BR102020002084A2 - PHARMACEUTICAL COMPOSITION BASED ON VANILLOSMOPSIS ERYTHROPAPPA EXTRACT AND USE - Google Patents

PHARMACEUTICAL COMPOSITION BASED ON VANILLOSMOPSIS ERYTHROPAPPA EXTRACT AND USE Download PDF

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BR102020002084A2
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Marisa Alves Nogueira Diaz
Duílio Teixeira Soares Júnior
Jefferson Viktor De Paula Barros Baeta
Gislaine Aparecida Purgato
Vírginia Ramos Pizziolo
Leandro José Gusmão
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Universidade Federal de Viçosa
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composição farmacêutica à base do extrato de vanillosmopsis erythropappa e uso. a presente invenção refere-se à composição à base do extrato vanillosmopsis erythropappa, com atividade cicatrizante para o tratamento de feridas cutâneas e que poderão ser usadas pela indústria farmacêutica na produção de medicamentos e ou de fitoterápicos para tratamento de pessoas com esse tipo de patologia, já que as feridas ainda são um problema de saúde humana e animal devido à complexidade do tratamento e complicações recorrentes, gerando custos elevados.pharmaceutical composition based on vanillosmopsis erythropappa extract and use. the present invention refers to a composition based on the extract vanillosmopsis erythropappa, with healing activity for the treatment of skin wounds and that can be used by the pharmaceutical industry in the production of medicines and/or herbal medicines for the treatment of people with this type of pathology, since wounds are still a human and animal health problem due to the complexity of the treatment and recurrent complications, generating high costs.

Description

COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA À BASE DO EXTRATO DE VANILLOSMOPSIS ERYTHROPAPPA E USOPHARMACEUTICAL COMPOSITION BASED ON VANILLOSMOPSIS ERYTHROPAPPA EXTRACT AND USE CAMPO DA INVENÇÃOFIELD OF THE INVENTION

1. A presente invenção refere-se à composição à base do extrato Vanillosmopsis erythropappa, com atividade cicatrizante para o tratamento de feridas cutâneas e que poderão ser usadas pela indústria farmacêutica na produção de medicamentos e ou de fitoterápicos para tratamento de pessoas com esse tipo de patologia, já que as feridas ainda são um problema de saúde humana e animal devido à complexidade do tratamento e complicações recorrentes, gerando custos elevados.1. The present invention refers to the composition based on the extract Vanillosmopsis erythropappa, with healing activity for the treatment of skin wounds and which can be used by the pharmaceutical industry in the production of medicines and/or herbal medicines for the treatment of people with this type of pathology, since wounds are still a human and animal health problem due to the complexity of the treatment and recurrent complications, generating high costs.

ESTADO DA TÉCNICATECHNICAL STATUS

2. Denomina-se ferida toda e qualquer ruptura da continuidade do tecido, desde pele, músculos e ossos, decorrente da lesão por agentes mecânicos, térmicos, químicos ou bacterianos (COLTRO, O.S.; FERREIRA, M.C.; BATISTA, B.P.S.N.; NAKAMOTO, H.A.; MILCHESKI, D.A.; TUMA, J.R.P. Atuação da cirurgia plástica no tratamento de feridas complexas. Rev Col Bras Cir, v.38, n.6, p.381-6, 2011). As feridas são classificadas quanto à causa, conteúdo microbiano, tipo de cicatrização, grau de abertura e tempo de duração. Tais classificações são uteis para determinar qual melhor tratamento para uma determinada ferida (PAVLETC, M.M. Atlas of small animal wound management and reconstructive surgery.3.ed. Iowa: Wiley-Blackwell, 2010).2. Wound is defined as any and all disruption of tissue continuity, from skin, muscles and bones, resulting from injury by mechanical, thermal, chemical or bacterial agents (COLTRO, OS; FERREIRA, MC; BATISTA, BPSN; NAKAMOTO, HA ; MILCHESKI, DA; TUMA, JRP The role of plastic surgery in the treatment of complex wounds. Rev Col Bras Cir, v.38, n.6, p.381-6, 2011). Wounds are classified by cause, microbial content, type of healing, degree of opening and duration. Such classifications are useful to determine the best treatment for a given wound (PAVLETC, M.M. Atlas of small animal wound management and reconstructive surgery. 3.ed. Iowa: Wiley-Blackwell, 2010).

3. As feridas podem ser cirúrgicas, traumáticas ou ulcerativas. Feridas cirúrgicas são provocadas intencionalmente por: incisão, quando não há perda de tecido e são geralmente fechadas por sutura; excisão, quando há remoção de tecido e punção, quando resultam de procedimentos terapêuticos e diagnósticos. Feridas traumáticas podem ser provocadas acidentalmente por agentes mecânicos (perfuração, corte ou contenção); químicos (iodo, cosméticos) e físicos como: calor, frio e radiação (MANTOVANI, M. & FONTELLES, M. J. Feridas traumáticas. In: Jorge, A. S.; Dantas S. R. P. E. Abordagem multiprofissional do tratamento de feridas. São Paulo: Atheneu, 2003). As feridas ulcerativas são resultantes de traumatismo ou doenças relacionadas com impedimento do suprimento de sangue. As úlceras de pele podem ser por pressão, por estase venosa, arteriais e diabéticas (SANTOS, J.B., Avaliação e tratamento de feridas: orientações ao profissional de saúde. Porto alegre: Hospital das Clínicas de Porto Alegre, 2011).3. Wounds can be surgical, traumatic or ulcerative. Surgical wounds are intentionally caused by: incision, when there is no loss of tissue and are usually closed by suture; excision, when there is tissue removal and puncture, when they result from therapeutic and diagnostic procedures. Traumatic wounds can be accidentally caused by mechanical agents (drilling, cutting or containment); chemical (iodine, cosmetic) and physical such as: heat, cold and radiation (MANTOVANI, M. & FONTELLES, M.J. Traumatic wounds. In: Jorge, A.S.; Dantas S.R.P.E. Multiprofessional approach to wound care. São Paulo: Atheneu, 2003). Ulcerative wounds are the result of trauma or illness related to an impaired blood supply. Skin ulcers can be caused by pressure, venous stasis, arterial and diabetic (SANTOS, J.B., Assessment and treatment of wounds: guidelines for health professionals. Porto Alegre: Hospital das Clínicas de Porto Alegre, 2011).

4. De acordo com o conteúdo microbiano, as feridas podem ser limpas, limpas contaminadas, contaminadas ou infectadas. As feridas limpas são lesões que ocorrem em condições assépticas. As feridas limpas contaminadas são aquelas com evolução inferior a 6 horas entre o trauma e o atendimento, sem contaminação significativa. Já as feridas contaminadas são aquelas com mais de 6 horas de evolução entre o trauma e o atendimento, apresentando sinais de infecção. As feridas consideradas infectadas apresentam agente infeccioso no local, com evidência de reação inflamatória, necrose e secreção purulenta (SANTOS, J.B., Avaliação e tratamento de feridas: orientações ao profissional de saúde. Porto alegre: Hospital das Clínicas de Porto Alegre, 2011).4. According to the microbial content, wounds can be cleaned, cleaned contaminated, contaminated or infected. Clean wounds are injuries that occur under aseptic conditions. Clean contaminated wounds are those with less than 6 hours evolution between trauma and care, without significant contamination. Contaminated wounds are those with more than 6 hours of evolution between trauma and care, showing signs of infection. Wounds considered infected present an infectious agent at the site, with evidence of inflammatory reaction, necrosis and purulent secretion (SANTOS, J.B., Assessment and treatment of wounds: guidelines for health professionals. Porto Alegre: Hospital das Clínicas de Porto Alegre, 2011).

5. Quanto ao tipo de cicatrização as feridas podem ser de Primeira Intenção, quando há aproximação direta das bordas sem perda de tecido e geralmente fechadas por sutura; Segunda Intenção, quando há perda de tecido, as bordas ficam distantes, sendo o processo de cicatrização mais lento e Terceira Intenção, quando são corrigidas cirurgicamente, afim de que apresentem melhores resultados funcionais e estéticos. Quanto ao grau de abertura, as feridas podem ser abertas, quando as bordas estão afastadas ou fechadas, quando as bordas estão justapostas. Quanto ao tempo, as feridas podem ser agudas, originadas por cirurgia ou trauma, em que a reparação ocorre em tempo adequado, sem complicações, e crônicas são aquelas em que o período de cicatrização é maior que o esperado devido a sua etiologia (ETHRIDGE, R. T.; LEONG, M.; PHILLIPS, M. T. Cicatrização de feridas. In: TOWNSEND, M. C. et al. Tratado de Cirurgia. Rio de Janeiro: Elsevier, 2010).5. As for the type of healing, wounds can be of First Intent, when there is direct approximation of the edges without tissue loss and usually closed by suture; Second Intention, when there is tissue loss, the edges are distant, being the healing process slower and Third Intention, when they are surgically corrected, in order to present better functional and aesthetic results. As for the degree of opening, wounds can be open when the edges are apart or closed when the edges are juxtaposed. As for time, wounds can be acute, originated by surgery or trauma, in which the repair occurs in an adequate time, without complications, and chronic are those in which the healing period is longer than expected due to its etiology (ETHRIDGE, RT; LEONG, M.; PHILLIPS, MT Wound healing. In: TOWNSEND, MC et al. Surgery Treaty. Rio de Janeiro: Elsevier, 2010).

6. A cicatrização consiste em uma perfeita e coordenada cascata de eventos celulares e moleculares que interagem para que ocorra a reconstituição do tecido. Tal evento é um processo dinâmico que envolve fenômenos bioquímicos e fisiológicos de forma sequencial, a fim de garantir a restauração tissular (MANDELBAUM, S.H.; DI SANTIS, E.P.; MANDELBAUM, M.H.S. Cicatrização: conceitos atuais e recursos auxiliares-ParteI. An Bras Dermatol, v.78, n.4, p.393-410, 2003).6. Healing consists of a perfect and coordinated cascade of cellular and molecular events that interact for tissue reconstitution to occur. This event is a dynamic process that involves sequential biochemical and physiological phenomena in order to ensure tissue restoration (MANDELBAUM, SH; DI SANTIS, EP; MANDELBAUM, MHS Healing: current concepts and auxiliary resources-Part I. An Bras Dermatol, v.78, n.4, p.393-410, 2003).

7. A reparação cutânea é um processo complexo, que envolve inflamação, reepitelização, angiogênese, formação de tecido de granulação e deposição de matriz intersticial, eventos realizados por diferentes tipos de células como, fibroblastos, células inflamatórias e pela matriz intersticial e fatores de crescimento, de modo a reparar os tecidos danificados (TENIUS, F.P.; BIONDO-SIMÕES, M.L.P.; IOSHII, S.O. Efeitos do uso crônico da dexametasona na cicatrização de feridas cutâneas em ratos. Anais Brasileiros de Dermatologia, v.82, p.141-149, 2007).7. Skin repair is a complex process that involves inflammation, reepithelialization, angiogenesis, formation of granulation tissue and interstitial matrix deposition, events carried out by different types of cells such as fibroblasts, inflammatory cells and by the interstitial matrix and growth factors , in order to repair the damaged tissues (TENIUS, FP; BIONDO-SIMÕES, MLP; IOSHII, SO Effects of the chronic use of dexamethasone in the healing of skin wounds in rats. Anais Brasileiros de Dermatologia, v.82, p.141-149 , 2007).

