BR112017011446B1 - Composto, composição e uso dos mesmos - Google Patents

Abstract

INIBIDORES HETEROBIFUNCIONAIS DE E-SELECTINAS E RECEPTORES DA QUIMIOCINA CXCR4. São divulgados compostos, composições e métodos para tratamento e/ou prevenção de câncer e doenças inflamatórias e para liberação de células tais como células tronco (por exemplo, células progenitoras da medula óssea) no sangue circulante e para aumentar a retenção das células no sangue. Por exemplo, são descritos compostos heterobifuncionais que inibem tanto as E? selectinas quanto os receptores da quimiocina CXCR4 e composições farmacêuticas que compreendem pelo menos um dos mesmos.

Description

RELATÓRIO DESCRITIVO CAMPO DA INVENÇÃO

[0001] Este Pedido de patente reivindica o benefício sob 35 U.S.C. § 119(e) ao Pedido de Patente U.S. Provisório No. 62/087.085 depositado em 3 de dezembro de 2014, cujo pedido de patente é incorporado aqui como referência em sua totalidade.

CAMPO DA INVENÇÃO

[0002] São divulgados aqui compostos, composições e métodos para o tratamento de câncer e doenças inflamatórias e para aumentar a retenção de células após a liberação no sangue circulante. Por exemplo, são divulgados compostos e composições heterobifuncionais que inibem as E-selectinas e os receptores da quimiocina CXCR4 e usos dos mesmos.

ANTECEDENTE DA INVENÇÃO

[0003] Um número de cânceres é tratável antes que o câncer tenha avançado para fora do sítio primário. Entretanto, uma vez que o câncer se espalhou para fora do sítio primário, as opções de tratamento podem ser limitadas e as estatísticas de sobrevivência podem diminuir drasticamente. Os ossos são uma localização comum para o câncer se infiltrar assim que deixa a localização do tumor primário. Os cânceres de mama e próstata são exemplos de cânceres que migram para os ossos. Mesmo células leucêmicas que se originam na corrente sanguínea podem retornar para a medula óssea. Uma vez que o câncer reside no osso, este pode causar dor em um indivíduo. Além disso, uma vez na medula óssea, as células cancerosas também podem ser tornar resistentes à quimioterapia. Em adição, se o osso afetado particular produzir células sanguíneas na medula óssea, o indivíduo pode desenvolver uma variedade de transtornos relacionados às células sanguíneas. Assim, pode ser desejável impedir que as células cancerosas deixem o sítio primário e/ou impedir o extravasamento das células cancerosas da corrente sanguínea e a infiltração em outros tecidos. A retenção das células cancerosas na corrente sanguínea torna as células mais suscetíveis ao tratamento, tal como quimioterapia.

[0004] Alguns cânceres se originam totalmente ou em parte no osso. Para tais cânceres, pode ser desejável mobilizar as células cancerosas do osso para a corrente sanguínea e/ou impedir que tais células (bem como quaisquer células cancerosas já na corrente sanguínea) retornem para o osso ou de outra maneira deixem a corrente sanguínea. A retenção das células cancerosas na corrente sanguínea (ou mobilização das células cancerosas para dentro da corrente sanguínea e então retenção ali) torna as células mais suscetíveis ao tratamento, tal como quimioterapia.

[0005] As células tronco hematopoiéticas (HSCs) também residem na medula óssea e são uma fonte de material para terapia celular. As HSCs se aderem ao estroma dentro da medula óssea e para ser coletadas é necessário romper estas adesões e mobilizá-las para fora da medula óssea. Podem ser desejados agentes aprimorados para o aumento do número de HSCs disponível para coleta. Tais HSCs podem ser úteis para enxerto.

[0006] Consequentemente, é uma necessidade na arte o tratamento de cânceres que podem deixar o sítio primário e cânceres que se originam totalmente ou em parte no osso e de métodos aprimorados para auxiliar na preparação de células tronco de grau terapêutico. A presente divulgação pode satisfazer uma ou mais destas necessidades e/ou pode fornecer outras vantagens.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0007] São divulgados os compostos, as composições e os métodos para tratamento de doenças e para aprimoramento dos métodos sucintamente citados em que uma E-selectina e um receptor da quimiocina CXCR4 podem desempenhar uma função. Os compostos divulgados aqui são heterobifuncionais, em que um inibidor de E- selectina é ligado a um inibidor do receptor da quimiocina CXCR4. Os compostos podem ser utilizados para tratar câncer em que as células cancerosas podem deixar o sítio primário, para tratar uma doença inflamatória em que a adesão ou a migração das células ocorre na doença e/ou para liberar células tais como células tronco (por exemplo, células progenitoras de medula óssea) no sangue circulante e aumentar a retenção das células no sangue (por exemplo, para mobilizar as células para fora da medula óssea e manter as células na corrente sanguínea periférica).

[0008] Em algumas modalidades, são divulgados inibidores heterobifuncionais da Fórmula (I): Ligante pró-fármacos da Fórmula (I) e sais farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um dos anteriores, em que R1 é selecionado de grupos H, C1-8 alquila, C2-8 alquenila, C2- 8 alquinila, C1-8 haloalquila, C2-8 haloalquenila e C2-8 haloalquinila; R2 é selecionado de grupos -OH, -NH2, -OC(=O)Y1, -NHC(=O)Y1 e - NHC(=O)NMY1, em que Y1 é selecionado de C1-8 alquila, C2-8 alquenila, C28 alquinila, C1-8 haloalquila, C2-8 haloalquenila, C2-8 haloalquinila, C6-18 arila e C1-13 heteroarila; R3 é selecionado de grupos -CN, -CH2CN e -C(=O)Y2, em que Y2 é selecionado dos grupos C1-8 alquila, C2-8 alquenila, C2-8 alquinila, -OZ1, - NHOH, -NHOCH3, -NHCN e -NZ1Z2, em que Z1 e Z2, que podem ser idênticos ou diferentes, são independentemente selecionados de grupos H, C1-8 alquila, C2-8 alquenila, C2-8 alquinila, C2-8 haloalquila, C2-8 haloalquenila e C2-8 haloalquinila, em que Z1 e Z2 podem ser ligados juntos para formar um anel; R4 é selecionado de grupos C3-8 cicloalquila; R5 é independentemente selecionado de grupos H, halo, C1-8 alquila, C2-8 alquenila, C2-8 alquinila, C1-8 haloalquila, C2-8 haloalquenila e C2-8 haloalquinila, com a condição de que pelo menos um R5 não seja H; n é selecionado de números inteiros que variam de 1 até 4; e L é selecionado de grupos ligantes.

[0009] Como é utilizado aqui, ‘composto da Fórmula (I)’ inclui inibidores heterobifuncionais da Fórmula (I), sais farmaceuticamente aceitáveis de inibidores heterobifuncionais da Fórmula (I), pró-fármacos de inibidores heterobifuncionais da Fórmula (I) e sais farmaceuticamente aceitáveis de pró-fármacos de inibidores heterobifuncionais da Fórmula (I).

[00010] Em algumas modalidades, são apresentadas composições farmacêuticas que compreendem pelo menos um composto da Fórmula (I) e opcionalmente pelo menos um ingrediente farmaceuticamente aceitável adicional.

[00011] Em algumas modalidades, um composto da Fórmula (I) e/ou uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um composto da Fórmula (I) pode ser utilizada para a preparação e/ou a manufatura de um medicamento para uso no tratamento de pelo menos uma das doenças, dos transtornos e dos estados de saúde descritos aqui.

[00012] Em algumas modalidades, é divulgado um método para tratamento e/ou prevenção de pelo menos um câncer em que as células cancerosas podem deixar o sítio primário, o método compreendendo a administração a um indivíduo que necessita do mesmo de uma quantidade eficiente de pelo menos um composto da Fórmula (I) e/ou uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um composto da Fórmula (I) e opcionalmente pelo menos um ingrediente farmaceuticamente aceitável adicional.

[00013] Em algumas modalidades, é divulgado um método para tratamento e/ou prevenção de pelo menos um câncer em que é desejado mobilizar as células cancerosas partindo de um local para dentro da corrente sanguínea e/ou manter as células cancerosas na corrente sanguínea, o método compreendendo a administração a um indivíduo que necessita do mesmo de uma quantidade eficiente de pelo menos um composto da Fórmula (I) e/ou uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um composto da Fórmula (I) e opcionalmente pelo menos um ingrediente farmaceuticamente aceitável adicional.

[00014] Em algumas modalidades, pelo menos um composto da Fórmula (I) e/ou uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um composto da Fórmula (I) pode ser utilizada nos métodos descritos aqui para tratamento e/ou prevenção de metástase de tumor. Em algumas modalidades, a metástase de tumor resulta de câncer pancreático. Em algumas modalidades, a metástase de tumor resulta de câncer de próstata. Em algumas modalidades, a metástase de tumor resulta de câncer pancreático. Em algumas modalidades, a metástase de tumor resulta de câncer de mama. Em algumas modalidades, pelo menos um agente quimioterapêutico adicional tal como gemcitabina é administrado ao indivíduo.

[00015] Em algumas modalidades, é divulgado um método para liberação de células no sangue circulante e de aumento da retenção das células no sangue que compreende a administração a um indivíduo que necessita do mesmo de uma quantidade eficiente de pelo menos um composto da Fórmula (I) e/ou uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um composto da Fórmula (I) e opcionalmente pelo menos um ingrediente farmaceuticamente aceitável adicional. Em algumas modalidades, o método inclui ainda a coleta das células liberadas. Em algumas modalidades, a coleta das células liberadas utiliza aférese. Em algumas modalidades, as células liberadas são células tronco (por exemplo, células progenitoras da medula óssea). Em algumas modalidades, G-CSF é administrado ao indivíduo.

[00016] Em algumas modalidades, é apresentado um método para o tratamento e/ou a prevenção de uma doença inflamatória em que a adesão e/ou a migração de células ocorre nas doenças que compreende a administração a um indivíduo que necessita do mesmo de uma quantidade eficiente de pelo menos um composto da Fórmula (I) e/ou uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um composto da Fórmula (I) e opcionalmente pelo menos um ingrediente farmaceuticamente aceitável adicional.

[00017] Na descrição a seguir, são certos detalhes específicos apresentados para fornecer um entendimento completo de várias modalidades. Todavia, um perito na arte entenderá que as modalidades divulgadas podem ser praticadas sem estes detalhes. Em outros casos, estruturas bem conhecidas não foram mostradas ou descritas em detalhes para evitar descrições duvidosas desnecessárias das modalidades. Estas e outras modalidades se tornarão evidentes após a referência à descrição detalhada e aos desenhos em anexo a seguir.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[00018] A FIG. 1 (Fig. 1A e Fig. 1B) é um diagrama que ilustra a síntese do Composto 9 e do Composto 16 heterobifuncionais.

[00019] A FIG. 2 mostra o espectro de 1H RMN de 400 MHz do Composto 9

[00020] A FIG. 3 mostra espectro de 1H RMN de 600 MHz do Composto 16

[00021] A FIG. 4 descreve os resultados da inibição do teste de quimiotaxia induzida por SDF-1 pelos Compostos 9 e 16 heterobifuncionais.

[00022] A FIG. 5 (Fig. 5A e Fig. 5B) descreve os resultados de um teste de E-selectina em que os Compostos 9 e 16 heterobifuncionais são utilizados com o inibidor.

[00023] A FIG. 6 descreve os resultados de um teste de CXCR4 pelo Composto 9 heterobifuncional.

[00024] A FIG. 7 descreve os resultados de um teste de migração linfática e endotelial vascular em direção aos fibroblastos associados a tumor pelo Composto 9 heterobifuncional.

