BR112013023440B1

BR112013023440B1 - COMPOSITIONS COMPRISING SOLUBLE SELENOGLYCOPROTEINS AND METHOD OF PREPARATION THEREOF

Info

Publication number: BR112013023440B1
Application number: BR112013023440-7A
Authority: BR
Inventors: Stefan Kwiatkowski; Ronan Power; Clayton Matney; Paiman P. Ghoroghchian; Eric M. Ostertag
Original assignee: Alltech, Inc
Priority date: 2011-03-18
Filing date: 2011-09-16
Publication date: 2023-07-25

Abstract

COMPOSIÇÕES E MÉTODOS PARA SEPARAR, CARACTERIZAR E ADMINISTRAR SELENOGLICOPROTEÍNAS SOLÚVEIS. A invenção relaciona-se a composições de selênio solúveis e métodos de produção, separação e purificação das mesmas. Em particular a presente invenção provê métodos de preparar selenoglicoproteínas solúveis em água (por exemplo, através da extração de selenoglicoproteinas a partir de levedura enriquecida com selênio), métodos de suplementar uma composição deficiente de selênio através de mistura de selenoglicoproteinas solúveis em água com composição deficiente em selênio, composições compreendendo as selenoglicoproteinas solúveis em água e métodos de administração das mesmas.COMPOSITIONS AND METHODS FOR SEPARATING, CHARACTERIZING AND ADMINISTERING SOLUBLE SELENOGLYCOPROTEINS. The invention relates to soluble selenium compositions and methods of production, separation and purification thereof. In particular, the present invention provides methods of preparing water-soluble selenoglycoproteins (e.g., by extracting selenoglycoproteins from selenium-enriched yeast), methods of supplementing a selenium-deficient composition by mixing water-soluble selenoglycoproteins with a deficient composition. in selenium, compositions comprising water-soluble selenoglycoproteins and methods of administration thereof.

Description

[0001] Este pedido é uma Continuação-Em-Parte, e reivindicações prioritárias ao, Pedido Seriado de Patente dos Estados Unidos No. 13/051.646 depositado em 18 de Março de 2011, que reivindica prioridade ao Pedido Seriado de Patente Provisória dos Estados Unidos No. 61/315.265 depositado em 18 de Março de 2010, cada dos quais é aqui incorporado por referência em sua totalidade.[0001] This application is a Continuation-In-Part of, and priority claims to, United States Serial Patent Application No. 13/051,646 filed March 18, 2011, which claims priority to the United States Serial Provisional Patent Application No. 61/315,265 filed March 18, 2010, each of which is incorporated herein by reference in its entirety.

Field of invention

[0002] A presente invenção relaciona-se a composições solúveis de selênio e métodos de produção, separação e purificação das mesmas. Em particular a presente invenção provê métodos de preparar selenoglicoproteínas solúveis em água (por exemplo, através de extração de selenoglicoproteínas a partir de levedura enriquecida com selênio), métodos de suplementar uma composição deficiente em selênio através de mistura com selenoglicoproteínas solúveis em água com composição deficiente em selênio, composições compreendendo as selenoglicoproteínas solúveis em água e métodos de administrar as mesmas.[0002] The present invention relates to soluble selenium compositions and methods of production, separation and purification thereof. In particular, the present invention provides methods of preparing water-soluble selenoglycoproteins (e.g., by extracting selenoglycoproteins from selenium-enriched yeast), methods of supplementing a selenium-deficient composition by mixing with water-soluble selenium-deficient selenoglycoproteins. in selenium, compositions comprising water-soluble selenoglycoproteins and methods of administering the same.

Background of the invention

[0003] Selênio é um elemento traço importante para função fisiológica apropriada em humanos. Selênio é ingerido através de dieta que pode ter um conteúdo variante de selênio.[0003] Selenium is an important trace element for proper physiological function in humans. Selenium is ingested through a diet that may have a varying selenium content.

[0004] Selênio é conhecido desempenhar um papel crítico em sustentar o metabolismo fisiológico, crescimento, saúde reprodutiva, e imunidade. Selênio é incorporado em diferentes moléculas orgânicas incluindo, por exemplo, aminoácidos tais como 1-selenometionina, selenocisteína, e selenocistina. Então, selênio pode ser um componente parte de proteínas, muitas das quais são de importância estrutural para o corpo. Além disso, selênio é um ingrediente importante em um número de enzimas que influenciam o metabolismo, reprodução, a prevenção de câncer, e defesa imune em humanos (Ver, por exemplo, Rayman, M, Lancet 356:233-241 (2000)).[0004] Selenium is known to play a critical role in sustaining physiological metabolism, growth, reproductive health, and immunity. Selenium is incorporated into different organic molecules including, for example, amino acids such as 1-selenomethionine, selenocysteine, and selenocystine. So, selenium may be a component part of proteins, many of which are of structural importance to the body. Furthermore, selenium is an important ingredient in a number of enzymes that influence metabolism, reproduction, cancer prevention, and immune defense in humans (See, e.g., Rayman, M, Lancet 356:233-241 (2000)) .

[0005] Múltiplos estudos têm tentado revelar benefícios potenciais da saúde resultando da ingestão de baixos níveis de selênio. Por exemplo, baixas concentrações de uma forma inorgânica de selênio, têm mostrado alguns potenciais benefícios a saúde (Ver, por exemplo, Furnsinn et al., Int. J of Obesity and Related Metab. Dis., 19, 458-463 (1995)). Entretanto, em níveis de dosagens elevados, efeitos benéficos são revertidos e perigosa toxicidade é manifestada.[0005] Multiple studies have attempted to reveal potential health benefits resulting from ingesting low levels of selenium. For example, low concentrations of an inorganic form of selenium have shown some potential health benefits (See, for example, Furnsinn et al., Int. J of Obesity and Related Metab. Dis., 19, 458-463 (1995) ). However, at high dosage levels, beneficial effects are reversed and dangerous toxicity is manifested.

[0006] Pesquisa ao longo das últimas duas décadas tem sugerido que selênio é efetivo na redução da incidência de câncer quando provido a animais em doses somente 5- a 10-vezes acima do requerimento nutricional (Ver, por exemplo, El-Bayoumy, The role of selenium in cancer prevention, Filadélfia, Lippincott, 1-15, 1991). Estudos de quimioprevenção com selênio em sistemas de modelo animal têm indicado que este elemento é efetivo para a maioria, se não todos os sistemas de órgãos e é protetor contra efeitos carcinogênicos (Ver, por exemplo, El-Bayoumy, The role of selenium in cancer prevention, Philadelphia, Lippincott, 1-15, 1991). Ambos estudos epidemiológicos e suplementação de triagens têm também sustentado sua eficácia em diminuir a incidência de cânceres do fígado, cólon, próstata e pulmão (Ver, por exemplo, Yu et al. Biol Trace Elem Res, 56: 117-124 (1997); Clark et al., J Am Med Assoc, 276: 1957-1963 (1996); Yoshizawa et al., J Natl Cancer Inst, 90: 1219-1224, (1998); Brooks, et al., J Urol, 166: 2034-2038, (2001)). Outros estudos não têm demonstrado efeito benéfico para redução de selênio de cânceres (Ver, por exemplo, Garland et al., J. Am. Coll Nutr., 12: 40011 (1993); Ghadirian et al., Cancer Detect Prev, 24: 305-13 (2000)).[0006] Research over the past two decades has suggested that selenium is effective in reducing the incidence of cancer when fed to animals in doses only 5- to 10-times above nutritional requirements (See, for example, El-Bayoumy, The role of selenium in cancer prevention, Philadelphia, Lippincott, 1-15, 1991). Chemoprevention studies with selenium in animal model systems have indicated that this element is effective for most, if not all, organ systems and is protective against carcinogenic effects (See, e.g., El-Bayoumy, The role of selenium in cancer prevention, Philadelphia, Lippincott, 1-15, 1991). Both epidemiological studies and supplemental screenings have also supported its effectiveness in decreasing the incidence of liver, colon, prostate, and lung cancers (See, for example, Yu et al. Biol Trace Elem Res, 56: 117-124 (1997); Clark et al., J Am Med Assoc, 276: 1957-1963 (1996); Yoshizawa et al., J Natl Cancer Inst, 90: 1219-1224, (1998); Brooks, et al., J Urol, 166: 2034-2038, (2001)). Other studies have not demonstrated a beneficial effect for selenium reduction in cancers (See, for example, Garland et al., J. Am. Coll Nutr., 12: 40011 (1993); Ghadirian et al., Cancer Detect Prev, 24: 305-13 (2000)).

[0007] Múltiplas formas de selênio têm sido examinadas. Essas incluem selênio inorgânico, tais como selenito de sódio, e fontes orgânicas, incluindo selênio de levedura. Existe uma diferença significante entre toxidade de selênio inorgânico e orgânico; os compostos inorgânicos usualmente sendo absorvidos e utilizados menos eficientemente e também sendo mais tóxicos que fontes orgânicas de selênio.[0007] Multiple forms of selenium have been examined. These include inorganic selenium, such as sodium selenite, and organic sources, including selenium from yeast. There is a significant difference between inorganic and organic selenium toxicity; inorganic compounds usually being absorbed and used less efficiently and also being more toxic than organic sources of selenium.

Summary of the invention

[0008] A presente invenção relaciona-se a composições de selênio solúveis e métodos de produção, separação e purificação das mesmas. Em particular a presente invenção provê métodos de preparar selenoglicoproteínas solúveis em água (por exemplo, através da estração de selenoglicoproteínas a partir de levedura enriquecida com selênio), métodos de suplementação de uma composição deficiente em selênio através da mistura de selenoglicoproteínas solúveis em água com composição deficiente em selênio, composições compreendendo as selenoglicoproteínas solúveis em água e métodos de administração das mesmas.[0008] The present invention relates to soluble selenium compositions and methods of production, separation and purification thereof. In particular, the present invention provides methods of preparing water-soluble selenoglycoproteins (e.g., by extracting selenoglycoproteins from selenium-enriched yeast), methods of supplementing a selenium-deficient composition by mixing water-soluble selenoglycoproteins with a composition deficient in selenium, compositions comprising water-soluble selenoglycoproteins and methods of administration thereof.

[0009] Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção provê um método para preparação de selenoglicoproteínas solúveis compreendendo: prover levedura enriquecida com selênio, expondo a levadura enriquecida em selênio à condições acídicas seguido por centrifugação para gerar i) um concentrado compreendendo material insolúvel em ácido; e ii) uma fase líquida compreendendo o extrato de levedura enriquecido com selênio sob condições acídicas; precipitando selenoglicoproteínas a partir da fase líquida compreendendo o extrato de levedura enriquecido de selênio solúvel em condições acídicas através do aumento do pH da fase líquida, e (d) separando as selenoglicoproteínas precipitadas a partir da fase líquida. Em algumas modalidades, exposição da levedura enriquecida com selênio à condições acídicas e ocorre em uma temperatura maior que temperatura ambiente (por exemplo, maior que cerca de 20-25°C). A presente invenção não é limitada por temperatura maior que temperatura ambiente sobre a qual levedura enriquecida com selênio é exposta a condições acídicas. De fato, uma variedade de temperaturas pode ser usada incluindo, mas não limitada a cerca de 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 90, 95, 97, 99°C, ou mais quente). Similarmente, a invenção não é limitada por condições acídicas sobre as quais as leveduras enriquecidas com selênio são expostas. Em algumas modalidades, as leveduras enriquecidas com selênio são expostas a condições em que o pH é cerca de 6.5, cerca de 6, cerca de 5.5, cerca de 5, cerca de 4.5, cerca de 4, cerca de 3.5, cerca de 3, cerca de 2.5, cerca de 2, cerca de 1.5, cerca de 1, ou menos. Em uma modalidade preferida, exposição das leveduras enriquecidas com selênio à condições acídicas compreendem exposição das leveduras enriquecidas com selênio a um pH de 1.5. Em algumas modalidades, exposição das leveduras enriquecidas com selênio à condições acídicas acontece por um certo período de tempo. A invenção não é limitada pela quantidade de tempo sobre a qual as leveduras enriquecidas com selênio são expostas à condições acídicas. Em algumas modalidades, as leveduras enriquecidas com selênio são expostas à condições acídicas por cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 ou mais horas. Em algumas modalidades, as leveduras enriquecidas com selênio são expostas à condições acídicas por entre uma e vinte e quatro horas. Em algumas modalidades, leveduras enriquecidas com selênio são expostas à condições acídicas por entre cinco e dez horas. Em uma modalidade preferida, as leveduras enriquecidas com selênio são expostas à condições acídicas por cerca de oito horas. Em algumas modalidades, condições acídicas são criadas e/ou mantidas utilizando tampão acídico e/ou a adição de um ácido. A invenção não é limitada pelo tipo de ácido utilizado. De fato, qualquer ácido pode ser usado. Em algumas modalidades, o ácido é ácido clorídrico, embora qualquer ácido possa ser utilizado. Em algumas modalidades, selenoglicoproteínas são precipitadas a partir da fase líquida compreendendo o extrato de levedura enriquecida com selênio solúvel em condições acídicas através do aumento do pH da fase líquida. Em algumas modalidades, as selenoglicoproteínas precipitadas são separadas a aprtir da fase líquida através de centrifugação para formar um concentrado das selenoglicoproteínas precipitadas seguido por remoção da fase líquida a partir de selenoglicoproteínas precipitadas. A invenção não é limitada pela quantidade de grau a qual o pH do extrato é elevado a fim de precipitar as selenoglicoproteínas a partir da fase líquida. Em algumas modalidades, o pH da fase líquida é elevado para 1.85. Em algumas modalidades, o pH da fase líquida é elevado a 3.0. Em algumas modalidades, o pH da fase líquida é elevado para 4.0. Em algumas modalidades, o pH da fase líquida é elevado a 6.0. Em algumas modalidades, selenoglicoproteínas são precipitadas e separadas a partir da fase líquida em uma variedade de condições de pH para gerar múltiplas frações dependentes de pH de selenoglicoproteínas solúveis. Por exemplo, em algumas modalidades, uma fase líquida única compreendendo o extrato de leveduras enriquecidas com selênio sob condições acídicas é usada para criar uma primeira fração de selenoglicoproteínas solúveis precipitadas em um primeiro pH (por exemplo, pH de 1.85) uma segunda fração de selenoglicoproteínas solúveis precipitada em um segundo pH (por exemplo, pH de 3.0), uma terceira fração de selenoglicoproteínas solúveis precipitada em um terceiro pH (por exemplo, pH de 4.0), e uma quarta fração de selenoglicoproteínas solúveis precipitada em um quarto pH (por exemplo, pH de 6.0). Em algumas modalidades, precipitando as selenoglicoproteínas a partir da fase líquida através da elevação do pH da fase líquida compreende múltiplas reações de precipitação dependente de pH sequencial da fase líquida. Em algumas modalidades, uma composição compreendendo selenoglicoproteínas solúveis contém somente uma única fração dependente de pH das selenoglicoproteínas (por exemplo, selenoglicoproteínas solúveis a partir da fase líquida compreendendo o extrato de levedura enriquecida com selênio sob condições acídicas precipitado em pH 4.0). Em algumas modalidades, uma composição compreendendo selenoglicoproteínas solúveis contém duas ou mais frações dependentes de pH de selenoglicoproteínas (por exemplo, selenoglicoproteínas solúveis a partir da fase líquida compreendendo o extrato de levedura enriquecida com selênio solúvel sob condições acídicas precipitado em dois ou mais valores de pHs diferentes).[0009] Consequently, in some embodiments, the present invention provides a method for preparing soluble selenoglycoproteins comprising: providing selenium-enriched yeast, exposing the selenium-enriched yeast to acidic conditions followed by centrifugation to generate i) a concentrate comprising selenium-insoluble material acid; and ii) a liquid phase comprising yeast extract enriched with selenium under acidic conditions; precipitating selenoglycoproteins from the liquid phase comprising soluble selenium-enriched yeast extract under acidic conditions by increasing the pH of the liquid phase, and (d) separating the precipitated selenoglycoproteins from the liquid phase. In some embodiments, exposure of the selenium-enriched yeast to acidic conditions occurs at a temperature greater than room temperature (e.g., greater than about 20-25°C). The present invention is not limited by temperature greater than room temperature at which selenium-enriched yeast is exposed to acidic conditions. In fact, a variety of temperatures may be used including, but not limited to about 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 90, 95, 97, 99°C, or hotter). Similarly, the invention is not limited by acidic conditions to which selenium-enriched yeasts are exposed. In some embodiments, the selenium-enriched yeasts are exposed to conditions in which the pH is about 6.5, about 6, about 5.5, about 5, about 4.5, about 4, about 3.5, about 3, about 2.5, about 2, about 1.5, about 1, or less. In a preferred embodiment, exposing the selenium-enriched yeast to acidic conditions comprises exposing the selenium-enriched yeast to a pH of 1.5. In some embodiments, exposure of selenium-enriched yeast to acidic conditions occurs for a certain period of time. The invention is not limited by the amount of time over which selenium-enriched yeasts are exposed to acidic conditions. In some embodiments, selenium-enriched yeast is exposed to acidic conditions for about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 18, 20, 22 , 24 or more hours. In some embodiments, selenium-enriched yeast is exposed to acidic conditions for between one and twenty-four hours. In some embodiments, selenium-enriched yeast is exposed to acidic conditions for between five and ten hours. In a preferred embodiment, selenium-enriched yeast is exposed to acidic conditions for about eight hours. In some embodiments, acidic conditions are created and/or maintained using acidic buffer and/or the addition of an acid. The invention is not limited by the type of acid used. In fact, any acid can be used. In some embodiments, the acid is hydrochloric acid, although any acid can be used. In some embodiments, selenoglycoproteins are precipitated from the liquid phase comprising yeast extract enriched with soluble selenium under acidic conditions by increasing the pH of the liquid phase. In some embodiments, the precipitated selenoglycoproteins are separated from the liquid phase by centrifugation to form a concentrate of the precipitated selenoglycoproteins followed by removal of the liquid phase from the precipitated selenoglycoproteins. The invention is not limited by the amount of degree to which the pH of the extract is raised in order to precipitate the selenoglycoproteins from the liquid phase. In some embodiments, the pH of the liquid phase is raised to 1.85. In some embodiments, the pH of the liquid phase is raised to 3.0. In some embodiments, the pH of the liquid phase is raised to 4.0. In some embodiments, the pH of the liquid phase is raised to 6.0. In some embodiments, selenoglycoproteins are precipitated and separated from the liquid phase under a variety of pH conditions to generate multiple pH-dependent fractions of soluble selenoglycoproteins. For example, in some embodiments, a single liquid phase comprising selenium-enriched yeast extract under acidic conditions is used to create a first fraction of soluble selenoglycoproteins precipitated at a first pH (e.g., pH 1.85) and a second fraction of selenoglycoproteins. soluble selenoglycoproteins precipitated at a second pH (e.g., pH 3.0), a third soluble selenoglycoprotein fraction precipitated at a third pH (e.g., pH 4.0), and a fourth soluble selenoglycoprotein fraction precipitated at a fourth pH (e.g. , pH of 6.0). In some embodiments, precipitating the selenoglycoproteins from the liquid phase by raising the pH of the liquid phase comprises multiple sequential pH-dependent precipitation reactions of the liquid phase. In some embodiments, a composition comprising soluble selenoglycoproteins contains only a single pH-dependent fraction of the selenoglycoproteins (e.g., soluble selenoglycoproteins from the liquid phase comprising selenium-enriched yeast extract under acidic conditions precipitated at pH 4.0). In some embodiments, a composition comprising soluble selenoglycoproteins contains two or more pH-dependent fractions of selenoglycoproteins (e.g., soluble selenoglycoproteins from the liquid phase comprising yeast extract enriched with soluble selenium under acidic conditions precipitated at two or more pH values many different).

[00010] Em algumas modalidades, as leveduras enriquecidas com selênio são leveduras enriquecidas com selênio não viáveis contendo 2% ou menos de selênio inorgânico.[00010] In some embodiments, selenium-enriched yeasts are non-viable selenium-enriched yeasts containing 2% or less inorganic selenium.

[00011] A invenção também provê composições compreendendo selenoglicoproteínas solúveis preparadas de acordo com a invenção. Por exemplo, em algumas modalidades, a invenção provê uma composição deficiente de selênio compreendendo selenoglicoproteínas solúveis da invenção. Em algumas modalidades, selenoglicoproteínas solúveis da invenção são adicioandas a e/ou misturadas com uma composição deficiente de selênio. A invenção não é limitada pelo tipo de composição deficiente de selênio ou material ao qual selenoglicoproteínas solúveis da invenção são adicionadas a ou drogas, farmacêuticos, produtos alimentícios, ração de animais, e outros tipos de materiais. Em algumas modalidades, adição ou mistura (por exemplo, mescla) de selenoglicoproteína compreende mistura de selenoglicoproteína e ou um ou mais tipos de selênio na composição. Em algumas modalidades, selenoglicoproteínas solúveis da invenção são adicionadas a e/ou misturadas com composições que contém selênio (por exemplo, para aumentar e/ou suplementar a quantidade total de selênio).[00011] The invention also provides compositions comprising soluble selenoglycoproteins prepared according to the invention. For example, in some embodiments, the invention provides a selenium-deficient composition comprising soluble selenoglycoproteins of the invention. In some embodiments, soluble selenoglycoproteins of the invention are added to and/or mixed with a selenium-deficient composition. The invention is not limited by the type of selenium-deficient composition or material to which soluble selenoglycoproteins of the invention are added to or drugs, pharmaceuticals, food products, animal feed, and other types of materials. In some embodiments, addition or mixing (e.g., blending) of selenoglycoprotein comprises a mixture of selenoglycoprotein and/or one or more types of selenium in the composition. In some embodiments, soluble selenoglycoproteins of the invention are added to and/or mixed with selenium-containing compositions (e.g., to increase and/or supplement the total amount of selenium).

[00012] A invenção também provê uma composição compreendendo selenoglicoproteínas solúveis e um veículo. Em algumas modalidades, as selenoglicoproteínas são uma fração dependente de pH específica de selenoglicoproteínas. A invenção não é limitada pelo tipo de veículo utilizado. De fato, uma variedade de veículos podem ser usados, incluindo, mas não limitados a, dendrímeros, polimersomas, nanopartículas, polímeros de liberação lenta, nanocápsulas, e/ou polímeros de impressão molecular. Em uma modalidade preferida, o veículo é um polímero de liberação lenta. Em outra modalidade preferida, o veículo é um polímero de impressão molecular. Em ainda outra modalidade preferida, o veículo é um polimersoma usado para encapsular selenoglicoproteína. A invenção não é limitada pelo tipo de polimersoma usado. De fato, qualquer polimersoma conhecido na técnica pode ser utilizado. Em algumas modalidades, o polimersoma compreende copolímero copolímero em bloco de poli(óxido de etileno) (PEO). Entretanto, a invenção não é limitada a ele. Qualquer copolímero bloqueador conhecido pode ser utilizado, incluindo, por exemplo, poli(etiletileno) (PEE), poli(butadieno) (PB ou PBD), poli(estireno) (PS), e poli(isopreno) (PI). Em algumas modalidades, o polímero compreende copolímero dibloco poli(D- caprolactona) (PCL). Em alguma modalidades, o polimersoma compreende copolímeros dibloco à base de poli(etileno óxido)-bloco- poli(n-caprolactona) (PEO-b-PCL). Em algumas modalidades, o polimersoma compreende um copolímero bloqueador que é tribloqueador, tetrabloqueador, pentabloqueador, ou pelo menos hexabloqueador. Em algumas modalidades, o polimersoma é derivado a partir do acoplamento de poli(ácido lático), poli(glicolídeo), poli(ácido lático-coglicólico), e/ou poli(3-hidroxibutirato) com PEO. A invenção não é limitada pelo tamanho de uma selenoglicoproteína encapsulada em polimersoma. Uma variedade de tamanhos encontram uso nas composições e métodos da invenção, incluindo, mas não limitado a, selenoglicoproteínas encapsuladas em polimersoma que têm cerca de 50-300 nm em diâmetro, embora maiores (por exemplo, cerca de 350 nm, 400 nm, 500 nm ou maiores) e menores (por exemplo, cerca de 40 nm, 30 nm, 20 nm, ou menores) elenoglicoproteínas encapsuladas em polimersoma possam ser usadas.[00012] The invention also provides a composition comprising soluble selenoglycoproteins and a carrier. In some embodiments, selenoglycoproteins are a specific pH-dependent moiety of selenoglycoproteins. The invention is not limited by the type of vehicle used. In fact, a variety of carriers can be used, including, but not limited to, dendrimers, polymersomes, nanoparticles, slow-release polymers, nanocapsules, and/or molecularly imprinted polymers. In a preferred embodiment, the carrier is a slow-release polymer. In another preferred embodiment, the carrier is a molecularly imprinted polymer. In yet another preferred embodiment, the carrier is a polymersome used to encapsulate selenoglycoprotein. The invention is not limited by the type of polymersome used. In fact, any polymersome known in the art can be used. In some embodiments, the polymersome comprises poly(ethylene oxide) (PEO) block copolymer copolymer. However, the invention is not limited to it. Any known blocking copolymer can be used, including, for example, poly(ethylethylene) (PEE), poly(butadiene) (PB or PBD), poly(styrene) (PS), and poly(isoprene) (PI). In some embodiments, the polymer comprises poly(D-caprolactone) diblock copolymer (PCL). In some embodiments, the polymersome comprises diblock copolymers based on poly(ethylene oxide)-block-poly(n-caprolactone) (PEO-b-PCL). In some embodiments, the polymersome comprises a blocking copolymer that is a triblocker, tetrablocker, pentablocker, or at least a hexablocker. In some embodiments, the polymersome is derived from the coupling of poly(lactic acid), poly(glycolide), poly(lactic-co-glycolic acid), and/or poly(3-hydroxybutyrate) with PEO. The invention is not limited by the size of a polymersome-encapsulated selenoglycoprotein. A variety of sizes find use in the compositions and methods of the invention, including, but not limited to, polymersome-encapsulated selenoglycoproteins that are about 50-300 nm in diameter, although larger (e.g., about 350 nm, 400 nm, 500 nm or larger) and smaller (e.g., about 40 nm, 30 nm, 20 nm, or smaller) polymersome-encapsulated elenoglycoproteins can be used.

Description of the drawings

[00013] Figura 1 mostra preparação sequencial de selenoglicoproteínas solúveis (SGPs) a partir de SEL-PLEX por extração acídica e precipitações subsequentes de uma modalidade da invenção.[00013] Figure 1 shows sequential preparation of soluble selenoglycoproteins (SGPs) from SEL-PLEX by acidic extraction and subsequent precipitations of an embodiment of the invention.

[00014] Figura 2 mostra um processo de precipitação dependente de pH de selenoglicoproteínas de uma modalidade da invenção.[00014] Figure 2 shows a pH-dependent precipitation process of selenoglycoproteins of an embodiment of the invention.

[00015] Figura 3 mostra um mapa de aquecimento representando os efeitos de tratamentos suplmentados com selênio diferentes descritos nas Tabelas 3 e 4 do Exemplo 3 em níveis de expressão gênica em músculo esquelético do peito de galinha relativo a um controle basal.[00015] Figure 3 shows a heat map representing the effects of different selenium supplemented treatments described in Tables 3 and 4 of Example 3 on gene expression levels in chicken breast skeletal muscle relative to a basal control.

[00016] Figura 4 mostra diagrama Venn revelando diferentes efeitos da fração SGP em pH 4.0 e SEL-PLEX na expressão gênica com perfil em músculo peitoral.[00016] Figure 4 shows Venn diagram revealing different effects of the SGP fraction at pH 4.0 and SEL-PLEX on gene expression profiled in pectoral muscle.

[00017] Figura 5 mostra genes exemplares identificados como sendo comumente regulados por selenito de sódio (SS), SEL-PLEX (SP) e fração selenoglicoproteína pH (SGP) 4.0.[00017] Figure 5 shows exemplary genes identified as being commonly regulated by sodium selenite (SS), SEL-PLEX (SP) and selenoglycoprotein fraction pH (SGP) 4.0.

[00018] Figura 6 mostra genes exemplares identificados como sendo comumente regulados por SEL-PLEX (SP) e fração de selenoglicoproteína (SGP) pH 4.0, mas não por selenito de sódio (SS).[00018] Figure 6 shows exemplary genes identified as being commonly regulated by SEL-PLEX (SP) and selenoglycoprotein fraction (SGP) pH 4.0, but not by sodium selenite (SS).

[00019] Figura 7 mostra genes exemplares identificados como sendo unicamente regulados por fração selenoglicoproteína (SGP) pH 4.0, e não regulados por selenito de sódio (SS) ou SEL-PLEX (SP).[00019] Figure 7 shows exemplary genes identified as being uniquely regulated by selenoglycoprotein fraction (SGP) pH 4.0, and not regulated by sodium selenite (SS) or SEL-PLEX (SP).

[00020] Figura 8 mostra um gene exemplar identificado como sendo unicamente regulado por fração selenoglicoproteína (SGP) pH 4.0, e não regulado por selenito de sódio (SS) ou SEL-PLEX (SP).[00020] Figure 8 shows an exemplary gene identified as being uniquely regulated by selenoglycoprotein fraction (SGP) pH 4.0, and not regulated by sodium selenite (SS) or SEL-PLEX (SP).

[00021] Figura 9 mostra um gene exemplar identificado como sendo unicamente regulado por fração selenoglicoproteína (SGP) pH 4.0, e não regulado por selenito de sódio (SS) ou SEL-PLEX (SP).[00021] Figure 9 shows an exemplary gene identified as being uniquely regulated by selenoglycoprotein fraction (SGP) pH 4.0, and not regulated by sodium selenite (SS) or SEL-PLEX (SP).

[00022] Figura 10 mostra um gene exemplar identificado como sendo unicamente regulado por fração selenoglicoproteína (SGP) pH 4.0, e não regulado por selenito de sódio (SS) ou SEL-PLEX (SP).[00022] Figure 10 shows an exemplary gene identified as being uniquely regulated by selenoglycoprotein fraction (SGP) pH 4.0, and not regulated by sodium selenite (SS) or SEL-PLEX (SP).

[00023] Figura 11 mostra um mapa de aquecimento representando os efeitos de diferentes tratamentos com suplemento de selênio descrito nas Tabelas 3 e 4 do Exemplo 3 nos níveis de expressão gênica em tecido hepático relativo a um controle basal.[00023] Figure 11 shows a heat map representing the effects of different selenium supplement treatments described in Tables 3 and 4 of Example 3 on gene expression levels in liver tissue relative to a basal control.

[00024] Figura 12 revela a liberação de SGP a partir de nanocápsulas em pH 5.1 e pH 7.4 por um período de duas semanas.[00024] Figure 12 reveals the release of SGP from nanocapsules at pH 5.1 and pH 7.4 for a period of two weeks.

[00025] Figura 13 mostra imagens Microscopia Eletrônica de Tunelamento Criogênico (cryo-TEM) de selenoglicoproteína encapsulada com polimersoma em pH 7.4.[00025] Figure 13 shows Cryogenic Tunneling Electron Microscopy (cryo-TEM) images of selenoglycoprotein encapsulated with polymersome at pH 7.4.

Definitions

[00026] Para facilitar um entendimento da presente invenção, um número de termos e frases são definidos abaixo:[00026] To facilitate an understanding of the present invention, a number of terms and phrases are defined below:

[00027] Como aqui utilizado, os termos "peptídeo", "polipeptídeo" e "proteína" todos referem a uma sequência primária de aminoácidos que são unidos por "ligações peptídicas" covalentes. Em geral, um peptídeo consiste de uns poucos aminoácidos, tipicamente a partir de 2-50 aminoácidos, e é mais curto que uma proteína. O termo "polipeptídeo" compreende peptídeos e proteínas.[00027] As used herein, the terms "peptide", "polypeptide" and "protein" all refer to a primary sequence of amino acids that are joined by covalent "peptide bonds". In general, a peptide consists of a few amino acids, typically from 2-50 amino acids, and is shorter than a protein. The term "polypeptide" comprises peptides and proteins.

[00028] O termo "glicoproteína(s)" ou "glicopeptídeo(s)" refere-se a uma proteína ou peptídeo que contém um ou mais resíduos carboidratos covalentemente ligados à cadeia polipeptídica. O termo "selenoproteína(s)" ou "selenopeptídeo(s)" refere-se a uma proteína ou peptídeo que contém um ou mais átomos de selênio. Tipicamente, átomos de selênio são incorporados em proteínas dentro de aminoácidos contendo selênio incluindo selenocisteína e selenometionina.[00028] The term "glycoprotein(s)" or "glycopeptide(s)" refers to a protein or peptide that contains one or more carbohydrate residues covalently linked to the polypeptide chain. The term "selenoprotein(s)" or "selenopeptide(s)" refers to a protein or peptide that contains one or more selenium atoms. Typically, selenium atoms are incorporated into proteins within selenium-containing amino acids including selenocysteine and selenomethionine.

[00029] O termo "selenoglicoproteína(s)", "selenoglicopeptídeo(s)" ou "SGP(s)" refere-se a uma glicoproteína ou glicopeptídeos que incorporam um ou mais átomos de selênio. Tipicamente, "selenoglicoproteínas" compreendem um ou mais aminoácidos contendo selênio. "Selenoglicoproteínas" podem compreender um número de carboidratos em qualquer número de diferentes formas.[00029] The term "selenoglycoprotein(s)", "selenoglycopeptide(s)" or "SGP(s)" refers to a glycoprotein or glycopeptides that incorporate one or more selenium atoms. Typically, "selenoglycoproteins" comprise one or more selenium-containing amino acids. "Selenoglycoproteins" may comprise a number of carbohydrates in any number of different forms.

[00030] Os termos "amostra" e "espécime" são usados no senso mais amplo e compreendem amostras ou espécimes obtidas a partir de animais (incluindo humanos), e compreendem fluidos, sólidos e tecidos. Em algumas modalidades desta invenção, amostras biológicas incluem fluido cerebroespinhal (CSF), fluido seroso, urina e saliva, sangue, e produtos sanguíneos tais como plasma, soro e semelhantes. Entretanto, esses exemplos não são construídos como limitantes dos tipos de amostras que encontram uso com a presente invenção.[00030] The terms "sample" and "specimen" are used in the broadest sense and comprise samples or specimens obtained from animals (including humans), and comprise fluids, solids and tissues. In some embodiments of this invention, biological samples include cerebrospinal fluid (CSF), serous fluid, urine and saliva, blood, and blood products such as plasma, serum, and the like. However, these examples are not intended to limit the types of samples that find use with the present invention.

[00031] Como aqui utilizado, o termo "levedura" e "células de levedura" referem-se a microorganismos eucarióticos classificados no reino Fungi, tendo uma parede celular, membrana celular e componentes intracelulares. Leveduras não formam um grupo taxonômico ou filogenético específico. Correntemente cerca de 1500 espécies são conhecidos; é estimado que somente 1% de todas as espécies de levedura tenham sido descritas. O termo "levedura" é sempre tomado como um sinônimo para S. cerevisiae, mas a diversidade filogenética de leveduras é mostrada por sua substituição em ambas as divisões Ascomycota e Basidiomycota. O termo "levedura" compreende levedura de cerveja, destilados de levedura e leveduras de Baker. As brotações de levedura ("leveduras verdadeiras") são classificadas na ordem Saccharomycetales. A maioria das espécies de levedura se reproduzem assexuadamente por brotação, embora algumas reproduzam por fissão binária. Leveduras são unicelulares, embora algumas espécies se tornam multicelulares através da formação de um cordão de células brotadas conectadas conhecidas como pseudoifas, ou falsas hifas. Tamanho de levedura varia grandemente dependendo das espécies, tipicamente medindo 34 μm em diâmetro, embora algumas leveduras podem alcançar mais de 40 μm.[00031] As used herein, the term "yeast" and "yeast cells" refer to eukaryotic microorganisms classified in the Fungi kingdom, having a cell wall, cell membrane and intracellular components. Yeasts do not form a specific taxonomic or phylogenetic group. Currently around 1500 species are known; It is estimated that only 1% of all yeast species have been described. The term "yeast" is always taken as a synonym for S. cerevisiae, but the phylogenetic diversity of yeasts is shown by their replacement in both the divisions Ascomycota and Basidiomycota. The term "yeast" comprises brewer's yeast, yeast distillates and Baker's yeast. Yeast buddings ("true yeasts") are classified in the order Saccharomycetales. Most yeast species reproduce asexually by budding, although some reproduce by binary fission. Yeasts are unicellular, although some species become multicellular through the formation of a cord of connected bud cells known as pseudoiphae, or false hyphae. Yeast size varies greatly depending on the species, typically measuring 34 μm in diameter, although some yeasts can reach over 40 μm.

