BR112016030851B1

BR112016030851B1 - Recipiente de separação de células, sistema de separação de células e método de separação de células

Info

Publication number: BR112016030851B1
Application number: BR112016030851-4A
Authority: BR
Inventors: Hyun Seung Ryu; Hee Jun Park; Soon Gee Hong; Young Su Kim; In Ho Kim
Original assignee: Cg Bio Co., Ltd.
Priority date: 2014-07-08
Filing date: 2015-06-26
Publication date: 2021-08-03
Also published as: BR112016030851A2; CN106661527A; BR112016030851A8; WO2016006850A1; CN106661527B

Abstract

recipiente de separação de células, sistema de separação de células e método de separação de células a presente invenção é um sistema e método de separação de células compreendendo: um depósito que armazena separadamente um tecido adiposo, uma solução de limpeza e uma enzima; um recipiente de separação de células que é fornecido com o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima, em que o recipiente de separação de células agita o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima, e separa por centrifugação uma célula-tronco; uma unidade de rotação que faz girar o recipiente de separação de células; um depósito de rejeitos que armazena os rejeitos fornecidos a partir do recipiente de separação de células; uma unidade de armazenamento de células que armazena a célula-tronco fornecida a partir do recipiente de separação de células, em que a célula-tronco é obtida por separação por centrifugação do tecido adiposo; uma unidade de ligação que liga o recipiente de separação de células ao depósito, ao depósito de rejeitos e à unidade de armazenamento de células; e uma unidade de distribuição que distribui o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima do depósito para o recipiente de separação de células, distribui os rejeitos do recipiente de separação de células para o depósito de rejeitos e distribui a célula-tronco à unidade de armazenamento de células.

Description

[001] Campo da Invenção

[002] A presente invenção se refere a um recipiente de separação de células, a um sistema de separação de células e a um método de separação de células usando o mesmo, e se refere particularmente ao recipiente de separação de células, ao sistema de separação de células e ao método de separação de células que podem separar células-tronco do tecido adiposo e cultivo da célula- tronco.

[003] Descrição da Técnica Relacionada

[004] As células-tronco são células que são capazes de se reduplicarem e serem divididas em mais de duas células. Recentemente, pesquisas para obtenção de células-tronco a partir de tecido adiposo, bem como medula óssea foram realizadas. As células-tronco adiposas que são separadas do tecido adiposo são células-tronco pluripotentes que são capazes de diferenciar a várias células tais como células adiposas, células musculares, condrócitos e osteócitos.

[005] As células-tronco adiposas têm melhor capacidade de auto regeneração do que as células-tronco mesenquimais separadas da medula óssea e são facilmente usadas para explante. O tecido adiposo do qual as células-tronco adiposas são separadas é abundante, fácil de coletar e seguro para coletar. Além disso, é sabido que as células-tronco adiposas têm as mesmas características (capacidade de diferenciação, características citológicas, características imunológicas, capacidade de regeneração de tecidos, etc.) que as células-tronco mesenquimais separadas da medula óssea. Ou seja, as células-tronco adiposas têm uma alta possibilidade de substituir as células- tronco mesenquimais separadas da medula óssea, e têm um alto uso médico.

[006] O processo de coleta de tecido de células-tronco adiposas é mais fácil e mais seguro do que o das células-tronco mesenquimais, e a oferta e demanda de tecido é ilimitada. Uma vez que o explante das células-tronco adiposas é fácil, elas são superiores às células-tronco mesenquimais em termos de acessibilidade, segurança, eficácia e viabilidade econômica dos tecidos.

[007] O método convencional de separação e cultivo de células-tronco adiposas consiste em quebrar finamente a gordura succionada ou cortada, a decompor com colagenase, separar uma fração vascular do estroma (FVE) por centrifugação e cultivar uma célula na FVE.

[008] Vários aparelhos foram desenvolvidos para coletar as células-tronco do tecido adiposo, mas as células-tronco têm sido normalmente separadas do tecido adiposo em um recipiente de separação. Consequentemente, se torna complicado descarregar os rejeitos dos materiais gerados e eliminá-los. A fim de resolver estes problemas, são usados dois recipientes de separação para separar as células-tronco do tecido adiposo. Neste caso, em um recipiente de separação, o tecido adiposo é manuseado, e no outro recipiente de separação, as células-tronco separadas são manipuladas. Consequentemente, uma vez que o número de recipientes de separação, que são consumíveis, é aumentado, e as constituições para a rotação dos recipientes de separação são aumentadas, o tempo e os custos para separar as células-tronco são aumentados.

[009] Sumário da invenção

[010] Objetivo da Invenção

[011] Um objetivo da presente invenção é proporcionar um recipiente de separação de células, um sistema de separação de células e um método de separação de células que pode aumentar a eficiência de separação de uma célula-tronco de um tecido adiposo.

[012] Outro objetivo da presente invenção é proporcionar um recipiente de separação de células, um sistema de separação de células e um método de separação de células que possa separar facilmente uma célula-tronco de um tecido adiposo com uma estrutura simples.

[013] Outro objetivo da presente invenção é proporcionar um recipiente de separação de células, um sistema de separação de células e um método de separação de células que pode reduzir o tempo e os custos para separar uma célula-tronco de um tecido adiposo.

[014] Constituição da invenção

[015] Um recipiente de separação de células de acordo com uma primeira concretização da presente invenção compreende: um alojamento que é rotativo em um eixo de rotação e tem um espaço de centrifugação no alojamento, em que o espaço de centrifugação se projeta de forma convexa de uma superfície lateral do alojamento ao longo de uma direção circunferencial; um primeiro tubo que é inserido no alojamento em uma direção do eixo de rotação e liga um espaço interno do alojamento com um espaço externo do alojamento; um segundo tubo que é inserido no alojamento na direção do eixo de rotação e liga o espaço interno do alojamento com o espaço externo do alojamento, em que o segundo tubo é dobrado de modo que uma extremidade do segundo tubo é disposta no espaço de centrifugação; e uma pluralidade de pás de agitação que sobressaem de uma superfície interna do alojamento.

[016] Preferencialmente, as pás de agitação estão dispostas em uma parte mais baixa do alojamento e estão dispostas em torno do primeiro tubo.

[017] Preferencialmente, as pás de agitação têm uma pluralidade de orifícios de passagem.

[018] Preferencialmente, o recipiente de separação de células compreende ainda um descarregador de ar que está disposto em uma parte superior do alojamento e liga o espaço interno do alojamento com o espaço externo do alojamento, controlando assim uma pressão interna do alojamento e tendo uma função de filtração do ar.

[019] Preferencialmente, quando o alojamento gira no eixo de rotação, o primeiro tubo e o segundo tubo não giram.

[020] Preferencialmente, o primeiro tubo é estendido em proximidade de uma superfície inferior do alojamento.

[021] Preferencialmente, o alojamento é girado por um motor que está disposto em uma parte mais baixa do alojamento.

[022] Um método de separação de células de acordo com uma segunda concretização da presente invenção, usando o recipiente de separação de células acima compreende as etapas de: (a) proporcionar o alojamento com um tecido adiposo através do primeiro tubo; (b) proporcionar ao alojamento uma solução de limpeza através do primeiro tubo e fazer girar o alojamento para agitar o tecido adiposo e a solução de limpeza, os separando assim em um tecido adiposo limpo e um contaminante sanguíneo como uma camada superior e uma camada inferior, respectivamente, após o alojamento parar de girar; (c) remoção do contaminante sanguíneo do alojamento através do primeiro tubo; (d) proporcionar ao alojamento uma enzima através do primeiro tubo e fazer girar o alojamento para agitar o tecido adiposo purificado e a enzima, os separando assim em um tecido adiposo digerido e uma primeira solução aquosa como camada superior e camada inferior, respectivamente, após o alojamento parar de girar; (e) remoção do tecido adiposo digerido do alojamento através do segundo tubo enquanto o tecido adiposo digerido e a primeira solução aquosa são separados por centrifugação em uma camada interna e uma camada externa, respectivamente, no espaço de centrifugação, girando o alojamento; (f) gerar uma segunda solução aquosa pela mistura da primeira solução aquosa com uma solução de limpeza fornecida através do primeiro tubo depois do alojamento parar de girar; (g) separar por centrifugação a segunda solução aquosa em uma célula-tronco e uma segunda solução aquosa extraída com células-tronco como uma camada externa e uma camada interna, respectivamente, no espaço de centrifugação pela rotação do alojamento e durante a centrifugação da célula-tronco, remoção da célula-tronco extraída da segunda solução aquosa do alojamento através do segundo tubo; e (h) gerar uma solução aquosa alvo misturando a célula-tronco com uma solução de limpeza fornecida através do segundo tubo depois do alojamento parar de girar e descarregar a solução aquosa alvo do alojamento através do primeiro tubo.

[023] Um sistema de separação de células de acordo com a terceira concretização da presente invenção compreende: um depósito que armazena separadamente um tecido adiposo, uma solução de limpeza e uma enzima; um alojamento para separa de células que é conectado ao depósito e proporcionado com o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima do depósito, em que o alojamento de separação de células agita o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima proporcionada a partir do depósito e separa por centrifugação uma célula-tronco; uma unidade de rotação que é conectada ao alojamento de separação de células e rotacional o alojamento de separação de células; um depósito de rejeitos o qual é conectado ao alojamento de separação de células e armazena o rejeito proporcionado a partir do alojamento de separação de células, em que o rejeito é gerado em um processo de agitação do tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima, e separar por centrifugação a célula- tronco no alojamento de separação de células; uma unidade de armazenamento de células a qual é conectada ao alojamento de separação de células e armazena as células-tronco proporcionadas a partir do alojamento de separação de células, em que a célula-tronco é obtida pela agitação do tecido adiposo, da solução de limpeza e da enzima, e separar por centrifugação o tecido adiposo; uma unidade de ligação a qual conecta o alojamento de separação de células ao depósito, o depósito de rejeitos e a unidade de armazenamento de células; e uma unidade de distribuição a qual é disposta sobre a unidade de ligação, em que a unidade de distribuição, distribuição o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima a partir do depósito para o alojamento de separação de células através da unidade de ligação, distribuição o rejeito a partir do alojamento de separação de células ao depósito de rejeitos, e distribuição as células-tronco a partir do alojamento de separação de células, e distribuição as células-tronco do alojamento de separação de células para a unidade de armazenamento de células.