8. Uma sequência de eventos acontece após o ferimento e, portanto, existem diferentes classificações didáticas para facilitar o entendimento do processo. Convenientemente, o processo de cicatrização tem sido dividido em três fases que se sobrepõem de forma continua e temporal: inflamatória, proliferativa e remodelagem ou maturação (PAVLETC, M.M. Atlas of small animal wound management and reconstructive surgery.3.ed. Iowa: Wiley-Blackwell, 2010; SCHEREMI, S.; SZEIMIES, R.M.; KARRER, S.; HEINLIN, J.; LANDTHALER, M.; BABILAS, P. The impact of the PH value on skin integrity and cutaneous wound healing. Journal of the European Academy of Dermatology and Venereology, v.24, n.4, p.373-378, 2010). Existem autores que consideram mais detalhadamente estas três fases em cinco estágios principais: coagulação, inflamação, proliferação, contração e remodelação da ferida (MANDELBAUM, S.H.; DI SANTIS, E.P.; MANDELBAUM, M.H.S. Cicatrização: conceitos atuais e recursos auxiliares-ParteI. An Bras Dermatol, v.78, n.4, p.393-410, 2003). As fases da cicatrização são processos entrelaçados e é possível haver um agente terapêutico que acelere uma fase, mas cause inibição de outra (FAHIE, M.A.; SHETTKO, D. Evidence-based wound management: a systematic review of therapeutic agents to enhance granulation and epithelization. Veterinary Clinics of North Amerca small Animal Practice, v.37, n.3, p.559-577, 2007). Na fase da proliferação ocorre o fechamento da ferida, e corresponde ao período entre 05 e 20 dias após a lesão (HOSGOOD, G. Stages of wound healing and their clinical relevance. Vet Clin North Am Small Anim Pract., v.36, n.4, p.667-685, 2006.; PAVLETIC, M. M. Atlas of small animal wound management and reconstructivesurgery. 3º Ed. Iowa: Wiley-Blackwell, 2010). Dividida em quatro etapas (epitelização, angiogênese, formação de tecido de granulação e deposição de colágeno), a fase proliferativa é responsável pelo fechamento da lesão propriamente dita (MANDELBAUM, S. H.; DI SANTIS, E. P.; MANDELBAUM, M. H. S. Cicatrização: Conceitos atuais e recursos auxiliares- Parte I. An Bras Dermatol., v.78, n.4, p.393-410, 2003). Com a ocorrência da lesão vascular causada pela ferida, entre um ou dois dias, inicia-se o processo de reparação via angiogênese, um processo no qual há formação de novos vasos sanguíneos a partir dos já existentes, consistindo em etapa primordial na cicatrização. Inicia-se com a liberação da enzima colagenase pelas células do endotélio capilar, a qual irá degradar o colágeno da membrana basal, permitindo que células do endotélio migrem para o espaço perivascular da ferida, formando ramificações no tecido de granulação (RAJA, K. S.; GARCIA, M. S.; ISSEROFF, R. R. Wound re-epitheliazation: modulating kerationcyte migration in wound healing. Frontiers in Bioscience, v,12, p.2849-68, 2008.; SCHUGART, R. C.; FRIEDMAN, A.; ZHAO, R.; SEN, C. K. Wound angiogenesis as a function of tissue oxygen tension: A mathematical model. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, v.105, n.7, p.2628-33, 2008).8. A sequence of events takes place after the injury and therefore there are different didactic classifications to facilitate the understanding of the process. Conveniently, the healing process has been divided into three phases that overlap continuously and temporally: inflammatory, proliferative, and remodeling or maturation (PAVLETC, MM Atlas of small animal wound management and reconstructive surgery.3.ed. Iowa: Wiley- Blackwell, 2010; SCHEREMI, S.; SZEIMIES, RM; KARRER, S.; HEINLIN, J.; LANDTHALER, M.; BABILAS, P. The impact of the PH value on skin integrity and cutaneous wound healing. Journal of the European Academy of Dermatology and Venereology, v.24, n.4, p.373-378, 2010). There are authors who consider these three phases in more detail in five main stages: coagulation, inflammation, proliferation, contraction and remodeling of the wound (MANDELBAUM, SH; DI SANTIS, EP; MANDELBAUM, MHS Healing: current concepts and auxiliary resources-Part I. An Bras Dermatol, v.78, n.4, p.393-410, 2003). The healing phases are intertwined processes and it is possible to have a therapeutic agent that accelerates one phase, but inhibits another (FAHIE, MA; SHETTKO, D. Evidence-based wound management: a systematic review of therapeutic agents to enhance granulation and epithelization Veterinary Clinics of North America Small Animal Practice, v.37, n.3, p.559-577, 2007). In the proliferation phase, wound closure occurs, and corresponds to the period between 05 and 20 days after the injury (HOSGOOD, G. Stages of wound healing and their clinical relevance. Vet Clin North Am Small Anim Pract., v.36, n. .4, p.667-685, 2006.; PAVLETIC, MM Atlas of small animal wound management and reconstructivesurgery. 3rd Ed. Iowa: Wiley-Blackwell, 2010). Divided into four stages (epithelialization, angiogenesis, formation of granulation tissue and collagen deposition), the proliferative phase is responsible for closing the lesion itself (MANDELBAUM, SH; DI SANTIS, EP; MANDELBAUM, MHS Healing: Current concepts and resources auxiliaries- Part I. An Bras Dermatol., v.78, n.4, p.393-410, 2003). With the occurrence of vascular injury caused by the wound, within one or two days, the repair process begins via angiogenesis, a process in which new blood vessels are formed from existing ones, consisting of a primordial stage in healing. It begins with the release of collagenase enzyme by capillary endothelial cells, which will degrade basement membrane collagen, allowing endothelial cells to migrate to the perivascular space of the wound, forming ramifications in the granulation tissue (RAJA, KS; GARCIA , MS; ISSEROFF, RR Wound re-epithelialization: modulating kerationcyte migration in wound healing. Frontiers in Bioscience, v.12, p.2849-68, 2008.; SCHUGART, RC; FRIEDMAN, A.; ZHAO, R.; SEN , CK Wound angiogenesis as a function of tissue oxygen tension: A mathematical model. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, v.105, n.7, p.2628-33, 2008).

9. A possibilidade de acelerar a cicatrização e o fechamento de lesões cutâneas, através de recursos químico-medicamentoso ou físico, tem sido objeto de estudo de diversos pesquisadores. O entendimento dos processos de cicatrização é essencial para uma abordagem ponderada ao tratamento de feridas (BEHEREGARAY, W.K.; GIANOTTI, G.C.; LEAL, J.S.; GARCEZ, T.; CONTESINI, E.A. Eletroetimulação na cicatrização de feridas cutâneas experimentais em coelhos. Ciência Rural, v.44, n.5, p.878-883, 2014).9. The possibility of accelerating the healing and closure of skin lesions, through chemical-medicinal or physical resources, has been the object of study by several researchers. Understanding the healing processes is essential for a thoughtful approach to wound care (BEHEREGARAY, WK; GIANOTTI, GC; LEAL, JS; GARCEZ, T.; CONTESINI, EA Electrostimulation in the healing of experimental skin wounds in rabbits. Rural Science, v.44, n.5, p.878-883, 2014).

10. A terapia tópica de feridas é fundamentada em estudos científicos sobre a fisiologia de reparação tecidual, e é norteada pelos seguintes princípios: remover tecidos necróticos e corpos estranhos no leito da ferida, eliminar processos infecciosos, absorver o excesso de exsudato, manter úmido o leito da ferida, promover isolamento térmico e proteger a ferida de traumas e contaminação bacteriana (BLANES, L. Tratamento de feridas: Cirurgia vascular, Guia Ilustrado. São Paulo: 2004).10. Topical wound therapy is based on scientific studies on the physiology of tissue repair, and is guided by the following principles: remove necrotic tissue and foreign bodies from the wound bed, eliminate infectious processes, absorb excess exudate, keep moist or wound bed, promote thermal insulation and protect the wound from trauma and bacterial contamination (BLANES, L. Wound treatment: Vascular surgery, Guia Ilustrado. São Paulo: 2004).

11. A escolha dos agentes tópicos pode variar de acordo com a dinâmica das feridas (GODOY, J.M.P.; PRADO, P.A. Ácidos graxos essenciais enriquecidos com vitamina A, E e ácido linoléico como pensos em feridas crônicas. Revista Portuguesa de Clínica Geral, v.21, n.2, p.193-5, 2005). Os medicamentos utilizados para melhorar na cicatrização utilizam uma variedade de mecanismos diferentes. Estes incluem a manutenção de ambiente úmido (hidrocoloides, hidrogel, alginatos); fornecimento de energia local (maltodextrina, mel, açúcar); redução do edema da ferida (alginatos, mel, açúcar, acemanann); aumento do nível de fatores de crescimento (complexo tripeptideocobre); o fornecimento de substância ativa (colágeno, membranas biológicas); o aumento da resposta inflamatória; o controle da infecção; auxilio no debridamento ( enzimas tópicas); e o aumento no fluxo sanguíneo como o laser, radiação ultravioleta e estimulação elétrica (KRAHWINKEL, D.J.; BOOTHE, H.W. Tropical and systemic medications for wounds. Vet. Clin. Small. Anim, v.36, n.4, p.739-757, 2006).11. The choice of topical agents may vary according to wound dynamics (GODOY, JMP; PRADO, PA Essential fatty acids enriched with vitamin A, E and linoleic acid as dressings in chronic wounds. Revista Portuguesa de Clínica Geral, vol. 21, n.2, p.193-5, 2005). Medications used to improve healing use a variety of different mechanisms. These include maintaining a moist environment (hydrocolloids, hydrogel, alginates); local energy supply (maltodextrin, honey, sugar); reduction of wound edema (alginates, honey, sugar, acemanann); increased level of growth factors (tripeptide copper complex); the supply of active substance (collagen, biological membranes); increased inflammatory response; infection control; aid in debridement (topical enzymes); and increased blood flow with laser, ultraviolet radiation, and electrical stimulation (KRAHWINKEL, DJ; BOOTHE, HW Tropical and systemic medications for wounds. Vet. Clin. Small. Anim, v.36, n.4, p.739- 757, 2006).

12. Apesar da variedade de medicamentos tópicos utilizados para o tratamento de feridas e o desenvolvimento de novos fármacos, tanto pela química sintética como na biotecnologia, os produtos naturais, com plantas medicinais, continuam sendo uma grande fonte de medicamentos para este fim e para o tratamento de várias condições patológicas, tendo sua origem na medicina popular (OLIVEIRA, S.T.; LEME, M.C.; PIPPI, N.L.;RAISER, A.G.; MANFRON, M.P. Formulações de confrei na cicatrização de feridas cutâneas de ratos. Rev FZVA, v.7/8, n.1, p.6474, 2000; GONÇALVES, R.V.; SARANDY, M.M.; MATTA, S.L.P.; NOVAES, R.D.; PINTO, M.V.M. Comparative study of the effects of laser photobiomodulation and extract of Brassica oleracea on skin wounds in wistar rats: A histomorphometric study. Pathology- Research and Practice, v.209, n.10, p.648-543, 2013).12. Despite the variety of topical drugs used to treat wounds and the development of new drugs, both through synthetic chemistry and biotechnology, natural products, with medicinal plants, continue to be a great source of drugs for this purpose and for the treatment of various pathological conditions, having its origin in folk medicine (OLIVEIRA, ST; LEME, MC; PIPPI, NL; RAISER, AG; MANFRON, MP Comfrey formulations in the healing of skin wounds in rats. Rev FZVA, v.7/ 8, n.1, p.6474, 2000; GONÇALVES, RV; SARANDY, MM; MATTA, SLP; NOVAES, RD; PINTO, MVM Comparative study of the effects of laser photobiomodulation and extract of Brassica oleracea on skin wounds in wistar rats : A histomorphometric study. Pathology-Research and Practice, v.209, n.10, p.648-543, 2013).