[00025] A FIG. 8 descreve os resultados de um teste de ligação de célula PDAC às monocamadas linfáticas pelo Composto 9 heterobifuncional.

[00026] A FIG. 9 descreve os resultados de um teste de tumor intratibial pelo Composto 9 heterobifuncional.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[00027] São divulgados aqui compostos, composições e métodos para o tratamento de doenças em que uma E-selectina e um receptor da quimiocina CXCR4 desempenham uma função e para aumentar a retenção de células após a liberação no sangue circulante. Os compostos possuem uma variedade de usos in vitro e in vivo.

[00028] Os inibidores de E-selectina são conhecidos na arte. Alguns inibidores de E-selectina são específicos apenas para a E-selectina. Outros inibidores de E-selectina possuem a capacidade de inibir não somente a E-selectina, mas adicionalmente a P-selectina ou a L-selectina ou tanto a P-selectina quanto a L-selectina. Os exemplos de inibidores de E-selectina (específicos para E-selectina ou de outra maneira) são divulgados na Patente U.S. No. 7.060.685; na Publicação de Pedido de Patente U.S. No. US-2007-0054870; na Publicação de Pedido de Patente U.S. No. US-2008-161546; e nas referências citadas em qualquer um destes documentos de patentes ou de pedidos de patentes publicados. Tais exemplos são moléculas orgânicas pequenas. Outros inibidores de E-selectina conhecidos são à base de aminoácidos, tais como anticorpos. Por exemplo, o anticorpo monoclonal humanizado CDP850 é um inibidor de E-selectina.

[00029] Os inibidores de receptor da quimiocina CXCR4 são conhecidos na arte. Tais inibidores irão tipicamente impedir o fator derivado de estroma 1 (SDF-1) a um receptor de CXCR4. Os exemplos de inibidores de receptor da quimiocina CXCR4 são AMD-3100 (Hendrix e outros, Antimicrob. Agents Chemother, 44: 1667-1673, 2000); ALX40-4C (Doranz e outros, AIDS Research and Human Retroviruses 17:475-486, 2001); e T134 (Arakaki e outros, J. Virol. 73: 1719-1723, 1999). Estes exemplos incluem uma molécula orgânica pequena e moléculas à base de aminoácidos, tal como o peptídeo T22. AMD-3100 uma biciclama. Cada um dos anéis de ciclama é ligado ao mesmo anel fenila (cada anel de ciclama fica para em relação ao outro) através de um grupo metileno.

[00030] Os compostos heterobifuncionais para a inibição de E- selectina e do receptor da quimiocina CXCR4 que compreendem inibidor de E-selectina-Ligante-Inibidor do receptor da quimiocina CXCR4 são conhecidos na arte. Os exemplos são divulgados, por exemplo, na Patente U.S. No. 8.410.066.

[00031] Em algumas modalidades, são apresentados inibidores heterobifuncionais da Fórmula (I): Ligante pró-fármacos da Fórmula (I) e sais farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um dos anteriores, em que R1 é selecionado de grupos H, C1-8 alquila, C2-8 alquenila, C2-8 alquinila, C1-8 haloalquila, C2-8 haloalquenila e C2-8 haloalquinila; R2 é selecionado de grupos -OH, -NH2, -OC(=O)Y1, -NHC(=O)Y1 e - NHC(=0)NHY1, em que Y1 é selecionado de Ci-8 alquila, C2-8 alquenila, C28 alquinila, C1-8 haloalquila, C2-8 haloalquenila, C2-8 haloalquinila, C6-18 arila e C1-13 heteroarila; R3 é selecionado de grupos -CN, -CH2CN e -C(=O)Y2, em que Y2 é selecionado de C1-8 alquila, C2-8 alquenila, C2-8 alquinila, -OZ1, -NHOH, - NHOCH3, -NHCN e -NZ1Z2, Em que Z1 e Z2, que podem ser idênticos ou diferentes, são independentemente selecionados de grupos H, C1-8 alquila, C2-8 alquenila, C2-8 alquinila, C1-8 haloalquila, C2-8 haloalquenila e C2-8 haloalquinila, em que Z1 e Z2 podem ser ligados juntos para formar um anel; R4 é selecionado de grupos C3-8 cicloalquila; cada R5 é independentemente selecionado de grupos H, halo, C1- 8 alquila, C2-8 alquenila, C2-8 alquinila, C1-8 haloalquila, C2-8 haloalquenila e C2-8 haloalquinila, com a condição de que pelo menos um R5 não seja H; n é selecionado de números inteiros que variam de 1 até 4; e L é selecionado de grupos ligantes.

[00032] Em algumas modalidades, R1 é selecionado de grupos H, C14 alquila e C1-4 haloalquila. Em algumas modalidades, R1 é selecionado de H, metila, etila, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CH2F, -CH2CHF2 e -CH2CF3. Em algumas modalidades, R1 é H. Em algumas modalidades, R1 é selecionado de metila e etila. Em algumas modalidades, R1 é metila. Em algumas modalidades, R1 é etila.

[00033] Em algumas modalidades, R2 é selecionado de grupos - OC(=O)Y1 e -NHC(=O)Y1, em que Y1 é selecionado de grupos C1-8 alquila, C1-8 haloalquila, C6-18 arila e C1-13 heteroarila, em algumas modalidades, R2 é selecionado de

[00034] Em algumas modalidades, R3 é -C(=O)Y2 em que Y2 é selecionado de grupos -OZ1 e -NZ1Z2, em que Z1 e Z1, que podem ser idênticos ou diferentes, são independentemente selecionados de H, C1-8 alquila e C1-8 haloalquila, em que Z1 e Z2 podem ser ligados juntos para formar um anel. Em algumas modalidades, R3 é -C(=O)OH.

[00035] Em algumas modalidades, R4 é selecionado de grupos ciclopropila e ciclohexila. Em algumas modalidades, R4 é selecionado de

[00036] Em algumas modalidades, cada R5 é independentemente selecionado de grupos H, halo, C1-8 alquila e C1-8 haloalquila, com a condição de que pelo menos um R5 não seja H. Em algumas modalidades, pelo menos um R5 é halo, em algumas modalidades, pelo menos um R5 é fluoro. Em algumas modalidades, pelo menos um R5 é cloro. Em algumas modalidades, pelo menos um R5 é bromo. Em algumas modalidades, pelo menos um R5 é iodo.

[00037] Em algumas modalidades, n é 2. Em algumas modalidades, n é 2 e R5 é halo. Em algumas modalidades, n é 2 e R5 é bromo. Em algumas modalidades, n é 1. Em algumas modalidades, n é 1 e R5 é halo. Em algumas modalidades, n é 1 e R5 é bromo.

[00038] Em algumas modalidades, o composto é selecionado de compostos da Fórmula (Ia): Ligante

[00039] Em algumas modalidades, o composto é selecionado de compostos das Fórmulas a seguir: Ligante e Ligante

[00040] Em algumas modalidades, o composto é selecionado de compostos da Fórmula (lb): (Ib) Ligante

[00041] Em algumas modalidades, o composto é selecionado de compostos das Fórmulas a seguir: Ligante e Ligante

[00042] Em algumas modalidades, o composto é selecionado de compostos das Fórmulas a seguir: Ligante Ligante Ligante Ligante Ligante e Ligante

[00043] Em algumas modalidades, o composto é selecionado de compostos das Fórmulas a seguir: Ligante Ligante Ligante Ligante Ligante e Ligante

[00044] Em algumas modalidades, os grupos ligantes podem ser selecionados de grupos que compreendem grupos espaçadores, grupos espaçadores tais como, por exemplo, -(CH2)p- e -O(CH2)p-, em que p é selecionado de números inteiros que variam de 1 até 20. Outros exemplos não limitantes de grupos espaçadores incluem grupos carbonila e grupos que contêm carbonila tais como, por exemplo, grupos amida. Um exemplo não limitante de um grupo espaçador é

[00045] Em algumas modalidades, o grupo ligante é selecionado de

[00046] Outros grupos ligantes, tais como, por exemplo, polietileno glicóis (PEGs) e -C(=O)-NH-(CH2)p-C(=O)-NH-, em que p é selecionado de números inteiros que variam de 1 até 20, serão familiares aos peritos comuns na arte e/ou aqueles em posse da presente divulgação.

[00047] Em algumas modalidades, o grupo ligante é

[00048] Em algumas modalidades, o grupo ligante é

[00049] Em algumas modalidades, o grupo ligante é selecionado de - C(=O)NH(CH2)2NH-, -CHzNHCH2- e -C(=O)NHCH2. Em algumas modalidades, o grupo ligante é -C(=O)NH(CH2)2NH-.

[00050] Em algumas modalidades, o composto é selecionado de compostos das Fórmulas a seguir: e

[00051] Em algumas modalidades, o composto é selecionado de compostos das Fórmulas a seguir:

[00052] Também são fornecidas composições farmacêuticas que compreendem pelo menos um composto da Fórmula (I). Tais composições farmacêuticas são descritas em maiores detalhes aqui. Estes compostos e composições podem ser utilizados nos métodos descritos aqui.

[00053] Em algumas modalidades, pelo menos um composto da Fórmula (I) e/ou uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um composto da Fórmula (I) pode ser utilizada nos métodos descritos aqui para tratamento e/ou prevenção de um câncer em que as células cancerosas podem deixar o sítio primário. Um sítio primário pode ser, por exemplo, tecido sólido (por exemplo, mama, próstata ou pâncreas) ou a corrente sanguínea.

[00054] Em adição a câncer de mama, câncer de próstata e câncer pancreático, outros exemplos de doenças infiltrantes incluem câncer de pulmão e melanoma, bem como as malignidades hematológicas (por exemplo, leucemias e mielomas). Como é utilizado aqui, o termo “tratamento” (que inclui variações tal como “tratar”) inclui para a doença ou uma complicação associada à doença. Por exemplo, uma complicação associada ao câncer pode não ter se apresentado em um indivíduo com a doença e um composto pode ser administrado para prevenir a apresentação da complicação no indivíduo. As complicações associadas a um câncer no qual as células cancerosas podem deixar o sítio primário incluem, por exemplo, metástase e infiltração de células cancerosas em outros tecidos. Por exemplo, as células de leucemia mielogênica aguda (AML) e mieloma múltiplo (MM) migram para a região endosteal da medula óssea onde as células se tornam quiescentes e são protegidas da apoptose induzida pela quimioterapia. A administração de um composto descrito aqui pode prevenir a adesão ou a migração das células cancerosas. Tal prevenção pode resultar na produção de células cancerosas mais suscetíveis ao tratamento com quimioterapia. A administração de um composto descrito aqui no contexto da prevenção pode ser feita a um indivíduo que está em risco de ocorrência de um câncer pela primeira vez ou de recorrência de um câncer. Por exemplo, embora um câncer de cérebro tal como glioblastoma multiforme seja tipicamente tratado com outro tipo de terapia (tal como radiação ou quimioterapia) para a primeira ocorrência, tal terapia geralmente não é eficiente para prevenir recorrência.

[00055] Em algumas modalidades, pelo menos um composto da Fórmula (I) e/ou uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um composto da Fórmula (I) pode ser utilizada nos métodos descritos aqui para tratamento e/ou prevenção de um câncer em que é desejado mobilizar as células cancerosas partindo de um local para dentro da corrente sanguínea e manter as células cancerosas na corrente sanguínea.

