BR102022002377A2 - Composição cosmética ou dermofarmacêutica, peptídeo e uso na redução e eliminação de rugas e linhas de expressão - Google Patents

Abstract

A presente invenção trata-se de um peptídeo (Giovian (SEQ ID Nº1)) anti rugas e de linhas de expressão, de uma composição cosmética ou dermofarmacêutica contendo esse peptídeo como princípio ativo e o uso dessa composição no tratamento de rugas e linhas de expressão. A composição atua via relaxamento muscular e redução da atividade contrátil de células dérmicas. Por ser uma composição cosmética, de aplicação tópica não invasiva, pode ser usada no dia a dia sem a necessidade de um especialista na área de estética, além de não ser onerosa como as técnicas atualmente conhecidas para tratamento de rugas e linhas de expressão.

Description

COMPOSIÇÃO COSMÉTICA OU DERMOFARMACÊUTICA, PEPTÍDEO E USO NA REDUÇÃO E ELIMINAÇÃO DE RUGAS E LINHAS DE EXPRESSÃO

[001] A presente invenção trata-se de um peptídeo (Giovian (SEQ ID Nº1)) antirrugas e atenuador de linhas de expressão, de uma composição cosmética ou dermofarmacêutica contendo esse peptídeo como princípio ativo e o uso dessa composição no tratamento de rugas e na atenuação de linhas de expressão. A composição atua via relaxamento muscular e na redução da atividade contrátil de células dérmicas. Por ser uma composição cosmética, de aplicação tópica não invasiva, pode ser usada no dia a dia sem a necessidade de um especialista na área de estética, além de não ser onerosa como as técnicas atualmente conhecidas para tratamento de rugas e linhas de expressão.

[002] Com o avançar da idade perde-se a elasticidade, por uma redução da constituição da matriz extracelular da pele, representado por uma redução de colágeno e fibras elásticas da pele. Estas alterações podem ser acompanhadas pelo aumento da atividade contrátil de células da pele, que em conjunto, promovem algumas alterações estéticas compatíveis com o envelhecimento cutâneo, marcadamente representados pelo aparecimento de ruga e linhas de expressão.

[003] Apesar de estar relacionado ao envelhecimento, o surgimento das rugas pode ser intensificado por alguns hábitos prejudiciais à saúde, como tabagismo, má-alimentação, exposição excessiva ao sol sem uso de protetor solar, redução na ingestão de água, períodos de sono insuficientes, entre outros. A hereditariedade também é um aspecto que pode influenciar a tendência a desenvolver rugas.

[004] O tratamento antirrugas pode ser iniciado à partir dos 25 anos, com cremes e cuidados diários, enquanto que os tratamentos estéticos podem ser iniciados a partir dos 30-35 anos quando nota-se que a pele está mais flácida.

[005] As opções de tratamentos estéticos têm aumentado cada vez mais, envolvendo diferentes tratamentos antirrugas e para a atenuação de linhas de expressão. No caso das linhas de expressão e das rugas mais finas pode-se citar os cremes antirrugas ou anti-idade, as técnicas de terapia manual que mobilizam os músculos faciais, a radiofrequência, o microagulhamento, o uso da toxina botulínica (Botox), que tem por função o bloqueio da atividade contrátil das células dérmicas.

[006] Já para o tratamento de rugas mais profundas, que se mantém mesmo esticando a pele, os tratamentos mais aplicados são o Peeling com ácidos, Laser HeNe, preenchimento com ácido hialurônico, plasma rico em plaquetas e até mesmo a realização de cirurgia plástica, como lifting facial.

[007] No entanto, muitos desses tratamentos estéticos não são acessíveis a grande parte da população pelo fato de serem onerosos e pela dificuldade de adesão devido à alta demanda cotidiana. Além disso, alguns deles estão restritos a alguns grupos de pessoas.