13. Vanillosmopsis erythropappa SCHULTZ – BIP pertencente à família Asteraceae. Essa espécie, também conhecida como Eremanthus erythropappus, cresce geralmente em solos rasos e pobres, suas raízes se desenvolvem entre as fendas de rochas e os ramos tornam-se tortuosos e com casca grossa. Popularmente é conhecida como candeia da serra.13. Vanillosmopsis erythropappa SCHULTZ – BIP belonging to the Asteraceae family. This species, also known as Eremanthus erythropappus, usually grows in shallow, poor soils, its roots develop between rock crevices and the branches become crooked and thick-barked. It is popularly known as “candeia da serra”.

14. O estímulo para patentear a presente invenção vem através do Ministério da Saúde Brasileiro que nos últimos anos, busca estimular a inserção das práticas complementares de cuidados no sistema oficial de saúde. Destaca-se a implementação da Política Nacional de Plantas Medicinais e Fitoterápicos (PNPMF) e a Política Nacional de Práticas Integrativas e Complementares (PNPIC) (BRASIL. Ministério da Saúde. Política Nacional de Plantas Medicinais e Fitoterápicos. Brasília: Ministério da Saúde, 2006a. 60p), que visam estimular o acesso a práticas complementares e às plantas medicinais, para o cuidado em saúde, de forma eficaz e segura14. The stimulus to patent this invention comes through the Brazilian Ministry of Health, which in recent years has sought to encourage the inclusion of complementary care practices in the official health system. The implementation of the National Policy on Medicinal Plants and Herbal Medicines (PNPMF) and the National Policy on Integrative and Complementary Practices (PNPIC) (BRASIL. Ministry of Health. National Policy on Medicinal Plants and Herbal Medicines. Brasília: Ministry of Health, 2006a) . 60p), which aim to encourage access to complementary practices and medicinal plants, for health care, effectively and safely

15. A composição farmacêutica contendo extrato hexânico de partes aéreas de Vanillosmopsis erythropappa, objeto do atual pedido de patente, promoveu a cicatrização da ferida, sendo eficaz na fase proliferativa da cicatrização, apresentando melhor índice de contração. Os parâmetros histomorfométricos indicam que essa composição modulou o processo inflamatório e aumentou a proliferação de fibroblastos. Além de apresentar atividade proliferativa para fibroblastos humanos NIH3T3 cultivados in vitro.15. The pharmaceutical composition containing the hexane extract of aerial parts of Vanillosmopsis erythropappa, object of the current patent application, promoted wound healing, being effective in the proliferative phase of healing, with a better contraction index. Histomorphometric parameters indicate that this composition modulated the inflammatory process and increased fibroblast proliferation. In addition to showing proliferative activity for NIH3T3 human fibroblasts cultured in vitro.

16. A presente invenção refere-se a composição farmacêutica baseada em extrato hexânico das partes aéreas de Vanillosmopsis erythropappa, a serem utilizadas como agentes terapêuticos no tratamento de feridas cutâneas. O extrato da planta poderá ser manipulado em diferentes formas galênicas, tais como pomadas, gel transdérmico, loções e cremes.16. The present invention relates to pharmaceutical composition based on hexane extract of aerial parts of Vanillosmopsis erythropappa, to be used as therapeutic agents in the treatment of skin wounds. The plant extract can be manipulated in different galenic forms, such as ointments, transdermal gels, lotions and creams.

17. Em busca realizada nos bancos de patentes, nacional e internacionais, foram encontrados alguns documentos que apresentam tecnologias similares, porém distintas da apresentada no atual pedido de patente.17. In a search carried out in national and international patent databases, some documents were found that present similar technologies, although different from those presented in the current patent application.

18. O documento de patente WO2017193186 intitulado “Composições cosméticas para reparação cutânea” refere-se a composições cosméticas para reparação cutânea compreendendo pelo menos um óleo selecionado de Bertholletia excelsa ou Fevillea trilobata e excipientes cosmeticamente aceitáveis. A presente invenção refere-se ainda ao uso de tais composições no tratamento cosmético de regeneração cutânea e/ou cicatrização, em tratamento anti-idade, tratamento de pele sensibilizada pós-procedimentos estéticos e/ou pele ressecada e na modulação de processos celulares envolvidos na reparação cutânea, associados aos mecanismos de regeneração e/ou cicatrização da pele Esse documento se difere do atual pedido de patente, pois usa o óleo essencial e plantas diferentes dos utilizados no atual pedido e apresenta finalidades diferentes.18. Patent document WO2017193186 entitled "Cosmetic compositions for skin repair" refers to cosmetic compositions for skin repair comprising at least one oil selected from Bertholletia excelsa or Fevillea trilobata and cosmetically acceptable excipients. The present invention further relates to the use of such compositions in the cosmetic treatment of skin regeneration and/or healing, in anti-aging treatment, treatment of sensitized skin after aesthetic procedures and/or dry skin and in the modulation of cellular processes involved in cutaneous repair, associated with skin regeneration and/or healing mechanisms This document differs from the current patent application, as it uses essential oil and plants different from those used in the current application and has different purposes.

19. O documento de patente BR 10 2016 030321 4 intitulado “Hidrogel de alginato contendo vitaminas do complexo b, resveratrol e carvacrol para cicatrização de ferimentos cutâneos” refere-se a uma mistura de alginato de sódio em pó, água deionizada, folato, cobalamina, piridoxina, resveratrol e carvacrol. O processo de obtenção compreende a preparação e obtenção de alíquotas com concentrações específicas de folato, cobalamina, piridoxina, resveratrol e carvacrol. O hidrogel se difere do atual pedido de patente, pois usa compostos químicos enquanto o atual pedido usa extrato da planta.19. Patent document BR 10 2016 030321 4 entitled "Alginate hydrogel containing b-complex vitamins, resveratrol and carvacrol for cutaneous wound healing" refers to a mixture of powdered sodium alginate, deionized water, folate, cobalamin , pyridoxine, resveratrol and carvacrol. The obtaining process comprises preparing and obtaining aliquots with specific concentrations of folate, cobalamin, pyridoxine, resveratrol and carvacrol. The hydrogel differs from the current patent application in that it uses chemical compounds while the current application uses plant extract.

20. O documento de patente BR 10 2014 031982 4 intitulado “Preparações à base de acerola liofilizada para uso tópico em processos de cicatrização” refere-se a um creme formulado a partir de polpa lioflizada de acerola. Apresenta diferentes fotoquímicos que atuam em sinergia e estimulam cicatrização rápida e eficaz. A formulação é preparada a partir de polpa lioflizada da acerola, com ação sinergética entre vitaminas e flavonóides para uso tópico, e foi testada em modelo de cicatrização em ratos albinos. Esse pedido se difere do atual pedido de patente, pois utiliza planta diferente da utilizada no atual pedido.20. Patent document BR 10 2014 031982 4 entitled "Preparations based on lyophilized acerola for topical use in healing processes" refers to a cream formulated from lyophilized acerola pulp. It features different photochemicals that act synergistically and stimulate fast and effective healing. The formulation is prepared from lyophilized acerola pulp, with synergistic action between vitamins and flavonoids for topical use, and was tested in a healing model in albino rats. This application differs from the current patent application, as it uses a different plant than the one used in the current application.

21. O documento de patente BR 10 2013 022400 6 intitulado “Composições bioativas de plantas a base de óleos essenciais, na forma de pomada, para cicatrização epitelial, anti-inflamatória, adequado para aplicação tópica na pele humana e de animais” refere-se à composição bioativa de plantas, na forma de pomada, para cicatrização epitelial, antiinflamatória, adequada para aplicação tópica, para uso humano ou animal, com formulação à base de óleos essenciais de plantas como a copaíba e a melaleuca. Esse pedido se difere do atual pedido de patente, pois usa óleos essenciais e plantas diferentes dos usados no atual pedido e apresenta finalidades diferentes.21. Patent document BR 10 2013 022400 6 entitled "Bioactive compositions of plants based on essential oils, in the form of ointment, for epithelial healing, anti-inflammatory, suitable for topical application to human and animal skin" refers to the bioactive composition of plants, in the form of an ointment, for epithelial healing, anti-inflammatory, suitable for topical application, for human or animal use, with a formulation based on essential oils from plants such as copaiba and melaleuca. This application differs from the current patent application in that it uses essential oils and plants different from those used in the current application and has different purposes.

22. O documento de patente PI 1104746-1 intitulado “Composição farmacêutica compreendendo extratos de Pterodon, processo de preparo, e seu uso em processos de cicatrização tecidual” refere-se a extratos vegetais e composições farmacêuticas compreendendo tais extratos. As composições farmacêuticas da invenção compreendem extratos de plantas do gênero Pterodon, preferencialmente Pterodon pubescens, sendo marcadamente cicatrizantes, podendo opcionalmente estar associadas a outros ativos e/ou terapias, como a laser terapia. Esse pedido se difere do atual pedido de patente, pois a planta utilizada é diferente da planta do atual pedido.22. Patent document PI 1104746-1 entitled "Pharmaceutical composition comprising Pterodon extracts, preparation process, and its use in tissue healing processes" refers to plant extracts and pharmaceutical compositions comprising such extracts. The pharmaceutical compositions of the invention comprise extracts from plants of the Pterodon genus, preferably Pterodon pubescens, being markedly healing, and may optionally be associated with other actives and/or therapies, such as laser therapy. This application differs from the current patent application, as the plant used is different from the plant in the current application.

23. Sendo assim a composição farmacêutica à base do extrato Vanillosmopsis erythropappa apresenta-se como mais uma alternativa para o tratamento de feridas cutâneas, tendo em vista que o Ministério da Saúde Brasileiro nos últimos anos busca estimular a inserção das práticas complementares de cuidados no sistema oficial de saúde.23. Therefore, the pharmaceutical composition based on the Vanillosmopsis erythropappa extract presents itself as another alternative for the treatment of skin wounds, considering that the Brazilian Ministry of Health in recent years has sought to encourage the inclusion of complementary care practices in the system health officer.

DESCRIÇÃO DAS FIGURASDESCRIPTION OF THE FIGURES

24. Figura 1: Porcentagem de vida celular em extrato hexânico.24. Figure 1: Percentage of cell life in hexane extract.

25. Figura 2: Representação fotográfica da evolução macroscópica das feridas controles e experimental. Grupo tratado com pomada 1% (G 1), pomada 3% (G 2) e pomada 5% (G 3), pomada veículo (G4-Veículo) e Pomada fitoscar controle (G5) durante os dias 7, 14 e 21 dias.25. Figure 2: Photographic representation of the macroscopic evolution of control and experimental wounds. Group treated with 1% ointment (G 1), 3% ointment (G 2) and 5% ointment (G 3), vehicle ointment (G4-Vehicle) and control fitoscar ointment (G5) during days 7, 14 and 21 days .

26. Figura 3: Fotomicrografia obtida sob microscopia de polarização com coloração Picrosirius e aumento de 400x, que mostra a distribuição das fibras de colágeno tipo I (vermelha) e III (verde) no tecido cicatricial da pele de ratos tratados com a pomada a base do extrato hexânico de V. erythropappa Schultz – Bip. pomada 1% (G1), pomada 3% (G2), pomada 5% (G3) e pomada veículo (G4) e Pomada fitoscar controle (G5), nos dias 7, 14 e 21 de pós-operatório.26. Figure 3: Photomicrograph obtained under polarization microscopy with Picrosirius staining and 400x magnification, which shows the distribution of collagen fibers type I (red) and III (green) in the scar tissue of the skin of rats treated with the base ointment from the hexane extract of V. erythropappa Schultz – Bip. 1% ointment (G1), 3% ointment (G2), 5% ointment (G3) and vehicle ointment (G4) and control fitoscar Ointment (G5), on days 7, 14 and 21 postoperatively.