[00032] Como aqui utilizado, os termos "levedura enriquecida com selênio" e "levedura selenizada" referem-se a qualquer levedura (por exemplo, Saccharomyces cerevisae) que é cultivada em um meio contendo sais de selênio inorgânico. A presente invenção não é limitada pelo sal selênio utilizado. De fato, uma variedade de sais selênio são contemplados para serem úteis na presente invenção incluindo, mas não limitada a, selenito de sódio, ou selenato de sódio. Selenometionina livre (por exemplo, não associada com uma célula ou levedura) pode também ser usada como a fonte de selênio para levedura enriquecida com selênio como levedura incorpora esta forma de selênio. Durante cultivo, por causa da similaridade química entre selênio e enxofre, a levedura incorpora selênio no lugar de enxofre onde são normalmente compostos orgânicos contendo enxofre dentro da célula. Um composto contendo selênio em tais preparações de levedura é selenometionina que é incorporada em polipeptídeos/proteínas. A quantidade de selênio celular total presente na forma de selenometionina em tais preparações variará, mas podem estar entre 10 e 100%, 20-60%, 50-75% e entre 60 e 75%. O remanescente do selênio orgânico em preparações de levedura selenizada é predominantemente feita de intermediários na via de biossíntese de selenometionina. Esses incluem, mas não são limitados a selenocisteína, selenocistationina, selenoomocisteína e selenoadenosilselenometionina. A quantidade de sal selênio inorgânico residual no produto terminado é geralmente bem baixa (por exemplo, <2%).[00032] As used herein, the terms "selenium-enriched yeast" and "selenized yeast" refer to any yeast (e.g., Saccharomyces cerevisae) that is cultivated in a medium containing inorganic selenium salts. The present invention is not limited by the selenium salt used. Indeed, a variety of selenium salts are contemplated to be useful in the present invention including, but not limited to, sodium selenite, or sodium selenate. Free selenomethionine (e.g., not associated with a cell or yeast) can also be used as the selenium source for selenium-enriched yeast as yeast incorporates this form of selenium. During cultivation, because of the chemical similarity between selenium and sulfur, yeast incorporates selenium in place of sulfur where organic sulfur-containing compounds are normally present within the cell. A selenium-containing compound in such yeast preparations is selenomethionine which is incorporated into polypeptides/proteins. The amount of total cellular selenium present in the form of selenomethionine in such preparations will vary, but may be between 10 and 100%, 20-60%, 50-75% and between 60 and 75%. The remainder of organic selenium in selenized yeast preparations is predominantly made from intermediates in the selenomethionine biosynthesis pathway. These include, but are not limited to, selenocysteine, selenocystathionine, selenomocysteine, and selenoadenosylselenomethionine. The amount of residual inorganic selenium salt in the finished product is generally quite low (e.g. <2%).

[00033] Como aqui utilizado, o termo "SEL-PLEX" refere-se a uma levedura enriquecida com selênio não viável (por exemplo, Sacchoromyces cerevisiae de número de acesso CNCM I-3060, Collection Nationale De Cultures De Microorganismes (CNCM), Instituto Pasteur, Paris, França) cultivada em um fed-batch de fermentação que provê quantidades incrementadas de melaço de cana e sais selênio em uma forma que minimiza os efeitos detrimetais de sais de selênio na taxa de crescimento da levedura e permite a ótima incorporação de selênio inorgânico no material orgânico celular. Selênio inorgânico residual é eliminado (por exemplo, usando um rigoroso processo de lavagem) e não excede 2% do conteúdo de selênio total.[00033] As used herein, the term "SEL-PLEX" refers to a non-viable selenium-enriched yeast (e.g., Sacchoromyces cerevisiae of CNCM accession number I-3060, Collection Nationale De Cultures De Microorganismes (CNCM), Pasteur Institute, Paris, France) grown in a fed-batch fermentation that provides incremental amounts of sugarcane molasses and selenium salts in a form that minimizes the detrimetal effects of selenium salts on the yeast growth rate and allows for optimal incorporation of inorganic selenium in cellular organic material. Residual inorganic selenium is eliminated (e.g. using a rigorous washing process) and does not exceed 2% of the total selenium content.

[00034] Como aqui utilizado, o termo "selênio orgânico" refere-se a qualquer composto orgânico em que átomo de selênio é diretamente conectado a um átomo de carbono.[00034] As used herein, the term "organic selenium" refers to any organic compound in which a selenium atom is directly connected to a carbon atom.

[00035] Como aqui utilizado, o termo "selênio inorgânico" geralmente refere-se a qualquer sal selênio (por exemplo, selenito de sódio, selenato de sódio) em que selênio está em um estado de oxidação -2, +4 e +6.[00035] As used herein, the term "inorganic selenium" generally refers to any selenium salt (e.g., sodium selenite, sodium selenate) in which selenium is in an oxidation state of -2, +4, and +6 .

[00036] Como aqui utilizado, os termos "hospedeiro", "sujeito" e "paciente" referem-se a qualquer animal, incluindo mas não limitado a, humanos e animais (por exemplo, primatas, cachorros, gatos, vacas, cavalos, ovelhas, aves domésticas, peixe, crustáceos etc) que são estudados, analisados, testados, diagnosticados ou tratados. Como aqui utilizado, os termos "hospedeiro", "sujeito" e "paciente" são usados de forma passível de mudança, a menos que de indicado de outra forma.[00036] As used herein, the terms "host", "subject" and "patient" refer to any animal, including but not limited to, humans and animals (e.g., primates, dogs, cats, cows, horses, sheep, poultry, fish, crustaceans, etc.) that are studied, analyzed, tested, diagnosed or treated. As used herein, the terms "host", "subject" and "patient" are used in a manner subject to change unless otherwise indicated.

[00037] Como aqui utilizado, o termo "p/p" ("peso/peso") refere-se a quantidade de uma dada substância em uma composição no peso base. Por exemplo, um animal alimentado compreendendo 0,02% p/p de suplemento de alimento dietético significa que a massa do suplemento de alimento dietético é 0,02% da massa total do alimento animal (por exemplo, 200 gramas de composição de suplemento alimentício dietético em 999,800 gramas de ração animal).[00037] As used herein, the term "w/w" ("weight/weight") refers to the amount of a given substance in a composition on a basis weight. For example, an animal feed comprising 0.02% w/w dietary food supplement means that the mass of the dietary food supplement is 0.02% of the total mass of the animal food (e.g., 200 grams of dietary supplement composition dietary allowance in 999,800 grams of animal feed).

[00038] Como aqui utilizado, o termo "purificado" ou "para purificar" refere-se a remoção de componentes a partir da amostra. Por exemplo, paredes de célula de levedura são purificadas por remoção de componentes da parede celular não levedura (por exemplo, membrana plasmática e/ou componentes intracelulares de levedura); elas são também purificadas por remoção de contaminantes o outros agentes que parede celular de levedura. A remoção de componentes da parede celular não levedura e/ou contaminantes de célula não levedura resulta em um aumento na percentagem de parede celular de levedura ou componentes da mesma em uma amostra.[00038] As used herein, the term "purified" or "to purify" refers to the removal of components from the sample. For example, yeast cell walls are purified by removing non-yeast cell wall components (e.g., yeast plasma membrane and/or intracellular components); They are also purified by removing contaminants and agents other than the yeast cell wall. Removal of non-yeast cell wall components and/or non-yeast cell contaminants results in an increase in the percentage of yeast cell wall or components thereof in a sample.

[00039] Como aqui utilizado, o termo "quantidade efetiva" refere-se a quantidade de uma composição (por exemplo, compreendendo selenoglicoproteínas da presente inveção para efetuar resultados benéficos ou desejados. Uma quantidade efetiva pode ser administrada em uma ou mais administrações, aplicações ou dosagens e não é tencionada ser limitada a uma formulação particular ou via de administração.[00039] As used herein, the term "effective amount" refers to the amount of a composition (e.g., comprising selenoglycoproteins of the present invention to effect beneficial or desired results. An effective amount may be administered in one or more administrations, applications or dosages and is not intended to be limited to a particular formulation or route of administration.

[00040] Como aqui utilizado, o termo "biodisponibilidade" refere-se a fração de uma molécula ou componente que é disponível a um organismo ou alcança a circulação sistêmica. Quando uma molécula ou componente é administrado intravenosamente, sua biodisponibilidade é bem alta. Entretanto, quando uma molécula ou componente é administrado através de outras vias (tal como oralmente), sua biodisponibilidade diminui (devido a absorção incompleta e metabolismo de primeira passagem). Em um ajuste nutricional, biodisponibilidade refere-se à taxas de absorção e utilização de um nutriente. Formas diferentes do mesmo nutriente, por exemplo, podem ter diferentes biodisponibilidades.[00040] As used herein, the term "bioavailability" refers to the fraction of a molecule or component that is available to an organism or reaches systemic circulation. When a molecule or component is administered intravenously, its bioavailability is very high. However, when a molecule or component is administered via other routes (such as orally), its bioavailability decreases (due to incomplete absorption and first-pass metabolism). In a nutritional setting, bioavailability refers to the rates of absorption and utilization of a nutrient. Different forms of the same nutrient, for example, can have different bioavailability.

[00041] Como aqui utilizado, os termos "alimento", "alimento animal", e "produto alimentício" refere-se ao(s) material(is) que é(são) consumido(s) por animais e contribuem para energia e/ou nutrientes a uma dieta animal. Exemplos incluem, mas não são limitados a, Ração Total Misturada (TMR), forragem(s), grãos(s), concentrado(s), pré- mistura(s), co-produto(s), grão(s) de destilação, melaços, fibra(s), ração(ões), grama(s), feno, semente(s), folhas, farinha, solúvel(is), e suplemento(s).[00041] As used herein, the terms "food", "animal food", and "food product" refer to material(s) that are consumed by animals and contribute to energy and /or nutrients to an animal diet. Examples include, but are not limited to, Total Mixed Feed (TMR), forage(s), grain(s), concentrate(s), premix(s), co-product(s), grain(s) distillation, molasses, fiber(s), feed(s), grass(es), hay, seed(s), leaves, flour, soluble(s), and supplement(s).

[00042] Como aqui utilizado, os termos "suplemento alimentar", "suplemento dietético", "composição de suplemento dietética", e semelhantes referem-se a um produto alimentar formulado como um suplemento dietético ou nutricional a ser usado como parte de uma dieta humana ou animal, por exemplo, como uma adição a alimentação animal.[00042] As used herein, the terms "dietary supplement", "dietary supplement", "dietary supplement composition", and the like refer to a food product formulated as a dietary or nutritional supplement to be used as part of a diet human or animal, for example, as an addition to animal feed.

[00043] Como aqui utilizado, os termos "administração" e "administrar" referem-se ao ato de dar uma droga, pró-droga, ou outro agente, ou tratamento terapêutico (por exemplo, composições da presente invenção) a um paciente (por exemplo, um paciente ou células, tecidos e órgãos in vivo, in vitro, ou ex vivo). Vias exemplares de administração ao corpo humano podem ser através dos olhos (oftálmico), boca (oral), pele (tópico ou transdérmico), nariz (nasal), pulmões (inalante), mucosa oral (bucal), ouvido, retal, vaginal, por injeção (por exemplo, intravenosamente, subcutaneamente, intratumoralmente, intraperitonealmente etc) e semelhantes.[00043] As used herein, the terms "administration" and "administer" refer to the act of giving a drug, prodrug, or other agent, or therapeutic treatment (e.g., compositions of the present invention) to a patient ( e.g., a patient or cells, tissues, and organs in vivo, in vitro, or ex vivo). Exemplary routes of administration to the human body may be through the eyes (ophthalmic), mouth (oral), skin (topical or transdermal), nose (nasal), lungs (inhalant), oral mucosa (buccal), ear, rectally, vaginally, by injection (e.g. intravenously, subcutaneously, intratumorally, intraperitoneally etc.) and the like.

[00044] Como aqui utilizado, os termos "co-administração" e "co- administrando" refere-se a administração de pelo menos dois agentes (por exemplo, composição compreendendo selenoglicoproteínas da invenção e um ou mais outros agentes -- por exemplo, um antibiótico, um terapêutico (por exemplo, droga ou farmacêutico), ou outros compostos biologicamente ativos) ou terapias a um paciente. Em algumas modalidades, a co-administração de dois ou mais agentes ou terapias é concorrente. Em outras modalidades, um primeiro agente/terapia é administrado antes de um segund agente/terapia. Aqueles versados na técnica entendem que as formulações e/ou vias de administração de vários agentes ou terapias usadas podem variar. A dose apropriada para co-administração pode ser facilmente determinada por um versado na técnica. Em algumas modalidades, quando agentes ou terapias são co-administradas, os agentes ou terapias respectivas são administrados em doses menores que apropriadas para sua administração sozinha. Então, co-administração é especialmente desejável em modalidades onde a co-administração dos agentes ou terapias inferiores da dose requerida de um agente(s) potencialmente prejudicial(is) (por exemplo, tóxico), e/ou quando co- administração de dois ou mais agentes resultam na sensibilização de um paciente para efeitos benéficos de um dos agentes através de co- administração de outro agente.[00044] As used herein, the terms "co-administration" and "co-administering" refer to the administration of at least two agents (e.g., composition comprising selenoglycoproteins of the invention and one or more other agents -- e.g. an antibiotic, a therapeutic (e.g., drug or pharmaceutical), or other biologically active compounds) or therapies to a patient. In some embodiments, the co-administration of two or more agents or therapies is concurrent. In other embodiments, a first agent/therapy is administered before a second agent/therapy. Those skilled in the art understand that the formulations and/or routes of administration of various agents or therapies used may vary. The appropriate dose for co-administration can be readily determined by one of skill in the art. In some embodiments, when agents or therapies are co-administered, the respective agents or therapies are administered in doses less than appropriate for their administration alone. Therefore, coadministration is especially desirable in embodiments where coadministration of agents or therapies less than the required dose of a potentially harmful (e.g., toxic) agent(s), and/or when coadministration of two or more agents result in sensitizing a patient to the beneficial effects of one of the agents through co-administration of another agent.

[00045] Como aqui utilizado, o termo "tratamento" ou equivalentes gramaticais compreende a melhora e/ou reversão dos sintomas da doença (por exemplo, doença neurodegenerativa). Um composto que causa uma melhora em qualquer parâmetro associado com doença quando usado nos métodos de seleção da presente invenção pode assim ser identificado como um composto terapêutico. O termo "tratamento" refere-se a ambos, tratamento terapêutico e profilático ou medidas preventivas. Por exemplo, aqueles que podem beneficiar a partir do tratamento com composições e métodos da presente invenção incluem aqueles já com uma doença e/ou distúrbio (por exemplo, doença neurodegenerativa, diabetes ou ausência ou perda de função cognitiva) bem como aquelas em que uma doença e/ou distúrbio é para ser prevenido (por exemplo, usando um tratamento profilático da presente invenção).[00045] As used herein, the term "treatment" or grammatical equivalents comprises the improvement and/or reversal of the symptoms of the disease (e.g., neurodegenerative disease). A compound that causes an improvement in any parameter associated with disease when used in the screening methods of the present invention can thus be identified as a therapeutic compound. The term "treatment" refers to both therapeutic and prophylactic treatment or preventive measures. For example, those who may benefit from treatment with compositions and methods of the present invention include those already with a disease and/or disorder (e.g., neurodegenerative disease, diabetes, or absence or loss of cognitive function) as well as those in whom a disease and/or disorder is to be prevented (e.g., using a prophylactic treatment of the present invention).

[00046] Como aqui utilizado, o termo "em risco de doença" refere- se a um paciente (por exemplo, um humano) que é pré-disposto para experienciar uma doença particular. Esta pré-disposição pode ser genética (por exemplo, uma tendência genética particular para experimentar a doença, tal como distúrbios hereditários), ou devido a outros fatores (por exemplo, idade, peso, condições ambientais, exposições a compostos danosos presentes no ambiente etc). Então, não é tencionado que a presente invenção seja limitada a qualquer risco particular, nem é tencionado que a presente invenção seja limitada a qualquer doença particular.[00046] As used herein, the term "at risk for disease" refers to a patient (e.g., a human) who is predisposed to experience a particular disease. This predisposition may be genetic (e.g., a particular genetic tendency to experience the disease, such as hereditary disorders), or due to other factors (e.g., age, weight, environmental conditions, exposure to harmful compounds present in the environment, etc. ). Therefore, it is not intended that the present invention be limited to any particular risk, nor is it intended that the present invention be limited to any particular disease.

[00047] Como aqui utilizado, o termo "sofrendo de doença" refere- se a um paciente (por exemplo, um humano) que é experimentado a uma doença particular. Não é tencionado que a presente invenção seja limitada a quaisquer sinais ou sintomas particulares, nem doença. Então, é tencionado que a presente invenção compreenda sujeitos que estão experimentando qualquer variação da doença (por exemplo, a partir de manifestação sub-clínica para doença desenvolvida) em que o paciente exibe pelo menos algum dos indícios (por exemplo, sinais e sintomas) associados com a doença particular.[00047] As used herein, the term "disease sufferer" refers to a patient (e.g., a human) who is experiencing a particular disease. It is not intended that the present invention be limited to any particular signs or symptoms, nor disease. Therefore, it is intended that the present invention encompass subjects who are experiencing any variation of the disease (e.g., from sub-clinical manifestation to full-blown disease) in which the patient exhibits at least some of the signs (e.g., signs and symptoms) associated with the particular disease.

[00048] Como aqui utilizado, os termos "doença" e "condição patológica" são usados de forma passível de mudança para descrever um estado, sinais, e/ou sintomas que são associados com qualquer impedimento do estado normal de um animal vivo ou de qualquer de seus órgãos ou tecidos que interrompe ou modifica o desempenho das funções normais, e podem ser uma resposta a fatores ambientais (tais como radiação, má-nutrição, riscos industriais, ou clima), para agentes infectivos específicos (tais como vermes, bactérias, ou vírus), para defeito inerente do organismo (tal como várias anormalidades genéticas), ou para combinações desses e outros fatores.[00048] As used herein, the terms "disease" and "pathological condition" are used in a changeable form to describe a state, signs, and/or symptoms that are associated with any impediment to the normal state of a living animal or any of its organs or tissues that interrupts or modifies the performance of normal functions, and may be a response to environmental factors (such as radiation, malnutrition, industrial hazards, or weather), to specific infectious agents (such as worms, bacteria , or virus), for an inherent defect of the organism (such as various genetic abnormalities), or for combinations of these and other factors.

[00049] O termo "composto" refere-se a qualquer entidade química, farmacêutica, droga, e semelhantes que pode ser usada para tratar ou prevenir uma doença, enfermidade, moléstia ou distúrbio de função corpórea. Compostos compreendem ambos, compostos conhecidos e potencialmente terapêuticos. Um composto pode ser determinado a ser terapêutico por seleção, usando os métodos de seleção da presente invenção. Um "composto terapêutico conhecido" refere-se a um composto terapêutico que tenha sido mostrado (por exemplo, através de triagens animais ou experiência anterior com administração a humanos) para ser efetivo em tal tratamento. Em outras palavras, um composto terapêutico conhecido não é limitado a um composto eficaz no tratamento da doença (por exemplo, câncer, doença neurodegenerativa etc.).[00049] The term "compound" refers to any chemical, pharmaceutical, drug, and similar entity that can be used to treat or prevent a disease, illness, disease or disorder of bodily function. Compounds comprise both known and potentially therapeutic compounds. A compound can be determined to be therapeutic by selection using the selection methods of the present invention. A "known therapeutic compound" refers to a therapeutic compound that has been shown (e.g., through animal screenings or previous experience with administration to humans) to be effective in such treatment. In other words, a known therapeutic compound is not limited to a compound effective in treating disease (e.g., cancer, neurodegenerative disease, etc.).

[00050] Como aqui utilizado, o termo "kit" é usado em referência a uma combinação de reagentes e outros materiais. É contemplado que o kit pode incluir reagentes como nutrientes e drogas bem como meios de administração. Não é tencionado que o termo "kit" seja limitado a uma combinação particular de reagentes e/ou outros materiais.[00050] As used herein, the term "kit" is used in reference to a combination of reagents and other materials. It is contemplated that the kit may include reagents such as nutrients and drugs as well as means of administration. It is not intended that the term "kit" be limited to a particular combination of reagents and/or other materials.

[00051] Como aqui utilizado, o termo "tóxico" refere-se a qualquer efeito danoso ou de risco em um paciente, uma célula, ou um tecido como comparado à mesma célula ou tecido antes da administração do toxicante.[00051] As used herein, the term "toxic" refers to any harmful or risky effect on a patient, a cell, or a tissue as compared to the same cell or tissue before administration of the toxicant.

[00052] Como aqui utilizado, o termo "composição farmacêutica" refere-se a combinação de um agente ativo (por exemplo, composição compreendendo selenoglicoproteínas) com um veículo, inerte ou ativo, fazendo a composição especialmente adequada para diagnóstico, uso preventivo e/ou terapêutico in vitro, in vivo ou ex vivo.[00052] As used herein, the term "pharmaceutical composition" refers to the combination of an active agent (e.g., composition comprising selenoglycoproteins) with a carrier, inert or active, making the composition especially suitable for diagnostic, preventive and/or use. or therapeutic in vitro, in vivo or ex vivo.

[00053] Os termos "farmaceuticamente aceitável" ou "farmacologicamente aceitável", como aqui utilizados, referem-se a composições que não substancialmente produzem reações adversas, por exemplo, reações tóxicas, alérgicas, ou imunológicas, quando administradas a um paciente.[00053] The terms "pharmaceutically acceptable" or "pharmacologically acceptable", as used herein, refer to compositions that do not substantially produce adverse reactions, for example, toxic, allergic, or immunological reactions, when administered to a patient.

[00054] Como aqui utilizado, o termo "topicamente" refere-se a aplicação das composições da presente invenção à superfície da pele e células e tecidos de mucosa (por exemplo, alveolar, bucal, lingual, mastigatório, ou mucosa nasal, e outros tecidos e células que alinham órgãos ocos ou cavidades corpóreas).[00054] As used herein, the term "topically" refers to the application of the compositions of the present invention to the surface of the skin and mucosal cells and tissues (e.g., alveolar, buccal, lingual, masticatory, or nasal mucosa, and others). tissues and cells that line hollow organs or body cavities).

[00055] Como aqui utilizado, o termo "veículo farmaceuticamente aceitável" refere-se a qualquer dos veículos farmaceuticamente aceitáveis incluindo, mas não limitados a, solução salina tamponada com fosfato, água, emulsões (por exemplo, tais como emulsões óleo/água ou água/óleo), e vários tipos de agentes umectantes, qualquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, lauril sulfato de sódio, agentes isotônicos e de retardo de absorção, desintegrantes (por exemplo, amido de batata ou glicolato amido de sódio), e semelhantes. As composições também pode incluir estabilizadores e conservantes. Exemplos de veículos, estabilizadores e adjuvantes são descritos, por exemplo, em Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15a Ed., Mack Publ. Co., Easton, Pa. (1975), aqui incorporado por referência). Em algumas modalidades, um produto alimentício (por exemplo, material de dieta e/ou tratamento) atua como um veículo (por exemplo, de uma composição selenogliproteína da invenção).[00055] As used herein, the term "pharmaceutically acceptable carrier" refers to any pharmaceutically acceptable carrier including, but not limited to, phosphate buffered saline, water, emulsions (e.g., such as oil/water emulsions or water/oil), and various types of wetting agents, any and all solvents, dispersing media, coatings, sodium lauryl sulfate, isotonic and absorption delaying agents, disintegrants (e.g., potato starch or sodium starch glycolate ), and the like. The compositions may also include stabilizers and preservatives. Examples of vehicles, stabilizers and adjuvants are described, for example, in Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publ. Co., Easton, Pa. (1975), incorporated herein by reference). In some embodiments, a food product (e.g., dietary and/or treatment material) acts as a carrier (e.g., of a selenoglyprotein composition of the invention).

[00056] Como aqui utilizado, o termo "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se a qualquer sal (por exemplo, obtido pela reação com um ácido ou uma base) de um composto da presente invenção que é fisiologicamente tolerado no paciente alvo (por exemplo, um paciente mamífero, e/ou células, tecidos ou órgãos in vivo ou ex vivo). "Sais" dos compostos da presente invenção podem ser derivados a partir de ácidos e bases inorgânicas ou orgânicas. Exemplos de ácidos incluem, mas não são limitados a, ácido clorídrico, bromídrico, sulfúrico, fumárico, maléico, fosfórico, glicólico, lático, salicílico, succínico, tolueno-p-sulfônico, tartárico, acético, cítrico, metanosulfônico, etanosulfônico, fórmico, benzóico, malônico, naftaleno-2-sulfônico, benzenosulfônico e semelhantes. Outros ácidos, tais como oxálico, enquando não farmaceuticamente aceitáveis eles mesmos, podem ser empregados na preparação de sais úteis como intermediários na obtenção de compostos da invenção e seus sais de adição ácida farmaceuticamente aceitáveis. Exemplos de bases incluem, mas não são limitados a hidróxidos de metal alcalino (por exemplo, sódio), hidróxidos de metal alcalino terroso (por exemplo, magnésio), e compostos de fórmula NW4+, em que W é alquilaC1-4, e semelhantes. Exemplos de sais incluem, mas não são limitados a: acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, benzenosulfonato, bisulfato, butirato, citrato, canforato, canforsulfonato, ciclopentanoproprionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, fumarato, flucoeptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, cloreto, brometo, iodeto, 2-hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, oxalato, palmoato, pectinato, fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, tosilato, undecanoato, e semelhantes. Outros exemplos de sais incluem ânions dos compostos da presente invenção compostos com um cátion adequado tais como Na +, NH4+, e NW4+ (em que W é um grupo alquilaC1-4), e semelhantes. Para uso terapêutico, sais dos compostos da presente invenção são contemplados como sendo farmaceuticamente aceitáveis. Entretanto, sais de ácidos e bases que são farmaceuticamente não aceitáveis podem também encontrar uso, por exemplo, na preparação ou purificação de um composto farmaceuticamente aceitável. Para uso terapêutico, sais dos compostos da presente invenção são contemplados como sendo farmaceuticamente aceitáveis. Entretanto, sais de ácidos e bases que são não farmaceuticamente aceitávels podem também encontrar uso, por exemplo, na preparação ou purificação de um composto farmaceuticamente aceitável.[00056] As used herein, the term "pharmaceutically acceptable salt" refers to any salt (e.g., obtained by reaction with an acid or a base) of a compound of the present invention that is physiologically tolerated in the target patient (e.g. , a mammalian patient, and/or cells, tissues or organs in vivo or ex vivo). "Salts" of the compounds of the present invention can be derived from inorganic or organic acids and bases. Examples of acids include, but are not limited to, hydrochloric, hydrobromic, sulfuric, fumaric, maleic, phosphoric, glycolic, lactic, salicylic, succinic, toluene-p-sulfonic, tartaric, acetic, citric, methanesulfonic, ethanesulfonic, formic, benzoic, malonic, naphthalene-2-sulfonic, benzenesulfonic and the like. Other acids, such as oxalic, while not pharmaceutically acceptable themselves, can be employed in the preparation of salts useful as intermediates in obtaining compounds of the invention and pharmaceutically acceptable acid addition salts thereof. Examples of bases include, but are not limited to, alkali metal hydroxides (e.g., sodium), alkaline earth metal hydroxides (e.g., magnesium), and compounds of formula NW4+, wherein W is C1-4 alkyl, and the like. Examples of salts include, but are not limited to: acetate, adipate, alginate, aspartate, benzoate, benzenesulfonate, bisulfate, butyrate, citrate, camphorate, camphorsulfonate, cyclopentaneproprionate, digluconate, dodecylsulfate, ethanesulfonate, fumarate, flucoeptanoate, glycerophosphate, hemisulfate, heptanoate , hexanoate, chloride, bromide, iodide, 2-hydroxyethanesulfonate, lactate, maleate, methanesulfonate, 2-naphthalenesulfonate, nicotinate, oxalate, palmoate, pectinate, phenylpropionate, picrate, pivalate, propionate, succinate, tartrate, thiocyanate, tosylate, undecanoate, and similar. Other examples of salts include anions of the compounds of the present invention compounded with a suitable cation such as Na+, NH4+, and NW4+ (wherein W is a C1-4 alkyl group), and the like. For therapeutic use, salts of the compounds of the present invention are contemplated to be pharmaceutically acceptable. However, salts of acids and bases that are pharmaceutically unacceptable may also find use, for example, in the preparation or purification of a pharmaceutically acceptable compound. For therapeutic use, salts of the compounds of the present invention are contemplated to be pharmaceutically acceptable. However, salts of acids and bases that are non-pharmaceutically acceptable may also find use, for example, in the preparation or purification of a pharmaceutically acceptable compound.

[00057] Como aqui utilizado, o termo "secando" refere-se a secagem por pulverização, liofilização, secagem ao ar, secagem a vácuo ou qualquer outro tipo de processo que reduz ou elimina líquido em uma substância.[00057] As used herein, the term "drying" refers to spray drying, freeze drying, air drying, vacuum drying or any other type of process that reduces or eliminates liquid in a substance.

[00058] Como aqui utilizado, o termo "secagem por pulverização" refere-se a método comumente utilizado de secagem de uma substância contendo líquido usando gás quente para evaporar o líquido para reduzir ou eliminar líquido na substância. Em outras palavras o material é seco por meio de pulverização ou atomização em um projeto de ar seco quente.[00058] As used herein, the term "spray drying" refers to a commonly used method of drying a liquid-containing substance using hot gas to evaporate the liquid to reduce or eliminate liquid in the substance. In other words the material is dried by spraying or atomizing in a hot dry air design.

[00059] Como aqui utilizado, o termo "freeze-drying"e o termo "liofilização" e o termo "criodesecação" refere-se a remoção de um solvente a partir da matéria em um estado congelado por sublimação. Isto é realizado por congelamento do material a ser seco abaixo de seu ponto eutético e então provendo o calor latente da sublimação. Controle preciso do vácuo e entrada de calor permite secagem a partir do estado de congelamento sem produção de derretimento. Em aplicação prática, o processo é acelerado e precisamente controlado sob condições de pressão reduzida.[00059] As used herein, the term "freeze-drying" and the term "lyophilization" and the term "cryo-drying" refer to the removal of a solvent from matter in a frozen state by sublimation. This is accomplished by freezing the material to be dried below its eutectic point and then providing the latent heat of sublimation. Precise control of vacuum and heat input allows drying from the frozen state without producing melt. In practical application, the process is accelerated and precisely controlled under reduced pressure conditions.

[00060] Como aqui utilizado, o termo "pós secos fluidos" referem-se a um pó seco de livre fluxo, por exemplo, um pó que pode ser despejado a partir de um recipiente, bolsa, vaso etc sem impedimento de grandes aglomerados.[00060] As used herein, the term "flowable dry powders" refers to a free-flowing dry powder, for example, a powder that can be poured from a container, bag, vessel, etc. without preventing large agglomerations.

[00061] Como aqui utilizado, o termo "moagem" refere-se a redução do tamanho da partícula pelo impacto, raspagem, ou atrito.[00061] As used herein, the term "grinding" refers to reducing particle size by impact, scraping, or friction.

[00062] Como aqui utilizado, o termo "lavagem" refere-se a remoção ou limpeza (por exemplo, usando qualquer tipo de soluto (por exemplo, água destilada, tampão, ou solvente) ou mistura) de impurezas ou componente não desejado solúvel de uma preparação (por exemplo, uma parede celular de levedura) pode ser lavada para remover componentes de parede celular de não levedura a partir da amostra).[00062] As used herein, the term "washing" refers to the removal or cleaning (e.g., using any type of solute (e.g., distilled water, buffer, or solvent) or mixture) of impurities or unwanted soluble component of a preparation (e.g., a yeast cell wall) can be washed to remove non-yeast cell wall components from the sample).

[00063] Como aqui utilizado, o termo "polimersoma" refere-se a vesículas que são reunidas a partir de polímeros sintéticos em solução aquosa (por exemplo, que podem ser utilizadas p ara encapsular um material). Polimersomas podem ser feitos usando copolímeros bloqueadores sintéticos anfifílicos para formar a membrana da vesícula, e ter raio variando de 50 nm a 5 μm ou mais. A maioria dos polimersomas contém uma solução aquosa em seu núcleo e são úteis para encapsular e proteger moléculas sensíveis, tais como drogas, enzimas, outras proteínas e peptídeos bem como fragmentos de DNA e RNA. A membrana polimersoma provê uma barreira física que isola o material encapsulado a partir de materiais externos, tais como aqueles encontrados em sistemas biológicos. Exemplos de polimersomas que encontram uso em modalidades da invenção, bem como suas sínteses, podem ser encontrados, por exemplo, na Patente dos EUA Nos. 7.867.512, 7.682.603 e 8.835.394, cada das quais é aqui incorporada por referêcia em sua totalidade.[00063] As used herein, the term "polymersome" refers to vesicles that are assembled from synthetic polymers in aqueous solution (for example, that can be used to encapsulate a material). Polymersomes can be made using amphiphilic synthetic blocking copolymers to form the vesicle membrane, and have radii ranging from 50 nm to 5 μm or more. Most polymersomes contain an aqueous solution in their core and are useful for encapsulating and protecting sensitive molecules such as drugs, enzymes, other proteins and peptides as well as DNA and RNA fragments. The polymersome membrane provides a physical barrier that isolates the encapsulated material from external materials, such as those found in biological systems. Examples of polymersomes that find use in embodiments of the invention, as well as their syntheses, can be found, for example, in US Patent Nos. 7,867,512, 7,682,603 and 8,835,394, each of which is incorporated herein by reference in its entirety.

[00064] Como aqui utilizado, o termo "descarte" refere-se a materiais não desejados ou inúteis.[00064] As used herein, the term "discard" refers to unwanted or useless materials.

[00065] Como aqui utilizado o termo "águas residuais" é qualquer água que tenha sido adversamente afetada em sua qualidade por influência antropogênica.[00065] As used herein the term "wastewater" is any water that has been adversely affected in its quality by anthropogenic influence.

Detailed description of the invention I. Introduction

[00066] Selênio é um elemento traço envolvido em aspectos reguladores do mecanismo de defesa antioxidante em todos os tecidos vivos por interação com a glutationa do corpo (GSH) e sua principal enzima antioxidante contendo Se, glutationa peroxidase (GPX) e tioredoxina redutase (Ver, por exemplo, Goehring et al., J. Anim. Sci. 59, 725-732 (1984); Gerloff et al., J. Anim. Sci. 70, 3934-3940 (1992); aqui incorporados por referência em suas totalidades). Glutationa e GPX têm a capacidade de proteger a integridade de ligações insaturadas de fosfolipídeos de membrana por extinsão de ataques de radical livre capaz de iniciar e propagar oxidação lipídica (Ver, por exemplo, Meister and Anderson, Annu. Rev. Biochem. 52, 711-760 (1983); Deleve and Kaplowitz, Pharm. Ther. 52, 287-305 (1991); Palmer and Paulson, Nutr. Rev. 55, 353-361 (1997); aqui incorporados por referência em suas totalidades).[00066] Selenium is a trace element involved in regulatory aspects of the antioxidant defense mechanism in all living tissues by interaction with the body's glutathione (GSH) and its main Se-containing antioxidant enzyme, glutathione peroxidase (GPX) and thioredoxin reductase (See , for example, Goehring et al., J. Anim. Sci. 59, 725-732 (1984); Gerloff et al., J. Anim. Sci. 70, 3934-3940 (1992); incorporated herein by reference in their totalities). Glutathione and GPX have the ability to protect the integrity of unsaturated bonds of membrane phospholipids by quenching free radical attacks capable of initiating and propagating lipid oxidation (See, e.g., Meister and Anderson, Annu. Rev. Biochem. 52, 711 -760 (1983); Deleve and Kaplowitz, Pharm. Ther. 52, 287-305 (1991); Palmer and Paulson, Nutr. Rev. 55, 353-361 (1997); incorporated herein by reference in their entireties).

[00067] Selênio tem também sido associado com risco de câncer reduzido em vários estudos epidemiológicos (Ver, por exemplo, Salonen et al., Am. J. Epidemiol. 120: 342-349 (1984); Willett et al., Lancet 2: 130-134 (1983); Virtamo et al., Cancer 60: 145-148 (1987); aqui incorporados por referência em suas totalidades). Vários compostos selênio de origem natural e sintética têm sido mostrados inibir desenvolvimento de tumor em estudos animais em uma ampla variedade de doses (Ver, por exemplo, Ip,. J. Nutr. 128: 1845-1854 (1998); aqui incorporado por referência em sua totalidade). Embora a maioria dos estudos com animais tem empregado doses farmacológicas de selênio (>2 mg/kg) em quimioprevenção de câncer (Ver, por exemplo, Ip,. J. Nutr. 128: 1845-1854 (1998)), deficiência em selênio tem também sido mostrada aumentar a carcinogênese mamária (Ver, por exemplo, Ip and Daniel, Cancer Res. 45: 61-65 (1985); aqui incorporado por referência em sua totalidade) e de pele induzida por UVB (Ver, por exemplo, Pence et al., 102: 759-761 (1994); aqui incorporado por referência em sua totalidade).[00067] Selenium has also been associated with reduced cancer risk in several epidemiological studies (See, for example, Salonen et al., Am. J. Epidemiol. 120: 342-349 (1984); Willett et al., Lancet 2 : 130-134 (1983); Virtamo et al., Cancer 60: 145-148 (1987); incorporated herein by reference in their entirety). Several selenium compounds of natural and synthetic origin have been shown to inhibit tumor development in animal studies at a wide range of doses (See, e.g., Ip, J. Nutr. 128: 1845-1854 (1998); incorporated herein by reference in its entirety). Although most animal studies have employed pharmacological doses of selenium (>2 mg/kg) in cancer chemoprevention (See, e.g., Ip. J. Nutr. 128:1845-1854 (1998)), selenium deficiency has also been shown to increase breast (See, e.g., Ip and Daniel, Cancer Res. 45:61-65 (1985); incorporated herein by reference in its entirety) and UVB-induced skin carcinogenesis (See, e.g., Pence et al., 102: 759-761 (1994); incorporated herein by reference in its entirety).

[00068] Proteínas de parede celular de levedura são conectadas a polissacarídeos de parede celular por ligação química, e a fim de liberar proteína de parede celular de levedura em solução, essas ligações precisam ser quebradas. A prática padrão para extração de proteína a partir da parede celular de levedura é quebrar as ligações usando hidrólise alcalina (pH 11,5, 80o C) antes de centrifugar para separar proteínas a partir de polissacarídeos glucan que são insolúveis em água.[00068] Yeast cell wall proteins are connected to cell wall polysaccharides by chemical bonding, and in order to release yeast cell wall protein into solution, these bonds need to be broken. Standard practice for extracting protein from the yeast cell wall is to break the bonds using alkaline hydrolysis (pH 11.5, 80o C) before centrifuging to separate proteins from glucan polysaccharides that are insoluble in water.