[024] Preferencialmente, o sistema de separação de células compreende ainda um sensor que é disposto sobre a unidade de ligação entre o alojamento de separação de células e a unidade de distribuição e percebe a concentração do rejeito descartado a partir do alojamento de separação de células pela unidade de distribuição.

[025] Preferencialmente, o alojamento de separação de células compreende: um alojamento o qual é girado sobre um eixo de rotação por uma unidade de rotação disposta sobre a porção inferior do alojamento, e tem um espaço de centrifugação no alojamento, no qual o espaço de centrifugação se projeta de forma convexa a partir da superfície lateral do alojamento ao longo de uma direção circunferencial; um primeiro tubo o qual é inserido dentro do alojamento em direção ao eixo de rotação e conecta um espaço interno do alojamento com um espaço externo do alojamento; um segundo tubo que é inserido dentro do alojamento na direção do eixo de rotação e conecta o espaço interno do alojamento com o espaço externo do alojamento, em que o segundo tubo é dobrado de forma que uma extremidade do segundo tubo é disposta no espaço de centrifugação; e uma pluralidade de pás de agitação as quais se expande a partir de uma superfície interna do alojamento.

[026] Preferencialmente, as pás de agitação são dispostas em uma porção inferior do alojamento e são arranjadas em volta do primeiro tubo.

[027] Preferencialmente, as pás de agitação tem uma pluralidade de orifícios de passagem.

[028] Preferencialmente, o alojamento de separação de células compreende ainda: um descarregador de ar o qual é disposto sobre uma porção superior do alojamento e conecta o espaço interno do alojamento com o espaço externo do alojamento, controlando assim uma pressão interna do alojamento e tendo uma função de filtro de ar.

[029] Preferencialmente, quando o alojamento gira sobre o eixo de rotação, o primeiro tubo e o segundo tubo não gira.

[030] Preferencialmente, o primeiro tubo se estende na proximidade de uma superfície de fundo do alojamento.

[031] Preferencialmente, o depósito compreende: um depósito de tecido adiposo que armazena o tecido adiposo e é conectado ao alojamento de separação de células através de uma unidade de ligação; um depósito de solução de limpeza que armazena a solução de limpeza e é conectado ao alojamento de separação de células através de uma unidade de ligação; e um depósito de enzimas que armazena a enzima e é conectado ao alojamento de separação de células através de uma unidade de ligação.

[032] Preferencialmente, a unidade de ligação compreende: um tubo comum que é conectado a unidade de distribuição; um tubo de tecido adiposo que conecta o depósito de tecido adiposo e o tubo comum; um tubo de solução de limpeza que conecta o depósito de solução de limpeza e o tubo comum; um tubo de enzima que conecta o depósito de enzima e o tubo comum; um tubo de rejeito que conecta o depósito de rejeito e o tubo comum; um tubo de separação que conecta o alojamento de separação de células e a unidade de distribuição; e um tubo de distribuição de células que conecta a unidade de armazenamento de células e o tubo comum.

[033] Preferencialmente, o sistema de separação de células compreende uma unidade de regulação que é disposta sobre uma unidade de ligação, e abre ou fecha a unidade de ligação.

[034] Preferencialmente, a unidade de regulação compreende: um regulador de tecido adiposo que é disposto sobre um tubo de tecido adiposo, e abre ou fecha o tubo de tecido adiposo; um regulador de solução de limpeza que é disposto sobre o tubo de solução de limpeza, e abre ou fecha o tubo de solução de limpeza; um regulador de enzima que é disposto sobre o tubo da enzima, e abre ou fecha o tubo da enzima; um regulador de rejeito que é disposto sobre o tubo de rejeito e abre ou fecha o tubo de rejeito; um regulador de separação que é disposto sobre o tubo de separação, e abre ou fecha o tubo de separação; e um regulador de distribuição de células que é disposto sobre o tubo de distribuição de células, e abre ou fecha o tubo de distribuição de células.

[035] Preferencialmente, o sistema de separação de células compreende uma unidade de controle que é conectada a unidade de rotação, a unidade de distribuição e a unidade de regulação, em que a unidade de controle controla a unidade de distribuição e a unidade de regulação para distribuir o tecido adiposo, a solução de limpeza, a enzima, o rejeito e a célula-tronco através da unidade de ligação, e controla a unidade de rotação para girar o alojamento de separação de células.

[036] Preferencialmente, o depósito de enzima e o alojamento de separação de células são conectados a uma unidade de regulação de temperatura, e a unidade de regulação de temperatura mantém a temperatura do depósito de enzima e alojamento de separação de células entre 35 °C a 40 °C.

[037] Preferencialmente, o depósito de tecido adiposo, o depósito de enzima e a unidade de armazenamento de células é uma seringa.

[038] Preferencialmente, a unidade de ligação compreende: um primeiro tubo de separação que conecta a unidade de distribuição ao primeiro tubo do alojamento de separação de células, e é aberto ou fechado pelo primeiro regulador de separação; e um segundo tubo de separação que conecta a unidade de distribuição ao segundo tubo do alojamento de separação de células, e é aberto ou fechado por um segundo regulador de separação.

[039] Preferencialmente, a unidade de armazenamento de células compreende uma unidade de filtração de células que é disposta na unidade de ligação entre a unidade de armazenamento de células e a unidade de distribuição e filtra a célula-tronco entregue à unidade de armazenamento de células através da unidade de ligação.

[040] Um método de separação de células de acordo com a quarta concretização da presente invenção compreende as etapas de: (a) pela unidade de distribuição, distribuir um tecido adiposo a partir de uma unidade de armazenamento de tecidos a um alojamento de separação de células; (b) pela unidade de distribuição, distribuir uma solução de limpeza a partir de um depósito de solução de limpeza a um alojamento de separação de células, e por uma unidade de rotação, girar o alojamento de separação de células para agitar o tecido adiposo e a solução de limpeza, separando assim estes em um tecido adiposo limpo e um contaminante sanguíneo como uma camada superior e uma camada inferior, respectivamente, após o alojamento de separação de células parar de girar; (c) pela unidade de distribuição, distribuir o contaminante sanguíneo a partir do alojamento de separação de células a um depósito de rejeitos; (d) pela unidade de distribuição, distribuir uma enzima a partir do depósito de enzimas ao alojamento de separação de células, e pela unidade de rotação, girar o alojamento de separação de células para agitar a enzima e o tecido adiposo limpo, separando assim estes em um tecido adiposo digerido e uma primeira solução aquosas como uma camada superior e uma camada inferior, respectivamente, após o alojamento de separação de células parar de girar; (e) pela unidade de distribuição, distribuir o tecido adiposo digerido a partir do alojamento de separação de células a depósito de rejeitos enquanto a unidade de rotação gira o alojamento de separação de células para separar por centrifugação o tecido adiposo digerido e a primeira solução aquosa dentro de uma camada interna e uma camada externa, respectivamente; (f) após o alojamento de separação de células parar de girar, pela unidade de distribuição, distribuir uma solução de limpeza ao alojamento de separação de células, e pelo alojamento de separação de células, agitar a primeira solução aquosa e a solução de limpeza para gerar uma segunda solução aquosa; (g) pela unidade de rotação, girar o alojamento de separação de células para separar por centrifugação a segunda solução aquosa em uma célula-tronco e uma célula- tronco extraída de segunda solução aquosa como uma camada externa e uma camada interna, respectivamente, e durante a centrifugação da célula-tronco, pela unidade de distribuição, distribuir a célula-tronco extraída da segunda solução aquosa do alojamento de separação de células ao depósito de rejeitos; (h) após o alojamento de separação de células parar de girar, pela unidade de distribuição, distribuir uma solução de limpeza ao alojamento de separação de células para gerar uma solução aquosa alvo por gotejamento da célula-tronco separada por centrifugação pelo uso da solução de limpeza; e (i) pela unidade de distribuição, distribuir a solução aquosa alvo a partir do alojamento de separação de células à unidade de armazenamento de células.

[041] Preferencialmente, a etapa (c) é repetida até o sensor detectar o tecido adiposo limpo.

[042] Preferencialmente, as etapas (b) e (c) são repetidas até o sensor detectar o contaminante sanguíneo que tem a concentração menor do que um valor predeterminado na etapa (c).

[043] Preferencialmente, o recipiente de separação de células compreende: um alojamento que é rotativo em um eixo de rotação por uma unidade de rotação e tem um espaço de centrifugação no alojamento, em que o espaço de centrifugação se projeta de forma convexa de uma superfície lateral do alojamento ao longo de uma direção circunferencial; um primeiro tubo que é inserido no alojamento em uma direção do eixo de rotação e liga um espaço interno do alojamento com um espaço externo do alojamento; um segundo tubo que é inserido no alojamento na direção do eixo de rotação e liga o espaço interno do alojamento com o espaço externo do alojamento, em que o segundo tubo é dobrado de modo que uma extremidade do segundo tubo é disposta no espaço de centrifugação; e uma pluralidade de pás de agitação que se projetam de uma superfície interna do alojamento.

[044] Preferencialmente, o primeiro tubo é usado nas etapas (a), (b), (c), (d), (f) e (i) e o segundo tubo é usado nas etapas (e), (g) e (h).

[045] Preferencialmente, na etapa (e), o tecido adiposo digerido e a primeira solução aquosa são separados por centrifugação em uma camada interna e uma camada externa, respectivamente, no espaço de centrifugação; e na etapa (g), as células-tronco e a segunda solução aquosa extraída com células-tronco são separadas por centrifugação em uma camada externa e uma camada interna, respectivamente, no espaço de centrifugação.

[046] Efeito da Invenção

[047] Os efeitos do alojamento de separação de células de acordo com a presente invenção são para separar eficientemente uma célula-tronco de um tecido adiposo, limpar a célula-tronco separada, armazenar a célula-tronco limpa e reduzir os custos de um aparelho uma vez que apenas o alojamento de separação de células de acordo com a presente invenção, que tem alojamento tendo um espaço de centrifugação, pode obter o mesmo efeito que dois alojamentos.

[048] Os efeitos do sistema de separação de células e do método de separação de células de acordo com a presente invenção são reduzir o uso de um recipiente de separação de células que é consumível, extrair uma célula- tronco com uma estrutura simples e separar a célula-tronco de um tecido adiposo apenas pela manipulação de uma unidade de controle, reduzindo assim o tempo e os custos de extração da célula-tronco.