27. Figura 4: Percentual de colágeno tipo III (verde) encontrado nos grupos G1, G2, G3, G4 e G5, no sétimo dia de tratamento, 1 representa diferença significativa em relação ao grupo G1 (1%), 3 representa diferença significativa em relação ao grupo G2 (3%), 5 representa diferença significativa em relação ao grupo G3 (5%), C representa diferença significativa em relação ao grupo G4 (Veículo), F representa diferença significativa em relação ao grupo G5 (Fitoscar®)27. Figure 4: Percentage of type III collagen (green) found in groups G1, G2, G3, G4 and G5 on the seventh day of treatment, 1 represents a significant difference compared to group G1 (1%), 3 represents a significant difference in relation to group G2 (3%), 5 represents a significant difference in relation to group G3 (5%), C represents a significant difference in relation to group G4 (Vehicle), F represents a significant difference in relation to group G5 (Fitoscar®)

28. Figura 5: Percentual de colágeno tipo III (verde) encontrado nos grupos G1, G2, G3, G4 e G5, no décimo quarto dia de tratamento, 1 representa diferença significativa em relação ao grupo G1 (1%), 3 representa diferença significativa em relação ao grupo G2 (3%), 5 representa diferença significativa em relação ao grupo G3 (5%), C representa diferença significativa em relação ao grupo G4 (Veículo), F representa diferença significativa em relação ao grupo G5 (Fitoscar®)28. Figure 5: Percentage of collagen type III (green) found in groups G1, G2, G3, G4 and G5 on the fourteenth day of treatment, 1 represents a significant difference compared to group G1 (1%), 3 represents a difference significant in relation to group G2 (3%), 5 represents a significant difference in relation to group G3 (5%), C represents a significant difference in relation to group G4 (Vehicle), F represents a significant difference in relation to group G5 (Fitoscar® )

29. Figura 6: Percentual de colágeno tipo III (verde) encontrado nos grupos G1, G2, G3, G4 e G5, no vigésimo primeiro dia de tratamento, 1 representa diferença significativa em relação ao grupo G1 (1%), 3 representa diferença significativa em relação ao grupo G2 (3%), 5 representa diferença significativa em relação ao grupo G3 (5%), C representa diferença significativa em relação ao grupo G4 (Veículo), F representa diferença significativa em relação ao grupo G5 (Fitoscar®)29. Figure 6: Percentage of type III collagen (green) found in groups G1, G2, G3, G4 and G5, on the twenty-first day of treatment, 1 represents a significant difference compared to group G1 (1%), 3 represents a difference significant in relation to group G2 (3%), 5 represents a significant difference in relation to group G3 (5%), C represents a significant difference in relation to group G4 (Vehicle), F represents a significant difference in relation to group G5 (Fitoscar® )

30. Figura 7: Percentual de colágeno tipo I (vermelho) encontrado nos grupos G1, G2, G3, G4 e G5, no sétimo dia de tratamento, 1 representa diferença significativa em relação ao grupo G1 (1%), 3 representa diferença significativa em relação ao grupo G2 (3%), 5 representa diferença significativa em relação ao grupo G3 (5%), C representa diferença significativa em relação ao grupo G4 (Veículo), F representa diferença significativa em relação ao grupo G5 (Fitoscar®)30. Figure 7: Percentage of collagen type I (red) found in groups G1, G2, G3, G4 and G5 on the seventh day of treatment, 1 represents a significant difference compared to group G1 (1%), 3 represents a significant difference in relation to group G2 (3%), 5 represents a significant difference in relation to group G3 (5%), C represents a significant difference in relation to group G4 (Vehicle), F represents a significant difference in relation to group G5 (Fitoscar®)

31. Figura 8: Percentual de colágeno tipo I (vermelho) encontrado nos grupos G1, G2, G3, G4 e G5, no décimo quarto dia de tratamento, 1 representa diferença significativa em relação ao grupo G1 (1%), 3 representa diferença significativa em relação ao grupo G2 (3%), 5 representa diferença significativa em relação ao grupo G3 (5%), C representa diferença significativa em relação ao grupo G4 (Veículo), F representa diferença significativa em relação ao grupo G5 (Fitoscar®)31. Figure 8: Percentage of collagen type I (red) found in groups G1, G2, G3, G4 and G5 on the fourteenth day of treatment, 1 represents a significant difference compared to group G1 (1%), 3 represents a difference significant in relation to group G2 (3%), 5 represents a significant difference in relation to group G3 (5%), C represents a significant difference in relation to group G4 (Vehicle), F represents a significant difference in relation to group G5 (Fitoscar® )

32. Figura 9: Percentual de colágeno tipo I (vermelho) encontrado nos grupos G1, G2, G3, G4 e G5, no vigésimo primeiro dia de tratamento. 1 representa diferença significativa em relação ao grupo G1 (1%), 3 representa diferença significativa em relação ao grupo G2 (3%), 5 representa diferença significativa em relação ao grupo G3 (5%), C representa diferença significativa em relação ao grupo G4 (Veículo), F representa diferença significativa em relação ao grupo G5 (Fitoscar®).32. Figure 9: Percentage of collagen type I (red) found in groups G1, G2, G3, G4 and G5, on the twenty-first day of treatment. 1 represents a significant difference in relation to group G1 (1%), 3 represents a significant difference in relation to group G2 (3%), 5 represents a significant difference in relation to group G3 (5%), C represents a significant difference in relation to the group G4 (Vehicle), F represents a significant difference compared to group G5 (Fitoscar®).

33. Figura 10: Expressão imunoistoquímica do VEGF nas células teciduais de feridas tratadas com extrato de V. erythropappa Schultz – Bip pomada 1% (G1); pomada 3% (G2); pomada 5% (G3); pomada veículo (G4) e Pomada fitoscar controle (G5).33. Figure 10: Immunohistochemical expression of VEGF in tissue cells from wounds treated with V. erythropappa Schultz extract – Bip ointment 1% (G1); 3% ointment (G2); 5% ointment (G3); vehicle ointment (G4) and fitoscar control ointment (G5).

34. Figura 11: Cromatograma do extrato hexânico das folhas de V. erythropappa Schultz – Bip obtido pela análise de CG-EM. Picos numerados de 1 a 9: 1) -cariofileno; 2) 2-metil-hexacosano; 3) Tetracontano; 4) Lupenona; 5) Acetato de lupeol; 6) -amirina; 7) Lupeol; 8) Friedelan-3-one; 9) Acetato de Lupanol, correspondem aos compostos de maiores intensidades no extrato.34. Figure 11: Chromatogram of the hexane extract of the leaves of V. erythropappa Schultz – Bip obtained by GC-MS analysis. Peaks numbered 1 to 9: 1) -caryophyllene; 2) 2-methylhexacosane; 3) Tetracontane; 4) Lupenone; 5) Lupeol acetate; 6) -amyrin; 7) Lupeol; 8) Friedelan-3-one; 9) Lupanol Acetate, correspond to the compounds with the highest intensities in the extract.

35. Figura 12: Estrutura do lupeol e seus derivados.35. Figure 12: Structure of lupeol and its derivatives.

36. Figura 13: Estrutura do -cariofileno, -amirina e da friedelina ou friedelan-3-one.36. Figure 13: Structure of -caryophyllene, -amyrin and friedelin or friedelan-3-one.

37. Figura 14: Análise do teor de Creatinina nos grupos G1, G2, G3, G4 e G5 nos dias sete, quatorze e vinte e um dias da realização de ferida cirúrgica, respectivamente37. Figure 14: Analysis of the creatinine content in groups G1, G2, G3, G4 and G5 on days seven, fourteen and twenty-one days after the surgical wound, respectively

38. Figura 15: Análise do teor de Ureia nos grupos G1, G2, G3, G4 e G5 nos dias sete, quatorze e vinte e um dias da realização de ferida cirúrgica, respectivamente.38. Figure 15: Analysis of urea content in groups G1, G2, G3, G4 and G5 on days seven, fourteen and twenty-one days after the surgical wound, respectively.

39. Figura 16: Análise do teor de Leucócitos Globais nos grupos G1, G2, G3, G4 e G5 nos dias sete, quatorze e vinte e um dias da realização de ferida cirúrgica, respectivamente.39. Figure 16: Analysis of the content of Global Leukocytes in groups G1, G2, G3, G4 and G5 on days seven, fourteen and twenty-one days after the surgical wound, respectively.

40. Figura 17: Análise do teor de TGO nos grupos G1, G2, G3, G4 e G5 nos dias sete, quatorze e vinte e um dias da realização de ferida cirúrgica, respectivamente.40. Figure 17: Analysis of TGO content in groups G1, G2, G3, G4 and G5 on days seven, fourteen and twenty-one days after the surgical wound, respectively.

41. Figura 18: Análise do teor de TGP nos grupos G1, G2, G3, G4 e G5 nos dias sete, quatorze e vinte e um dias da realização de ferida cirúrgica, respectivamente.41. Figure 18: Analysis of TGP content in groups G1, G2, G3, G4 and G5 on days seven, fourteen and twenty-one days after the surgical wound, respectively.

42. Figura 19: Análise do teor de Ácido Úrico nos grupos G1, G2, G3, G4 e G5 nos dias sete, quatorze e vinte e um após a realização de ferida cirúrgica, respectivamente.42. Figure 19: Analysis of uric acid content in groups G1, G2, G3, G4 and G5 on days seven, fourteen and twenty-one after the surgical wound, respectively.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃODESCRIPTION OF THE INVENTION

43. A presente invenção refere-se à composição à base do extrato de Vanillosmopsis erythropappa e excipientes farmacológica e farmaceuticamente adequados, com atividade cicatrizante para o tratamento de feridas cutâneas, e ao uso da composição e do extrato Vanillosmopsis erythropappa para a produção de medicamentos e ou de fitoterápicos cicatrizantes.43. The present invention relates to the composition based on Vanillosmopsis erythropappa extract and pharmacologically and pharmaceutically suitable excipients, with healing activity for the treatment of skin wounds, and to the use of the composition and Vanillosmopsis erythropappa extract for the production of medicines and or of healing herbal medicines.

44. O extrato hexânico das folhas de V. erythropappa foi preparado por meio do método de maceração e remaceração. Para a produção dos extratos vegetais foram utilizados 1500g das folhas moídas utilizando hexano como solvente e ao abrigo da luz, até a exaustão. O macerado foi filtrado e concentrado em evaporador rotativo até eliminação completa do solvente. O extrato assim obtido foi armazenado em freezer a 4 oC até a sua utilização.44. The hexane extract of V. erythropappa leaves was prepared using the maceration and remaceration method. For the production of plant extracts, 1500g of ground leaves were used using hexane as a solvent and protected from light, until exhaustion. The macerate was filtered and concentrated on a rotary evaporator until complete removal of the solvent. The extract thus obtained was stored in a freezer at 4 oC until use.

45. Os componentes da Composição e suas porcentagens estão descritos na tabela 1.

Figure img0001
Figure img0002
45. The components of the Composition and their percentages are described in table 1.
Figure img0001
Figure img0002

46. A composição pode ser preparada na forma de pomada, creme, gel, loção, etc.46. The composition can be prepared in the form of an ointment, cream, gel, lotion, etc.

EXPERIMENTOS DE DEMONSTRAÇÃODEMONSTRATION EXPERIMENTS Teste preliminar de proliferação celular in vitro em culturas celulares de fibroblastos humanosIn vitro cell proliferation preliminary test in human fibroblast cell cultures

47. O teste de estimulação da proliferação foi adaptado de (PONNUSAMY, Y.; CHEAR, N. J.; RAMANATHAN, S.; LAI, C. S. Polyphenols rich fraction of Dicranopteris linearis promotes fibroblast cell migration and proliferation in vitro. Journal of Ethnopharmacology, v. 168, p. 305-14, 2015). O meio de cultura utilizado para cultivo e manutenção das células foi o RPMI 1640 suplementado com soro fetal bovino inativado (SFB, 10%), penicilina (100 UI/mL) e estreptomicina (100 μg/mL). Os fibroblastos humanos (NIH3T3) foram mantidos em estufa, a 37°C, num ambiente enriquecido por CO2 a 5%.47. The proliferation stimulation test was adapted from (PONNUSAMY, Y.; CHEAR, NJ; RAMANATHAN, S.; LAI, CS Polyphenols rich fraction of Dicranopteris linearis promotes fibroblast cell migration and proliferation in vitro. Journal of Ethnopharmacology, v. 168, p. 305-14, 2015). The culture medium used for cell culture and maintenance was RPMI 1640 supplemented with inactivated fetal bovine serum (FBS, 10%), penicillin (100 IU/mL) and streptomycin (100 μg/mL). Human fibroblasts (NIH3T3) were kept in an oven at 37°C in an environment enriched by 5% CO2.