[00056] Exemplos de cânceres para tal tratamento incluem leucemias e mielomas (por exemplo, AML e MM). A mobilização de células cancerosas para dentro da corrente sanguínea partindo de um local e a manutenção das células ali podem resultar em tornar as células cancerosas mais suscetíveis ao tratamento com quimioterapia. Um exemplo de um sítio partindo do qual as células são mobilizadas é o osso. As células cancerosas podem, por exemplo, estar na circulação e então voltar para o osso. Uma vez no osso, as células cancerosas ficam protegidas da quimioterapia. Um composto descrito aqui pode ser utilizado, por exemplo, para mobilizar as células cancerosas do osso para dentro da corrente sanguínea e prevenir que as células cancerosas voltem para o osso, mantendo assim as células cancerosas na corrente sanguínea. A administração de um composto descrito aqui no contexto de prevenção pode ser realizada em um indivíduo que está em risco de ocorrência de um câncer pela primeira vez ou de recorrência de um câncer. Por exemplo, embora um câncer cerebral tal como glioblastoma multiforme seja tipicamente tratado com outro tipo de terapia (tal como radiação ou quimioterapia) para a primeira ocorrência, tal terapia geralmente não é eficiente para prevenir recorrência.

[00057] Em algumas modalidades, pelo menos um composto da Fórmula (I) e/ou uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um composto da Fórmula (I) pode ser utilizada nos métodos para a liberação das células (tais como células tronco hematopoiéticas) no sangue circulante e para aumentar a retenção das células no sangue.

[00058] Um uso do método é, por exemplo, para coleta de células tronco. As células tronco podem ser necessárias, por exemplo, após tratamento de quimioterapia em doses altas. Muitas quimioterapias suprimem a medula óssea o que interrompe a produção de certos componentes do sangue em um indivíduo. Como um resultado, o indivíduo pode desenvolver uma variedade de transtornos relacionados às células sanguíneas e a continuação da quimioterapia pode ser comprometida. Um composto descrito aqui pode ser utilizado, por exemplo, para liberar as células tronco no sangue circulante e aumentar a retenção das células tronco no sangue. O método pode incluir uma etapa adicional de coleta das células que são liberadas. Por exemplo, as células tronco liberadas podem ser coletadas. Uma variedade de técnicas é conhecida na arte para a coleta de células. Por exemplo, pode ser utilizada aférese. Um exemplo de uma célula tronco é uma célula progenitora da medula óssea. A liberação de tais células da medula óssea no sangue circulante e a retenção no mesmo possui uma variedade de usos. Por exemplo, as células progenitoras da medula óssea mobilizadas podem ser coletadas do sangue. Um uso de tais células coletadas é a obtenção de células progenitoras da medula óssea saudáveis de um indivíduo antes do tratamento do indivíduo de tal maneira que a medula óssea seja suprimida. Após o tratamento, o indivíduo pode receber um transplante de medula óssea utilizando as células progenitoras da medula óssea coletadas antes do tratamento. Isto é útil, por exemplo, quando um indivíduo precisa ser submetido a um protocolo de quimioterapia que irá suprimir a medula óssea.

[00059] Pode ser desejável tratar adicionalmente um indivíduo com pelo menos um (isto é, um ou mais) fator estimulador de colônia. Tal fator pode ser administrado, por exemplo, antes ou simultaneamente à administração de pelo menos um dos compostos descritos anteriormente. Quando a administração for simultânea, a combinação pode ser administrada partindo de um único recipiente ou dois (ou mais) recipientes separados. Um exemplo de um fator estimulador de colônia adequado é o fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSF). O G- CSF induz a medula óssea a crescer e produzir mais células tronco. Um composto descrito aqui ajuda na liberação de células tronco no sangue circulante. As células tronco produzidas na medula óssea e liberadas no sangue circulante, como um resultado da combinação da administração (separadamente ou junta) de um composto descrito aqui e G-CSF, podem ser coletadas como descrito anteriormente. Tais células tronco coletadas podem ser, por exemplo, administradas ao indivíduo após a quimioterapia. As células tronco voltam para a medula óssea e produzem células sanguíneas. A aplicação de um composto descrito aqui para a mobilização e a coleta de células progenitoras da medula óssea saudáveis da medula óssea tratada com G-CSF fornece células úteis, por exemplo, para transplante de medula óssea.

[00060] Em algumas modalidades, pelo menos um composto da Fórmula (I) e/ou uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um composto da Fórmula (i) pode ser utilizada nos métodos descritos aqui para tratamento e/ou prevenção de metástase de tumor. Em algumas modalidades, a metástase de tumor resulta de câncer pancreático. Em algumas modalidades, a metástase de tumor resulta de câncer de próstata. Em algumas modalidades, a metástase de tumor resulta de câncer pancreático. Em algumas modalidades, a metástase de tumor resulta de câncer de mama. Em algumas modalidades, pelo menos um agente quimioterapêutico adicional tal como gemcitabina é administrado ao indivíduo.

[00061] Em algumas modalidades, pelo menos um composto da Fórmula (I) e/ou uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um composto da Fórmula (I) pode ser utilizada em métodos para tratamento e/ou prevenção de uma doença inflamatória em que a adesão ou a migração das células ocorre na doença.

[00062] Exemplos de doenças inflamatórias incluem transtornos inflamatórios da pele tais como dermatite atópica e psoríase. O tratamento pode reduzir (parcialmente ou totalmente) a doença ou uma complicação associada à mesma, tal como dor. O tratamento pode ser utilizado em associação a uma ou mais outras terapias para tal doença inflamatória ou uma complicação associada à mesma.

[00063] Em algumas modalidades, um composto da Fórmula (I) e/ou uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um composto da Fórmula (I) pode ser utilizada para o tratamento de pelo menos uma das doenças, dos transtornos e dos estados de saúde descritos aqui ou para a preparação ou manufatura de um medicamento para uso no tratamento de pelo menos uma das doenças, dos transtornos e/ou dos estados de saúde descritos aqui. Cada um destes métodos e usos é descrito em maiores detalhes.

Definições

[00064] Sempre que um termo no Relatório Descritivo for identificado como uma faixa (por exemplo, C1-4 alquila), a faixa divulga independentemente e inclui cada elemento da faixa. Como um exemplo não limitante, C1-4 alquilas incluem, independentemente, C1 alquilas, C2 alquilas, C3 alquilas e C4 alquilas.

[00065] O termo “pelo menos um” refere-se a um ou mais, tal como um, dois etc. Por exemplo, o termo “pelo menos um C1-4 alquila” refere- se a um ou mais grupos C1-4 alquila, tal como um grupo C1-4 alquila, dois grupos C1-4 alquila etc.

[00066] O termo “alquila” inclui grupos hidrocarboneto primários, secundários e terciários de cadeia reta, ramificada e cíclica (também identificada como cicloalquila) saturados. Exemplos não limitantes de grupos alquila incluem metila, etila, propila, isopropila, ciclopropila, butila, secbutila, isobutila, tertbutila, ciclobutila, 1-metilbutila, 1,1- dimetilpropila, pentila, ciclopentila, isopentila, neopentila, ciclopentila, hexila, isohexila e ciclohexila. A não ser que seja citado especificamente o contrário no Relatório Descritivo, um grupo alquila pode ser opcionalmente substituído.

[00067] O termo “alquenila” inclui grupos hidrocarboneto de cadeia reta, ramificada e cíclica que compreendem pelo menos uma ligação dupla. A ligação dupla de um grupo alquenila pode ser não conjugada ou conjugada com outro grupo insaturado. Os exemplos não limitantes de grupos alquenila incluem vinila, alila, butenila, pentenila, hexenila, butadienila, pentadienila, hexadienila, 2-etilhexenila e ciclopent-1-en-1- ila. A não ser que seja citado especificamente o contrário no Relatório Descritivo, um grupo alquenila pode ser opcionalmente substituído.

[00068] O termo “alquinila” inclui grupos hidrocarboneto de cadeia reta e ramificada que compreendem pelo menos uma ligação tripla. A ligação tripla de um grupo alquinila pode ser não conjugada ou conjugada a outro grupo insaturado. Exemplos não limitantes de grupos alquinila incluem etinila, propinila, butinila, pentinila e hexinila. A não ser que seja citado especificamente o contrário no Relatório Descritivo, um grupo alquinila pode ser opcionalmente substituído.

[00069] O termo “arila” inclui grupo de sistema de anel de hidrocarboneto que compreende 6 até 18 átomos de carbono no anel e pelo menos um anel aromático. O grupo arila pode ser um sistema de anel monocíclico, bicíclico, tricíclico ou tetracíclico, que pode incluir sistemas de anel fundidos ou em ponte. Exemplos não limitantes de grupos arila incluem grupos arila derivados de aceantrileno, acenaftileno, acefenantrileno, antraceno, azuleno, benzeno, criseno, fluoranteno, fluoreno, as-indaceno, s-indaceno, indano, indeno, naftaleno, fenaleno, fenantreno, pleiadeno, pireno e trifenileno. A não ser que seja citado especificamente o contrário no Relatório Descritivo, um grupo arila pode ser opcionalmente substituído.

[00070] O termo “arilalquila” ou “aralquila” inclui grupos arila, como é descrito aqui, anexados ao grupamento molecular original através de um grupo alquila, como é definido aqui. Exemplos não limitantes de um grupo arilalquila ou aralquila incluem benzila, fenetila e difenilmetila. A não ser que seja citado especificamente o contrário no Relatório Descritivo, um grupo arilalquila ou aralquila pode ser opcionalmente substituído.

[00071] O termo “cicloalquila” ou “anel carbocíclico” inclui grupo hidrocarboneto monocíclico ou policíclico saturado, que pode incluir sistemas de anel fundidos ou em ponte. Exemplos não limitantes de um grupo cicloalquila incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, cicloheptila, ciclooctila, adamantila e norbornila. A não ser que seja especificamente citado o contrário no Relatório Descritivo, um grupo cicloalquila pode ser opcionalmente substituído.

[00072] O termo “antagonista de E-selectina” inclui inibidores de E- selectina apenas, bem como inibidores de E-selectina e de P-selectina ou L-selectina e inibidores de E-selectina, P-selectina e L-selectina.

[00073] O termo “fundido(a)” inclui qualquer estrutura de anel descrita aqui que está fundida a uma estrutura de anel existente. Quando o anel fundido for um anel heterociclila ou um anel heteroarila, qualquer átomo de carbono na estrutura de anel existente que se torna parte do anel heterociclila fundido ou do anel heteroarila fundido pode ser substituído por um átomo de nitrogênio.

[00074] O termo “halo” ou “halogênio” inclui fluoro, cloro, bromo e iodo.

[00075] O termo “haloalquila” inclui grupos alquila, como são definidos aqui, substituídos por pelo menos um halogênio, como é definido aqui. Os exemplos não limitantes incluem trifluorometila, difluorometila, triclorometila, 2,2,2-trifluoroetila, 1,2-difluoroetila, 3- bromo-2-fluoropropila e 1,2-dibromoetila. Um “fluoroalquila” é um haloalquila que é substituído por pelo menos um grupo fluoro. A não ser que seja citado especificamente o contrário no Relatório Descritivo, um grupo haloalquila pode ser opcionalmente substituído.

[00076] O termo “haloalquenila” inclui grupos alquenila, como são definidos aqui, substituídos por pelo menos um halogênio, como é definido aqui. Os exemplos não limitantes incluem fluoroetenila, 1,2- difluoroetenila, 3-bromo-2-fluoropropenila e 1,2-dibromoetenila. Um “fluoroalquenila” é um haloalquenila substituído por pelo menos um grupo fluoro. A não ser que seja citado especificamente o contrário no Relatório Descritivo, um grupo haloalquenila pode ser opcionalmente substituído.