[049] Breve descrição dos Desenhos

[050] Fig. 1 é uma vista esquemática de um sistema de separação de células de acordo com uma concretização preferida da presente invenção.

[051] Fig. 2 é uma vista em corte de um recipiente de separação de células de acordo com uma concretização preferida da presente invenção.

[052] Fig. 3 é uma vista em corte do recipiente de separação de células da Fig. 2 cortado ao longo da linha B-B’.

[053] Fig. 4 é um fluxograma de um método de separação de células de acordo com uma concretização preferida da presente invenção.

[054] As Figs. 5-13 são vistas esquemáticas dos condições do sistema de separação de células correspondentes às etapas do método de separação de células da Fig. 4.

[055] Descrição Detalhada da Invenção

[056] Doravante, as concretizações preferidas da presente invenção serão explicadas mais detalhadamente com referência aos desenhos anexos. As funções ou estruturas publicamente conhecidas relevantes não serão aqui explicadas em detalhes se não forem necessárias para compreender a essência da presente invenção.

[057] A Fig. 1 é uma vista esquemática de um sistema de separação de células 100 de acordo com uma concretização preferida da presente invenção. A Fig. 2 é uma vista em corte de um recipiente de separação de células 102 de acordo com uma concretização preferida da presente invenção. A Fig. 3 é uma vista em corte do recipiente de separação de células 102 da Fig. 2 cortado ao longo da linha B-B’.

[058] Conforme ilustrado nas Figs. 1 a 3, um sistema de separação de células 100 de acordo com uma concretização preferida da presente invenção compreende um depósito 101, um recipiente de separação de células 102, uma unidade de rotação 120, um depósito de rejeitos 103, uma unidade de armazenamento de células 104, uma unidade de ligação e uma unidade de distribuição 106 e é usado para separar e extrair uma célula-tronco de um tecido adiposo. Um tecido adiposo significa um tecido adiposo extraído por lipoaspiração e uma solução de limpeza significa uma solução salina, uma solução salina tamponada com fosfato, uma solução de Hartmann, etc. Uma enzima significa colagenase, tripsina, etc. e é usada sendo dissolvida na solução de limpeza. O sistema de separação de células 100 está totalmente vedado e está em uma condição asséptica. Portanto, uma célula-tronco pode ser estavelmente separada e extraída do tecido adiposo.

[059] O depósito 101 armazena o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima, que são usados para extrair a célula-tronco. O depósito 101 compreende um depósito de tecido adiposo 111 que armazena o tecido adiposo, um depósito de solução de limpeza 113 que armazena a solução de limpeza e um depósito de enzima 115 que armazena a enzima. O depósito de tecido adiposo 111 e o depósito de enzima 115 podem ser uma seringa. Consequentemente, o fornecimento de tecido adiposo e o fornecimento de enzima podem ser controlados pelo depósito de tecido adiposo 111 e pelo depósito de enzima 115.

[060] O depósito de enzima 115 pode ser ligado a uma unidade de regulação de temperatura 115a, a qual é uma unidade separada, e a unidade de regulação de temperatura 115a mantém a temperatura do depósito de enzima 115 a uma determinada temperatura tal como 35 °C a 40 °C. Consequentemente, a enzima pode ser mantida a uma determinada temperatura. A essa faixa de temperatura, a enzima pode reagir ativamente.

[061] O recipiente de separação de células 102 está ligado ao depósito 101. Particularmente, o depósito de tecido adiposo 111, o depósito de solução de limpeza 113 e o depósito de enzima 115 estão ligados ao recipiente de separação de células 102. O recipiente de separação de células 102 recebe o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima a partir do depósito 101. O recipiente de separação de células 102 é rotativo em um eixo de rotação A e, à medida que o recipiente de separação de células 102 gira, o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima são agitados e separados por centrifugação no recipiente de separação de células 102.

[062] O recipiente de separação de células 102 compreende um alojamento 121, um primeiro tubo 122, um segundo tubo 123, pás de agitação 124 e um descarregador de ar 125 e é usado para separar a célula-tronco do tecido adiposo por agitação e separação por centrifugação do tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima. O recipiente de separação de células 102 está totalmente vedado e em uma condição asséptica, exceto para as partes ligadas ao aparelho externo. As células-tronco separadas são cultivadas e usadas.

[063] O alojamento 121 está ligado à unidade de rotação 120 disposta em uma porção inferior do alojamento 121 e é girado no eixo de rotação A pela unidade de rotação 120. O tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima são proporcionados ao alojamento 121. A porção inferior do alojamento 121 tem uma superfície curvada. A área da seção transversal do alojamento 121 se torna menor em uma direção descendente. Consequentemente, o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima, que são proporcionados ao alojamento 121, podem ser facilmente recolhidos na porção inferior do alojamento 121.

[064] O alojamento 121 tem um espaço de centrifugação 121a no seu interior e o espaço de centrifugação 121a se projeta de forma convexa de uma superfície lateral do alojamento 121 ao longo de uma direção circunferencial.

[065] O primeiro tubo 122 tem uma forma de tubo e é inserido no alojamento 121 na direção do eixo de rotação A. É preferido que o primeiro tubo 122 seja estendido em proximidade da superfície de fundo do alojamento 121. O primeiro tubo 122 liga um espaço interno do alojamento 121 com um espaço externo do alojamento 121. O tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima são entregues no alojamento 121 através do primeiro tubo 122. Quando o alojamento 121 gira no eixo de rotação A, o primeiro tubo 122 não gira. O tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima são agitados no alojamento 121 e os materiais agitados são descarregados a partir do interior do alojamento 121 através do primeiro tubo 122. O primeiro tubo 122 está conectado a um primeiro tubo de separação 155a de um tubo de separação 155.

[066] O segundo tubo 123 tem uma forma de tubo como o primeiro tubo 122 e é inserido no alojamento 121 na direção do eixo de rotação A. O segundo tubo 123 liga o espaço interno do alojamento 121 ao espaço externo do alojamento 121 O segundo tubo 123 é dobrado de modo que uma extremidade 123a do segundo tubo 123 está disposta no espaço de centrifugação 121a. Consequentemente, quando o alojamento 121 gira, os materiais agitados são recolhidos no espaço de centrifugação 121a pela força centrífuga e são descarregados a partir do interior do alojamento 121 através do segundo tubo 123. O segundo tubo 123 está ligado ao segundo tubo de separação 155b do tubo de separação 155.

[067] Quando o alojamento 121 gira, o segundo tubo 123 não gira juntamente com o primeiro tubo 122. Consequentemente, as mangueiras que estão ligadas ao primeiro tubo 122 e ao segundo tubo 123 podem manter a conexão ao primeiro tubo 122 e ao segundo tubo 123 independentemente da rotação do alojamento 121, liberando deste modo de forma estável o tecido adiposo, a solução de limpeza, a enzima, o rejeito e a célula-tronco através do primeiro tubo 122 e do segundo tubo 123.

[068] As pás de agitação 124 se projetam da superfície interna do alojamento 121. Quando o alojamento 121 gira, as pás de agitação 124 giram em torno do eixo de rotação A. Consequentemente, o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima são agitados de forma eficiente no alojamento 121 e são reagidos uns com os outros.

[069] Conforme ilustrado na Fig. 3, as pás de agitação 124 podem estar dispostas em uma parte inferior do alojamento 121 e dispostas em torno do primeiro tubo 122. Consequentemente, mesmo quando pequenas quantidades de tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima são fornecidas ao alojamento 121, o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima podem ser agitados de forma estável pelas pás de agitação 124.

[070] As pás de agitação 124 têm uma pluralidade de orifícios de passagem 124a. Consequentemente, a resistência à rotação das pás de agitação 124 é diminuída, e uma vez que o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima podem fluir através dos orifícios de passagem 124a, a eficiência de agitação é aumentada.

[071] O descarregador de ar 125 está disposto em uma parte superior do alojamento 121 e liga o espaço interno do alojamento 121 com o espaço externo do alojamento 121. Deste modo, o descarregador de ar 125 pode controlar a pressão interna do alojamento 121 para ser uma pressão constante. O descarregador de ar 125 tem uma função de filtração de ar. Consequentemente, o descarregador de ar 125 pode impedir que materiais estranhos entrem no alojamento 121, mantendo assim o espaço interno do alojamento 121 em uma condição asséptica.

[072] O tamanho do recipiente de separação de células 102 pode corresponder a uma quantidade das células-tronco a serem obtidas. O tecido adiposo, cuja quantidade corresponde à da célula-tronco a ser obtida, é proporcionado ao recipiente de separação de células 102, o recipiente de separação de células 102 é entregue com a solução de limpeza e a enzima, cuja quantidade corresponde àquela do tecido adiposo, e separa a célula-tronco do tecido adiposo. Consequentemente, o recipiente de separação de células 102 de acordo com a presente concretização pode obter a quantidade desejada das células-tronco ao mesmo tempo.

[073] O recipiente de separação de células 102, particularmente o alojamento 121, pode ser conectado a uma unidade de regulação de temperatura 102a, que é uma unidade separada, e a unidade de regulação de temperatura 102a mantém a temperatura do alojamento 121 a uma determinada temperatura tal como 35 °C a 40 °C. Consequentemente, o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima, que são proporcionados a partir do depósito 101, podem ser mantidos a uma determinada temperatura. Em tal faixa de temperaturas, o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima podem reagir ativamente.

[074] A unidade de rotação 120 está ligada a uma parte inferior do recipiente de separação de células 102 e faz girar o recipiente de separação de células 102 no eixo de rotação A. A unidade de rotação 120 pode ser um motor que controla a velocidade de rotação do recipiente de separação de células 102, proporcionando assim agitação e centrifugação no recipiente de separação de células 102.

[075] O depósito de rejeitos 103 é conectado ao recipiente de separação de células 102. Quando o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima são agitados e separados por centrifugação no recipiente de separação de células 102, são gerados os materiais agitados. Entre os materiais agitados, o material, que não é usado no processo de separação da célula-tronco do tecido adiposo, é referido como rejeito. O depósito de rejeitos 103 armazena o rejeito que é removido do recipiente de separação de células 102.

