de 34,6 µg/mL para taurolidina e de 19,3 µg/mL para taurultam (Figura 3C).

[0184] Os camundongos com CSCs foram gerados a partir da linha celular de glioma SMA560 e cultivados durante 7 dias. As CSCs foram tratadas com a mesma concentração de taurolidina e taurultam como acima, e a citotoxicidade foi determinada após 24 horas. Tal como mostrado na Figura 4, tanto taurolidina quanto taurultam mostraram uma citotoxicidade dependente da dose com um EC50 de 12,5 µg/mL para taurolidina e EC50 de 10 µg/mL para taurultam contra CSCs de murídeos. Estes valores demonstram, pela primeira vez, que taurolidina e taurultam são eficazes contra uma CSC. Taurolidina e taurultam induzem a morte celular em CSC humana isolada a partir de quatro pacientes com glioblastoma diferentes

[0185] CSCs foram isoladas a partir do tecido ressectado de glioblastoma a partir de quatro pacientes. A mesma faixa de concentrações de taurolidina e taurultam foi aplicada tal como acima, e a citotoxicidade foi medida após 24 horas de incubação com o fármaco. Todas as quatro CSCs de glioblastoma testadas (GBM #3, #4, #5 e #6) foram igualmente sensíveis à taurolidina e taurultam (Figuras 5A e 5B). O valor médio de CE50 de taurolidina foi de 13 ± 2 µg/mL, e o valor médio de CE50 de taurultam foi de 111 ± 0,4 µg/mL (Tabela 2). Nestes experimentos, a capacidade citotóxica de taurolidina e taurultam foi comparada com a de temozolamida (TIM) aplicada na faixa de concentração de 5 µM a 1.000 µM (Figura 2C). O valor médio de CE50 de TMZ foi de 68,5 ± 26 µg/mL (Tabela 2). Curiosamente, esta concentração é muito mais elevada do que os níveis plasmáticos de pico de TMZ medidos em pacientes (13,7 µg/mL) (Portnow et al., Clin Cancer Res 15, 7.092-7.098, 2009).

[0186] Os resultados demonstram que taurolidina e taurultam são eficazes contra CSCs e este achado foi estabelecido para CSCs de glioma de duas espécies, camundongo e humano.

[0187] As CSCs de camundongos foram geradas a partir de uma linha celular de glioma de camundongo (SMA560). Notavelmente, com base nos valores de CE50, as CSCs foram ainda mais sensíveis a taurolidina e taurultam do que as massas de células de glioma correspondentes (cerca de 3 vezes para taurolidina e duas vezes para taurultam) (Figuras 3 e 4).

[0188] As CSCs humanas, isoladas e frescas a partir de quatro pacientes com glioblastoma humano, também foram altamente quimiossensíveis para taurolidina e taurultam. Os valores de CE50 de citotoxicidade foram de 13 ± 2 µg/mL e 11 ± 0,4 µg/mL, respectivamente (Tabela 2). Estes valores demonstram que as CSCs humanas, tal como os seus homólogos de murídeos, são mais sensíveis à taurolidina e taurultam (cerca de 3 a 4 vezes) do que as massas celulares de glioblastoma humanos que exibem valores de CE50 na faixa de 50 µg/mL (Rodak et al., J. Neurosurg., 102, 1055-1068, 2005). Tabela 2: Citotoxicidade induzida por taurolidina (Tau), taurultam (TT) ou temozolamida (TMZ) em células tronco tumorais (CSC) derivadas a partir de quatro pacientes com glioblastoma. CE50 (µg/mL) = concentração do fármaco resultando em 50% de morte celular em comparação com culturas de controle não tratadas in vitro.

Exemplo 8

[0189] Taurolidina e taurultam foram testadas contra células tronco tumorais derivadas de uma linha celular de glioma de murídeo e contra células tronco tumorais humanas. Taurolidina e taurultam exerceram uma potente atividade antineoplásica contra células tronco tumorais derivadas de uma linha celular de glioma de murídeo (CE50 = 12,5 µg/mL para taurolidina, CE50 = 10 µg/mL para taurultam), bem como contra células tronco tumorais humanas, isoladas e frescas a partir de quatro pacientes com glioblastoma (CE50 = 13 ± 2 µg/mL para taurolidina; CE50 = 11 ± 1,4 µg/mL para taurultam) .

Exemplo 9 Efeito antineoplásico em culturas de esferoides multicelulares semelhantes a células tronco de pâncreas.