[00077] O termo “haloalquinila” inclui grupos alquinila, como são definidos aqui, substituídos por pelo menos um halogênio, como é definido aqui. Os exemplos não limitantes incluem fluoroetinila, 1,2- difluoroetinila, 3-bromo-2-fluoropropinila e 1,2-dibromoetinila. Um “fluoroalquinila” é um haloalquinila substituído por pelo menos um grupo fluoro. A não ser que seja citado especificamente o contrário no Relatório Descritivo, um grupo haloalquinila pode ser opcionalmente substituído.

[00078] O termo “heterociclila” ou “anel heterocíclico” inclui grupos de anel não aromáticos saturados ou parcialmente insaturados de 3 até 18 membros que compreendem 2 até 12 átomos de carbono no anel e 1 até 6 heteroátomos no anel cada um independentemente selecionado de N, O e S. A não ser que seja citado especificamente o contrário no Relatório Descritivo, os grupos heterociclila podem ser um sistema de anel monocíclico, bicíclico, tricíclico ou tetracíclico, que pode incluir sistemas de anel fundidos ou em ponte; e os átomos de nitrogênio, carbono ou enxofre no grupo heterociclia podem ser opcionalmente oxidados; o átomo de nitrogênio pode ser opcionalmente quaternizado; e o grupo heterociclila pode ser parcialmente ou completamente saturado. Os exemplos não limitantes incluem dioxolanila, tienil[1,3]ditianila, decahidroisoquinolila, imidazolinila, imidazolidinila. isotiazolidinila, isoxazolidinila, morfolinila, octahidroindolila, octahidroisoindolila, 2- oxopiperazinila, 2-oxopiperidinila, 2-oxopirrolidinila, oxazolidinila, piperidinila, piperazinila, 4-piperidonila, pirrolidinila, pirazolidinila, quinuclidinila, tiazolidinila, tetrahidrofurila, tritianila, tetrahidropiranila, tiomorfolinila, tiamorfolinila, 1-oxo-tiomorfolinila e 1,1-dioxo- tiomorfolinila. A não ser que seja citado especificamente o contrário no Relatório Descritivo, um grupo heterociclila pode ser opcionalmente substituído.

[00079] O termo “heteroarila” inclui grupos de anel de 5 até 14 membros que compreendem 1 até 13 átomos de carbono no anel e 1 até 6 heteroátomos no anel cada um independentemente selecionado de N, O e S e pelo menos um anel aromático. A não ser que seja citado especificamente o contrário no Relatório Descritivo, o grupo heteroarila pode ser um sistema de anel monocíclico, bicíclico, tricíclico ou tetracíclico, que pode incluir sistemas de anel fundidos ou em ponte; e os átomos de nitrogênio, carbono ou enxofre no radical heteroarila podem ser opcionalmente oxidados; o átomo de nitrogênio pode ser opcionalmente quaternizado. Os exemplos não limitantes incluem azepinila, acridinila, benzimidazolila, benzotiazolila, benzindolila, benzodioxolila, benzofuranila, benzooxazolila, benzotiazolila, benzotiadiazolila, benzo[b][1,4]dioxepinila, 1,4-benzodioxanila, benzonaftofuranila, benzoxazolila, benzodioxolila, benzodioxinila, benzopiranila, benzopiranonila, benzofuranila, benzofuranonila, benzotienila (benzotiofenila), benzotriazolila, benzo[4,6]imidazo[1,2- a]piridinila, carbazolila, cinolinila, dibenzofuranila, dibenzotiofenila, furanila, furanonila, isotiazolila, imidazolila, indazolila, indolila, indazolila, isoindolila, indolinila, isoindolinila, isoquinolila, indolizinila, isoxazolila, naftiridinila, oxadiazolila, 2-oxoazepinila, oxazolila, oxiranila, 1-oxidopiridinila, 1-oxidopirimidinila, 1-oxidopirazinila, 1- oxidopiridazinila, 1-fenil-1H-pirrolila, fenazinila, fenotiazinila, fenoxazinila, ftalazinila, pteridinila, purinila, pirrolila, pirazolila, piridinila, pirazinila, pirimidinila, piridazinila, quinazolinila, quinoxalinila, quinolinila, quinuclidinila, isoquinolinila, tetrahidroquinolinila, tiazolila, tiadiazolila, triazolila, tetrazolila, triazinila e tiofenila (isto é, tienila). A não ser que seja citado especificamente o contrário no Relatório Descritivo, um grupo heteroarila pode ser opcionalmente substituído.

[00080] O termo “sais farmaceuticamente aceitáveis” inclui tanto ácidos de adição ácida quanto básica. Os exemplos não limitantes de sais de adição ácida farmaceuticamente aceitáveis incluem cloretos, brometos, sulfatos, nitratos, fosfatos, sulfonatos, metano sulfonatos, formatos, tartaratos, maleatos, citratos, benzoatos, salicilatos e ascorbatos. Os exemplos não limitantes de sais de adição básica farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de sódio, potássio, lítio, amônio (substituído e não substituído), cálcio, magnésio, ferro, zinco, cobre, manganês e alumínio. Os sais farmaceuticamente aceitáveis podem, por exemplo, ser obtidos utilizando procedimentos padronizados bem conhecidos no campo dos produtos farmacêuticos.

[00081] O termo “pró-fármaco” inclui compostos que podem ser convertidos, por exemplo, sob condições fisiológicas ou através de solvólise, em um composto biologicamente ativo descrito aqui. Assim, o termo “pró-fármaco” inclui precursores metabólicos dos compostos descritos aqui que são farmaceuticamente aceitáveis. Uma discussão sobre pró-fármacos pode ser encontrada, por exemplo, em Higuchi, T. e outros, “Pro-drugs as Novel Delivery Systems”, A.C.S, Symposium Series, Vol, 14 e em Bioreversibie Carriers in Drug Design, ed, Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987. O termo “pró-fármaco” também inclui carreadores ligados de forma covalente que liberam o(s) composto(s) ativo(s) que é(são) descrito(s) aqui in vivo quando tal pró-fármaco for administrado a um indivíduo. Os exemplos não limitantes de pró-fármacos incluem derivados de éster e amida de grupos funcionais hidróxi, carbóxi, mercapto e amino nos compostos descritos aqui.

[00082] O termo “substituído” inclui a situação em que, em qualquer um dos grupos anteriores, pelo menos um átomo de hidrogênio é substituído por um átomo sem ser de hidrogênio tal como, por exemplo, um átomo de halogênio tal como F, CI, Br e I; um átomo de oxigênio em grupos tais como grupos hidroxila, grupos alcóxi e grupos éster; um átomo de enxofre em grupos tais como grupos tiol, grupos tioalquila, grupos sulfona, grupos sulfonila e grupos sulfóxido; um átomo de nitrogênio em grupos tais como aminas, amidas, alquilaminas, dialquilaminas, arilaminas, alquilarilaminas, diarilaminas, N-óxidos, imidas e enaminas; um átomo de silício em grupos tais como grupos trialquilsilila, grupos dialquilarilsilila, grupos alquildiarilsilila e grupos triarilsilila; e outros heteroátomos em vários outros grupos. “Substituído” também inclui a situação em que, em qualquer um dos grupos anteriores, pelo menos um átomo de hidrogênio é substituído por uma ligação de ordem superior (por exemplo, uma ligação dupla ou tripla) a um heteroátomo tal como oxigênio nos grupos oxo, carbonila, carboxila e éster; e nitrogênio em grupos tais como iminas, oximas, hidrazonas e nitrilas.

[00083] O termo “tioalquila” inclui grupos -SRa em que Ra é selecionado de grupos alquila, alquenila e alquinila, como é definido aqui. A não ser que seja citado especificamente o contrário no Relatório Descritivo, um grupo tioalquila pode ser opcionalmente substituído.

[00084] A presente divulgação inclui dentro de seu âmbito todos os isômeros geométricos possíveis, por exemplo, isômeros Z e E (isômeros cis e trans), dos compostos bem como todos os isômeros ópticos possíveis, por exemplo, diastereoisômeros e enanciômeros, dos compostos. Além disso, a presente divulgação inclui em seu âmbito tanto os isômeros individuais quanto quaisquer misturas dos mesmos, por exemplo, misturas racêmicas. Os isômeros individuais podem ser obtidos utilizando as formas isoméricas correspondentes do material de partida ou podem ser separados após a preparação do composto final de acordo com métodos de separação convencionais. Para a separação de isômeros ópticos, por exemplo, enanciômeros, da mistura dos mesmos, podem ser utilizados métodos de resolução convencionais, por exemplo, cristalização fracionada.

[00085] A presente divulgação inclui dentro de seu âmbito todos os tautômeros possíveis. Além disso, a presente divulgação inclui em seu âmbito tanto tautômeros individuais quanto quaisquer misturas dos mesmos.

Procedimentos de Síntese dos Compostos

[00086] Os compostos da Fórmula (I) podem ser preparados de acordo com os Esquemas de Reação Geral I e II a seguir. É entendido que um perito comum na arte pode ser capaz de produzir estes compostos através de métodos similares ou através da combinação de outros métodos conhecidos por um perito comum na arte. É também entendido que um perito comum na arte seria capaz de produzir, de uma maneira similar à descrita a seguir, outros compostos da Fórmula (I) não ilustrados especificamente aqui através da utilização de componentes de partida apropriados e da modificação dos parâmetros da síntese quando necessário. Em geral, os componentes de partida podem ser obtidos de fontes tais como Sigma Aldrich, Lancaster Synthesis, Inc., Maybridge, Matrix Scientific, TCI e Fluorochem USA etc. e/ou sintetizados de acordo com fontes conhecidas pelos peritos comuns na arte (ver, por exemplo, Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5a edição (Wiley, December 2000)) e/ou preparados como é descrito aqui. Esquema de Reação Geral I

Desproteção Redução Oxidação Redução Desproteção

[00087] A desproteção do composto 1 fornece hidroximetil aldeído II bromado. A aminação redutora com uma ciclama adequadamente triprotegida gera o composto IV. A oxidação fornece o aldeído V que pode ser acoplado ao composto VI (WO 2013/096926) através de aminação redutora. A desproteção fornece então um composto da invenção.

[00088] Alternativamente, o brometo regioisomérico pode ser preparado de acordo com o Esquema II. A oxidação do composto I fornece o aldeído IX. A aminação redutora com uma ciclama adequadamente triprotegida fornece o intermediário X. A desproteção fornece XI que pode ser acoplado ao composto VI através de aminação redutora para fornecer XIII. A desproteção fornece então um composto da invenção. Esquema de Reação Geral II

Oxidação Redução Desproteção Redução Desproteção

[00089] Os peritos comuns na arte entenderão que, nos processos descritos aqui, pode ser necessário proteger os grupos funcionais dos compostos intermediários através de pelo menos um grupo protetor adequado. Os exemplos não limitantes de tais grupos funcionais incluem grupos hidroxila, grupos aldeído, grupos amino, grupos mercapto e grupos do ácido carboxílico. Os exemplos não limitantes de grupos protetores adequados para os grupos hidróxi incluem grupos trialquilsilila e diarilalquilsilila (por exemplo, t-butildimetilsilila, t- butildifenilsilila ou trimetilsilila), tetrahidropiranila e benzila. Os exemplos não limitantes de grupos protetores adequados para grupos aldeído incluem 1,3-dioxanos e 1,3-dioxolanos. Os exemplos não limitantes de grupos protetores adequados para amino, amidino e guanidino incluem grupos t-butoxicarbonila, benziloxicarbonila, aliloxicarbonila e trifluoracetila. Os exemplos não limitantes de grupos protetores adequados for mercapto incluem grupos -C(O)-R” (em que R” é alquila, arila ou arilalquila), p-metóxi benzila e tritila. Os exemplos não limitantes de grupos protetores adequados para ácido carboxílico incluem alquil, aril e arilalquil ésteres. Os grupos protetores podem ser adicionados ou removidos de acordo com técnicas padronizadas, que são conhecidas por um perito comum na arte e que são descritas aqui. O uso de grupos protetores é, por exemplo, descrito em detalhes em Green, T.W. e P.G.M. Wutz, Protective Groups in Organic Synthesis (1999), 3a Ed., Wiley. Como seria considerado por um perito comum na arte, o grupo protetor também pode ser uma resina polimérica tal como uma resina Wang, uma resina Rink ou uma resina de 2-clorotritil-cloreto.