[076] A unidade de armazenamento de células 104 está conectada ao recipiente de separação de células 102. Quando o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima são agitados e separados por centrifugação no recipiente de separação de células 102, a célula-tronco, que é separada do tecido adiposo, é finalmente obtida no recipiente de separação de células 102. A célula-tronco é recolhida na unidade de armazenamento de células 104 e cultivada na unidade de armazenamento de células 104. A unidade de armazenamento de células 104 pode ser uma seringa.

[077] A unidade de filtração de células 104a está disposta na proximidade da unidade de armazenamento de células 104. A célula-tronco é recolhida na unidade de armazenamento de células 104 depois de passar através da unidade de filtração de células 104a. Consequentemente, a célula-tronco que é purificada para ter elevada pureza pode ser armazenada na unidade de armazenamento de células 104 e cultivada.

[078] A unidade de ligação pode ser uma mangueira. O recipiente de separação de células 102 está ligado ao depósito 101, ao depósito de rejeitos 103 e à unidade de armazenamento de células 104 pela unidade de ligação. A unidade de ligação desempenha a função de uma passagem que liga um recipiente de separação de células 102 a um depósito 101, o recipiente de separação de células 102 ao depósito de rejeitos 103 e o recipiente de separação de células 102 à unidade de armazenamento de células 104. Consequentemente, o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima podem ser entregues a partir do depósito 101 ao recipiente de separação de células 102 ao longo da unidade de ligação, o rejeito no recipiente de separação de células 102 pode ser entregue a partir do recipiente de separação de células 102 ao depósito de rejeitos 103 ao longo da unidade de ligação, e a célula-tronco que está separada no recipiente de separação de células 102 pode ser fornecida a partir do recipiente de separação de células 102 à unidade de armazenamento de células 104 ao longo da unidade de ligação.

[079] A unidade de distribuição 106 pode ser uma bomba, a qual está ligada à unidade de ligação. A unidade de distribuição 106 distribuição o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima a partir do depósito 101, particularmente o depósito de tecido adiposo 111, o depósito da solução de limpeza 113 e o depósito da enzima 115, respectivamente, ao recipiente de separação de células 102 ao longo da unidade de ligação. A unidade de distribuição 106 distribuição o rejeito do recipiente de separação de células 102 para o depósito de rejeitos 103 ao longo da unidade de ligação e distribui a célula-tronco do recipiente de separação de células 102 para a unidade de armazenamento de células 104 ao longo da unidade de ligação.

[080] Como explicado acima, a unidade de distribuição 106 é operada para controlar a direção de distribuição do tecido adiposo, a solução de limpeza, a enzima, o rejeito e a célula-tronco, e executa a sucção do tecido adiposo, a solução de limpeza, a enzima, os rejeitos e a célula-tronco.

[081] A unidade de ligação compreende um tubo comum 105, um tubo de tecido adiposo 151, um tubo de solução de limpeza 152, um tubo de enzima 153, um tubo de rejeitos 154, um tubo de separação 155 e um tubo de distribuição de células 156. O tubo comum 105 está sempre aberto. O tubo comum 105 está ligado ao tubo de tecido adiposo 151 de modo a ligar o depósito de tecido adiposo 111 à unidade de distribuição 106, está ligado ao tubo de solução de limpeza 152 de modo a ligar o depósito da solução de limpeza 113 à unidade de distribuição 106, está ligada ao tubo da enzima 153 de modo a ligar o depósito de enzimas 115 à unidade de distribuição 106, está ligado ao tubo de rejeitos 154 de modo a ligar o depósito de rejeitos 103 à unidade de distribuição 106 e está ligado ao dispositivo de distribuição de células 156 de modo a ligar a unidade de armazenamento de células 104 à unidade de distribuição 106.

[082] O tubo de separação 155 liga o recipiente de separação de células 102 e a unidade de distribuição 106. O tubo de separação 155 compreende o primeiro tubo de separação 155a que liga a unidade de distribuição 106 e o primeiro tubo 122 do recipiente de separação de células 102 e o segundo tubo de separação 155b que liga a unidade de distribuição 106 e o segundo tubo 123 do recipiente de separação de células 102.

[083] Pela estrutura da unidade de ligação, o tecido adiposo, que é armazenado no depósito de tecido adiposo 111, é entregue ao recipiente de separação de células 102 através do tubo de tecido adiposo 151, o tubo comum 105, a unidade de distribuição 106 e o tubo de separação 155. A solução de limpeza, que é armazenada no depósito de solução de limpeza 113, é fornecida ao recipiente de separação de células 102 através do tubo de solução de limpeza 152, do tubo comum 105, da unidade de distribuição 106 e do tubo de separação 155. A enzima que é armazenada no depósito da enzima 115 é entregue ao recipiente de separação de células 102 através do tubo de enzima 153, do tubo comum 105, da unidade de distribuição 106 e do tubo de separação 155. O rejeito que é gerado no recipiente de separação de células 102 é entregue ao depósito de rejeitos 103 através do tubo de separação 155, da unidade de distribuição 106, do tubo comum 105 e do tubo de rejeitos 154 e é armazenado no depósito de rejeitos 103. A célula-tronco, que é separada do tecido adiposo no recipiente de separação de células 102, é entregue à unidade de armazenamento de células 104 através do tubo de separação 155, da unidade de distribuição 106, do tubo comum 105 e do tubo de distribuição de células 156 e é cultivado na unidade de armazenamento de células 104.

[084] Usando esta estrutura, o tecido adiposo é limpo pela solução de limpeza e digerido pela enzima. Em seguida, apenas a célula-tronco é separada e extraída. A célula-tronco é recolhida e cultivada na unidade de armazenamento de células 104.

[085] O sistema de separação de células 100 pode ainda compreender um sensor 107, uma unidade de regulação 108 e uma unidade de controle 109.

[086] O sensor 107 está disposto no tubo de separação 155 entre o recipiente de separação de células 102 e a unidade de distribuição 106 e detecta o interior do tubo de separação 155. O sensor 107 pode ser um sensor óptico que é usado para verificar se o tecido adiposo, a solução de limpeza, a enzima, o rejeito e a célula-tronco, que são entregues pela unidade de distribuição 106, são corretamente entregues no processo de separação e extração da célula- tronco do tecido adiposo. Particularmente, o sensor 107 detecta o rejeito que é liberado a partir do recipiente de separação de células 102 pela unidade de distribuição 106, pelo que pode ser verificado se o tecido adiposo está claramente limpo ou se os rejeitos são entregues. Por exemplo, o sensor 107 detecta se a concentração do contaminante sanguíneo está abaixo de um nível predeterminado detectando a variação de cor do rejeito (isto é, contaminante sanguíneo). O contaminante sanguíneo é um rejeito que é gerado quando o tecido adiposo é limpo pela solução de limpeza. Se a concentração do contaminante sanguíneo estiver abaixo do nível predeterminado, isto significa que o tecido adiposo é completamente limpo pela solução de limpeza. Consequentemente, o tecido adiposo purificado pode ser usado na etapa seguinte.

[087] A unidade de regulação 108 está disposta na unidade de ligação e abre ou fecha a unidade de ligação. Quando o tecido adiposo, a solução de limpeza, a enzima, o rejeito e a célula-tronco são entregues ao longo da unidade de ligação pela unidade de distribuição 106, a unidade de ligação, que não precisa distribuição o tecido adiposo, a solução de limpeza, a enzima, a unidade de regulação 108 evita que o tecido adiposo, a solução de limpeza, a enzima, o rejeito e a célula-tronco sejam erradamente entregues pela unidade de distribuição 106 quando o tecido adiposo, a solução de limpeza, a enzima, o material agitado e a célula-tronco são entregues.

[088] A unidade de regulação 108 compreende um regulador de tecido adiposo 181 disposto no tubo de tecido adiposo 151, um regulador de solução de limpeza 182 disposto no tubo de solução de limpeza 152, um regulador de enzima 183 disposto no tubo de enzima 153, um regulador de rejeitos 184 disposto no tubo de rejeito 154, um regulador de separação 185 disposto no tubo de separação 155 e um regulador de distribuição de células 186 disposto no tubo de distribuição de células 156. O regulador de separação 185 compreende um primeiro regulador de separação 185a disposto no primeiro tubo de separação 155a e um segundo regulador de separação 185b disposto no segundo tubo de separação 155b. O primeiro regulador de separação 185a e o segundo regulador de separação 185b trabalham reciprocamente.

[089] A unidade de filtração de células 104a está disposta no tubo de distribuição de células 156 entre o regulador de distribuição de células 186 e a unidade de armazenamento de células 104.

[090] O regulador de tecido adiposo 181, o regulador de solução de limpeza 182, o regulador de enzima 183, o regulador de rejeitos 184, o regulador de separação 185 e o regulador de distribuição de células 186 podem ser do tipo cassete. Os reguladores 181-186 estão dispostos em locais fixos. Os reguladores do tipo cassete 181-186 estão dispostos no sistema de separação de células 100 e as unidades de ligação estão ligadas aos reguladores 181-186. Consequentemente, as unidades de ligação não estão emaranhadas e são facilmente ligadas ao depósito 101, ao recipiente de separação de células 102, ao depósito de rejeitos 103 e à unidade de armazenamento de células 104. Os reguladores 181-186 podem ser do tipo válvula ou tipo ressalto.

[091] Por exemplo, o regulador de tecido adiposo 181 abre o tubo de tecido adiposo 151 e o regulador de separação 185 abre o tubo de separação 155 (por exemplo, o primeiro regulador de separação 185a abre o primeiro tubo de separação 155a e o segundo regulador de separação 185b fecha o segundo tubo 155b), enquanto o regulador de solução de limpeza 182 fecha o tubo de solução de limpeza 152, o regulador de enzima 183 fecha o tubo de enzima 153, o regulador de rejeitos 184 fecha o tubo de rejeitos 154 e o regulador de distribuição de células 186 fecha o tubo de distribuição de células 156. Quando a unidade de distribuição 106 opera, o tecido adiposo que é armazenado no depósito de tecido adiposo 111 é entregue ao recipiente de separação de células 102. Ou seja, o depósito de tecido adiposo 111 está ligada ao recipiente de separação de células 102 através do tubo de tecido adiposo 151, o tubo comum 105 e o tubo de separação 155 (por exemplo, o primeiro tubo de separação 155a), que estão abertos, e o tecido adiposo pode ser distribuído através do tubo de tecido adiposo 151, o tubo comum 105 e o tubo de separação 155, que estão abertas, pela unidade de distribuição 106.