[008] A Radiofrequência, por exemplo, não pode ser aplicada em pessoas com sinais de infecção ou inflamação na área a ser tratada; não é recomendada para mulheres grávidas, pessoas que possuem hipertensão ou alterações relacionadas com o aumento da produção de colágeno, como a queloide, por exemplo (VIEIRA, Giovanna de Simone K. Importância da radiofrequência em tratamentos estéticos: revisão da literatura. Trabalho de especialização, 2016. Pontifícia Universidade Católica de Goiás - Departamento de Fisioterapia) Além disso, é uma técnica que pode colocar em risco o paciente, pois o mau uso do equipamento pode causar queimaduras na pele.

[009] O peeling de diamante não é recomendado para quem possui a pele muito sensível, inflamada ou com acne de graus II, III ou IV. Nesses casos é preciso esperar até que a pele esteja cicatrizada e que o dermatologista autorize o procedimento para evitar lesões (disponível em https://www.peleclinicadermatologia.com.br/blog/estetica/peeling-de-diamantes/ acesso em 25/01/2022).

[0010] O peeling químico apresenta resultados mais satisfatórios apenas em peles mais claras. Além disso, os cuidados pós peeling que devem ser bem

[0011] rigorosos (FIGUEIREDO, Vania et al. Chemical peels: review and practical applications. Surg Cosmet Dermatol. Vol.5. 1.ed; 58-68, 2013; TRUCHUELO, M.; CERDÁ, P.; FERNANDEZ L. F. Peeling químico, una herramienta útil en la consulta. Academia Española de Dermatología y Venereología. Vol.108. 4.ed; 315-322, 2016).

[0012] Atualmente o uso da toxina botulínica- Botox- é recorrente no tratamento das rugas, tanto de expressão quanto de idade. O Botox atua bloqueando a produção ou a liberação de acetilcolina nas sinapses e junções neuromusculares. Para o músculo esquelético se contrair, ocorre a liberação de acetilcolina pelos nervos. A acetilcolina se liga aos seus receptores no músculo, fazendo suas células se contraírem. Sendo assim, o Botox impede a liberação de acetilcolina pelos nervos, fazendo que o músculo não se contraia mais, ou seja, deixando-o relaxado.

[0013] No entanto, o uso de Botox pode trazer consigo alguns efeitos adversos e complicações decorrentes da injeção ou do próprio produto.

[0014] Dentre as complicações podemos citar ptose palpebral, que pode ser causada por diluições muito altas da toxina, injeções muito próximas da borda orbital, massagens ou intensa manipulação da área depois da aplicação e pela maior difusão das preparações da toxina. Pode ocorrer também dificuldade de oclusão das pálpebras (lagoftalmo), no tratamento de rugas periorbitárias; ptose superciliar e a diminuição significativa da expressividade do terço superior da face; outro efeito indesejado é a ptose lateral do supercílio (ZAGUI, R.M.B.; MATAYOSHI, S.; MOURA, F.C. Efeitos adversos associados à aplicação de toxina botulínica na face: revisão sistemática com meta-análise. Arq Bras Oftalmol. v.71, n.6, p. 894-901, 2008). Podem também surgir pontos assimétricos na face; como ptose do lábio superior, além da dificuldade em movimentar o lábio inferior causando prejuízos à mordedura e fala (MAIO, Maurício. Tratato de Medicina Estética. 2.ed, v.2, São Paulo: Roca, 2011.).

[0015] Deve-se levar em conta ainda que a eficácia do Botox é de 3 a 6 meses apenas, após esse período, as injeções deverão ser repetidas para que o efeito seja mantido, correndo o risco do aumento de efeitos adversos.

[0016] Adicionalmente, qualquer tratamento estético assume um risco, onde então o profissional atuante na dermatologia deve ter pleno conhecimento anatômico, muscular e subcutâneo da face. (SANTOS, Thiago José. Aplicação da toxina Botulínica em Dermatologia e estética e suas complicações: Revisão da Literatura. Trabalho de obtenção de título de pós-graduação em Dermatologia – Núcleo Alfenas, 2013).

