BR112016004372B1 - método para a remoção de uma tatuagem em uma região da pele e composição para remover ou clarear uma tatuagem - Google Patents

Abstract

COMPOSIÇÕES E MÉTODOS PARA A REMOÇÃO DE TATUAGENS. A presente invenção refere-se a um método para a remoção de uma tatuagem numa região da pele. O método compreende a administração, a pelo menos uma parte da tatuagem, de uma composição que compreende uma quantidade eficaz de um bifosfonato e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável para causar, pelo menos, o desbotamento da tatuagem na referida região.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA AOS PEDIDOS ANTERIORES

[001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório dos Estados Unidos No. 61/871.929 depositado em 30 de agosto de 2013, a divulgação do qual é aqui incorporada por referência em sua totalidade.

CAMPO

[002] A presente invenção refere-se, geralmente, a composições e à sua utilização no tratamento e remoção de arte corporal, particularmente, na remoção de tatuagens.

FUNDAMENTOS

[003] As afirmações contidas nesta seção apresentam, meramente, informações fundamentais relacionadas à presente divulgação e não podem constituir técnica anterior.

[004] As tatuagens são um método popular de arte corporal, e há um número estimado de 20-30 milhões de indivíduos tatuados no mundo. Aproximadamente 50% das pessoas que fazem tatuagens se arrependem da totalidade ou de parte de suas tatuagens e quer removê-las completamente, ou desbotá-las o suficiente para permitir a retatuagem de um novo projeto sobre a antiga tatuagem. Atualmente, não existem métodos fiáveis, seguros, consistentes, ou a preços acessíveis para remoção de tatuagens. Terapias à base de laser são o padrão de atendimento e mostraram-se eficientes em tatuagens muito específicas (ou seja, tipo de pigmento, tamanho e cor da pele do paciente), mas possuem várias deficiências que impedem muitos de procurar este tratamento. Tatuagens profissionais são criadas por injeção de tintas de tatuagem com uma agulha rápida e oscilante que impulsiona partículas de tinta na derme a uma profundidade de 0,6 mm a 2,2 mm. As tintas utilizadas na tatuagem são derivadas de pigmentos exógenos. Pigmentos em tinta de tatuagem podem incluir óxidos de ferro, óxido de crômio, óxido de alumínio, óxido de titânio, sulfato de bário, óxido de zinco, silicato de cobre de sódio, silicato de alumínio e sódio, carbonato de cobre, dioxazina e carbazol, entre outras formulações de pigmento conhecidos. Após a injeção de partículas de pigmento de tinta em uma região da pele, as partículas de pigmento da tinta passam a residir no espaço intersticial entre as células dérmicas onde formam agregados grandes de cerca de 100μm a 200μm até que fibroblastos ou macrófagos envolvam as partículas de pigmento e internalizem a tinta de tatuagem. O tamanho dos agregados de partículas de tinta e a rede de colágeno em torno dos agregados ajudar a manter os pigmentos da tinta dentro da pele tornando a tatuagem permanente, daí a dificuldade da remoção de tatuagens.

[005] A remoção de tatuagens depende de vários fatores, incluindo o tamanho da tatuagem, localização da tatuagem, processo de cura do indivíduo, como a tatuagem foi aplicada e quanto tempo está na pele. Tatuagens naturalmente desaparecem ao longo do tempo devido à exposição ao sol e à resposta do sistema imunológico a corpos estranhos (ou seja, partículas de pigmento de tinta). Terapias à base de laser utilizam as emissões de luz de alta energia em comprimentos de onda específicos, em essência, para acelerar e melhorar a especificidade da decomposição natural de tinta de tatuagem por exposição ao sol. Como tintas de tatuagem variam em cor e, consequentemente, os comprimentos de onda de absorção, lasers com diferentes comprimentos de onda de emissão são necessários para remover pigmentos específicos, essencialmente exigindo tratamentos com laser avançados e caros com lasers sofisticados que podem emitir vários comprimentos de onda. A luz de alta energia decompõe a tinta residente em corpos residuais, permitindo que a resposta imune natural continue. As desvantagens de terapias à base de laser para remoção de tatuagem incluem, e não se limitam a, acessibilidade, disponibilidade, confiabilidade, consistência, dor e desconforto associados, hipo ou hiperpigmentação da pele e cicatrizes. Outras modalidades de tratamento comumente aceitas para remoção de tatuagem incluem dermoabrasão e remoção cirúrgica que pode aumentar ainda mais o risco de efeitos colaterais adversos e potenciais marcas irreversíveis deixadas no processo de remoção.

[006] Além de tatuagens do corpo que são mais prevalentes, tatuagens cosméticas ou "maquiagem permanente" também são problemas de pele que muitos tentam remover com laser, dermoabrasão e tratamentos cirúrgicos. Em alguns exemplos de tatuagens cosméticas, muitas vezes procura-se remover sobrancelhas tatuadas, delineador e lápis de boca.

[007] Quando se trabalha em torno da área do olho com laser ou tratamento cirúrgico, deve ser tomado cuidado especial para garantir que não há nenhum dano ocular, o que torna necessário o uso de escudos protetores de olho que ficam na córnea durante a remoção de tatuagens de delineador permanente. O laser utilizado para remover estes pigmentos pode também remover pelos (mas apenas temporariamente) e isto pode ser um problema quando se remove tatuagens de delineador e sobrancelha.

[008] Além disso, com tatuagens cosméticas, é possível que uma mudança de cor ocorra, por exemplo, uma tatuagem de lápis de boca cor de rosa pode tornar-se verde escuro ou preto. Embora esta cor mais escura possa ser tratada com o laser, é possível que ela não pareça esteticamente agradável durante o período de eliminação e aumente ainda mais o inconveniente, tempo e custos para a remoção permanente.

[009] IBIS World (Relatório de Pesquisa de Mercado dos Praticantes de Remoção de Tatuagens, Jan 2012) avalia o mercado de remoção de tatuagem em U$66 milhões e determinou um crescimento anual de 21% a partir de 2007-2012. Para colocar o desembolso em perspectiva, o custo inicial médio por polegada quadrada da remoção de tatuagem pode variar de cerca de US $100,00 para US $150.00 (média de aproximadamente US$ 125 por tratamento) e leva 6-10 tratamentos, dependendo do tamanho e das cores de tinta para obliterar a maioria das tatuagens. Por isso, é razoável acreditar que o custo da remoção de uma tatuagem com as terapias a laser é muito maior do que o custo original da tatuagem. Disto deriva que seria desejável uma terapia alternativa tanto da perspectiva de um cliente quanto de uma perspectiva econômica.

[0010] Para, pelo menos, as razões apresentadas acima, existe uma necessidade de proporcionar procedimentos dermatológicos para métodos seguros, confiáveis e econômicos para a remoção ou atenuação de tatuagens permanentes.

SUMÁRIO

[0011] A presente tecnologia proporciona novas composições para a remover e desbotar tatuagens aplicadas sobre a pele de um sujeito mamífero.

[0012] Em um outro aspecto, a presente tecnologia proporciona um método para a remoção de uma tatuagem em uma região da pele. O método compreende: a administração a, pelo menos, uma parte da tatuagem, de uma composição que compreende uma quantidade eficaz de um bifosfonato e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável, para pelo menos causar o desbotamento da tatuagem na referida região.

[0013] Em um aspecto, a composição é uma composição administrável via intradérmica, uma composição para administração tópica ou um dispositivo transdérmico. Em um aspecto relacionado, a composição proporciona partículas de bifosfonato adequadas para administração em uma região da pele para remover ou desbotar uma tatuagem.

[0014] Outras áreas de aplicabilidade se tornarão aparentes apartir da descrição apresentada neste documento. Deve ser entendido que a descrição e os exemplos específicos são destinados a ilustração apenas e não se destinam a limitar o escopo da presente divulgação de qualquer maneira.

DESENHOS

[0015] Os desenhos aqui descritos são apenas para fins ilustrativos e não se destinam a limitar o âmbito da presente divulgação de qualquer forma.

[0016] FIG. 1A representa uma fotomicrografia representando a pele que foi tratada com lipossomas de clodronato marcadas de forma fluorescente com um corante verde. Na FIG. 1A, a fotomicrografia ilustra as camadas dérmicas marcadas com setas brancas para indicar tinta de tatuagem engolfadas por macrófagos, como visto com microscopia de luz.

[0017] FIG. 1B representa uma fotomicrografia representando a pele que foi tratada com lipossomas de clodronato marcados de forma fluorescente com um corante verde. Na FIG. 1B, a fotomicrografia ilustra as camadas dérmicas marcadas com setas brancas para indicar tinta de tatuagem e lipossomas clodronatos engolfados por macrófagos, como visto com microscopia de luz.

[0018] FIG. 1C representa uma fotomicrografia representando a pele que foi tratada com lipossomas de clodronato marcados de forma fluorescente com um corante verde. Na FIG. 1C, a fotomicrografia ilustra uma sobreposição das estruturas de microscopia de luz com a presença de macrófagos que fagocitaram os lipossomas de clodronato, como pode ser visto por microscopia de fluorescência.

[0019] FIG. 1D mostra uma fotomicrografia que representa uma seção de tecido de linfonodos em um animal sob microscopia de luz que foi tratada com lipossomas de clodronato marcados de forma fluorescente com um corante verde 24 horas antes. Na FIG. 1D, a fotomicrografia ilustra linfonodo em animais tratados 24 horas antes do sacrifício.

[0020] FIG. 1E mostra uma fotomicrografia que representa uma seção de tecido de linfonodos em um animal que foi tratada com lipossomas de clodronato marcados de forma fluorescente com um corante verde 24 horas antes. Na FIG. 1E, a fotomicrografia ilustra o linfonodo visto sob microscopia de fluorescência, para visualizar macrófagos que indicam lipossomas clodronato digeridos em animais tratados 24 horas antes do sacrifício.

[0021] FIG. 1F mostra uma fotomicrografia que representa uma seção de tecido de linfonodos em um animal que foi tratada com lipossomas de clodronato marcados de forma fluorescente com um corante verde 2 semanas antes. Na FIG. 1F, a fotomicrografia ilustra o linfonodo visto como uma sobreposição sob microscopia de fluorescência quanto à presença de macrófagos que fagocitaram os lipossomas de clodronato em animais tratados 24 horas antes do sacrifício.

[0022] FIG. 1G mostra uma fotomicrografia que representa uma seção de tecido de linfonodos em um animal sob microscopia de luz que foi tratado com lipossomas de clodronato marcados de forma fluorescente com um corante verde 2 semanas antes. Na FIG. 1G, a fotomicrografia ilustra linfonodo em animais tratados 2 semanas antes do sacrifício.

[0023] FIG. 1H mostra uma fotomicrografia que representa seção de tecido de linfonodos em um animal que foi tratado com lipossomas de clodronato marcados de forma fluorescente com um corante verde 2 semanas antes. Na FIG. 1H, a fotomicrografia ilustra o linfonodo visto sob microscopia de fluorescência, para visualizar macrófagos que indicam lipossomas clodronato digeridos em animais tratados 2 semanas antes do sacrifício.

[0024] FIG. 1I mostra uma fotomicrografia que representa seção de tecido de linfonodos em um animal que foi tratado com lipossomas de clodronato marcados de forma fluorescente com um corante verde 2 semanas antes. Na FIG. 1I, a fotomicrografia ilustra o linfonodo visto como uma sobreposição sob microscopia de fluorescência quanto à presença de macrófagos que fagocitaram os lipossomas de clodronato em animais tratados 2 semanas antes do sacrifício.

[0025] FIG. 2 representa uma fotomicrografia representando o tecido da pele dérmica em um animal experimental tratados com lipossomas de clodronato da presente tecnologia e um anticorpo apoptose para ilustrar a presença de macrófagos em apoptose. Como pode ser visto na FIG. 2, macrófagos apoptóticos são vistos com partículas de tinta de tatuagem digerida.

[0026] FIG. 3 mostra uma fotomicrografia que representa o tecido da pele dérmica, em um animal experimental, manchado com hematoxilina e eosina, que foi tatuado e deixado para curar durante 12 semanas.

[0027] FIG. 4A representa uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de luz de uma seção de tecido de pele dérmica tatuada após 24 horas em um animal experimental tratado com lipossomas de clodronato marcados de forma fluorescente da presente tecnologia.

[0028] FIG. 4B mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de fluorescência de uma seção de tecido de pele dérmica tatuada após 24 horas em um animal experimental tratados com clodronato marcado de forma fluorescente que contémos li- possomas da presente tecnologia.

[0029] FIG. 4C mostra uma fotomicrografia representando a imagem de microscopia de luz sobreposta sobre a imagem de microscopia de fluorescência da seção de tecido de pele dérmica tatuada após 24 horas em um animal experimental tratados com clodronato marcado de forma fluorescente que contém lipossomas da presente tecnologia.

[0030] FIG. 5A mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de fluorescência de uma seção de tecido de pele dérmica obtida após 24 horas em um animal experimental tratados com clodronato marcado de forma fluorescente que contém os lipossomas da presente tecnologia.

[0031] FIG. 5B mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de fluorescência de uma seção de tecido de pele dérmica obtida após 2 dias em um animal experimental tratados com clodronato marcado de forma fluorescente que contém os lipossomas da presente tecnologia.

[0032] FIG. 5C mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de fluorescência de uma seção de tecido de pele dérmica obtida após 5 dias em um animal experimental tratados com clodronato marcado de forma fluorescente que contém os lipossomas da presente tecnologia.

[0033] FIG. 5D mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de fluorescência de uma seção de tecido de pele dérmica obtida após 7 dias em um animal experimental tratados com clodronato marcado de forma fluorescente que contém os lipossomas da presente tecnologia.

[0034] FIG. 5E mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de fluorescência de uma seção de tecido de pele dérmica obtida após 14 dias em um animal experimental tratados com clodronato marcado de forma fluorescente que contém os lipos- somas da presente tecnologia.

[0035] FIG. 6A mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de luz de uma seção de tecido de pele dérmica tatuada obtidos depois de 2 dias após o tratamento, em um animal experimental tratado com clodronato que contêm lipossomas que identificam apoptose em células da derme.