[092] O regulador de solução de limpeza 182 abre o tubo de solução de limpeza 152, o regulador de separação 185 abre o tubo de separação 155 (por exemplo, o primeiro regulador de separação 185a abre o primeiro tubo de separação 155a e o segundo regulador de separação 185b fecha o segundo tubo de separação 155b), enquanto que o regulador de tecido adiposo 181 fecha o tubo de tecido adiposo 151, o regulador de enzima 183 fecha o tubo de enzima 153, o regulador de rejeitos 184 fecha o tubo de rejeitos 154 e o regulador de distribuição de células 186 fecha o tubo de distribuição de células 156. Quando a unidade de distribuição 106 opera, a solução de limpeza, que é armazenada no depósito de solução de limpeza 113, é entregue ao recipiente de separação de células 102. Ou seja, o depósito de solução de limpeza 113 está ligado ao recipiente de separação de células 102 através do tubo de solução de limpeza 152, o tubo comum 105 e o tubo de separação 155 (por exemplo, o primeiro tubo de separação 155a), que estão abertos, e a solução de limpeza pode ser distribuição através do tubo de solução de limpeza 152, o tubo comum 105 e o tubo de separação 155 estão abertos, pela unidade de distribuição 106.

[093] O regulador de enzima 183 abre o tubo de enzima 153 e o regulador de separação 185 abre o tubo de separação 155 (por exemplo, o primeiro regulador de separação 185a abre o primeiro tubo de separação 155a e o segundo regulador de separação 185b fecha o segundo tubo de separação 155b), enquanto o regulador de tecido adiposo 181 feche o tubo de tecido adiposo 151, o regulador de solução de limpeza 182 fecha o tubo de solução de limpeza 152, o regulador de rejeitos 184 fecha o tubo de rejeitos 154 e o regulador de distribuição de células 186 fecha o tubo de distribuição de células 156. Quando a unidade de distribuição 106 opera, a enzima, que é armazenada no depósito de enzimas 115, é entregue ao recipiente de separação de células 102. Ou seja, o depósito de enzimas 115 está ligado ao recipiente de separação de células 102 através do tubo de enzima 153, o tubo comum 105 e o tubo de separação 155 (por exemplo, o primeiro tubo de separação 155a), que está aberto, e a enzima pode ser entregue através do tubo de enzima 153, do tubo comum 105 e do tubo de separação 155, que estão abertos pela unidade de distribuição (106).

[094] O regulador de rejeitos 184 abre o tubo de rejeito 154 e o regulador de separação 185 abre o tubo de separação 155 (por exemplo, um dentre o primeiro regulador de separação 185a e o segundo regulador de separação 185b abre o correspondente primeiro tubo de separação 155a e o segundo tubo de separação 155b, e o outro do primeiro regulador de separação 185a e o segundo regulador de separação 185b fecha o correspondente primeiro tubo de separação 155a e do segundo tubo de separação 155b), enquanto o regulador de tecido adiposo 181 fecha o tubo de tecido adiposo 151, o regulador de solução de limpeza 182 fecha o tubo de solução de limpeza 152, o regulador de enzima 183 fecha o tubo de enzima 153 e o regulador de distribuição de células 186 fecha o tubo de distribuição de células 156. Quando a unidade de distribuição 106 opera, o rejeito que é gerado no recipiente de separação de células 102 é entregue ao depósito de rejeitos 103. Ou seja, o recipiente de separação de células 102 é ligado ao depósito de rejeitos 103 através do tubo de separação 155, o tubo comum 105 e o tubo de rejeitos 154, e os rejeitos podem ser entregues através do tubo de separação 155, do tubo comum 105 e do tubo de rejeitos 154, que estão abertos, pela unidade de distribuição 106.

[095] O regulador de distribuição de células 186 abre o tubo de distribuição de células 156 e o regulador de separação 185 abre o tubo de separação 155, enquanto o regulador de tecido adiposo 181 fecha o tubo de tecido adiposo 151, o regulador de solução de limpeza 182 fecha o tubo de solução de limpeza 152, o regulador de enzima 183 fecha o tubo de enzima 153 e o regulador de rejeitos 184 fecha o tubo de rejeitos 154. Quando a unidade de distribuição 106 opera, a célula-tronco, que é separada do tecido adiposo no recipiente de separação de células 102, é entregue a unidade de armazenamento de células 104. Isto é, o recipiente de separação de células 102 está ligado à unidade de armazenamento de células 104 através do tubo de separação 155, do tubo comum 105 e do tubo de distribuição de células 156, que estão abertos, e a célula-tronco pode ser entregue através do tubo de separação 155, o tubo comum 105 e o tubo de distribuição de células 156, que estão abertos, pela unidade de distribuição 106.

[096] O regulador de separação 185 mantém o tubo de separação 155 aberto. Ou seja, um do primeiro tubo de separação 155a e do segundo tubo de separação 155b é mantido aberto. Quando o material, que não deve ser fornecido a partir do recipiente de separação de células 102 para o depósito de rejeitos 103, é fornecido ao tubo de separação 155, o regulador de separação 185 fecha o tubo de separação 155, evitando assim que o material seja descarregado a partir do recipiente separação de células 102.

[097] A unidade de controle 109 está ligada à unidade de rotação 120, à unidade de distribuição 106 e à unidade de regulação 108. A unidade de controle 109 aciona a unidade de distribuição 106 e controla a unidade de regulação 108 para abrir ou fechar a unidade de ligação. Consequentemente, o tecido adiposo, a solução de limpeza, a enzima, o rejeito e a célula-tronco são entregues através da unidade de ligação. A unidade de controle 109 opera a unidade de rotação 120 para girar o recipiente de separação de células 102, agitando e separando por centrifugação o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima no recipiente de separação de células 102. Pela simples manipulação da unidade de controle 109, a célula-tronco pode ser separada do tecido adiposo.

[098] A unidade de controle 109 pode ter um visor e uma pluralidade de botões. Um usuário verifica a condição do sistema de separação de células 100 no visor e manipula os botões para controlar o sistema de separação de células 100.

[099] A Fig. 4 é um fluxograma de um método de separação de células de acordo com uma concretização preferida da presente invenção. As Figs. 5-13 são vistas esquemáticas das condições do sistema de separação de células 100 correspondendo às etapas do método de separação de células da Fig. 4.

[100] Conforme ilustrado nas Figs. 4-13, o método de separação de células de acordo com uma concretização preferida da presente invenção é um método para separar e extrair a célula-tronco do tecido adiposo e usa o sistema de separação de células 100.

[101] Inicialmente, o tecido adiposo é distribuído a partir do depósito de tecido adiposo 111 para o recipiente de separação de células 102 (S101) (ver Fig. 5). Na etapa S101, o regulador de tecido adiposo 181 abre o tubo de tecido adiposo 151, o regulador de separação 185 abre o tubo de separação 155, o regulador de solução de limpeza 182 fecha o tubo de solução de limpeza 152, o regulador de enzima 183 fecha o tubo de enzima 153, o regulador 184 fecha o tubo de rejeito 154 e o regulador de distribuição de células 186 fecha o tubo de distribuição de células 156. No regulador de separação 185, apenas o primeiro regulador de separação 185a abre o primeiro tubo de separação 155a que está ligado ao primeiro tubo 122 do recipiente de separação de células 102 e o segundo regulador de separação 185b abre o segundo tubo de separação 155b que está ligado ao segundo tubo 123 do recipiente de separação de células 102.

[102] A unidade de distribuição 106 entrega o tecido adiposo, que é armazenado no depósito de tecido adiposo 111 do depósito 101, ao recipiente de separação de células 102 através do tubo de tecido adiposo 151, o tubo comum 105 e o primeiro tubo de separação 155a. O tecido adiposo passa através do primeiro tubo 122 do recipiente de separação de células 102 e está disposto no alojamento 121.

[103] Em seguida, a solução de limpeza é fornecida a partir do depósito de solução de limpeza 113 para o recipiente de separação de células 102 e é agitada com o tecido adiposo pela rotação do recipiente de separação de células 102 pela unidade de rotação 120 (S102) (ver Fig. 6). A etapa S102 é semelhante a etapa S101 exceto que o regulador de solução de limpeza 182 abre o tubo de solução de limpeza 152 e o regulador de tecido adiposo 181 fecha o tubo de tecido adiposo 151. A unidade de distribuição 106 fornece a solução de limpeza que é armazenada no depósito de solução de limpeza 113 do depósito 101, ao recipiente de separação de células 102 através do tubo de solução de limpeza 152, do tubo comum 105 e do primeiro tubo de separação 155a. A solução de limpeza, cuja quantidade é maior do que a do tecido adiposo, passa através do primeiro tubo 122 do recipiente de separação de células 102.

[104] A unidade de rotação 120 repete a rotação do recipiente de separação de células 102 e interrompe a rotação do recipiente de separação de células 102. A solução de limpeza e o tecido adiposo são agitados pelas pás de agitação 124 no recipiente de separação de células 102. O tecido adiposo é limpo pela solução de limpeza, e o tecido adiposo, que é limpo no recipiente de separação de células 102, e o contaminante sanguíneo são gerados. Depois de o tecido adiposo estar completamente limpo, a unidade de rotação 120 deixa girar o recipiente de separação de células 102 e, em seguida, o tecido adiposo purificado e o contaminante sanguíneo são separados por gravidade devido às suas diferentes densidades. Consequentemente, o contaminante sanguíneo afunda no recipiente de separação de células 102 para formar uma camada inferior, e o tecido adiposo lavado flutua no contaminante sanguíneo para formar uma camada superior. O contaminante sanguíneo compreende a solução de limpeza, o sangue e um fluido corporal.

[105] Em seguida, a unidade de distribuição 106 fornece os rejeitos (isto é, o contaminante sanguíneo) do recipiente de separação de células 102 para o depósito de rejeitos 103 (S103) (ver Fig. 7). A etapa S103 é semelhante à etapa S102 com a exceção de o regulador de solução de limpeza 182 fechar o tubo de solução de limpeza 152 e o regulador de rejeitos 184 abrir o tubo de rejeitos 154. A unidade de distribuição 106 fornece o contaminante sanguíneo do recipiente de separação de células 102 ao depósito de rejeitos 103 através do primeiro tubo de separação 155a, do tubo comum 105 e do tubo de rejeitos 154. O contaminante sanguíneo passa através do primeiro tubo 122 do recipiente de separação de células 102. Ou seja, a etapa S103 remove o rejeito (isto é, o contaminante sanguíneo) que é gerado na etapa S102.