48. As células estoque, em crescimento sub confluente, foram centrifugadas e ressuspendidas em uma garrafa de cultivo contendo meio RPMI suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB). Uma alíquota da suspensão de células foi retirada para contagem em câmara de Neubauer e definição do volume de inóculo.48. Stock cells, growing sub-confluent, were centrifuged and resuspended in a culture bottle containing RPMI medium supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS). An aliquot of the cell suspension was removed for counting in a Neubauer chamber and definition of the inoculum volume.

49. As células foram inoculadas a uma concentração de 5000 células por poço em uma placa de 96 poços. A placa foi incubada por aproximadamente 24 h, em estufa a 37°C, 5% CO2, permitindo que as células se aderissem e se espalhassem nos poços. O meio de cultura anteriormente adicionado (RPMI, 10% SFB) foi então substituído por meio novo acrescido do extrato hexânico de V. erythropappa.49. Cells were inoculated at a concentration of 5000 cells per well in a 96-well plate. The plate was incubated for approximately 24 h, in an oven at 37°C, 5% CO2, allowing the cells to adhere and spread into the wells. The previously added culture medium (RPMI, 10% FCS) was then replaced by new medium added with the hexane extract of V. erythropappa.

50. Após a adição do meio novo acrescido das diferentes concentrações dos extratos e de SFB, a placa foi então incubada nas mesmas condições por mais 48h. A seguir, foram adicionados 10 μL de solução contendo o indicador MTT na concentração de 5 mg/mL e as placas foram incubadas por mais 4h. As placas tiveram seu conteúdo esgotado em descarte adequado e, aos poços, foram adicionados 200μL de DMSO. O DMSO permitiu a lise celular e, consequentemente, a liberação do indicador colorimétrico derivado do MTT. A quantificação do indicador foi realizada em leitor ELISA em λ= 540 nm. Foi construído um gráfico para indicar o efeito produzido pelas diferentes concentrações dos estímulos em relação ao padrão (% de viabilidade celular). A comparação entre os valores de absorbância adquiridos após o MTT foi utilizada para comparação estatística entre os tratamentos (teste-T) com α=5%.50. After the addition of new medium plus different concentrations of extracts and FBS, the plate was then incubated under the same conditions for another 48h. Then, 10 μL of solution containing the MTT indicator at a concentration of 5 mg/mL were added and the plates were incubated for another 4h. The plates had their content exhausted by proper disposal and 200μL of DMSO were added to the wells. DMSO allowed cell lysis and, consequently, the release of the colorimetric indicator derived from MTT. The indicator was quantified in an ELISA reader at λ= 540 nm. A graph was constructed to indicate the effect produced by the different concentrations of stimuli in relation to the standard (% cell viability). The comparison between absorbance values acquired after MTT was used for statistical comparison between treatments (T-test) with α=5%.

AnimaisAnimals

51. Foram utilizados 96 ratos albinos adultos, da espécie Rattus Norvegicus, linhagem Wistar, com idade média de 120 dias, saudáveis, com massa corporal entre 250g e 350g, provenientes do Biotério Central da UFV.51. Ninety-six adult albino rats, Rattus Norvegicus species, Wistar lineage, with an average age of 120 days, healthy, with body weight between 250g and 350g, from the Central Animal Facility of UFV, were used.

52. O tamanho da amostra foi baseado na Resolução RE nº 90, de 16 de março de 2004 da ANVISA, que tem por objetivo indicar métodos padronizados para estudos de toxicologia pré-clínica no Brasil que visam no futuro, o registro e renovação de fitoterápicos. O item três do anexo desta resolução determina o número mínimo de seis animais por grupo experimental, o que dispensa neste caso, a necessidade do uso de fórmulas estatísticas para obtenção do número da amostra.52. The sample size was based on Resolution RE No. 90, of March 16, 2004 by ANVISA, which aims to indicate standardized methods for preclinical toxicology studies in Brazil that aim in the future, the registration and renewal of herbal medicines . Item three of the annex to this resolution determines the minimum number of six animals per experimental group, which in this case does not require the use of statistical formulas to obtain the sample number.

53. Antes de iniciar o estudo, os animais ficaram durante 30 dias em período de adaptação na área experimental do Laboratório de Biofarmácos da UFV. Durante o experimento os animais foram mantidos em gaiolas individuais cobertas com maravalha, temperatura controlada na faixa de 20ºC a 25ºC, fotoperíodo de 12h, com água e ração específica para roedores ad libitum.53. Before starting the study, the animals stayed for 30 days in an adaptation period in the experimental area of the Laboratory of Biopharmaceuticals at UFV. During the experiment, the animals were kept in individual cages covered with wood shavings, temperature controlled in the range of 20ºC to 25ºC, 12h photoperiod, with water and specific chow for rodents ad libitum.

Procedimento cirúrgicoSurgical procedure

54. O procedimento anestésico e a indução das feridas foram realizados sob a supervisão de um médico veterinário. Os animais foram sedados e anestesiados usando xilazina 2% (Anasedan®), 10mg/Kg e cloridrato de quetamina (Dopalen®), 50mg/Kg, adicionados na mesma seringa e administrado por via intraperitoneal. A obtenção da anestesia foi observada pela ausência de reflexo palpebral e redução da frequência cardíaca e respiratória. Uma vez anestesiados, foi realizado a tricotomia do dorso dos animais com auxílio de lâmina de barbear.54. The anesthetic procedure and wound induction were performed under the supervision of a veterinarian. The animals were sedated and anesthetized using 2% xylazine (Anasedan®), 10mg/kg and ketamine hydrochloride (Dopalen®), 50mg/kg, added in the same syringe and administered intraperitoneally. Obtaining anesthesia was observed by the absence of eyelid reflex and reduction in heart and respiratory rate. Once anesthetized, the animals' back was shaved with the aid of a razor blade.

55. Após a tricotomia realizou-se a assepsia com solução de álcool etílico 70% na região tricotomizada. Para padronizar o tamanho da ferida, utilizou-se um tubo de ensaio de 10mL para coletar sangue, devidamente desinfetado, que quando pressionado contra a pele, delimitou uma área aproximada de 1cm2 . Os cortes foram seccionados utilizando lâmina de bisturi Nº 11, tesoura curva e pinça anatômica tipo dente de rato, até a exposição da fáscia muscular.55. After shaving, asepsis was performed with a 70% ethyl alcohol solution in the shaved region. To standardize the size of the wound, a 10mL test tube was used to collect blood, properly disinfected, which when pressed against the skin, delimited an area of approximately 1cm2 . The sections were sectioned using a No. 11 scalpel blade, curved scissors and anatomical rat-tooth tweezers, until the muscle fascia was exposed.

Organização dos grupos experimentais e tratamento tópico das lesõesOrganization of experimental groups and topical treatment of injuries

56. Os 96 animais foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos, entre grupos controles e experimentais. Após a indução das feridas nos ratos, todos os dias, os animais receberam, diariamente o equivalente a 1g da solução de acordo com tratamento do seu grupo experimental, utilizando técnica asséptica. Os curativos foram realizados em intervalo de 24h, utilizando a mesma técnica e no mesmo horário até o 21º dia de pós-operatório (PO). Todos os procedimentos pós-operatórios foram realizados pelo mesmo investigador (Tabela 2).

Figure img0003
56. The 96 animals were randomly distributed into four groups, between control and experimental groups. After the induction of wounds in the rats, every day, the animals received, daily, the equivalent of 1g of the solution according to the treatment of their experimental group, using aseptic technique. The dressings were applied at a 24-hour interval, using the same technique and at the same time until the 21st postoperative day (PO). All postoperative procedures were performed by the same investigator (Table 2).
Figure img0003

EUTANÁSIA DOS ANIMAISEUTHANASIA OF ANIMALS

57. Aos 7, 14 e 21 dias de tratamento, seis animais de cada grupo foram eutanasiados com a administração do triplo da dose anestésica padronizada, seguido de exsanguinação por punção cardíaca para obter amostras de sangue e a eutanásia ser realizada por choque hipovolêmico.57. At 7, 14 and 21 days of treatment, six animals from each group were euthanized with the administration of triple the standardized anesthetic dose, followed by exsanguination by cardiac puncture to obtain blood samples and euthanasia to be performed by hypovolemic shock.

ANÁLISE MACROSCÓPICA DAS FERIDASMACROSCOPIC ANALYSIS OF WOUNDS

58. As feridas foram avaliadas pelo Índice de Contração (IC), mensurado no 7°, 14° e 21° dias após a execução das feridas, com uso de paquímetro manual, em duas direções, segundo (BORGES, E.L.; SAAR, S.R.C.; MAGALHÃES, M.B.B.; GOMES, F.S.L.; LIMA, V.L.A.N. Feridas: como tratar. 2 ed. Belo Horizonte/MG: Coopmed, 2010).58. The wounds were evaluated by the Contraction Index (CI), measured on the 7th, 14th and 21st days after the wounds were performed, using a manual caliper, in two directions, according to (BORGES, EL; SAAR, SRC ; MAGALHÃES, MBB; GOMES, FSL; LIMA, VLAN Wounds: how to treat. 2 ed. Belo Horizonte/MG: Coopmed, 2010).

ANÁLISE HISTOLÓGICAHISTOLOGICAL ANALYSIS

59. As feridas foram retiradas com margem de 1 cm de pele íntegra ao redor da lesão com profundidade até a fáscia muscular. As amostras de pele foram imediatamente fixadas em solução de formol 10% por 24h e posteriormente inseridas em frascos com álcool 70% até a confecção das preparações histológicas. As lâminas foram coradas rotineiramente em Hematoxilina-Eosina (HE) para a avaliação de fibroblastos, vasos sanguíneos e células inflamatórias. Os parâmetros histomorfométricos foram calculados utilizando as médias de fibroblastos, vasos sanguíneos e células inflamatórias (GONÇALVES, R.V.; SARANDY, M.M.; MATTA, S.L.P.; NOVAES, R.D.; PINTO, M.V.M. Comparative study of the effects of laser photobiomodulation and extract of Brassica oleracea on skin wounds in wistar rats: A histomorphometric study. Pathology-Research and Practice, v.209, n.10, p.648-543, 2013). A análise histomorfométrica foi realizada utilizando o software ImageJ (Aplicativo Java para processamentos de imagens científicas).59. The wounds were removed with a 1 cm margin of intact skin around the lesion, deep to the muscle fascia. The skin samples were immediately fixed in a 10% formalin solution for 24 hours and then placed in vials with 70% alcohol until the histological preparations were made. Slides were routinely stained in Hematoxylin-Eosin (HE) for the evaluation of fibroblasts, blood vessels and inflammatory cells. Histomorphometric parameters were calculated using the means of fibroblasts, blood vessels and inflammatory cells (GONÇALVES, RV; SARANDY, MM; MATTA, SLP; NOVAES, RD; PINTO, MVM Comparative study of the effects of laser photobiomodulation and extract of Brassica oleracea on skin wounds in wistar rats: A histomorphometric study. Pathology-Research and Practice, v.209, n.10, p.648-543, 2013). Histomorphometric analysis was performed using ImageJ software (Java application for scientific image processing).