[0036] FIG. 6B mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de luz de uma seção de tecido de linfonodos obtida depois de 2 dias após o tratamento em um animal experimental tatuado tratado com clodronato que contêm lipossomas que identificam apoptose em células da derme. Note-se que a falta de coloração TUNEL indica uma falta de células apoptóticas no linfonodo.

[0037] FIG. 7 mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de fluorescência de uma seção de tecido de linfonodos obtida após 7 dias em um animal experimental tatuado tratados com os lipossomas de clodronato marcado de forma fluorescente da presente tecnologia. Células CD11b+ que migram a partir da pele para o linfonodo são identificados na seção de tecido de linfonodo, como mostrado por coloração com CD11b positiva após o tratamento com o clodronato que contém lipossomas da presente tecnologia.

[0038] FIG. 8A mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de luz de uma seção de tecido de pele dérmico tatuado e não tratado obtida 7 dias após a aplicação de tatuagem.

[0039] FIG. 8B mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de luz de uma seção de tecido de pele dérmica tatuada obtidos depois de 7 dias após o tratamento, em um animal experimental tratado com clodronato que contêm lipossomas.

[0040] FIG. 8C mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de luz de uma seção de tecido de pele dérmico tatuado e não tratado obtida 14 dias após a aplicação de tatuagem.

[0041] FIG. 8D mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de luz de uma seção de tecido de pele dérmica tatuada obtidos depois de 14 dias após o tratamento, em um animal experimental tratado com clodronato que contêm lipossomas.

[0042] FIG. 9A mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de luz de uma seção de tecido de linfonodos obtida 1 dia após o tratamento em um animal experimental tatuado tratado com os lipossomas de clodronato da presente tecnologia marcados de forma fluorescente.

[0043] FIG. 9B mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de fluorescência de uma seção de tecido de linfonodos obtida 1 após o tratamento em um animal experimental tatuado tratados com os lipossomas de clodronato marcado de forma fluorescente da presente tecnologia.

[0044] FIG. 9C mostra uma fotomicrografia representando a imagem de microscopia de luz sobreposta sobre a imagem de microscopia de fluorescência de uma seção de tecido de linfonodo depois de 1 dia após o tratamento em um animal experimental tatuado tratados com clodronato marcado de forma fluorescente que contém os lipossomas da presente tecnologia.

[0045] FIG. 9D mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de luz de uma seção de tecido de linfonodos obtida 14 dias após o tratamento em um animal experimental tatuado tratado com os lipossomas de clodronato da presente tecnologia marcados de forma fluorescente.

[0046] FIG. 9E mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de fluorescência de uma seção de tecido de linfonodos obtida 14 dias após tratamento em um animal experimental tatuado tratados com os lipossomas de clodronato marcado de forma fluorescente da presente tecnologia.

[0047] FIG. 9F mostra uma fotomicrografia representando a imagem de microscopia de luz sobreposta sobre a imagem de microscopia de fluorescência de uma seção de tecido de linfonodo depois de 14 dias após o tratamento em um animal experimental tatuado tratados com clodronato marcado de forma fluorescente que contém os lipossomas da presente tecnologia.

[0048] FIG. 9G mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de fluorescência de uma seção de tecido de linfonodos obtida 14 dias após tratamento em um animal experimental tatuado tratados com os lipossomas de clodronato marcado de forma fluorescente da presente tecnologia. Co-localização de tinta de tatuagem e lipossomas de clodronato marcados de forma fluorescente/restos de células são indicados por setas brancas.

[0049] FIG. 10 mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de fluorescência de uma seção de tecido de linfonodos obtida 14 dias após tratamento em um animal experimental tatuado tratados com os lipossomas presente tecnologia e manchados com o marcador de células fagocitadas CD11b. Co-localização de lipossomas de clodronato marcado por fluorescência/restos de célula e a mancha de CD11b+ estão indicados por setas brancas.

[0050] FIG. 11A mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de fluorescência de uma seção de tecido de linfonodos obtida 1 dia após tratamento em um animal experimental tatuado tratados com os lipossomas de clodronato marcado de forma fluorescente da presente tecnologia.

[0051] FIG. 11B mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de fluorescência de uma seção de tecido de linfonodos obtida 2 dias após tratamento em um animal experimental tatuado tratados com os lipossomas de clodronato marcado de forma fluorescente da presente tecnologia.

[0052] FIG. 11C mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de fluorescência de uma seção de tecido de linfonodos obtida 5 dias após tratamento em um animal experimental tatuado tratados com os lipossomas de clodronato marcado de forma fluorescente da presente tecnologia.

[0053] FIG. 11D mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de fluorescência de uma seção de tecido de linfonodos obtida 7 dias após tratamento em um animal experimental tatuado tratados com os lipossomas de clodronato marcado de forma fluorescente da presente tecnologia.

[0054] FIG. 11E mostra uma fotomicrografia representando uma imagem de microscopia de fluorescência de uma seção de tecido de linfonodos obtida 14 dias após tratamento em um animal experimental tatuado tratados com os lipossomas de clodronato marcado de forma fluorescente da presente tecnologia.

[0055] FIG. 12A mostra uma fotomicrografia que representa uma imagem de microscopia de luz de uma seção de tecido da pele dérmica tatuado colhida após 12 semanas de tratamento com um controle lipossomal em um animal experimental. Os animais foram tratados uma vez por semana durante 12 semanas.

[0056] FIG. 12B mostra uma fotomicrografia que representa uma imagem de microscopia de luz de uma seção de tecido da pele dérmica tatuada colhida após 12 semanas de tratamento com lipossomas de clodronato da presente tecnologia em um animal experimental. Os animais foram tratados uma vez por semana durante 12 semanas.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0057] A descrição seguinte é meramente exemplar na natureza e não se destina a limitar a presente divulgação, aplicação ou usos.

[0058] A seguinte descrição da tecnologia é meramente exemplar na natureza do assunto em questão, fabricação e uso de umas ou mais invenções, e não se destina a limitar o âmbito do escopo, pedido, ou pedidos, de qualquer invenção específica reivindicada neste pedido de patente ou em quaisquer outros pedidos que podem ser apresentados reivindicando prioridade a este pedido, ou emissão de patentes do mesmo. As seguintes definições e orientações não limitantes devem ser consideradas na análise da descrição da tecnologia aqui estabelecida. Todas as referências citadas na seção "Descrição" do presente relatório descritivo são aqui incorporadas por referência na sua totalidade.

[0059] A descrição e os exemplos específicos, embora indiquem modalidades da tecnologia, são destinados para fins de ilustração unicamente e não se destinam a limitar o âmbito da tecnologia. Além disso, a recitação de várias modalidades que têm as características acima mencionadas, não pretende excluir outras modalidades que têm características adicionais, ou outras modalidades que incorporam diferentes combinações das características indicadas. Os exemplos específicos são fornecidos para fins ilustrativos de como fazer e usar as composições e métodos da presente tecnologia e, a menos que explicitamente indicado de outro modo, não se destinam a ser uma representação do fato de que dadas modalidades desta tecnologia foram, ou que não foram feitas ou testadas.

[0060] Tal como aqui utilizado, os termos "preferido" e "preferivelmente" referem-se a modalidades da tecnologia que proporcionam certas vantagens, em certas circunstâncias. No entanto, outras modalidades podem também ser preferidas, de acordo com as mesmas ou outras circunstâncias. Além disso, a recitação de uma ou mais modalidades preferenciais não implica que outras modalidades não são úteis, e não se pretende excluir outras modalidades do âmbito da tecnologia.

[0061] Como aqui referido, todas as percentagens de composição são em peso da composição total, salvo indicação em contrário. Tal como aqui utilizado, a palavra "incluir", e suas variantes, destina-se a ser não limitativa, de tal forma que a recitação de itens em uma lista não é para a exclusão de outros itens semelhantes, que podem também ser úteis nos materiais, composições, dispositivos, e métodos desta tecnologia. Da mesma forma, os termos "pode" e "podem" e suas variantes não pretendem ser limitativos, de tal forma que a recitação de que uma modalidade pode compreender certos elementos ou características não exclui outras modalidades da presente tecnologia que não contêm aqueles elementos ou características.

[0062] Divulgação de valores e intervalos de valores para parâmetros específicos (tais como temperaturas, pesos moleculares, percentagens em peso, etc.) não excluem outros valores e intervalos de valores aqui úteis. Prevê-se que dois ou mais valores específicos exemplificados para um dado parâmetro podem definir pontos de terminação para um intervalo de valores que pode ser requerido para o parâmetro. Por exemplo, se o parâmetro X é aqui exemplificado como tendo valor A e também exemplificado como tendo valor de Z, está previsto que o parâmetro X pode ter uma gama de valores de cerca de A a cerca de Z. Do mesmo modo, prevê-se que a divulgação de duas ou mais faixas de valores para um parâmetro (sejam estas faixas agrupadas, sobrepostas ou distintas) inclui todas as combinações possíveis de faixas para o valor que podem ser reivindicadas usando os pontos finais dos intervalos divulgados. Por exemplo, se o parâmetro X é aqui exemplificado para ter valores nos intervalos de 1 10, ou 2 9, ou 3 8, é também previsto que o parâmetro X pode ter valores em outros intervalos, incluindo 1 9, 1 8, 1 3, 1 2, 2 10, 2 8, 2 3, 3 10, e 3 9.

[0063] Embora o termo aberto "compreende", como um sinônimo de termos tais como inclui, que contém, ou que tenham, é usado aqui para descrever e reivindicar a presente invenção, a invenção, ou suas modalidades, pode ser alternativamente descrita usando termos mais limitativos tais como "que consiste em" ou "consistindo essencialmente em" os ingredientes referidos.

[0064] Em várias modalidades, a presente invenção proporciona um método para a remoção de uma tatuagem em uma região da pele. O método compreende: a administração, a pelo menos uma parte da tatuagem, de uma composição que compreende uma quantidade eficaz de um bifosfonato e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável, para pelo menos causar o desbotamento da tatuagem na região da pele.

[0065] Uma "tatuagem" é uma porção de pele em que a tinta de tatuagem foi incorporada.

[0066] Em várias modalidades, o termo "remoção de uma tatuagem" de uma região de pele significa extrair, por exemplo, através de deslocamento, tinta de tatuagem (pigmento de tinta ou partículas de tinta) da região do tecido subjacente ou em torno da tatuagem, e inclui desalojar e retirar partículas de tinta suficientes para provocar algum desbotamento, com ou sem a eliminação total, da tatuagem na região da pele a ser tratada. "Remoção" de uma tatuagem de uma região de pele, significa, de forma semelhante, ter extraído a tinta de tatuagem do tecido suficientemente para provocar algum desbotamento, com ou sem a eliminação total, da tatuagem.

[0067] Tal como aqui utilizado, o termo "partícula" refere-se a moléculas portadoras totalmente fechadas que podem ser fagocitadas pelas células fagocitárias, incluindo, mas não se limitando a, partículas poliméricas, microcápsulas, lipossomas, microesferas, microemulsões, nanopartículas, nanocápsulas e nanoesferas. Em várias modalidades, as partículas de bifosfonato são partículas contendo um ou mais bifosfonato, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemihidratos, solvatos e seus derivados. Os bifosfonatos, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e os seus derivados são liberados da partícula de bifosfonato uma vez que a partícula bifosfonato foi engolida pela célula fagocitária. Em várias modalidades, as partículas de bifosfonato da presente tecnologia podem medir (diâmetro e/ou comprimento) de cerca de 0,01 mícron a cerca de 30 mícrons, de preferência entre cerca de 0,05 mícrons e cerca de 25 mícrons, ou entre cerca de 0,1 mícron a cerca de 20 mícrons (μm), ou a partir de cerca de 0,1 microns a cerca de 10 microns, ou desde cerca de 0,1 mícron a cerca de 1 mícron. Composições

[0068] O presente inventor identificou uma classe de fármacos, bifosfonatos, que são úteis na redução e na destruição de células fagocitárias que ingeriram pigmento de tinta de tatuagem e particulas de tinta de tatuagem, reduzindo assim a quantidade de pigmento de tinta visiveis e particulas de uma tatuagem na pele tratada. Acredita-se que, durante e imediatamente após a tinta de tatuagem ter sido incorporada na pele de um sujeito, a célula fagocitária envolvida na resposta imune ingere o pigmento da tinta de tatuagem e particulas e transportá-o para o linfonodo de drenagem através do sistema linfático. Uma proporção menor das células fagocitárias permanece no local da tatuagem nos espaços perivasculares. Estas células fagocitárias armazenam o pigmento da tinta de tatuagem e particulas indigestos em corpos residuais onde ele pode residir por décadas, sendo assim responsável pela permanência de uma tatuagem.

[0069] Os bifosfonatos como uma classe de fármacos são pensados para inibir a reabsorção óssea osteoclástica por meio de um mecanismo que difere de outros agentes anti-reabsorção. Acredita-se que os bifosfonatos se prendem a locais de aderência de hidroxiapatita nas superficies ósseas, especialmente superficies submetidas a reabsorção ativa. Quando os osteoclastos começam a reabsorver o osso que está impregnado com bifosfonato, o bifosfonato liberado durante a reabsorção prejudica a capacidade dos osteoclastos em formar a borda enrugada, para aderir à superfície óssea, e em produzir os prótons necessários para a contínua reabsorção do osso. Os bifosfonatos também reduzem a atividade dos osteoclastos, diminuindo o desenvolvimento e recrutamento do osteoclasto progenitor e promovendo apoptose de osteoclastos. Em adição ao seu efeito inibitório sobre osteoclastos, os bifosfonatos parecem ter efeitos benéficos sobre os osteoblastos. Em um modelo murino de osteoporose induzida por glucocorticoides, os bifosfonatos impediram a apoptose de osteoblastos e osteócitos. Os bifosfonatos são comumente empregues medicamente para inibir a reabsorção óssea e, por conseguinte, eles encontram utilidade no tratamento de hipercalcemia, osteoporose, doença óssea metastática, e doença de Paget. Os bifosfonatos têm todos em comum a estrutura P-C-P, que é semelhante à estrutura P-O-P de pirofosfato nativo e diferem uns dos outros apenas nos dois grupos "R". Alguns bifosfonatos, por exemplo, neridronato, ibandronato, pamidronato, risedronato, e ácido zoledrônico tem um grupo de nitrogênio e são chamados bifosfonatos que contém nitrogênio, em contraste com o etidronato e tiludronato, que não o tem.