[106] Na etapa S103, o sensor 107, que está disposto no tubo de separação 155, detecta a concentração do contaminante sanguíneo que é descarregado e removido do recipiente de separação de células 102 pela unidade de distribuição 106. O contaminante sanguíneo removido é de cor vermelha devido ao fluido corporal ou ao sangue, e o tecido adiposo limpo é de cor amarela. Consequentemente, na etapa S103, se o sensor 107 detectar que o tecido adiposo limpo é de cor amarela, a unidade de distribuição 106 para e o primeiro regulador de separação 185a fecha o primeiro tubo de separação 155a. A etapa S103 é repetida até que o sensor 107 detecte que o tecido adiposo limpo é de cor amarela. Consequentemente, o tecido adiposo purificado pode ser impedido de ser descarregado do recipiente de separação de células 102.

[107] Quando o contaminante sanguíneo é fornecido pela unidade de distribuição 106, o sensor 107 detecta a concentração do rejeito (isto é, o contaminante sanguíneo). Se o sensor 107 detectar que a concentração do contaminante sanguíneo está abaixo de um nível predeterminado, a etapa seguinte é realizada. Se não, no entanto, a etapa S102 é repetida após a etapa S103 ter terminado. As etapas S102 e S103 são repetidas até que o sensor 107 detecte que a concentração do contaminante sanguíneo está abaixo do nível predeterminado. Portanto, o tecido adiposo pode ser completamente limpo pela solução de limpeza.

[108] Em seguida, a enzima é distribuída a partir do depósito de enzima 115 para o recipiente de separação de células 102 e é agitada com o tecido adiposo limpo por meio da rotação do recipiente de separação de células 102 pela unidade de rotação 120 (S104) (ver Fig. 8). A etapa S104 é semelhante à etapa S102 com a exceção de o regulador de solução de limpeza 182 fechar o tubo de solução de limpeza 152 e o regulador de enzima 183 abrir o tubo de enzima 153. A unidade de distribuição 106 entrega a enzima que é armazenada no depósito de enzima 115 do depósito 101, ao recipiente de separação de células 102 através do tubo de enzimas 153, o tubo comum 105 e o primeiro tubo de separação 155a. A enzima passa através do primeiro tubo 122 do recipiente de separação de células 102 e é entregue ao alojamento 121 do recipiente de separação de células 102.

[109] A unidade de rotação 120 repete a rotação do recipiente de separação de células 102 e interrompe a rotação do recipiente de separação de células 102. A enzima e o tecido adiposo purificado são agitados no recipiente de separação de células 102 pelas pás de agitação 124 e o tecido adiposo é digerido pela enzima. Consequentemente, o tecido adiposo digerido e a primeira solução aquosa são gerados no alojamento 121. Depois de o tecido adiposo ser completamente digerido, a unidade de rotação 120 deixa de fazer girar o recipiente de separação de células 102 e, em seguida, o tecido adiposo digerido e a primeira solução aquosa são separadas pela gravidade devido às suas densidades. A primeira solução aquosa afunda no recipiente de separação de células 102 para formar uma camada inferior, e o tecido adiposo digerido flutua na primeira solução aquosa para formar uma camada superior. A primeira solução aquosa compreende a célula-tronco e a enzima.

[110] Em seguida, a unidade de rotação 120 faz girar o recipiente de separação de células 102, o tecido adiposo digerido e a primeira solução aquosa são separados por centrifugação e a unidade de distribuição 106 distribui o tecido adiposo digerido do recipiente de separação de células 102 para o depósito de rejeitos 103 (S105) (ver Fig. 9). Na etapa S105, o recipiente de separação de células 102 efetua a centrifugação. O tecido adiposo digerido e a primeira solução aquosa se deslocam para o espaço de centrifugação 121a do alojamento 121 devido à força centrífuga gerada pela unidade de rotação 120. O tecido adiposo digerido e a primeira solução aquosa são separados pela força centrífuga devido às suas densidades. A primeira solução aquosa é disposta na superfície interna do espaço de centrifugação 121a para formar uma camada externa, o tecido adiposo digerido é colocado no interior da primeira solução aquosa para formar uma camada interna.

[111] Uma vez que a extremidade 123a do segundo tubo 123 entra em contato com o tecido adiposo digerido, o tecido adiposo digerido pode ser fornecido a partir do recipiente de separação de células 102 para o depósito de rejeitos 103 através do segundo tubo 123. A etapa S105 é semelhante à etapa S104 exceto que o regulador de enzima 183 fecha o tubo de enzima 153, o segundo regulador de separação 185b abre o segundo tubo de separação 155b, o primeiro regulador de separação 185a fecha o primeiro tubo de separação 155a e o regulador de rejeitos 184 abre o tubo de rejeitos 154. A unidade de distribuição 106 entrega o tecido adiposo digerido do recipiente de separação de células 102 ao depósito de rejeitos 103 através do segundo tubo de separação 155b, do tubo comum 105 e do tubo de rejeitos 154. O tecido adiposo digerido é descarregado do alojamento 121 através do segundo tubo 123 do recipiente de separação de células 102.

[112] Na etapa S105, o sensor 107, que está disposto no tubo de separação 155, detecta o tecido adiposo digerido que é separado e removido do recipiente de separação de células 102 pela unidade de distribuição 106. O tecido adiposo digerido removido é de cor amarela. Consequentemente, na etapa S106, se o sensor 107 não detectar um tecido adiposo purificado de cor amarela, a unidade de distribuição 106 para de funcionar e o segundo regulador de separação 185b fecha o segundo tubo de separação 155b. A etapa S105 é completada quando o sensor 107 detecta o tecido adiposo purificado de cor amarela.

[113] Em seguida, a solução de limpeza é distribuída a partir do depósito de solução de limpeza 113 para o recipiente de separação de células 102 e é agitada com a primeira solução aquosa pela rotação do recipiente de separação de células 102 pela unidade de rotação 120 (S106) (ver Fig. 10). A etapa S106 é semelhante à etapa S105 exceto que o regulador de solução de limpeza 182 abre o tubo de solução de limpeza 152, o segundo regulador de separação 185b fecha o segundo tubo de separação 155b e o primeiro regulador de separação 185a abre o primeiro tubo de separação 155a. A unidade de distribuição 106 fornece a solução de limpeza, que é armazenada no depósito de solução de limpeza 113 do depósito 101, no recipiente de separação de células 102 através do tubo de solução de limpeza 152, do tubo comum 105 e do tubo de separação 155 (particularmente, o primeiro tubo de separação 155a). A solução de limpeza é fornecida ao alojamento 121 através do primeiro tubo 122 do recipiente de separação de células 102.

[114] A unidade de rotação 120 repete a rotação do recipiente de separação de células 102 e interrompe a rotação do recipiente de separação de células 102. A célula-tronco na primeira solução aquosa é limpa pela solução de limpeza. A segunda solução aquosa é gerada pela mistura da primeira solução aquosa e da solução de limpeza. A segunda solução aquosa é uma solução aquosa na qual a solução de limpeza é misturada na primeira solução aquosa.

[115] Em seguida, a unidade de rotação 120 faz girar o recipiente de separação de células 102, a célula-tronco é separada pela centrifugação da segunda solução aquosa e a unidade de distribuição 106 fornece a célula-tronco extraída da segunda solução aquosa do recipiente de separação de células 102 para o depósito de rejeitos 103 (S107) (ver Fig. 11). Na etapa S107, o recipiente de separação de células 102 executa a centrifugação. A segunda solução aquosa de células-tronco extraídas (abaixo, “a segunda solução aquosa remanescente”) se desloca para o espaço de centrifugação 121a do alojamento 121 pela força centrífuga gerada pela unidade de rotação 120. A célula-tronco e a segunda solução aquosa remanescente são separadas pela força centrífuga devido às suas diferentes densidades. A célula-tronco é disposta na superfície interna do espaço de centrifugação 121a para formar uma camada externa e a segunda solução aquosa remanescente é disposta dentro da célula-tronco para formar uma camada interna.

[116] Uma vez que a extremidade 123a do segundo tubo 123 contata a segunda solução aquosa remanescente, a segunda solução aquosa remanescente pode ser fornecida a partir do recipiente de separação de células 102 para o depósito de rejeitos 103 através do segundo tubo 123. A etapa S107 é semelhante à etapa S106 exceto que o regulador de solução de limpeza 182 fecha o tubo de solução de limpeza 152, o primeiro regulador de separação 185a fecha o primeiro tubo de separação 155a, o segundo regulador de separação 185b abre o segundo tubo de separação 155b e o regulador de rejeitos 184 abre o tubo de rejeitos 154. A unidade de distribuição 106 fornece a segunda solução aquosa do recipiente de separação de células 102 ao depósito de rejeitos 103 através do segundo tubo de separação 155b, do tubo comum 105 e do tubo de rejeitos 154. A segunda solução aquosa é descarregada através do segundo tubo 123 do recipiente de separação de células 102.

[117] Em seguida, a solução de limpeza é fornecida a partir do depósito de solução de limpeza 113 para o recipiente de separação de células 102 e deixa cair à célula-tronco separada por centrifugação para gerar uma solução aquosa alvo (S108) (ver Fig. 12). A etapa S108 é semelhante à etapa S107 exceto que o regulador de solução de limpeza 182 abre o tubo de solução de limpeza 152 e o regulador de rejeitos 184 fecha o tubo de rejeitos 154. A unidade de distribuição 106 fornece a solução de limpeza que é armazenada no depósito de solução de limpeza 113 do depósito 101, ao recipiente de separação de células 102 através do tubo de solução de limpeza 152, o tubo comum 105 e o segundo tubo de separação 155b. A solução de limpeza passa através do segundo tubo 123 do recipiente de separação de células 102 e é lançada para o espaço de centrifugação 121a do alojamento 121 do recipiente de separação de células 102. A célula-tronco cai para a parte inferior do recipiente de separação de células 102 por meio da solução de limpeza para gerar a solução aquosa alvo. A solução aquosa alvo compreende a solução de limpeza e a célula-tronco flutua sobre a solução de limpeza.