[00069] Experimentos conduzidos durante o desenvolvimento das modalidades da invenção foram feitos em uma tentativa de extrair selenoglicoproteínas usando a prática padrão de hidrólise alcalina. Essas tentativas para extrair selenoglicoproteínas a partir da parede celular de levedura usando hidrólise alcalina falharam. Foi mais tarde aprendido que a falha em extrair selenoglicoproteínas a partir da parece celular de levedura usando hidrólise alcalina foi devido a destruição de selenoglicoproteínas. Tentativas posteriores de extrair selenoglicoproteínas foram conduzidas usando um procedimento de hidrólise alcalina modificado (pH 11,5, 60o C). Essas tentativas também falharam em extrair selenoglicoproteínas a partir da parede celular de levedura. Os métodos de extração da proteína de levedura, alcalina, típica não funcionam quando tentados para extrair selenoglicoproteínas a partir de leveduras. Então, experimentos adicionais foram conduzidos durante o desenvolvimento de modalidades da invenção que tentaram extrair selenoglicoproteínas usando uma extração acídica (pH 5, 80oC). Como descrito aqui, o método de extração acídica foi bem sucedido; as selenoglicoproteínas não foram destruídas e extração foi possível.[00069] Experiments conducted during the development of embodiments of the invention were done in an attempt to extract selenoglycoproteins using the standard practice of alkaline hydrolysis. These attempts to extract selenoglycoproteins from the yeast cell wall using alkaline hydrolysis have failed. It was later learned that the failure to extract selenoglycoproteins from the yeast cell wall using alkaline hydrolysis was due to the destruction of selenoglycoproteins. Later attempts to extract selenoglycoproteins were conducted using a modified alkaline hydrolysis procedure (pH 11.5, 60o C). These attempts also failed to extract selenoglycoproteins from the yeast cell wall. Typical alkaline yeast protein extraction methods do not work when attempted to extract selenoglycoproteins from yeast. Then, additional experiments were conducted during the development of embodiments of the invention that attempted to extract selenoglycoproteins using an acidic extraction (pH 5, 80oC). As described here, the acidic extraction method was successful; selenoglycoproteins were not destroyed and extraction was possible.

[00070] Então, em algumas modalidades, a invenção provê novos métodos para obtenção de selenoglicoproteínas (SGPs), composições de selenoglicoproteína (SGP) (por exemplo, obtido usando métodos de extração acídicos (por exempl, frações de selenoglicoproteína dependentes de pH), composições compreendendo selenoglicoproteínas encapsuladas (SGP's), e métodos de uso das mesmas (por exemplo, para prover benefício in vivo (por exemplo, mudanças nos perfis de expressão gênica) a um paciente (por exemplo, humano, animal etc)). Em particular, experimentos conduzidos durante o desenvolvimento de modalidades da invenção demonstram que composições (por exemplo, compreendendo SGP (por exemplo, isoladas através de um método da invenção)) e método da invenção podem ser usados para prover selênio biologicamente provido a um paciente (por exemplo, assim aumentando o conteúdo de selênio de tecido e/ou músculo dentro do paciente (por exemplo, assim levando a uma estabilização e/ou aumento da saúde de um paciente))). Em algumas modalidades, a invenção provê métodos para obtenção de SGP's, composições compreendendo SGP's encapsuladas (por exemplo, polimersoma encapsulado) e métodos de uso das mesmas para alterar a função celular (por exemplo, assim provendo efeitos benéficos a um sistema de um paciente (por exemplo, incluindo, mas não limitado a, sistema músculo-esquelético, o sistema neurológico, o sistema nervoso, o sistema endócrino, o sistema metabólico, e/ou o sistema imune). A invenção também provê métodos de uso de SGPs sozinhas ou em combinação com um ou mais outros agentes ativos para tratar ou prevenir doença (por exemplo, crescimento de câncer e/ou metástase). A invenção também provê métodos de uso de SGPs para aumentar a saúde do animal (por exemplo, pecuária). Em algumas modalidades, composições da invenção são utilizadas para suplementar, melhorar e/ou aumentar a saúde e/ou valor nutricional de produtos alimentícios (por exemplo, carne, laticínio, ovos etc). Em algumas modalidades, a invenção provê composições compreendendo SGPs e métodos de uso dos mesmos como tratamento terapêutico, suplemento nutricional, e/ou profilático (por exemplo, para saúde geral, para desafio do sistema imune, para doença neurodegenerativa, para aumentar a função cognitiva, para o tratamento ou prevenção de câncer, crescimento de tumor e/ou metástase etc), e métodos de fazer, produzir, purificar, isolar, extrair, e/ou caracterizar as mesmas. A invenção também provê SPGs e métodos de uso das SGPs para alimentar animais e/ou suplementar ração animal.[00070] Then, in some embodiments, the invention provides new methods for obtaining selenoglycoproteins (SGPs), selenoglycoprotein (SGP) compositions (e.g., obtained using acidic extraction methods (e.g., pH-dependent selenoglycoprotein fractions), compositions comprising encapsulated selenoglycoproteins (SGP's), and methods of using the same (e.g., to provide in vivo benefit (e.g., changes in gene expression profiles) to a patient (e.g., human, animal, etc.)). In particular , experiments conducted during the development of embodiments of the invention demonstrate that compositions (e.g., comprising SGP (e.g., isolated by a method of the invention)) and method of the invention can be used to provide biologically provided selenium to a patient (e.g. , thus increasing the selenium content of tissue and/or muscle within the patient (e.g., thus leading to a stabilization and/or increase in a patient's health))). In some embodiments, the invention provides methods for obtaining SGP's, compositions comprising encapsulated SGP's (e.g., encapsulated polymersome) and methods of using the same to alter cellular function (e.g., thereby providing beneficial effects to a patient's system). for example, including, but not limited to, the musculoskeletal system, the neurological system, the nervous system, the endocrine system, the metabolic system, and/or the immune system). The invention also provides methods of using SGPs alone or in combination with one or more other active agents to treat or prevent disease (e.g., cancer growth and/or metastasis). The invention also provides methods of using SGPs to increase animal health (e.g., animal husbandry). In some embodiments, compositions of the invention are used to supplement, improve and/or increase the health and/or nutritional value of food products (e.g., meat, dairy, eggs, etc.) In some embodiments, the invention provides compositions comprising SGPs and methods use of them as a therapeutic treatment, nutritional supplement, and/or prophylactic (e.g., for general health, to challenge the immune system, for neurodegenerative disease, to increase cognitive function, for the treatment or prevention of cancer, tumor growth and/or metastasis, etc.), and methods of making, producing, purifying, isolating, extracting, and/or characterizing them. The invention also provides SPGs and methods of using SGPs to feed animals and/or supplement animal feed.

[00071] A invenção também provê composições de selênio solúveis (por exemplo, SGPs) e métodos de uso, produção, e purificação das mesmas. Por exemplo, em algumas modalidades, a invenção provê SGPs solúveis (Ver, por exemplo, Exemplos 1-2 descrevendo a geração de (por exemplo, separação e caracterização de) frações de SGP dependentes de pH), e composições e métodos para administração das mesmas (Ver, por exemplo, Exemplos 3-4). Em algumas modalidades, a invenção provê selênio (por exemplo, selênio orgânico (por exemplo, fração SGP dependente de pH de SEL-PLEX ou outra levedura enriquecida por selênio)) em uma forma solúvel que é administrada a um paciente através de uma variedade de vias (por exemplo, oral, tópica, intravenosa etc). Em algumas modalidades, a invenção provê uma composição de selênio solúvel de baixa fibra (por exemplo, selênio orgânico). Em algumas modalidades, a invenção provê composições e métodos para sistemas de distribuição de selênio orgânico solúvel (por exemplo, selenoglicoproteínas encapsuladas com polimersoma, nanocápsulas, polímeros etc).[00071] The invention also provides soluble selenium compositions (e.g., SGPs) and methods of use, production, and purification thereof. For example, in some embodiments, the invention provides soluble SGPs (See, e.g., Examples 1-2 describing the generation of (e.g., separation and characterization of) pH-dependent SGP fractions), and compositions and methods for administering the (See, for example, Examples 3-4). In some embodiments, the invention provides selenium (e.g., organic selenium (e.g., pH-dependent SGP fraction of SEL-PLEX or other selenium-enriched yeast)) in a soluble form that is administered to a patient through a variety of routes (e.g. oral, topical, intravenous, etc.). In some embodiments, the invention provides a low fiber soluble selenium composition (e.g., organic selenium). In some embodiments, the invention provides compositions and methods for soluble organic selenium delivery systems (e.g., polymersome-encapsulated selenoglycoproteins, nanocapsules, polymers, etc.).

[00072] Levedura (por exemplo, Saccharomyces cerevisiae), crescidos em meio contendo selênio (por exemplo, selênio inorgânico (por exemplo, selenito de sódio (Na2SeO3))) metabolizam o selênio (por exemplo, selênio inorgânico) e incorporam selênio ao invés de enxofre em cisteína e metionina, produzindo proteínas contendo selenoaminoácidos (SeCys e SeMet) (Demirci et al. J. Agric. Food Chem. 47, 2496-2500 (1999)., Demirci & Pometto. J. Agric. Food Chem. 47, 2491-2495 (1999), Ouerdane & Mester. J.Agric.Food Chem. 56,11792-11799, (2008), cada dos quais é aqui incorporado por referência em suas totalidades). ALLTECH, Inc. (Nicholsville, KY, EUA) produz levedura enriquecida de selênio secada por pulverização, vendida sobre o nome de SEL-PLEX como um alimento e suplemento nutricional alimentício, contendo "selênio orgânico" (Ver, por exemplo, Korhola et al. Res. 18, 65-68, (1986)., aqui incorporado por referência em sua totalidade). A concentração mínica de selênio em SEL-PLEX é 1500 ppm e proteínas são os veículos exclusivos do mesmo (Ver, por exemplo, Surai. Nottingham University Press 2002, 234-236 (2002), Kelly & Power. J. Dairy Sci. 78, 237-242 (1995), McSheehy et al. Analyst 130, 35-37 (2005), aqui incorporados por referência em suas totalidades). Existem dois grupos de proteínas em levedura: proteínas presentes dentro da célula de levedura e proteínas associadas com a manana na parede celular da levedura (Ver, por exemplo, Sedmak. Pub. Pedido de Patente Norte-Americana No.: US 2006/0263415., aqui incorporado por referência em sua totalidade). Cerca de 17,0 peso% de SEL-PLEX comercial é solúvel em água, e este material contém menos que 6,5% do selênio total que está presente em SEL-PLEX. Estudos de alimentação de galinhas em que SEL-PLEX e selenito de sódio foram usados com fontes de selênio, indicaram muito melhor a transferência de selênio em um músculo de peito de galinha por SEL- PLEX. Uma variedade de bio-atividades foram descobertas para administração oral de SEL-PLEX (Ver, por exemplo, Rayman. The Lancet 356, 233-241 (2000), McKenzie Trends in Immunology 19, 342-345 (1998), Tapiero. Biomedicine & Pharmacotherapy 57, 134-144 (2003), Combs & Grey Pharmacol. Ther. 79, 179-192 (1998), Clark et. al. J. Am. Med. Assoc. 276, 1957-1963 (1996), aqui incorporado por referência em suas totalidades).[00072] Yeast (e.g., Saccharomyces cerevisiae), grown in medium containing selenium (e.g., inorganic selenium (e.g., sodium selenite (Na2SeO3))) metabolize selenium (e.g., inorganic selenium) and incorporate selenium instead of sulfur into cysteine and methionine, producing proteins containing selenoamino acids (SeCys and SeMet) (Demirci et al. J. Agric. Food Chem. 47, 2496-2500 (1999)., Demirci & Pometto. J. Agric. Food Chem. 47 , 2491-2495 (1999), Ouerdane & Mester. J.Agric.Food Chem. 56,11792-11799, (2008), each of which is incorporated herein by reference in its entirety). ALLTECH, Inc. (Nicholsville, KY, USA) produces spray-dried selenium-enriched yeast, sold under the name SEL-PLEX as a food and nutritional supplement, containing "organic selenium" (See, for example, Korhola et al. . Res. 18, 65-68, (1986)., incorporated herein by reference in its entirety). The minimum concentration of selenium in SEL-PLEX is 1500 ppm and proteins are the exclusive carriers of it (See, for example, Surai. Nottingham University Press 2002, 234-236 (2002), Kelly & Power. J. Dairy Sci. 78 , 237-242 (1995), McSheehy et al. Analyst 130, 35-37 (2005), incorporated herein by reference in their entirety). There are two groups of proteins in yeast: proteins present within the yeast cell and proteins associated with mannan in the yeast cell wall (See, for example, Sedmak. Pub. U.S. Patent Application No.: US 2006/0263415. , incorporated herein by reference in its entirety). About 17.0 wt% of commercial SEL-PLEX is water soluble, and this material contains less than 6.5% of the total selenium that is present in SEL-PLEX. Chicken feeding studies in which SEL-PLEX and sodium selenite were used with selenium sources indicated much better transfer of selenium into chicken breast muscle by SEL-PLEX. A variety of bioactivities have been discovered for oral administration of SEL-PLEX (See, for example, Rayman. The Lancet 356, 233-241 (2000), McKenzie Trends in Immunology 19, 342-345 (1998), Tapiero. Biomedicine & Pharmacotherapy 57, 134-144 (2003), Combs & Gray Pharmacol. Ther. 79, 179-192 (1998), Clark et. al. J. Am. Med. Assoc. 276, 1957-1963 (1996), here incorporated by reference in their entireties).

[00073] Em algumas modalidades, a invenção provê separação, e caracterização física e química de selenoglicoproteínas solúveis (SGP's) a partir de levedura (por exemplo, Saccharomyces cerevisiae) cresceu em meio contendo selênio (por exemplo, selênio inorgânico (por exemplo, selenito de sódio)), e sua participação ativa na distribuição de "selênio orgânico" a tecidos (por exemplo, humano, animal, galinha etc), alimentando o pacient com alimento suplementado (por exemplo, ração) com ou de outra forma contendo SGP's da invenção (Ver, por exemplo, Exemplo 1-4). A invenção provê distribuição do ativo no tecido alvo, intravenosa, oral, e/ou transdérmica, componentes de selênio solúvel (por exemplo, frações SGP dependente de pH de um selênio, levedura enriquecida (por exemplo, SEL-PLEX). Em algumas modalidades, a invenção provê formas de liberação lenta de sistemas de distribuição de "selênio orgânico" (por exemplo, nanocápsulas, esferas poliméricas, e SGPs encapsuladas com polimersoma) (Ver, por exemplo, Exemplos 5-9). Em algumas modalidades, a invenção provê uma composição compreendendo SGP's encapsuladas com polimersoma. Em algumas modalidades a invenção provê distribuição aumentada e biodistribuição melhorada de SGP's por encapsulamento de SGP dentro de poli(etileno óxido)-bloco-poH(n-caprolactona) (PEO-b-PCL) baseada em polimersomas.[00073] In some embodiments, the invention provides separation, and physical and chemical characterization of soluble selenoglycoproteins (SGP's) from yeast (e.g., Saccharomyces cerevisiae) grown in selenium-containing medium (e.g., inorganic selenium (e.g., selenite sodium)), and its active participation in the distribution of "organic selenium" to tissues (e.g., human, animal, chicken, etc.), feeding the patient with food supplemented (e.g., feed) with or otherwise containing SGP's from invention (See, for example, Example 1-4). The invention provides target tissue delivery of the active, intravenous, oral, and/or transdermal, soluble selenium components (e.g., pH-dependent SGP fractions of a selenium, enriched yeast (e.g., SEL-PLEX). In some embodiments , the invention provides slow-release forms of "organic selenium" delivery systems (e.g., nanocapsules, polymeric beads, and polymersome-encapsulated SGPs) (See, e.g., Examples 5-9). In some embodiments, the invention provides a composition comprising polymersome-encapsulated SGP's. in polymersomes.

[00074] Separação de vários componentes de célula de levedura por extração da parede celular a partir de componentes intracelulares de células de levedura têm sido descritos (Ver, por exemplo, Otero et al. J. Chem. Tech. Biotechnol. 66, 67-71 (1996), aqui incorporados por referência em sua totalidade). Essas técnicas de separação não tem sido aplicadas à extração de selênio de levedura por secagem por pulverização. As condições alcalinas convencionais (pH 9.0-14.0) usadas na técnica na extração de glicoproteínas a partir de levedura (Ver, por exemplo, Roberge et. al. J.Agric. Food Chem. 51, 4191-4197 (2003), aqui incorporado por referência em sua totalidade) falhou porque substituintes SeH ou SeMe foram eliminados a partir de aminoácidos selenocistina ou selenometionina. Em outras palavras, os substituintes desejados decompostos e como um resultado selênio que estava presente na SGP original foi perdida durante a tentativa de extração em condições alcalinas quando aplicada à extração de levedura contendo selenoproteínas (Ver, por exemplo, Tabela 12 do Exemplo 8).[00074] Separation of various yeast cell components by cell wall extraction from intracellular components of yeast cells have been described (See, for example, Otero et al. J. Chem. Tech. Biotechnol. 66, 67- 71 (1996), incorporated herein by reference in its entirety). These separation techniques have not been applied to the extraction of selenium from yeast by spray drying. Conventional alkaline conditions (pH 9.0-14.0) used in the art in the extraction of glycoproteins from yeast (See, for example, Roberge et. al. J.Agric. Food Chem. 51, 4191-4197 (2003), incorporated herein by reference in its entirety) failed because SeH or SeMe substituents were deleted from selenocystine or selenomethionine amino acids. In other words, the desired substituents decomposed and as a result selenium that was present in the original SGP was lost during the attempted extraction under alkaline conditions when applied to the extraction of yeast containing selenoproteins (See, for example, Table 12 of Example 8).

[00075] Consequentemente, em algumas modalidades, a invenção provê composições de selenoglicoproteínas (por exemplo, compreendendo uma fração dependente de pH de selenoglicoproteínas aqui descritas) e métodos de utilização do mesmo. Em algumas modalidades, a invenção provê métodos de produção, purificação, isolamento, extração, separação, precipitação, e/ou caracterização de selenoglicoproteínas (por exemplo, a partir da levedura enriquecida com selênio). Em algumas modalidades, a invenção provê composições e métodos para a distribuição de composições de selênio solúveis (por exemplo, SGPs (por exemplo, frações SGP dependentes de pH)) a um paciente, incluindo composições suplementares da dieta (por exemplo, compreendendo SGPs (por exemplo, farmacêuticos, nutracêuticos, suplementos, produtos alimentícios etc)). Em algumas modalidades, a invenção provê composições e métodos para distribuição avançada (por exemplo, distribuição direcionada, distribuição de liberação por tempo etc) de selênio (por exemplo, SGPs (por exemplo, polimersomas, nanocápsulas, nanopartículas, polímeros etc)). Composições e métodos da invenção encontram uso em uma variedade de aplicações incluindo mas não limitadas a dieta (por exemplo, misturando com produtos alimentícios ou de outra forma alimentos de animais), preventiva, terapêutica, bem como, aplicações de pesquisa. Consequentemente, em algumas modalidades, a invenção provê composições de ração animal (por exemplo, compreendendo SGPs (por exemplo, SGPs solúveis (por exemplo, selênio orgânico solúvel))), métodos de fabricação das composições e métodos de prover nutrição (por exemplo, compreendendo SGPs (por exemplo, SGPs solúveis (por exemplo, selênio orgânico solúvel))) à animais compreendendo prover as composições aos animais.[00075] Consequently, in some embodiments, the invention provides selenoglycoprotein compositions (for example, comprising a pH-dependent fraction of selenoglycoproteins described herein) and methods of using the same. In some embodiments, the invention provides methods of producing, purifying, isolating, extracting, separating, precipitation, and/or characterizing selenoglycoproteins (e.g., from selenium-enriched yeast). In some embodiments, the invention provides compositions and methods for delivering soluble selenium compositions (e.g., SGPs (e.g., pH-dependent SGP fractions)) to a patient, including dietary supplemental compositions (e.g., comprising SGPs ( e.g. pharmaceuticals, nutraceuticals, supplements, food products etc)). In some embodiments, the invention provides compositions and methods for advanced delivery (e.g., targeted delivery, time-release delivery, etc.) of selenium (e.g., SGPs (e.g., polymersomes, nanocapsules, nanoparticles, polymers, etc.)). Compositions and methods of the invention find use in a variety of applications including but not limited to dietary (e.g., mixing with food products or otherwise animal feed), preventative, therapeutic, as well as, research applications. Accordingly, in some embodiments, the invention provides animal feed compositions (e.g., comprising SGPs (e.g., soluble SGPs (e.g., soluble organic selenium))), methods of manufacturing the compositions, and methods of providing nutrition (e.g., comprising SGPs (e.g., soluble SGPs (e.g., soluble organic selenium))) to animals comprising providing the compositions to animals.

II. Extraction, separation, purification and use

[00076] Em algumas modalidades da invenção, selênio solúvel é obtido na forma de selenoglicoproteínas (SGPs). Em algumas modalidades, SGPs são extraídas a partir da fonte geral de selenoproteínas (por exemplo, levedura enriquecida com selênio (por exemplo, SEL-PLES)). Em algumas modalidades, extração e/ou purificação de SGPs compreendem um ou mais passos de extração/precipitação dependente de pH (por exemplo, como descrito nos Exemplos 1 e 2). Em algumas modalidades, extração e/ou purificação de SGPs compreendem um ou mais passos de fracionamento dependente de pH. Em algumas modalidades a invenção provê extração acídica de levedura enriquecida com selênio (por exemplo, SEL-PLEX) para solubilizar SGP's (por exemplo, sem desnaturar e/ou destruir os SGPs). Em algumas modalidades, a invenção provê que a precipitação dependente de pH de SGPs a partir de um extrato acídico (por exemplo, como descrito nos Exemplos 1-2) produz conteúdo aumentado de selenoglicoproteínas, conteúdo diminuído de fibras não digeríveis, e uma alta concentração de selênio (por exemplo, uma concentração de selênio que é maior que aquela presente em SEL-PLEX). Então, em algumas modalidades, a invenção provê SGP extraído de levedura enriquecida com selênio em que o conteúdo de selênio da SGP é maior que o conteúdo de selênio do material a partir do qual a SGP foi extraída (por exemplo, em p/p%, ppm etc). Em algumas modalidades, a invenção provê selênio na forma de uma fração SGP dependente de pH (por exemplo, frações pH 4.0 ou pH 6.0) de levedura enriquecida com selênio (por exemplo, SEL-PLEX) que revela o mesmo ou nível similar mais alto de biodisponibilidade quando administrado a um paciente comparado a biodisponiblidade de selênio a partir de uma fonte parental de levedura enriquecida com selênio (por exemplo, SEL-PLEX) (Ver, por exemplo, Exemplo 3, Tabela 5).[00076] In some embodiments of the invention, soluble selenium is obtained in the form of selenoglycoproteins (SGPs). In some embodiments, SGPs are extracted from the general source of selenoproteins (e.g., selenium-enriched yeast (e.g., SEL-PLES)). In some embodiments, extraction and/or purification of SGPs comprises one or more pH-dependent extraction/precipitation steps (e.g., as described in Examples 1 and 2). In some embodiments, extraction and/or purification of SGPs comprises one or more pH-dependent fractionation steps. In some embodiments the invention provides acidic extraction of selenium-enriched yeast (e.g., SEL-PLEX) to solubilize SGP's (e.g., without denaturing and/or destroying the SGPs). In some embodiments, the invention provides that pH-dependent precipitation of SGPs from an acidic extract (e.g., as described in Examples 1-2) produces increased content of selenoglycoproteins, decreased content of nondigestible fibers, and a high concentration of selenium (e.g., a concentration of selenium that is greater than that present in SEL-PLEX). Thus, in some embodiments, the invention provides SGP extracted from selenium-enriched yeast in which the selenium content of the SGP is greater than the selenium content of the material from which the SGP was extracted (e.g., in w/w% , ppm etc). In some embodiments, the invention provides selenium in the form of a pH-dependent SGP fraction (e.g., pH 4.0 or pH 6.0 fractions) from selenium-enriched yeast (e.g., SEL-PLEX) that yields the same or similar higher level of bioavailability when administered to a patient compared to the bioavailability of selenium from a parental source of selenium-enriched yeast (e.g., SEL-PLEX) (See, e.g., Example 3, Table 5).

[00077] Em algumas modalidades, SGPs são extraídas a partir da fonte geral de selenoproteínas (por exemplo, células de levedura enriquecidas com selênio (por exemplo, SEL-PLEX)). Em algumas modalidades, uma porção das selenoproteínas em uma fonte de selenoproteína compreende SGPs (por exemplo 0,1%... 0,2%... 0,5%... 1,0%... 2,0%... 5,0%... 10%... 20%... 50% ou mais SGPs). Em algumas modalidades, uma fonte de selenoproteína compreende células (por exemplo, células de levedura) que têm sido crescidas na presença de meio contendo Se (por exemplo, meio rico em Se). Em algumas modalidades, células contendo Se (por exemplo, células de levedura) são processadas para extrair, isolar, e/ou purificar selenoproteínas resultando em uma fonte de selenoproteína ou composição rica em selenoproteína (por exemplo, composição rica em SGP). Em algumas modalidades, uma amostra compreendendo selenoproteínas e SGPs é enriquecida para SGPs.[00077] In some embodiments, SGPs are extracted from the general source of selenoproteins (e.g., selenium-enriched yeast cells (e.g., SEL-PLEX)). In some embodiments, a portion of the selenoproteins in a selenoprotein source comprises SGPs (e.g. 0.1%... 0.2%... 0.5%... 1.0%... 2.0% ... 5.0%... 10%... 20%... 50% or more SGPs). In some embodiments, a source of selenoprotein comprises cells (e.g., yeast cells) that have been grown in the presence of Se-containing medium (e.g., Se-rich medium). In some embodiments, Se-containing cells (e.g., yeast cells) are processed to extract, isolate, and/or purify selenoproteins resulting in a source of selenoprotein or selenoprotein-rich composition (e.g., SGP-rich composition). In some embodiments, a sample comprising selenoproteins and SGPs is enriched for SGPs.

[00078] Em algumas modalidades, uma fonte de selenoproteína ou composição rica em selenoproteína (por exemplo, fonte de levedura enriquecida em selênio (por exemplo, SEL-PLEX)) é sujeita a um ou mais passos para produzir, purificar, separar, e/ou extrair SPGs. Em algumas modalidades, uma fonte de selenoproteína misturada (por exemplo, em um veículo líquido (por exemplo, água, tampão, sal etc)) para produzir uma suspensão, mistura, lisado, e/ou solução protéica. Em algumas modalidades, a fonte de selenoproteína (por exemplo, fonte de levedura enriquecida com selênio (por exemplo, SEL-PLEX)) é misturada em alta temperatura (por exemplo, acima do congelamento, acima de temperatur aambiente, 30°C... 40°C... 50°C... 60°C... 70°C... 80°C... 90°C ou maior). Em algumas modalidades, a fonte de selenoproteína (por exemplo, fonte de levedura enriquecida com selênio (por exemplo, SEL-PLEX)) é misturada em pH baixo (por exemplo, condições acídicas (por exemplo, pH cerca de 0.5, cerca de 1.0, cerca de 1.5, cerca de 2.0, cerca de 3.0, cerca de 4.0, cerca de 4.5, cerca de 5.0, cerca de 5.5, cerca de 6.0 ou cerca de 6.5). Em algumas modalidades, a fonte de selenoproteína (por exemplo, fonte de levedura enriquecida por selênio (por exemplo, SEL-PLEX)) é gentilmente misturada, rapidamente misturada, completamente misturada, vigorosamente misturada etc. Em algumas modalidades, a fonte de selenoproteína (por exemplo, fonte de levedura enriquecida com selênio (por exemplo, SEL-PLEX)) é misturada em pH baixo (por exemplo, condições acídicas (por exemplo, pH cerca de 0.5, cerca de 1.0, cerca de 1.5, cerca de 2.0, cerca de 3.0, cerca de 4.0, cerca de 4.5, cerca de 5.0, cerca de 5.5, cerca de 6.0 ou cerca de 6.5) em alta temperatura (por exemplo, acima do congelamento, acima da temperatura ambiente, 30°C... 40°C... 50°C... 60°C... 70°C... 80°C... 90°C ou maior)). Em algumas modalidades, o pH da mistura é mantido através da adição de ácido ou base.[00078] In some embodiments, a selenoprotein source or selenoprotein-rich composition (e.g., selenium-enriched yeast source (e.g., SEL-PLEX)) is subjected to one or more steps to produce, purify, separate, and /or extract SPGs. In some embodiments, a source of selenoprotein is mixed (e.g., in a liquid vehicle (e.g., water, buffer, salt, etc.)) to produce a suspension, mixture, lysate, and/or protein solution. In some embodiments, the selenoprotein source (e.g., selenium-enriched yeast source (e.g., SEL-PLEX)) is mixed at high temperature (e.g., above freezing, above room temperature, 30°C.. 40°C... 50°C... 60°C... 70°C... 80°C... 90°C or greater). In some embodiments, the selenoprotein source (e.g., selenium-enriched yeast source (e.g., SEL-PLEX)) is mixed under low pH (e.g., acidic conditions (e.g., pH about 0.5, about 1.0). , about 1.5, about 2.0, about 3.0, about 4.0, about 4.5, about 5.0, about 5.5, about 6.0, or about 6.5).In some embodiments, the source of selenoprotein (e.g., selenium-enriched yeast source (e.g., SEL-PLEX)) is gently mixed, quickly mixed, thoroughly mixed, vigorously mixed, etc. In some embodiments, the selenoprotein source (e.g., selenium-enriched yeast source (e.g., , SEL-PLEX)) is mixed under low pH (e.g., acidic conditions (e.g., pH about 0.5, about 1.0, about 1.5, about 2.0, about 3.0, about 4.0, about 4.5, about 5.0, about 5.5, about 6.0 or about 6.5) at high temperature (e.g. above freezing, above room temperature, 30°C... 40°C... 50°C... 60°C... 70°C... 80°C... 90°C or higher)). In some embodiments, the pH of the mixture is maintained through the addition of acid or base.

[00079] Em algumas modalidades, a mistura contendo selenoproteína é centrifugada para separar as fases líquida/sólida e sólida/insolúvel. Em algumas modalidades, uma velocidade centrífuga é selecionada que é suficiente para separar as fases. Em algumas modalidades, a fase líquida compreende SGPs solúveis. Em algumas modalidades, o pH da fase líquida é ajustado (por exemplo, elevado) para precipitar uma porção das SGPs. Em algumas modalidades, o pH da fração líquida é elevado levemente para moderadamente (por exemplo, pH elevado por cerca de 0,1... 0,2... 0,5... 1,0... 2,0) para precipitar SGPs que foram solúveis no pH original, mas não pH elevado. Em algumas modalidades, o pH da fração líquida é elevado significativamente (por exemplo, pH elevado por cerca de 1.0... 2.0... 3.0... 4.0... 5.0... 6.0) para precipitar uma grande porção das SGPs que foram solúveis no pH original. Em algumas modalidades, selenoglicoproteínas são precipitadas e separadas a partir da fase líquida em uma variedade de condições de pH para gerar múltiplas frações dependentes de pH de selenoglicoproteínas solúveis. Por exemplo, em algumas modalidades, uma fase líquida única compreendendo o extrato de levedura enriquecida com selênio solúvel em condições acídicas é usado para criar uma primeira fração de selenoglicoproteínas solúveis precipitadas em um primeiro pH (por exemplo, pH de 1.85), uma segunda fração de selenoglicoproteínas solúveis precipitadas a um segundo pH (por exemplo, pH de 3.0), uma terceira fração de selenoglicoproteínas solúveis precipitadas em um terceiro pH (por exemplo, pH de 4.0), e uma quarta fração de selenoglicoproteínas solúveis precipitadas em um quarto pH (por exemplo, pH de 6.0). Em algumas modalidades, precipitando as selenoglicoproteínas a partir da fase líquida através de elevar o pH da fase líquida compreende múltiplas reações de precipitação dependente de pH sequencial da fase líquida.[00079] In some embodiments, the selenoprotein-containing mixture is centrifuged to separate the liquid/solid and solid/insoluble phases. In some embodiments, a centrifugal speed is selected that is sufficient to separate the phases. In some embodiments, the liquid phase comprises soluble SGPs. In some embodiments, the pH of the liquid phase is adjusted (e.g., raised) to precipitate a portion of the SGPs. In some embodiments, the pH of the liquid fraction is raised slightly to moderately (e.g., pH raised by about 0.1... 0.2... 0.5... 1.0... 2.0 ) to precipitate SGPs that were soluble at the original pH, but not elevated pH. In some embodiments, the pH of the liquid fraction is raised significantly (e.g., pH raised by about 1.0... 2.0... 3.0... 4.0... 5.0... 6.0) to precipitate a large portion of the SGPs. which were soluble at the original pH. In some embodiments, selenoglycoproteins are precipitated and separated from the liquid phase under a variety of pH conditions to generate multiple pH-dependent fractions of soluble selenoglycoproteins. For example, in some embodiments, a single liquid phase comprising soluble selenium-enriched yeast extract under acidic conditions is used to create a first fraction of soluble selenoglycoproteins precipitated at a first pH (e.g., pH 1.85), a second fraction of soluble selenoglycoproteins precipitated at a second pH (e.g., pH 3.0), a third fraction of soluble selenoglycoproteins precipitated at a third pH (e.g., pH 4.0), and a fourth fraction of soluble selenoglycoproteins precipitated at a fourth pH ( e.g. pH of 6.0). In some embodiments, precipitating selenoglycoproteins from the liquid phase by raising the pH of the liquid phase comprises multiple sequential pH-dependent precipitation reactions of the liquid phase.

[00080] Em algumas modalidades, SGPs precipitadas são separadas a partir da fração líquida ajustada com pH por centrifugação (por exemplo, em velocidade suficiente para produzir fases líquidas e sólidas separadsa). Em algumas modalidades, SGPs que têm sido separadas a partir da fase líquida são liofilizadas para produzir uma fração SGP sólida. Em algumas modalidades, o processo de elevar o pH da fase líquida e centrifugação para isolar a fração SGP é repetida para produzir frações SGP de solubilidade diferente (por exemplo, solúvel abaixo de pH 1.5..., solúvel abaixo de pH 2..., solúvel abaixo de pH 3... solúvel abaixo de pH 4... solúvel abaixo de pH 5... solúvel abaixo de pH 6 etc). Em algumas modalidades, um único ajuste de pH e passos de centrifugação são feitos para produzir uma fração contendo SGPs de uma solubilidade desejada (por exemplo, solúvel abaixo de pH 1.5... solúvel abaixo de pH 2... solúvel abaixo de pH 3... solúvel abaixo de pH 4... solúvel abaixo de pH 5... solúvel abaixo de pH 6 etc). Em algumas modalidades, a fase líqida que permanece após a remoção da fração SGP final encontra utilidade como um componente de meio de crescimento para células usadas em uma produção adicional de selenoproteínas ou SGPs. Em algumas modalidades, uma composição compreendendo selenoglicoproteínas solúveis contêm somente uma fração dependente de pH única das selenoglicoproteínas (por exemplo, selenoglicoproteínas solúveis a partir da fase líquida compreendendo o extrato de levedura enriquecida com selênio solúvel em condições acídicas precipitadas em pH 4.0). Em algumas modalidades, uma composição compreendendo selenoglicoproteínas solúveis contêm duas ou mais frações dependentes de pH de selenoglicoproteínas (por exemplo, selenoglicoproteínas solúveis a partir da fase líquida compreendendo o extrato de levedura enriquecida com selênio solúvel sob condições acídicas em dois ou mais valores de pH diferentes).[00080] In some embodiments, precipitated SGPs are separated from the pH-adjusted liquid fraction by centrifugation (e.g., at a speed sufficient to produce separate liquid and solid phases). In some embodiments, SGPs that have been separated from the liquid phase are lyophilized to produce a solid SGP fraction. In some embodiments, the process of raising the pH of the liquid phase and centrifugation to isolate the SGP fraction is repeated to produce SGP fractions of different solubility (e.g., soluble below pH 1.5..., soluble below pH 2... , soluble below pH 3... soluble below pH 4... soluble below pH 5... soluble below pH 6 etc.). In some embodiments, a single pH adjustment and centrifugation steps are done to produce a fraction containing SGPs of a desired solubility (e.g., soluble below pH 1.5... soluble below pH 2... soluble below pH 3 ... soluble below pH 4... soluble below pH 5... soluble below pH 6 etc.). In some embodiments, the liquid phase that remains after removal of the final SGP fraction finds use as a growth medium component for cells used in further production of selenoproteins or SGPs. In some embodiments, a composition comprising soluble selenoglycoproteins contains only a single pH-dependent fraction of the selenoglycoproteins (e.g., soluble selenoglycoproteins from the liquid phase comprising selenium-enriched yeast extract soluble in acidic conditions precipitated at pH 4.0). In some embodiments, a composition comprising soluble selenoglycoproteins contains two or more pH-dependent fractions of selenoglycoproteins (e.g., soluble selenoglycoproteins from the liquid phase comprising selenium-enriched yeast extract soluble under acidic conditions at two or more different pH values). ).