Métodos para Caracterização Compostos Heterobifuncionais

[0090] A atividade biológica de um composto heterobifuncional descrito aqui pode ser determinada, por exemplo, através da realização de pelo menos um estudo in vitro e/ou in vivo praticado de forma rotineira na arte e descrito aqui ou na arte. Ensaios in vitro incluem sem limitação ensaios de ligação, ensaios imunológicos, ensaios de ligação competitiva e ensaios de atividade à base de células.

[0091] Um ensaio de inibição pode ser utilizado para verificar antagonistas de E-selectina. Por exemplo, um ensaio pode ser realizado para caracterizar a capacidade de um composto descrito aqui de inibir (isto é, reduzir, bloquear, diminuir ou prevenir de uma maneira estatisticamente ou biologicamente significativa) a interação da E- selectina com sLea ou sLex. O ensaio de inibição pode ser um ensaio de ligação competitiva, que permite a determinação de valores de IC50. Com a finalidade de exemplo, uma quimera de E-selectina/Ig pode ser imobilizada sobre uma matriz (por exemplo, uma placa de vários poços, que pode ser feita de um polímero, tal como poliestireno; um tubo de ensaio e similares); uma composição pode ser adicionada para reduzir a ligação não específica (por exemplo, uma composição que compreende leite em pó desnatado ou albumina do soro bovino ou outro tampão de bloqueio utilizado de forma rotineira por um perito na arte); a E-selectina imobilizada pode ser colocada em contato com o composto candidato na presença de sLea que compreende um grupo repórter sob condições e ao longo de um período de tempo suficiente para permitir que sLea se ligue à E-selectina imobilizada; a E-selectina imobilizada pode ser lavada; e a quantidade de sLea ligada à E-selectina imobilizada pode ser detectada. Variações de tais etapas podem ser realizadas facilmente e de forma rotineira por um perito comum na arte.

[0092] Um ensaio de inibição pode ser utilizado para verificar o antagonismo da quimiotaxia mediada por CXCR4. Por exemplo, pode ser realizado um ensaio para medir a capacidade de um antagonista de CXCR4 glicomimético de inibir a migração de células CCRF-CEM, que expressam CXCR4 sobre suas superfícies celulares, através de uma membrana em direção ao ligante CXCL12 de CXCR4 (SDF-1α). Com a finalidade de exemplo, as células CCRF-CEM são linfoblastos T humanos que expressam CXCR4 sobre a superfície celular. As células podem ser marcadas com 3 μM de Calcein AM para possibilitar a detecção através de fluorescência. As células podem ser tratadas com um antagonista de CXCR4 e colocadas dentro da câmara superior de um inserto transwell. Os transwells podem ser colocados dentro dos poços de uma placa de 24 poços com cada poço contendo 600 μL de RPMI 1640 mais 2% de FBS e 50 ng/mL de CXCL12 (SDF1α). Pode ser permitido que as células migrem através da membrana da câmara superior para dentro da câmara inferior durante 3 horas a 37°C em 5% de CO2. Os insertos transwell podem ser removidos da placa de 24 poços e a fluorescência nas câmaras inferiores medidas utilizando um Molecular Devices FlexStation 3 com um comprimento de onda de excitação de 485 nm e um comprimento de onda de emissão de 538 nm.

[0093] Alternativamente, um ensaio pode ser utilizado para medir a capacidade de um antagonista de CXCR4 glicomimético de inibir a ligação de CXCL12 (SDF-1α) às células CHO que foram engenheiradas geneticamente para expressarem CXCR4 sobre a superfície celular. Um perito na arte pode ativar CXCR4 através da ligação do ligante (CXCL12), fazendo com que Gi se dissocie do complexo de CXCR4. O CXCR4 ativado pode se ligar à adenilil ciclase, inativando assim a mesma, resultando em níveis reduzidos de cAMP intracelular. O cAMP intracelular é geralmente baixo, de forma que a redução do baixo nível de cAMP por um receptor acoplado a Gi será difícil de detectar. A forscolina é adicionada às células CHO para ativar diretamente a adenilil ciclase (contornando todos os GPCRs), aumentando, assim, o nível de cAMP na célula, de forma que a resposta de Gi possa ser facilmente observada. A interação de CXCL12 com CXCR4 diminui o nível intracelular de cAMP e a inibição da interação de CXCL12 com CXCR4 por um antagonista de CXCR4 aumenta o nível de cAMP intracelular, que é medido por luminescência.

[0094] Alternativamente, um perito na arte pode utilizar um ensaio para medir a capacidade de um antagonista de CXCR4 glicomimético de bloquear a ligação de um anticorpo anti-CXCR4 às células Jurkat, que expressam CXCR4 sobre a superfície celular. As células Jurkat podem ser tratadas com um antagonista de CXCR4 seguido por um anticorpo anti-CXCR4 conjugado com ficoeritrina. Pode ser permitido que o anticorpo se ligue às células durante 1 hora a 4°C. As células podem ser lavadas e a ligação do anticorpo anti-CXCR4-PE às células pode ser avaliada por citometria de fluxo.

[0095] As condições para um ensaio particular incluem temperatura, tampões (que incluem sais, cátions, meios) e outros componentes que mantêm a integridade de qualquer célula utilizada no ensaio e o composto, com o qual um perito comum na arte estará familiarizado e/ou que pode ser facilmente determinado. Um perito comum na arte também considera rapidamente que controles apropriados podem ser planejados e incluídos quando são realizados os métodos in vitro e métodos in vivo descritos aqui.

[0096] A fonte de um composto que é caracterizado por pelo menos um ensaio e técnicas descritas aqui e na arte pode ser uma amostra biológica que é obtida de um indivíduo que foi tratado com o composto. As células que podem ser utilizadas no ensaio também podem ser fornecidas em uma amostra biológica. Uma “amostra biológica” pode incluir uma amostra proveniente de um indivíduo e pode ser uma amostra de sangue (partindo da qual pode ser preparado soro ou plasma), uma amostra de biópsia, um ou mais fluidos corporais (por exemplo, lavagem pulmonar, ascitos, lavagens de mucosa, fluido sinovial, urina), medula óssea, nódulos linfáticos, explante de tecido, cultura de órgão ou qualquer outra preparação de tecido ou célula proveniente do indivíduo ou uma fonte biológica. Uma amostra biológica pode incluir ainda uma preparação de tecido ou célula na qual a integridade morfológica ou o estado físico foi abalado, por exemplo, através de dissecação, dissociação, solubilização, fracionamento, homogeneização, extração bioquímica ou química, pulverização, liofilização, tratamento com ultrassom ou quaisquer outros meios para processamento de uma amostra derivada de um indivíduo ou de uma fonte biológica. Em algumas modalidades, o indivíduo ou a fonte biológica pode ser um ser humano ou um animal não humano, uma cultura de células primária (por exemplo, células imunológicas) ou uma linhagem de células adaptada à cultura, incluindo, mas não limitada a, linhagens de células geneticamente engenhadas que podem conter sequências de ácido nucleico integradas no cromossomo ou recombinantes epissomais, linhagens de células imortalizadas ou que podem ser imortalizadas, linhagens de células híbridas de células somáticas, linhagens de células diferenciadas ou que podem ser diferenciadas, linhagens de células transformadas e similares.

[0097] Como é descrito aqui, os métodos para caracterização de inibidores heterobifuncionais incluem estudos em modelos de animais. Os exemplos não limitantes de modelos de animais para cânceres líquidos utilizados na arte incluem mieloma múltiplo (ver, por exemplo, DeWeerdt, Nature 480:S38-S39 (15 de dezembro de 2011) doi:10.1038/480S38a; Publicado online em 14 de dezembro de 2011; Mitsiades e outros, Clin. Cancer Res. 2009 15:1210021 (2009)); leucemia mieloide aguda (AML) (Zuber e outros, Genes Dev. 2009 April 1; 23(7): 877-889). Os modelos de animais para leucemia linfoblástica aguda (ALL) foram utilizados por peritos comuns na arte durante mais de duas décadas. Inúmeros exemplos de modelos de animais para cânceres de tumores sólidos são utilizados de forma rotineira e são bem conhecidos pelos peritos comuns na arte.

[0098] Como é entendido por um perito comum na arte da medicina, os termos, “tratar” e “tratamento”, incluem o controle médico de uma doença, um transtorno ou um estado de saúde de uma pessoa (isto é, paciente, indivíduo) (ver, por exemplo, Stedman’s Medical Dictionary). Em geral, uma dose e um regime de tratamento apropriados fornecem pelo menos um dos compostos da presente divulgação em uma quantidade suficiente para fornecer benefício terapêutico e/ou profilático. Tanto para o tratamento terapêutico quanto profilático ou para medidas preventivas, o benefício terapêutico e/ou profilático inclui, por exemplo, um melhor resultado clínico, em que o objetivo é prevenir ou reduzir ou retardar (diminuir) uma alteração ou um transtorno fisiológico indesejado ou para prevenir ou reduzir ou retardar (diminuir) a expansão da gravidade de tal transtorno. Como é discutido aqui, os resultados clínicos benéficos ou desejados provenientes do tratamento de um indivíduo incluem, mas sem limitação, abatimento, redução ou alívio dos sintomas que resultam ou estão associados à doença, ao estado de saúde ou ao transtorno que será tratado; ocorrência reduzida dos sintomas; melhor qualidade de vida; condição livre de doença mais longa (isto é, diminuindo a probabilidade ou a propensão de um indivíduo apresentar os sintomas com base em qual diagnóstico de uma doença é feito); diminuição da extensão da doença; condição de doença estabilizada (isto é, sem piora); atraso ou retardo de progressão da doença; melhora ou paliação da condição de doença; e remissão (parcial ou total), detectável ou não detectável; e/ou sobrevida total. “Tratamento” pode incluir o prolongamento da sobrevida quando comparada à sobrevida esperada se um indivíduo não estivesse recebendo o tratamento. Os indivíduos que necessitam de tratamento incluem aqueles que já têm a doença, o estado de saúde ou o transtorno bem como indivíduos propensos a ter ou em risco de desenvolver a doença, o estado de saúde ou o transtorno e aqueles nos quais a doença, o estado de saúde ou o transtorno deve ser prevenido (isto é, diminuindo a probabilidade de ocorrência da doença, do transtorno ou do estado de saúde).

[0099] Em algumas modalidades dos métodos descritos aqui, o indivíduo é um ser humano. Em algumas modalidades dos métodos descritos aqui, o indivíduo é um animal não humano. Um indivíduo que necessita de tratamento como é descrito aqui pode exibir pelo menos um sintoma ou uma sequela da doença, do transtorno ou do estado de saúde descrito aqui ou pode estar em risco de desenvolver a doença, o transtorno ou o estado de saúde. Os animais não humanos que podem ser tratados incluem mamíferos, por exemplo, primatas não humanos (por exemplo, macaco, chimpanzé, gorila e similares), roedores (por exemplo, ratos, camundongos, gerbils, hamsters, furões, coelhos), lagomorfos, suínos (por exemplo, porco, miniporco), equinos, caninos, felinos, bovinos e outros animais domésticos, de fazenda e de zoológico.