[118] Em seguida, a unidade de distribuição 106 fornece a solução aquosa alvo do recipiente de separação de células 102 para a unidade de armazenamento de células 104 (S109) (ver Fig. 13). Na etapa S109, o primeiro regulador de separação 185a e o regulador de distribuição de células 186 abrem o primeiro tubo de separação 155a e o tubo de distribuição de células 156, respectivamente, e o tubo de tecido adiposo 151, o tubo de solução de limpeza 152, o tubo de enzima 153 e o tubo de rejeitos 154 estão fechados. A unidade de distribuição 106 fornece a solução aquosa alvo no recipiente de separação de células 102 a partir do recipiente de separação de células 102 para a unidade de armazenamento de células 104 através do primeiro tubo de separação 155a, do tubo comum 105 e do tubo de distribuição de células 156. A solução aquosa alvo passa através da unidade de filtração de células 104a e é entregue à unidade de armazenamento de células 104. Consequentemente, a célula-tronco é purificada e armazenada e cultivada na unidade de armazenamento de células 104.

[119] Pelo sistema e método acima explicados, em um recipiente de separação de células 102, a célula-tronco é separada do tecido adiposo, e o rejeito é descarregado e removido, sendo assim obtida apenas uma célula- tronco altamente pura. Particularmente, uma vez que apenas um recipiente de separação de células 102 é usado, o tempo e os custos para separar e extrair a célula-tronco podem ser poupados. Símbolos de referência 100: sistema de separação de células 101: depósito 111: depósito de tecido adiposo 113: depósito da solução de limpeza 115: depósito de enzimas 115a: unidade de regulação da temperatura 102: recipiente de separação de células 102a: unidade de regulação da temperatura 121: alojamento 121a: espaço de centrifugação 122: primeiro tubo 123: segundo tubo 123a: extremidade 124: pá de agitação 124a: orifício de passagem 125: descarregador de ar 126: unidade de rotação 127: depósito de rejeitos 128: unidade de armazenagem de células 104a: unidade de filtração de células 129: tubo comum 151: tubo de tecido adiposo 152: tubo de solução de limpeza 153: tubo de enzima 154: tubo de rejeitos 155: tubo de separação 155a: primeiro tubo de separação 155b: segundo tubo de separação 156: tubo de distribuição de células 106: unidade de distribuição 107: sensor 108: unidade de regulação 181: regulador de tecido adiposo 182: regulador de solução de limpeza 183: regulador de enzima 184: regulador de rejeitos 185: regulador de separação 185a: primeiro regulador de separação 185b: segundo regulador de separação 186: regulador de distribuição de células 109: unidade de controle

Claims

1. Recipiente de separação de células caracterizado porcompreender: um alojamento (121) que é rotativo em um eixo de rotação e tem um espaço de centrifugação (121a) no alojamento (121), em que o espaço de centrifugação (121a) se projeta de forma convexa de uma superfície lateral do alojamento (121) ao longo de uma direção circunferencial; um primeiro tubo (122) que é inserido no alojamento (121) em uma direção do eixo de rotação e liga um espaço interno do alojamento (121) com um espaço externo do alojamento (121) para que o fluido entre e saia através do primeiro tubo (122); um segundo tubo (123) que é inserido no alojamento na direção do eixo de rotação e liga o espaço interno do alojamento (121) com o espaço externo do alojamento (121), em que o segundo tubo (123) é dobrado de modo que uma extremidade do segundo tubo (123) é disposta no espaço de centrifugação (121a) para que o fluido entre e saia através do segundo tubo (123) e alguns dos produtos produzidos por separação centrífuga no espaço de centrifugação (121a) são descarregadas para o exterior do alojamento (121) através do segundo tubo (123); e uma pluralidade de pás de agitação (124) que se projetam de uma superfície interna do alojamento (121). em que o espaço de centrifugação (121a) é formado de modo a ser convexo externamente ao longo de toda a direção de rediscagem, em que o primeiro tubo (122) e o segundo tubo (123) são configurados para fixação sem rotação, quando o alojamento (121) gira em torno do eixo de rotação, em que o segundo tubo (123) está configurado para injetar uma solução de limpeza em direção ao lado interno do espaço de centrifugação (121a), de modo que a célula-tronco localizada no lado interno do espaço de centrifugação (121a) caia para a parte inferior do alojamento (121), em que o primeiro tubo (122) está configurado para descarregar a solução aquosa alvo localizada na parte inferior do alojamento (121).

2. Recipiente de separação de células (102) de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por: as pás de agitação (124) serem dispostas em uma parte inferior do alojamento (121) e serem dispostas em torno do primeiro tubo (122).

3. Recipiente de separação de células (102) de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por: as pás de agitação (124) terem uma pluralidade de orifícios de passagem(124a).

4. Recipiente de separação de células (102) de acordo com a reivindicação 1, caracterizado porcompreender ainda um descarregador de ar (125) que está disposto em uma parte superior do alojamento (121) e ligar o espaço interno do alojamento (121) ao espaço externo do alojamento (121), controlando assim uma pressão interna do alojamento (121) e tendo uma função de filtração de ar.

5. Recipiente de separação de células (102) de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por: o primeiro tubo (122) é estendido a uma distância predeterminada de uma superfície inferior do alojamento (121).

6. Recipiente de separação de células (102) de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por: o alojamento (121) é girado por um motor que está conectado a uma parte inferior do alojamento (121).

7. Método de separação de células usando o recipiente de separação de células (102) de acordo com a reivindicação 1, caracterizado poro método de separação de células compreender as etapas de: (a) proporcionar ao alojamento (121) um tecido adiposo através do primeiro tubo (122); (b) proporcionar ao alojamento (121) uma solução de limpeza através do primeiro tubo (122) e fazer girar o alojamento (121) para agitar o tecido adiposo e a solução de limpeza, os separando assim em um tecido adiposo limpo e um contaminante sanguíneo como uma camada superior e uma camada inferior, respectivamente, após o alojamento parar de girar; (c) remover o contaminante sanguíneo do alojamento (121) através do primeiro tubo (122); (d) proporcionar ao alojamento (121) uma enzima através do primeiro tubo (122) e fazer girar o alojamento (121) para agitar o tecido adiposo purificado e a enzima, os separando assim em um tecido adiposo digerido e uma primeira solução aquosa como camada superior e camada inferior, respectivamente, após o alojamento parar de girar; (e) remover o tecido adiposo digerido do alojamento (121) através do segundo tubo (123) enquanto o tecido adiposo digerido e a primeira solução aquosa são separados por centrifugação em uma camada interna e uma camada externa, respectivamente, no espaço de centrifugação (121a), girando o alojamento (121); (f) gerar uma segunda solução aquosa por mistura da primeira solução aquosa com uma solução de limpeza fornecida através do primeiro tubo (122) depois do alojamento (121) parar de girar; (g) separar por centrifugação a segunda solução aquosa em uma célula- tronco e uma segunda solução aquosa de células-tronco extraídas como uma camada externa e uma camada interna, respectivamente, no espaço de centrifugação (121a) pela rotação do alojamento (121) e durante a centrifugação da célula-tronco, remover a segunda solução aquosa extraída de células-tronco do alojamento (121) através do segundo tubo (123); e (h) gerar uma solução aquosa alvo misturando a célula-tronco com uma solução de limpeza fornecida através do segundo tubo (123) depois do alojamento (121) parar de girar e descarregar a solução aquosa alvo do alojamento (121) através do primeiro tubo (122).

8. Sistema de separação de células (100) caracterizado porcompreender: um depósito que armazena (101) um tecido adiposo, uma solução de limpeza e uma enzima separadamente; um recipiente de separação de células (102) que está ligado ao depósito (101) e fornecido com o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima a partir do depósito (101), em que o recipiente de separação de células (102) agita o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima proporcionada a partir do depósito (101) e separar por centrifugação uma célula-tronco; uma unidade de rotação (120) que está ligada ao recipiente de separação de células (102) e faz girar o recipiente de separação de células (102); um depósito de rejeitos (103) que está ligado ao recipiente de separação de células (102) e armazena os rejeitos fornecidos a partir do recipiente de separação de células (102), em que o rejeito é gerado em um processo de agitação do tecido adiposo, da solução de limpeza e da enzima e separação por centrifugação da célula- tronco no recipiente de separação de células (102); uma unidade de armazenamento de células (104) que está ligada ao recipiente de separação de células (102) e armazena a célula-tronco fornecida a partir do recipiente de separação de células (102), em que a célula-tronco é obtida pela agitação do tecido adiposo, da solução de limpeza e da enzima e separada por centrifugação do tecido adiposo; uma unidade de ligação que liga o recipiente de separação de células (102) ao depósito (101), ao depósito de rejeitos (103) e à unidade de armazenamento de células (104); e uma unidade de distribuição (106) que está disposta na unidade de ligação, em que a unidade de distribuição (106) entrega o tecido adiposo, a solução de limpeza e a enzima do depósito (101) para o recipiente de separação de células (102) através da unidade de ligação, entrega o rejeito do recipiente de separação de células (102) para o depósito de rejeito (103) e entrega a célula-tronco do recipiente de separação de células (102) para a unidade de armazenamento de células (104).

9. Sistema de separação de células (102), que compreende: um alojamento (121) que é rodado em um eixo de rotação e tem um espaço de centrifugação (121a) no alojamento (121), em que o espaço de centrifugação (121a) se projeta de forma convexa de uma superfície lateral do alojamento (121) ao longo de uma direção circunferencial; um primeiro tubo (122) que é inserido no alojamento (121) em uma direção do eixo de rotação e liga um espaço interno do alojamento com um espaço externo do alojamento (121) de modo que o fluido entre e saia através do primeiro tubo (122); um segundo tubo (123) que é inserido no alojamento (121) na direção do eixo de rotação e liga o espaço interno do alojamento (121) com o espaço externo do alojamento (121), em que o segundo tubo (123) é dobrado de modo que uma extremidade do segundo tubo (123a) é disposta na espaço de centrifugação(121a) de modo que o fluido entre e saia através do segundo tubo (123) e alguns dos produtos produzidos por separação centrífuga no espaço de centrifugação (121a) são descarregados para o exterior do alojamento (121) através do segundo tubo (123); e uma pluralidade de pás de agitação (124) que se projetam de uma superfície interna do alojamento (121).