[0070] Os termos "bifosfonato" e "difosfonato", tal como aqui utilizado, incluem os ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemihidratos, solvatos e seus derivados.

[0071] Em várias modalidades, bifosfonato, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e os seus derivados são utilizados em composições da presente tecnologia para remover células fagocitárias residentes e não residentes que digeriram pigmento de tinta de tatuagem e partículas na região perivascular de camadas dérmicas do sujeito.

[0072] Exemplos de células fagocitárias incluem, mas não estão limitados a células do sistema fagocitário mononuclear, incluindo, mas não se limitando a macrófagos e monócitos circulantes. Outras células capazes de fagocitose incluem, por exemplo, neutrófilos, células dendríticas, e fibroblastos. Mais preferencialmente as células fagocitárias são macrófagos e/ou monócitos. De acordo com este aspecto da presente invenção, a inibição de células fagocitárias inclui a redução do número de eliminação (ou seja, morte), retardar a proliferação e/ou reduzir a atividade de células fagocitárias (por exemplo, reduzindo a capacidade de fagocitose ou de secretar citocinas). Agentes farmacêuticos capazes de inibir células fagocitárias são descritos aqui a seguir.

[0073] Em várias modalidades, as composições da presente tecnologia de contém, pelo menos, um bifosfonato, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e seus derivados selecionados de entre: alendronato, cimadronato, incadronato, clodronato, etidronates, risedronate, zoledronato, ibandronato, minodronato, pamidronato, piridronato, tiludronato, olpadronato, neridronato, YH529, EB 1053 e ISA-13-1. Pelo menos um desses bifosfonatos, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemihidratos, solvatos e os seus derivados é formulado com pelo menos um veículo, excipiente ou diluente, pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável para formar uma composição de remoção de tatuagem que pode ser aplicada a pelo menos uma porção de uma tatuagem por métodos de administração aqui divulgados.

[0074] Em algumas modalidades, o bifosfonato, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e os seus derivados podem ser misturados com o, pelo menos, um transportador excipiente ou diluente farmaceuticamente aceitável, ou o bifosfonato, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e os seus derivados podem ser encapsulados em uma partícula, formando, assim, uma partícula de bifosfonato. Tal como aqui utilizado, uma partícula de bifosfonato pode incluir: lipossomas, microesferas, nanoesferas, bicamadas lipídicas, nanopartículas, micropartículas, microcápsulas, nanocápsulas e semelhantes. A partícula pode ter uma parede exterior que define um espaço interior que pode ser preenchido com o bifosfonato, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e seus derivados. Em algumas modalidades, a partícula pode compreender pelo menos um material biodegradável, por exemplo, um ou mais lipídios (por exemplo, um lipossoma que forma lipídio), PGLA, silício, celulose, minerais inorgânicos (por exemplo, cerâmicas à base de cálcio) que degradam quando ingeridos ou fagocitados por uma célula fagocitária. Tal como aqui utilizado, o termo fagocitose também abrange formas de endocitose, incluindo, mas não se limitando a, pinocitose, endocitose mediada por receptor e outros meios de absorção celular/internalização de pigmento da tinta de tatuagem ou partículas de tinta de material nas camadas da derme da pele.

[0075] A quantidade de dosagem do bifosfonato, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e seus derivados e o intervalo podem ser ajustados individualmente para proporcionar níveis intradérmicos de pele do bifosfonato, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e seus derivados que são suficientes para induzir o efeito biológico (concentração eficaz, CE). A CE irá variar para cada preparação, mas pode ser estimada a partir de dados in vitro. As dosagens necessárias para atingir a CE dependerão de vários fatores relacionados com o sujeito a ser tratado e da via de administração. Os ensaios de detecção podem ser utilizados para determinar as concentrações de plasma dos lipossomas e/ou níveis dos bifosfonatos, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e seus derivados administrados.

[0076] Em algumas modalidades, as composições da presente tecnologia podem ser administradas a uma região da pele usando um meio injetável. Em algumas modalidades, uma composição injetável pode compreender partículas de bifosfonato contendo, pelo menos, um bifosfonato, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e os seus derivados e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável. Em várias modalidades, as partículas de bifosfonato podem incluir lipossomas, microesferas, nanoesferas, bicamadas lipídicas, nanopartículas, micropartículas, microcápsulas, nanocápsulas e semelhantes.

[0077] De acordo com este aspecto da presente tecnologia, as partículas de bifosfonato são preparadas de tal modo que o tamanho da partícula de bifosfonato é suficientemente grande para, essencialmente, ser internalizada por fagocitose, dirigindo, assim, as composições da presente tecnologia especificamente para células fagocitárias. Partículas de bifosfonato que variam de cerca de 0,01μm a cerca de 5,0μm, de preferência entre cerca de 0,05μm a cerca de 1μm, podem ser empregues em métodos da presente invenção. Em algumas modalidades, bifosfonato, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e seus derivados contendo partículas são orientados diretamente para células fagocitárias nas camadas da derme da pele do sujeito são, de preferência na gama de tamanho de 0,02-2,5 μm, mais preferivelmente 0,05-1,0μm e, mais preferencialmente, 0,07-0,7μm.

[0078] A partícula bifosfonato pode ser provida em qualquer forma adequada, incluindo, mas não se limitando a uma solução, uma suspensão, uma emulsão, ou qualquer forma de mistura. A partícula de bifosfonato pode ser entregue em formulação com qualquer excipiente, transportador ou veículo farmaceuticamente aceitável. Por exemplo, a formulação pode ser administrada em uma forma de dosagem tópica convencional, tal como, por exemplo, um creme, uma pomada, uma formulação em aerossol, uma pulverização não aerossol, um gel, uma espuma, uma solução, uma suspensão, uma dispersão, uma emulsão, uma microemulsão, uma pasta, um pó, um bastonete sólido (por exemplo, varas à base de cera ou petróleo), um toalhete, um óleo, uma loção, e semelhantes. Em uma modalidade particular, a partícula de bifosfonato é fornecida em uma formulação de creme adequado para administração tópica. Em uma outra modalidade, a partícula de bifosfonato é fornecida como uma formulação injetável, por exemplo, uma formulação intradérmica.

[0079] Em várias modalidades, a partícula pode compreender um ou mais bifosfonatos em mistura com um excipiente farmaceuticamente aceitável. Excipientes farmaceuticamente aceitáveis para utilização com partículas de bifosfonato podem incluir um ou mais de um veículo, um diluente, um aglutinante, um lipídio, por exemplo, colesterol, azeite, etc., um lipossoma que forma lipídios, um polímero de eluição de fármaco ou de monômero, um intensificador de penetração epitelial, por exemplo, um álcool inferior (por exemplo metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, ou suas combinações), um agente quelante, um agente emulsionante e tensoativo, um agente espessante, um modificador de pH, um analgésico, um antibiótico, um agente anti-inflamatório, um anestésico, um ésteroide, e um agente quelante (por exemplo: etileno diamina tetra acetato (EDTA), desferrioxamina, clioquinol, ácido etileno-glicol tetra-acético (EGTA), pequenos quelantes hidrofóbicos, tais como fenantrolina ou bipiridina, ferro hexadentado quelante e deferoxamina (também conhecido como desferrioxamina, desferoxamina, DFO, DFOA ou Desferal).

[0080] Em uma modalidade específica, a partícula de bifosfonato é um lipossoma que contém um ou mais bifosfonatos, difosfonatos, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos, ou os seus derivados. Nesta modalidade, os lipossomas úteis na presente tecnologia podem incluir qualquer estrutura sintética (vesículas unilamelares ou multilamelares), que é feita com lipídios lipossomas em uma fase líquida cristalina ou uma fase de gel líquido, que encerram um volume de líquido que compreende um bifosfonato, difosfonato ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e os seus derivados. Em algumas modalidades, os lipossomas podem ser revestidos (por exemplo, com albumina) ou não revestidos.

[0081] Em algumas modalidades, os lipossomas podem incluir emulsões, espumas, micelas, monocamadas insolúveis, cristais líquidos, dispersões de fosfolipídio, camadas lamelares e semelhantes. Os lipossomas podem ser preparados por qualquer um dos métodos conhecidos na técnica. Os lipossomas podem ter carga positiva, neutra ou, preferencialmente, terem carga negativa. Em várias modalidades, o lipossoma pode compreender colesterol, um lipídio formador de lipossomas e, opcionalmente, um polímero poli-iônico. Em algumas dessas modalidades, o lipossoma que forma lipídio selecionado a partir do grupo que consiste de fosfatidilcolina de soja hidrogenada, diestearoil fosfatidilcolina, esfingomielina, diacilglicerol, fosfatidiletanolamina, fosfatidilglicerol, fosfatidilserina, diestearoil fosfatidilcolina e distearil fosfatidiletanolamina e suas combinações.

[0082] Em várias modalidades, os lipossomas da presente tecnologia podem também compreender um tensoativo não iônico. Em alguns exemplos, o tensoativo não iônico pode incluir: polioxil 35, polioxil 40 óleo de rícino hidrogenado (Cremophor RH 40), e polioxil 60 óleo de rícino hidrogenado (Cremophor RH 60), bem como d-α-tocoferol, succinato de polietileno glicol 1000, polissorbato 20, polissorbato 80, monolaurato de sorbitano (Span 20), monopalmitato de sorbitano (Span 40); Monoestearato de sorbitano (Span 60); Monooleato de sorbitano (Span 80), Solutol HS 15, Poloxamero 407, Labrafil M-1944CS, Labrafil M-2125CS, Labrasol, Gellucire 44/1. Em algumas modalidades, o tensoativo não iônico é o monooleato de sorbitano.

[0083] Como detalhado acima, muitas propriedades influenciam a absorção de lipossomas pelas células fagocitárias, incluindo, mas não se limitando, ao tamanho do lipossoma, carga e hidrofobicidade, bem como os fosfolipídios e componentes não fosfolipídicos dos lipossomas.

[0084] Os lipossomas podem ser modificados de qualquer outra maneira para melhorar a sua absorção pelas células fagocitárias, por exemplo, ligando-os a moléculas reconhecidas seletivamente pelas células fagocitárias, tais como ligantes que interagem com o receptor de Fc de macrófagos, proteínas séricas, tais como albumina, ou ligante galactosil, ou inclusão de substâncias na bicamada tais como complemento, fibronectina, lipoproteínas, albuminas ou globulina gama.

[0085] Os lipossomas podem ser uma camada única de lipídio ou podem ser multilamelares. Se o agente capaz de inibir as células fagocitárias é hidrofílico, a sua entrega pode ser ainda melhorada com a utilização de vesículas unilamelares grandes, devido ao seu maior volume interno. Por outro lado, se o agente é hidrofóbico, a sua entrega pode ser ainda melhorada usando vesículas multilamelares. Alternativamente, o agente capaz de suprarregulação das células fagocitárias (por exemplo, oligonucleótidos) pode não ser capaz de penetrar a camada dupla de lipídios e, consequentemente, iria permanecer adsorvido na superfície do lipossoma. Neste caso, o aumento da área da superfície do lipossoma pode melhorar ainda mais a distribuição do agente terapêutico. Os lipossomas adequados, de acordo com a invenção, são de preferência os lipossomas não tóxicos, tais como, por exemplo, os que são preparados a partir de qualquer um, ou mais de um, de fosfatidilcolina, diestearoil fosfatidilcolina, esfingomielina, diacilglicerol, fosfatidiletanolamina, fosfatidilglicerol, distearil fosfatidilcolina e distearil fosfatidiletanolamina, e colesterol. O diâmetro dos lipossomas utilizados varia de preferência entre cerca de 0,05-25 mícrons, por exemplo, a cerca de 0,1 mícron a cerca de 10 mícrons, ou desde cerca de 0,08 a cerca de 1,0 mícron. No entanto, outro tamanho de lipossoma ou variação de diâmetro apropriada para fagocitose por células fagocitárias podem também ser utilizados, e podem variar muito entre os tipos de células, tais como monócitos e macrófagos. Em algumas modalidades, os lipossomas podem variar de diâmetro de entre, por exemplo, 0,01 mícron a cerca de 20 mícrons, ou, por exemplo, desde cerca de 0,1 mícron a cerca de 10 mícrons, ou de cerca de 0,008 mícrons a cerca de 1 mícron. Para medir o tamanho de lipossomas pode-se utilizar homogeneização, o que depende de energia de cisalhamento para fragmentar lipossomas grandes em menores. Homogeneizadores, que podem ser convenientemente usados, incluem microfluidizadores produzidos por Microfluidics de Boston, Mass. Em um procedimento típico de homogeneização, os lipossomas são recirculados através de um homogeneizador de emulsão padrão até que tamanhos selecionados de lipossomas sejam observados. A distribuição do tamanho de partícula pode ser monitorizada por discriminação de tamanho de partícula por feixe de laser convencional. A extrusão de lipossomas através de uma membrana de policarbonato de poros pequenos ou através de uma membrana cerâmica assimétrica é um método eficaz para reduzir os tamanhos de lipossoma para uma distribuição de tamanho relativamente bem definida. Tipicamente, a suspensão é circulada através da membrana uma ou mais vezes até que a distribuição de tamanho de lipossomas desejada seja atingida. Os lipossomas podem ser extrudados através de membranas de poros sucessivamente menores para atingir uma redução gradual no tamanho do lipossoma.