[00081] Em uma modalidade preferida, o processo de extração de SGP a partir da fonte de selenoproteína (por exemplo, levedura enriquecida com selênio (por exemplo, SEL-PLEX)) e fracionamento dependendo pH da mistura de SGPs (Ver, por exemplo, Figuras 2 e 3) compreende dois estágios (Ver, por exemplo, Exemplos 1-2, Figuras 1 e 2). No primeiro estágio, uma suspensão de levedura enriquecida com selênio em 0,3 N HCl (pH 1.5) é agitada e aquecida a 80oC por 8 h. O pH da mistura é mantida a pH 1.5 pela adição de HCl concentrado durante a primeira hora da extração. Após oito horas, a mistura é centrifugada, e a fase líquida é separada. O pH da solução e ajustado a 1.85, pela adição de 2.0 N NaOH e SGPs que têm solubilidade limitada neste pH precipitado a partir da solução e são separados a partir dos líquidos (pH 1.85) pela segunda centrifugação e então liofilizado para produzir fração SGP sólida de pH 1.85. Em algumas modalidades, os líquidos (pH 1.85) são misturados com sólidos (pH 1.5) a partir da primeira centrifugação, que resulta em mudança do pH da mistura para pH 1.6. A maioria das SGPs solúveis em pH 1.6 é transferida na fase líquida, sem aumentar os volumes das corrente de descarte dentro desta estágio do processo. O principal subproduto a partir deste corrente de descarte sólida constitui cerca de 56.5 peso% de levedura enriquecida com selênio tomada para extração e contém valioso material de parede celular de levedura com selênio contendo: 38,91% de proteína e 2477 ppm de selênio. Em algumas modalidades, esses sólidos são utilizados (por exemplo sozinhos ou em combinação com outro material (por exemplo, levedura enriquecida com selênio)) como um suplemento nutricional amigo do ambiente em dietas animais. No segundo estágio (Ver, por exemplo, Figura 3), a fase líquida (pH 1.6) a partir da segunda centrifugação (Ver FIG. 2) é transferida para um misturado e o pH é ajustado para pH 3.0 pela adição de 2.0 N de NaOH e SGPs que têm solubilidade limitada neste pH precipitado a partir da solução e são separados a partir dos líquidos (pH 3.0) pela terceira centrifugação e finalmente liofilizado para produzir fração sólida SGP de pH 3.0(Ver, por exemplo, Exemplos 1-2 e Figuras 2 e 3). A fase líquida (pH 3.0) a partir da terceira centrifugação é transferida a um misturados e o pH ajustado para o pH 4.0 pela adição de 2.0 N de NaOH e SGPs que têm solubilidade limitada neste pH precipitado a partir da solução e são separados a partir dos líquidos (pH 4.0) pela quarta centrifugação e finalmente liofilizado para produzir fração SGP sólida de pH 4.0. A fase líquida (pH 4.0) a partir da quarta centrifugação é transferida a um misturado e o pH é ajustado para pH 6.0 pela adição de 2.0 N de NaOH e SGPs que têm solubilidade limitada neste pH precipitado a partir da solução e são separados a partir dos líquidos (pH 6.0) pela quinta centrifugação e então liofilizado para produzir a fração SGP sólida de pH 6.0. A única corrente de descarte produzida no segundo estágio do processo é corrente de descarte de água, contendo 13,4 peso% de sólidos (em comparação com o peso de levedura enriquecida com selênio usada na extração) fora dos quais a fração de proteína constitui cerca de 13.1 peso%, cloreto de sódio para 3,6 peso%, e glicose emono- e oligossacarídeos de manose constituem acima de 80 peso%. Esta corrente de "descarte de água" de pH 6.0 e concentração de selênio de 242 ppm podem ser reciclados ou de outra forma reutilizados para a preparação de um novo lote de levedura com selênio (por exemplo, utilizada em meio de crescimento).[00081] In a preferred embodiment, the process of extracting SGP from the selenoprotein source (e.g., selenium-enriched yeast (e.g., SEL-PLEX)) and fractionating depending on the pH of the mixture of SGPs (See, e.g. , Figures 2 and 3) comprises two stages (See, for example, Examples 1-2, Figures 1 and 2). In the first stage, a selenium-enriched yeast suspension in 0.3 N HCl (pH 1.5) is stirred and heated at 80oC for 8 h. The pH of the mixture is maintained at pH 1.5 by adding concentrated HCl during the first hour of extraction. After eight hours, the mixture is centrifuged, and the liquid phase is separated. The pH of the solution is adjusted to 1.85 by the addition of 2.0 N NaOH and SGPs which have limited solubility at this pH precipitate from the solution and are separated from the liquids (pH 1.85) by the second centrifugation and then lyophilized to produce solid SGP fraction. pH 1.85. In some embodiments, liquids (pH 1.85) are mixed with solids (pH 1.5) from the first centrifugation, which results in a change in the pH of the mixture to pH 1.6. Most SGPs soluble at pH 1.6 are transferred into the liquid phase, without increasing waste stream volumes within this stage of the process. The main by-product from this solid waste stream constitutes about 56.5 wt% selenium-enriched yeast taken for extraction and contains valuable selenium yeast cell wall material containing: 38.91% protein and 2477 ppm selenium. In some embodiments, these solids are used (e.g. alone or in combination with another material (e.g., selenium-enriched yeast)) as an environmentally friendly nutritional supplement in animal diets. In the second stage (See, for example, Figure 3), the liquid phase (pH 1.6) from the second centrifugation (See FIG. 2) is transferred to a blender and the pH is adjusted to pH 3.0 by adding 2.0 N of NaOH and SGPs that have limited solubility at this pH precipitate from the solution and are separated from the liquids (pH 3.0) by the third centrifugation and finally lyophilized to produce solid SGP fraction of pH 3.0 (See, for example, Examples 1-2 and Figures 2 and 3). The liquid phase (pH 3.0) from the third centrifugation is transferred to a mixed and pH adjusted to pH 4.0 by the addition of 2.0 N NaOH and SGPs which have limited solubility at this pH precipitate from the solution and are separated from of liquids (pH 4.0) by the fourth centrifugation and finally lyophilized to produce solid SGP fraction of pH 4.0. The liquid phase (pH 4.0) from the fourth centrifugation is transferred to a mixture and the pH is adjusted to pH 6.0 by the addition of 2.0 N NaOH and SGPs which have limited solubility at this pH precipitate from the solution and are separated from of the liquids (pH 6.0) by the fifth centrifugation and then lyophilized to produce the solid SGP fraction of pH 6.0. The only waste stream produced in the second stage of the process is water waste stream, containing 13.4 wt% solids (compared to the weight of selenium-enriched yeast used in extraction) out of which the protein fraction constitutes ca. to 13.1 weight%, sodium chloride to 3.6 weight%, and glucose emono- and mannose oligosaccharides constitute above 80 weight%. This "water waste" stream of pH 6.0 and selenium concentration of 242 ppm can be recycled or otherwise reused to prepare a new batch of selenium yeast (e.g., used in growth medium).

[00082] Em algumas modalidades, SPGs precipitadas a pH 4.0 exibem distribuição de selênio superior (por exemplo, a tecido muscular) como comparado a levedura enriquecida com selênio (por exemplo, SEL-PLEX) e distribuição muito superior quando comparado a formas inorgânicas de selênio (por exemplo, selenito de sódio) (Ver, por exemplo, Exemplo 3). Adicionalmente, frações de selenoglicoproteínas dependentes de pH (pore xemplo, pH 6.0) são diferentes composionalmente que a levedura enriquecida com selênio (por exemplo, SEL-PLEX) e permitem a distribuição de quantidades similares de selênio enquanto requerendo muito menos material de partida (por exemplo, levedura enriquecida com selênio).[00082] In some embodiments, SPGs precipitated at pH 4.0 exhibit superior selenium distribution (e.g., to muscle tissue) as compared to selenium-enriched yeast (e.g., SEL-PLEX) and much superior distribution when compared to inorganic forms of selenium (e.g. sodium selenite) (See, e.g., Example 3). Additionally, pH-dependent selenoglycoprotein fractions (e.g., pH 6.0) are compositionally different than selenium-enriched yeast (e.g., SEL-PLEX) and allow delivery of similar amounts of selenium while requiring much less starting material (e.g., example, selenium-enriched yeast).

[00083] Em algumas modalidades, um procedimento de extração de SGP compreende 4 ou menos de ajuste de pH e passos de centrifugação do procedimento acima (por exemplo, 1 ajuste de pH e passo de centrifugação, 2 ajustes de pH e passos de centrifugação 3 ajustes de pH e passos de centrifugação, 4 ajustes de pH e passos de centrifugação).[00083] In some embodiments, an SGP extraction procedure comprises 4 or less pH adjustment and centrifugation steps of the above procedure (e.g., 1 pH adjustment and centrifugation step, 2 pH adjustments and 3 centrifugation steps pH adjustments and centrifugation steps, 4 pH adjustments and centrifugation steps).

III. Animal food

[00084] Ração animal refere-se a qualquer produto alimentício usado para alimentar livestock domesticado (por exemplo, gado, cabra, ovelha, cavalos, aves domésticas, búfalo, alpaca, lhamas, burros, mulas, coelhos, galinhas, ganso, perus, o porcos). Rações animais incluem feno, palha, silagem, rações comprimidas e peletizadas, rações oleosas e misturadas, e também grãos e legumes germinados. A indústria de ração animal ao redor do mundo consumiu 635 milhões de toneladas de alimentos em 2006, com uma taxa de crescimento anual de cerca de 2%. O uso de terra agrícola para crescimento de ração ao invés de alimento humano pode ser controverso; alguns tipos de raçõe, tais como milho (maizena), podem também servir como alimento humano, enquanto outros tais como grama não. Em adição para prover uma fonte de energia aos animais, rações animais também provêem nutrientes (por exemplo, selênio) utilizados pelo corpo.[00084] Animal feed refers to any food product used to feed domesticated livestock (e.g., cattle, goats, sheep, horses, poultry, buffalo, alpaca, llamas, donkeys, mules, rabbits, chickens, goose, turkeys, or pigs). Animal feeds include hay, straw, silage, compressed and pelleted feeds, oily and mixed feeds, and also sprouted grains and legumes. The animal feed industry around the world consumed 635 million tons of food in 2006, with an annual growth rate of about 2%. The use of agricultural land to grow feed rather than human food can be controversial; Some types of feed, such as corn, can also serve as human food, while others, such as grass, cannot. In addition to providing an energy source to animals, animal feed also provides nutrients (e.g. selenium) used by the body.

[00085] Em algumas modalidades, a invenção provê composições nutricionais (por exemplo, composições de selênio (por exemplo, SGPs) que permitem geração de composições de ração anial compreendendo selênio (por exemplo, concentrações elevadas de selênio por composições de ração padrões (por exemplo, selênio solúvel)) que diminui custos gerais, aumenta conversão da ração e mantém e/ou melhora a qualidade de produtos animais (por exemplo, carne, ovos, leite etc) derivados da pecuária recebendo a mesma comparada a rações animais convencionais.[00085] In some embodiments, the invention provides nutritional compositions (e.g., selenium compositions (e.g., SGPs) that allow generation of feed compositions comprising selenium (e.g., elevated concentrations of selenium by standard feed compositions (e.g., example, soluble selenium)) which reduces general costs, increases feed conversion and maintains and/or improves the quality of animal products (e.g. meat, eggs, milk, etc.) derived from livestock farming receiving the same compared to conventional animal feed.

[00086] Por exemplo, em algumas modalidades, a invenção provê uma composição de dieta suplementar compreendendo SGPs que podem ser combinadas com e/ou incorporadas em uma ração animal e administrada a (por exemplo, alimentada) um animal para prover efeitos equivalentes ou superiores no desempenho do crescimento no animal (por exemplo, comparado a dietas de alimentação de animais com outras formas de selênio suplementar (por exemplo, levedura enriquecida com selênio (por exemplo, SEL-PLEX)). Em algumas modalidades, uma composição de dieta suplementar da invenção aumenta a quantidade de selênio circulante (por exemplo, localizada no sangue e/ou soro) em um paciente (por exemplo, humano ou animal) recebendo a composição. E algumas modalidades, uma proporção maior de selênio administrada é biodisponível nas composições de selênio solúveis da invenção (por exemplo, SGPs) que em outras formulações de selênio (por exemplo, selenito de sódio ou levedura enriquecida com selênio (por exemplo, SEL-PLEX). Isto é, em algumas modalidades, a invenção provê composições compreendendo selenoglicoproteínas que contém uma proporção maior e/ou proporçao de selênio que é feita disponível (por exemplo, biodisponível) a um paciente comparado a outras formas de selênio (por exemplo, levedura enriquecida com selênio) significando que quantidades menores de uma composição compreendendo selenoglicoproteína da invenção são requeridas (por exemplo, para obter quantidades de biodisponibilidade similares). Em algumas modalidades, uma composição de dieta suplementar da invenção (por exemplo, compreendendo SGPs da invenção) aumentam a quantidade de selênio (por exemplo, localizado no músculo ou outro tecido) em um paciente (por exemplo, humano ou animal) recebendo a composição. Em algumas modalidades, SGPs e/ou administração de selênio resulta em biodisponibildiade de selênio aumentada no soro, tecido adiposo, tecido muscular etc.[00086] For example, in some embodiments, the invention provides a supplemental diet composition comprising SGPs that can be combined with and/or incorporated into an animal feed and administered to (e.g., fed) an animal to provide equivalent or greater effects. on growth performance in the animal (e.g., compared to diets feeding animals with other forms of supplemental selenium (e.g., selenium-enriched yeast (e.g., SEL-PLEX)). In some embodiments, a supplemental diet composition of the invention increases the amount of circulating selenium (e.g., located in the blood and/or serum) in a patient (e.g., human or animal) receiving the composition. And in some embodiments, a greater proportion of administered selenium is bioavailable in the compositions of soluble selenium compounds of the invention (e.g., SGPs) than in other selenium formulations (e.g., sodium selenite or selenium-enriched yeast (e.g., SEL-PLEX). That is, in some embodiments, the invention provides compositions comprising selenoglycoproteins that contain a greater proportion and/or proportion of selenium that is made available (e.g., bioavailable) to a patient compared to other forms of selenium (e.g., yeast enriched with selenium) meaning that smaller amounts of a composition comprising selenoglycoprotein of the invention are required (for example, to obtain similar amounts of bioavailability). In some embodiments, a supplemental dietary composition of the invention (e.g., comprising SGPs of the invention) increases the amount of selenium (e.g., located in muscle or other tissue) in a patient (e.g., human or animal) receiving the composition. . In some embodiments, SGPs and/or selenium administration results in increased selenium bioavailability in serum, adipose tissue, muscle tissue, etc.

[00087] Em algumas modalidades, a invenção provê um método de aumentar a eficiência pela qual um animal utiliza nutrientes em uma alimentação diet ao animal compreendendo prover ao animal uma dieta compreendendo uma composição de suplemento dietético da invenção, em que a composição suplemento aumenta a habilidade do animal em processar e utilizar os nutrientes presentes em sua dieta. Em algumas modalidades, uma composição suplementar dietética da invenção aumenta a quantidade de antioxidantes circulantes (por exemplo, selênio localizado no sangue e/ou soro) em um paciente recebendo a composição. Em algumas modalidades, uma composição de suplemento dietético da invenção aumente a quantidade de antioxidantes (por exemplo, selênio localizado em tecido adiposo, músculo etc) em um paciente recebendo a composição.[00087] In some embodiments, the invention provides a method of increasing the efficiency by which an animal utilizes nutrients in a diet feed to the animal comprising providing the animal with a diet comprising a dietary supplement composition of the invention, wherein the supplement composition increases the the animal's ability to process and use the nutrients present in its diet. In some embodiments, a dietary supplement composition of the invention increases the amount of circulating antioxidants (e.g., selenium located in blood and/or serum) in a patient receiving the composition. In some embodiments, a dietary supplement composition of the invention increases the amount of antioxidants (e.g., selenium located in adipose tissue, muscle, etc.) in a patient receiving the composition.

IV. Pharmaceuticals, nutraceuticals and supplements

[00088] Níveis de selênio nutricionais têm sido estabelecidos pelo FDA (Ver, C.F.R. 101.9(c)(8)(iv), Janeiro de 1994). Humanos e animais podem seguramente metabolizar quantidades limitadas de ambas as formas, inorgânica e orgânica de selênio e podem converter selênio não metilado para derivados mono-ordi- ou trimetilado, dos quais os derivados monometilados são mais tóxicos. (Ver, por exemplo, Bedwal, R. S., et al., Medical Hypotheses, 41 (2):150-159 (Agosto 1993)). O FDA tem aditado Referência de Ingestão Diária (RDIs) de 70 microgramas para selênio para mulheres lactantes e RDI de 55 microgramas para adultos não lactantes. Dosagem de selênio de 600 microgramas por dia tem sido reportada como segura. (Ver, por exemplo, Ferris G. M. Lloyd, et al., App. Clin. Biochem.,26:83-88 (1989). A cerca desta dosagem, atividade normal da enzima glutationa redutase seguramente converte selenoglutationa a selento de hidrogênio no fígado e eritrócitos e é finalmente excretada. Então, em tais doses inferiores, o corpo é capaz de seguramente metabolizar e excretar selênio que está presente em uma forma metálica livre. Entretanto, como com muitos elementos traços (por exemplo, selênio) em níveis ou concentrações de doses mais altas os efeitos benéficos são revertidos e toxidade perigosa é manifestada (Ver, por exemplo, Furnsinn, C. et al., Internat'l J. of Obesity and Related Metab. Dis., 19(7):458-463 (1995)).[00088] Nutritional selenium levels have been established by the FDA (See, C.F.R. 101.9(c)(8)(iv), January 1994). Humans and animals can safely metabolize limited amounts of both inorganic and organic forms of selenium and can convert unmethylated selenium to mono-ordi- or trimethylated derivatives, of which the monomethylated derivatives are more toxic. (See, for example, Bedwal, R. S., et al., Medical Hypotheses, 41 (2):150-159 (August 1993)). The FDA has added Reference Daily Intakes (RDIs) of 70 micrograms for selenium for lactating women and RDI of 55 micrograms for non-lactating adults. Selenium dosage of 600 micrograms per day has been reported to be safe. (See, for example, Ferris G. M. Lloyd, et al., App. Clin. Biochem., 26:83-88 (1989). At about this dosage, normal activity of the enzyme glutathione reductase reliably converts selenoglutathione to hydrogen selenate in the liver and erythrocytes and is ultimately excreted. Thus, at such lower doses, the body is able to safely metabolize and excrete selenium that is present in a free metallic form. However, as with many trace elements (e.g., selenium) at levels or concentrations At higher doses the beneficial effects are reversed and dangerous toxicity is manifested (See, for example, Furnsinn, C. et al., Internat'l J. of Obesity and Related Metab. Dis., 19(7):458-463 (1995)).

[00089] A administração de selênio na forma natural envolve uma trade-off científica e médica porque, quando administrada em relativamente baixas concentrações, selênio provê efeitos benéficos para saúde, entretanto, em concentrações mais altas, selênio exibe toxidade dramática tal que o potencial benefício à saúde é perdido e toxidade se torna a preocupação primária.[00089] Administration of selenium in natural form involves a scientific and medical trade-off because, when administered in relatively low concentrations, selenium provides beneficial health effects, however, at higher concentrations, selenium exhibits dramatic toxicity such that the potential benefit health is lost and toxicity becomes the primary concern.

[00090] Como descrito acima, a invenção provê efeitos a um paciente. Evidência tem mostrado que formas orgânicas de selênio (por exemplo, selenometionina e levedura enriquecida com selênio) podem ser menos tóxicas e melhor absorvida que formas inorgânicas (Ver, por exemplo, Mahan, Proceedings of the 15th Annual Symposium Nottingham University Press, Nottingham, UK, pp. 523-535 (1999). Todavia, em algumas modalidades, formas múltiplas de selênio são usadas em combinação com uma outra (por exemplo, para prover efeitos benéficos à saúde a um paciente). Fontes naturais de selênio incluem, mas não são limitadas a, levedura enriquecida com selênio (por exemplo, selenizado). A cepa de levedura usada não é limitada.[00090] As described above, the invention provides effects to a patient. Evidence has shown that organic forms of selenium (e.g. selenomethionine and selenium-enriched yeast) may be less toxic and better absorbed than inorganic forms (See, e.g., Mahan, Proceedings of the 15th Annual Symposium Nottingham University Press, Nottingham, UK , pp. 523-535 (1999). However, in some embodiments, multiple forms of selenium are used in combination with one another (e.g., to provide beneficial health effects to a patient). Natural sources of selenium include, but not are limited to, selenium-enriched (e.g., selenized) yeast.The strain of yeast used is not limited.

[00091] Em certas modalidades preferidas da invenção, SGPs (por exemplo, derivadas a partir da levedura enriquecida com selênio (por exemplo, SEL-PLEX), como descrito nos Exemplos 1-2) é a forma selênio de escolha para formulações e composições da invenção. Em algumas modalidades, composições compreendendo selênio solúvel em água e/ou SGPs provêem uma forma mais biologicamente disponível de selênio comparada a outras formas de selênio. Entretanto, outras formas de selênio podem também encontrar uso na invenção incluindo derivados ou modificações de selênio solúvel em água e/ou SGPs, SEL-PLEX, ou outras formas de levedura enriquecida com selênio, selenometionina, selenocisteína, um composto selenito, um composto selenato, ou derivados, sais, ou modificações dos mesmos. Então, em algumas modalidades preferidas, cada dessas formas de selênio podem ser usadas como um componente de uma formulação. Alternativamente, cada das formas descritas acima de selênio podem ser ligadas (por exemplo, quimicamente ou fisicamente) a uma droga ou terapêutico para formar derivado de selênio-droga. Adicionalmente, composições e formulações não são limitadas a uma forma de selênio. De fato, uma composição ou formulação pode compreender formas múltiplas de selênio (por exemplo, SGPs e SEL-PLEX, ou Sod-sel e selênio solúvel em água).[00091] In certain preferred embodiments of the invention, SGPs (e.g., derived from selenium-enriched yeast (e.g., SEL-PLEX), as described in Examples 1-2) is the selenium form of choice for formulations and compositions. of the invention. In some embodiments, compositions comprising water-soluble selenium and/or SGPs provide a more biologically available form of selenium compared to other forms of selenium. However, other forms of selenium may also find use in the invention including water-soluble selenium derivatives or modifications and/or SGPs, SEL-PLEX, or other forms of selenium-enriched yeast, selenomethionine, selenocysteine, a selenite compound, a selenate compound , or derivatives, salts, or modifications thereof. Then, in some preferred embodiments, each of these forms of selenium can be used as a component of a formulation. Alternatively, each of the above-described forms of selenium can be linked (e.g., chemically or physically) to a drug or therapeutic to form drug-selenium derivative. Additionally, compositions and formulations are not limited to one form of selenium. Indeed, a composition or formulation may comprise multiple forms of selenium (e.g., SGPs and SEL-PLEX, or Sod-sel and water-soluble selenium).

[00092] Outras formas de selênio que encontram uso em várias modalidades da presente invenção são descritas na Pat. Norte- Americana Nos. 6.911.550, 6.197.295, 5.221.545, 6 e 6.576.233, e Pedido de Pat. Norte-Americano Nos. 20010043925, 20050069594, 20050089530, e 20080107755, aqui incorporado por referência em suas totalidades.[00092] Other forms of selenium that find use in various embodiments of the present invention are described in Pat. North American Nos. 6,911,550, 6,197,295, 5,221,545, 6 and 6,576,233, and Pat. North American Nos. 20010043925, 20050069594, 20050089530, and 20080107755, incorporated herein by reference in their entireties.

[00093] Consequentemente, a presente invençao provê composições farmacêuticas, nutricêuticas e/ou suplementar (por exemplo, produtos alimentícios e/ou composição ou tratameto dietético) que compreendem uma ou mais formas de selênio (por exemplo, SGPs, selênio solúvel (por exemplo, selênio solúvel em água) etc), sozinhas ou em combinação com pelo menos um outro agente, tal como composto estabilizante, outro(s) terapêutico(s), nutriente(s), e/ou minerais; e podem ser administrados em qualquer veículo estéril biocompatível, incluindo, mas não limitado a, salina, salina tamponada, dextrose, água etc.[00093] Consequently, the present invention provides pharmaceutical, nutriceutical and/or supplemental compositions (e.g., food products and/or dietary composition or treatment) comprising one or more forms of selenium (e.g., SGPs, soluble selenium (e.g., , water-soluble selenium) etc.), alone or in combination with at least one other agent, such as a stabilizing compound, other therapeutic(s), nutrient(s), and/or minerals; and can be administered in any sterile biocompatible vehicle, including, but not limited to, saline, buffered saline, dextrose, water, etc.

[00094] Os métodos da presente invenção encontram uso no tratamento (por exemplo, profilaticamente ou terapeuticamente) de doenças (por exemplo, doença neurodegenerativa, câncer etc) ou alterando estados fisiológicos. Selênio (por exemplo, selênio solúvel (por exemplo, selênio solúvel em água), SGPs))) pode ser administrado a um sujeito (por exemplo, um paciente) intravenosamente em um veículo farmaceuticamente aceitável tal como salina fisiológica. Métodos padrões para distribuição intracelular de compostos podem ser usados (por exemplo, distribuição através de lipossomo). Tais métodos são bem conhecidos por aqueles versados na técnica. As formulações desta invenção são úteis para administração parenteral, tais como intravenosa, subcutânea, intramuscular, e intraperitoneal. Em algumas modalidades, composições (por exemplo, SGPs e/ou formulações farmacêuticas compreendendo as mesmas) são oralmente administradas.[00094] The methods of the present invention find use in treating (e.g., prophylactically or therapeutically) diseases (e.g., neurodegenerative disease, cancer, etc.) or altering physiological states. Selenium (e.g., soluble selenium (e.g., water-soluble selenium), SGPs))) can be administered to a subject (e.g., a patient) intravenously in a pharmaceutically acceptable vehicle such as physiological saline. Standard methods for intracellular delivery of compounds can be used (e.g., liposome delivery). Such methods are well known to those skilled in the art. The formulations of this invention are useful for parenteral administration, such as intravenous, subcutaneous, intramuscular, and intraperitoneal. In some embodiments, compositions (e.g., SGPs and/or pharmaceutical formulations comprising the same) are orally administered.

[00095] Como é bem conhecido nas técnicas médicas, doses para qualquer um paciente pode depender de muitos fatores, incluindo o tamanho do paciente, área de superfície corpórea, idade, o composto particular a ser administrado, sexo, tempo e via de administração, saúde geral, e interação com outras drogas sendo concorrentemente administradas.[00095] As is well known in the medical arts, doses for any one patient may depend on many factors, including the patient's size, body surface area, age, the particular compound being administered, sex, time and route of administration, general health, and interaction with other drugs being concurrently administered.

[00096] Consequentemente, em algumas modalidades e/ou formulações compreendendo selênio (por exeplo, selênio solúvel (por exemplo, selênio solúvel em água), SGPs etc) são administradas a um sujeito sozinho, ou em combinação com outras formas de selênio, drogas, pequenas moléculas, ou em composições farmacêuticas onde ele é misturado com excipiente(s) ou outros veículos farmaceuticamente aceitáveis. Em algumas modalidades, o veículo farmaceuticamente aceitável é farmaceuticamente inerte. Em outras modalidades, composições compreendendo selênio (por exemplo, selênio solúvel (por exemplo, selênio solúvel em água), SGPs etc) são administrados sozinhos a sujeitos individuais sofrendo a partir de uma doença ou condição. Em outras modalidades da presente invenção, composições compreendendo selênio (por exemplo, selênio solúvel (por exemplo, selênio solúvel em água), SGPs etc) são administrados sozinhos a pacientes individuais para a promoção de saúde geral ou saúde de um sistema corpóreo. Composições compreendendo selênio (por exemplo, selênio solúvel (por exemplo, selênio solúvel em água), SGPs etc) sozinhas ou em combinação com uma ou mais outras formas de selênio podem ser adicionados a uma bebida ou comida nutricional (por exemplo, ENSURE, POWERBAR, ou semelhantes), uma multi-vitamina, produtos nutricionais, produtos alimentícios etc, para consumo diário.[00096] Consequently, in some embodiments and/or formulations comprising selenium (e.g., soluble selenium (e.g., water-soluble selenium), SGPs, etc.) are administered to a subject alone, or in combination with other forms of selenium, drugs , small molecules, or in pharmaceutical compositions where it is mixed with excipient(s) or other pharmaceutically acceptable carriers. In some embodiments, the pharmaceutically acceptable carrier is pharmaceutically inert. In other embodiments, compositions comprising selenium (e.g., soluble selenium (e.g., water-soluble selenium), SGPs, etc.) are administered alone to individual subjects suffering from a disease or condition. In other embodiments of the present invention, compositions comprising selenium (e.g., soluble selenium (e.g., water-soluble selenium), SGPs, etc.) are administered alone to individual patients for promoting general health or health of a bodily system. Compositions comprising selenium (e.g., soluble selenium (e.g., water-soluble selenium), SGPs, etc.) alone or in combination with one or more other forms of selenium can be added to a nutritional drink or food (e.g., ENSURE, POWERBAR , or similar), a multi-vitamin, nutritional products, food products, etc., for daily consumption.

[00097] Dependendo do alvo sought a ser alterado pelo tratamento (por exemplo, expressão gênica associada com envelhecimento e/ou a regulação da expressão gênica associada com câncer e/ou crescimento de tumor ou metástase), essas composições farmacêuticas, suplementares e/ou nutricêuticas são formuladas e administradas sistemicamente ou localmente. Técncias para formulação e administração podem ser encontradas na última edição de "Remington's Pharmaceutical Sciences" (Mack Publishing Co, Easton Pa.). Vias adequadas podem, por exemplo, incluir administração oral ou transmucosa; bem como distribuição parenteral, incluindo administração intramuscular, subcutânea, intramedular, intratecal, intraventricular, intravenosa, intraperitoneal, ou intranasal.[00097] Depending on the target sought to be altered by the treatment (e.g., gene expression associated with aging and/or the regulation of gene expression associated with cancer and/or tumor growth or metastasis), these pharmaceutical, supplemental and/or Nutriceuticals are formulated and administered systemically or locally. Techniques for formulation and administration can be found in the latest edition of "Remington's Pharmaceutical Sciences" (Mack Publishing Co, Easton Pa.). Suitable routes may, for example, include oral or transmucosal administration; as well as parenteral distribution, including intramuscular, subcutaneous, intramedullary, intrathecal, intraventricular, intravenous, intraperitoneal, or intranasal administration.

[00098] Para injeção, composições contendo selênio (por exemplo, selênio solúvel (por exemplo, selênio solúvel em água), SGPs etc) são formulados em soluções aquosas, preferivelmente em tampões fisiologicamente ativos tais como solução de Hank, solução de Ringer, ou salina tamponada fisiologicamente. Para administração tecidual ou celular, penetrantes apropriados para a barreira particular a ser permeados são usados na formulação. Tais penetrantes são geralmente conhecidos na técnica.[00098] For injection, compositions containing selenium (e.g., soluble selenium (e.g., water-soluble selenium), SGPs, etc.) are formulated in aqueous solutions, preferably in physiologically active buffers such as Hank's solution, Ringer's solution, or physiologically buffered saline. For tissue or cellular administration, penetrants appropriate to the particular barrier to be permeated are used in the formulation. Such penetrants are generally known in the art.

[00099] Em outras modalidades, as composições contendo selênio (por exemplo, selênio solúvel (por exemplo, selênio solúvel em água), SGPs etc) são formuladas usando veículos farmaceuticamente aceitáveis bem conhecidos na técnica em doses adequadas para administração oral. Tais veículos permitem as composições contendo selênio (por exemplo, selênio solúvel (por exemplo, selênio solúvel em água), SGPs, etc) para ser formuladas como comprimidos, pílulas, cápsulas, líquidos, géis, xaropes, misturas, suspensões e semelhantes, para ingestão oral ou nasal por um paciente a ser tratado.[00099] In other embodiments, selenium-containing compositions (e.g., soluble selenium (e.g., water-soluble selenium), SGPs, etc.) are formulated using pharmaceutically acceptable carriers well known in the art in doses suitable for oral administration. Such carriers allow selenium-containing compositions (e.g., soluble selenium (e.g., water-soluble selenium), SGPs, etc.) to be formulated as tablets, pills, capsules, liquids, gels, syrups, mixtures, suspensions, and the like, for oral or nasal ingestion by a patient being treated.

[000100] Composições farmacêuticas adequadas para uso na presente invenção incluem composições em que os ingredientes ativos (por exemplo, composições contendo selênio (por exemplo, selênio solúvel (por exemplo, selênio solúvel em água), SGPs etc) são contidas em uma quantidade efetiva para alcançar o objetivo tencionado. Por exemplo, uma quantidade efetiva do agente farmacêutico pode ser aquela quantidade que altera a expressão de um gene específico (por exemplo, KTLG, GRB2, DNAJ3, TGFB1, MAPK8, C1R, UBE4A, SMPX, USP22, e/ou PTP4A1). Determinação de quantidades efetivas estão bem dentro da capacidade daqueles versados na técnica.[000100] Pharmaceutical compositions suitable for use in the present invention include compositions in which the active ingredients (e.g., selenium-containing compositions (e.g., soluble selenium (e.g., water-soluble selenium), SGPs, etc.) are contained in an effective amount to achieve the intended objective. For example, an effective amount of the pharmaceutical agent may be that amount that alters the expression of a specific gene (e.g., KTLG, GRB2, DNAJ3, TGFB1, MAPK8, C1R, UBE4A, SMPX, USP22, and /or PTP4A1). Determination of effective amounts is well within the ability of those skilled in the art.

[000101] A invenção também provê SPGs dependentes de pH e composições compreendendo as mesmas para uso na prevenção e/ou tratamento terapêutico de câncer (por exemplo, para prevenir ou diminuir progressão de câncer/tumor e/ou metástase). Por exemplo, em uma modalidade preferida, uma fração SGP dependente de pH de uma levedura enriquecida com selênio (por exemplo, SEL-PLEX) é administrada a um paciente para regular a expressão (por exemplo, em uma forma desejada) de um gene associado com crescimento de câncer e/ou metástase). Como aqui descrito, certas frações SGP solúveis têm sido identificadas para possuir propriedades biológicas (por exemplo, a habilidade de regular a expressão gênica) que o material parente a partir do qual a fração SGP solúvel foi derivada (por exemplo, levedura enriquecida com selênio (por exemplo, SEL-PLEX)) não possui (Ver, por exemplo, Exemplo 4 e Figuras 7-11). Em uma modalidade preferida, a fração SGP dependente de pH de uma levedura enriquecida com selênio (por exemplo, SEL-PLEX) é uma fração dependente de pH 4.0, embora outras frações (por exemplo, pH 3.0, pH 6.0 etc) também encontram uso nas composições e métodos da invenção.[000101] The invention also provides pH-dependent SPGs and compositions comprising the same for use in the prevention and/or therapeutic treatment of cancer (for example, to prevent or decrease cancer/tumor progression and/or metastasis). For example, in a preferred embodiment, a pH-dependent SGP fraction from a selenium-enriched yeast (e.g., SEL-PLEX) is administered to a patient to regulate the expression (e.g., in a desired form) of an associated gene. with cancer growth and/or metastasis). As described herein, certain soluble SGP fractions have been identified to possess biological properties (e.g., the ability to regulate gene expression) than the parent material from which the soluble SGP fraction was derived (e.g., selenium-enriched yeast (e.g., selenium-enriched yeast). for example, SEL-PLEX)) does not (See, for example, Example 4 and Figures 7-11). In a preferred embodiment, the pH-dependent SGP fraction of a selenium-enriched yeast (e.g., SEL-PLEX) is a pH 4.0-dependent fraction, although other fractions (e.g., pH 3.0, pH 6.0, etc.) also find use in the compositions and methods of the invention.

[000102] Em adição dos ingredientes ativos essas composições farmacêuticas contendo selênio (por exemplo, selênio solúvel (por exemplo, selênio solúvel em água), SGPs etc) podem conter veículos farmaceuticamente aceitáveis adequados compreendendo excipientes e auxiliares que facilitam o processamento dos compostos ativos em preparações que podem ser usadas farmaceuticamente. As preparações formuladas para administração oral podem estar na forma de comprimidos, drágeas, cápsulas, ou soluções.[000102] In addition to the active ingredients, these selenium-containing pharmaceutical compositions (e.g., soluble selenium (e.g., water-soluble selenium), SGPs, etc.) may contain suitable pharmaceutically acceptable carriers comprising excipients and auxiliaries that facilitate the processing of the active compounds into preparations that can be used pharmaceutically. Preparations formulated for oral administration may be in the form of tablets, tablets, capsules, or solutions.

[000103] As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser fabricadas em uma forma que é conhecida por si próprias (por exemplo, por meios de mistura, dissolução, granulação, drageamento, levigação, emulsificação, encapsulamento, aprisionamento ou processos de liofilização convencionais).[000103] The pharmaceutical compositions of the present invention can be manufactured in a form that is known per se (for example, by means of mixing, dissolving, granulating, dredging, levigation, emulsification, encapsulation, entrapment or conventional lyophilization processes).

[000104] Formulações farmacêuticas para administração parenteral incluem soluções aquosas dos compostos ativos na forma solúvel em água. Adicionalmente, suspensões dos compostos ativos podem ser preparadas como suspensões de injeção oleosa apropriadas. Solventes ou veículos lipofílicos adequados incluem óleos graxos tais como óleo de gergelim, ou ésteres de ácido graxo sintéticos, tais como oleato de etila ou triglicerídeos, ou lipossomas. Suspensões de injeção aquosas podem conter substâncias que aumentam a viscosidade da suspensão, tais como carboximetil celulose de sódio, sorbitol ou dextran. Opcionalmente, a suspensão pode também conter estabilizadores adequados ou agentes que aumentam a solubilidade dos compostos que permitem para a preparação de soluções altamente concentradas.[000104] Pharmaceutical formulations for parenteral administration include aqueous solutions of the active compounds in water-soluble form. Additionally, suspensions of the active compounds can be prepared as suitable oily injection suspensions. Suitable lipophilic solvents or vehicles include fatty oils such as sesame oil, or synthetic fatty acid esters such as ethyl oleate or triglycerides, or liposomes. Aqueous injection suspensions may contain substances that increase the viscosity of the suspension, such as sodium carboxymethyl cellulose, sorbitol or dextran. Optionally, the suspension may also contain suitable stabilizers or agents that increase the solubility of the compounds allowing for the preparation of highly concentrated solutions.