10. Sistema de separação de células (100) de acordo com a reivindicação 9, caracterizado porcompreender ainda: um sensor (107) que é disposto na unidade de conexão entre o recipiente de separação de células (102) e a unidade de distribuição (106) e detecta uma concentração dos resíduos descarregados do recipiente de separação de células (102) pela unidade de distribuição (106).

11. Sistema de separação de células (100) de acordo com a reivindicação 9, caracterizado por: as pás de agitação (124) são dispostas em uma parte inferior do alojamento (121) e estão dispostas em torno do primeiro tubo (122).

12. Sistema de separação de células (100) de acordo com a reivindicação 9, caracterizado por as pás de agitação (124) têm uma pluralidade de orifícios de passagem.

13. Sistema de separação de células (100) de acordo com a reivindicação 9, caracterizado por o recipiente de separação celular (102) compreender ainda: um descarregador de ar (125) que é disposto na parte superior do alojamento (121) e conecta o espaço interno do alojamento (121) ao espaço externo do alojamento (121), controlando desse modo uma pressão interna do alojamento (121) e com uma função de filtragem de ar.

14. Sistema de separação de células (100) de acordo com a reivindicação 9, caracterizado por: o primeiro tubo (122) ser estendido em proximidade de uma superfície de fundo do alojamento (121).

15. Sistema de separação de células (100) de acordo com a reivindicação 9, caracterizado poro armazenamento (101) compreender: um depósito de tecido adiposo (111) que armazena o tecido adiposo e está ligado ao recipiente de separação de células (102) através da unidade de ligação; um depósito de solução de limpeza (113) que armazena a solução de limpeza e está ligado ao recipiente de separação de células (102) através da unidade de ligação; e um depósito de enzima (115) que armazena a enzima e está ligado ao recipiente de separação de células (102) através da unidade de ligação.

16. Sistema de separação de células (100) de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pora unidade de ligação compreender: um tubo comum (105) que está ligado à unidade de distribuição (106); um tubo de tecido adiposo (151) que liga o depósito de tecido adiposo (111) e o tubo comum (105); um tubo de solução de limpeza (152) que liga o depósito da solução de limpeza (113) e o tubo comum (105); um tubo de enzima (153) que liga o depósito de enzima (115) e o tubo comum (105); um tubo de rejeitos (154) que liga o depósito de rejeitos (103) e o tubo comum (105); um tubo de separação (155) que liga o recipiente de separação de células (102) e a unidade de distribuição (106); e um tubo de distribuição de células (156) que liga a unidade de armazenamento de células (104) e o tubo comum (105).

17. Sistema de separação de células (100) de acordo com a reivindicação 16, caracterizado porcompreender ainda uma unidade de regulação (108) que está disposta na unidade de ligação e abre ou fecha a unidade de ligação.

18. Sistema de separação de células (100) de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pora unidade de regulação compreender: um regulador de tecido adiposo (181) que está disposto no tubo de tecido adiposo (151) e abre ou fecha o tubo de tecido adiposo (151); um regulador de solução de limpeza (182) que está disposto no tubo de solução de limpeza (152), e abre ou fecha o tubo de solução de limpeza (152); um regulador de enzima (183) que está disposto no tubo de enzima (153), e abre ou fecha o tubo de enzima (153); um regulador de rejeitos (184) que está disposto no tubo de rejeitos (154) e abre ou fecha o tubo de rejeitos (154); um regulador de separação (185) que está disposto no tubo de separação (155) e abre ou fecha o tubo de separação (155); e um regulador de distribuição de células (186) que está disposto no tubo de distribuição de células (156) e abre ou fecha o tubo de distribuição de células (156).

19. Sistema de separação de células (100), de acordo com a reivindicação 17, caracterizado porcompreender ainda uma unidade de controle (109) que está ligada à unidade de rotação (120), à unidade de distribuição (106) e à unidade de regulação (108), em que a unidade de controle (109) controla a unidade de distribuição (106) e a unidade de regulação (108) para libertar o tecido adiposo, a solução de limpeza, a enzima, os resíduos e as células-tronco através da unidade de ligação, e controla a unidade de rotação (120) para girar o recipiente de separação de células (102).

20. Sistema de separação de células (100), de acordo com a reivindicação 15, caracterizado por: o depósito de enzimas (115) e o recipiente de separação de células (102) estarem ligados a uma unidade de regulação da temperatura (115a) e a unidade de regulação da temperatura (115a) manter a temperatura do armazenamento de enzima (115) e o recipiente de separação de células (102) entre 35 °C e 40 °C.

21. Sistema de separação de células (100), de acordo com a reivindicação 15, caracterizado por: o depósito de tecido adiposo (111), o armazenamento de enzima (115) e a unidade de armazenamento de células (104) serem uma seringa.

22. Sistema de separação de células (100), de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pora unidade de ligação compreender: um primeiro tubo de separação (155a) que liga a unidade de distribuição (106) ao primeiro tubo (122) do recipiente de separação de células (102) e é aberto ou fechado por um primeiro regulador de separação (185a); e um segundo tubo de separação (155b) que liga a unidade de distribuição (106) ao segundo tubo (123) do recipiente de separação de células (102) e é aberto ou fechado por um segundo regulador de separação (185b).

23. Sistema de separação de células (100), de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pora unidade de armazenamento de células (104) compreender: uma unidade de filtração de células (104a) que está disposta na unidade de ligação entre a unidade de armazenamento de células (104) e a unidade de distribuição (106) e filtra a célula-tronco distribuída à unidade de armazenamento de células através (104) da unidade de ligação.

24. Método de separação de células (100), de acordo com a reivindicação 9, caracterizado poro método de separação de células compreender as etapas de: (a) por uma unidade de distribuição (106), fornecer um tecido adiposo a partir de um depósito de tecido adiposo (111) para um recipiente de separação de células (102); (b) pela unidade de distribuição (106), distribuir uma solução de limpeza de um depósito de solução de limpeza (113) para o recipiente de separação de células (102) e por uma unidade de rotação (120), girar o recipiente de separação de células (102) para agitar o tecido adiposo e a solução de limpeza, os separando assim em um tecido purificado e um contaminante sanguíneo como uma camada superior e uma camada inferior, respectivamente, depois do recipiente de separação de células (102) parar de girar; (c) pela unidade de distribuição (106), distribuir o contaminante sanguíneo do recipiente de separação de células (102) para um depósito de rejeitos (103); (d) pela unidade de distribuição (106), distribuir uma enzima a partir de um depósito de enzima (115) para o recipiente de separação de células (102) e pela unidade de rotação (120), girar o recipiente de separação de células (102) para agitar a enzima e o tecido adiposo purificado, os separando assim em um tecido adiposo digerido e uma primeira solução aquosa como uma camada superior e uma camada inferior, respectivamente, depois do recipiente de separação de células (102) parar de girar; (e) pela unidade de distribuição (106), distribuir o tecido adiposo digerido do recipiente de separação de células (102) para o depósito de rejeitos (103) enquanto a unidade de rotação (120) gira o recipiente de separação de células (102), para separar por centrifugação o tecido adiposo digerido e a primeira solução aquosa em uma camada interna e uma camada externa, respectivamente; (f) após o recipiente de separação de células (102) parar de girar, pela unidade de distribuição (106), fornecer uma solução de limpeza ao recipiente de separação de células (102) e pelo recipiente de separação de células (102), agitar a primeira solução aquosa e a solução de limpeza para gerar uma segunda solução aquosa; (g) pela unidade de rotação (120), girar o recipiente de separação de células (102) para separar por centrifugação a segunda solução aquosa em uma célula-tronco e uma segunda solução aquosa com células-tronco extraídas como uma camada externa e uma camada interna respectivamente, e durante a centrifugação das células-tronco, pela unidade de distribuição (106), distribuir a segunda solução aquosa de células-tronco extraídas do recipiente de separação de células (102) para o depósito de rejeitos (103); (h) depois de o recipiente de separação de células (102) parar de girar, pela unidade de distribuição (106), fornecer uma solução de limpeza ao recipiente de separação de células (102) para gerar uma solução aquosa alvo por queda da célula- tronco separada por centrifugação usando a solução de limpeza; e (I) pela unidade de distribuição (106), liberar a solução aquosa alvo do recipiente de separação de células (102) para uma unidade de armazenamento de células (104).

25. Método de separação de células, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado por: a etapa (c) ser repetida até que o sensor (107) detecte o tecido adiposo purificado.

26. Método de separação de células, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado por: as etapas (b) e (c) serem repetidas até que o sensor (107) detecte o contaminante sanguíneo que tem uma concentração inferior a um valor predeterminado na etapa (c).

27. Método de separação de células, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado poro recipiente de separação de células (102) compreender: um alojamento (121) que é rotativo em um eixo de rotação por uma unidade de rotação (120) e tem um espaço de centrifugação (121a) no alojamento (121), em que o espaço de centrifugação (121a)se projeta de forma convexa de uma superfície lateral do alojamento (121) ao longo de uma direção circunferencial; um primeiro tubo (122) que é inserido no alojamento (121) em uma direção do eixo de rotação e liga um espaço interno do alojamento (121) com um espaço externo do alojamento (121); um segundo tubo (123) que é inserido no alojamento (121) na direção do eixo de rotação e liga o espaço interno do alojamento (121) com o espaço externo do alojamento (121), em que o segundo tubo (123) é dobrado de modo que uma extremidade do segundo tubo (123) é disposta no espaço de centrifugação (121a); e uma pluralidade de pás de agitação (124) que se projetam de uma superfície interna do alojamento (121).

28. Método de separação de células, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado por: o primeiro tubo (122) ser usado nas etapas (a), (b), (c), (d), (f) e (i) e o segundo tubo (123) ser usado nas etapas (e), (g) e (h).

29. Método de separação de células, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado por: na etapa (e), o tecido adiposo digerido e a primeira solução aquosa serem separados por centrifugação em uma camada interna e uma camada externa, respectivamente, no espaço de centrifugação (121a); e na etapa (g), a célula-tronco e a segunda solução aquosa com células- tronco extraídas serem separadas por centrifugação em uma camada externa e uma camada interna, respectivamente, no espaço de centrifugação (121a).