[0086] Em algumas modalidades, os lipossomas da presente tecnologia compreendem um bifosfonato, por exemplo, clodronato, encapsulado em um lipossoma feito de fosfatidilcolina de soja hidrogenada na função de lipídio formador de lipossomas. Os lipossomas podem também conter clodronato monooleato de sorbitano. Os métodos para produção de clodronato que contém lipossomas são conhecidos, por exemplo, como fornecida em: Van Rooijen, N, Sanders, A. (1994) Depleção mediada por lipossomas de macrófagos: mecanismo de ação, a preparação de lipossomas e aplicações, J. Immunol. Methods 174: 8393, cuja divulgação é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Em algumas modalidades, os lipossomas de clodronato podem ser produzidos por mistura de um lipídio formador de lipossoma com colesterol e com uma solução de clodronato (variando de cerca de 0,1 a cerca de 1,5 M) e aplicando ultra-sons à mistura suavemente. Os lipossomas resultantes podem ser, então, dialisados, centrifugados, ou de outra forma lavados para remover o clodronato livre antes da administração ou formulação em uma dose tópica, transdérmica ou injetável. Em algumas modalidades, os lipossomas de clodronato em injeções prontas (lipossoma de clodronato multilamelar encapsulado) encontram-se comercialmente disponíveis a partir de Encapsula NanoScience, (Brentwood, TN EUA).

[0087] A quantidade de uma composição a ser administrada irá, claro, ser dependente do sujeito a ser tratado, da gravidade da aflição, do modo de administração, da decisão do médico que prescreve, etc. A concentração de partículas de bifosfonato nestas formulações pode variar amplamente, isto é, desde menos do que cerca de 0,5%, normalmente em torno de, ou pelo menos até mesmo 15 ou 20%, em peso, e será selecionada principalmente por volume de fluido, viscosidades, etc., de acordo com o modo particular de administração selecionado.

[0088] Em uma modalidade, o bifosfonato aprisionado, encapsulado ou capturado usado em conexão com as formulações e métodos da presente tecnologia pode ter uma concentração que varia entre cerca de 0,7 M a cerca de 0,001M. Em algumas modalidades, a quantidade de bifosfonato em relação à quantidade da partícula pode representar desde cerca de menos do que cerca de 0,5%, a cerca de 20% da partícula (por exemplo, lipossomas), em uma base molar e 0,05 a 10% em uma base por peso. Descrito pela proporção, em algumas concretizações, as partículas de lipossomas têm uma proporção de bifosfonato encapsulado para lipídio (em uma base molar) de cerca de 1: 3 a 1: 250 e uma proporção de bifosfonato encapsulado para lipídio (em uma base por peso) de cerca de 1: 10 a 1: 2000. Em algumas modalidades, a proporção molar de bifosfonato encapsulado, por exemplo, clodronato, para lipídios na preparação lipossômica pode variar de 1: 4 a 3: 4. Em algumas modalidades, a proporção em peso de bifosfonato para lipídio pode variar de 1: 3 a 1:10. Em várias modalidades, as partículas de bifosfonato podem ser formuladas para produzir um creme, uma pomada, uma formulação em aerossol, uma pulverização que não é em aerossol, um gel, uma espuma, uma solução, uma suspensão, uma dispersão, uma emulsão, uma microemulsão, um pasta, um pó, um bastonete sólido (por exemplo, varas, ou à base de cera ou petróleo), uma toalhete, um óleo, uma loção, de tal modo que, quando administrado a uma região da pele, seja através de uma aplicação tópica, de um dispositivo transdérmico, tal como um adesivo, ou injetado por via intradérmica, a dose administrada da formulação de partículas de bifosfonato fornece desde cerca de 1 nanograma de bifosfonato por 50 microgramas de tecido intradérmico até de cerca de 25 microgramas de bifosfonato por 50 microgramas de tecido em uma base por peso. Em outras modalidades, as formulações da presente tecnologia compreendem de cerca de 2% a cerca de 20% (% em peso/volume) dos lipossomas, em que a proporção de bifosfonato para lipídio nos lipos- somas varia de 1: 3 a 1: 250 em uma base por peso.

[0089] Em algumas modalidades, as várias composições de lipossomas compreendem lipossomas que contém de 0,1 mg/mL a cerca de 1.000 mg/mL do bifosfonato, por exemplo, clodronato dentro dos lipossomas, preferencialmente, desde cerca de 1 mg/mL a cerca de 500 mg/mL. Em algumas modalidades, a razão molar de bifosfonato, por exemplo, o clodronato, para lipídios no lipossoma pode variar de cerca de 1:4 a cerca de 3:4. Em várias modalidades, a solubilidade máxima do bifosfonato utilizado, por exemplo, clodronato, pode variar de cerca de 100 mg/mL a cerca de 300 mg/mL. Em várias modalidades, as partículas de lipossomas da presente invenção retêm cerca de 0,5% a cerca de 5%, ou desde cerca de 1% a cerca de 2% de um bifosfonato, por exemplo, uma solução de clodronato (com uma concentração de cerca de 200 mg/mL a cerca de 300 mg/mL). Em várias modalidades, a proporção em peso de bifosfonato para lipídio nos lipossomas preparados pode variar desde cerca de 1: 3 a cerca de 1:10. Em algumas modalidades, a proporção molar de bifosfonato encapsulado, por exemplo, clodronato, para lipídios na preparação lipossômica pode variar de 1: 4 a 3: 4. Em algumas modalidades, a proporção em peso de bifosfonato, por exemplo, clodronato, para lipídio pode variar de 1:2 a 1:10, por exemplo, desde cerca de 1: 3 a cerca de 1:10.

[0090] Qualquer método conhecido na arte pode ser utilizado para determinar o tamanho de partícula antes da administração a um paciente em necessidade do mesmo. Por exemplo, um Nicomp Submícron Particle Sizer (model 370, Nicomp, Santa Barbara, Calif.) utilizando dispersão de luz de laser pode ser utilizado. Outros métodos de medição de tamanho de partículas são também conhecidos na técnica.

[0091] Determinação do tamanho, formulação e/ou quantidade ideais de uma partícula a ser ingerida por uma célula fagocitária podem ser determinadas utilizando procedimentos conhecidos na técnica, tais como os ensaios descritos no Pedido de patente N°. 20040266734 e Pedido de de patente dos Estados Unido N°. 20040266734; e em Danenberg et al, Journal of cardiovascular pharmacology 2003 , 42: 671-9; Circulação 2002, 106: 599-605; Circulação 2003, 108: 2798-804. Em um ensaio de varredura in vitro, a absorção de lipossomas pode ser visualmente inspecionada utilizando-se de cultura in vitro de tecidos de macrófagos. As células fagocitárias podem ser obtidas a partir de uma linha de células estabelecida ou isoladas a partir de um indivíduo como uma linha de células primária. Em um ensaio in vivo, as partículas de bifosfonato podem ser administradas a um sujeito de teste (por exemplo, um sujeito experimental, um camundongo ou um coelho) e depois de um determinado período de tempo, os tecidos podem ser removidos e examinados utilizando-se microscopia confocal para a evidência de ingestão por células fagocitárias de partículas de bifosfonato e depleção de células fagocitárias. Da mesma forma, a depleção de células fagocitárias que contêm pigmento ou partículas de tinta pode igualmente ser visualizada utilizando-se de microscopia confocal.

[0092] Tipicamente, as partículas da presente invenção sequestram o bifosfonato, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e os seus derivados, capazes de inibir células fagocitárias durante um tempo suficiente para aumentar a entrega do bifosfonato, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e os seus derivados, e tornarem-se biodisponíveis quando eles são digeridos pelas células fagocitárias na região perivascular de pele tratada do sujeito. Além disso, o bifosfonato, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemihidratos, solvatos e os seus derivados são tipicamente liberados das partículas de bifosfonato quando são ingeridos pela célula alvo (por exemplo, a célula fagocitária) no local alvo.

[0093] Além de soluções, suspensões, dispersões, emulsões, microemulsões, pastas e pós que podem ser injetados por via intradérmica, as partículas de bifosfonato também pode ser formuladas e administradas na forma de formulações tópicas, tais como cremes, pomadas, formulações de aerossol, um spray não aerossol, géis, espumas, e quaisquer outras formulações tópicas conhecidas e medicamente aceitáveis, que são conhecidos na técnica e descritas em "Remington: The Science And Practice Of Pharmacy", 1577-1591, 16721673, 866-885 (ed. Alfonso R. Gennaro, ed 19 de 1995.); Ghosh, T.K.; et al. Transdermal And Topical Drug Delivery Systems (1997), ambas as quais são aqui incorporadas por referência.

[0094] Assim, as composições farmacêuticas para uso de acordo com a presente invenção podem ser formuladas de maneira convencional usando um ou mais transportadores fisiologicamente aceitáveis, compreendendo excipientes e auxiliares que facilitam o processamento dos ingredientes ativos em preparações que podem ser usadas farmaceuticamente. Uma formulação específica é dependente da via de administração escolhida, e do agente. Em uma modalidade, a composição é aplicada topicamente à pele de uma região que contém pelo menos uma parte de uma tatuagem. Uma composição administrável topicamente que pode ser utilizada em modalidades da presente invenção que compreende um transportador farmaceuticamente aceitável e uma quantidade terapeuticamente eficaz de um bifosfonato, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e seus derivados. Os veículos úteis para a entrega tópica de compostos especificados de acordo com modalidades da invenção pode ser qualquer transportador conhecido na arte para a administração tópica de fármacos, incluindo, mas não se limitando a, solventes farmaceuticamente aceitáveis, tais como um poliálcool ou água; emulsões (quer emulsões óleo-em-água ou água-em-óleo), tais como loções ou cremes; micro emulsões; géis; pomadas; lipossomas; nanopartículas ou micropartículas, pós; e soluções ou suspensões aquosas. O transportador farmaceuticamente aceitável e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis inativos, incluindo, mas não se limitando a, ligantes, veículos, diluentes, agentes de suspensão, lubrificantes, emulsionantes, aromatizantes, conservantes, corantes e revestimentos.

[0095] A composição administrável topicamente, é preparada por mistura de um transportador farmaceuticamente aceitável com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um bifosfonato, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e os seus derivados, de acordo com métodos conhecidos na técnica, por exemplo, os métodos fornecidos por textos de referência padrão, tais como, Remington: The Science And Practice Of Pharmacy", 15771591, 1672-1673, 866-885 (ed. Alfonso R. Gennaro, ed 19 de 1995.); Ghosh, T.K.; et al. Transdermal And Topical Drug Delivery Systems (1997), ambas as quais são aqui incorporadas por referência.

[0096] Em uma modalidade, a composição é administrável topicamente, sob a forma de uma emulsão. Emulsões, tais como cremes e loções são formulações tópicas adequadas para utilização na invenção. Uma emulsão é um sistema disperso compreendendo pelo menos duas fases imiscíveis, uma fase dispersa na outra forma de gotículas que variam em diâmetro de 0,1μm a 100μm. Um agente emulsionante está tipicamente incluído para melhorar a estabilidade. Quando a água é a fase dispersa e o óleo é o meio de dispersão, a emulsão é denominada uma emulsão de água-em-óleo. Quando o óleo é disperso como gotículas em toda a fase aquosa como gotículas, a emulsão é denominada uma emulsão de óleo-em-água. Emulsões, tais como cremes e loções que podem ser utilizadas como veículos tópicos e a sua preparação estão descritas em Remington: The Science and Practice of Pharmacy", 282-291 (ed. Alfonso R. Gennaro, ed 19 1995), incorporado aqui por referência.

[0097] Em uma outra modalidade, a composição é administrável topicamente, sob a forma de um gel, por exemplo, um gel de duas fases ou um gel de fase única. Os géis são sistemas semissólidos consistindo de suspensões de partículas inorgânicas pequenas ou de grandes moléculas orgânicas interpenetradas por um líquido. Quando a massa de gel inclui uma rede de pequenas partículas inorgânicos discretas, é classificada como um gel de duas fases. Géis de fase única consistem em macromoléculas orgânicas uniformemente distribuídas por todo um líquido de tal modo que não existam fronteiras aparentes entre as macromoléculas dispersas e o líquido. Géis adequados para utilização na invenção são descritas em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 1517-1518 (ed. Alfonso R. Gennaro, ed 19 1995), incorporado aqui por referência.

[0098] Em uma modalidade, a composição topicamente administrável compreende um gel aquoso que compreende uma água e uma quantidade de água de gelificação de um agente farmaceuticamente aceitável selecionado a partir do grupo que consiste em carbômeros, poliacrilatos de glicerina e suas misturas, e a composição tópica tem um pH fisiologicamente aceitável.

[0099] Espessantes de polímeros (agentes gelificantes) que podem ser utilizados nas composições de acordo com modalidades da presente invenção incluem os que são conhecidos para uma pessoa versada na técnica, tais como agentes gelificantes hidrófilos e hidroalcoólicos usados frequentemente nas indústrias cosmética e farmacêutica. De preferência, o agente gelificante hidrófilo ou hidroalcoólico compreende "CARBOPOL®" (B.F. Goodrich, Cleveland, Ohio), "HYPAN®" (Kingston Technologies, Dayton, N.J.), "NATROSOL®" (Aqualon, Wilmington, Del.), "KLUCEL®" (Aqualon, Wilmington, Del.), ou "STABILEZE®" (ISP Technologies, Wayne, N.J.). De preferência, o agente gelificante compreende entre cerca de 0,2% a cerca de 4% do peso da composição. Mais particularmente, o percentual preferencial em peso para composição "CARBOPOL®" está entre cerca de 0,5% a cerca de 2%, enquanto que o percentual preferencial em peso para "NATROLSOL®" e "KLUCEL®" está entre cerca de 0,5% a cerca de 4%. O percentual preferencial em peso da composição para ambos "HYPAN®" e "STABILEZE®" está entre 0,5% a cerca de 4%.

[00100] "CARBOPOL®" é um dos numerosos polímeros de ácido acrílico com ligações cruzadas aos quais se dá o nome normalmente adotado de carbômero. Estes polímeros dissolvem-se em água e formam um gel transparente ou ligeiramente turvo, uma vez que neutralizados com um material cáustico tal como hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, trietanolamina ou outras bases amina. "KLUCEL®" é um polímero de celulose que é disperso em água e forma um gel uniforme por hidratação completa. Outros polímeros gelificantes preferidos incluem hidroxi-etilcelulose, goma de celulose, MVE/MA crospolímero de decadieno, copolímero de PVM/MA ou uma combinação destes.