Análise dos resultados da proliferação de fibroblastos in vitro tratados com extrato de vanillosmopsis erythropappa.Analysis of the results of fibroblast proliferation in vitro treated with vanillosmopsis erythropappa extract.

60. O extrato hexânico de Vanillosmopsis erythropappa, apresentou atividade proliferativa de fibroblastos maior que o controle positivo (SFB 10%). A tabela 3 representa a porcentagens de vida celular e o desviopadrão frente à concentração do extrato hexânico (Figura 1).

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60. The hexane extract of Vanillosmopsis erythropappa showed greater fibroblast proliferative activity than the positive control (10% FBS). Table 3 represents the percentages of cell life and the standard deviation compared to the concentration of the hexane extract (Figure 1).
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Avaliação clínica dos animais e feridaClinical evaluation of animals and wound

61. Neste estudo foi escolhido o tempo experimental de 21 dias, com três tempos de coleta das amostras para o estudo (7°, 14° e 21° dias). Segundo (SHIMIZU, B.J.; EURIDES, D.; BELETTI, M.E.; FREITAS, P.M.C.; CHANG, R. Extrato hexânico de Barbatimão a 5% em gel de hidroxietilcelulose aplicado em feridas cutâneas, produzidas experimentalmente em camundongos. Vet. Not., Uberlândia, v.15, n.1, p.21-27, 2009) e (TRINDADE, L.C.T.; et al. Avaliação do uso tópico do metronidazol no processo de cicatrização de feridas: um estudo experimental. Rev. Col. Bras. Cir. v.37, p.358-363, 2010), estes são os dias mais significativos para o estudo do processo de reparação tecidual da pele.61. In this study, the experimental time of 21 days was chosen, with three sample collection times for the study (7th, 14th and 21st days). Second (SHIMIZU, BJ; EURIDES, D.; BELETTI, ME; FREITAS, PMC; CHANG, R. Hexanic extract of Barbatimão at 5% in hydroxyethylcellulose gel applied to skin wounds, experimentally produced in mice. Vet. Not., Uberlândia. , v.15, n.1, p.21-27, 2009) and (TRINDADE, LCT; et al. Evaluation of the topical use of metronidazole in the wound healing process: an experimental study. Rev. Col. Bras. Cir. Cir. . v.37, p.358-363, 2010), these are the most significant days for the study of the skin tissue repair process.

62. No período do estudo não houve sinais de desenvolvimento de infecção nas feridas e os parâmetros clínicos dos animais, como higidez, alerta e apetite se mostraram dentro da normalidade. Na figura 2 é possível observar o aspecto clínico macroscópico das feridas póscirúrgicos nos dias zero, sete, décimo quarto e vigésimo primeiro de pósoperatório. A partir do sétimo dia houve formação de crosta cicatricial nas feridas de todos os grupos analisados, mas o grupo G4 (tratado com pomada veículo) apresentou crosta mais espessa ao longo dos dias. Segundo HERNANDES et al. (HERNANDES, L.; PEREIRA, L.M.S.; PALLAZO, F.; MELLO, J.C.P. wound-healing evaluation of ointment from (barbatimão) in rat skin. Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences, v.46, n.3, p.431-436, 2010), a presença de crosta na ferida pode dificultar a migração celular para o leito da ferida, podendo atrasar o início da fase proliferativa.62. During the study period, there were no signs of the development of infection in the wounds and the clinical parameters of the animals, such as health, alertness and appetite, were within normal limits. In figure 2, it is possible to observe the macroscopic clinical aspect of post-surgical wounds on days zero, seven, fourteenth and twenty-first postoperatively. From the seventh day onwards, there was formation of scarring on the wounds of all groups analyzed, but the G4 group (treated with vehicle ointment) had a thicker crust over the days. According to HERNANDES et al. (HERNANDES, L.; PEREIRA, LMS; PALLAZO, F.; MELLO, JCP wound-healing evaluation of ointment from (barbatimão) in rat skin. Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences, v.46, n.3, p.431- 436, 2010), the presence of crust in the wound can hinder cell migration to the wound bed, which can delay the onset of the proliferative phase.

63. A figura 2 representa o aspecto clínico macroscópico das feridas nos dias zero, sétimo, décimo quarto e vigésimo primeiro de pósoperatório.63. Figure 2 represents the macroscopic clinical appearance of the wounds on days zero, seventh, fourteenth and twenty-first postoperatively.

64. A tabela 4 apresenta os valores do índice de contração (expressa em %) das feridas cirúrgicas produzidas em ratos tratados com a pomada de V. erythropappa. O índice de contração da ferida é considerado um indicativo do potencial de cicatrização, ou seja, quanto melhor o processo de cicatrização de uma ferida, maior é a percentagem de contração da mesma (BRITO, N.M.B.; SILVA, G.C.F.; CASELHA, S.F.M.; SAMPAIO, A.R.S.; CARVALHO, R.A. Avaliação macroscópica de feridas cutâneas aberta, em ratos, tratadas com óleo de andiroba. Rev. Med., v.15, n.2, p.17-22, 2001).

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As médias seguidas de asterisco (*) apresentam diferença significativa (P<0,05%) em relação ao tratamento G4, pelo Teste de Tukey. Pomada a 1% (G1); Pomada a 3% (G2); e Pomada a 5% (G3); Pomada controle (G4); G5 pomada comercial nos dias 07, 14 e 21 de pósoperatório.64. Table 4 presents the contraction index values (expressed in %) of surgical wounds produced in rats treated with V. erythropappa ointment. The wound contraction index is considered an indication of the healing potential, that is, the better the wound healing process, the higher its contraction percentage (BRITO, NMB; SILVA, GCF; CASELHA, SFM; SAMPAIO , ARS; CARVALHO, RA Macroscopic evaluation of open skin wounds, in rats, treated with andiroba oil. Rev. Med., v.15, n.2, p.17-22, 2001).
Figure img0006
The means followed by an asterisk (*) show a significant difference (P<0.05%) in relation to the G4 treatment, by the Tukey test. 1% ointment (G1); 3% ointment (G2); and 5% Ointment (G3); Control ointment (G4); G5 commercial ointment on days 07, 14 and 21 postoperatively.

65. A contração da ferida se dá na fase proliferativa da cicatrização, em virtude da ação dos miofibroblastos, os quais sintetizam a matriz extracelular e produzem força mecânica para essa contração, por meio do estímulo de fatores de crescimento PDGF e TGF-β sobre tais células musculares (TOMASEK, J. J.; GABBIANI, G.; HINZ, B.; CHAPONIER, C.; BROWN, R. A. Myofibroblasts and mechano-regulation of connective tissue remodelling. Nat Rev Mol Cell Biol., v.3, n.5, p.349-63, 2002). Nesse processo, a pele periférica à lesão e interligada por colágeno sofre a força de tração dos miofibroblastos e avança para o centro da lesão até que as bordas se encontrem (PAVLETIC, M. M. Atlas of small animal wound management and reconstructive surgery. 3º Ed. Iowa: WileyBlackwell, 2010). Dessa forma, o potencial de cicatrização pode ser mensurado pela contração da ferida, uma vez que o percentual de contração será maior quanto melhor for a cicatrização (BRITO, N. M. B.; SILVA, P. R. F. S.; SILVA, G. C. F.; CASELHA, S. F. M.; SAMPAIO, A. R. S.; CARVALHO, R. A. Avaliação macroscópica de feridas cutâneas abertas, em ratos, tratadas com óleo de andiroba. Rev. Para. Med., v.15, n.2, p.17-22, 2001).65. Wound contraction occurs in the proliferative phase of healing, due to the action of myofibroblasts, which synthesize the extracellular matrix and produce mechanical force for this contraction, by stimulating PDGF and TGF-β growth factors on them muscle cells (TOMASEK, JJ; GABBIANI, G.; HINZ, B.; CHAPONIER, C.; BROWN, RA Myofibroblasts and mechano-regulation of connective tissue remodelling. Nat Rev Mol Cell Biol., v.3, n.5, p.349-63, 2002). In this process, the skin peripheral to the lesion and interconnected by collagen undergoes the traction force of the myofibroblasts and advances to the center of the lesion until the edges meet (PAVLETIC, MM Atlas of small animal wound management and reconstructive surgery. 3rd Ed. Iowa : WileyBlackwell, 2010). Thus, the healing potential can be measured by the contraction of the wound, since the percentage of contraction will be greater the better the healing (BRITO, NMB; SILVA, PRFS; SILVA, GCF; CASELHA, SFM; SAMPAIO, ARS; CARVALHO, RA Macroscopic evaluation of open skin wounds in rats treated with andiroba oil Rev. Para. Med., v.15, n.2, p.17-22, 2001).

66. No sétimo dia, o grupo tratado com pomada veículo (G4) apresentou o maior percentual de contração da ferida, seguido do grupo tratado com a pomada a 1% (G1), o qual apresentou 67,9% de contração, e do grupo tratado com a pomada a 3% (G2), que apresentou 54,8% de contração. Já o grupo tratado com a pomada a 5% (G3) teve o menor percentual de contração entre todos os grupos, com uma média de 43,1%, e apresentou uma diferença significativa quando comparado ao grupo controle (G4) e (G5).66. On the seventh day, the group treated with vehicle ointment (G4) had the highest percentage of wound contraction, followed by the group treated with 1% ointment (G1), which had 67.9% contraction, and the group treated with 3% ointment (G2), which presented 54.8% of contraction. The group treated with the 5% ointment (G3) had the lowest percentage of contraction among all groups, with an average of 43.1%, and showed a significant difference when compared to the control group (G4) and (G5) .

67. Essa diferença significativa de G3 no sétimo dia possivelmente está relacionada ao fato de que, por estar em grande concentração, não foi bem absorvido nesse curto período de tratamento, não permitindo uma regeneração eficiente do tecido nos primeiros dias.67. This significant difference in G3 on the seventh day is possibly related to the fact that, being in high concentration, it was not well absorbed in this short period of treatment, not allowing an efficient tissue regeneration in the first days.

68. No décimo quarto dia todos os grupos analisados apresentaram maior contração das feridas, sendo que o grupo tratado com a pomada a 5% (G3) foi o que apresentou maior contração, com 94,1%, seguido do grupo tratado com a pomada a 1%, com 93,5%, e do grupo tratado com a pomada a 3% com 92,9% de contração. Embora não tenham apresentado diferença estatística significativa (P>0,05%), todos tiveram porcentagens maiores que o grupo controle (G4), o qual apresentou índice de contração de 88%.68. On the fourteenth day, all groups analyzed presented greater contraction of the wounds, and the group treated with the 5% ointment (G3) had the greatest contraction, with 94.1%, followed by the group treated with the ointment 1%, with 93.5%, and the group treated with the ointment at 3% with 92.9% contraction. Although there was no statistically significant difference (P>0.05%), all had higher percentages than the control group (G4), which presented a contraction rate of 88%.

69. Ao analisar as fases da cicatrização, durante a fase a proliferativa (7º ao 14º dia) os grupos tratados com a pomada a 1% (G1) e 5% (G3) apresentaram melhores resultados, sendo capazes de reduzir maior área da ferida.69. When analyzing the healing phases, during the proliferative phase (7th to 14th day) the groups treated with 1% (G1) and 5% (G3) ointment showed better results, being able to reduce a larger wound area .