[0190] Os esferoides multicelulares são compostos por células de tumor que crescem em uma estrutura tridimensional que estimula o crescimento, condições micro- ambientais e características semelhantes a células tronco de tumores reais. O modelo esferoide de tumor multicelular (“MCTs”, na sigla em inglês) compensa muitas das deficiências observadas em culturas de monocamada. Os esferoides na escala de 200 µm a 500 µm desenvolvem gradientes químicos de oxigênio, nutrientes e catabólitos, enquanto possuem características morfológicas e funcionais semelhantes aos tumores. Portanto, os ensaios utilizando o modelo de MCTS permitem a avaliação da penetração de fármacos e são mais preditivos de sucesso in vivo em comparação com as culturas de monocamada. Os ensaios de MCTS representam um sistema modelo de tumor de complexidade intermediária entre monocamada padrão e tumores in vivo.

[0191] As células tumorais pancreáticas (Panc Tu-1, BxPC-3, Mia Paca-2, ASPC1) e células tumorais primárias pancreáticas (Bo80) foram semeadas em placas de adesão ultrabaixa em meios especiais de células tronco.

[0192] As células tumorais pancreáticas (ASPC1, Mia Paca-2, Panc Tu-1, BxPC-3) e células tumorais primárias pancreáticas (Bo80) foram criadas em cultura em monocamada, antes de semear as placas de adesão ultrabaixa sob condições de meio especial de células tronco para formar esferoides multicelulares e passados através de um filtro de células para excluir agregados.

[0193] A inibição semi-máxima da viabilidade das células foi conseguida entre 750 µM e 1.000 µM de composto 2250 em linhas celulares de tumor AsPC-1, BxPC-3 e HCT-1 16. Estes efeitos são similares aos observados na linha celular de glioma LN-229. A indução da morte celular foi devida a apoptose e necrose (mais provável necroptose). Verificou-se que a indução desta morte celular programada foi prevenida pela adição do agente redutor N-acetilcisteína e que caspases não estão envolvidos. Assim, existe um mecanismo de ação direcionado por redox.

[0194] O crescimento de células tronco tumorais de pâncreas (AsPC-1, BxPC-3 e HCT-116) foi inibido pelo composto 2250 com uma concentração semi-máxima de 300 µM, que é consideravelmente mais baixa do que a concentração necessária para provocar citotoxicidade.

[0195] Tal como mostrado na Figura 8, os esferoides de tumor multicelular pancreático (Panc Tu-1 ou BxPC-3) foram testados como controle, tratados com amostras de taurolidina (500 µM) ou tratados com amostras de composto 2250 (1.000 µM) durante 48 horas (colunas rotuladas A). Após o tratamento, cada uma das suspensões inteiras de células foi passada através de um filtro celular de 45 µm novamente para analisar agregados residuais em relação a sua estabilidade (colunas rotuladas B).

[0196] As Figuras 9A e 9B mostram os resultados da análise FACS do teor de culturas esferoides multicelulares CD133 de Panc Tu-1. CD133 é uma característica conhecida e bem estabelecida de células tronco. Os resultados mostram que a quantidade de células CD133-positivas em culturas esferoides multicelulares de Panc Tu-l foi enriquecida 10 vezes em comparação com Panc Tu-1 cultivadas em cultura em monocamada (B). O Isotipo IgG foi utilizado como controle negativo (A). Os resultados demonstram que taurolidina e o composto 2250 possuem um efeito antineoplásico em células tronco do pâncreas como culturas esferoides multicelulares.

Exemplo 10 Estudo in vivo de taurolidina e composto 2250 como agentes antineoplásicos em carcinoma pancreático maligno.

[0197] Foram analisados os efeitos de taurolidina e do composto 2250 em camundongos atímicos (NMRI-Foxn1 nu/nu). 1 x 107 células tumorais (PancTu-1 e MiaPaCa 2) foram injetados subcutaneamente no flanco. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em três grupos: o grupo de controle; o grupo tratado i.p. com taurolidina (TRD), e o grupo tratado i.p. com composto 2250 (NDTRLT).

[0198] Os tumores foram cultivados para um tamanho de 200 mm3 antes de o tratamento ser iniciado. Os camundongos foram tratados em dias alternados com 500 mg/kg * peso corporal.

[0199] Tal como mostrado na Figura 10A, a administração de taurolidina reduziu significativamente o volume do tumor MiaPaCa2 em comparação com o controle (cerca de 2 vezes).

[0200] Tal como mostrado na Figura 10B, a administração do composto 2250 reduziu significativamente o volume do tumor MIaPaCa2 em comparação com o controle (mais de 3 vezes).

[0201] Tal como mostrado na Figura 10C, a administração de taurolidina reduziu significativamente o volume do tumor PancTu I em comparação com o controle (cerca de 3 vezes).

[0202] Tal como mostrado na Figura 10D, a administração do composto 2250 reduziu significativamente o volume do tumor PancTu I em comparação com o controle (cerca de 2 vezes).

[0203] A taurolidina aplicada e as dosagens de composto 2250 não apresentaram nenhum efeito tóxico sobre os camundongos durante o estudo. Em ambos os modelos de linhas celulares tumorais, foi obtida uma redução significativa do crescimento do tumor.