[000105] Preparações farmacêuticas para uso oral podem ser obtidas por combinação dos compostos ativos com excipiente sólido, opcionalmente moendo a mistura resultante, e processando a mistura de grânulos, após a adição de auxiliares adequados, se desejado, para obter núcleos de comprimidos ou drágeas. Excipientes adequados são enchimentos carboidratos ou proteínas tais como açúcares, incluindo lactose, sacarose, manitol, ou sorbitol; amido a partir de milho, trigo, arroz, batata etc; celulose tal como metil celulose, hidroxipropilemetil-celulose, ou carboximetilcelulose de sódio; e gomas incluindo arábica e tragacanto; e proteínas tais como gelatina e colágeno. Se desejado, agentes desintegrantes ou solubilizantes podem ser adicionados, tais como polivinil pirrolidona de ligação cruzada, ágar, ácido algínico ou um sal do mesmo tal como alginato de sódio.[000105] Pharmaceutical preparations for oral use can be obtained by combining the active compounds with a solid excipient, optionally grinding the resulting mixture, and processing the mixture of granules, after adding suitable auxiliaries, if desired, to obtain tablet cores or dragees . Suitable excipients are carbohydrate or protein fillers such as sugars, including lactose, sucrose, mannitol, or sorbitol; starch from corn, wheat, rice, potatoes etc; cellulose such as methyl cellulose, hydroxypropylemethylcellulose, or sodium carboxymethylcellulose; and gums including Arabica and Traganthus; and proteins such as gelatin and collagen. If desired, disintegrating or solubilizing agents may be added, such as cross-linked polyvinyl pyrrolidone, agar, alginic acid or a salt thereof such as sodium alginate.

[000106] Núcleos de drágeas são providos com revestimentos adequados tais como soluções de açúcar concentrado, que podem também conter goma arábica, talco, polivinilpirrolidona, gel carbopol, polietileno glicol, e/ou dióxido de titânio, soluções laca, e solventes orgânicos adequados ou misturas de solventes. Corantes ou pigmentos podem ser adicionados a revestimentos de comprimidos ou drágeas para identificação de produto ou para caracterizar a quantidade de composto ativo (isto é, dosagem).[000106] Dragee cores are provided with suitable coatings such as concentrated sugar solutions, which may also contain gum arabic, talc, polyvinylpyrrolidone, carbopol gel, polyethylene glycol, and/or titanium dioxide, lacquer solutions, and suitable organic solvents or solvent mixtures. Dyes or pigments may be added to tablet or dragee coatings for product identification or to characterize the amount of active compound (i.e., dosage).

[000107] Preparações farmacêuticas que podem ser usadas oralmente incluem cápsulas de encaixe feitas de gelatina, bem como, cápsulas moles seladas feitas de gelatina e um revestimento tal como glicerol ou sorbitol. As cápsulas de encaixe podem conter os ingredientes ativos misturados com um enchimento ou ligantes tais como lactose ou amidos, lubrificantes tais como talco ou estearato de magnésio, e opcionalmente, estabilizadores. Em cápsulas moles, os compostos ativos podem ser dissolvidos ou suspensos em líquidos adequados, tais como óleos graxos, prafina líquida, ou polietileno glicol líquido com ou sem estabilizantes.[000107] Pharmaceutical preparations that can be used orally include snap-on capsules made of gelatin, as well as sealed soft capsules made of gelatin and a coating such as glycerol or sorbitol. Snap-on capsules may contain the active ingredients mixed with a filler or binders such as lactose or starches, lubricants such as talc or magnesium stearate, and optionally, stabilizers. In soft capsules, the active compounds can be dissolved or suspended in suitable liquids, such as fatty oils, liquid praffin, or liquid polyethylene glycol with or without stabilizers.

[000108] Composições compreendendo um composto da invenção formuladas em um veículo farmaceuticamente aceitável podem ser preparadas, colocadas em um recipiente apropriado, e marcadas para tratamento de uma condição indicada. Para composições ou formulações compreendendo selênio, condições indicadas na marcação podem incluir tratamento de condição relacionada ao tratamento profilático ou terapêutico de uma doença ou condição (por exemplo, câncer, doença neurodegenerativa e/ou função cognitiva).[000108] Compositions comprising a compound of the invention formulated in a pharmaceutically acceptable carrier can be prepared, placed in an appropriate container, and labeled for treating an indicated condition. For compositions or formulations comprising selenium, conditions indicated in the labeling may include treatment of a condition related to the prophylactic or therapeutic treatment of a disease or condition (e.g., cancer, neurodegenerative disease and/or cognitive function).

[000109] A composição farmacêutica pode ser provida como um sal e pode ser formada com muitos ácidos, incluindo mas não limitado a clorídrico, sulfúrico, acético, lático, tartárico, málico, succínico etc. Sais tendem a ser mais solúveis em solventes aquosos ou outros solventes protônicos que são as correspondentes formas de base livre. Em outros casos, a preparação preferida podem ser um pó liofilizado em 1 mM-50 mM de histidina, 0,1%-2% de sacarose, 2%-7% de manitol em uma variação de pH de 4.5 a 5.5 que é combinada com tampão antes do uso.[000109] The pharmaceutical composition can be provided as a salt and can be formed with many acids, including but not limited to hydrochloric, sulfuric, acetic, lactic, tartaric, malic, succinic, etc. Salts tend to be more soluble in aqueous solvents or other proton solvents that are the corresponding free base forms. In other cases, the preferred preparation may be a powder lyophilized in 1 mM-50 mM histidine, 0.1%-2% sucrose, 2%-7% mannitol in a pH range of 4.5 to 5.5 that is combined with buffer before use.

[000110] Para qualquer composto usado nos métodos da invenção, a dose terapeuticamente efetiva pode ser estimada inicialmente a partir de ensaios de cultura celular. Então, preferivelmente, dosagem pode ser formulada em modelos animais (particularmente modelos murinos) para alcançar uma variação de concentração circulante desejável. Uma dose terapeuticamente efetiva refere-se àquela quantidade que melhora ou previne sintomas de um estado ou condição de doença (por exemplo, através de alteração da expressão gênica). Toxidez e eficácia terapêutica de tais compostos podem ser determinadas por procedimentos farmacêuticos padrões em culturas celulares ou animais experimentais, por exemplo, para determinar o LD50 (a dose letal para 50% da população) e o ED50 (a dose terapeuticamente efetiva em 50% da população). A proporção de dose entre efeitos tóxicos e terapêuticos é o índice terapêutico, e ele pode ser expresso como a proporção LD50/ED50. Compostos que exibem grandes índices terapêuticos são preferidos. Os dados obtidos a partir desses ensaios de cultura celular e estudos animais adicionais podem ser usados em formular uma variedade de doses para uso humano. A dose de tais compostos está preferivelmente entre uma variação de concentrações circulantes que incluem o ED50 com pouca ou nenhuma toxidade. A dose varia dentro desta variação dependendo da forma de dosagem empregada, sensibilidade do paciente, e via de administração.[000110] For any compound used in the methods of the invention, the therapeutically effective dose can be estimated initially from cell culture assays. Therefore, preferably, dosage can be formulated in animal models (particularly murine models) to achieve a desirable circulating concentration range. A therapeutically effective dose refers to that amount that improves or prevents symptoms of a disease state or condition (e.g., through alteration of gene expression). Toxicity and therapeutic efficacy of such compounds can be determined by standard pharmaceutical procedures in cell cultures or experimental animals, for example, to determine the LD50 (the lethal dose for 50% of the population) and the ED50 (the therapeutically effective dose in 50% of the population). population). The dose ratio between toxic and therapeutic effects is the therapeutic index, and it can be expressed as the LD50/ED50 ratio. Compounds that exhibit large therapeutic indices are preferred. Data obtained from these cell culture assays and additional animal studies can be used in formulating a variety of doses for human use. The dose of such compounds is preferably within a range of circulating concentrations that include the ED50 with little or no toxicity. The dose varies within this range depending on the dosage form used, patient sensitivity, and route of administration.

[000111] A dose exata pode ser escolhida por um paciente ou por um médico em vista do paciente a ser tratado. Dose e administração são ajustadas para prover níveis suficientes da fração ativa ou para manter o efeito desejado (por exemplo, alteração de expressão gênica em um paciente). Fatores adicionais que podem ser levados em consideração incluem a severidade do estado da doença; idade, peso, e sexo do paciente; dieta, tempo e frequência de administração; combinação (ões) de droga(s), sensibilidade de reação e tolerância/resposta a terapia. Composições farmacêuticas de longa duração devem ser administradas a cada 3 a 4 dias, a cada semana, ou uma vez a cada duas semanas ou uma vez a cada mês dependendo da meia-vida e taxa de depuração da formulação particular.[000111] The exact dose can be chosen by a patient or a doctor in view of the patient to be treated. Dose and administration are adjusted to provide sufficient levels of the active moiety or to maintain the desired effect (e.g., alteration of gene expression in a patient). Additional factors that may be taken into consideration include the severity of the disease state; age, weight, and sex of the patient; diet, time and frequency of administration; drug combination(s), reaction sensitivity and tolerance/response to therapy. Long-acting pharmaceutical compositions should be administered every 3 to 4 days, every week, or once every two weeks or once every month depending on the half-life and clearance rate of the particular formulation.

[000112] Em algumas modalidades, selênio (por exemplo, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGPs etc) é administrado em uma dose diária de entre 25 e 600 μg por dia (por exemplo, selênio solúvel, selênio solúvel em água, e/ou SGP é administrado a um paciente em tal forma que para prover entre 25 e 600 μg de selênio ao paciente por dia). Em modalidades preferidas, o selênio é administrado em uma dose diária de entre 50 e 200 μg por dia. Em outras modalidades preferidas, selênio é administrado em uma dose diária de entre 100 e 200 μg por dia. Doses foram de 25 e 600 μg podem ser usadas. Em algumas modalidades, uma dose única de selênio (por exemplo, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGPs etc) é administrada uma vez ao dia. Em outras modalidades, 2, 3, 4 ou mais doses podem ser administradas a cada dia (por exemplo, uma vez de manhã e uma vez a noite, ou uma vez a cada 4 ou 6 horas). Por exemplo, em algumas modalidades, selênio (por exemplo, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGPs etc) é administrado a um paciente em três doses separadas, mais que três doses separadas, duas doses separadas, ou menos que duas doses separadas. Em algumas modalidades preferidas, a dose diária é administrada em uma cápsula de liberação controlada. Em algumas modalidades preferidas, a dose diária é entre 25-75 μg de selênio (por exemplo, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGPs etc). Em outras modalidades preferidas, a dose diária é 200 μg de selênio (por exemplo, selênio orgânico, levedura selenizada, SEL-PLEX, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGPs etc).[000112] In some embodiments, selenium (e.g., soluble selenium, water-soluble selenium, SGPs, etc.) is administered in a daily dose of between 25 and 600 μg per day (e.g., soluble selenium, water-soluble selenium, and /or SGP is administered to a patient in such a form as to provide between 25 and 600 μg of selenium to the patient per day). In preferred embodiments, selenium is administered in a daily dose of between 50 and 200 μg per day. In other preferred embodiments, selenium is administered in a daily dose of between 100 and 200 μg per day. Doses were 25 and 600 μg can be used. In some embodiments, a single dose of selenium (e.g., soluble selenium, water-soluble selenium, SGPs, etc.) is administered once daily. In other embodiments, 2, 3, 4 or more doses may be administered each day (e.g., once in the morning and once in the evening, or once every 4 or 6 hours). For example, in some embodiments, selenium (e.g., soluble selenium, water-soluble selenium, SGPs, etc.) is administered to a patient in three separate doses, more than three separate doses, two separate doses, or less than two separate doses. In some preferred embodiments, the daily dose is administered in a controlled-release capsule. In some preferred embodiments, the daily dose is between 25-75 μg of selenium (e.g., soluble selenium, water-soluble selenium, SGPs, etc.). In other preferred embodiments, the daily dose is 200 μg of selenium (e.g., organic selenium, selenized yeast, SEL-PLEX, soluble selenium, water-soluble selenium, SGPs, etc.).

[000113] As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser adminsitradas em um número de formas dependendo se tratamento local ou sistêmico é desejado e sob a área a ser tratada. Administração pode ser tópica (incluindo membranas oftálmicas e mucosas incluindo distribuição vaginal e retal), pulmonar (por exemplo, por inalação ou insuflação de pós ou aerosóis, incluindo por nebulizadores; intratecal, intranasal, epidermal e transdérmica), oral e parenteral. Administração parenteral inclui injeção ou infusão intravenosa, intraarterial, subcutânea, intraperitoneal, ou intramuscular; ou intracraniana, por exemplo, administração intratecal ou intraventricular. Composições e formulações compreendendo selênio são acreditadas serem particularmente úteis para administração oral.[000113] The pharmaceutical compositions of the present invention can be administered in a number of ways depending on whether local or systemic treatment is desired and under the area to be treated. Administration can be topical (including ophthalmic and mucous membranes including vaginal and rectal distribution), pulmonary (for example, by inhalation or insufflation of powders or aerosols, including by nebulizers; intrathecal, intranasal, epidermal and transdermal), oral and parenteral. Parenteral administration includes intravenous, intraarterial, subcutaneous, intraperitoneal, or intramuscular injection or infusion; or intracranial, for example, intrathecal or intraventricular administration. Compositions and formulations comprising selenium are believed to be particularly useful for oral administration.

[000114] Composições e formulações farmacêuticas, nutracêuticas e/ou suplementar contendo selênio (por exemplo, contendo SGP) para administração tópica podem incluir adesivos transdérmicos, pomadas, loções, cremes, géis, gotas, supositórios, sprays, líquidos e pós. Veículos farmacêuticos convencionais, bases aquosas, em pó ou oleosas, espessantes e semelhantes pode ser necessárias ou desejáveis.[000114] Pharmaceutical, nutraceutical and/or supplemental compositions and formulations containing selenium (e.g., containing SGP) for topical administration may include transdermal patches, ointments, lotions, creams, gels, drops, suppositories, sprays, liquids and powders. Conventional pharmaceutical vehicles, aqueous, powder or oil bases, thickeners and the like may be necessary or desirable.

[000115] Composições e formulações para administração oral incluem pós e grânulos, suspensões ou soluções em água e meio não aquoso, cápsulas, sachês ou comprimidos. Espessantes, agentes flavorizantes, diluentes, emulsificantes, auxiliadores de dispersão ou ligantes podem ser desejáveis.[000115] Compositions and formulations for oral administration include powders and granules, suspensions or solutions in water and non-aqueous media, capsules, sachets or tablets. Thickeners, flavoring agents, diluents, emulsifiers, dispersion aids or binders may be desirable.

[000116] Composições e formulações para administração parenteral, intratecal ou intraventricular podem incluir soluções aquosas estéreis que podem também conter tampões, diluentes e outros aditivos adequados tais como, mas não limitados a aumentadores de penetração, compostos veículos e outros veículos ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis.[000116] Compositions and formulations for parenteral, intrathecal or intraventricular administration may include sterile aqueous solutions that may also contain buffers, diluents and other suitable additives such as, but not limited to, penetration enhancers, carrier compounds and other pharmaceutically acceptable carriers or excipients.

[000117] Então, em algumas modalidades, composições farmacêuticas, nutracêuticas e/ou suplementares da presente invenção incluem, mas não são limitadas a soluções, emulsões e formulações contendo lipossoma. Essas composições podem ser geradas a partir de uma variedade de componentes que incluem, mas não são limitadas a liquidos pré-formados, sólidos auto-emulsificantes e semi-sólidos auto-emulsificantes.[000117] Therefore, in some embodiments, pharmaceutical, nutraceutical and/or supplemental compositions of the present invention include, but are not limited to, solutions, emulsions and liposome-containing formulations. Such compositions can be generated from a variety of components including, but not limited to, preformed liquids, self-emulsifying solids and self-emulsifying semi-solids.

[000118] As formulações farmacêuticas, nutracêuticas e/ou suplementares da presente invenção, que podem convenientemente ser apresentadas na forma de dose única, podem ser preparadas de acordo com técnicas convencionais bem conhecidas na indústria farmacêutica. Tais técnicas incluem o passo de trazer em associação os ingredientes ativos com o(s) veículo(s) ou excipiente(s) farmacêutico(s). Em geral, as formulações são preparadas por trazer uniformemente e intimamente a associação dos ingredientes ativos com veículos líquidos ou veículos sólidos finamente divididos ou ambos, e então, se neessário, moldar o produto.[000118] The pharmaceutical, nutraceutical and/or supplementary formulations of the present invention, which can conveniently be presented in single dose form, can be prepared according to conventional techniques well known in the pharmaceutical industry. Such techniques include the step of bringing into association the active ingredients with the pharmaceutical carrier(s) or excipient(s). In general, formulations are prepared by uniformly and intimately bringing into association the active ingredients with liquid carriers or finely divided solid carriers or both, and then, if necessary, shaping the product.

[000119] Em algumas modalidades, as composições contendo selênio (por exemplo, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP) da pesente invenção podem ser formuladas em qualquer de muitas formas de dosagem possíveis tais como, mas não limitadas a comprimidos, cápsulas, xaropes liquidos, géis moles, supositórios e enemas. As composições da presente invenção podem também ser formuladas como nanopartículas de liberação controlada (por exemplo, nanocápsulas), vesículas, lipossomas, polímeros (por exemplo, polímeros de impressão molecular (MIPs), polímeros de liberação controlada biodegradáveis, polímeros policatiônicos etc. As composições da presente invenção podem também ser formuladas como suspensões em meios aquosos, não aquosos ou misturados. Suspensões aquosas podem ainda conter substâncias que aumentam a viscosidade da suspensão incluindo, por exemplo, carboximetilcelulose de sódio, sorbitol e/ou dextran. A suspensão pode também conter estabilizantes. Em uma modalidade da presente invenção as composições farmacêuticas, e/ou suplementares podem ser formuladas e usadas como espumas. Espumas incluem formulações tais como, mas não limitadas a emulsões, microemulsões, cremes, géis e lipossomas. Enquanto basicamente similar em natureza, essas formulações variam em componentes e a consistência do produto final.[000119] In some embodiments, the selenium-containing compositions (e.g., soluble selenium, water-soluble selenium, SGP) of the present invention may be formulated into any of many possible dosage forms such as, but not limited to, tablets, capsules, liquid syrups, soft gels, suppositories and enemas. The compositions of the present invention can also be formulated as controlled-release nanoparticles (e.g., nanocapsules), vesicles, liposomes, polymers (e.g., molecularly imprinted polymers (MIPs), biodegradable controlled-release polymers, polycationic polymers, etc. The compositions of the present invention may also be formulated as suspensions in aqueous, non-aqueous or mixed media. Aqueous suspensions may further contain substances that increase the viscosity of the suspension including, for example, sodium carboxymethyl cellulose, sorbitol and/or dextran. The suspension may also contain stabilizers. In one embodiment of the present invention pharmaceutical, and/or supplemental compositions may be formulated and used as foams. Foams include formulations such as, but not limited to, emulsions, microemulsions, creams, gels, and liposomes. While basically similar in nature, These formulations vary in components and the consistency of the final product.

[000120] As composições contendo selênio (por exemplo, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP etc) da presente invenção podem adicionalmente conter outros componentes adjuntos convencionalmente encontrados em composições farmacêuticas. Então, por exemplo, as composições podem conter materiais adicionais, compatíveis, farmaceuticamente ativos tais como, por exemplo, anti-pruriginosos, adstringentes, anestésicos locais ou agentes antiinflamatórios, ou podem conter materiais adicionais úteis em fisicamente formular várias formas de dosagem das composições da presente invenção, tais como corantes, agentes flavorizantes, conservantes, antioxidantes, opacificantes, agentes espessantes e estabilizantes. Entretanto, tais materiais, quando adicionados, não devem interferir indevidamente com as atividades biológicas dos componentes das composições da presente invenção. As formulações podem ser esterilizadas e, se desejado, misturadas com agentes auxiliares, por exemplo, lubrificantes, conservantes, estabilizantes, agentes umectantes, emulsificantes, sais para influenciar pressão osmótica, tampões, colorantes, flavorizantes e/ou substâncias aromáticas e semelhantes que não interagem deleteriamente com o(s) ácido(s) nucléico(s) da formulação.[000120] The selenium-containing compositions (e.g., soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, etc.) of the present invention may additionally contain other adjunct components conventionally found in pharmaceutical compositions. So, for example, the compositions may contain additional, compatible, pharmaceutically active materials such as, for example, antipruritic, astringent, local anesthetic or anti-inflammatory agents, or may contain additional materials useful in physically formulating various dosage forms of the compositions. present invention, such as coloring agents, flavoring agents, preservatives, antioxidants, opacifiers, thickening agents and stabilizers. However, such materials, when added, should not unduly interfere with the biological activities of the components of the compositions of the present invention. The formulations can be sterilized and, if desired, mixed with auxiliary agents, for example, lubricants, preservatives, stabilizers, wetting agents, emulsifiers, salts to influence osmotic pressure, buffers, colorings, flavors and/or aromatic and similar substances that do not interact deleterious with the nucleic acid(s) of the formulation.

[000121] Em algumas modalidades, a invenção provê composições farmacêuticas, nutracêuticos e/ou suplementares contendo (a) uma ou mais formas de selênio (por exemplo, SGP (por exemplo, fração SGP dependente de pH), selênio solúvel, selênio solúvel em água, SEL- PLEX) e (b) um ou mais outros agentes (por exemplo, nutriente, mineral, terapêutico etc).[000121] In some embodiments, the invention provides pharmaceutical, nutraceutical and/or supplemental compositions containing (a) one or more forms of selenium (e.g., SGP (e.g., pH-dependent SGP fraction), soluble selenium, soluble selenium in water, SEL-PLEX) and (b) one or more other agents (e.g., nutrient, mineral, therapeutic, etc.).

[000122] A presente invenção também inclui métodos envolvendo co-administração de compostos compreendendo selênio (por exemplo, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP etc) aqui descritos com um ou mais agentes ativos adicionais (por exemplo, um terapêutico (terapêutico de câncer, terapêutico de Alzheimer), antioxidante etc). De fato, é um aspecto adicional desta invenção prover métodos para aumentar terapias e/ou composições farmacêuticas, nutracêuticas e/ou suplementares por co-administração de uma composição compreendendo selênio (por exemplo, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP (por exemplo, fração SGP dependente de pH) etc) desta invenção com uma composição farmacêutica, nutracêutica e/ou suplementar preventiva ou terapêutica. Em procedimentos de co- administração, os agentes podem ser administrados concorrentemente ou sequencialmente. Em uma modalidade, os componentes aqui descritos são administrados antes dos outro(s) agente(s) ativo(s). As formulações e modos de administração podem ser quaisquer daqueles descritos acima. Em adição, os dois ou mais agentes co-administrados podem cada ser administrados usando modos diferentes ou diferentes formulações. Em algumas modalidades, uma composição da invenção é co-administrada com um tratamento de câncer.[000122] The present invention also includes methods involving co-administration of compounds comprising selenium (e.g., soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, etc.) described herein with one or more additional active agents (e.g., a therapeutic). cancer, Alzheimer's therapeutic), antioxidant, etc.). Indeed, it is a further aspect of this invention to provide methods for enhancing pharmaceutical, nutraceutical and/or supplemental therapies and/or compositions by co-administration of a composition comprising selenium (e.g., soluble selenium, water-soluble selenium, SGP (e.g. , pH-dependent SGP fraction) etc.) of this invention with a preventive or therapeutic pharmaceutical, nutraceutical and/or supplementary composition. In co-administration procedures, the agents can be administered concurrently or sequentially. In one embodiment, the components described herein are administered before the other active agent(s). The formulations and modes of administration may be any of those described above. In addition, the two or more co-administered agents may each be administered using different modes or different formulations. In some embodiments, a composition of the invention is co-administered with a cancer treatment.

[000123] Consequentemente, em algumas modalidades, uma composição contendo uma ou mais formas de selênio (por exemplo, SGP (por exemplo, fração SGP dependente de pH), selênio solúvel, selênio solúvel em águam SEL-PLEX) é administrada sistemicamente ou localmente para inibir proliferação de célula tumoral e angiogênese, e/ou induzir morte de célula tumoral em pacientes com câncer. Por exemplo, em algumas modalidades, uma composição compreendendo uma fração SGP dependete de pH (pH 4.0) de uma levedura enriquecida com selênio (por exemplo, SEL-PLEX) é administrada a um paciente sob condições tal que a expressão de um ou mais genes associados com crescimento de câncer/tumor e/ou metástase é regulado (por exemplo, regulado positivamente ou regulado negativamente) em uma forma benéfica no paciente (Ver, por exemplo, Exemplo 4). As composições podem ser administradas intravenosamente, intratecalmente, intraperitonealmente bem como oralmente. Além disso, elas podem ser administradas sozinhas ou em combinação com drogas anti-proliferativas.[000123] Accordingly, in some embodiments, a composition containing one or more forms of selenium (e.g., SGP (e.g., pH-dependent SGP fraction), soluble selenium, water-soluble selenium in SEL-PLEX) is administered systemically or locally to inhibit tumor cell proliferation and angiogenesis, and/or induce tumor cell death in cancer patients. For example, in some embodiments, a composition comprising a pH-dependent SGP fraction (pH 4.0) from a selenium-enriched yeast (e.g., SEL-PLEX) is administered to a patient under conditions such that expression of one or more genes associated with cancer/tumor growth and/or metastasis is regulated (e.g., upregulated or downregulated) in a beneficial manner in the patient (See, e.g., Example 4). The compositions can be administered intravenously, intrathecally, intraperitoneally as well as orally. Furthermore, they can be administered alone or in combination with anti-proliferative drugs.

[000124] Onde combinações são contempladas, não é tencionado que a presente invenção seja limitada pela natureza particular da combinação. A presente invenção contempla combinações como misturas simples bem como híbridos químicos. Um exemplo do último é onde uma composição contendo uma o mais formas de selênio são covalentemente ligadas a um veículo alvo ou a um farmacêutico ativo. Ligação covalente pode ser realizada por qualquer um dos muitos compostos de ligação cruzada comercialmente disponíveis.[000124] Where combinations are contemplated, it is not intended that the present invention be limited by the particular nature of the combination. The present invention contemplates combinations such as simple mixtures as well as chemical hybrids. An example of the latter is where a composition containing one or more forms of selenium is covalently linked to a target carrier or an active pharmaceutical. Covalent bonding can be accomplished by any of the many commercially available cross-linking compounds.

[000125] Não é tencionado que a presente invenção seja limitada pela natureza particular da preparação terapêutica. Por exemplo, tais composições podem ser providas juntas com veículos, diluentes, adjuvantes e excipientes líquidos, géis ou sólidos fisiologicamente toleráveis.[000125] It is not intended that the present invention be limited by the particular nature of the therapeutic preparation. For example, such compositions may be provided together with physiologically tolerable liquid, gel or solid carriers, diluents, adjuvants and excipients.

[000126] Essas preparações terapêuticas podem ser administradas a mamíferos para uso veterinário, tal como animais domésticos ou crescidos em fazenda, e uso clínico em humanos em uma forma similar a outros agentes terapêuticos. Em geral, a dose requerida para eficácia terapêutica variará de acordo com o tipo de uso e modo de administração, bem como os requerimentos particularizados dos hospedeiros individuais.[000126] These therapeutic preparations can be administered to mammals for veterinary use, such as domestic or farm-grown animals, and clinical use in humans in a manner similar to other therapeutic agents. In general, the dose required for therapeutic efficacy will vary according to the type of use and mode of administration, as well as the particularized requirements of individual hosts.

[000127] Tais composições são tipicamente preparadas como soluções ou suspensões líquidas, ou em formas sólidas. Formulações orais para câncer usualmente incluirão tais aditivos normalmente empregados tais como ligantes, enchimentos, veículos, conservantes, agentes estabilizantes, emulsificantes, tampões e excipientes como, por exemplo, graus farmacêuticos de manitol, lactose, amido, esterato de magnésio, sacarina sódica, celulose, carbonato de magnésio, e semelhantes. Essas composições tomam a forma de soluções, suspensões, comprimidos, pílulas, cápsulas, formulações de liberação controlada, ou pós, e tipicamente contêm 1%-95% do ingredente ativo, preferivelmente 2%-70%.[000127] Such compositions are typically prepared as liquid solutions or suspensions, or in solid forms. Oral formulations for cancer will usually include such commonly employed additives as binders, fillers, carriers, preservatives, stabilizing agents, emulsifiers, buffers and excipients such as, for example, pharmaceutical grades of mannitol, lactose, starch, magnesium esterate, sodium saccharin, cellulose , magnesium carbonate, and the like. These compositions take the form of solutions, suspensions, tablets, pills, capsules, controlled-release formulations, or powders, and typically contain 1%-95% of the active ingredient, preferably 2%-70%.

[000128] As composições são também preparadas como injetáveis, ou como soluções ou suspensões líquidas; formas sólidas adequadas para solução em, ou suspensão em, líquido antes da injeção pode também ser preparado.[000128] The compositions are also prepared as injectables, or as liquid solutions or suspensions; Solid forms suitable for solution in, or suspension in, liquid prior to injection may also be prepared.

[000129] As composições da presente invenção são sempre misturadas com diluentes ou excipientes que são fisiologicamente toleráveis e compatíveis. Diluentes adequados e excipientes são, por exemplo, água, salina, dextrose, glicerol, ou semelhantes, e combinações dos mesmos. Em adição, se desejado, as composições podem conter quantidades menores de substâncias auxiliares tais como agentes umectantes ou emulsificantes, agentes estabilizantes ou tamponantes de pH.[000129] The compositions of the present invention are always mixed with diluents or excipients that are physiologically tolerable and compatible. Suitable diluents and excipients are, for example, water, saline, dextrose, glycerol, or the like, and combinations thereof. In addition, if desired, the compositions may contain minor amounts of auxiliary substances such as wetting or emulsifying agents, stabilizing agents or pH buffers.

[000130] Uma ampla variedade de agentes terapêuticos encontram uso com a presente invenção. Por exemplo, qualquer agente terapêutico que pode ser co-administrado com uma composição contendo uma ou mais formas de selênio da invenção é adequada para uso na presente invenção.[000130] A wide variety of therapeutic agents find use with the present invention. For example, any therapeutic agent that can be co-administered with a composition containing one or more selenium forms of the invention is suitable for use in the present invention.

[000131] Algumas modalidades da presente invenção provêem administração a um paciente de uma quantidade efetiva de uma composição contendo uma ou mais formas de selênio e pelo menos um agente anti-câncer (por exemplo, um agente anti-câncer convencional, tal como, drogas quimioterapêuticas, e/ou radioterapia).[000131] Some embodiments of the present invention provide for administration to a patient of an effective amount of a composition containing one or more forms of selenium and at least one anti-cancer agent (e.g., a conventional anti-cancer agent, such as drugs chemotherapy, and/or radiotherapy).

[000132] Mecanismos de agente anti-câncer adequados para uso com a presente invenção incluem, mas não são limitados a, agentes que induzem apoptose, agentes que induzem/causam dano em ácido nucléico, agentes que inibem síntese de ácido nucléico, agentes que afetam formação de microtúbulo, e agentes que afetam síntese protéica ou estabilidade.[000132] Anti-cancer agent mechanisms suitable for use with the present invention include, but are not limited to, agents that induce apoptosis, agents that induce/cause nucleic acid damage, agents that inhibit nucleic acid synthesis, agents that affect microtubule formation, and agents that affect protein synthesis or stability.

[000133] Classes de agentes anti-câncer adequados para uso nas composições e métodos da presente invenção incluem, mas não são limitadas a: 1) alcalóides, incluindo inibidores de microtúbulos (por exemplo, vincristina, vinblastina, e vindesina etc), estabilizantes de microtúbulos (por exemplo, Paclitaxel (Taxol), e Docetaxel etc), e inibidores da função de cromatina, incluindo, inibidores da topoisomerase, tais como, epipodofilotoxinas (por exemplo, Etoposídeo (VP-16), e Teniposídeo (VM-26) etc), e agentes que tem como alvo topoisomerase I (por exemplo, Camptotecina e Isirinotecan (CPT-11) etc); 2) agentes ligadores de DNA covalentes (agentes alquilantes), incluindo nitrogênio mostarda (por exemplo, Mecloretamina, Clorambucil, Ciclofosfamida, Ifosfamida, e Busulfan (Mileran) etc), nitrosouréias (por exemplo, Carmustina, Lomustina e Semustina etc), e outros agentes alquilantes (por exemplo, Dacarbazina, Hidroximetilmelamina, Tiotepa e Mitocicin etc); 3) agentes ligadores de DNA não covalentes (antibióticos anti-tumor), incluindo, inibidores de ácido nucléico (por exemplo, Dactinomicin (Actinomicin D) etc.), antraciclinas (por exemplo, Daunorubicin (Daunomicin, e Cerubidina), Doxorubicin (Adriamicin), e Idarubicin (Idamicin) etc.), antracenodionas (por exemplo, análogos de antraciclina, tal como, (Mitoxantrona) etc.), bleomicinas (Blenoxane) etc., e plicamicin (Mitramicin) etc.; 4) antimetabólitos, incluindo, antifolatos (por exemplo, Metotrexato, Folex, e Mexato etc.), antimetabólitos de purina (por exemplo, 6-Mercaptopurina (6-MP, Purinetol), 6-Tioguanina (6-TG), Azatioprina, Aciclovir, Ganciclovir, Clorodeoxiadenosina, 2-Clorodeoxiadenosina (CdA), e 2'- Deoxicoformicin (Pentostatin) etc.), antagonistas de pirimidina (por exemplo, fluorpirimidinas (por exemplo, 5-fluoruracil (Adrucil), 5- fluordeoxiuridina (FdUrd) (Floxuridina)) etc.), e citosina arabinosídeos (por exemplo, Cytosar (ara-C) e Fludarabina etc.); 5) enzimas, incluindo, L-asparaginase, e hidroxiuréia etc.; 6) hormônios, incluindo, glicocorticóides, tais como, anti-estrógenos (por exemplo, Tamoxifen etc.), anti-andrógenos não esteroidais (por exemplo, Flutamida etc.), e inibidores da aromatase (por exemplo, anastrozol (Arimidex) etc.); 7) compostos platina (por exemplo, Cisplatina e Carboplatina etc.); 8) anticorpos monoclonais conjugados com drogas anti-câncer, toxinas e/ou radionuclídeos etc 9) modificadores de resposta biológica (por exemplo, interferons (por exemplo, IFN— I etc.) e interleucinas (por exemplo, IL-2 etc.), etc.); 10) imunoterapia adotiva; 11) fatores de crescimento hematopoiéticos; 12) agentes que induzem diferenciação de célula tumoral (por exemplo, ácido all-trans-retinóico etc); 13) técnicas de terapia gênica; 14) técnicas de terapia antisenso; 15) vacinas tumorais; 16) terapias direcionadas contra metástases tumorais (por exemplo, Batimistat etc); e 17) outros inibidores de angiogênese.[000133] Classes of anti-cancer agents suitable for use in the compositions and methods of the present invention include, but are not limited to: 1) alkaloids, including microtubule inhibitors (e.g., vincristine, vinblastine, and vindesine etc.), microtubules (e.g., Paclitaxel (Taxol), and Docetaxel etc.), and inhibitors of chromatin function, including, topoisomerase inhibitors, such as, epipodophyllotoxins (e.g., Etoposide (VP-16), and Teniposide (VM-26) etc.), and agents that target topoisomerase I (e.g. Camptothecin and Isirinotecan (CPT-11) etc.); 2) Covalent DNA binding agents (alkylating agents) including nitrogen mustard (e.g. Mechlorethamine, Chlorambucil, Cyclophosphamide, Ifosfamide, and Busulfan (Mileran) etc), nitrosoureas (e.g. Carmustine, Lomustine and Semustine etc), and others alkylating agents (e.g. Dacarbazine, Hydroxymethylmelamine, Thiotepa and Mitocicin etc); 3) non-covalent DNA binding agents (anti-tumor antibiotics), including, nucleic acid inhibitors (e.g. Dactinomycin (Actinomycin D) etc.), anthracyclines (e.g. Daunorubicin (Daunomicin, and Cerubidin), Doxorubicin (Adriamicin ), and Idarubicin (Idamicin) etc.), anthracenediones (e.g., anthracycline analogues such as, (Mitoxantrone) etc.), bleomycins (Blenoxane) etc., and plicamicin (Mitramicin) etc.; 4) antimetabolites, including, antifolates (e.g., Methotrexate, Folex, and Mexate etc.), purine antimetabolites (e.g., 6-Mercaptopurine (6-MP, Purinetol), 6-Thioguanine (6-TG), Azathioprine, Acyclovir, Ganciclovir, Chlorodeoxyadenosine, 2-Chlorodeoxyadenosine (CdA), and 2'- Deoxycoformicin (Pentostatin) etc.), pyrimidine antagonists (e.g., fluoropyrimidines (e.g., 5-fluorouracil (Adrucil), 5-fluorodeoxyuridine (FdUrd) (Floxuridine)) etc.), and cytosine arabinosides (e.g. Cytosar (ara-C) and Fludarabine etc.); 5) enzymes including, L-asparaginase, and hydroxyurea etc.; 6) Hormones, including, glucocorticoids, such as, anti-estrogens (e.g. Tamoxifen etc.), non-steroidal anti-androgens (e.g. Flutamide etc.), and aromatase inhibitors (e.g. Anastrozole (Arimidex) etc. .); 7) platinum compounds (e.g. Cisplatin and Carboplatin etc.); 8) monoclonal antibodies conjugated to anti-cancer drugs, toxins and/or radionuclides etc. 9) biological response modifiers (e.g. interferons (e.g. IFN—I etc.) and interleukins (e.g. IL-2 etc.) , etc.); 10) adoptive immunotherapy; 11) hematopoietic growth factors; 12) agents that induce tumor cell differentiation (e.g. all-trans-retinoic acid etc.); 13) gene therapy techniques; 14) antisense therapy techniques; 15) tumor vaccines; 16) targeted therapies against tumor metastases (e.g. Batimistat etc); and 17) other angiogenesis inhibitors.