[00101] Em uma outra modalidade preferida, a composição é administrável topicamente, sob a forma de uma pomada. As pomadas são semissólidos oleaginosas que contêm pouca ou nenhuma água. Preferencialmente, a pomada é à base de hidrocarbonetos, tal como uma cera, petrolato ou óleo mineral gelificado. Pomadas adequadas para utilização na invenção são bem conhecidos na técnica e são descritas em Remington: The Science and Practice of Pharmacy", 1585-1591 (ed. Alfonso R. Gennaro, ed 19 1995), incorporado aqui por referência.

[00102] Em uma modalidade da presente invenção, a composição administrável topicamente, compreende, pelo menos, um destes: um creme, uma emulsão, uma espuma, uma pomada, uma dispersão, uma pasta, um spray, uma solução, um óleo, ou uma micro-emulsão, em que as composições tópicas compreendem uma partícula de bifosfonato e, pelo menos, um agente selecionado a partir do grupo que consiste em: ácido esteárico, monooleato de sorbitano (Span80), álcool estearílico, álcool cetílico, etanol, glicerina, polietileno-glicol, água, e suas misturas, e a composição tópica tem um pH fisiologicamente aceitável.

[00103] Em uma outra modalidade, a composição administrável topicamente está sob a forma de uma solução aquosa ou suspensão, de preferência, uma solução aquosa. Formulações tópicas aquosas adequadas para uso na invenção incluem aquelas divulgadas em (ed. Alfonso R. Gennaro ed 19 1995), incorporado aqui por referência.

[00104] O pH das formulações tópicas da invenção é, de preferência dentro de pH fisiologicamente aceitável, por exemplo, dentro do intervalo de cerca de 6 a cerca de 8, mais preferencialmente, de cerca de 6,3 a cerca de 6,5. Para estabilizar o pH, de preferência, uma quantidade eficaz de um tampão é incluída. Em uma modalidade, o agente tampão está presente na formulação tópica aquosa em uma quantidade de cerca de 0,05 a cerca de 1 por cento em peso da formulação. Ácidos ou bases podem ser usados para ajustar o pH como necessário.

[00105] Agentes de ajuste de tonicidade podem ser incluídos nas formulações tópicas aquosas para serem utilizados em modalidades da presente invenção. Exemplos de agentes de ajuste de tonicidade adequados incluem, mas não estão limitados a cloreto de sódio, cloreto de potássio, manitol, dextrose, glicerina, polietileno glicol, e propileno glicol. A quantidade de agente de tonicidade pode variar muito, dependendo das propriedades desejadas para formulação. Em uma modalidade, o agente de ajuste de tonicidade está presente na formulação tópica aquosa em uma quantidade de cerca de 0,5 a cerca de 0,9 por cento em peso da formulação.

[00106] De preferência, as formulações tópicas aquosas têm uma viscosidade na gama de desde cerca de 15 cps a cerca de 25 cps. A viscosidade das soluções aquosas da presente invenção pode ser ajustada por adição de agentes de ajuste de viscosidade, por exemplo, mas não limitados a álcool polivinílico, povidona, hidroxipropil metilcelulose, poloxameros, carboximetilcelulose, ou celulose hidroxietil.

[00107] Em uma modalidade preferencial, a formulação tópica aquosa é uma solução salina isotônica que compreende um conservante, tal como cloreto de benzalcônio ou o dióxido de cloro, um agente de ajuste de viscosidade, tal como álcool polivinílico, e um sistema tampão tal como citrato de sódio e ácido cítrico.

[00108] A composição administrável topicamente pode compreender excipientes farmaceuticamente aceitáveis, tais como os listados em Remington: The Science And Practice Of Pharmacy, 866-885 (ed. Alfonso R. Gennaro, ed 19 de 1995.); Ghosh, T.K.; et al. Transdermal And Topical Drug Delivery Systems (1997), aqui incorporada por referência, incluindo, mas não limitada a, protetores, adsorventes, demulcentes, emolientes, conservantes, antioxidantes, hidratantes, agentes de tamponamento, agentes solubilizantes, agentes de penetração de pele, e surfactantes.

[00109] Protetores e adsorventes apropriados incluem, mas não estão limitados a pós para polvilhar, estearato de zinco, colódio, dimeticona, silicones, carbonato de zinco, gel de aloé vera e outros produtos de aloé, óleo de vitamina E, alantoína, glicerina, petrolato, e óxido de zinco.

[00110] Demulcentes adequados incluem, mas não estão limitados a benzoína, celulose hidroxipropil, metilcelulose hidroxipropil, e álcool polivinílico.

[00111] Emolientes adequados incluem, mas não estão limitados a gorduras animais e vegetais, óleos, álcool miristílico, alúmen, e acetato de alumínio.

[00112] Em uma modalidade da presente invenção, a composição administrável por via tópica compreende ainda um ou mais agentes selecionados a partir do grupo constituído por um conservante, um anestésico local e um umectante da pele.

[00113] Os conservantes adequados incluem, mas não estão limitados a, compostos de amônia quaternários, tais como cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio, cetrimida, cloreto de dequalínio, cloreto de cetilpiridínio; agentes mercuriais, tais como nitrato fenilmercúrio, acetato fenilmercúrio e timerosal; agentes alcoólicos, por exemplo, clorobutanol, álcool feniletílico e álcool benzílico; dióxido de cloro estabilizado, por exemplo, o dióxido de cloro estabilizado de BioCide International, Inc. of Norman, Okla., vendido sob a marca registada Purogene ™ ou Purite ™. Outros produtos adequados de dióxido de cloro estabilizado incluem o vendido sob a marca registada DuraKlor® por Rio Linda Chemical Company, Inc., e que é vendido sob a marca registada Antheium Dioxide® de ésteres antibacterianos da International Dioxide, Inc. por exemplo, ácido para-hidroxibenzoico de éster; e outros agentes anti-microbianos tais como clorexidina, clorocresol, ácido benzoico e polimixina.

[00114] Os antioxidantes adequados incluem, mas não estão limitados a ácido ascórbico e os seus ésteres, bissulfito de sódio, hidroxitolueno butilado, hidroxianisol butilado, tocoferol, e agentes quelantes, como EDTA e ácido cítrico.

[00115] Hidratantes adequados incluem, mas não estão limitados a glicerina, sorbitol, polietilenoglicóis, ureia e propilenoglicol.

[00116] Os agentes tampão adequados para utilização com a invenção incluem, mas não estão limitados a tampões acetato, tampões citrato, tampões de fosfato, tampões de ácido láctico, e tampões borato.

[00117] Agentes de solubilização adequados incluem, mas não estão limitados a cloretos de amônia quaternário, ciclodextrinas, benzoato de benzilo, lecitina, ésteres de sorbitano, e polisorbatos.

[00118] Agentes de penetração de pele adequados incluem, mas não estão limitados a álcool etílico, álcool isopropílico, octilfenil polietileno glicol, ácido oleico, polietileno glicol 400, propileno glicol, Ndecilmetilsulfóxido, ésteres de ácidos graxos (por exemplo, miristato de isopropilo, laurato de metilo, mono-oleato de glicerol, e mono-oleato de propileno glicol); e N-metilpirrolidona.

[00119] A composição administrável topicamente, de acordo com modalidades da presente tecnologia pode incluir fármacos ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, tais como um bifosfonato, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos, e derivados dos mesmos, e, opcionalmente, um ou mais outros ingredientes farmaceuticamente ativos, incluindo, mas não se limitando a, alcatrão de hulha, o ditranol (antralina), corticosteroides como desoximetasona (Topicort), fluocinonida, análogos da vitamina D (por exemplo, o calcipotriol), retinoides, óleo de argan, psoraleno, metotrexato, ciclosporina, retinoides ou outras formas sintéticos da vitamina a, que podem ajudar na remoção de células fagocitárias na área de administração.

[00120] A composição administrável topicamente, de acordo com modalidades da invenção pode ainda incluir anestésicos locais e analgésicos, tais como cânfora, mentol, lidocaína, dibucaína e, e pramoxina; antifúngicos, tais como ciclopirox, cloroxilenol, triacetina, sulconazol, nistatina, ácido undecilênico, tolnaftato, miconizol, clotrimazol, oxiconazol, griseofulvina, econazol, cetoconazol, e anfotericina B; os antibióticos e anti-infecciosos, tais como mupirocina, eritromicina, clindamicina, gentamicina, polimixina, bacitracina, e sulfadiazina de prata; e antissépticos, tais como iodo, povidina-iodo, cloreto de benzalcônio, ácido benzoico, clorexidina, nitrofurazina, peróxido de benzoílo, peróxido de hidrogênio, hexaclorofeno, fenol, resorcinol e cloreto de cetilpiridínio.

[00121] Em várias modalidades, a quantidade de agente ativo nas composições aqui descritas (por exemplo, em formulações injetáveis, as formulações tópicas e formulações transdérmicas), pode variar de 0,01% a 5%, em peso, do bifosfonato, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e os seus derivados. Por exemplo, a composição pode compreender, 0,01%, 0,05%, 0,1%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8%, 0,9%, 1%, 2%, 3%, 4% 5%, 6%, 7%, 8%9%, 10%, 12%, 14%, 16%, 18%, ou 20% em peso ou em volume da composição final, do bifosfonato, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e seus derivados.

[00122] Em uma modalidade preferencial, a composição compreende de 0,05% -20%, 0,1% -10%, ou 0,1-5%, em peso de bifosfonato, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemihidratos, solvatos e seus derivados.

[00123] Em várias modalidades, as composições da presente invenção podem compreender entre cerca de 0,1 mg/mL a cerca de 100 mg/mL de bifosfonato, difosfonato, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e os seus derivados, e compreende pelo menos um lipídio formador de lipossomas selecionado a partir do grupo que consiste em fosfatidilcolina hidrogenada de soja, distearoilfosfatidilcolina, esfingomielina, diacilglicerol, fosfatidiletanolamina, fosfatidilglicerol, diestearoil fosfatidilcolina e diestearil fosfatidil etanolamina e combinações dos mesmos, e um emulsionante. Métodos de Utilização

[00124] Em algumas modalidades, os presentes métodos envolvem a administração de uma quantidade eficaz de um bifosfonato ou difosfonato, tal como aqui utilizados, que incluem ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e os seus derivados a uma região de pele que contém pelo menos uma parte de uma tatuagem a ser removida ou desbotada.

[00125] Os métodos da presente invenção podem ser realizados em qualquer objeto adequado. Indivíduos adequados incluem, mas não se limitam a, mamíferos, tais como, mas não se limitando a, humanos, primatas não humanos, animais de laboratório tais como camundongos, camundongos, porquinhos-da-índia, coelhos, hamsters, furões e semelhantes, animais de companhia, tais como cães, gatos e animais de rebanho, tais como vacas, porcos, cavalos, ovelhas, cabras e semelhantes. Em algumas modalidades, o sujeito é um ser humano.

[00126] Em algumas modalidades, o método da presente tecnologia proporciona uma remoção ou desbotamento de uma tatuagem em uma região da pele, o método compreende: a administração a, pelo menos, uma parte da tatuagem de uma composição que compreende uma quantidade eficaz de um bifosfonato e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável para, pelo menos, causar o desbotamento da tatuagem na referida região.

[00127] Em várias modalidades, a quantidade eficaz administrada de um bifosfonato e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável, é feita com a utilização de uma composição farmaceuticamente aceitável que proporciona uma relação entre risco e benefício apropriada que é comensurável com as práticas médicas padrão para a remoção dermatológica de tatuagens.

[00128] Tal como referido acima, as composições úteis para os presentes métodos podem utilizar bifosfonatos, e/ou partículas que contém, pelo menos, um bifosfonato ou difosfonato, ou ácidos farmaceuticamente aceitáveis, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e seus derivados. Em algumas modalidades, os bifosfonatos, quando encapsulados em lipossomas ou micropartículas ou nanopartículas em uma forma de dosagem de "partículas", são ingeridos, pelo processo de fagocitose mediada por macrófagos e monócitos, e, em certa medida, por outras células com atividade fagocária tais como fibroblastos que residem nas camadas da derme da pele do sujeito. Em uma modalidade, a administração de partículas de bifosfonatos sob a forma de lipossomas, uma vez no interior das células fagocitárias, a estrutura lipossomal do lipossoma é rompida e os bifosfonatos ou difosfonato encapsulados, ou ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e os seus derivados farmaceuticamente aceitáveis são liberados para o citoplasma da célula fagocitária, matando assim as células fagocitárias na região perivascular do local de tatuagem. Uma vez que macrófagos, em seu estado normal, são recrutados para as camadas dérmicas, eles participam da fagocitose para remover pigmentos de tinta de tatuagem e partículas.

[00129] Sem pretender limitar-se a qualquer teoria em particular, acredita-se que a administração das composições de bifosfonato contendo um ou mais bifosfonatos ou difosfonato, ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e os seus derivados, ou partículas contendo um ou mais bifosfonatos ou difosfonato e ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e seus derivados, reduzem ou desbotam a tatuagem visível ao reduzir e/ou destruir células fagocitárias que fagocitaram tinta de tatuagem, e/ou são importantes no acúmulo de pigmento de tinta de tatuagem e partículas como corpos estranhos. Sem pretender limitar-se a qualquer teoria em particular, acredita-se que a destruição destas células fagocitárias residuais que contém partículas de pigmento da tinta de tatuagem e/ou partículas de tinta nas áreas perivascular da derme resulta em que o pigmento da tinta de tatuagem e partículas de tinta sejam transportados para os nódulos linfáticos para posterior eliminação resultando no desbotamento da tatuagem na área tratada com as composições da presente tecnologia.

[00130] Outras células capazes de fagocitose incluem, por exemplo, neutrófilos, células dendríticas, e fibroblastos. Mais preferencialmente as células fagocitárias são macrófagos e/ou monócitos. Em algumas modalidades, a utilização das composições aqui descritas que contêm um ou mais bifosfonatos ou difosfonatos, ácidos, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e seus derivados para remover macrófagos e/ou monócitos da camada dérmica pode ocorrer quando a tatuagem é recém-aplicada a uma região da pele (isto é, dentro de 24-72 horas) ou após a tatuagem amadureceu (de 2 semanas a 50 anos).