[0204] O crescimento do tumor (volume) foi significativamente reduzido a partir do dia 9 em diante (PancTuI) e dia 11 em diante (MiaPaCa2) em comparação aos controles. A dose de 500 mg/kg i.p. foi bem tolerada com nenhum sinal evidente de toxicidade.

[0205] Tal como mostrado na Figura 11A, um modelo de xenoenxerto de tumores pancreáticos primários (Bo 73) foi observado durante 15 dias e verificou-se que a administração de taurolidina reduziu ligeiramente o volume relativo do tumor em relação ao controle, e a administração do composto 2250 reduziu ainda mais o volume relativo do tumor em comparação ao controle. No entanto, as diferenças nos volumes dos tumores não foram estatisticamente relevantes, provavelmente devido à curta duração do estudo e a lenta taxa de crescimento dos tumores. Na Figura 11B, observou-se um modelo de xenoenxerto de tumores pancreáticos primários (Bo 70) durante 23 dias e observou-se que a administração de taurolidina e composto 2250 reduziu significativamente o volume do tumor comparado com o controle.

[0206] A administração, por exemplo, por via intraperitoneal, de taurolidina e/ou composto 2250 inibe o crescimento do tumor in vivo.

Claims (9)

1. Processo para preparar os compostos 2245, 2250 e/ou 2255 de fórmula caracterizado pelo fato de compreender: reagir o composto 1908/2244 de fórmula , com HCHO a 20°C e HCOOH sob aquecimento, para obter uma mistura do composto 1893/2245 de fórmula moderadamente solúvel, e do composto 2250 na forma de óleo viscoso; ou reagir o composto 2244 com metileno glicol para obter o composto 2250; reagir o composto 2245 com H2 em Pd e carvão ativado para obter o composto 2250; e/ou reagir o composto 2245 com H2 em Pd e carvão ativado sob temperatura de 50 a 60°C e 60 a 100 bar de pressão com acetato de etila para obter uma mistura dos compostos 2250 e 2255.

2. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto 1908/2244 é produzido através da reação do composto 1907/2264 de fórmula (a) H2 sob pressão, em Pd e carvão ativado, e com acetato de etila a 50°C e 100 bar; (b) Acetato de etila em Pd e carbono ativado; (c) H2 e éster acético sob pressão, em que reação (c) compreende as seguintes etapas sequenciais: dissolver o composto 1907 em éster acético e adicionar paládio/carbono ativado para formar uma mistura reacional, autoclavar a mistura reacional a 100°C, hidrogenar a 50°C, resfriar de um dia para o outro, filtrar e concentrar à secura para obter o composto 1908/2244 sólido; ou (d) Com H2 sob pressão normal e éster acético em Pd e carbono ativo; em que a reação (d) compreende as seguintes etapas sequenciais: dissolver o composto 1907 em éster acético e adicionar paládio/carbono ativado para formar uma mistura reacional, hidrogenar a mistura sob temperatura ambiente e pressão atmosférica, remover o hidrogênio, filtrar e secar até obter o composto 1908/2244 sólido.

3. Processo, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a etapa reacional (a) compreende, adicionalmente, ebulir o composto 1907/2244 com HCl concentrado e refluxar para formar uma mistura reacional, resfriar a mistura reacional e separar uma fase oleosa de uma fase aquosa da mistura reacional, concentrar a fase aquosa e resfriar o resíduo oleoso para formar cristais do composto 1908/2244.

4. Processo, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a etapa reacional (a) compreende, adicionalmente, ebulir o composto 1907/2244 com HCl concentrado e refluxar para formar uma mistura reacional, resfriar a mistura reacional e separar uma fase oleosa de uma fase aquosa da mistura reacional, dissolver a fase aquosa com cloreto de metileno, separar o cloreto de metileno, concentrar a fase aquosa e resfriar para formar um óleo.

5. Processo, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a etapa reacional (a) compreende, adicionalmente, ebulir o composto 1907/2244 com HCl concentrado e refluxar para formar uma mistura reacional, resfriar a mistura reacional, adicionar diclorometano para formar uma fase aquosa e uma fase oleosa, evaporar a fase aquosa, semear a fase oleosa com cristais do composto 1908/2244, e obter os cristais do composto 1908/2244.

6. Processo, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o composto 1907/2264 é produzido pela reação do composto 1906 de fórmula

7. Processo, de acordo com a reivindicação 6, que o caracterizado pelo fato de composto 1906 é produzido de fórmula , com SOCl2 e dimetilformamida.

8. Uso de uma combinação compreendendo o composto 2250 e gencitabina caracterizado pelo fato de ser para preparar um medicamento para tratar câncer.

9. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o câncer é câncer pancreático.