[000134] Em modalidades preferidas, a presente invenção provê administração de uma quantidade efetiva de uma composição contendo uma ou mais formas de selênio da invenção e pelo menos um agente anti-câncer convencional que induz apoptose e/ou previne proliferação de célula cancerosa a um paciente. Em algumas modalidades, o paciente tem uma doença caracterizada por metástase. Em ainda outras modalidades preferidas, a presente invenção provê administração de uma quantidade efetiva de uma composição contendo uma ou mais formas de selênio e um taxano (por exemplo, Docetaxel) a um paciente tendo uma doença caracterizada pela super expressão de proteína(s) da família Bcl-2 (por exemplo, Bcl-2 e/ou Bcl-XL).[000134] In preferred embodiments, the present invention provides administration of an effective amount of a composition containing one or more selenium forms of the invention and at least one conventional anti-cancer agent that induces apoptosis and/or prevents cancer cell proliferation to a patient. In some embodiments, the patient has a disease characterized by metastasis. In still other preferred embodiments, the present invention provides administration of an effective amount of a composition containing one or more forms of selenium and a taxane (e.g., Docetaxel) to a patient having a disease characterized by overexpression of selenium protein(s). Bcl-2 family (e.g., Bcl-2 and/or Bcl-XL).

[000135] Os taxanos (por exemplo, Docetaxel) são uma classe efetiva de agentes quimioterapêuticos anti-câncer (Ver, por exemplo, K. D. Miller and G. W. Sledge, Jr. Cancer Investigation, 17:121-136 (1999)). Enquanto a presente invenção não é tencionada ser limitada a qualquer mecanismo particular, morte celular mediada por taxano é pensada proceder através da estabilização de microtúbulo intercelular e indução subsequente da via apoptótica. (Ver, por exemplo, S. Haldar et al., Cancer Research, 57:229-233 (1997)). Em algumas outras modalidades, cisplatina e taxol são especificamente contempladsa para uso com uma composição contendo uma ou mais formas de selênio da presente invenção. Em algumas modalidades, qualquer farmacêutico que é rotineiramente usado em um contexto de terapia de câncer encontra uso na presente invenção. Agentes anti-câncer convencionais que são adequados para administração com as composições reveladas contendo uma ou mais formas de selênio incluem, mas não são limitadas a adriamicina, 5-fluoruracil, etoposídeo, camptotecina, metotrexato, actinomicina-D, mitomicina C, ou mais preferivelmente, cisplatina. Em algumas modalidades da presente invenção, tratamentos terapêuticos ainda compreendem um ou mais agentes que diretamente se ligação cruzadamente a ácidos nucléicos (por exemplo, DNA) para facilitar dano ao DNA, levando a um agente antineoplásico sinergístico da presente invenção. Por exemplo, agentes tal como cisplatina, e outros agentes alquilantes de DNA podem ser usados. Agentes que danificam DNA também incluem compostos que interferem com replicação de DNA, mitose, e segregação cromossomal. Tais compostos quimioterápicos incluem, mas não são limitados a, adriamicina, também conhecidoss como doxorubicina, etoposídeo, verapamil, podofilotoxina, e semelhantes. Esses compostos são amplamente usados nos ajustes clínicos para o tratamento de neoplasmas, e são administrados através de injeções bolus intravenosamente em doses variando de 25-75 M/2 a intervalos de 21 dias para adriamicina a 35-50 Mg/M2 para etoposídeo intravenosamente ou dobro da dose intravenosa oralmente.[000135] Taxanes (e.g., Docetaxel) are an effective class of anti-cancer chemotherapeutic agents (See, for example, K. D. Miller and G. W. Sledge, Jr. Cancer Investigation, 17:121-136 (1999)). While the present invention is not intended to be limited to any particular mechanism, taxane-mediated cell death is thought to proceed through intercellular microtubule stabilization and subsequent induction of the apoptotic pathway. (See, for example, S. Haldar et al., Cancer Research, 57:229-233 (1997)). In some other embodiments, cisplatin and taxol are specifically contemplated for use with a composition containing one or more forms of selenium of the present invention. In some embodiments, any pharmaceutical that is routinely used in a cancer therapy context finds use in the present invention. Conventional anti-cancer agents that are suitable for administration with the disclosed compositions containing one or more forms of selenium include, but are not limited to, adriamycin, 5-fluorouracil, etoposide, camptothecin, methotrexate, actinomycin-D, mitomycin C, or more preferably , cisplatin. In some embodiments of the present invention, therapeutic treatments further comprise one or more agents that directly cross-link to nucleic acids (e.g., DNA) to facilitate DNA damage, leading to a synergistic antineoplastic agent of the present invention. For example, agents such as cisplatin, and other DNA alkylating agents can be used. Agents that damage DNA also include compounds that interfere with DNA replication, mitosis, and chromosome segregation. Such chemotherapeutic compounds include, but are not limited to, adriamycin, also known as doxorubicin, etoposide, verapamil, podophyllotoxin, and the like. These compounds are widely used in clinical settings for the treatment of neoplasms, and are administered via bolus injections intravenously at doses ranging from 25-75 M/2 at 21-day intervals for adriamycin to 35-50 Mg/M2 for etoposide intravenously or double the intravenous dose orally.

[000136] Agentes que rompem a síntese e fidelidade de precursores de ácido nucléico e subunidades também levam a dano de DNA e encontra uso como agentes quimioterápicos na presente invenção. Um número de precursores de ácido nucléico têm sido desenvolvidos. Particularmente úteis são agentes que têm sofrido extensivo teste e são facilmente disponíveis. Tal como, agentes tal como 5-fluoruracil (5- FU) são preferivelmente usados por tecido neuplástico, fazendo este agente particularmente útil para alvejar as células neoplásticas. As doses de ditribuição podem variar de 3 a 15 mg/kg/dia, embora outras doses possam variar consideravelmente de acordo com vários fatores incluindo estágio da doença, amenabilidade das células à terapia, quantidade de resistência aos agentes e semelhantes.[000136] Agents that disrupt the synthesis and fidelity of nucleic acid precursors and subunits also lead to DNA damage and find use as chemotherapeutic agents in the present invention. A number of nucleic acid precursors have been developed. Particularly useful are agents that have undergone extensive testing and are readily available. As well, agents such as 5-fluorouracil (5-FU) are preferably used by neoplastic tissue, making this agent particularly useful for targeting neoplastic cells. Delivery doses may range from 3 to 15 mg/kg/day, although other doses may vary considerably according to various factors including stage of the disease, amenability of the cells to therapy, amount of resistance to the agents, and the like.

[000137] Em modalidades preferidas, os agentes anti-câncer (por exemplo, fatores anti-angiogênicos discutidos aqui) usados na presente invenção são aqueles que são amenable a co-administração com uma composição contendo uma ou ais formas de selênio ou são de outra forma associados com a composição contendo uma ou mais formas de selênio, tal que elas podem ser distribuídas em um paciente, tecido, ou células sem perda de fidelidade do efeito anti- câncer. Para uma descrição mais detalhada de agentes terapêuticos de câncer tais como complexo platina verapamil, podofilotoxina, carboplatina, procarbazina, mecloretamina ciclofosfamida, camptotecina, ifosfamida, melfalan, clorambucila, bisulfan, mitrouréia, adriamicina, dactinomicina, daunorubicina, doxorubicina, bleomicina, plicomicina, mitomicina, etoposídeo (VP16), tamoxifeno, taxol, transplatina, 5-fluoruracila, vincristina, vinblastina e metotrexato e outros agentes anti-câncer similares, aqueles versados na técnica são referidos a qualquer número de manuais instrutivos, incluindo, mas não limitado a, referência Physician's Desk e Goodman and Gilman's "Pharmaceutical Basis of Therapeutics" nona edição, Eds. Hardman et al., 1996.[000137] In preferred embodiments, the anti-cancer agents (e.g., anti-angiogenic factors discussed herein) used in the present invention are those that are amenable to co-administration with a composition containing one or more forms of selenium or are otherwise form associated with the composition containing one or more forms of selenium, such that they can be distributed into a patient, tissue, or cells without loss of fidelity of the anti-cancer effect. For a more detailed description of cancer therapeutic agents such as verapamil platinum complex, podophyllotoxin, carboplatin, procarbazine, mechlorethamine, cyclophosphamide, camptothecin, ifosfamide, melphalan, chlorambucil, bisulfan, mitrourea, adriamycin, dactinomycin, daunorubicin, doxorubicin, bleomycin, plicomycin, mitomycin , etoposide (VP16), tamoxifen, taxol, transplatin, 5-fluorouracil, vincristine, vinblastine and methotrexate and other similar anti-cancer agents, those skilled in the art are referred to any number of instructional manuals, including, but not limited to, reference Physician's Desk and Goodman and Gilman's "Pharmaceutical Basis of Therapeutics" ninth edition, Eds. Hardman et al., 1996.

V. Antioxidants

[000138] Em algumas modalidades da presente invenção antioxidantes são co-administrados com composições ou formulaçõe da presente invenção. A presente invenção não é limitada pelo tipo de antioxidante utilizado. De fato, uma variedade de antioxidantes é contemplada para ser útil na presente invenção, incluindo, mas não limitada a, difenilaminas alquiladas, fenilenodiaminas N-alquiladas, fenil-alfa-naftilamina, fenil-alfa-naftilamina alquilada, dimetil quinolinas, trimetildiidroquinolinas e composições oligoméricas derivadas dos mesmos, fenólicos hindered, hidroquinonas alquiladas, éteres tiodifenil hidroxilado. alquilidenobisfenóis, tiopropionatos, ditiocarbamatos metálicos, 1,3,4-dimercaptotiadiazol e derivados, compostos de cobre solúveis em óleo, e semelhantes, Naugalube.RTM. 438, Naugalube 438L, Naugalube 640, Naugalube 635, Naugalube 680, Naugalube AMS, Naugalube APAN, Naugard PANA, Naugalube TMQ, Naugalube 531, Naugalube 431, Naugard BHT, Naugalube 403, e Naugalube 420, ácido ascórbico, tocoferóis incluindo alfa-tocoferol, antioxidantes solúveis em água tais como compostos sulfidrila e seus derivados (por exemplo, metabissulfito de sódio e N-acetil-cisteína), ácido lipóico e ácido diidrolipóico, resveratrol, lactoferrina, derivados do ácido ascórbico (por exemplo, ascorbil palmitato e ascorbil polipeptídeo), hidroxitolueno butilado, retinóides (por exemplo, retinol e retinil palmitato), tocotrienóis, ubiquinonam extratos contendo flavonóides e isoflavonóides e seus derivados (por exemplo, genisterína e diadzeina), extratos contendo resveratrol e semelhantes, semente de uva, chá verde, casca de pinheiro, própolis, Irganox 1010, 1035, Sumilizer GA-80 (fabricado por Sumitomo Chemical Industries Co., Ltd.), beta-caroteno, licopeno, vitaminas C, E, e A, e outras substâncias.[000138] In some embodiments of the present invention antioxidants are co-administered with compositions or formulations of the present invention. The present invention is not limited by the type of antioxidant used. Indeed, a variety of antioxidants are contemplated to be useful in the present invention, including, but not limited to, alkylated diphenylamines, N-alkylated phenylenediamines, phenyl-alpha-naphthylamine, alkylated phenyl-alpha-naphthylamine, dimethyl quinolines, trimethyldihydroquinolines and compositions oligomeric derivatives thereof, hindered phenolics, alkylated hydroquinones, hydroxylated thiodiphenyl ethers. alkylidenebisphenols, thiopropionates, metal dithiocarbamates, 1,3,4-dimercaptothiadiazole and derivatives, oil-soluble copper compounds, and the like, Naugalube.RTM. 438, Naugalube 438L, Naugalube 640, Naugalube 635, Naugalube 680, Naugalube AMS, Naugalube APAN, Naugard PANA, Naugalube TMQ, Naugalube 531, Naugalube 431, Naugard BHT, Naugalube 403, and Naugalube 420, ascorbic acid, tocopher ols including alpha-tocopherol , water-soluble antioxidants such as sulfhydryl compounds and their derivatives (e.g., sodium metabisulfite and N-acetyl-cysteine), lipoic acid and dihydrolipoic acid, resveratrol, lactoferrin, ascorbic acid derivatives (e.g., ascorbyl palmitate and ascorbyl polypeptide ), butylated hydroxytoluene, retinoids (e.g. retinol and retinyl palmitate), tocotrienols, ubiquinonam extracts containing flavonoids and isoflavonoids and their derivatives (e.g. genisterin and diadzein), extracts containing resveratrol and the like, grape seed, green tea, bark pine, propolis, Irganox 1010, 1035, Sumilizer GA-80 (manufactured by Sumitomo Chemical Industries Co., Ltd.), beta-carotene, lycopene, vitamins C, E, and A, and other substances.

[000139] Embora um entendimento do mecanismo não seja necessário para prática da presente invenção e a presente invenção não é limitada a qualquer mecanismo particular de ação, em algumas modalidades, administração de uma composição contendo selênio (por exemplo, selênio solúvel, SGP) a um paciente muda perfis de expressão gênica (por exemplo, TGFB1, MAPK8, C1R, UBE4A, SMPX, USP22, e PTP4A1) no paciente. Em algumas modalidades, administração de uma composição contendo selênio (por exemplo, selênio solúvel, SGP) a um paciente reduz o nível de dano de DNA (por exemplo, no tecido cerebral (por exemplo, neocórtex), tecido muscular, tecido adiposo etc) de um paciente.[000139] Although an understanding of the mechanism is not necessary to practice the present invention and the present invention is not limited to any particular mechanism of action, in some embodiments, administering a selenium-containing composition (e.g., soluble selenium, SGP) to a patient changes gene expression profiles (e.g., TGFB1, MAPK8, C1R, UBE4A, SMPX, USP22, and PTP4A1) in the patient. In some embodiments, administering a selenium-containing composition (e.g., soluble selenium, SGP) to a patient reduces the level of DNA damage (e.g., in brain tissue (e.g., neocortex), muscle tissue, adipose tissue, etc.) of a patient.

[000140] Em algumas modalidades, a presente invenção provê um método de redução de sensibilidade de células para citotoxidade de H2O2 compreendendo administração às células de uma composição contendo selênio (por exemplo, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP, SEL-PLEX etc).[000140] In some embodiments, the present invention provides a method of reducing sensitivity of cells to H2O2 cytotoxicity comprising administering to cells a composition containing selenium (e.g., soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, SEL-PLEX, etc. ).

[000141] A invenção ainda provê um método de redução de radicais superóxido em um paciente (por exemplo, em um paciente experimentando estresse oxidativo) compreendendo administração de uma composição (por exemplo, um suplemento nutricional) compreendendo selênio (por exemplo, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP, SEL-PLEX etc) ao paciente. Além disso, em algumas modalidades, a presente invenção provê que pacientes recebendo certas composições compreendendo selênio (por exemplo, selênio solúvel, selênio solúvel me água, SGP, SEL-PLEX etc) têm uma habilidade aumentada para ligar com estresse oxidativo. Embora um entendimento do mecanismo não seja necessário para praticar a presente invenção e a presente invenção não seja limitada a qualquer mecanismo particular de ação, em algumas modalidades, pacientes recebendo uma composição compreendendo selênio (por exemplo, um suplemento dietético contendo selênio (por exemplo, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP, SEL-PLEX etc)) têm uma habilidade aumentada para lidar com estresse oxidativo devido a habilidade de selecionar formas de selênio (por exemplo, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP, SEL-PLEX etc) para alterar (por exemplo, reduzir) o nível de radicais superóxido no paciente.[000141] The invention further provides a method of reducing superoxide radicals in a patient (e.g., in a patient experiencing oxidative stress) comprising administering a composition (e.g., a nutritional supplement) comprising selenium (e.g., soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, SEL-PLEX etc) to the patient. Furthermore, in some embodiments, the present invention provides that patients receiving certain compositions comprising selenium (e.g., soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, SEL-PLEX, etc.) have an increased ability to react with oxidative stress. Although an understanding of the mechanism is not necessary to practice the present invention and the present invention is not limited to any particular mechanism of action, in some embodiments, patients receiving a composition comprising selenium (e.g., a dietary supplement containing selenium (e.g., soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, SEL-PLEX etc)) have an increased ability to deal with oxidative stress due to the ability to select forms of selenium (e.g. soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, SEL-PLEX etc) to change (e.g. reduce) the level of superoxide radicals in the patient.

[000142] É contemplado que as composições e métodos da presente invenção encontrarão uso em vários ajustes, incluindo, mas não limitado a pesquisa e diagnóstico clínico.[000142] It is contemplated that the compositions and methods of the present invention will find use in various settings, including, but not limited to clinical research and diagnosis.

SAW. Vehicles

[000143] Em algumas modalidades, a presente invenção provê distribuição de selênio (por exemplo, selenoglicoproteínas) através de um ou mais veículos incluindo, mas não limitado a nanopartículas (por exemplo, nanocápsulas), vesículas, lipossomas, polímeros (por exemplo, polímeros de impressão molecular (MIPs), polímeros de liberação lenta, polímeros policatiônicos, e/ou polimersomas. Em algumas modalidades, um veículo selênio provê administração, alvo e/ou liberação controlada de compostos contendo selênio (por exemplo, selênio solúvel em água, SGP) em um paciente (por exemplo, humano ou animal). Em algumas modalidades, veículos (por exemplo, polímero de liberação controlada, nanocápsula, MIP, polimersomas etc) aumentam a distribuição de compostos contendo selênio (por exemplo, selênio orgânico, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP, SEL-PLEX etc) a um paciente. Em algumas modalidades, veículos (por exemplo, polímero de liberação controlada, nanocápsula, MIP, polimersomas etc) aumentam a biodisponibilidade de compsotos contendo selênio (por exemplo, selênio orgânico, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP, SEL-PLEX etc) a um paciente.[000143] In some embodiments, the present invention provides delivery of selenium (e.g., selenoglycoproteins) through one or more carriers including, but not limited to nanoparticles (e.g., nanocapsules), vesicles, liposomes, polymers (e.g., polymers molecular imprinted polymers (MIPs), slow-release polymers, polycationic polymers, and/or polymersomes. In some embodiments, a selenium carrier provides delivery, targeting, and/or controlled release of selenium-containing compounds (e.g., water-soluble selenium, SGP ) in a patient (e.g., human or animal). In some embodiments, carriers (e.g., controlled-release polymer, nanocapsule, MIP, polymersomes, etc.) increase the delivery of selenium-containing compounds (e.g., organic selenium, soluble selenium , water-soluble selenium, SGP, SEL-PLEX, etc.) to a patient. In some embodiments, vehicles (e.g., controlled-release polymer, nanocapsule, MIP, polymersomes, etc.) increase the bioavailability of selenium-containing compounds (e.g., selenium organic, soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, SEL-PLEX etc) to a patient.

[000144] A invenção não é limitada pelo tipo de veículo utilizado. De fato uma variedade de veículos pode ser usado, incluindo, mas não limitado a dendrímeros, polymerosomes, nanopartículas, polímeros de liberação lenta, nanocápsulas, polímeros de impressão molecular e/ou outro tipo de veículo (por exemplo, qualquer um dos veículos aqui descritos). Em uma modalidade preferida, o veículo é um polímero de liberação controlada. Em outra modalidade preferida, o veículo é um polímero de impressão molecular. Em ainda outra modalidade preferida, o veículo é um polimersoma usado para encapsular selenoglicoproteína. A invenção não é limitada pelo tipo de polimersoma usado. De fato, qualquer polimersoma conhecido na técnica pode ser utilizado. Em algumas modalidades, o polimersoma compreende copolímero em bloco de poli(óxido de etileno) (PEO). Entretanto, a invenção não é tão limitada. Qualquer copolímero bloqueador conhecido pode ser utilizado, incluindo, por exemplo, poli(etiletileno) (PEE), poli(butadieno) (PB ou PBD), poli(estireno (PS), e poli(isopreno) (PI). Em algumas modalidades, o polímero compreende copolímero dibloco poli(a-caprolactona) (PCL). Em algumas modalidades, o polimersoma compreende copolímeros dibloco à base de poli(etileno óxido)-bloco-poli(D-caprolactona) (PEO- b-PCL). Em algumas modalidades, o polimersoma compreende um copolímero bloqueador que é tribloqueador, tetrabloqueador, pentabloqueador ou pelo menos copolímero seis vezes bloqueador. Em algumas modalidades, o polimersoma é derivado a partir do acoplamento de poli(ácido lático), poli(glicolídeo), poli(ácido lático- coglicólico) e/ou poli(3-hidroxibutirato) com PEO. A invenção não é limitada pelo tamanho da selenoglicoproteína encapsulada co polimersoma. Uma variedade de tamanhos encontra uso nas composições e métodos da invenção incluindo, mas não limitado a, selenoglicoproteínas encapsuladas com polimersoma que têm cerca de 50-300 nm em diâmetro embora maiores (por exemplo, cerca de 350 nm, 400 nm, 500 nm ou maiores) e menores (por exemplo, cerca de 40 nm, 30 nm, 20 nm, ou menores) selenoglicoproteínas encapsuladas em polimersoma podem ser usadas.[000144] The invention is not limited by the type of vehicle used. In fact a variety of carriers can be used, including but not limited to dendrimers, polymerosomes, nanoparticles, slow-release polymers, nanocapsules, molecularly imprinted polymers and/or other type of carrier (e.g., any of the carriers described herein ). In a preferred embodiment, the carrier is a controlled release polymer. In another preferred embodiment, the carrier is a molecularly imprinted polymer. In yet another preferred embodiment, the carrier is a polymersome used to encapsulate selenoglycoprotein. The invention is not limited by the type of polymersome used. In fact, any polymersome known in the art can be used. In some embodiments, the polymersome comprises poly(ethylene oxide) (PEO) block copolymer. However, the invention is not so limited. Any known blocking copolymer may be used, including, for example, poly(ethylethylene) (PEE), poly(butadiene) (PB or PBD), poly(styrene (PS), and poly(isoprene) (PI). In some embodiments , the polymer comprises poly(a-caprolactone) diblock copolymer (PCL).In some embodiments, the polymersome comprises diblock copolymers based on poly(ethylene oxide)-block-poly(D-caprolactone) (PEO-b-PCL). In some embodiments, the polymersome comprises a blocking copolymer that is a triblocker, tetrablocker, pentablocker, or at least a sixfold blocker copolymer. In some embodiments, the polymersome is derived from the coupling of poly(lactic acid), poly(glycolide), poly (lactic-coglycolic acid) and/or poly(3-hydroxybutyrate) with PEO. The invention is not limited by the size of the selenoglycoprotein encapsulated in the polymersome. A variety of sizes find use in the compositions and methods of the invention including, but not limited to, polymersome-encapsulated selenoglycoproteins that are about 50-300 nm in diameter although larger (e.g., about 350 nm, 400 nm, 500 nm or larger) and smaller (e.g., about 40 nm, 30 nm, 20 nm, or smaller) polymersome-encapsulated selenoglycoproteins can be used.

[000145] Em algumas modalidades, a presente invenção compreende nanocápsulas de liberação controlada SGP e esferas MIP para prover fornecimento estável e seguro de selênio orgânico (por exemplo, polímeros de impressão molecular (MIPs), polímeros de liberação controlada etc) em comparação com outras formas de selênio (por exemplo, levedura enriquecida com selênio, SEL-PLEX, ou cápsulas ou pílulas de doses únicas de selênio inorgânico). Em algumas modalidades, solúvel em água, solúvel, e/ou SGPs são utilizado para encapsulamento eficiente e distribuição de selênio através de métodos de distribuição avançada aqui (por exemplo, nanopartículas (por exemplo, nanocápsulas), vesículas, polímeros (por exemplo, polímeros de impressão molecular (MIPs), polímeros de liberação controlada etc), e/ou polimerosomos). Em algumas modalidades, os métodos de distribuição avançada aqui aumentam a biodisponibilidade do selênio encapsulado (por exemplo, SGPs ou selênio solúvel). Em algumas modalidades, os métodos de distribuição avançada aqui provêem liberação controlada (por exemplo, 12 horas, 24 horas, 2 dias, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 10 semanas etc) de selênio em uma solução, um paciente, soro etc.[000145] In some embodiments, the present invention comprises SGP controlled-release nanocapsules and MIP beads to provide stable and safe supply of organic selenium (e.g., molecularly imprinted polymers (MIPs), controlled-release polymers, etc.) compared to other forms of selenium (e.g., selenium-enriched yeast, SEL-PLEX, or single-dose inorganic selenium capsules or pills). In some embodiments, water-soluble, soluble, and/or SGPs are used for efficient encapsulation and delivery of selenium through delivery methods advanced herein (e.g., nanoparticles (e.g., nanocapsules), vesicles, polymers (e.g., (MIPs), controlled release polymers, etc.), and/or polymersomes). In some embodiments, the delivery methods advanced herein increase the bioavailability of encapsulated selenium (e.g., SGPs or soluble selenium). In some embodiments, the advanced delivery methods herein provide controlled release (e.g., 12 hours, 24 hours, 2 days, 1 week, 2 weeks, 3 weeks, 10 weeks, etc.) of selenium in a solution, a patient, serum, etc. .

[000146] Em algumas modalidades, a invenção provê polímeros de liberação controlada como veículo para composições contendo selênio (por exemplo, selênio orgânico, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP etc) da presente invenção. Polímeros de liberação controlada, tais como poli(ácido lático - ácido co-glicólico) (PLGA), ou polímeros policatiônicos, tal como, polietilenoimina (PEI), podem ser utilizados como veículos. Em algumas modalidades, polímeros de liberação controlada provêem distribuição controlada de composições contendo selênio (por exemplo, selênio orgânico, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP, SEL-PLEX etc). Em algumas modalidades, distribuição controlada ocorre quando um polímero (por exemplo, PEI), se natural ou sintético, é criteriosamente combinado com uma composição contendo selênio (por exemplo, selênio orgânico, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP, SEL-PLEX etc) e opcionalmente outros agentes ativos ou inativos em tal forma que a composição contendo selênio (por exemplo, selênio orgânico, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP, SEL-PLEX etc) é liberada a partir do material em uma forma pré-designada. A liberação da composição contendo selênio (por exemplo, selênio orgânico, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP, SEL-PLEX etc) pode ser constante ao longo de um período, ele pode ser cíclico ao longo de um período, ou ele pode ser iniciado pelo ambiente ou outros eventos externos. Em algumas modalidades, distribuição controlada provê terapia mais efetiva. Em algumas modalidades, distribuição controlada elimina o potencial para dosagem inferior e super dosagem. Outras vantagens do uso de sistemas de liberação controlada podem incluir manutenção de níveis de selênio dentro de uma variação desejada, a necessidade para administrações inferiores, e obediência do paciente aumentada.[000146] In some embodiments, the invention provides controlled-release polymers as a vehicle for selenium-containing compositions (e.g., organic selenium, soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, etc.) of the present invention. Controlled-release polymers, such as poly(lactic acid - co-glycolic acid) (PLGA), or polycationic polymers, such as polyethyleneimine (PEI), can be used as carriers. In some embodiments, controlled release polymers provide controlled delivery of selenium-containing compositions (e.g., organic selenium, soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, SEL-PLEX, etc.). In some embodiments, controlled delivery occurs when a polymer (e.g., PEI), whether natural or synthetic, is judiciously combined with a selenium-containing composition (e.g., organic selenium, soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, SEL-PLEX etc.) and optionally other active or inactive agents in such a form that the selenium-containing composition (e.g. organic selenium, soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, SEL-PLEX etc.) is released from the material in a pre- designated. The release of the selenium-containing composition (e.g., organic selenium, soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, SEL-PLEX etc.) may be constant over a period, it may be cyclical over a period, or it may be initiated by the environment or other external events. In some embodiments, controlled delivery provides more effective therapy. In some embodiments, controlled distribution eliminates the potential for underdosing and overdosing. Other advantages of using controlled release systems may include maintenance of selenium levels within a desired range, the need for lower administrations, and increased patient compliance.

[000147] Em algumas modalidades, a invenção provê polymerosomes como veículos para composições contendo selênio (por exemplo, selênio orgânico, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP, SEL-PLEX etc) da presente invenção. Em algumas modalidades, polimersomas são feitos usando copolíeros bloqueados sintéticos anfifílicos para formar a membrana da vesícula, e ter um raio variando de cerca de 50 nm a cerca de 10 um ou mais (Ver, por exemplo, Discher et al. Journal of Physical Chemistry B (2002), 106(11), 2848-2854), aqui incorporado pode referência em sua totalidade). Em algumas modalidades, polimersomas contêm uma solução aquosa em seu núcleo e são úteis para encapsular e proteger moléculas, tais como composições contendo selênio (por exemplo, selênio orgânico, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP, SEL- PLEX etc) e opcionalmente uma ou mais drogas, enzimas, outras proteínas e peptídeos, e fragmentos de DNA e RNA. Em algumas modalidades, a membrana do polimersoma provê uma barreira física que isola o material encapsulado a partir de materiais externos, tais como aqueles encontrados em sistemas biológicos. Em algumas modalidades, polimerosomos permitem liberação controlada de conteúdos dentro de seu núcleo (por exemplo, composições contendo selênio (por exemplo, selênio orgânico, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP, SEL-PLEX etc)). Em algumas modalidades, o uso de polímeros sintéticos para construções polimerosomos permite autores manipular as características da membrana e então controlar permeabilidade, taxas de liberação, estabilidade e outras propriedades.[000147] In some embodiments, the invention provides polymerosomes as vehicles for selenium-containing compositions (e.g., organic selenium, soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, SEL-PLEX, etc.) of the present invention. In some embodiments, polymersomes are made using amphiphilic synthetic blocked copolymers to form the vesicle membrane, and have a radius ranging from about 50 nm to about 10 μm or more (See, for example, Discher et al. Journal of Physical Chemistry B (2002), 106(11), 2848-2854), incorporated herein for reference in its entirety). In some embodiments, polymersomes contain an aqueous solution in their core and are useful for encapsulating and protecting molecules, such as selenium-containing compositions (e.g., organic selenium, soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, SEL-PLEX, etc.) and optionally one or more drugs, enzymes, other proteins and peptides, and fragments of DNA and RNA. In some embodiments, the polymersome membrane provides a physical barrier that isolates the encapsulated material from external materials, such as those found in biological systems. In some embodiments, polymersomes allow controlled release of contents within their core (e.g., selenium-containing compositions (e.g., organic selenium, soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, SEL-PLEX, etc.)). In some embodiments, the use of synthetic polymers for polymersome constructs allows authors to manipulate membrane characteristics and then control permeability, release rates, stability, and other properties.

[000148] Em uma modalidade, as composições contendo selênio (por exemplo, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP) da presente invenção podem ser encapsuladas dentro de polimersomas baseados em poli(etileno óxido)-bloco-poH(D-caprolactona) (PEO-b- PCL). Embora um entendimento de um mecanismo não seja necessário para prática da invenção, e a invenção não é limitada a qualquer mecanismo particular de ação, em algumas modalidade, PEO provê estabilidade química e mecânica in vitro melhorada do veículo resultante, biodisponibilidade in vivo aumentada e meias-vidas de circulação sanguínea prolongada. PCL, um biomaterial implantável bem conhecido, forma a membrana do polimersoma, e facilita a degradação completa e segura in vivo do produto resultante por hidrólise de suas ligações éster.[000148] In one embodiment, the selenium-containing compositions (e.g., soluble selenium, water-soluble selenium, SGP) of the present invention can be encapsulated within polymersomes based on poly(ethylene oxide)-block-poH(D-caprolactone) (PEO-b-PCL). Although an understanding of a mechanism is not necessary to practice the invention, and the invention is not limited to any particular mechanism of action, in some embodiments, PEO provides improved in vitro chemical and mechanical stability of the resulting vehicle, increased in vivo bioavailability, and means -prolonged blood circulation lives. PCL, a well-known implantable biomaterial, forms the membrane of the polymersome, and facilitates the complete and safe in vivo degradation of the resulting product by hydrolysis of its ester bonds.

[000149] Em outra modalidade, as composições contendo selênio (por exemplo, selenoglicoproteínas) da presente invenção podem ser encapsuladas em polimersomas sintetizados a partir de misturas ou derivados puros de outros polímeros bloqueadores biodegradáveis a partir do acoplamento de poli(ácido lático), poli(glicolídeo), poli(ácido lático-coglicólico) ou poli(3-hidroxibutirato) com PEO.[000149] In another embodiment, the selenium-containing compositions (e.g., selenoglycoproteins) of the present invention can be encapsulated in polymersomes synthesized from mixtures or pure derivatives of other biodegradable blocking polymers from the coupling of poly(lactic acid), poly (glycolide), poly(lactic-coglycolic acid) or poly(3-hydroxybutyrate) with PEO.

[000150] Em algumas modalidades, a presente invenção provê nanocápsulas (Couvreur et al. Crit Rev Ther Drug Carrier Syst. 2002;19(2):99-134,., aqui incorporadas por referência em sua totalidade) como veículos para composições contendo selênio (por exemplo, selênio orgânico, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP, SEL-PLEX etc) da presente invenção (Ver, por exemplo, Pat. Norte-Americana No. 7.498.045, aqui incorporada por referência em sua totalidade). Em algumas modalidades, nanocápsulas provêem liberação controlada de composições contendo selênio (por exemplo, selênio orgânico, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP, SEL- PLEX etc) sob biodegradação de nanocápsula. Em algumas modalidades, nanocápsulas têm meias-vidas de biodegradação de cerca de 2 a cerca de 100 horas (por exemplo, cerca de 2 horas... 4 horas... 6 horas... 12 horas... 24 horas... 48 horas... 96 horas etc). Em algumas modalidades, nanocápsulas biodegradáveis da invenção são adaptáveis para a liberação controlada de composições contendo selênio (por exemplo, selênio orgânico, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP, SEL-PLEX etc) e opcionalmente uma variedade de outros agentes terapêuticos encapsulados, incluindo macromoléculas, na circulação in vivo de um paciente sob administração do mesmo. As composições nanocápsulas da presente invenção são ainda adaptadas para encapsular concentrações terapeuticamente efetivas de composições contendo selênio (por exemplo, selênio orgânico, selênio seolúvel, selênio solúvel em água SGP etc) e distribuição do mesmo na circulação in vivo de um recipiente. Em algumas modalidades, uma nanocápsula que encapsula composições contendo selênio (por exemplo, selênio orgânico, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP, SEL-PLEX etc) é uma membrana compreendendo, por exemplo, um copolímero de polímero de ácido polilático e polietileno glicol. Em algumas modalidades, nanocápsulas são formadas por polimerização interfacial de um monômero ou a nanodeposição interfacial de um polímero pré-formado.[000150] In some embodiments, the present invention provides nanocapsules (Couvreur et al. Crit Rev Ther Drug Carrier Syst. 2002;19(2):99-134,., incorporated herein by reference in their entirety) as vehicles for compositions containing selenium (e.g., organic selenium, soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, SEL-PLEX, etc.) of the present invention (See, e.g., U.S. Pat. No. 7,498,045, incorporated herein by reference in its entirety ). In some embodiments, nanocapsules provide controlled release of selenium-containing compositions (e.g., organic selenium, soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, SEL-PLEX, etc.) under nanocapsule biodegradation. In some embodiments, nanocapsules have biodegradation half-lives of about 2 to about 100 hours (e.g., about 2 hours... 4 hours... 6 hours... 12 hours... 24 hours... 48 hours... 96 hours etc). In some embodiments, biodegradable nanocapsules of the invention are adaptable for the controlled release of selenium-containing compositions (e.g., organic selenium, soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, SEL-PLEX, etc.) and optionally a variety of other encapsulated therapeutic agents, including macromolecules, in the in vivo circulation of a patient under administration thereof. The nanocapsule compositions of the present invention are further adapted to encapsulate therapeutically effective concentrations of selenium-containing compositions (e.g., organic selenium, selenium selenium, SGP water-soluble selenium, etc.) and distribution thereof in the in vivo circulation of a container. In some embodiments, a nanocapsule that encapsulates selenium-containing compositions (e.g., organic selenium, soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, SEL-PLEX, etc.) is a membrane comprising, for example, a copolymer of polylactic acid polymer and polyethylene glycol. In some embodiments, nanocapsules are formed by interfacial polymerization of a monomer or interfacial nanodeposition of a preformed polymer.

[000151] Em algumas modalidades, a presente invenção provê polímeros de impressão molecular como veículos para composições contendo selênio (por exemplo, selênio orgânico, selênio solúvel, selênio solúvel em água, SGP, SEL-PLEX etc) da presente invenção Mosbach. Trends in Biochemical Sciences, Vol. 7, pp. 92-96, 1994., Wulff. Trends in Biotechnology, Vol. 11, pp. 85-87, 1993., Andersson, et al., Molecular Interactions in Bioseparations (Ngo. T. T. ed.), pp. 383-394,)., Pat. Norte-Americana No. 5.959.050, aqui incorporada por referência em suas totalidades.[000151] In some embodiments, the present invention provides molecular imprinting polymers as carriers for selenium-containing compositions (e.g., organic selenium, soluble selenium, water-soluble selenium, SGP, SEL-PLEX, etc.) of the present Mosbach invention. Trends in Biochemical Sciences, Vol. 7, pp. 92-96, 1994., Wulff. Trends in Biotechnology, Vol. 11, pp. 85-87, 1993., Andersson, et al., Molecular Interactions in Bioseparations (Ngo. T. T. ed.), pp. 383-394,)., Pat. North American No. 5,959,050, incorporated herein by reference in its entirety.

Experimental

[000152] Os seguintes exemplos são providos a fim de demonstrar e ainda ilustrar certas modalidades preferidas e aspectos da presente invenção e não são tencionadas ser construídas como limitantes do objetivo da mesma.[000152] The following examples are provided in order to demonstrate and further illustrate certain preferred embodiments and aspects of the present invention and are not intended to be construed as limiting the scope thereof.