[0017] Portanto, a presente invenção consiste numa opção de tratamento de rugas através de uma composição cosmética ou dermofarmacêutica simples, de aplicação tópica não invasiva, preferencialmente na pele do rosto, e que pode ser utilizada no dia a dia sem a presença de um profissional, sendo eficiente tanto no tratamento de rugas mais finas, como daquelas mais profundas. A composição da presente invenção também age reduzindo a contratilidade de células dérmicas de forma não invasiva. Vantajosamente o princípio ativo, o peptídeo (denominado GIOVIAN), pode ser absorvido pela pele, sendo assim, a composição pode apresentar-se na forma de creme, sérum ou outra forma farmacêutica de aplicação tópica na pele, sendo usada facilmente no dia a dia, poupando o indivíduo de correr riscos com técnicas estéticas. Além de ser um tratamento dermo facial simples, menos oneroso e que poderá conferir maior adesão do indivíduo quando comparado aos métodos citados.

[0018] Em buscas realizadas em bancos de patentes foram encontrados documentos que descrevem composições antirugas compreendendo peptídeos, como por exemplo o documento WO2017183942A2 que descreve uma composição contendo peptídeo que tem eficácia em aumentar a produção de colágeno melhorando as rugas e prevenindo a idade. O documento KR20170050327A descreve uma composição cosmética anti-idade que compreende peptídeo queratina como composto ativo. O documento EP3904369A1 descreve um novo peptídeo que tem atividade de prevenir os danos causados à pele por poluentes, aliviando as rugas e com atividade antienvelhecimento. O peptídeo previne o influxo dos poluentes na pele podendo prevenir e tratar câncer, doenças de pele e de pulmão. O documento KR20200101765A refere-se a um peptídeo com atividade anti-envelhecimento da pele e uma composição contendo o peptídeo, que exibe atividade fisiológica, tal como inibição da degradação do colágeno e, portanto, pode ser útil para redução de rugas, regeneração da pele, melhoria da elasticidade da pele, inibição do envelhecimento da pele, regeneração de feridas e semelhantes. O documento WO2013133482A1 refere-se a um método de extração de veneno de vespa mandarina para a produção de uma composição cosmética funcional. O documento CN101352402A descreve um creme de massagem de dupla nutrição rejuvenescedor contendo peptídeo de abelha, bem como o método para produzir o mesmo. O Documento US2009111731 descreve novos agentes de aplicação tópica contra rugas mímicas e relacionadas à idade.

[0019] No entanto, a composição bem como o peptídeo apresentado na presente invenção apresenta sequência de aminoácidos diferenciada daqueles encontrados no estado da técnica, de forma a configurar uma composição inédita. A composição da presente invenção atua através da inibição da sinápse neuromuscular, da contração da musculatura, resultando, dessa forma, na diminuição das rugas e na atenuação das linhas de expressão.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0020] Figura 1- Porcentagem de viabilidade celular para tratamento com a amostra Giovian (SEQ ID Nº1).

[0021] Figura 2- Imagens representativas de cada grupo após o tratamento. O controle negativo, sem a presença de células, não demonstrou redução do volume, ou seja, não há contratilidade celular. As imagens representam um disco de colágeno contendo uma população de células dérmicas com atividade contrátil. O experimento consiste na avaliação da atividade contrátil, pela mensuração da alteração do volume do disco de colágeno.

[0022] Figura 3- Efeito da curva de concentração do peptídeo no relaxamento celular.

[0023] Figura 4- Avaliação da Apreciabilidade Cosmética nos testes clínicos.

[0024] Figura 5- Avaliação da Eficácia Clínica Subjetiva após 30 +/- 2 dias.

[0025] Figura 6- Percepção após período de uso da composição.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0026] A presente invenção trata-se de composição cosmética ou dermofarmacêutica contendo o peptídeo (Giovian - SEQ ID Nº1)) e seu uso na redução e eliminação de rugas e linhas de expressão.