[00131] Os lipossomas têm a vantagem de prolongar a meia-vida ao proteger o clodronato de decomposição, além de aumentar a especificidade para macrófagos. Macrófagos facilmente engolem e ingerem lipossomas de clodronato, posteriormente liberando o clodronato para o citoplasma. O clodronato é reconhecido de forma incorreta pela célula fagocitária nas mitocôndrias da célula, o que leva, em última análise, à morte celular. Por sua vez, as partículas de pigmento contidas dentro dos macrófagos são liberados e fragmentados e são eliminados nos nodos linfáticos do sujeito. Administração

[00132] De acordo com a presente tecnologia, um bifosfonato, difosfonato, ou ácidos farmaceuticamente aceitáveis, sais, ésteres, hidratos, polimorfos, hemi-hidratos, solvatos e derivados farmaceuticamente aceitáveis são administrados a uma região da pele que contém, pelo menos, uma parte de uma tatuagem para remover ou desbotar uma tatuagem na região da pele.

[00133] A presente invenção proporciona assim a utilização de bifosfonatos, ou difosfonatos, um complexo de bifosfonato, ou difosfonato, ou um ácido, sal, éster, hidrato, polimorfo, hemi-hidrato, solvato, e seus derivado farmaceuticamente aceitáveis ou partículas contendo o referido bifosfonato, ou difosfonato, um complexo de bifosfonato, ou difosfonato, ou um ácido, sal, éster, hidrato, polimorfo, hemi-hidrato, solvato, e seus derivado farmaceuticamente aceitáveis, para a preparação de uma composição para a remoção ou desbotamento de uma tatuagem em uma região da pele. Em uma modalidade, a composição compreende uma forma de dosagem de"partículas", em que o bifosfonato, ou difosfonato, ou um ácido, sal, éster, hidrato, polimorfo, hemihidrato, solvato, e seus derivados farmaceuticamente aceitáveis são encapsulados, incorporados, e/ou adsorvidos dentro de uma partícula, dispersos na matriz da partícula, adsorvidos ou ligados à superfície da partícula, ou uma combinação de qualquer uma destas formas. A partícula inclui qualquer um dos lipossomas, micropartículas, nanopartículas, nanoesferas, microesferas, microcápsulas, ou nanocápsulas conhecidas na técnica e exemplos aqui descritos, ou suas combinações.

[00134] Em algumas modalidades, o bifosfonato contendo partículas pode ser administrado sob a forma de uma solução injetável intradérmica, emulsão, suspensão, dispersão e semelhantes, ou administrado como uma formulação tópica ou como parte de um aplicador transdérmico, como um adesivo, a uma região de pele contendo, pelo menos, uma porção de uma tatuagem. Em algumas modalidades, as composições são formuladas para administração utilizando-se uma solução injetável que contém as partículas de bifosfonato do invento. Em algumas modalidades, a composição é injetada em uma região da pele que compreende, pelo menos, uma parte de uma tatuagem por administração intradérmica.

[00135] Em várias modalidades da presente tecnologia, as partículas de bifosfonato são entregues para o compartimento intradérmico ou são entregues por via intradérmica em uma região da pele que compreende pelo menos uma parte de uma tatuagem. Desta forma, as partículas de bifosfonatos são administradas dentro da derme, de tal forma que as partículas de bifosfonato facilmente atingem a derme papilar ricamente vascularizada e são captadas pelas células fagocitárias que residem nas áreas perivascular da derme papilar. Em algumas modalidades as composições de bifosfonato da presente tecnologia podem ser colocadas na região superior da derme, isto é, na derme papilar, ou na porção superior da derme reticular relativamente menos vascular, de forma que o agente se difunda facilmente na derme papilar.

[00136] Em algumas modalidades, as partículas de bifosfonato da presente tecnologia podem ser entregue predominantemente em uma profundidade de pelo menos cerca de 0,3 mm, mais preferencialmente, pelo menos cerca de 0,4 mm e ainda mais preferencialmente pelo menos cerca de 0,5 mm até uma profundidade de não mais do que cerca de 2,5 mm, mais preferencialmente, não mais do que cerca de 2,0 mm e ainda mais preferencialmente não mais do que cerca de 1,7 mm. Em algumas modalidades, as partículas de lipossomas de bifosfonato podem ser injetadas por via intradérmica, em uma região da pele que contém pelo menos uma porção de uma tatuagem a uma profundidade de cerca de 0,3 mm a cerca de 1,25 mm, de preferência cerca de 1 mm a partir da superfície da pele. Os métodos e dispositivos para a entrega intradérmica de agentes ativos são bem conhecidos na arte. Métodos ilustrativos para entrega intradérmica de agentes ativos a regiões da pele podem incluir administração intradérmica direta (ID). Em algumas modalidades, a administração das composições da presente tecnologia em regiões da pele que contêm pelo menos uma porção de uma tatuagem pode ser conseguida usando, por exemplo, sistemas de injeção e infusão à base de microagulhas, ou quaisquer outros meios conhecidos por uma pessoa versada na técnica para alvejar com precisão o compartimento intradérmico. Dispositivos exemplares incluem os descritos na Publicação de Pedido Internacional PCT N ° s WO 01/02178, publicada 10 de janeiro de 2002.; e WO 02/02179, publicada 10 de janeiro de 2002, Pat. N ° 6.494.865, concedida em 17 de dezembro, 2002 e Patente US No. 6.569.143 emitida 27 de maio de 2003; e Publicação US N° 2005/0163711 A1, publicada 28 de junho de 2005.; e todos os quais são aqui incorporados por referência na sua totalidade. Metodologias e dispositivos à base de microcânulas e microagulhas são também descritos na Publicação US N°. 2002-0095134, publicada 18 de julho de 2002, que é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Cânulas de aço padrão também podem ser usadas para a entrega intradérmica utilizando dispositivos e métodos como descrito na Patente US N ° 6.494.865, concedida em 17 de dezembro, 2002, que é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Estes métodos e dispositivos incluem a administração de agentes através de uma "microcânula" de bitola estreita (30 G ou mais estreito) com profundidade limitada de penetração (normalmente variando de 100μm a 2mm), tal como definido pelo comprimento total da cânula ou o comprimento total da cânula que é exposta para além de uma característica de encaixe que limita a profundidade.

[00137] Em outras modalidades, as partículas de bifosfonato e composições que compreendem as partículas de bifosfonato podem ser formuladas para administração tópica utilizando as formulações tópicas aqui descritas. As formulações tópicas contendo as partículas de bifosfonato podem ser aplicadas topicamente na tatuagem ou porções desta utilizando-se uma quantidade eficaz da formulação tópica de forma com que cause pelo menos alguma atenuação da tatuagem depois de uma ou mais aplicações da formulação tópica, como aqui descrito. Dosagem

[00138] O termo "quantidade eficaz" significa uma quantidade da composição de partículas que contém bifosfonato, que é eficaz para alcançar o resultado terapêutico desejado, a saber, pelo menos, induzir algum desbotamento da tatuagem. A quantidade determinada da composição que contém partículas de bifosfonato que constitui um montante eficaz pode depender, pelo menos em parte, de um ou mais fatores. Tais fatores incluem, mas não estão limitados a, o tipo de bifosfonato ou difosfonato, ácido, sal, éster, hidrato, polimorfo, hemihidrato, solvato, ou seus derivados a serem administrado, o estado do sistema imunológico do sujeito (por exemplo, suprimido, comprometido, estimulado); a via de administração da composição que contém partículas bifosfonato; a idade da tatuagem; o tipo de pigmentos contidos na tatuagem; a habilidade e/ou experiência da pessoa que aplicou a tatuagem; o tamanho total da tatuagem; e o resultado pretendido (isto é, a redução ou a remoção completa). Por conseguinte, não é prático definir de modo geral a quantidade que constitui uma quantidade eficaz de um bifosfonato ou difosfonato, ácido, sal, éster, hidrato, polimorfo, hemi-hidrato, solvato, ou seus derivados. Aqueles versados na técnica, no entanto, podem facilmente determinar a quantidade apropriada, com a devida consideração a tais fatores.

[00139] Em algumas modalidades, os métodos da presente invenção incluem a administração de bifosfonato ou difosfonato, ácido, sal, éster, hidrato, polimorfo, hemi-hidrato, solvato, ou seus derivados suficiente para proporcionar uma dose de, por exemplo, desde cerca de 100ng/kg a cerca de 50 mg/kg para o sujeito, embora, em algumas modalidades, o método pode ser realizado através da administração do bifosfonato ou difosfonato, ácido, sal, éster, hidrato, polimorfo, hemi-hidrato, solvato, ou derivados em uma dose fora desta variação. Em algumas dessas modalidades o método inclui a administração de bifosfonato ou difosfonato, ácido, sal, éster, hidrato, polimorfo, hemihidrato, solvato, ou seus derivados suficientes para proporcionar uma dose de desde cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 100 mg/kg para o sujeito, por exemplo, uma dose de desde cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 50 mg/kg. O técnico, através de uma experimentação de rotina não deve ter dificuldades consideráveis na determinação da quantidade eficaz em cada caso.

[00140] Uma formulação adequada pode conter, por exemplo, cerca de 0,001%, cerca de 0,002%, cerca de 0,005%, cerca de 0,01%, cerca de 0,015%, cerca de 0,02%, cerca de 0,025%, cerca de 0,05%, cerca de 0,1%, cerca de 0,25%, cerca de 0,5%, cerca de 0,75%, cerca de 1%, cerca de 2,5%, cerca de 5%, cerca de 7,5%, cerca de 10%, cerca de 15%, ou cerca de 20% de bifosfonato ou difosfonato, ácido, sal, éster, hidrato, polimorfo, hemi-hidrato, solvato, ou derivados do mesmo ativos, em uma base (v/v), por exemplo, um ou mais de alendronato, cimadronato, incadronato, clodronato, etidronatos, risedronato, zoledronato, ibandronato, minodronate, pamidronato, piridronato, tiludronato, olpadronato, neridronato, YH529, EB 1053 ISA-13-1 e sais, ésteres e suas misturas farmaceuticamente aceitáveis. Em uma modalidade em particular, a composição inclui aproximadamente 5% de um ou mais de alendronato, cimadronato, incadronato, clodronato, etidronates, risedronato, zoledronato, ibandronato, minodronate, pamidronato, piridronato, tiludronato, olpadronato, neridronato, YH529, EB 1053 ISA13-1 e seus sais, ésteres e suas misturas farmaceuticamente aceitáveis. Em algumas modalidades, a quantidade de bifosfonato na composição varia de cerca de 10 mg/mL a cerca de 500 mg/mL em peso por base de volume.

[00141] Em algumas modalidades da invenção, a composição que contém partículas de bifosfonato da presente tecnologia pode ser administrada, por exemplo, desde uma única dose até doses múltiplas, administradas uma vez ou várias vezes por dia. Em certas modalidades, as partículas de bifosfonato adequadamente formuladas, podem ser administradas entre cerca de uma vez por semana a cerca de uma vez por dia. Em uma modalidade específica, a composição, que contém partículas de bifosfonato, dosada é administrada uma vez por dia. Em uma modalidade alternativa, a composição dosada, que contém partículas de bifosfonato é administrada uma vez a cada dois dias. Em algumas modalidades, a composição doseada é administrada a uma região da pele que contém pelo menos uma parte de uma tatuagem, pelo menos uma vez por semana, ou, pelo menos, duas vezes por semana, ou pelo menos uma vez por mês, ou, pelo menos, 5-10 vezes por mês ou, pelo menos, 1-10 vezes a cada 6 meses. EXEMPLOS Exemplo 1. Preparação de composições de remoção de tatuagem

[00142] A metodologia que se segue foi utilizada para fazer 5 mL de solução de lipídio de 10% (peso: volume), para a preparação de uma partícula encapsulado de lipossomas com o bifosfonato clodronato. Em balão de fundo redodndo de 100 mL foram combinados os seguintes: 0,5 gramas de fosfatidilcolina de soja de 95% (sPC) (Avanti Lipídeos: 441601); 0,09 gramas de Span80 (Sigma-Aldrich: S6760). A esta mistura, foram adicionados 3mL de clorofórmio/metanol (2: 1). O sPC e Span80 são dissolvidos na mistura de clorofórmio/metanol e evaporados sob vácuo no evaporador rotativo até que se forme um filme de lipídios uniformes no interior do balão. Em um recipiente separado, clodronato (isto é bifosfonato selecionado) (Sigma-Aldrich: D4434) é dissolvido em etanol 7% (EtOH) para fazer uma solução concentração de 200 mg/mL. A película de lipídio no fbalão de fundo redondo é hidratada com 10 mL de EtOH contendo 200 mg/mL de clodronato. O frasco é purgado com nitrogênio e, em seguida, tampado. O balão é então girado durante 1 hora à temperatura ambiente (TA). O balão, em seguida, repousa, durante pelo menos 2 horas (ou durante a noite) à temperatura ambiente. Os lipossomas são formados por sonicação da formulação a 40W durante 20 min a 4°C. Os lipossomas formados que contêm clodronato são, então, extrudados através de membrana de 400nm vinte vezes. Subsequentemente, a formulação lipossômica é então extrudada através de membrana de 200nm vinte vezes. A formulação lipossomal extrudada resultante é centrifugada em uma centrífuga de rotor oscilante por 8 horas a 50.000 RPM a 10°C. A camada inferior clara (ou seja, clodronato livre de EtOH 7%) é removida e reutilizada para posterior preparação lipossômica. A camada superior é suspensa novamente em EtOH de 7%. A resultante partícula de bifosfonato que contém a formulação de clodronato (lipossomas), em seguida, é centrifugada em uma centrífuga de rotor oscilante durante 1h a 24.000 RPM a 10°C. Mais uma vez, a camada superior flutuante é removida e o sedimento é suspenso novamente em 5 mL de EtOH 7% para uma concentração final de 10% de lipossomas (peso: volume). Os lipossomas de clodronato são então divididos em alíquotas e enxaguados com nitrogênio, tapados e selados com fita de Teflon. Os lipossomas de clodronato são então armazenados a 4°C no escuro. Exemplo 2. A apoptose de macrófagos que contém tinta com lipossomas de clodronato in vivo.