EXAMPLE 1

[000153] A. Preparação sequencial das selenoglicoproteínas a partir de SEL-PLEX pode extração acídica e subsequente precipitações[000153] A. Sequential preparation of selenoglycoproteins from SEL-PLEX can acidic extraction and subsequent precipitation

[000154] Um reator de três entradas de 4 L (extrato#1, Ver Figura 1) equipado com um agitador mecânico, um termômetro, e uma manta elétrica foi enchida com 3 L de H2O deionizada e 50 mL de 0,3 N de HCl. O reator foi aquecido para acima de 50°C e 600 g de SEL-PLEX a 1600 ppm foram adicionados em porções enquanto agitados. Após aproximadamente uma hora, a temperatura alcançou 80°C e o pH da mistura foi 2.23. O pH foi reduzido para 1.5 pela adição de 13,5 mL de 0,3 N de HCl. O recipiente de reação foi mantido com aquecimento e agitação por 7 horas. O pH da mistura foi avaliado aproximadamente a cada hora para garantir que o nível de pH permaneceu a 1.5. A mistura pós-reacional acídica (pH 1.5) foi distribuída em quatro garrafas de centrífuga de 1 L e centrifugada (centrífuga#1, Ver Figura 1) a 4000 RCF por 20 min a 8°C. O sobrenadante (pH 1.5) e os concentrados sólidos foram coletados. O sobrenadante foi adicionado a um reator de 3 entradas de 3 L (misturador#1, Ver Figura 1) em um banho de gelo (4°C), e equipado com um funil de gotejamento contendo NaOH 2N, um agitador mecânico e um eletrodo pH. NaOH 2 N foi adicionado gota a gota à solução enquanto agitada até o pH da mistura alcançar 1.85. Durante adição de NaOH, um precipitado branco foi formado. Agitação continuou por 30 min e a mistura foi centrifugada novamente (centrífuga#2, Ver Figura 1) formando um sobrenadante e um concentrado de selenoglicoproteína. O concentrado de selenoglicoproteína foi coletado e liofilizado (liofilizador#1, Ver Figura 1) produzindo 1.635 g de precipitado branco. O sobrenadante em pH 1.85 e o concentrado formado em pH 1.5 foram adicionados a um recipiente de reação (misturador#2, Ver Figura 1) e colocados em um banho de água gelada (4°C). A mistura foi agitada por 30 minutos e então centrifugada (centrífuga#3, Ver Figura 1 e Figura 2), formando resíduos sólidos úmidos e um sobrenadante a pH 1.6, o último utilizado para gerar SGPs por subsequente precipitação dependente de pH (por exemplo, frações SGP pH 3.0, pH 4.0 e pH 6.0 como descrito abaixo).[000154] A 4 L three-inlet reactor (extract #1, See Figure 1) equipped with a mechanical stirrer, a thermometer, and an electric blanket was filled with 3 L of deionized H2O and 50 mL of 0.3 N HCl. The reactor was heated to above 50°C and 600 g of SEL-PLEX at 1600 ppm was added in portions while stirring. After approximately one hour, the temperature reached 80°C and the pH of the mixture was 2.23. The pH was reduced to 1.5 by adding 13.5 mL of 0.3 N HCl. The reaction vessel was kept heated and stirred for 7 hours. The pH of the mixture was assessed approximately every hour to ensure that the pH level remained at 1.5. The acidic post-reaction mixture (pH 1.5) was distributed into four 1 L centrifuge bottles and centrifuged (centrifuge#1, See Figure 1) at 4000 RCF for 20 min at 8°C. The supernatant (pH 1.5) and solid concentrates were collected. The supernatant was added to a 3-L 3-port reactor (mixer#1, See Figure 1) in an ice bath (4°C), and equipped with a dropping funnel containing 2N NaOH, a mechanical stirrer, and an electrode. pH. 2N NaOH was added dropwise to the solution while stirring until the pH of the mixture reached 1.85. During addition of NaOH, a white precipitate was formed. Stirring continued for 30 min and the mixture was centrifuged again (centrifuge #2, See Figure 1) forming a supernatant and a selenoglycoprotein concentrate. The selenoglycoprotein concentrate was collected and lyophilized (lyophilizer#1, See Figure 1) yielding 1,635 g of white precipitate. The supernatant at pH 1.85 and the concentrate formed at pH 1.5 were added to a reaction vessel (mixer#2, See Figure 1) and placed in an ice-water bath (4°C). The mixture was stirred for 30 minutes and then centrifuged (centrifuge#3, See Figure 1 and Figure 2), forming wet solid residue and a supernatant at pH 1.6, the latter used to generate SGPs by subsequent pH-dependent precipitation (e.g. SGP fractions pH 3.0, pH 4.0 and pH 6.0 as described below).

B. pH-dependent precipitation of selnoglycoproteins

[000155] O sobrenadante de pH 1.6 foi colocado em um reator (misturador#3, Ver Figura 2) e 2 N de NaOH foram adicionados à solução enquanto agitada até o pH da mistura alcançar 3.0. Agitação continuou por mais 30 minutos e a mistura foi centrifugada (centrífuga#4, Ver Figura 2) formando um sobrenadante e um concentrado de selenoglicoproteína. O concentrado de selenoglicoproteína em pH 3.0 (SGP pH 3.0) foi coletado e liofilizado (liofilizador#2, Ver Figura 2) produzindo um precipitado cinza claro. O sobrenadante de pH 3.0 foi colocado em um reator (misturador#4, Ver Figura 2) e 2 N de NaOH foram adicionados à solução até o pH da solução aumentar para 4.0. Agitação continuou por mais 30 minutos e a mistura foi centrifugada (centrífuga#5, Ver Figura 2) formando um sobrenadante e um concentrado de selenoglicoproteína. O concentrado de selenoglicoproteína em pH 4.0 (SGP pH 4.0) foi coletado e liofilizado (liofilizador#3, Ver Figura 2) produzindo um precipitado cinza claro. O sobrenadante de pH 4.0 foi colocado em um reator (misturador#5, Ver Figura 2) e NaOH 2 N foi adicionado à solução até o pH da solução aumentar para 6.0. Agitação continuou por mais 30 minutos e a mistura foi centrifugada (centrífuga#6, Figura 2) formando um sobrenadante e um concentrado de selenoglicoproteína. O concentrado de selenoglicoproteína em pH 6.0 (SGP pH 6.0) foi coletado e liofilizado (liofilizador#4, Ver Figura 2) produzindo um precipitado cinza claro. Precipitados subsequentes que foram formados foram coletados por centrifugação. A corrente de descarte de água de pH 6.0 a partir da última centrifugação continha alguns seleno-peptídeos, manose e oligossacarídeos glicose (por exemplo, aquele que pode ser utilizado na preparação de meio de crescimento de levedura ou outra matéria nutriente). O processo não produziu descarte tóxico e ambientamente amigável.[000155] The pH 1.6 supernatant was placed in a reactor (mixer #3, See Figure 2) and 2 N NaOH was added to the solution while stirring until the pH of the mixture reached 3.0. Stirring continued for another 30 minutes and the mixture was centrifuged (centrifuge #4, See Figure 2) forming a supernatant and a selenoglycoprotein concentrate. The selenoglycoprotein concentrate at pH 3.0 (SGP pH 3.0) was collected and lyophilized (lyophilizer#2, See Figure 2) producing a light gray precipitate. The pH 3.0 supernatant was placed in a reactor (mixer #4, See Figure 2) and 2 N NaOH was added to the solution until the pH of the solution increased to 4.0. Stirring continued for another 30 minutes and the mixture was centrifuged (centrifuge #5, See Figure 2) forming a supernatant and a selenoglycoprotein concentrate. The selenoglycoprotein concentrate at pH 4.0 (SGP pH 4.0) was collected and lyophilized (lyophilizer#3, See Figure 2) producing a light gray precipitate. The pH 4.0 supernatant was placed in a reactor (mixer #5, See Figure 2) and 2 N NaOH was added to the solution until the pH of the solution increased to 6.0. Agitation continued for another 30 minutes and the mixture was centrifuged (centrifuge #6, Figure 2) forming a supernatant and a selenoglycoprotein concentrate. The selenoglycoprotein concentrate at pH 6.0 (SGP pH 6.0) was collected and lyophilized (lyophilizer#4, See Figure 2) producing a light gray precipitate. Subsequent precipitates that were formed were collected by centrifugation. The waste stream of pH 6.0 water from the last centrifugation contained some seleno-peptides, mannose and glucose oligosaccharides (e.g., that which can be used in the preparation of yeast growth medium or other nutrient matter). The process produced no toxic and environmentally friendly disposal.

EXAMPLE 2 Separation and characterization of soluble SGP

[000156] O concentrado contendo resíduos sólidos em pH 1.5 formado pela extração acídica de SEL-PLEX foi lavado com o sobrenadante em pH 1.85 a partir da segunda extração (Ver, Exemplo 1) para reduzir o volume de água usado no processo, e para dissolver a maioria dos de SGP presa dentro do concentrado. Os resíduos sólidos seguindo a terceira centrifugação em pH 1.6 contêm uma quantidade significante de selênio e pode ser misturado com um lote fresco de selênio de levedura antes de ser liofilizado, utilizando completamente o material que foi tomado para a extração.[000156] The concentrate containing solid residues at pH 1.5 formed by the acidic extraction of SEL-PLEX was washed with the supernatant at pH 1.85 from the second extraction (See, Example 1) to reduce the volume of water used in the process, and to dissolve most of the SGP trapped within the concentrate. The solid residues following the third centrifugation at pH 1.6 contain a significant amount of selenium and can be mixed with a fresh batch of yeast selenium before being freeze-dried, completely utilizing the material that was taken for extraction.

[000157] Selênio total, percentagem de concentração de proteína, e o peso de cada das frações SGP tiveram suas médias após três extrações subsequentes a partir de SEL-PLEX (Ver Tabela 1). As frações SGP extraídas constituídas a partir de 2.0 a 2.5 peso% de SEL-PLEX e a partir de 4.3 a 5.75% de selênio total que estava presente em SEL-PLEX pré-extraído.[000157] Total selenium, percentage protein concentration, and the weight of each of the SGP fractions were averaged after three subsequent extractions from SEL-PLEX (See Table 1). The extracted SGP fractions constituted from 2.0 to 2.5 wt% of SEL-PLEX and from 4.3 to 5.75% of total selenium that was present in pre-extracted SEL-PLEX.

[000158] Existe uma correlação positiva entre o pH das frações SGP e o peso da proteína, o inverso sendo verdade para concentração total de selênio (Ver Tabela 1).[000158] There is a positive correlation between the pH of the SGP fractions and the weight of the protein, the opposite being true for total selenium concentration (See Table 1).

[000159] O peso médio de proteína para frações SGP variou de aproximadamente 65 a 90 %peso, e a concentração de selênio para o mesmo grupo de frações variou de aproximadamente 2900 ppm para 4900 ppm de variação. As frações SGP continham de 4 a 37 peso% do componente carboidrato. Tabela 1. A média de resultados a partir de três extrações subsequentes de 600 g de SEL-PLEX [000159] The average protein weight for SGP fractions varied from approximately 65 to 90% weight, and the selenium concentration for the same group of fractions varied from approximately 2900 ppm to 4900 ppm variation. The SGP fractions contained from 4 to 37 wt% of the carbohydrate component. Table 1. Average results from three subsequent extractions of 600 g of SEL-PLEX

[000160] Eletroforese em gel da fração SGP em pH 1.5 formada pela extração de SEL-PLEX revelou que bandas correspondentes a proteínas de alto peso molecular ou proteínas carreando um grande componente carboidrato foram ausentes. Distribuição de tamanho similar, com dominação de frações de baixo peso molecular, foi detectada usando eletroforese capilar e as proteínas de baixo peso molecular a partir de 5.1 kDa a 12.2 kDa compreenderam mais que 90% das misturas.[000160] Gel electrophoresis of the SGP fraction at pH 1.5 formed by SEL-PLEX extraction revealed that bands corresponding to high molecular weight proteins or proteins carrying a large carbohydrate component were absent. Similar size distribution, with domination of low molecular weight fractions, was detected using capillary electrophoresis and low molecular weight proteins from 5.1 kDa to 12.2 kDa comprised more than 90% of the mixtures.

[000161] Cromatografia de exclusão por tamanho de três frações SGP e pH 3.0, 4.0 e 6.0 na BIO-RAD P10 gel (tempos de retenção até 6 h) e em BIO-RAD P30 gel (menos que uma hora de tempo de retenção), resultou em um pico inicial com o tempo de retenção de 510 minutos e um pico tardio mais amplo, com o tempo de retenção em 35-60 minutos. O pico inicial continha significantemente mais proteína: a partir de 64.74 a 75.24%, e significativamente concentração de selênio mais alta: a partir de 2972 a 4252 ppm. O conteúdo de proteína no pico tardio foi muito inferior: a partir de 31,66 a 54,95% e a concentração de selênio foi significativamente inferior: a partir de 1193 a 1858 ppm. Este tipo de cromatografia pode produzir SPGs com um alto conteúdo de Se a partir de frações brutas, e demonstrou baixa homogeneidade do componente do carboidrato nessas misturas.[000161] Size exclusion chromatography of three SGP fractions and pH 3.0, 4.0 and 6.0 on BIO-RAD P10 gel (retention times up to 6 h) and on BIO-RAD P30 gel (less than one hour retention time) , resulted in an early peak with a retention time of 510 minutes and a broader late peak with a retention time of 35–60 minutes. The initial peak contained significantly more protein: from 64.74 to 75.24%, and significantly higher selenium concentration: from 2972 to 4252 ppm. The protein content in the late peak was much lower: from 31.66 to 54.95% and the selenium concentration was significantly lower: from 1193 to 1858 ppm. This type of chromatography can produce SPGs with a high Se content from crude fractions, and has demonstrated low homogeneity of the carbohydrate component in these mixtures.

[000162] Cromatografia por exclusão de tamanho em resina SUPERDEX Peptídeo 10/300 GL (AMERSHAM Biosciences; variação de fracionamento 7.0-100 kDa) usando 0,1 M de AcONH4 (pH 7.5) de vários peptíeos a partir de digestão tríptica de SEL-PLEX, têm produzido grupos similares de picos para amostras SGP (10-100 kDa e > 100 kDa) e eluição completamente diferente para a amostra SEL- PLEX. Somente os picos "iniciais", com o tempo de eluição abaixo de 20 min, continha selênio. Os eluentes contendo selênio foram coletados, liofilizados e analisados usando técnicas SEC ICP MS, MALDI TOF MS e nano ESI MS/MS. Os resultados foram complementares e permitiram a detecção, identificação e sequenciamento de peptídeos contendo selênio. A identificação de proteínas detectadas foi obtida por pesquisa em base de dados SwissProt (Ver, Tabela 2). Tabela 2. Seleno-peptídeos e selenoproteínas identificadas a partir da digestão tríptica do extrato SEL-PLEX. [000162] Size exclusion chromatography on SUPERDEX Peptide 10/300 GL resin (AMERSHAM Biosciences; fractionation range 7.0-100 kDa) using 0.1 M AcONH4 (pH 7.5) of various peptides from tryptic digestion of SEL- PLEX, have produced similar groups of peaks for SGP samples (10-100 kDa and > 100 kDa) and completely different elution for the SEL-PLEX sample. Only the "initial" peaks, with elution time below 20 min, contained selenium. Selenium-containing eluents were collected, lyophilized and analyzed using SEC ICP MS, MALDI TOF MS and nano ESI MS/MS techniques. The results were complementary and allowed the detection, identification and sequencing of selenium-containing peptides. The identification of detected proteins was obtained by searching the SwissProt database (See, Table 2). Table 2. Seleno-peptides and selenoproteins identified from tryptic digestion of the SEL-PLEX extract.

[000163] A natureza mais surpreendente deste método foi que a composição protéica de várias frações obtidas por separações cromatográficas (por exemplo, cromatografia de troca iônica, cromatografia por exclusão de tamanho) de diferentes frações SGP a partir da precipitação dependente de pH, foi a mesma ou muito similar, de acordo com os métodos eletroforéticos (eletroforese em gel e eletroforese capilar) que têm sido aplicados. Como aqui descritos, extração de selenoglicoproteínas a partir de levedura enriquecida com selênio foi bem sucedida em um pH baixo (por exemplo, 1.5). Embora um entendimento de um mecanismo não seja necessário para a prática da invenção e a invenção não seja limitada a qualquer mecanismo particular de ação, em algumas modalidades, sob condições acídicas usadas para extração SGP, os núcleos de proteína não são hidrolisados significativamente e sobrevivem em sua maioria em suas formas originais. Em algumas modalidades, frações selenoglicoproteínas dependentes de pH de SEL-PLES (por exemplo, SGP pH 3.0, SGP pH 4.0, SGP pH 6.0) são geradas e administradas (por exemplo, por elas mesmas ou em combinação com outro agente) a um paciente (por exemplo, para distribuir selênio orgânico a um paciente (por exemplo, através de uma via oral)).[000163] The most surprising nature of this method was that the protein composition of various fractions obtained by chromatographic separations (e.g., ion exchange chromatography, size exclusion chromatography) of different SGP fractions from pH-dependent precipitation, was the same or very similar, according to the electrophoretic methods (gel electrophoresis and capillary electrophoresis) that have been applied. As described herein, extraction of selenoglycoproteins from selenium-enriched yeast was successful at a low pH (e.g., 1.5). Although an understanding of a mechanism is not necessary to practice the invention and the invention is not limited to any particular mechanism of action, in some embodiments, under acidic conditions used for SGP extraction, the protein cores are not significantly hydrolyzed and survive in most of them in their original forms. In some embodiments, pH-dependent selenoglycoprotein fractions of SEL-PLES (e.g., SGP pH 3.0, SGP pH 4.0, SGP pH 6.0) are generated and administered (e.g., by themselves or in combination with another agent) to a patient. (e.g., to deliver organic selenium to a patient (e.g., via an oral route)).

EXAMPLE 3 Bioavailability Comparison

[000164] Pintinhos foram alimentados por dezoito dias com sete tratamentos dietéticos diferentes (Ver Tabelas 3 e 4) para comparar a biodisponibilidade de selênio a partir da precipitação dependente de pH da SGP a partir do extrato acídico SEL-PLEX por medida do conteúdo de selênio em músculo do peito de galinha: Tabela 3: Composição e especificação nutriente da dieta basal Tabela 4. Tratamentos Dietéticos [000164] Chicks were fed for eighteen days with seven different dietary treatments (See Tables 3 and 4) to compare the bioavailability of selenium from the pH-dependent precipitation of SGP from the acidic SEL-PLEX extract by measuring selenium content in chicken breast muscle: Table 3: Composition and nutrient specification of the basal diet Table 4. Dietary Treatments

[000165] Como mostrado na Tabela 5, galinhas alimentadas com dietas suplementadas com fração SGP pH 4.0 o pH 6.0 acumularam quase a mesma quantidade de deposição de selênio no tecido do músculo do peito comparado a galinhas alimentadas com dieta suplementada com SEL-PLEX (SP). Comparado ao controle, o nível de Se tecidual em galinhas alimentadas com a dieta SP e aquelas alimentadas com dietas suplementadas com fração SGP pH 4.0 ou pH 6.0 foi mais de duas vezes tão alto quando galinhas recebendo alimento suplementado com selenito de sódio. Então a invenção provê, em algumas modalidades, que SP, bem como frações SGP dando SP (por exemplo, pH 4.0 e pH 6.0) são biodisponíveis quando administradas a um paciente (por exemplo, em algumas modalidades, SP, SGP pH 4.0 ou SGP pH 6.0 são mais (por exemplo, 2 vezes ou mais) biodisponíveis que selênio inorgânico (por exemplo, selenito de sódio) quando administrado a um paciente (por exemplo, como evidenciado pela distribuição de selênio ao tecido do paciente)). Tabela 5. Efeitos de fontes dietél ticas de Se em concentração de Se muscular[000165] As shown in Table 5, chickens fed diets supplemented with SGP fraction pH 4.0 to pH 6.0 accumulated almost the same amount of selenium deposition in breast muscle tissue compared to chickens fed a diet supplemented with SEL-PLEX (SP ). Compared to control, tissue Se level in chickens fed the SP diet and those fed diets supplemented with SGP fraction pH 4.0 or pH 6.0 was more than twice as high as chickens receiving food supplemented with sodium selenite. Thus the invention provides, in some embodiments, that SP, as well as SGP fractions giving SP (e.g., pH 4.0 and pH 6.0) are bioavailable when administered to a patient (e.g., in some embodiments, SP, SGP pH 4.0, or SGP pH 6.0 are more (e.g., 2 times or more) bioavailable than inorganic selenium (e.g., sodium selenite) when administered to a patient (e.g., as evidenced by the distribution of selenium to the patient's tissue)). Table 5. Effects of dietary Se sources on muscle Se concentration

[000166] * Valores com letras diferentes indicam que os resultados são estatisticamente significantes (P<0,05).[000166] * Values with different letters indicate that the results are statistically significant (P<0.05).

EXAMPLE 4

[000167] A. Efeitos de fontes de dietéticas de selêni diferentes no perfil de expressão gênica no músculo do peito de frangos de corte[000167] A. Effects of different dietary sources of selenium on the gene expression profile in the breast muscle of broiler chickens

[000168] Tecido muscular de breast de galinhas referenciados no Exemplo 3 foi usado para avaliar similaridades e diferenças nos perfis de expressão gênica elicitados pelos seguintes tratamentos dietéticos: Tratamento 1- basal (Controle); Tratamento 2 - Controle + 0,3 ppm selenito-sódio (SS); Tratamento 3 - Controle + 0,3 ppm SEL-PLEX; Tratamento fração SGP 6-0,3 ppm extraída de SEL-PLEX (SP) em pH 4.0. Fração SGP pH 4.0 foi analisada porque ela resultou em níveis quase idênticos de deposição de selênio em tecido peitoral comparado àquela obtida com SP (Ver, Tabela 5). Tal como, experimentos foram conduzidos durante desenvolvimento de modalidades da inveção a fim de determinar se animais recebendo fração SGP pH 4.0 experimentado efeitos in vivo similares (por exemplo, mudanças de expressão gênica) observados em animais alimentados com SP, ou se significante, diferenças mensuráveis existentes.[000168] Chicken breast muscle tissue referenced in Example 3 was used to evaluate similarities and differences in gene expression profiles elicited by the following dietary treatments: Treatment 1- basal (Control); Treatment 2 - Control + 0.3 ppm sodium selenite (SS); Treatment 3 - Control + 0.3 ppm SEL-PLEX; Treatment fraction SGP 6-0.3 ppm extracted from SEL-PLEX (SP) at pH 4.0. SGP pH 4.0 fraction was analyzed because it resulted in almost identical levels of selenium deposition in breast tissue compared to that obtained with SP (See, Table 5). As well, experiments were conducted during development of embodiments of the invention in order to determine whether animals receiving SGP pH 4.0 fraction experienced similar in vivo effects (e.g., gene expression changes) observed in animals fed SP, or if significant, measurable differences. existing.

Animals and Tissue Samples:

[000169] Aos 18 dias de idade, cinco galinhas de cada grupo de tratamento (descritos acima e nas Tabelas 3 e 4) foram aleatoriamente selecionadas e eutanaziadas por asfixia em argônio, seguido por deslocamento cervical. Amostras de tecido muscular de peito (1 grama) foram rapidamente removidas e rapidamente congeladas em nitrogênio líquido. Amostras foram armazenadas a -80oC até análise.[000169] At 18 days of age, five chickens from each treatment group (described above and in Tables 3 and 4) were randomly selected and euthanized by argon asphyxiation, followed by cervical dislocation. Breast muscle tissue samples (1 gram) were quickly removed and quickly frozen in liquid nitrogen. Samples were stored at -80oC until analysis.

Microarray Analysis (Microarray):

[000170] RNA total foi isolado a partir de tecido congelado usando reagente TRIZOL (INVITROGEN, Carlsbad, CA) de acordo com o protocolo do fabricante e purificado usando um kit RNEASY (QIAGEN, Valência, CA). TNA total foi quantificada por absorbância a 260 nm e integridade foi confirmada por eletroforese em gel de agarose e coloração com brometo de etídio das bandas 28S e 18S.[000170] Total RNA was isolated from frozen tissue using TRIZOL reagent (INVITROGEN, Carlsbad, CA) according to the manufacturer's protocol and purified using an RNEASY kit (QIAGEN, Valencia, CA). Total TNA was quantified by absorbance at 260 nm and integrity was confirmed by agarose gel electrophoresis and ethidium bromide staining of the 28S and 18S bands.

[000171] Perfil de microarray foi feito usando o AFFYMETRIX (Santa Clara, CA) Genechip Chicken Genome Array seguindo os protocolos sugeridos pelo fabricante.[000171] Microarray profiling was done using the AFFYMETRIX (Santa Clara, CA) Genechip Chicken Genome Array following the manufacturer's suggested protocols.

[000172] Dados foram processados e cada grupo padrão foi marcado como P (presente), M (marginal) ou A (ausente), baseado na proporção do sinal para força do ruído usando o algoritmo de resumo de expressão AFFYMETRIX MAS5.0.[000172] Data was processed and each pattern group was marked as P (present), M (marginal) or A (absent), based on the ratio of signal to noise strength using the AFFYMETRIX MAS5.0 expression summary algorithm.

Bioinformatics Analysis:

[000173] GeneSpring GX 10.0 (Silicon Genetics, Redwood, CA) foi usado para qualificar e normalizar os dados de microarray e fazer análise estatística e padrão de expressão gênica.[000173] GeneSpring GX 10.0 (Silicon Genetics, Redwood, CA) was used to qualify and normalize the microarray data and perform statistical analysis and gene expression pattern.

[000174] Para minimizar a possiblidade de descobertas misleading, grupos de padrões com baixa intensidade de sinal (marcados como "Ausente" pelo algoritmo MAS5.0) foram excluídos a partir da análise adicional. Os perfil de expressão gênica filtrados foram então sujeitos a one way ANOVA (Análise de variança simples) para identificar os grupos padrões que foram diferencialmente expressos entre grupos e seguidos por um teste post hoc para determinar os genes que foram significativamente mudados por tratamentos com selênio quando comparados ao Controle. Somente genes que diferem do Controle (P<0,05) e tendo uma mudança de vezes na intensidade de sinal correspondente (FC) > 1.2 foram considerados para ser mudados.[000174] To minimize the possibility of misleading findings, groups of patterns with low signal intensity (marked as "Absent" by the MAS5.0 algorithm) were excluded from further analysis. The filtered gene expression profiles were then subjected to one-way ANOVA (Simple Analysis of Variance) to identify the standard groups that were differentially expressed between groups and followed by a post hoc test to determine the genes that were significantly changed by selenium treatments when compared to Control. Only genes differing from Control (P<0.05) and having a fold change in corresponding signal intensity (FC) > 1.2 were considered to be changed.

[000175] A fim de visualmente representar os efeitos de tratamentos dietéticos em perfis de expressão gênica no tecido muscular de peito, 693 genes que foram identificados como sendo diferencialmente expressos (ANOVA, P<0,05) foram sujeitos a agrupamentos hierárquicos não supervisionados baseados em ambos, arranjos e genes. Como descrito em detalhes acima, a fração SGP pH 4.0 foi diretamente derivada de SP, e os grupos de tratamento dietético receberam SP ou a fração SGP pH 4.0 revelou quase níveis idênticos de deposição de selênio (biodisponibilidade) em tecido muscular de peito de galinha (Ver, Tabela 5, acima), Então, foi esperado que ambos grupos de tratamento com selênio (SP e fração SGP pH 4.0) podem ter revelado mudanças de expressão gênica idênticas ou altamente similares. Entretanto, e bem surpreendente, um efeito dietético claro nos perfis de expressão gênica foi observado entre os dois grupos de tratamento (Ver, Figura 3). Especificamente, diferenças dramáticas foram observadas entre os perfils de expressão gênica do grupo de tratamento SP comparados ao grupo de tratamento fração SGP pH 4.0, onde a maioria dos genes analisados responderam diferentemente aos dois grupos de tratamento. Esta ótima variação nos perfis de expressão gênica trazido pelo tratamento Sp versus o tratamento da fração SGP pH 4.0 foi totalmente inesperado e provê até agora percepções não disponíveis em relação a biologia do elemento traço.[000175] In order to visually represent the effects of dietary treatments on gene expression profiles in breast muscle tissue, 693 genes that were identified as being differentially expressed (ANOVA, P<0.05) were subjected to unsupervised hierarchical clustering based in both arrangements and genes. As described in detail above, the SGP pH 4.0 fraction was directly derived from SP, and the dietary treatment groups receiving SP or the SGP pH 4.0 fraction revealed nearly identical levels of selenium deposition (bioavailability) in chicken breast muscle tissue ( See, Table 5, above), Therefore, it was expected that both selenium treatment groups (SP and SGP pH 4.0 fraction) may have revealed identical or highly similar gene expression changes. However, and quite surprisingly, a clear dietary effect on gene expression profiles was observed between the two treatment groups (See, Figure 3). Specifically, dramatic differences were observed between the gene expression profiles of the SP treatment group compared to the SGP pH 4.0 fraction treatment group, where the majority of analyzed genes responded differently to the two treatment groups. This great variation in gene expression profiles brought by the Sp treatment versus the SGP pH 4.0 fraction treatment was totally unexpected and provides insights not previously available regarding the biology of the trace element.

[000176] Por exemplo, 693 genes diferentemente regulados (P<0,05, ANOVA) foram sujeitos ao agrupamento hierárquico não supervisionado baseado em ambos, arranjos e genes. No mapa de aquecimento mostrado na Figura 3, perfis de expressão gênica normalizados são mostrados em cores que refletem as mudanças de expressão comparadas ao valor médio de cada gene; cores branco, preto ou cinza representam diminuição, aumento ou nenhuma mudança no nível de intensidade de expressão, respectivamente. O dendrograma em cima do mapa de aquecimento reflete a extensão de similaridade nos perfis de expressão entre tratamentos, enquanto o dendrograma no lado esquerdo representa as diferenças nos padrões de expressão dos genes individuais, através de todos os tratamentos. Os comprimendos dos dendrogramas mostrados na Figura 3 correspondem ao nível de dissimilaridade entre grupos de saída (um dendrograma curto indica um nível mais alto de similaridade).[000176] For example, 693 differentially regulated genes (P<0.05, ANOVA) were subjected to unsupervised hierarchical clustering based on both arrays and genes. In the heat map shown in Figure 3, normalized gene expression profiles are shown in colors that reflect expression changes compared to the mean value of each gene; White, black or gray colors represent decrease, increase or no change in expression intensity level, respectively. The dendrogram on top of the heat map reflects the extent of similarity in expression profiles between treatments, while the dendrogram on the left represents differences in expression patterns of individual genes across all treatments. The lengths of the dendrograms shown in Figure 3 correspond to the level of dissimilarity between output groups (a short dendrogram indicates a higher level of similarity).

[000177] Os efeitos diferentes da fração GP pH 4.0 e SP nos perfil de expressão gênica em músculo de peito foram ainda analisados por comparação do número de genes significativamente mudados (P<0,05, FC>1,2) pela fração SGP pH 4.0 (pH 4), SP e selenito de sódio (SS), como representado no diagrama Venn mostrado na Figura 4. Existem 198, 173 e 283 genes significativamente mudados por SP, pH 4 e SS, respectivamente. Existem somente 21 genes comumente regulados por todos os três grupos de tratamento com Se, e 46 comumente regulados por ambos, SP e fração SGP pH 4.0. Existem 152 e 127 genes unicamente mudados por SP ou fração SGP pH 4.0, respectivamente.[000177] The different effects of the GP pH 4.0 and SP fraction on the gene expression profile in breast muscle were further analyzed by comparing the number of genes significantly changed (P<0.05, FC>1.2) by the SGP pH fraction 4.0 (pH 4), SP and sodium selenite (SS), as represented in the Venn diagram shown in Figure 4. There are 198, 173 and 283 genes significantly changed by SP, pH 4 and SS, respectively. There are only 21 genes commonly regulated by all three Se treatment groups, and 46 commonly regulated by both SP and SGP pH 4.0 fraction. There are 152 and 127 genes uniquely changed by SP or SGP pH 4.0 fraction, respectively.

[000178] Por exemplo, vários genes identificados como sendo diferentemente ou comumente regulado em tecidos muscular de peito de galinha como um resultado de vários tratamentos de selênio são mostrados nas Figuras 5-7.[000178] For example, several genes identified as being differentially or commonly regulated in chicken breast muscle tissues as a result of various selenium treatments are shown in Figures 5-7.

[000179] Fator transformador de crescimento, beta-induzido (TGFBU 68 kDa) é pensado estar envolvido em interações célula-matriz, adesão celualr, migração e diferenciação. Mutações deste gene têm sido ligadas a várias formas de distrofias córneas. Proteína quinase ativada por mitógeno 8, (MAPK8, também conhecido como JNK1) é um membro da família quinse MAP. MAP quinases atuam como um ponto de integração para múltiplos sinais bioquímicos, e são envolvidos em uma ampla variedade de processos celulares tais como proliferação, diferenciação, regulação de transcrição e desenvolvimento. MAPK8 também desempenham um papel importante em resposta de estresse oxidativo celular, resposta imune, bem como, metabolismo de carboidrato e proteína através de vias de sinalização de insulina. É também conhecido que em com a ativação de MAPK8 pode induzir resistência a insulina através de fosforilação de substrato de receptor de insulina 1 (IRS1).[000179] Transforming growth factor, beta-inducible (TGFBU 68 kDa) is thought to be involved in cell-matrix interactions, cell adhesion, migration and differentiation. Mutations of this gene have been linked to several forms of corneal dystrophies. Mitogen-activated protein kinase 8, (MAPK8, also known as JNK1) is a member of the MAP kinse family. MAP kinases act as an integration point for multiple biochemical signals, and are involved in a wide variety of cellular processes such as proliferation, differentiation, transcriptional regulation and development. MAPK8 also plays an important role in cellular oxidative stress response, immune response, as well as carbohydrate and protein metabolism through insulin signaling pathways. It is also known that MAPK8 activation can induce insulin resistance through phosphorylation of insulin receptor substrate 1 (IRS1).

[000180] Figura 5 provê exemplos de genes (por exemplo, TGFBI e MAPK8) que foram comumente regulados por SS, SP e fração SGP pH 4.0. Figura 6 provê exemplos de genes (por exemplo, componente complemento 1R (C1R), e fator de ubiquinação E4A (UBE4A)) comumente regulado por SP e fração SGP pH 4.0, mas não por SS. Componente do complemento 1R (C1R) é uma proteína envolvida na cascata do complemento do sistema imune inato e remoção de patógeno. A modificação das proteínas com ubiquitina é um importante mecanismo celular para alvos anomais ou proteínas de vida curta para degradação. UBE4A codifica uma ligase ubiquitina tipo U-box descrita como um fator de ubiquitinação E4. UBE4A é pensada ter papéis em processos bioquímicos diferentes, outros que ubiquitinação, incluindo crescimento e/ou diferenciação.[000180] Figure 5 provides examples of genes (e.g., TGFBI and MAPK8) that were commonly regulated by SS, SP and SGP pH 4.0 fraction. Figure 6 provides examples of genes (e.g., complement component 1R (C1R), and ubiquination factor E4A (UBE4A)) commonly regulated by SP and SGP pH 4.0 fraction, but not by SS. Complement component 1R (C1R) is a protein involved in the innate immune system's complement cascade and pathogen clearance. Modification of proteins with ubiquitin is an important cellular mechanism to target abnormal or short-lived proteins for degradation. UBE4A encodes a U-box type ubiquitin ligase described as an E4 ubiquitination factor. UBE4A is thought to have roles in biochemical processes other than ubiquitination, including growth and/or differentiation.

[000181] Figura 7 provê exemplos de genes (por exemplo, proteína muscular pequena, ligada a X (SMPX) e ubiquitina peptidase específica (USP22)) que foram unicamente regulados pela fração SGP pH 4.0. Proteína muscular pequena, ligada a X (SMPX) é uma proteína pequena especificamente expressa em músculo estriado e desempenha um papel importante na contração muscular. Ubiquitina peptidase específica 22 (USP22) é um gene envolvido nos processos catabólicos de proteína dependente de ubiquitina. USP22 tem sido mostrado a ser reguador positivo de crescimento de tumor. Expressão aumentada de USP22 é ligada a progressão de câncer. A habilidade em reduzir ou expressão knockdown de USP22 pode prover inibição de crescimento tumoral e/u progressão de câncer. Por exemplo, redução da expressão de USP22 pode regular negativamente a expressão de Mdm2 e ciclina E, resultando na expressão regulada positivamente de p53 e p21, levando ao impedimento de ciclo celular e inibição da proliferação celular do tumor de bexiga humano.[000181] Figure 7 provides examples of genes (e.g., small muscle protein, X-linked (SMPX) and specific ubiquitin peptidase (USP22)) that were uniquely regulated by the SGP pH 4.0 fraction. Small muscle protein, X-linked (SMPX) is a small protein specifically expressed in striated muscle and plays an important role in muscle contraction. Ubiquitin-specific peptidase 22 (USP22) is a gene involved in ubiquitin-dependent protein catabolic processes. USP22 has been shown to be a positive regulator of tumor growth. Increased expression of USP22 is linked to cancer progression. The ability to reduce or knockdown expression of USP22 may provide inhibition of tumor growth and/or cancer progression. For example, reduced expression of USP22 can downregulate the expression of Mdm2 and cyclin E, resulting in upregulated expression of p53 and p21, leading to cell cycle arrest and inhibition of human bladder tumor cell proliferation.

[000182] Examinação adicional do padrão de expressão de gene único elicitada pela fração pH 4.0 no tecido muscular produz evidência adicional para o uso terapêutico potencial das formas químicas de selênio nesta fração (por exemplo, para prevenir ou diminuir a progressão do tumor e/ou metástase).[000182] Further examination of the single gene expression pattern elicited by the pH 4.0 fraction in muscle tissue yields additional evidence for the potential therapeutic use of chemical forms of selenium in this fraction (e.g., to prevent or slow tumor progression and/or metastasis).