[0027] O peptídeo da presente invenção (SEQ ID Nº1) apresenta uma massa teórica de 2713.20 (Grau de pureza >95%) e possui a seguinte sequência peptídica: H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Thr-Pro-Phe-Arg-Lys-Ile-Phe-Trp-Leu-LysLeu-Gly-Lys-Leu-Ile-Asp-Ala-Leu-NH2. RPPGFTPFRKIFWLKLGKLIDAL

[0028] Ainda, pode se considerar, para a presente invenção, sequências em que o aminoácido Isoleucina é substituído pelo aminoácido de mesma propriedade química Leucina e vice-versa.

[0029] A formulação contendo o peptídeo consiste de água, ácido hialurônico 0,2% a 1%, peptídeo Giovian (SEQ ID Nº1) 0,0002% a 0,005% e/ou peptídeos obtidos pela substituição dos aminoácidos Isoleucina por Leucina na estrutura de SEQID Nº1; Tanino de acácia negra 0,01% a 0,25%, Usotiazolinona 0,02% a 0,5%.

[0030] Foram realizados estudos de citotoxicidade in vitro, considerando sistemas de culturas celulares dermatológicas eucarióticas; bem como capacidade de contração de miofibroblastos em sistemas de culturas celulares em discos de colágeno para a verificação da atividade Botox-like do Giovian (SEQ ID Nº1). Com relação aos ensaios clínicos, foram realizados ensaios com indivíduos voluntários (n=36, CEP/Plataforma Brasil número 5.121.752) com o objetivo de avaliar o perfil de segurança e eficácia do Giovian (SEQ ID Nº1). Além disso, uma análise de percepção de funcionalidade do Giovian (SEQ ID Nº1) também foi analisada nos ensaios clínicos realizados.

[0031] A tecnologia poderá ser melhor compreendida a partir dos exemplos, não limitantes, que seguem.

EXEMPLO 1- ENSAIOS BIOLÓGICOS IN VITRO UTILIZANDO SISTEMAS DE CÉLULAS DÉRMICAS EUCARIÓTICAS EM CULTURA DE CÉLULAS 1.1. Estudo in vitro de citotoxicidade por vermelho neutro Objetivo:

[0032] Avaliar o potencial citotóxico in vitro do peptídeo Giovian (SEQ ID Nº1) em cultura de células Balb/c 3T3 clone 31.

Metodologia: Cultura de Células:

[0033] Neste estudo foram utilizadas células Balb.c 3T3 clone 31, obtidas do fornecedor Banco de Células do Rio de Janeiro, lote 001242, mantidas em cultivo com DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium) com adição de suplementos, em estufa a 37°C e 5% de CO2 e manipuladas dentro da capela de fluxo laminar. Na passagem 04 após descongelamento, as células foram distribuídas em placas de 96 poços na mantidas em cultivo nas mesmas condições descritas.
Preparo da amostra Giovian (SEQ ID Nº1):

• ● Condições de preparo da amostra na solução de partida: amostra foi diluída a 1 mg/mL em meio e cultivo celular;
• ● Preparo das concentrações: a primeira concentração testada foi a 1 mg/mL e as concentrações seguintes foram diluídas com 10% a partir da concentração anterior em meio de cultivo celular suplementado;
• ● Após a primeira avalição, foi realizado segundo estudo com as seguintes concentrações: 0,1, 0,09, 0,075, 0,06, 0,05, 0,0375, 0,025 e 0,01 mg/mL;
• ● Aspecto da amostra solubilizada: totalmente solubilizada.
• ● Preparo dos grupos controles: Grupo controle: meio de cultivo celular suplementado; Grupo controle positivo: lauril sulfato de sódio diluído em meio de cultivo celular suplementado.
• ● Incubação e avaliação da viabilidade celular. As soluções contendo os grupos controle, controle positivo e amostra foram aplicadas na cultura de células, 100 µL por poço em quadruplicata para cada grupo, seguindo-se uma incubação em estufa a 37°C e 5% de CO2 por 24 horas. Após lavagem, foi analisada a viabilidade celular com o indicador vermelho neutro, 100 µL por poço. Após incubação, a reação foi revelada e absorbância foi determinada a 540nm.