[00143] Usando-se um modelo estabelecido de tatuar camundongos albinos, sem pelo e imunocompetentes (SKH1), várias formulações de lipossomas encapsulados com clodronato foram testadas. Em resumo, camundongos machos SKH1 foram obtidos de Charles River (Boston, MA) com 8 semanas de idade. Os camundongos foram alojados no Carleton Animal Care Facility na Universidade de Dalhousie e aclimatados na sala de animais por 2 semanas antes do uso. Todos os tratamentos dos camundongos estão em conformidade com as diretrizes do Conselho Canadense de Cuidado Animal (Canadian Council on Animal Care). Às 10 semanas de idade, os camundongos foram anestesiados com isoflurano e tatuados entre as escápulas com duas linhas de 1 cm2 de metade sólida e metade pontilhada, a 2 cm de distância uma da outra, de cada lado da coluna, usando uma agulha de tatuagem longa, pontiaguda e de 14 pt (AIMS Inc., Hornell, NY) em uma máquina de tatuagem comercial (AIMS Inc. Hornell, NY). As tatuagens cicatrizaram durante 1 mês antes do início do tratamento com a formulação.

[00144] Após 1 mês, a pele foi limpa com dH2O e foram aplicados 25 μL de formulação marcada com fluorescente (DiO+) a um lado da região tatuada entre as escápulas. A formulação foi esfregada uniformemente sobre a área da pele utilizando-se uma luva de borracha de nitrilo e, em seguida, deixou-se ela secar a descoberto. Em diferentes pontos de tempo, animais foram sacrificados por isoflurano, seguido por deslocação cervical. Pele e nódulos linfáticos de drenagem foram colhidas. Cada segmento de pele e linfonodo foi dividido ao meio: (1) fixa em 4% PFA durante a noite e transferida para tampão de Millonig até afundado em 2: 1 OCT: sacarose (20%) ou (2) fixados em formol a 10% neutro e tamponado e embebidos em parafina para histologia geral e rotulagem de apoptose.

[00145] Peles congeladas foram cortadas com 7μm em um crióstato e armazenado a 4°C até a sua utilização. As seções congeladas foram tingidas para CD11b (AbD Serotec) seguido por IgG de cabra anticamundongo (H+ L) Alexa Fluor® 555 (Invitrogen). Os núcleos foram marcados com Hoechst (H1399, Invitrogen).

[00146] As seções de parafina foram cortadas em 5μm e processadas de acordo com o protocolo do fabricante para o kit de apoptose Apoptag peroxidase (Millipore). F4/80, TUNEL, lipossomas que contém clodronato marcado por fluorescência, e Hoechst serão visualizados usando-se um Zeiss Axioplan II e fotografada com uma câmera AxioCam HRC Color (Carl Zeiss International, Toronto, ON). Colocalização de F4/80-Alexa Fluor® 647, TUNEL-PE, e lipossomas que contém clodronato tingido com fluorescente-DiO aparecem brancos. A tinta de tatuagem aparece opaca, permitindo assim a visualização de F4/ 80, lipossomas que contém clodronato tingido com fluorescente, TUNEL, e do pigmento da tatuagem.

[00147] Seções de pele dos camundongos tratados revelam a absorção de lipossomas de clodronato in vivo após 24 horas e depois de 2 semanas. Na FIG. 1A, a fotomicrografia ilustra as camadas dérmicas marcadas com setas brancas para indicar tinta de tatuagem ingerida por macrófagos, como visto com microscopia de luz, e como mostrado na FIG. 1B, a fotomicrografia ilustra as camadas dérmicas marcadas com setas brancas para indicar tinta de tatuagem e lipossomas clodronatos engolfados por macrófagos, como visto com microscopia de luz. Os lipossomas injetados têm uma coloração fluorescente e são claramente vistos nas camadas da derme após 24 horas. Estes lipossomas marcados com fluorescência que contêm clodronato são tomadas por macrófagos residentes, tal como indicado na FIG. 1C, que ilustra uma sobreposição das estruturas de microscopia de luz com a presença de macrófagos que fagocitaram os lipossomas de clodronato, como pode ser visto por microscopia de fluorescência.

[00148] Acredita-se que as células fagocitárias, tais como macrófagos ingerem as partículas de tinta e, em seguida, transportem a tinta para o nodo de drenagem linfática através do sistema linfático. Os resultados mostrados nas FIGs. 1D-F ilustram que, no primeiro ponto de tempo de 24 horas um pouco da tinta foi transportado para os nódulos linfáticos.

[00149] No entanto, ao fim de 2 semanas, macrófagos que contêm os lipossomas de clodronato são vistos transportando tinta para os nódulos linfáticos, como mostrado nas Figs. 1G-H.

[00150] Para confirmar que os macrófagos que tomaram a tinta e os lipossomas são sensíveis à atividade apoptótica da preparação lipossômica administrada, a FIG. 2 representa uma fotomicrografia representando o tecido da pele dérmica em um modelo de camundongos com lipossomas de clodronato da presente tecnologia e um anticorpo apoptose para ilustrar a presença de macrófagos em apoptose. Como pode ser visto na FIG. 2, macrófagos apoptóticos são vistos com partículas de tinta de tatuagem digerida. Estes resultados sugerem fortemente que os lipossomas de clodronato são preferencialmente absorvidos pelos macrófagos dérmicos. Os macrófagos que contêm partículas de tinta também ingerem os lipossomas de clodronato encapsulado e sofrem apoptose o que resulta em uma redução na quantidade de partículas de tinta presentes na pele tratada. Exemplo 3. A absorção de partículas de tinta estranhas por macrófagos

[00151] A capacidade para induzir a morte celular de macrófagos usando lipossoma de clodronato in vitro foi demonstrada pelo laboratório do inventor. Um protocolo in vivo para a remoção de tatuagens pode ser efetuado tal como descrito. Porcos (pelo menos 4 por grupo4 grupos, dois grupos de tratamento e dois grupos de controle) são tatuados por um tatuador profissional, para melhor imitar uma tatuagem administrada profissionalmente em um ser humano. A tatuagem vai ser dividida em um número representativo de regiões que varia de 1 a 10. Uma composição de partículas de bifosfonato que compreende lipossoma de clodronato em 7% de etanol, tal como descrito no Exemplo 1 vai ser preparada. Lipossomas de clodronato encapsulados (teste) e lipossomas de controle (controle) para duas formas de administração serão preparados: (1) intradérmica (injeção) e (2) transdérmica (creme). Permitirá-se que as tatuagens curem antes de se iniciar a administração dos lipossomas de controle e de teste. Os lipossomas de controle e de teste são administrados (100 μL da preparação lipossômica de forma intradérmica ou 100 mg de um creme contendo 100 μL da preparação lipossômica cada dose administrada, contendo uma concentração de lipossomas de 10 mg/kg de peso do sujeito) para uma ou mais regiões da pele tatuada no dia 0, e depois uma vez por dia por um período de dez dias. As tatuagens serão fotografadas a cada dia, começando na administração inicial e terminando com a cessação do tratamento e, em seguida, quatro semanas após a cessação do tratamento. As fotografias são tiradas em configurações de luz idênticas. O grau de desbotamento é qualitativamente e visualmente medido usando uma escala +, ++, +++ e ++++ que representa: + ~ 10% de desbotamento, ++ representa ~ 10-33% de desbotamento, +++ representando ~ 34-66% de desbotamento e ++++ que representa > 66% por cento de desbotamento, cada imagem em comparação com a imagem da tatuagem feita no dia 0. Exemplo 4. Remoção de Tinta de Tatuagem In Vivo

[00152] Camundongos machos SKH1 foram obtidos de Charles River (Boston, MA) com 8 semanas de idade. Os camundongos foram alojados no Carleton Animal Care Facility na Universidade de Dalhousie e aclimatados na sala de animais por 2 semanas antes do uso. Todos os tratamentos dos camundongos estão em conformidade com as diretrizes do Conselho Canadense de Cuidado Animal (Canadian Council on Animal Care). Os animais foram tatuados nas costas com linhas longitudinais de 4x4cm usando-se tinta preta Phoenix TAT2, e depois deixou-se as tatuagens curarem. Depois de aproximadamente 12 semanas de cura, o local da tatuagem foi tratado topicamente com uma composição da presente invenção. O tratamento por via administrativa tópica é uma composição (25 microlitros) constituída por uma solução que contém 33,07 mM de lipídios que contém cerca de 3 mg/mL de clodronato na forma de um etanol 7%, a um pH 7,2, (doravante denominada "a composição lipossômica que contém clodronato"). Cada dose da composição lipossômica que contém clodronato continha 25 microlitros da composição de lipossomas contendo o clodronato e foi aplicada topicamente e igualmente distribuídas através de uma linha de 4 cm de tatuagem. A pele tatuada foi tratada com uma dose por semana, para um total de 12 doses por local de tratamento. Foram removidas seções da pele tatuada e linfonodos de locais tratados e não tratados nos seguintes momentos: t = dia 1 (Figuras 4, 5, 9 e 11), t = dia 2 (Figuras 5,6 e 11), t = dia 5 (Figuras 5 e 11), t = dia 7 (Figuras 5, 7, 8 e 11), t = dia 14 (Figuras 5, 8, 9, 10 e 11) e t = 12 semanas (Figuras 3 e 12). Seções completas de pele foram removidas de forma a capturar a epiderme e camadas dérmicas da pele e ademais analisadas com microscopia de luz ou coloração com fluorescência.

[00153] Os camundongos foram tatuados e deixados para curar por 3 meses antes do início do tratamento. A Figura 3 mostra uma seção de parafina representativa de uma tatuagem curada tingida com hematoxilina (núcleos) e eosina (citoplasma). Na tatuagem curada, a tinta de tatuagem na derme superior foi amplamente relocada para a derme inferior. Como se mostra nas Figuras 4A-4C, a pele foi tratada topicamente com lipossomas que contém clodronato marcados com fluorescência. Como mostrado na Figura 4A, a fotomicrografia de microscopia de luz da seção de pele mostra dispersão da tinta de tatuagem da pele ao longo da derme reticular. FIG. 4B representa lipossomas que contém clodronato marcados com fluorescentes. FIG. 4C representa uma imagem sobreposta da Fig. 4A e Fig. 4B da pele de um animal tratado com lipossomas contendo clodronato marcados fluorescentemente e colhidas após 24 horas. O pigmento de tatuagem pode ser visto como negro opaco. Tinta de tatuagem não curada pode ser vista na derme reticular. Co-localização de tinta de tatuagem e lipossomas que contém clodronato marcados com fluorescência pode ser vista em vários domínios. A imagem foi tomada em 40x.

[00154] As Figuras 5A-5E representam imagens fluorescentes de fotomicrografia da pele de camundongos tratados com lipossomas que contém clodronato marcados de forma fluorescente em que t = dia 0 e colhidas mostradas na Fig. 5A em que t = dia 1, a Fig. 5B em t = dia 2, a Fig. 5C em que t = dia 5, a Fig. 5D em que t = dia 7 e a Fig. 5E no dia 14. O pigmento de tatuagem pode ser visto como negro opaco. Colocalização da tinta de tatuagem e lipossomas que contém clodronato marcado com fluorescente parece estar em pico em 48 horas. As imagens foram tiradas em 40x.

[00155] Como mostrado nas Figuras 6A e 6B pele representativa (6A) e seções de linfonodos (6B) de camundongos tratados com a composição lipossômica que contém clodronato em t = 0, colhidas no dia 2, e coradas para TUNEL (apoptose). TUNEL foi desenvolvida com DAB (castanho). Pigmento de tatuagem pode ser visto como negro opaco. Co-localização de tinta de tatuagem e a apoptose pode ser vista em várias células na pele, tal como mostrado na Fig. 6A. Pigmento pode ser visto no linfonodo, mas há uma marcada ausência de apoptose na seção de linfonodo, tal como mostrado na Fig. 6B. As imagens foram tiradas em 63x.

[00156] Como mostrado na Figura 7, uma imagem representativa de células CD11b+ (monócitos e macrófagos) há um efluxo a partir da pele para os nódulos linfáticos após a dosagem com lipossomas que contém clodronato marcado com fluorescente em t = 0 e colheita no dia 7. Tinta de tatuagem aparece como opaca.

[00157] Em outras experiências, os camundongos foram tratados (ou não tratados) com composições lipossômicas que contém lipossomas embebidos com clodronato, tal como descrito nos presentes exemplos. Os camundongos foram tratados (topicamente) de uma só vez com uma dose da preparação lipossômica que contém clodronato, e a pele foi colhida 1 semana ou 2 semanas após aplicação. Seções de pele foram embebidas em parafina e cortadas a 5 mícrons. As lâminas foram tingidas com hematoxilina (núcleos) e eosina (citoplasma). As Figuras 8A-8D são orientadas com a epiderme na parte inferior. Nas seções tratadas mostradas nas Figs. 8B e 8D, a tinta de tatuagem foi principalmente removida da camada dérmica mais profunda (da parte do meio para a parte superior de cada foto) por 1 semana e praticamente completamente removida por 2 semanas após a aplicação. Isto indica que a tinta que reside na camada dérmica interior (a tinta "permanente") está sendo removida, em um processo gradual, dependente de composições de remoção de tatuagens de bifosfonato lipossomais da presente invenção. Conforme mostrado nas Figs. 8A e 8C, tinta de tatuagem permanente é presa de forma intra e extracelular nas camadas dérmicas interior e superiores.