[000183] Por exemplo, o gene KITLG (ligante c-Kit) codifica o ligante do receptor de tirosina-quinase que é um fator pleiotrópico que atua no útero no desenvolvimento da céula germinal e células neural e hematopoiese; processos que são acreditados refletir um papel na migração celular. Recentemente, variações no gene KITLG têm sido descobertas que são pensadas ser associadas com um risco aumentado de câncer testicular (Kanetsky et al, 2009). Além disso, super expressão do receptor cognato de KITLG, o produto gene oncogene KIT, tem sido documentado no carcinoma de célula renal cromófobo e expressão de ambos KITLG e KIT são conhecidos estarem envolvidos na transformação de fibroblastos NIH3T3 e a tumorigênse de câncer de pulmão de célula pequena (Yamazaki et al, 2003).[000183] For example, the KITLG gene (c-Kit ligand) encodes the tyrosine kinase receptor ligand, which is a pleiotropic factor that acts in the uterus in the development of the germinal cell and neural cells and hematopoiesis; processes that are believed to reflect a role in cell migration. Recently, variations in the KITLG gene have been discovered that are thought to be associated with an increased risk of testicular cancer (Kanetsky et al, 2009). Furthermore, overexpression of the cognate receptor of KITLG, the KIT oncogene gene product, has been documented in chromophobe renal cell carcinoma and expression of both KITLG and KIT are known to be involved in the transformation of NIH3T3 fibroblasts and the tumorigenesis of lung cancer. small cell (Yamazaki et al, 2003).

[000184] Surpreendentemente, foi observado que tecido muscular a partir do paciente administrado a fração pH 4.0 significativamente regulado negativamente o gene KITLG mas seu nível de expressão não foi afetado por outros tratamentos de selênio incluindo SP, o material parente para a fração pH 4.0 (Ver, por exemplo, Figura 8).[000184] Surprisingly, it was observed that muscle tissue from the patient administered the pH 4.0 fraction significantly downregulated the KITLG gene but its expression level was not affected by other selenium treatments including SP, the parent material for the pH 4.0 fraction ( See, for example, Figure 8).

[000185] Metástase é a causa primária de morte na maioria dos cânceres humanos e é um proesso multi-passo em que células a partir da migração do tumor primário através da matriz extracelular, entram na circulação através de vasos sanguíneos recentemente formados (angiogênese tumoral) e disseminam para locais distantes (extravasamento), onde proliferação se inicia novamente.[000185] Metastasis is the primary cause of death in most human cancers and is a multi-step process in which cells from migrating from the primary tumor through the extracellular matrix enter the circulation through newly formed blood vessels (tumor angiogenesis) and spread to distant locations (extravasation), where proliferation begins again.

[000186] Proteína ligadora de Receptor do Fator de Crescimento 2 (Grb2) é uma molécula chave na transdução sinal intracelular. É crítica para progressão do ciclo celular e motilidade baseada em actina e, consequentemente, processos mais complexos tais como morfogênese epitelial, angiogênese e vasculogênese. Essas funções importantes fazem Grb2 um alvo terapêutico para estratégias designadas para prevenir o espalhamento de tumores sólidos através da invasão local e metástase. De fato, muito esforço é correntemente direcionado em descobrir caminhos para bloquear ou antagonizar Grb2 porque ela sente que isto pode reprensentar uma estratégia anti- metastática efetiva (Giubellino, Burke e Bottaro, 2008).[000186] Growth Factor Receptor 2 (Grb2) binding protein is a key molecule in intracellular signal transduction. It is critical for cell cycle progression and actin-based motility and, consequently, more complex processes such as epithelial morphogenesis, angiogenesis and vasculogenesis. These important functions make Grb2 a therapeutic target for strategies designed to prevent the spread of solid tumors through local invasion and metastasis. In fact, much effort is currently directed at discovering ways to block or antagonize Grb2 because it is felt that this may represent an effective anti-metastatic strategy (Giubellino, Burke, and Bottaro, 2008).

[000187] Como mostrado na Figura 9, Grb2 foi significativamente regulado negativamente em pH 4.0 - animais tratados versus controle e outros tratamentos de selênio, incluindo selenito de sódio e o material de selênio parente para pH 4.0; Sel-Plex.[000187] As shown in Figure 9, Grb2 was significantly downregulated at pH 4.0 - treated animals versus control and other selenium treatments, including sodium selenite and the parent selenium material for pH 4.0; Sel-Plex.

[000188] A atividade anti-carcinogênica potencial da fração pH 4.0 não é limitada a regulação negativa de genes associados ao câncer importantes. Por exemplo, reduzindo a expressão de DNAJA3 em células de câncer de mama tem sido observada aumentar sua migração por permitir níveis de Interleucina-8 aumentar (Kim et al, 2005). Isto e outros resultados fortemente sugerem que desafio dos níveis de Tid1 (DNAJA3) em células cancerígenas negativamente regula sua motilidade e habilidade em fazer metástase.[000188] The potential anti-carcinogenic activity of the pH 4.0 fraction is not limited to the negative regulation of important cancer-associated genes. For example, reducing DNAJA3 expression in breast cancer cells has been observed to increase their migration by allowing Interleukin-8 levels to increase (Kim et al, 2005). This and other results strongly suggest that challenging Tid1 (DNAJA3) levels in cancer cells negatively regulates their motility and ability to metastasize.

[000189] DNAJA3 foi robustamente positivamente regulada no tecido muscular em experimentos em resposta ao selênio pH 4.0 (Figura 10), mas permaneceu não responssiva, relativo às condições controles, no tecido muscular a partir de animais recebendo as outras fontes de selênio.[000189] DNAJA3 was robustly upregulated in muscle tissue in experiments in response to selenium pH 4.0 (Figure 10), but remained unresponsive, relative to control conditions, in muscle tissue from animals receiving other sources of selenium.

B. Effects of different selenium treatments on hepatic gene expression profiles of broilers

[000190] Em um esforço para ainda caracterizar os efeitos da expressão gênica diferencial não esperada de SP e fração SGP pH 4.0 e para determinar se a regulação de expressão estendida a outros tecidos, estudos de expressão gênica foram feitos como descrito acima no Exemplo 4(a). Ao invés de tecido muscular de peito, tecido hepático foi coletado e analisado a partir das mesmas galinhas referenciadas no Exemplo 3. Em adição a grupos de tratamento suplementados com SS, Sp e fração SGP pH 4.0, perfis de expressão do gene hepático de galinhas a partir dos grupos de tratamento adicionais (fração SGP pH 1.85 (pH1.85), fração SGP pH 3.0 (pH3), e fração SHP pH 6.0 (pH6) foram também caracterizados e comparados ao grupo de tratamento controle.[000190] In an effort to further characterize the effects of unexpected differential gene expression of SP and SGP pH 4.0 fraction and to determine whether regulation of expression extended to other tissues, gene expression studies were done as described above in Example 4( The). Instead of breast muscle tissue, liver tissue was collected and analyzed from the same chickens referenced in Example 3. In addition to treatment groups supplemented with SS, Sp, and SGP pH 4.0 fraction, hepatic gene expression profiles from chickens to from additional treatment groups (SGP fraction pH 1.85 (pH1.85), SGP fraction pH 3.0 (pH3), and SHP fraction pH 6.0 (pH6) were also characterized and compared to the control treatment group.

[000191] Seguindo o mesmo protocolo experimental referenciado no Exemplo 4 (A), análise dos perfis de expressão de gene hepático a partir de pacientes de cada grupo de tratamento identificaram 1520 genes que foram significativamente mudados por diferentes tratamentos dietéticos diferentes (P<0,01, ANOVA). Uma análise de grupos hierárquicos não supervisionados desses genes é mostrada na Figura 11 e provê evidência adicional que tratamento com diferentes fontes d selênio elicita um grande grau de variação na habilidade de regular a expressão gênica. O mapa de aquecimento da Figura 11 mostra perfis de expressão gênica normalizados em cores que refletem mudanças de expressão comparadas ao valor médio de cada gene; cores branca, preta ou cinza representam diminuição, aumento ou nenhuma mudança no nível de intensidade de expressão, respectivamente. O dendograma em cima do mapa de aquecimento reflete a extensão da similaridade nos perfis de expressão entre tratamentos, enquanto o dendrograma no lado esquerdo representa as diferenças nos padrões de expressão de genes individuais através de todos os tratamentos. Os comprimentos dos dendrogramas mostrados na figura correspondem ao nível de dissimilaridade entre grupos de saíde (um dendrograma curto indica um nível maior de similaridade).[000191] Following the same experimental protocol referenced in Example 4 (A), analysis of liver gene expression profiles from patients in each treatment group identified 1520 genes that were significantly changed by different dietary treatments (P<0. 01, ANOVA). An unsupervised hierarchical cluster analysis of these genes is shown in Figure 11 and provides additional evidence that treatment with different selenium sources elicits a large degree of variation in the ability to regulate gene expression. The heat map in Figure 11 shows normalized gene expression profiles in colors that reflect expression changes compared to the mean value of each gene; white, black or gray colors represent decrease, increase or no change in expression intensity level, respectively. The dendrogram on top of the heat map reflects the extent of similarity in expression profiles between treatments, while the dendrogram on the left side represents differences in expression patterns of individual genes across all treatments. The lengths of the dendrograms shown in the figure correspond to the level of dissimilarity between output groups (a short dendrogram indicates a higher level of similarity).

[000192] As diferenças entre SP e fração SGP pH 4.0, bem como aquelas entre fração SGP pH 3.0 e fra'ão SGP pH 6.0, foram dramáticas, com somente poucos genes sendo comumente regulados pelo tratamento com cada das fontes de selênio. Em geral, os efeitos do tratamento com fração SGP pH 1.85 na expressão gênica cai entre grupos SP e outro tratamento SGP (Ver, Figura 11). Então, em algumas modalidades, a invenção provê que tratamento com (por exemplo, dietas contendo e/ou administração de) SEL-PLEX versus tratamento com (por exemplo, dietas contendo e/ou administração de) frações SGP extraídas a partir de SEL-PLEX, resultam em atividades biológicas diferentes mesmo que diferentes fontes de selênio mostrem efeitos similares em termos de biodisponibilidade de selênio.[000192] The differences between SP and SGP pH 4.0 fraction, as well as those between SGP pH 3.0 fraction and SGP pH 6.0 fraction, were dramatic, with only a few genes being commonly regulated by treatment with each of the selenium sources. In general, the effects of treatment with SGP fraction pH 1.85 on gene expression falls between SP groups and other SGP treatment (See, Figure 11). Thus, in some embodiments, the invention provides that treatment with (e.g., diets containing and/or administration of) SEL-PLEX versus treatment with (e.g., diets containing and/or administration of) SGP fractions extracted from SEL- PLEX, result in different biological activities even though different selenium sources show similar effects in terms of selenium bioavailability.

EXAMPLE 5 Encapsulation in selenoglycoprotein polymersome

[000193] Uma mistura de 1:1 de SGPs precipitada em pH 4.0 e 6.0 (Ver, por exemplo, Exemplos 1 e 2) foram encapsuladas em polimersomas. A concentração da mistura foi 3,054 ppm e continha 79,96% de peso de proteína.[000193] A 1:1 mixture of SGPs precipitated at pH 4.0 and 6.0 (See, for example, Examples 1 and 2) were encapsulated in polymersomes. The concentration of the mixture was 3.054 ppm and contained 79.96% protein by weight.

[000194] A fim de gerar selenoglicoproteínas encapsuladas em polimersomas, a mistura foi dissolvida em tampões aquosos de pH 5.1, 6.2 e 7.4, e a suspensão foi misturada por uma noite em plataforma de agitação. A SGP não dissolvida foi removida por centrifugação. Para fazer polimersomas, copolímero dibloco PEO(2k)- b-PCL(12k) foi dissolvido em um solvente orgânico (por exemplo, cloreto de metileno, tetraidrofurano, ou dimetil sulfóxido) para produzir 1 mM de polímero PEO-b-PCL em solução orgânica. A solução foi então depositada em uma fita de TEFLON áspera (aproximadamente 1''x 1''x 1/16''esquessura) e colocada no fundo de um frasco de vidro, o lado áspero para cima. O solvente foi evaporado sob vácuo em temperatura ambiente por 24-48 horas, resultando em um filme seco de copolímeros pesando 1-10 mg.[000194] In order to generate selenoglycoproteins encapsulated in polymersomes, the mixture was dissolved in aqueous buffers of pH 5.1, 6.2 and 7.4, and the suspension was mixed overnight on a shaking platform. Undissolved SGP was removed by centrifugation. To make polymersomes, PEO(2k)-b-PCL(12k) diblock copolymer was dissolved in an organic solvent (e.g., methylene chloride, tetrahydrofuran, or dimethyl sulfoxide) to produce 1 mM PEO-b-PCL polymer in solution. organic. The solution was then deposited on a rough TEFLON tape (approximately 1''x 1''x 1/16'' thick) and placed at the bottom of a glass vial, rough side up. The solvent was evaporated under vacuum at room temperature for 24-48 hours, resulting in a dry film of copolymers weighing 1-10 mg.

[000195] Esses filmes foram hidratados com 1-3 mL de solução aquosa contendo uma proporção de 1:1 de selenoglicoproteínas em pH 4.0 e pH 6.0, e então sonicadas em um banho sonicador a 20-100 Hz por 1-2 horas. Após sonicação estar completa, frascos foram imediatamente agitados por 1-2 min para formar polimersomas que encapsulam as selenoglicoproteínas no núcleo aquoso de vesículas poliméricas baseadas em PEO-b-PCL. Os polimersomas foram então rapidamente extruídos através de uma membrana de policarbonato do tamanho de poro desejado usando um extrusor LIPOSOFAST para obter um diâmetro médio desejado dos polimersomas, neste caso, variando de 50-300 nm. Polimersomas extrusos foram então injetados em um cassete de diálise para troca de solução contra um tampão iso- osmóstico de oH 7.4 por 24 horas de forma que todas as selenoglicoproteínas não encapsuladas foram removidas.[000195] These films were hydrated with 1-3 mL of aqueous solution containing a 1:1 ratio of selenoglycoproteins at pH 4.0 and pH 6.0, and then sonicated in a sonicator bath at 20-100 Hz for 1-2 hours. After sonication was complete, vials were immediately shaken for 1–2 min to form polymersomes that encapsulate the selenoglycoproteins in the aqueous core of PEO-b-PCL-based polymeric vesicles. The polymersomes were then rapidly extruded through a polycarbonate membrane of the desired pore size using a LIPOSOFAST extruder to obtain a desired average diameter of the polymersomes, in this case ranging from 50-300 nm. Extruded polymersomes were then injected into a dialysis cassette for solution exchange against a 7.4 oH iso-osmostic buffer for 24 hours so that all unencapsulated selenoglycoproteins were removed.

[000196] Uma amostra de selenoglicoproteínas encapsuladas com polimersoma em pH 7.4 foi preparada com uma concentração de selenoglicoproteína de partida de 10 mg/mL e dialisada em tampão PBS iso-osmótico. Foi feita imagem da amostra por crio-TEM em magnificações de 21000x e 52000x para obter identificação visual do encapsulamento de selenoglicoproteína dentro de polimersomas bem sucedido (Ver Figura 13). Crio-TEM permite fazer imagens de espécimens em temperaturas criogênicas em seus estados hidratados nativos, assim prevenindo quaisquer mudanças conformacionais não desejáveis. Geralmente, polimersomas esféricos uniformes de tamanhos de cerca de 100 nm ou levemente menores foram observados na imagem da amostra. Em alguns casos, aproximadamente agregados esféricos de material amorfo foram observados em adição aos polimersomas. Esses agregados podem ser compreendidos de selenoglicoproteína liberada a partir de núcleo polimersoma e que ainda precipita devido a diferença no pH a partir de dentro para fora do polimersoma pelo tempo que são feitas as imagens das amostras.[000196] A sample of polymersome-encapsulated selenoglycoproteins at pH 7.4 was prepared with a starting selenoglycoprotein concentration of 10 mg/mL and dialyzed in iso-osmotic PBS buffer. The sample was imaged by cryo-TEM at magnifications of 21000x and 52000x to obtain visual identification of successful selenoglycoprotein encapsulation within polymersomes (See Figure 13). Cryo-TEM allows you to image specimens at cryogenic temperatures in their native hydrated states, thus preventing any undesirable conformational changes. Generally, uniform spherical polymersomes of sizes of about 100 nm or slightly smaller were observed in the sample image. In some cases, approximately spherical aggregates of amorphous material were observed in addition to the polymersomes. These aggregates can be comprised of selenoglycoprotein released from the polymersome core and which still precipitates due to the difference in pH from the inside to the outside of the polymersome during the time the samples are imaged.

[000197] As selenoglicoproteínas encapsuladas em polimersoma em pH 5.1, 6.2 e 7.4 foram ainda caracterizadas por medida da concentração de selênio (Ver, Tabela 6). Um mL de cada amostra selenoglicoproteína encapsulada em polimersoma foi liofilizado, formando um pó branco precipitado que foi mais tarde pesado e inspecionado sob magnificações de 200x. Quantidades totais de selenoglicoproteínas encapsuladas com polimersoma foram dissolvidas usando ácidos concentrados: ácidos perclórico, nítrico e clorídrico, em uma temperatura entre 100°C a 175°C. As soluções foram diluídas a 50 mL usando água deionizada (DI) e analisadas usando um instrumento e metodologia MILLENIUM EXCALIBUR. Tabela 6. Resultados do encapsulamento [000197] The selenoglycoproteins encapsulated in polymersomes at pH 5.1, 6.2 and 7.4 were further characterized by measuring the selenium concentration (See, Table 6). One mL of each polymersome-encapsulated selenoglycoprotein sample was freeze-dried, forming a precipitated white powder that was later weighed and inspected under 200x magnifications. Total amounts of polymersome-encapsulated selenoglycoproteins were dissolved using concentrated acids: perchloric, nitric and hydrochloric acids, at a temperature between 100°C to 175°C. Solutions were diluted to 50 mL using deionized (DI) water and analyzed using a MILLENIUM EXCALIBUR instrument and methodology. Table 6. Encapsulation results

EXAMPLE 6 Release of selenoglycoproteins from nanocapsules:

[000198] Liberação de selenoglicoproteína (SGP) a partir de formulações de nanocápsulas #1 e 3 a partir da Tabela 6 acima, preparadas com 10 mg/mL de suspensãode SGP e dialisadas em tampões de pH 7.4 e 5.1, respectivamente, foi monitorada por um período de 14 dias a 370 C. Para monitorar a liberação das selenoglicoproteínas a partir da selenoglicoproteína encapsulada em nanocápsula, suspensões dialisadas foram concentradas por centrifugação de membrana (tubos de centrífuga com peso molecular limite de 300 kD foram usados). As suspensões concentradas foram aliquotadas em tampões iso-osmolares (pH de 5.1 ou 7.4) e mantidas com N=2 amostras para cada tempo. Para avaliar a % de liberação de selenoglicoproteína a partir de nanocápsulas, as amostras foram centrifugadas para separar nanocápsulas intactas em cada tempo. Para garantir que nanocápsulas foram efetivamente separadas da amostra de selenoglicoproteína, medidas de espalhamento de luz dinâmica foram feitas em vesículas separadas (retido) e solução livre (filtrado) para medir tamanhos de partículas. Absorbância UV de solução livre foi medida a 280 nm e % de liberação de selenoglicoproteínas foi calculada como (A amostra - A inicial) / (A final - A inicial), onde A inicial é a absorbância no dia 0, e A final é a absorbância no fim do estid quando as amostras foram solubilizadas para causar liberação completa (Ver Figura 12). Por um período de 14 dias, aproximadamente 70% das SGP em pH 5.1 foram liberadas a partir da nanocápsula em estado estável; embora cerca de 50% foi liberada em pH 7.4. A taxa de liberação inicial de SGPs em pH inferior e pensado ser devido a hidrólise catalisada por ácido da membrana da nanocápsula, seguida por difusão estável de selenoglicoproteínas através da membrana de nanocápsulas. Esses perfis de liberação são notavelmente similares aos da doxorubicina, um terapêutico de câncer, encapsulado dentro de polimersomas baseados em PEO-b-OCL (Ver, por exemplo, Ghoroghchian et al. Macromolecules, 2006, 39 (5), 16731675). Esses dados confirmam que encapsulamento de selenoglicoproteínas mesmo em uma concentração de carregamento relativamente alta não afeta o padrão de liberação em uma forma negativa.[000198] Release of selenoglycoprotein (SGP) from nanocapsule formulations #1 and 3 from Table 6 above, prepared with 10 mg/mL SGP suspension and dialyzed in buffers of pH 7.4 and 5.1, respectively, was monitored by a period of 14 days at 370 C. To monitor the release of selenoglycoproteins from the nanocapsule-encapsulated selenoglycoprotein, dialyzed suspensions were concentrated by membrane centrifugation (centrifuge tubes with a molecular weight limit of 300 kD were used). The concentrated suspensions were aliquoted into iso-osmolar buffers (pH of 5.1 or 7.4) and maintained with N=2 samples for each time. To evaluate the % release of selenoglycoprotein from nanocapsules, samples were centrifuged to separate intact nanocapsules at each time point. To ensure that nanocapsules were effectively separated from the selenoglycoprotein sample, dynamic light scattering measurements were made on separate vesicles (retained) and free solution (filtrate) to measure particle sizes. UV absorbance of free solution was measured at 280 nm and % release of selenoglycoproteins was calculated as (A sample - Initial A) / (Final A - Initial A), where initial A is the absorbance on day 0, and final A is the absorbance at the end of the estid when samples were solubilized to cause complete release (See Figure 12). Over a period of 14 days, approximately 70% of the SGP at pH 5.1 were released from the nanocapsule at steady state; although about 50% was released at pH 7.4. The initial release rate of SGPs at lower pH is thought to be due to acid-catalyzed hydrolysis of the nanocapsule membrane, followed by steady diffusion of selenoglycoproteins across the nanocapsule membrane. These release profiles are remarkably similar to those of doxorubicin, a cancer therapeutic, encapsulated within PEO-b-OCL-based polymersomes (See, for example, Ghoroghchian et al. Macromolecules, 2006, 39 (5), 16731675). These data confirm that encapsulation of selenoglycoproteins even at a relatively high loading concentration does not affect the release pattern in a negative way.

EXAMPLE 7 Preparation of selenoglycoprotein (SGP) slow-release polymers

[000199] Síntese de polímero A. Uma mistura 1:1 de SGPs precipitada a pH 4.0 e 6.0 (Ver, Exemplo 5) foi usada na preparação de polímeros de liberação lenta SGP. 150 mg de SGP foram dissolvidas em 2 mL de ácido metacrílico e 1 mL de água DI. Algum aquecimento foi aplicado para acelerar a dissolução. Uma amostra de 0,5 mL de solução foi colocada em um frasco de 5 mL contendo 10 mg de AIBN, agitada por 1 min e o ar a partir do tubo foi removido a vácuo e substituído por nitrogênio. Os conteúdos do tubo foram polimerizados por colocar o tubo em um forno de laboratório aquecido a 70oC por 2 h. O tubo foi quebrado e o polímero foi cortado em seções finas e seco em alto vácuo.[000199] Polymer synthesis A. A 1:1 mixture of SGPs precipitated at pH 4.0 and 6.0 (See, Example 5) was used in the preparation of SGP slow release polymers. 150 mg of SGP was dissolved in 2 mL of methacrylic acid and 1 mL of DI water. Some heating was applied to accelerate dissolution. A 0.5 mL sample of solution was placed in a 5 mL vial containing 10 mg of AIBN, stirred for 1 min, and the air from the tube was removed under vacuum and replaced with nitrogen. The contents of the tube were polymerized by placing the tube in a laboratory oven heated to 70oC for 2 h. The tube was broken and the polymer was cut into thin sections and dried in a high vacuum.

[000200] Síntese de polímero B. Uma mistura de: 0,064 mL de ácido metacrílico, 0,091 mL de 2-hidroxietil-metacrilato, 1,427 mL de etileno glicol dimetacrilato e 10 mg de AIBN foi colocada em um frasco de 5 mL e agitada com barra agitadora magnética, seguido por 75 mg de SGP dissolvido em uma mistura de 1,5 mL de ácido acético e 0,75 ml de água DI. O ar no frasco foi substituído com nitrogênio e o frasco foi selado e colocado em um banho de óleo a 70oC por quatro horas. O frasco foi quebrado e o polímero monolito foi triturado em pó em um gral de porcelana. Os voláteis foram removidos a partir do polímero sob alto vácuo.[000200] Synthesis of polymer B. A mixture of: 0.064 mL of methacrylic acid, 0.091 mL of 2-hydroxyethyl methacrylate, 1.427 mL of ethylene glycol dimethacrylate and 10 mg of AIBN was placed in a 5 mL flask and stirred with a bar magnetic stirrer, followed by 75 mg of SGP dissolved in a mixture of 1.5 mL of acetic acid and 0.75 mL of DI water. The air in the flask was replaced with nitrogen and the flask was sealed and placed in an oil bath at 70oC for four hours. The flask was broken and the monolith polymer was ground into powder in a porcelain bowl. Volatiles were removed from the polymer under high vacuum.

[000201] Tempo de liberação de SGP. O mesmo protocolo de liberação controlada de SGP foi aplicado a cada dos polímeros (A e B). 333,7 ± 0,1 mg de polímero foi substituído em um tubo de centrífuga de 15 mL contendo 5 mL de tampão citrato (pH 5.0) e o tubo foi gentilmente agitado por quatro horas. Os tubos foram então centrifugados e sobrenadante coletado enquando o polímero concentrado foi lavado com dois volumes de 8 mL de água DI e liofilizados. ~21 mg foram tirados da amostra liofilizada para análise de Se. As extrações foram repetidas duas vezes mais. Os pesos das amostras foram gravados. Todas as amostras perderam peso durante esses tratamentos (Ver Tabelas 8 e 9). Tabela 8 Tabela 9 [000201] SGP release time. The same SGP controlled release protocol was applied to each of the polymers (A and B). 333.7 ± 0.1 mg of polymer was placed in a 15 mL centrifuge tube containing 5 mL of citrate buffer (pH 5.0) and the tube was gently shaken for four hours. The tubes were then centrifuged and supernatant collected while the concentrated polymer was washed with two 8 mL volumes of DI water and lyophilized. ~21 mg was taken from the freeze-dried sample for Se analysis. Extractions were repeated twice more. Sample weights were recorded. All samples lost weight during these treatments (See Tables 8 and 9). Table 8 Table 9

[000202] A concentração estimada da SGP liberada, a absorbância UV a 280 nm dos sobrenadantes foram medidas e comparadas com a curva de calibração SGP preparada no mesmo tampão (Ver Tabela 10). Tabela 10 [000202] The estimated concentration of the released SGP, the UV absorbance at 280 nm of the supernatants were measured and compared with the SGP calibration curve prepared in the same buffer (See Table 10). Table 10

[000203] A espectroscopia de absorção atômica (usando método e instrumento EXCALIBUR) foi aplicada para medir a concentração do resíduo Se no polímero de liberação lenta (Ver Tabela 11). Tabela 11 [000203] Atomic absorption spectroscopy (using EXCALIBUR method and instrument) was applied to measure the concentration of Se residue in the slow-release polymer (See Table 11). Table 11

[000204] De acordo com as medidas da concentração de Se nos resíduos concentrados, 36,08% de SGP foram liberados a partir do Polímero A, após tripla lavagem de 4 h (12 h totais). Durante o mesmo tratamento, 30,11% de SGP foram liberados a partir do Polímero B.[000204] According to measurements of the Se concentration in the concentrated residues, 36.08% of SGP was released from Polymer A, after triple washing for 4 hours (12 hours total). During the same treatment, 30.11% of SGP was released from Polymer B.

EXAMPLE 8 Alkaline extraction of intracellular yeast proteins

[000205] 200,0 g de SEL-PLEX foram misturadas com 1 L de 0,1 M de hidróxido de sódio em pH 11.5 e aquecidos a 60oC por 8 horas. A mistura foi então centrifugada a 14.000x g/10 min/10oC formando um sobrenadante e um concentrado. O concentrado foi lavado duas vezes cm 400 mL de água DI e liofilizado, resultando em um peso de 54,5 g (Ver Tabela 12). O sobrenadante em pH 11.5 e lavados que foram usados foram misturados juntos. O pH foi reduzido para 6.6 por neutralização usando ácido clorídrico concentrado. Pequenos traços de um precipitado e um sobrenadante claro foram formados durante a neutralização. O precipitado foi separado por centrifugação e o sobrenadante foi concentrado usando dispositivos de ultrafiltração AMICON 10 kDa. O concentrado foi lavado com duas porções de 100 mL de água DI e liofilizado, produzindo 64,0 g de sólido marrom. Os filtrados remanescentes foram combinados (volume total 2 l) e analisados para concentração de selênio. O precipitado separado foi analisado para Selênio e nitrogênio/proteína (Ver, Tabela 12). Tabela 12: Extração alcalina [000205] 200.0 g of SEL-PLEX were mixed with 1 L of 0.1 M sodium hydroxide at pH 11.5 and heated at 60oC for 8 hours. The mixture was then centrifuged at 14,000xg/10 min/10oC, forming a supernatant and a concentrate. The concentrate was washed twice in 400 mL of DI water and lyophilized, resulting in a weight of 54.5 g (See Table 12). The supernatant at pH 11.5 and washings that were used were mixed together. The pH was reduced to 6.6 by neutralization using concentrated hydrochloric acid. Small traces of a precipitate and a clear supernatant were formed during neutralization. The precipitate was separated by centrifugation and the supernatant was concentrated using AMICON 10 kDa ultrafiltration devices. The concentrate was washed with two 100 mL portions of DI water and lyophilized, yielding 64.0 g of brown solid. The remaining filtrates were combined (total volume 2 l) and analyzed for selenium concentration. The separated precipitate was analyzed for Selenium and nitrogen/protein (See, Table 12). Table 12: Alkaline extraction

[000206] Análise do filtrado indicou uma perda de 40,7% de massa e 48,7% de selênio que não foi recuperado por ultra-filtração através de membrana de 10 kDa. Eliminações e-nucleofílicas/térmicas de MeSe-1 e HSe-1 e formas oxidadas desses grupos funcionais a partir de peptídeos contendo selênio resultaram na degradação da estrutura química original de SGP e perda de massa e selênio no filtrado. O processo de produção comumente praticado na técnica gera aumento de volume e concentração aumentada de selênio no filtrado que resulta em uma corrente de descarte que pode ser danosa ou ter efeitos deletérios (por exemplo, danosa ao ambiente). Em contraste, os métodos da presente invenção provêem extração acídica e fracionamento dependente de pH de SGPs a partir de levedura enriquecida com selênio (por exemplo, em um processo de larga escala comercial). Sob condições de temperatura variante, foi encontrado que técnicas tradicionais/convencionais usando hidrólise alcalina não funcionam na extração de selenoglicoproteínas a partir de células de levedura. Como aqui descrito, extração de SGPs a partir de células de levedura usando extração acídica foi descoberta ser bem sucedida.[000206] Analysis of the filtrate indicated a loss of 40.7% of mass and 48.7% of selenium that was not recovered by ultrafiltration through a 10 kDa membrane. e-Nucleophilic/thermal eliminations of MeSe-1 and HSe-1 and oxidized forms of these functional groups from selenium-containing peptides resulted in degradation of the original chemical structure of SGP and loss of mass and selenium in the filtrate. The production process commonly practiced in the art generates an increase in volume and an increased concentration of selenium in the filtrate, which results in a waste stream that can be harmful or have deleterious effects (for example, harmful to the environment). In contrast, the methods of the present invention provide acidic extraction and pH-dependent fractionation of SGPs from selenium-enriched yeast (e.g., in a large-scale commercial process). Under varying temperature conditions, it has been found that traditional/conventional techniques using alkaline hydrolysis do not work in extracting selenoglycoproteins from yeast cells. As described herein, extraction of SGPs from yeast cells using acidic extraction has been found to be successful.

References

[000207] As seguintes referências são aqui incorporadas em suas totalidades, como se complemente reveladas aqui. 1. Demirci A., Pometto III A. L. ‘Enhanced Organically Bound Selenium Yeast Production By Fed-Batch Fermentation’ J. Agric. Food Chem. 47, 2496-2500 (1999). 2. Demirci A., Pometto III A. L. ‘Production of Organically Bound Selenium Yeast by Continuous Fermentation’ J. Agric. Food Chem. 47, 2491-2495 (1999). 3. Ouerdane L., Mester Z. ‘Production and Characterization of Fully Selenomethionine-Labelled Saccharomyces cerevisiae’ J.Agric.Food Chem. 56,11792-11799, (2008). 4. Korhola.M.; Vainio, A.; Edaelman, K. ‘Selenium yeast’ Ann. Clin. Res. 18, 65-68, (1986). 5. Surai P.F. Natural Antooxidants in Avian Nutrition and Reproduction’ Nottingham University Press 2002, 234-236 (2002). 6. Kelly, M. P.; Power R. F. ‘ Fractionation and identification of the major selenium compounds in selenized yeast’ J. Dairy Sci. 78, 237-242 (1995). 7. 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Claims

1. Composition CHARACTERIZED by the fact that it comprises soluble selenoglycoproteins and a vehicle selected from the group consisting of a polymersome, a controlled-release polymer, a nanocapsule, and a molecularly imprinted polymer, in which the soluble selenoglycoproteins contain two or more fractions dependent on pH of selenoglycoproteins, wherein soluble selenoglycoproteins are obtained by acid extraction of soluble selenoglycoproteins from selenium-enriched yeast and subsequently exposing the selenium-enriched yeast to acidic conditions via sequential pH-dependent precipitation at two or more different values of pH of soluble selenoglycoproteins, wherein the soluble selenoglycoproteins are generated by a method comprising: a) providing yeast enriched with selenium; b) exposing the selenium-enriched yeast to acidic conditions followed by centrifugation to generate i) a concentrate comprising acid insoluble material; and ii) a liquid phase comprising yeast extract enriched with selenium soluble in acidic conditions; c) precipitate selenoglycoproteins from the liquid phase comprising yeast extract enriched with soluble selenium under acidic conditions by raising the pH of the liquid phase by 0.1; 0.2; 0.5; 1.0; 2.0; 3.0; 4.0; 5.0 or 6.0; It is; and d) separate the precipitated selenoglycoproteins from the liquid phase.

2. Composition according to claim 1, CHARACTERIZED by the fact that soluble selenoglycoproteins are soluble at pH below 1.5; two; 3; 4; 5 or 6.

3. Composition according to claim 2, CHARACTERIZED by the fact that soluble selenoglycoproteins are soluble at pH below 4; 5 or 6.

4. Composition, according to claim 1, CHARACTERIZED by the fact that the vehicle is a controlled release polymer.

5. Composition, according to claim 4, CHARACTERIZED by the fact that the average diameter of a polymersome encapsulating selenoglycoprotein is 50-300 nm.

6. Method for preparing a composition as defined in claim 1, CHARACTERIZED by the fact that it comprises: a) providing yeast enriched with selenium; b) exposing the selenium-enriched yeast to acidic conditions followed by centrifugation to generate i) a concentrate comprising acid insoluble material; and ii) a liquid phase comprising yeast extract enriched with selenium soluble in acidic conditions; c) precipitate selenoglycoproteins from the liquid phase comprising yeast extract enriched with soluble selenium under acidic conditions by raising the pH of the liquid phase by 0.1; 0.2; 0.5; 1.0; 2.0; 3.0; 4.0; 5.0 or 6.0; and d) separating the selenoglycoproteins precipitated from the liquid phase.

7. Method according to claim 6, CHARACTERIZED by the fact that acidic conditions are obtained using acidic buffer or the addition of an acid, wherein the acid is hydrochloric acid.

8. Method, according to claim 6, CHARACTERIZED by the fact that exposing the selenium-enriched yeast to acidic conditions comprises exposing the selenium-enriched yeast to a pH level of 1.5.

9. Method, according to claim 6, CHARACTERIZED by the fact that selenium-enriched yeasts are exposed to acidic conditions for between 1 and 24 hours.

10. Method, according to claim 6, CHARACTERIZED by the fact that the exposure of selenium-enriched yeast to acidic conditions occurs at a temperature higher than room temperature, where the temperature is between 50 oC and 100 °C.

11. Method according to claim 6, CHARACTERIZED by the fact that selenoglycoproteins are precipitated from the liquid phase in a variety of pH conditions to generate multiple pH-dependent fractions of soluble selenoglycoproteins in which the multiple pH-dependent fractions of soluble selenoglycoproteins are generated at pH values of 1.85; 3.0; 4.0 and 6.0.

12. Method, according to claim 6, CHARACTERIZED by the fact that the separation of the precipitated selenoglycoproteins from the liquid phase comprises centrifugation to form a concentrate of the precipitated selenoglycoproteins followed by removal of the liquid phase from the precipitated selenoglycoproteins.

13. Method, according to claim 6, CHARACTERIZED by the fact that the selenium-enriched yeasts are non-viable selenium-enriched dry yeasts containing 2% or less inorganic selenium.

14. Method according to claim 6, CHARACTERIZED by the fact that soluble selenoglycoproteins are soluble at pH below 1.5; two; 3; 4; 5 or 6.

15. Composition, according to claim 1, CHARACTERIZED by the fact that the vehicle is a polymersome used to encapsulate selenoglycoprotein, wherein the polymersome comprises poly(ethylene oxide) (PEO) block copolymer.

16. Composition, according to claim 1, CHARACTERIZED by the fact that the polymersome comprises diblock copolymer poly(ε-caprolactone) (PCL), or in which the polymersome comprises diblock copolymers based on poly(ethylene oxide)-block- poly(s-caprolactone) (PEO-b-PCL).

17. Composition, according to claim 1, CHARACTERIZED by the fact that the polymersome is derived from the coupling of poly(lactic acid), poly(glycolide), poly(lactic-coglycolic acid) or poly(3-hydroxybutyrate) with PEO .