[00100] A eficácia dos compostos da presente divulgação no tratamento e/ou na prevenção de uma doença, um transtorno ou um estado de saúde descrito aqui pode ser facilmente determinada por um perito comum nas artes médica e clínica. A determinação e o ajuste de um regime de dosagem apropriado (por exemplo, ajuste da quantidade de composto por dose e/ou número de doses e frequência de dosagem) também podem ser facilmente realizados por um perito comum nas artes médica e clínica. Uma ou qualquer combinação de métodos de diagnóstico, incluindo exame físico, avaliação e monitoramento de sintomas clínicos e realização de testes analíticos e métodos descritos aqui, pode ser utilizada para o monitoramento do estado de saúde do indivíduo.

Composições Farmacêuticas e Métodos de Utilização de Composições Farmacêuticas

[00101] Também são fornecidas aqui composições farmacêuticas que compreendem pelo menos um composto da Fórmula (I). Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende ainda pelo menos um ingrediente farmaceuticamente aceitável adicional.

[00102] Nas formas de dosagem farmacêuticas, qualquer um ou mais dos compostos da presente divulgação podem ser administrados na forma de um derivado farmaceuticamente aceitável, tal como um sal e/ou este/estes também pode(m) ser utilizado(s) isoladamente e/ou em associação apropriada, bem como em combinação, com outros compostos farmaceuticamente ativos.

[00103] Uma quantidade eficiente ou uma quantidade terapeuticamente eficiente refere-se a uma quantidade de um composto da presente divulgação ou uma composição que compreende pelo menos tal composto que, quando administrado a um indivíduo, na forma de uma dose única ou como parte de uma série de doses, é eficiente para produzir pelo menos um efeito terapêutico. As doses ótimas podem geralmente ser determinadas utilizando modelos experimentais e/ou testes clínicos. O planejamento e a execução de estudos pré-clínicos e clínicos para cada um dos compostos terapêuticos (incluindo quando administrados para benefício profilático) descritos aqui estão bem dentro da perícia de um perito comum na arte relevante. A dose ótima de um composto terapêutico pode depender da massa corporal, do peso e/ou do volume de sangue do indivíduo. Em geral, a quantidade de pelo menos um composto da Fórmula (I) como é descrito aqui, que está presente em uma dose, pode variar de aproximadamente 0,01 μg até aproximadamente 1000 μg por kg do peso do indivíduo. A dose mínima que é suficiente para fornecer terapia eficiente pode ser utilizada em algumas modalidades. Os indivíduos podem geralmente ser monitorados em relação à efetividade terapêutica utilizando ensaios adequados para a doença ou o estado de saúde que será tratado ou prevenido, cujos ensaios serão familiares aos peritos comuns na arte e são descritos aqui. O nível de um composto que é administrado a um indivíduo pode ser monitorado através da determinação do nível do composto (ou de um metabólito do composto) em um fluido biológico, por exemplo, no sangue, na fração do sangue (por exemplo, soro) e/ou na urina e/ou outra amostra biológica do indivíduo. Qualquer método praticado na arte para detectar o composto ou metabólito do mesmo, pode ser utilizado para medir o nível do composto durante o curso de um regime terapêutico.

[00104] A dose de um composto descrito aqui pode depender do estado de saúde do indivíduo, ou seja, do estágio da doença, da gravidade dos sintomas causados pela doença, pelo estado de saúde geral, bem como da idade, do gênero e do peso e de outros fatores evidentes para um perito comum na arte da medicina. Similarmente, a dose do composto terapêutico para o tratamento de uma doença ou um transtorno pode ser determinada de acordo com parâmetros entendidos por um perito comum na arte da medicina.

[00105] As composições farmacêuticas podem ser administradas de qualquer maneira apropriada para a doença ou o transtorno que será tratado como é determinado pelos peritos comuns nas artes médicas. Uma dose apropriada e uma duração e uma frequência de administração adequadas serão determinadas por fatores tais como aqueles discutidos aqui, incluindo o estado de saúde do paciente, o tipo e a gravidade da doença do paciente, a forma particular do ingrediente ativo e o método de administração. Em geral, uma dose apropriada (ou dose eficiente) e o regime de tratamento fornecem a(s) composição(ões) farmacêutica(s) que é(são) descrita(s) aqui em uma quantidade suficiente para fornecer benefício terapêutico e/ou profilático (por exemplo, um melhor resultado clínico, tal como remissões completas ou parciais mais frequentes ou sobrevida livre de doença e/ou total mais longa ou uma redução da gravidade dos sintomas ou outro benefício que é descrito anteriormente em detalhes).

[00106] As composições farmacêuticas descritas aqui podem ser administradas a um indivíduo que necessita das mesmas através de uma de várias rotas que fornecem eficientemente uma quantidade eficiente do composto. As rotas de administração adequadas não limitantes incluem administração tópica, oral, nasal, intratecal, entérica, bucal, sublingual, transdermal, retal, vaginal, intraocular, subconjuntival, sublingual e parenteral, incluindo injeção e/ou infusão subcutânea, intravenosa, intramuscular, intraesternal, intracavernosa, intrameatal e intrauretral.

[00107] A composição farmacêutica descrita aqui pode ser soluções, suspensões ou emulsões aquosas esterilizadas ou não aquosas esterilizadas e pode adicionalmente compreender pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável (isto é, um material não tóxico que não interfere na atividade do ingrediente ativo). Tais composições podem estar na forma de um sólido, um líquido ou um gás (aerossol). Alternativamente, as composições descritas aqui podem ser formuladas como um produto liofilizado ou os compostos descritos aqui podem ser encapsulados dentro de lipossomos utilizando tecnologia conhecida na arte. As composições farmacêuticas podem compreender ainda pelo menos um ingrediente farmaceuticamente aceitável adicional, que pode ser biologicamente ativo ou inativo. Os exemplos não limitantes de tais ingredientes incluem tampões (por exemplo, solução salina tamponada neutra ou solução salina tamponada com fosfato), carboidratos (por exemplo, glicose, manose, sacarose ou dextrans), manitol, proteínas, polipeptídeos, aminoácidos (por exemplo, glicina), antioxidantes, agentes quelantes (por exemplo, EDTA e glutationa), estabilizantes, corantes, agentes aromatizantes, agentes de suspensão e conservantes.

[00108] Qualquer excipiente ou carreador adequado conhecido pelos peritos comuns na arte para uso nas composições farmacêuticas pode ser empregado nas composições descritas aqui. Os excipientes para uso terapêutico são bem conhecidos e são descritos, por exemplo, em Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Gennaro, 21a Ed. Mack Pub. Co., Easton, PA (2005)). Em geral, o tipo de excipiente é selecionado com base no modo de administração, bem como na composição química do(s) ingrediente(s) ativo(s). As composições farmacêuticas podem ser formuladas para o modo particular de administração. Para administração parenteral, as composições farmacêuticas podem compreender ainda água, solução salina, álcoois, gorduras, ceras e tampões. Para administração oral, as composições farmacêuticas podem compreender ainda pelo menos um ingrediente selecionado, por exemplo, de qualquer um dos excipientes mencionados anteriormente, excipientes e carreadores sólidos, tais como manitol, lactose, amido, estearato de magnésio, sacarina sódica, talco, celulose, caulim, glicerina, dextrinas de amido, alginato de sódio, carboximetilcelulose, etil celulose, glicose, sacarose e carbonato de magnésio.

[00109] As composições farmacêuticas (por exemplo, para administração oral ou fornecimento através de injeção) podem estar na forma de um líquido. Uma composição farmacêutica líquida pode incluir, por exemplo, pelo menos um dos seguintes: um diluente esterilizado tal como água para injeção, solução salina, preferencialmente solução salina fisiológica, solução de Ringer, cloreto de sódio isotônico, óleos fixos que podem servir como o solvente ou o meio de suspensão, polietileno glicóis, glicerina, propileno glicol ou outros solventes; agentes antibacterianos; antioxidantes; agentes quelantes; tampões e agentes para o ajuste da tonicidade tal como cloreto de sódio ou dextrose. Uma preparação parenteral pode ser colocada dentro de ampolas, seringas descartáveis ou frascos com várias doses feitos de vidro ou plástico. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende solução salina fisiológica. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é uma composição farmacêutica injetável e em algumas modalidades, a composição farmacêutica injetável é esterilizada.

[00110] Para formulações orais, pelo menos um dos compostos da presente divulgação pode ser utilizado isoladamente ou em combinação com pelo menos um aditivo apropriado para produzir comprimidos, pós, grânulos e/ou cápsulas, por exemplo, aqueles selecionados de aditivos convencionais, agentes de desintegração, lubrificantes, diluentes, agentes tamponantes, agentes umectantes, conservantes, agentes corantes e agentes aromatizantes. As composições farmacêuticas podem ser formuladas para incluírem pelo menos um agente tamponante, que pode fornecer proteção do ingrediente ativo do pH baixo do ambiente gástrico e/ou um revestimento entérico. Uma composição farmacêutica pode ser formulada para fornecimento oral com pelo menos um agente aromatizante, por exemplo, em uma formulação líquida, sólida ou semissólida e/ou com um revestimento entérico.

[00111] As formulações orais podem ser fornecidas na forma de cápsulas de gelatina, que podem conter o composto ativo ou o agente biológico junto com carreadores em pó. Carreadores e diluentes similares podem ser utilizados para produzir comprimidos por compressão. Os comprimidos e as cápsulas podem ser produzidos na forma de produtos de liberação prolongada para fornecer liberação contínua dos ingredientes ativos ao longo de um período de tempo. Os comprimidos obtidos podem ser revestidos com açúcar ou revestidos com filme para mascarar qualquer sabor desagradável e proteger o comprimido da atmosférica ou com revestimento entérico para desintegração seletiva no trato gastrointestinal.

[00112] Uma composição farmacêutica pode ser formulada para liberação prolongada ou lenta. Tais composições podem ser geralmente preparadas utilizando tecnologia bem conhecida e administradas, por exemplo, através de implantação oral, retal ou subcutânea ou através de implantação no sítio alvo desejado. As formulações de liberação prolongada podem conter o agente terapêutico ativo disperso em uma matriz carreadora e/ou contido dentro de um reservatório circundado por uma membrana de controle da taxa. Os excipientes para uso dentro de tais formulações são biocompatíveis e também podem ser biodegradáveis; preferencialmente a formulação fornece um nível relativamente constante de liberação do componente ativo. A quantidade de agente terapêutico ativo contida dentro de uma formulação de liberação prolongada depende do local de implantação, da taxa e da duração esperada de liberação e da natureza do estado de saúde que será tratado ou prevenido.

[00113] As composições farmacêuticas descritas aqui podem ser formuladas na forma de supositórios através da mistura com uma variedade de bases tais como bases emulsificantes ou bases solúveis em água. As composições farmacêuticas podem ser preparadas na forma de formulações em aerossol que serão administradas através de inalação. As composições podem ser formuladas em propelentes pressurizados aceitáveis tais como diclorodifluorometano, propano, nitrogênio e similares.