Resultados:

[0034] Os resultados foram avaliados com auxílio do software Microsoft Excell. O grupo controle foi normalizado a 100% e o percentual viabilidade celular na amostra e no controle positivo foi calculado em relação ao controle. Amostras são consideradas citotóxicas quando apresentam 30% ou mais de redução de viabilidade celular.

[0035] De acordo com os resultados obtidos (Figura 1), é possível afirmar que a amostra de Giovian (SEQ ID Nº1) não apresentou efeito citotóxico nas concentrações inferiores a 0,0375 mg/ml.

1.2. Estudo in vitro de efeito botox-like – contratilidade celular in vitro Objetivo:

[0036] Avaliar o potencial da amostra em reduzir a contratilidade de células utilizando células de mioblastos.

Metodologia: Cultura de Células:

[0037] Neste estudo foram utilizadas cultura de células de mioblastos, mantidas em cultivo com DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium) com adição de suplementos, em estufa a 37°C e 5% de CO2 e manipuladas dentro da capela de fluxo laminar. Para estimular a contração destas células, elas foram embebidas em matriz tridimensional de colágeno. Após a polimerização da matriz embebida com os mioblastos, foi adicionado o meio de cultura de acordo com os grupos experimentais. Para o grupo controle negativo, foi confeccionado matriz tridimensional sem a presença das células. Todos os grupos foram realizados em triplicata.
Preparo da amostra Giovian (SEQ ID Nº1):

• ✓ Condições de preparo da amostra na solução de partida: 1 mg/ml em meio de cultura; Concentrações avaliadas: 0,05; 0,025 e 0,01 mg/ml;
• ✓ Grupo controle: meio de cultura; Grupo controle negativo: ausência de células no gel de colágeno;
• ✓ Incubação e avaliação da contratilidade. Após a adição do meio de cultura no grupo controle e meio de cultura contendo a amostra Giovian (SEQ ID Nº1), os géis foram mantidos em estufa por 72 horas. Ao final do tempo, cada matriz foi medida para cálculo final do volume bem como realizada fotografias de cada matriz avaliada.

Resultados:

[0038] Os resultados foram avaliados com auxílio do software Graphpad Prism 5. Os grupos foram comparados e analisados estatisticamente pelo teste OneWay Anova seguido pelo teste de Bonferroni e estabelecido como diferença estatística quando p foi menor que 0,05.

[0039] Na figura 2 Pode-se observar o aspecto macroscópico dos discos de colágeno contento os miofibroblastos tratados com diferentes concentrações do Giovian (SEQ ID Nº1). Pode-se observar o padrão de dimensão circunferencial diferencial em cada grupo experimental. O controle negativo que não apresenta células não demonstrou redução do volume, ou seja, não há contratilidade celular.

[0040] Quanto maior as doses de Giovian (SEQ ID Nº1) maiores são os alos, o que demonstra o o aumento do relaxamento celular, ou seja, as células reduzem a contração, promovendo um relaxamento a partir do efeito do peptídeo. A partir da análise dimensional dos resultados representados na Figura 2, pode-se construir uma evidência qualitativa da capacidade de contratilidade do peptídeo Giovian (SEQ ID Nº1). Os resultados da Figura 2 estão quantitativamente representados na Figura 3, onde é possível observar um perfil gráfico de doseresposta da atividade do peptídeo no relaxamento celular. Com esta evidência, é possível comprovar a atividade de inibição da contratilidade das células dérmicas pelo Giovian (SEQ ID Nº1), o que teria a consequência de reduzir o aspecto de “enrugamento” da pele em situações clínicas. Ou seja, quanto maior o relaxamento celular, melhor o efeito de redução das rugas e linhas de expressão clinicamente detectadas.