70. Os resultados mostram que o índice de contração apresentado no grupo tratado com a pomada de V. erythropappa foram satisfatórios e semelhantes a outros estudos discutidos na literatura (COELHO, J.M.; ANTONIOLLI, A.B.; SILVA, DN.; CARVALHO, T.M.M.B.; PONTES, E.R.J.C.; DASHIRO, A.N. O efeito da sulfadiazina de prata, extrato hexânico de ipê-roxo e extrato hexânico de barbatimão na cicatrização cutâneas em ratos. Revista do Colégio Brasileiro de Cirurgiões, v.37, n.1, p.045--051, 2010; EURIDES, D.; SILVA, L. A. F.; DALECK, C. R.; FREITAS, P. M. C.; ALVES, L. B. Efecto del extracto de óleo de rosa mosqueda (Rosa aff. Rubiginosa) em la cicatrización de heridas cutáneas. Rev. Electr Vet., v.12, n.1, p.1-10, 2011; VIEIRA, G. T. Avaliação do efeito cicatrizante de Inga subnuda e Pseudopiptadenia contorta em feridas cirúrgicas em coelhos. (Tese) Doutorado em Bioquímica Aplicada. Universidade Federal de Viçosa; Viçosa, 2015. 142p).70. The results show that the contraction index presented in the group treated with V. erythropappa ointment were satisfactory and similar to other studies discussed in the literature (COELHO, JM; ANTONIOLLI, AB; SILVA, DN.; CARVALHO, TMMB; BRIDGES , ERJC; DASHIRO, AN The effect of silver sulfadiazine, Ipê-roxo hexane extract and barbatimão hexane extract on skin healing in rats Revista do Colégio Brasileiro de Cirurgiões, v.37, n.1, p.045-- 051, 2010; EURIDES, D.; SILVA, LAF; DALECK, CR; FREITAS, PMC; ALVES, LB Effect of rose hip oil extract (Rosa aff. Rubiginosa) in the healing of cutaneous herids. Rev. Electr Vet. , v.12, n.1, p.1-10, 2011; VIEIRA, GT Evaluation of the healing effect of Inga subnuda and Pseudopiptadenia contorta in surgical wounds in rabbits. (Thesis) Doctorate in Applied Biochemistry, Federal University of Viçosa; Viçosa , 2015. 142p).

Avaliação qualitativa e quantitativa do colágeno tipo I e tipo IIIQualitative and quantitative assessment of collagen type I and type III

71. A figura 3 representa fotomicrografias coradas com pricosirius dos colágenos tipo I e III das feridas tratadas com pomada veículo (G4), extrato 1% (G1), extrato 3% (G2) e extrato 5% (G3), respectivamente, nos dias sete, décimo quarto e vigésimo primeiro dia de pós-operatório. É possível verificar a presença de colágeno tipo III (fibras imaturas – colágeno verde) nas feridas em processo de cicatrização, o qual representa presença de tecido novo em formação, bem como a presença de colágeno tipo I (fibras maduras – colágeno vermelho) no período analisado, indicando maturação do colágeno e a regeneração do tecido. Para analisar a maturação do colágeno é ideal que seja avaliado antes da cicatrização completa da ferida. A partir do sétimo dia da ferida a produção de fibroblastos atinge sua capacidade máxima, e, sendo essas as células que sintetizam o colágeno, pode-se observar presença aumentada de colágeno, e próximo ao período da oclusão total da ferida, verifica-se apenas colágeno do tipo I, uma vez que se encontram maturados (SILVA, T. F.; PENNA, A. L. B. Colágeno: Características químicas e propriedades funcionais. Revista do Instituto Adolfo Lutz, v.71, n.3, p.530-9, 2012.; VIEIRA, G. T. Avaliação do efeito cicatrizante de Inga subnuda e Pseudopiptadenia contorta em feridas cirúrgicas em coelhos. (Tese) Doutorado em Bioquímica Aplicada. Universidade Federal de Viçosa; Viçosa, 2015. 142p.).71. Figure 3 represents photomicrographs stained with pricosirius of collagen types I and III of wounds treated with vehicle ointment (G4), 1% extract (G1), 3% extract (G2) and 5% extract (G3), respectively, in days seven, fourteenth and twenty-first postoperative day. It is possible to verify the presence of type III collagen (immature fibers - green collagen) in wounds in the healing process, which represents the presence of new tissue in formation, as well as the presence of type I collagen (mature fibers - red collagen) in the period analyzed, indicating collagen maturation and tissue regeneration. To analyze collagen maturation, it is ideal that it be evaluated before complete wound healing. From the seventh day of the wound, the production of fibroblasts reaches its maximum capacity, and, as these are the cells that synthesize collagen, an increased presence of collagen can be observed, and close to the period of total occlusion of the wound, only type I collagen, once they are matured (SILVA, TF; PENNA, ALB Collagen: Chemical characteristics and functional properties. Revista do Instituto Adolfo Lutz, v.71, n.3, p.530-9, 2012.; VIEIRA, GT Evaluation of the healing effect of Inga subnuda and Pseudopiptadenia contorta in surgical wounds in rabbits. (Thesis) Doctorate in Applied Biochemistry. Federal University of Viçosa; Viçosa, 2015. 142p.).

72. Nessa última etapa da cicatrização, conhecida como fase de remodelação, o tecido de granulação da ferida quase completamente cicatrizada tem sua matriz extracelular reorganizada, com presença abundante de vasos sanguíneos e fibras colágenas, que no início do processo eram do tipo III, e agora, ao final, são substituídas pelas fibras do tipo I, as quais são maduras e tornam o tecido mais forte, característico de uma cicatrização efetiva (SARANDY, M. M.; NOVAES, R. D.; MATTA, S. L. P.; MEZENCIO, J. M. S.; SILVA, M. B.; ZANUNCIO, J. C.; GONÇALVES, R. V. Ointment of Brassica oleracea var. capitata matures the extracellular matrix in skin wounds of Wistar Rats. Evid Based Complement Alternat Med, v.2015, p.1-9, 2015).72. In this last stage of healing, known as the remodeling phase, the granulation tissue of the almost completely healed wound has its extracellular matrix reorganized, with abundant presence of blood vessels and collagen fibers, which at the beginning of the process were type III, and now, in the end, they are replaced by type I fibers, which mature and make the tissue stronger, characteristic of effective healing (SARANDY, MM; NOVAES, RD; MATTA, SLP; MEZENCIO, JMS; SILVA, MB; ZANUNCIO, JC; GONÇALVES, RV Ointment of Brassica oleracea var. capitata matures the extracellular matrix in skin wounds of Wistar Rats. Evid Based Complement Alternat Med, v.2015, p.1-9, 2015).

73. Foi realizada análise quantitativa dos colágenos tipo I e tipo III ao longo do período de tratamento e os resultados obtidos estão apresentados nas tabelas 5 e 6, que mostram a média (%), mediana, desvio padrão e valores mínimo e máximo de colágenos para cada grupo

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73. Quantitative analysis of type I and type III collagens was performed throughout the treatment period and the results are shown in tables 5 and 6, which show the mean (%), median, standard deviation and minimum and maximum values of collagen for each group
Figure img0007
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74. Nas figuras 4 a 9 constam a representação gráfica dos percentuais de colágenos tipo I e tipo III encontrados nas feridas tratadas com as pomadas nos dias sete, quatorze e vinte um de pós-operatório74. Figures 4 to 9 show the graphical representation of the percentages of type I and type III collagen found in wounds treated with the ointments on days seven, fourteen and twenty-one postoperatively

Avaliação da imunoistoquímica para VEGFImmunohistochemistry evaluation for VEGF

75. Os macrófagos respondem pela produção de diversos mediadores que atuam na regulação do processo cicatricial, entre eles, o fator de crescimento vascular – VEGF – conhecido como o fator de permeabilidade vascular (SINGER; CLARK, 1999). O VEGF é uma importante proteína ligada à formação de novos vasos e essencial no processo inicial de cicatrização, sendo expresso no primeiro dia da lesão pelos queratinócitos e considerado uma das principais citocinas responsáveis por estimular o surgimento de tecido de granulação (DINH, T.; BRAUNAGEL, S.; ROSENBLUM, B. I. Growth Factors in Wound Healing: The Present and the Future? Clin Podiatri Med Surg., v. 32, n. 1, p. 109-119, 2015).75. Macrophages are responsible for the production of several mediators that act in the regulation of the healing process, including the vascular growth factor – VEGF – known as the vascular permeability factor (SINGER; CLARK, 1999). VEGF is an important protein linked to the formation of new vessels and essential in the initial healing process, being expressed on the first day of injury by keratinocytes and considered one of the main cytokines responsible for stimulating the appearance of granulation tissue (DINH, T.; BRAUNAGEL, S.; ROSENBLUM, BI Growth Factors in Wound Healing: The Present and the Future? Clin Podiatri Med Surg., v. 32, n. 1, p. 109-119, 2015).

76. Assim, a angiogênese é fundamental no processo de cicatrização, sendo importante para formar tecido de granulação provisório que irá renovar o estoque de oxigênio e nutrientes no novo tecido em crescimento, favorecendo a proliferação de fibroblastos que irão sintetizar o colágeno, necessário para organização tecidual e boa cicatrização (COLOMBO, F.; NETO, A. A.; SOUSA, A. P.; MARCHIONNI, A. M. T.; PINHEIRO, A. L. B.; REIS, S. R. A. Effect of low-level laser therapy (λ660nm) on angiogenesis in wound healing: a Immunohistochemical Study in a rodent model. Braz. Dent. J., v.24, n.4, p.308-312, 2013). Segundo Masi (2015), os fatores de crescimento, como o VEGF, aceleram a cicatrização, estimulam produção aumentada de novos vasos sanguíneos, aceleram a produção de tecido fibroso e atuam na maturação do colágeno, levando, por consequência, à cicatrização completa e madura de uma ferida (MASI, E. C. D. J. A influência de fatores de crescimento na cicatrização de feridas cutâneas em ratas. (Tese) Doutorado em Clínica Cirúrgica. Universidade Federal do Paraná; Curitiba, 2015. 104p.).76. Thus, angiogenesis is fundamental in the healing process, being important to form temporary granulation tissue that will renew the oxygen and nutrient supply in the new growing tissue, favoring the proliferation of fibroblasts that will synthesize collagen, necessary for organization tissue and good healing (COLOMBO, F.; NETO, AA; SOUSA, AP; MARCHIONNI, AMT; PINHEIRO, ALB; REIS, SRA Effect of low-level laser therapy (λ660nm) on angiogenesis in wound healing: a Immunohistochemical Study in a rodent model. Braz. Dent. J., v.24, n.4, p.308-312, 2013). According to Masi (2015), growth factors, such as VEGF, accelerate healing, stimulate increased production of new blood vessels, accelerate the production of fibrous tissue and act on collagen maturation, consequently leading to complete and mature healing of a wound (MASI, ECDJ The influence of growth factors on the healing of skin wounds in female rats. (Thesis) Doctorate in Clinical Surgery. Federal University of Paraná; Curitiba, 2015. 104p.).

77. Nesse sentido, existem técnicas de biologia molecular capazes de avaliar a expressão do VEGF, determinar a angiogênese e a formação de células endoteliais, sendo de extrema importância em estudos sobre cicatrizações cutâneas. Um dos meios de realizar essa avaliação é a Imunoistoquímica, a qual utiliza o princípio antígeno/anticorpo para detectar a expressão de proteínas em determinados tecidos (PINHO, M. S. L. Imunoistoquímica: O estudo da biologia molecular ao alcance de todos. Rev. Bras. Coloproct., v.25, n.2, p.188-191, 2005).77. In this sense, there are molecular biology techniques capable of evaluating VEGF expression, determining angiogenesis and endothelial cell formation, which are extremely important in studies on skin healing. One of the ways to carry out this evaluation is Immunohistochemistry, which uses the antigen/antibody principle to detect the expression of proteins in certain tissues (PINHO, MSL Immunohistochemistry: The study of molecular biology within the reach of all. Rev. Bras. Coloproct. , v.25, n.2, p.188-191, 2005).