[00114] Os compostos da presente divulgação e as composições farmacêuticas que compreendem estes compostos podem ser administrados de forma tópica (por exemplo, através de administração transdermal). As formulações tópicas podem estar na forma de um adesivo, um unguento, uma pasta, uma loção, um creme, um gel e similares. As formulações tópicas podem incluir um ou mais de um agente ou um intensificador de penetração (também chamado de melhorador de penetração), um espessante, um diluente, um emulsificante, um auxiliador de dispersão ou um agente aglutinante. Os melhoradores de penetração físicos incluem, por exemplo, técnicas eletroforéticas tais como iontoforese, uso de ultrassom (ou “fonoforese”) e similares. Os melhoradores de penetração químicos são agentes administrados antes, com ou imediatamente após a administração do agente terapêutico, que aumentam a permeabilidade na pele, particularmente no extrato córneo, para fornecer melhor penetração do fármaco através da pele. Os melhoradores de penetração químicos e físicos adicionais são descritos, por exemplo, em Transdermal Delivery of Drugs, A. F. Kydonieus (ED) 1987 CRL Press; Percutaneous Penetration Enhancers, eds. Smith e outros (CRC Press, 1995); Lennerâs e outros, J. Pharm. Pharmacol. 54:499-508 (2002); Karande e outros, Pharm. Res. 19:655-60 (2002); Vaddi e outros, Int. J. Pharm. 91:1639-51 (2002); Ventura e outros, J. Drug Target 9:379-93 (2001); Shokri e outros, Int. J. Pharm. 228(1-2):99-107 (2001); Suzuki e outros, Biol. Pharm. Bull. 24:698-700 (2001); Alberti e outros, J. Control Release 71:319-27 (2001); Goldstein e outros, Urology 57:301-5 (2001); Kiijavainen e outros, Eur. J. Pharm. Sci. 10:97-102 (2000); e Tenjarla e outros, Int. J. Pharm. 192:147-58 (1999).

[00115] São fornecidos kits que compreendem doses unitárias de pelo menos um composto da presente divulgação, por exemplo, em doses orais ou injetáveis. Tais kits podem incluir um recipiente que compreende uma dose unitária, uma bula da embalagem com informações que descreve o uso e os benefícios resultantes do agente terapêutico no tratamento do estado de saúde patológico de interesse e/ou opcionalmente um instrumento ou um dispositivo para fornecimento do pelo menos um composto ou uma composição que compreende o mesmo.

EXEMPLOS EXEMPLO 1 INIBIDOR HETEROBIFUNCIONAL DE E-SELECTINA E RECEPTOR DA QUIMIOCINA CXCR4 (COMPOSTOS 9 E 16)

[00116] Os exemplos de compostos heterobifuncionais da Fórmula (I) foram sintetizados como descrito nos Exemplos 1-2 e como mostrado nos exemplos de esquemas de síntese apresentados na Figura 1.

[00117] Síntese do composto 2: O composto 1 (2,5 g, 8,3 mmoles, Qian e outros, Nature Communications, 2, 2011, 495) foi dissolvido em dioxano (30 mL) e H2O (20 mL) foi adicionada lentamente com agitação à temperatura ambiente. A solução foi resfriada a 0 °C (banho de gelo) e NaBH4 (3 g, 79,3 mmoles) foi adicionado lentamente com agitação. A mistura de reação foi agitada a 64 °C durante 16 h. A mistura de reação foi resfriada a 0 °C e extinta com HCl a 5 N. Foi precipitada da solução uma massa sólida que foi removida por filtração. O filtrado foi diluído com EtOAc (125ml) e transferido para um funil de separação. As fases foram separadas. A fase orgânica foi lavada com solução salina (100 mL), seca (Na2SO4) e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando hexanos-EtOAc como a fase móvel para fornecer o composto 2 (1,8 g, 6,6 mmoles, 79,3%).

[00118] Síntese do composto 3: O composto 2 (1,7 g, 6,2 mmoles) foi dissolvido em THF (32 mL) e HCl a 10 N (30 mL) foi adicionado com agitação à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente 4,5 h. A mistura de reação foi diluída com H2O (150 mL) e extraída com EtOAc (3x125 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução saturada de NaHCO3 (1x125 mL) e salmoura (1x125 mL), secas (Na2SO4), filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando hexanos e EtOAc como a fase móvel para fornecer o composto 3 (1,22 g, 5,7 mmoles, 91,7%).

[00119] Síntese do composto 5: Uma mistura do composto 4 (3,7 g, 7,58 mmoles, Tetrahedron Letters, 2003, 44, 2481-2483) e do composto 3 (2,05 g, 9,53 mmoles) foi coevaporada com tolueno (2 x 40 ml) e mantida a vácuo durante 30 min. A mistura foi dissolvida em 1, 2-dicloroetano, 40 mL) e agitada à temperatura ambiente durante 30 min sob argônio, Na(OAc)3BH (3,2 g, 15 mmoles) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante toda a noite à temperatura ambiente sob argônio. A água (60 mL) foi adicionada seguida por CH2Cl2 (80 mL). A mistura de reação foi transferida para um funil de separação e a fase orgânica foi coletada. A fase aquosa foi lavada com CH2Cl2 (2x60 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas sucessivamente com solução saturada resfriada de NaHCO3 (80 mL) e salmoura (80 mL), secas (Na2SO4), filtradas e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando Hexanos e EtOAc como a fase móvel para fornecer o composto 5 (4,5 g, 6,54 mmoles, 86,3%).

[00120] Síntese do composto 6: O composto 5 (4,5 g, 6,54 mmoles) foi dissolvido em CH2Cl2 (50 mL) sob argônio e resfriado em um banho de gelo. O reagente de Dess-Martin (3,6 g, 8,49 mmoles) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante 3 h sob argônio durante tal período de tempo a mistura de reação atingiu a temperatura ambiente lentamente. A mistura de reação foi diluída com CH2Cl2 (40 mL) e lavada com solução saturada resfriada de NaHCO3 e salmoura resfriado. A fase orgânica foi seca (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando Hexanos-EtOAc como a fase móvel para fornecer o composto 5 (3,6 g, 5,25 mmoles, 80,28%).

[00121] Síntese do composto 8: Uma mistura do composto 6 (3,5 g, 5,11 mmoles) e do composto 7 (2,8 g, WO2013/096926) foi coevaporada com MeOH (3x50 mL) e seca a vácuo. O resíduo foi dissolvido em MeOH (50 mL) e agitado sob argônio durante 1 h à temperatura ambiente. Na(OAc)3BH (3,6 g, 16,99 mmoles) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada sob argônio durante 17 h à temperatura ambiente. A mistura de reação foi concentrada. O resíduo sólido foi suspenso em CHCl3 (100 mL), H2O (250 mL) foi adicionada com agitação. A mistura foi agitada durante 10 min à temperatura ambiente durante tal período de tempo o produto sólido precipitou. O produto sólido foi coletado por filtração, lavado com água e seco a vácuo para fornecer o composto 8 (4,4 g, 3,14 mmoles, 82,2% com base no composto 6).

[00122] Síntese do composto 9: A uma solução de composto 8 (4,2 g, 3 mmoles) em MeOH (100 mL) foi adicionada uma solução aquosa de NaOH a 1 N (50 mL) com agitação à temperatura ambiente. A mistura de reação (pH 12,9) foi agitada durante 2 h à temperatura ambiente. O pH da mistura de reação resultante foi ajustado em 8,9 através da adição de AcOH (3ml). O solvente foi extraído por evaporação e então liofilizado. A massa sólida foi dissolvida em H2O (20 mL) e o pH da solução foi ajustado em 9,5 através da adição de solução de NaOH. A dessalinização foi realizada através da utilização da coluna Sep-Pak C18 pré-empacotada (2x10 g) utilizando H2O (150 mL cada coluna), 50% de MeOH em H2O (60 mL cada coluna), 70% de MeOH em H2O (100 mL cada coluna) e 80% de MeOH em H2O (50 mL cada coluna). O composto desejado foi eluído em 50-80% de MeOH em H2O. Este foi combinado e concentrado até 74 do volume total. A solução resultante foi liofilizada para fornecer o composto 8 (2,9 g, 2,6 mmoles, 86,7%). m/z calculada para C52 h88BrN7O14 [M+H]: 1116,2; encontrada: 1116,4.

[00123] Síntese do composto 10: A uma solução de composto 2 (0,225 g, 0,73 mmol) em CH2Cl2 foi adicionado Celite seguido por clorocromato de piridínio (0,28 g, 1,3 mmol) com agitação à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h e filtrada através de um leito de sílica e celite. O filtrado foi evaporado até a secura e purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto 10 (0,2 g).

[00124] Síntese do composto 12: A uma suspensão de ciclama (5 g, 25 mmoles) em CH2Cl2 anidro (150 mL) foi adicionada uma solução de dialildicarbonato (12 mL, d 0,991g/mL, 83,7 mmoles) em CH2Cl2 (100 mL) em gotas com agitação. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante toda a noite durante a qual a reação ficou verde clara e forneceu uma solução translúcida. O solvente foi removido e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando CH2Cl2 e MeOH como a fase móvel para fornecer o composto 12 (10,5 g, 23,2 mmoles, 92,9%). TLC: CH2Cl2-MeOH (95:5).

[00125] Síntese do composto 13: Uma solução do composto 10 (0,19 g, 0,7 mmol) e do composto 12 (0,45 g, 1 mmol) em MeOH (1 mL e THF 0,5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min. A esta solução foi adicionado Na(OAc)3BH (0,36 g, 1,6 mmol) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante toda a noite. A solução foi diluída com EtOAc e lavada com H2O. A camada orgânica foi seca (Na2SO4), filtrada e concentrada até a secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto 13 (0,2 g).

[00126] Síntese do composto 14: A uma solução do composto 13 (0,24 g, 0,34 mmol) em THF (7 mL) foi adicionado HCl concentrado (5 mL) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 h. A mistura de reação foi diluída com H2O (20 mL) e extraída com EtOAc (3x16 mL). As fases orgânicas combinadas foram secas (Na2SO4), filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto 14 (0,15 g).

[00127] Síntese do composto 15: Uma mistura do composto 7 (0,1 g, 0,14 mmol, WO2013/096926) e do composto 14 (0,15 g, 0,23 mmol) em MeOH (1,5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min seguidos pela adição de Na(OAc)3BH (0,096 g, 0,45 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante toda a noite. A mistura de reação foi concentrada e o resíduo foi suspenso em MeOH. O sólido resultante foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto 15 (35 mg).

[00128] Síntese do composto 16: A uma solução do composto 15 (0,028 g, 0,02 mmol) em CH2Cl2 (2 mL) foi adicionado AcOH (0,005 mL, 0,09 mmol) seguido por Pd(PPh3)4 (0,003 g, 0,003 mmol) e Bu3SnH (0,017 mL, 0,06 mmol) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. A mistura de reação foi diluída com CH2Cl2 (10 mL) e extraída com H2O (8 mL). A camada aquosa foi liofilizada, dissolvida em H2O e purificada por Coluna Sep-Pak C-18. A fração correspondente ao produto foi concentrada e dissolvida em H2O. O pH da solução foi ajustado em 9,5 com uma solução de NaOH e esta foi liofilizada para fornecer o composto 16 (6,5 mg) na forma de Sal de Na. m/z calculada para C52 h88BrN7O14 [M+H]: 1116,2; encontrada: 1116,6

EXEMPLO 2 ENSAIO DE CXCR4 PARA AVALIAR A INIBIÇÃO DA QUIMIOTAXIA INDUZIDA POR SDF-1

[00129] Um ensaio de quimiotaxia foi utilizado para medir a capacidade de um antagonista de CXCR4 glicomimético de inibir a migração de células CCRF-CEM, que expressam CXCR4 sobre suas superfícies celulares, através de uma membrana em direção ao ligante CXCL12 de CXCR4 (SDF-1α). As células CCRF-CEM são linfoblastos T humanos que expressam CXCR4 sobre a superfície celular. As células foram marcadas com 3 μM de Calcein AM durante 15 minutos a 37°C para possibilitar a detecção por fluorescência. Subsequentemente, as células foram centrifugadas a 250 x g durante 10 minutos e ressuspensas a uma concentração final de aproximadamente 5 x 105 células por mL em meio RPMI 1640 suplementado com 2% de FBS. Tipicamente, 200 μL de células foram misturados com 22 μL de uma concentração 10x do composto que seria testado e colocados à temperatura ambiente durante 10 minutos. As células tratadas foram avaliadas em duplicatas, assim 100 μL das células foram colocados dentro da câmara superior de cada um dos dois insertos transwell (Costar número 3421; poros de 5,0 μm; insertos com 6,5 mm de diâmetro). Os transwells foram colocados dentro dos poços de uma placa de 24 poços com cada poço contendo 600 μL de RPMI 1640 mais 2% de FBS e 50 ng/mL de CXCL12. Os poços de controle negativo não continham CXCL12 na câmara inferior. Foi permitido que as células migrassem através da membrana partindo da câmara superior para dentro da câmara inferior durante 3 horas a 37°C em 5% de CO2. Os insertos transwell foram removidos da placa de 24 poços e a fluorescência nas câmaras inferiores foi medida utilizando um Molecular Devices FlexStation 3 com um comprimento de onda de excitação de 485 nm e um comprimento de onda de emissão de 538 nm. Ver a Figura 4.