EXEMPLO 2- AVALIAÇÃO SUBJETIVA DA EFICÁCIA CLÍNICA ANTIRRUGAS, COM APRECIABILIDADE COSMÉTICA E ACEITABILIDADE DERMATOLÓGICA

[0041] Com o objetivo de avaliar a segurança e a eficácia do Giovian (SEQ ID Nº1) em humanos foram realizados ensaios clínicos com 32 voluntários, de 35 a 65 anos, que utilizaram o produto contendo o peptídeo durante 30 dias.

[0042] Nenhum participante relatou sensações de desconforto e não foram detectados sinais clínicos após o uso do produto. Portanto, suporta o apelo “Dermatologicamente testado”.

[0043] Foi aplicado um questionário de apreciabilidade cosmética após 30 +/- 2 dias de uso do produto. No questionário foram avaliadas algumas percepções dos voluntários, a partir de respostas com “Sim” ou “Não”. Abaixo as questões avaliadas e o percentual de respostas positivas e negativas em relação aos questionamentos são listadas (Figura 4).

[0044] Se houve atenuação das rugas e linhas de expressão na região de aplicação do produto;

• ●Houve atenuação das imperfeições na região de aplicação do produto? 66% Sim / 34% Não
• ●Houve redução em realção à sensação de pele cansada? 69% Sim / 31% Não
• ●A pele ficou mais saudável e viçosa? 84% Sim / 16% Não
• ●A pele ficou mais preenchida e iluminada? 78% Sim / 22% Não
• ●A pele ficou mais hidratada? 69% Sim / 31% Não
• ●O voluntário gostou do produto? 84% Sim / 16% Não
• ●O voluntário compraria o produto? 78 % Sim / 2% Não

[0045] Foi avaliada também a eficácia clínica subjetiva da composição após 30 +/- 2 dias de uso (Figura 5). Foi avaliado se houve melhora ou se manteve da mesma forma: as rugas tipo pé de galinha, os sulcos nasolabiais, as rugas na testa, a elasticidade da pele, a firmeza da pele e a hidratação. 72% dos participantes observaram melhora nas rugas tipo pé de galinha, 63% observaram melhora dos sulcos nasolabiais, 69% observaram melhora nas rugas na testa, 75% observaram melhora na elasticidade e 78% observaram melhora na firmeza da pele.

[0046] Na figura 6 pode-se observar a resposta dos participantes, considerando uma escala de 0 a 5, quanto aos efeitos da composição na melhora da Hidratação, Firmeza, Elasticidade, das rugas na testa, dos sulcos nasolabias e das rugas tipo pé de galinha.

[0047] A partir dos resultados apresentados pode-se observar que a composição da presente invenção apresenta eficácia clínica na melhora de rugas, sucos labiais, elasticidade e firmeza da pele.

Claims (6)

1. PEPTÍDEO caracterizado por apresentar a sequência SEQ ID Nº1.
2. PEPTÍDEO de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por apresentar a sequência SEQ ID Nº1 com substituições dos aminoácidos Ile por Leu e vice versa.
3. PEPTÍDEO de acordo com as reivindicações 1 e 2, caracterizado por ser usado na preparação de composições cosméticas ou dermofarmacêuticas anti-rugas e de atenuação de linhas de expressão.
4. COMPOSIÇÃO COSMÉTICA OU DERMOFARMACÊUTICA, caracterizada por consistir de água, ácido hialurônico de 0,2% a 1%, peptídeo de SEQ ID Nº 1 de 0,0002% a 0,005%; Tanino de acácia negra de 0,01% a 0,25% e Usotiazolinona de 0,02% a 0,5%.
5. COMPOSIÇÃO COSMÉTICA OU DERMOFARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo peptídeo da composição poder resultar de substituições dos aminoácidos Ile, de SEQ ID Nº 1, pelo aminoácido Leu e vice versa.
6. USO DA COMPOSIÇÃO COSMÉTICA OU DERMOFARMACÊUTICA, conforme descrita nas reivindicações 4 e 5, caracterizado por ser na pele para a redução e eliminação de rugas e linhas de expressão.

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