[00158] Em experiências adicionais, os linfonodos de camundongos não tratados e tratados com composições de lipossomas que contém clodronato marcado com fluorescente como descrito no presente exemplo foram secionados. Como mostrado nas Figuras 9A e 9D, seções de linfonodos feitas após 1 dia e 14 dias, respectivamente, foram visualizadas utilizando microscopia de luz. Nas Figuras 9B e 9E, seções de tecido de nódulo foram tingidas com fluorescente para visualizar clodronato que contém partículas e/ou fragmentos de células tingido com fluorescente. Em cada um dos métodos de coloração de tecido, a linha do topo ilustra fotomicrografias de uma seção do linfonodo de um animal, tratados 24 horas antes e a segunda fila e o nódulo refletem tecido obtido após 14 dias de tratamento. Uma sobreposição mostrando as partículas de tinta de tatuagem relativas às composições de lipossomas marcadas com fluorescência que contêm clodronato estão apresentadas nas Figuras 9C e 9F. Figura 9G é mostrada como uma ampliação de uma imagem que descreve um linfonodo de 2 semanas na caixa branca. Co-localização de tinta de tatuagem e clodronato marcado de forma fluorescente que contém lipossomas/detritos de célula pode ser vista em várias áreas, indicadas por setas brancas, que parecem aumentar com o tempo após a dosagem com lipossomas que contêm clodronato. Os nódulos linfáticos foram negativos para marcadores de apoptose, sugerindo que a rotulagem verde é devido a detritos celulares e não a remoção mediada ativa de lipossoma de clodronato, e, assim, sugere que remoção de lipossomas que contém clodronato acelera a remoção de tinta de tatuagem a partir da derme para drenagem de linfonodo, como indicado pela co-localização da tinta de tatuagem e detritos celulares. As imagens foram tiradas em 40x.

[00159] A Figura 10 representa uma fotomicrografia de um linfonodo de um camundongo representativo tratado com lipossomas que contêm clodronato marcados com fluorescente e colhido 14 dias após a dose inicial. O marcador CD1Ib de monócito/macrófago é distinguível de outras colorações fluorescentes e é visto estando em colocalização com lipossomas que contêm clodronato marcados por fluorescência/detritos de células. O pigmento de tatuagem pode ser visto como negro opaco. Co-localização de tinta de tatuagem e lipossomas que contêm clodronato marcados por fluorescência pode ser visto em várias áreas, indicadas por setas brancas. Os nódulos linfáticos foram negativos para marcadores de apoptose, sugerindo que a presença de marcação por fluorescência verde é de detritos celulares e não de lipossomas que contêm clodronato marcado por fluorescência ativos. A imagem foi tomada em 100x.

[00160] Fotomicrografias representativas são mostrados nas Figuras 11A-11E, que mostram as imagens das seções de linfonodos de camundongos tratados com lipossomas que contêm clodronato marcados por fluorescência em t = 0 e colhidas no dia 1 (Fig. 11A), no dia 2 (Fig. 11B), em 5 dias (Fig. 11C), no dia 7 (Fig. 11D), no dia 14 (Fig. 11E). O pigmento de tatuagem pode ser visto como negro opaco. Colocalização da tinta de tatuagem e lipossomas que contém clodronato marcado com fluorescente nos linfonodos parece estar em pico em 514 dias. As imagens foram tiradas em 40x.

[00161] Os camundongos foram tratados semanalmente com um preparado de lipossomas que contêm clodronato, ou lipossomas de controle. Seções de pele foram subsequentemente colhidas após 12 semanas de dosagem semanal única. Seções de pele foram embebidas em parafina e cortadas a 5 mícrons. As lâminas foram tingidas com hematoxilina (núcleos) e eosina (citoplasma). Como mostrado na Figura 12B, a seção de pele ilustra a remoção de tinta de tatuagem a partir da camada dérmica mais profunda deixando a tinta de tatuagem extracelular que é invulnerável a remoção de tinta à base de lipossomas de clodronato. Em contraste, na seção de controle lipossômico representativa, como mostrado na figura 12B, a tinta permanece na tatuagem tanto na camada dérmica mais profunda quanto na derme superior. Resultados e Conclusão:

[00162] Os resultados obtidos, como mostrado nas Figuras 3-12 ilustram que a formulação lipossômica penetrou na pele, depois de ter sido aplicada topicamente, no local da tatuagem na derme profunda, onde foi capaz de colocalizar com áreas de tinta de tatuagem.

[00163] Além disso, descobriu-se que o lipossoma que contém clodronato, tingido com corante fluorescente solúvel lipídico, havia sido removido da pele no dia 7. Embora não se deseje afiliar-se a qualquer teoria específica, acredita-se que a administração de formulação lipossomômica que contém clodronato em uma pele coberta com tatuagem levou à segmentação das células que tinham absorvido a tinta de tatuagem por apoptose na derme profunda, o que foi consistente com o padrão de infiltração de macrófagos, como denotado pelas células CD11b+ mostradas na Figura 7. Na pele, a administração da formulação de lipossomas que contém clodronato foi associada com uma redução visual na quantidade de tinta de tatuagem presente na derme mais profunda da pele em relação à pele controle não tratada, tal como se mostra nas Figuras 12A e 12B. Esta diferença foi ainda mais pronunciada 2 semanas após tratamento. Ao mesmo tempo, embora a apoptose estivesse ausente dos linfonodos, houve um aumento significativo na fluorescência entre dia um e dia catorze após tratamento, o que é consistente com a remoção de células na pele que eram o alvo da formulação de lipossomas fluorescentes. Além disso, nos linfonodos, células CD11b+ estavam colocalizadas com tinta de tatuagem e a fluorescência verde, o quê, juntamente com a ausência de apoptose, corrobora com um mecanismo provável de ação para a formulação lipossômica que contém bifosfonato da presente invenção. Finalmente, ao fim de 12 semanas de tratamento semanal, a tinta de tatuagem estava praticamente ausente da derme profunda dos animais tratados em relação aos animais não tratados. A tinta de tatuagem que permaneceu na pele foi amplamente localizada na derme superior e verificou-se ser extracelular.

Claims (33)

1. Método para a remoção de uma tatuagem em uma região da pele, caracterizado pelo fato de que compreende: a administração, a pelo menos uma porção da tatuagem, de uma composição que compreende bifosfonato e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável para causar, pelo menos, o clareamento da tatuagem na referida região.

2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o bifosfonato é selecionado do grupo que consiste em: alendronato, cimadronato, incadronato, clodronato, etidronatos, risedronato, zoledronato, ibandronato, minodronato, pamidronato, piridronato, tiludronato, olpadronato, neridronato, YH529 (ácido [1-hidroxi2-(imidazo[1,2a]piridin-3-il)etilideno)-bifosfônico monoidratado), EB 1053 (dissódio-1-hidroxi-3-(1-pirrolidinil)-propilideno-1,1-bifosfonato), ISA -13-1 (ácido 2-(2-aminopirimidinio)etilideno-1,1-bifosfônico betaína), e sais, ésteres e misturas farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

3. Método de acordo com a reivindicação 1 or 2, caracterizado pelo fato de que o bifosfonato é clodronato, alendronato, risedronato, zoledronato, ibandronato, ou pamidronato ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo.

4. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o bifosfonato é uma partícula de bifosfonato selecionada a partir do grupo que consiste em lipossomas, bicamadas lipídicas, nanopartículas, micropartículas, microcápsulas, nanocápsulas, nanoesferas e microesferas.

5. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a composição compreende uma partícula de bifosfonato que compreende lipossomas envolvidos com um bifosfonato.

6. Método de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a composição contém 0,1 mg/mL a 100 mg/mL do bifosfonato e compreende, pelo menos, um lipídio formador de lipossoma selecionado a partir do grupo que consiste em fosfatidilcolina, distearoilfosfatidilcolina, esfingomielina, diacilglicerol, fosfatidil etanolamina, fosfatidilglicerol, fosfatidilserina, diestearilfosfatidilcolina e diestearil osfatidil etanolamina, colesterol e combinações dos mesmos, e um emulsionante.

7. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o lipossoma contém fosfatidilcolina.

8. Método de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o lipossoma compreende clodronato, alendronato, risedronato, zoledronato, ibandronato, ou pamidronato.

9. Método de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a composição contém 0,1 mg/mL a 100 mg/mL de clodronato, alendronato, risedronato, zoledronato, ibandronato, ou pamidronato.

10. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o bifosfonato administrada na referida região é de 0,1 mg a 100 mg por kg de peso corporal do sujeito.

11. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que a composição é administrável através das vias tópicas, transdérmica ou intradérmica.

12. Método de acordo com qualquer uma das 1 a 11, caracterizado pelo fato de que a composição compreende partículas de bifosfonato de lipossomas, um emulsionante e um excipiente álcool inferior, em que a proporção de lipídio formador de lipossomas nos lipossomas para emulsionante varia entre 80:20 e 90:10.

13. Método de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que as partículas de bifosfonato de lipossoma compreendem clodronato, alendronato, risedronato, zoledronato, ibandronato, ou pamidronato ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo.

14. Método de acordo com a reivindicação 12 ou 13, caracterizado pelo fato de que o bifosfonato na composição varia de 0,1 mg/mL a 100 mg/mL.

15. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 14, caracterizado pelo fato de que o emulsionante é um tensoativo não iônico.

16. Método de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o tensoativo não iônico é o mono-oleato de sorbitano.

17. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 16, caracterizado pelo fato de que o álcool inferior é metanol, etanol, n-propanol, isopropanol ou combinações dos mesmos.

18. Método de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a composição compreende de 5-15% (% em peso/peso) de etanol.

19. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a composição compreende de 5% a 20% (% em mol) de lipídio formador de lipossomas.

20. Método de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que o lipídio formador de lipossoma compreende fosfatidilcolina.

21. Método de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que as partículas de lipossomas de bifosfonato que compreendem clodronato, alendronato, risedronato, zoledronato, ibandronato, ou pamidronato a uma concentração de pelo menos 0,1 μmol de bifosfonato por mol de fosfatidilcolina.

22. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizado pelo fato de que a composição é administrada em pelo menos uma parte da tatuagem pelo menos uma vez por semana, pelo menos duas vezes por semana, pelo menos uma vez por mês, pelo menos 5-10 vezes por mês ou pelo menos 1-10 vezes a cada 6 meses e é administrada como uma formulação tópica, ou um adesivo transdérmico, em que a formulação tópica compreende um creme, uma emulsão, uma espuma, uma pomada, uma dispersão, uma pasta, um spray, uma solução, um óleo, ou uma microemulsão.

23. Composição para remover ou clarear uma tatuagem localizada em uma região da pele de um sujeito, caracterizada pelo fato de que a composição compreende lipossomas compostos por um bifosfonato livre, um lipídio formador de lipossoma, um emulsionante e um diluente álcool inferior, em que a proporção de lipídio formador de lipossoma para emulsio-nante varia de 80: 20 a 90:10.

24. Composição de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo fato de que o bifosfonato livre é selecionado do grupo que consiste em: alendronato, cimadronato, incadronato, clodronato, etidronatos, isedronato, zoledronato, ibandronato, minodronato, pamidronato, piridronato, tiludronato, olpadronato, neridronato, YH529 (ácido [1-hidroxi-2-(imidazo[1,2a]piridin-3-il)etilideno)-bifosfônico monoidratado), EB 1053 (dissódio-1-hidroxi-3-(1-pirrolidinil)-propilideno-1,1bifosfonato), ISA -13-1 (ácido 2-(2-aminopirimidinio)etilideno-1,1bifosfônico betaína), e sais, ésteres e misturas farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

25. Composição de acordo com a reivindicação 23 ou 24, caracterizada pelo fato de que o bifosfonato livre é clodronato, alendronato, risedronato, zoledronato, ibandronato, ou pamidronato ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo.

26. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 25, caracterizada pelo fato de que o lipídio formador de lipossomas é selecionado a partir do grupo que consiste em fosfatidilcolina, diestearoilfosfatidilcolina, esfingomielina, diacilglicerol, fosfatidil etanolamina, fosfatidilglicerol, fosfatidilserina, diestearilfosfatidilcolina e diestearilfosfatidil etanolmina, colesterol e combinações dos mesmos.

27. Composição de acordo com a reivindicação 26, caracterizada pelo fato de que o lipídio formador de lipossomas é fosfatidilcolina.

28. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 27, caracterizada pelo fato de que o emulsionante é um tensoativo não iônico.

29. Composição de acordo com a reivindicação 28, caracterizada pelo fato de que o tensoativo não iônico é o mono-oleato de sorbitano.

30. Composição de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo fato de compreender: (a) lipossomas compostos de um bifosfonato livre selecionado dentre alendronato, cimadronato, incadronato, clodronato, etidronatos, risedronato, zoledronato, ibandronato, minodronato, pamidronato, piridronato, tiludronato, olpadronato, neridronato, YH529 (ácido [1-hidroxi2-(imidazo[1,2a]piridin-3-il)etilideno)-bifosfônico monoidratado), EB 1053 (dissódio-1-hidroxi-3-(1-pirrolidinil)-propilideno-1,1-bifosfonato), ISA -13-1 (ácido 2-(2-aminopirimidinio)etilideno-1,1-bifosfônico betaína), e sais, ésteres e misturas farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos; (b) um lipídio formador de lipossomas selecionado do grupo que consiste em fosfatidilcolina, diestearoilfosfatidilcolina, esfingomielina, diacilglicerol, fosfatidil etanolamina, fosfatidilglicerol, fosfatidilserina, diestearilfosfatidilcolina e diestearilfosfatidil etanolmina, colesterol e combinações dos mesmos; (c) um emulsionante selecionado do grupo que consiste em polioxil 35, polioxil 40, óleo de rícino hidrogenando, polioxil 60, d-αtocoferol, polietileno glicol, 1000 succinato (TPGS), polissorbato 20, polissorbato 80, monolaurato de sorbitano, monopalmitato de sorbitano, monoestearato de sorbitano, e mono-oleato de sorbitano; e (d) um diluente do tipo álcool inferior secelecionado dentre metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, ou combinações dos mesmos. em que a razão de lipídio formador de lipossomas para emulsionante varia de 80:20 a 90:10.

31. Composição de acordo com a reivindicação 30, caracterizada pelo fato de que o bifosfonato é clodronato, alendronato, risedronato, zoledronato, ibandronato, ou pamidronato ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável dos mesmos, o lipídio formador de lipossomas é fosfatidilcolina, e o emulsionante é mono-oleato de sorbitano, monooleate.

32. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 31, caracterizada pelo fato de que a composição é administrável topicamente, transdermicamente ou intradermicamente.

33. Composição de acordo com a reivindicação 32, caracterizada pelo fato de que a administração tópica está na forma de um creme, uma pomada, uma formulação aerossol, um spray não aerossol, um gel, uma espuma, uma solução, uma suspensão, uma dispersão, uma emulsão, uma microemulsão, uma pasta, um pó, um bastão sólido, um lenço, um óleo, ou uma loção.

Images