EXEMPLO 3 ATIVIDADE DA E-SELECTINA - ENSAIO DE LIGAÇÃO

[00130] O ensaio de inibição para verificar e caracterizar os antagonistas da E-selectina é um ensaio de ligação competitiva, partindo do qual os valores de IC50 podem ser determinados. A quimera de E- selectina/Ig foi imobilizada em placas para microtitulação de 96 poços através de incubação a 37 °C durante 2 horas. Para reduzir a ligação inespecífica, a albumina do soro bovino foi adicionada em cada poço e incubada à temperatura ambiente durante 2 horas. A placa foi lavada e diluições em série dos compostos de teste foram adicionadas aos poços na presença de conjugados de sLea poliacrilamida biotinilados, com estreptavidina/peroxidase de raiz forte e foram incubadas durante 2 horas à temperatura ambiente.

[00131] Para determinar a quantidade de sLea ligada à E-selectina imobilizada após a lavagem, o substrato da peroxidase, 3,3’,5,5’ tetrametilbenzidina (TMB) foi adicionado. Após 3 minutos, a reação enzimática foi interrompida através da adição de H3PO4 e foi determinada a absorbância da luz em um comprimento de onda de 450 nm. A concentração do composto de teste necessária para inibir a ligação em 50% foi determinada e relatada como o valor de IC50 para cada antagonista E-selectina como é mostrado na tabela abaixo. Os valores de IC50 para os exemplos de compostos divulgados aqui são fornecidos na tabela a seguir. Ver a Figura 5. Atividade Antagonista à E-Selectina dos Compostos Heterobifuncionais

EXEMPLO 4 ENSAIO DE CXCR4 - INIBIÇÃO DE AMP CÍCLICO

[00132] O ensaio de CXCR4-cAMP mede a capacidade de um antagonista de CXCR4 glicomimético de inibir a ligação de CXCL12 (SDF- 1α) às células CHO que foram engenheiradas geneticamente para expressarem CXCR4 sobre a superfície celular. Os kits de ensaio podem ser obtidos na DiscoveRx (95-0081E2CP2M; cAMP Hunter eXpress CXCR4 CHO-K1). Foi seguido o protocolo de resposta do antagonista do receptor acoplado a Gi descrito no manual de instruções do kit. GPCRs, tal como CXCR4, são tipicamente acoplados a uma das 3 proteínas G: Gs, Gi ou Gq. Nas células CHO fornecidas com o kit, CXCR4 é acoplado a Gi. Após a ativação de CXCR4 através da ligação do ligante (CXCL12), Gi se dissocia do complexo de CXCR4, fica ativada e se liga à adenilil ciclase, inativando assim a mesma, resultando em níveis menores de cAMP intracelular. O cAMP intracelular é geralmente baixo, de forma que a redução do nível baixo de cAMP por um receptor acoplado à Gi será difícil de detectar. A forscolina é adicionada às células CHO para ativar diretamente a adenilil ciclase (contornando todos os GPCRs), aumentando assim o nível de cAMP na célula, de forma que uma resposta à Gi possa ser facilmente observada. A interação de CXCL12 com CXCR4 diminui o nível intracelular de cAMP e a inibição da interação de CXCL12 com CXCR4 por um antagonista de CXCR4 aumenta o nível de cAMP intracelular, que é medido por luminescência. Ver a Figura 6.

EXEMPLO 5 INIBIÇÃO DA MIGRAÇÃO LINFÁTICA E ENDOTELIAL VASCULAR EM DIREÇÃO AOS FIBROBLASTOS ASSOCIADOS A TUMOR

[00133] Foram plaqueados 8,0 x 105 fibroblastos 13.34, células tumorais S2.013 e células tumorais Colo357 em um T-25. Foram incubados durante toda a noite. O meio foi trocado por EBM-2 sem soro e foi permitido que as células se condicionassem ao meio durante 24 horas. O meio foi coletado e filtrado para remover os restos celulares. Foram adicionados 750 μL de meio condicionado aos poços inferiores de uma placa de migração de câmara Boyden (3 réplicas/tipo de célula/tratamento). Especificações das placas: 24 poços; poros de 8,0 μm. Foram adicionadas 3,0 x 104 hLECs ou HUVECs aos poços superiores da câmara Boyden diluídas em EBM-2 sem soro (500 μL/inserto). Foram adicionados 100 μg/mL do composto 9 aos poços superiores. Foi permitido que as hLECs ou as HUVECs migrassem durante toda a noite. Após a migração, os insertos foram lavados e as células que não migraram foram removidas sobre a face superior da membrana com um Q-tip. As células que migraram foram fixadas e coradas com Diff-Quik Kit. As membranas foram removidas dos insertos e montadas sobre uma lâmina. Foram traçados quadrantes sobre as membranas e foram obtidas imagens de cada quadrante. O número de células endoteliais migratórias foi quantificado. Ver a Figura 7.

EXEMPLO 6 INIBIÇÃO DA LIGAÇÃO DE CÉLULAS PDAC ÀS MONOCAMADAS LINFÁTICAS

[00134] Foram plaqueadas 4,5 x 104 hLECs dentro dos poços de lâminas de câmara de 8 poços. As células foram incubadas até que fosse obtida uma monocamada confluente de células endoteliais. As células endoteliais foram pré-tratadas durante 2 horas com os tratamentos designados: controle com meio, 100 μg/mL de um antagonista específico para E-selectina, 10 μg/mL do composto 9 ou 100 μg/mL do composto 9. S2.013 ou Colo357 foi corada com CFDA-SE Cell Tracker Dye. Após o pré-tratamento das células endoteliais, foram adicionadas 3,0 x 104 células S2.013 ou Colo357 diluídas em EBM-2 sem soro aos poços junto com os tratamentos designados (400 μL/poço; 3 poços em réplica/tratamento). As células tumorais foram incubadas sobre a monocamada endotelial durante 1 hora. Após a incubação de ligação, cada poço foi lavado 3X com PBS+0,5% de FBS para remover células não aderentes. As lâminas foram fixadas com 4% de PFA e cobertas com lamínulas. Foram obtidas imagens de 5 localizações/poço no aumento de 10X. O número de células aderentes foi quantificado em cada imagem. Ver a Figura 8.

EXEMPLO 7 MODELO DE CÂNCER DE PRÓSTATA

[00135] Células PC3Luc transfectadas com luciferase foram injetadas a 2 x 105 células/10 μL de meio sem soro nas tíbias proximais de machos de camundongos CD1 nu/nu de 4 semanas de idade. O desenvolvimento de metástases foi monitorado através da utilização de um sistema de raios X Faxitron cabinet e a carga tumoral foi avaliada através de análises de bioluminescência (ver a seguir). O desenvolvimento de metástases foi monitorado por radiografia utilizando um sistema de raios X Faxitron cabinet (Faxitron x-ray corp., Wheeling, IL, USA). As análises radiográficas foram realizadas nos dias 28, 35, 42 e 50 após a injeção de células. Nenhuma análise com Faxitron foi realizada após o 50o dia uma vez que após esse período de tempo o risco estimado de mortalidade relacionada à anestesia de camundongos era significativamente maior. Entretanto, com a finalidade de determinar tanto a incidência cumulativa de metástases ósseas quanto a sobrevida livre de doença (SLD), os raios X também foram repetidos no momento da morte de cada animal ou no animal que sobreviveu no final do acompanhamento, que foi definido como sendo 170 dias, quando os animais foram sacrificados. A carga de lesões osteolíticas foi avaliada através de exame digital de radiografia (ImageJ, um software de domínio público por Wayne Rasband, NIH, USA). Os animais foram sacrificados através da inalação de dióxido de carbono 170 dias após injeções no coração ou antes se houvesse sinais iniciais de sofrimento grave. Todos os animais foram submetidos a um exame post mortem acurado e amostras de vários órgãos foram processadas para análises histológicas de rotina.

[00136] Para obtenção de imagens por luminescência, os camundongos receberam 150 mg de luciferase de vagalume (Synchem Ug e Co.KG, Felsberg-Altenburg, Alemanha) por kg de peso corporal fornecidos de forma intraperitoneal. Após a anestesia com mistura de cetamina/xilazina os camundongos foram colocados dentro de uma estação de obtenção de imagens Hamamatsu (Hamamatsu photonics, distribuidor italiano, Roma Itália). A bioluminescência gerada pela reação de luciferina/luciferase foi utilizada para quantificação utilizando um software Living Image dedicado em uma escala visual de vermelho (alta intensidade/número de célula) até azul (baixa intensidade/número de célula). Uma imagem do animal em escala de cinza digital foi obtida seguida pela aquisição e pela cobertura de uma imagem pseudocolorida representando a distribuição espacial das contagens de fótons detectados emergindo da luciferase ativa dentro do animal. A intensidade de sinal foi quantificada como a soma de todos os fótons detectados dentro da região de interesse durante um tempo de integração luminescente de 1 minuto. A incidência de tumor foi classificada em uma escala de dicotomia como sendo positiva ou negativa se os animais tivessem pelo menos uma lesão detectada nos úmeros ou na região da tíbia/fêmur. Ver a Figura 9.

[00137] As várias modalidades descritas anteriormente podem ser combinadas para fornecer modalidades adicionais. Todas as patentes U.S., as publicações de pedidos de patentes U.S., os pedidos de patentes U.S., as patentes que não são U.S., os pedidos de patentes que não são U.S. e as publicações que não são patentes referidos neste Relatório Descritivo e/ou listados na Folha de Dados do Pedido de Patente são incorporados aqui como referência, em sua totalidade. Os aspectos das modalidades podem ser modificados, se necessário, para empregar os conceitos das várias patentes, pedidos de patentes e publicações para fornecer mais modalidades adicionais.

Claims (3)

1. Composto(s), caracterizado por que é/são escolhido(s) a partir de e sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.

2. Composição, caracterizada por que compreende pelo menos um composto, conforme definido na Reivindicação 1, e pelo menos um ingrediente adicional farmaceuticamente aceitável.

3. Uso de Composto(s), conforme definido(s) na Reivindicação 1, e/ou de Composição, conforme definida na Reivindicação 2, caracterizado por que é no fabrico de um medicamento para tratamento e/ou prevenção de câncer, metástase tumoral ou doença inflamatória e/ou para liberação de células na circulação sanguínea e aumento da retenção das células no sangue.