78. O presente estudo avaliou a expressão do VEGF nos cinco grupos estudados (figura 10) e verificou que aqueles tratados com o extrato de V. erythropappa Schultz – Bip apresentaram expressão aumentada desse fator de crescimento, contudo, apenas os grupos tratados com extrato 1% e 3%, G1 e G2 respectivamente, apresentaram diferença estatística significativa (P<0,05%) quando comparados com o grupo controle (G4). Esses resultados indicam que os extratos vegetais em 1% e 3% promovem maior vascularização nas feridas induzidas, acelerando assim o processo de cicatrização nesses grupos.78. The present study evaluated the expression of VEGF in the five groups studied (figure 10) and found that those treated with the extract of V. erythropappa Schultz – Bip showed increased expression of this growth factor, however, only the groups treated with extract 1 % and 3%, G1 and G2 respectively, showed a statistically significant difference (P<0.05%) when compared to the control group (G4). These results indicate that plant extracts in 1% and 3% promote greater vascularization in induced wounds, thus accelerating the healing process in these groups.

79. Ao verificar o aumento dos níveis de VEGF nas feridas tratadas com o extrato vegetal e a consequente formação de vasos sanguíneos de forma intensa, pode-se compreender o potencial cicatrizante do extrato de V. erythropappa Schultz – Bip, uma vez que, segundo Majewska & Gendaszewska-Darmach (2011), os fitoterápicos mais eficazes no tratamento de feridas apresentam potencial curativo em virtude de seus efeitos angiogênicos (MAJEWSKA, I.; GENDASZEWSKA-DARMACH, E. Proangiogenic activity of plant extracts in accelerating wound healing - a new face of old phytomedicines. Acta Biochim Pol., v. 58, n. 4, p. 449-60, 2011).79. By verifying the increase in VEGF levels in wounds treated with the plant extract and the consequent intense formation of blood vessels, it is possible to understand the healing potential of the extract of V. erythropappa Schultz – Bip, since, according to Majewska & Gendaszewska-Darmach (2011), the most effective herbal medicines in the treatment of wounds have healing potential due to their angiogenic effects (MAJEWSKA, I.; GENDASZEWSKA-DARMACH, E. Proangiogenic activity of plant extracts in accelerating wound healing - a new face of old phytomedicines. Acta Biochim Pol., v. 58, n. 4, p. 449-60, 2011).

80. No trabalho de Marques (2016) foi avaliado o efeito do óleo de semente de maracujá no reparo de feridas cutâneas em ratos Wistar sendo observado que o grupo tratado com o óleo apresentou resultado de VEGF significativamente maior que o grupo controle, indicando que o fitoterápico é eficiente no tratamento de feridas, uma vez que o aumento comprovado do endotélio vascular promove aceleração do processo cicatricial. (MARQUES, I. C. S. Óleo de semente de maracujá no reparo de feridas cutâneas em equinos e ratos Wistar. (Tese) Doutorado em Cirurgia Veterinária. UNESP - Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”; Jaboticabal, 2016. 77p.).80. In the work of Marques (2016), the effect of passion fruit seed oil on the repair of skin wounds in Wistar rats was evaluated, and it was observed that the group treated with the oil had a significantly higher VEGF result than the control group, indicating that the Herbal medicine is efficient in the treatment of wounds, since the proven increase in vascular endothelium promotes acceleration of the healing process. (MARQUES, I.C.S. Passion fruit seed oil in the repair of skin wounds in Wistar horses and rats. (Thesis) Doctorate in Veterinary Surgery. UNESP - São Paulo State University “Júlio de Mesquita Filho”; Jaboticabal, 2016. 77p.).

81. De maneira semelhante, no estudo de Santana (2015), que avaliou o efeito da solução de papaína no reparo tecidual em feridas de camundongos, observou-se que os grupos tratados com papaína (3%) apresentaram, após sete dias da ferida, níveis elevados de VEGF, o que, segunda a autora, promoveu redução do processo inflamatório, facilitou a proliferação celular no leito da ferida, favoreceu a formação do tecido de granulação e a deposição de colágeno, indicando o tratamento eficaz no reparo tecidual (SANTANA, L. P. G. Avaliação do reparo tecidual durante o tratamento tópico com solução de papaína em feridas de camundongos black. (Dissertação) Mestrado em Ciências da Saúde. Universidade Estadual de Campinas; Campinas, 2015. 65p.).81. Similarly, in the study by Santana (2015), which evaluated the effect of papain solution on tissue repair in mouse wounds, it was observed that the papain-treated groups (3%) presented, after seven days of the wound. , high levels of VEGF, which, according to the author, reduced the inflammatory process, facilitated cell proliferation in the wound bed, favored the formation of granulation tissue and collagen deposition, indicating an effective treatment for tissue repair (SANTANA , LPG Evaluation of tissue repair during topical treatment with papain solution in wounds of black mice.(Dissertation) Master in Health Sciences. Universidade Estadual de Campinas; Campinas, 2015. 65p.).

82. Ainda, o estudo de Estevão et al. (2015) avaliou o efeito do tratamento de feridas cutâneas de ratos com o óleo essencial de pimenta (Schinus terebinthifolius Raddi) sendo constatado que o tratamento com o óleo das folhas de pimenta à 5% foi bastante favorável na angiogênese e neovascularização, com maior liberação de fatores de crescimento (pró-angiogênicos) a partir do 14º dia de tratamento, os quais promoveram proliferação de capilares e organização de colágenos (ESTEVÃO, L. R. M.; MEDEIROS, J. P.; EVÊNCIO, L. B.; SIMÕES, R. S.; MENDONÇA, F. S.; NETO, J. E. Effects of the topical administrations of copaíba oil ointment (Copaifera langsdorffii) in skin flaps viability of rats. Act Cir. Bras., v.28, n.12, p.863-869, 2013).82. Also, the study by Estevão et al. (2015) evaluated the effect of treating skin wounds in rats with pepper essential oil (Schinus terebinthifolius Raddi) and found that treatment with 5% pepper leaf oil was quite favorable in angiogenesis and neovascularization, with greater release of growth factors (pro-angiogenic) from the 14th day of treatment, which promoted proliferation of capillaries and organization of collagens (ESTEVÃO, LRM; MEDEIROS, JP; EVÊNCIO, LB; SIMÕES, RS; MENDONÇA, FS; NETO, NETO, JE Effects of the topical administrations of copaiba oil ointment (Copaifera langsdorffii) in skin flaps viability of rats. Act Cir. Bras., v.28, n.12, p.863-869, 2013).

83. Em outro estudo foi avaliado o efeito do óleo de copaíba (Copaifera langsdorffii) à 10% sobre feridas cutâneas de ratos e concluiu-se que o extrato foi capaz de aumentar a proliferação de vasos sanguíneos e neovascularização no leito das feridas dos animais tratados já no oitavo dia, mostrando uma angiogênese intensa promovida pelos mediadores da cicatrização. Segundo os autores, o extrato vegetal, em virtude de seus compostos bioativos, estimulou o processo angiogênico e promoveu reparo tecidual eficaz nos grupos tratados (ESTEVÃO et al., 2013).83. In another study, the effect of copaiba oil (Copaifera langsdorffii) at 10% on skin wounds in rats was evaluated and it was concluded that the extract was able to increase the proliferation of blood vessels and neovascularization in the wound bed of treated animals already on the eighth day, showing intense angiogenesis promoted by healing mediators. According to the authors, the plant extract, due to its bioactive compounds, stimulated the angiogenic process and promoted effective tissue repair in the treated groups (ESTEVÃO et al., 2013).

84. O extrato das folhas de V. erythropappa Schultz – Bip apresenta em sua composição polifenóis, os quais, de acordo com Tsala, Amadou & Habtemariam (2013), são responsáveis pelo potencial cicatrizante tanto in vitro quanto in vivo, uma vez que esse composto modula a expressão de fatores de crescimento, em especial o VEGF, da angiogênese e da formação de colágeno na área lesionada. Os polifenóis, presente neste extrato, além de maximizar a vascularização pelo aumento nos níveis de VEGF, também apresentam atividade antioxidante no tecido em processo de cicatrização (BAHRAMSOLTANI et al., 2014).84. The extract from the leaves of V. erythropappa Schultz – Bip has polyphenols in its composition, which, according to Tsala, Amadou & Habtemariam (2013), are responsible for the healing potential both in vitro and in vivo, since this compound modulates the expression of growth factors, especially VEGF, angiogenesis and collagen formation in the injured area. The polyphenols present in this extract, in addition to maximizing vascularization by increasing VEGF levels, also have antioxidant activity in tissue undergoing healing (BAHRAMSOLTANI et al., 2014).

Cromatografia gasosa acoplada ao espectrômetro de massas (CGEM)Gas Chromatography Coupled to a Mass Spectrometer (CGEM)

85. O extrato de V. erythropappa Schultz – Bip foi analisado por cromatografia gasosa acoplada ao espectrômetro de massas (CG-EM). A partir da análise do cromatograma (Figura 11) é possível visualizar vários picos (compostos) de diferentes intensidades. Com base nos tempos de retenção (TR) e nos espectros de massas (razão massa/carga e fragmentações) dos picos mais abundantes foi possível determinar os prováveis compostos presentes no extrato.85. The extract of V. erythropappa Schultz – Bip was analyzed by gas chromatography coupled to a mass spectrometer (GC-MS). From the analysis of the chromatogram (Figure 11) it is possible to visualize several peaks (compounds) of different intensities. Based on the retention times (TR) and on the mass spectra (mass/charge ratio and fragmentation) of the most abundant peaks, it was possible to determine the likely compounds present in the extract.

86. O composto Lupeol (7) (Figura 12) cujo pico se encontra no tempo de retenção TR = 21,20 como um dos mais abundantes parece ser um dos responsáveis pela atividade cicatrizante encontrada no extrato, tendo em vista que há relatos na literatura da sua atividade como cicatrizante (FERNANDO PEREIRA BESERRA, Mecanismos envolvidos no efeito cicatrizante de feridas cutâneas do lupeol isolado das cascas do caule de Bowdichia virgilioides Kunth. (Fabaceae) em modelos experimentais in vivo e in vitro. Tese de Doutorado, UNESP, 2019).86. The compound Lupeol (7) (Figure 12) whose peak is at the retention time TR = 21.20 as one of the most abundant seems to be one of those responsible for the healing activity found in the extract, considering that there are reports in the literature of its activity as a healing agent (FERNANDO PEREIRA BESERRA, Mechanisms involved in the healing effect of cutaneous wounds of lupeol isolated from the stem bark of Bowdichia virgilioides Kunth. (Fabaceae) in experimental models in vivo and in vitro. Doctoral Thesis, UNESP, 2019) .

87. Por outro lado, o composto friedelina ou friedelan-3-one (figura 13) também tem efeito na cicatrização uma vez que age estimulando a angiogênese (Julianderson O. S. Carmo, Uso tópico da friedelina acelera a cicatrização de feridas em animais diabéticos, através da modulação do processo de angiogênese, Resumo 68ª Reunião Anual da SBPC, 2016) além dos compostos -cariofileno e -amirina que também apresentam atividade cicatrizante. Esses dados corroboram com a atividade cicatrizante apresentada pelo extrato hexânico da planta (JONATHAN PARISOTTO PETERLE, Estudo da atividade cicatrizante de hidrogel contendo β-cariofileno nanoemulsionado, Dissertação de Mestrado, UFRS, 2017, 159p. e LEILA MARIA LEAL PARENTE, Atividades angiogênica, antiinflamatória, cicatrizante e antibacteriana do extrato etanólico e frações das flores da Calendula officinalis L. cultivadas no Brasil, Tese de Doutorado, UFG, 2008, 72p.).87. On the other hand, the compound friedelin or friedelan-3-one (figure 13) also has an effect on wound healing as it acts by stimulating angiogenesis (Julianderson OS Carmo, Topical use of friedelin accelerates wound healing in diabetic animals through of the modulation of the angiogenesis process, Abstract 68th Annual Meeting of the SBPC, 2016) in addition to the compounds -caryophyllene and -amyrin, which also have healing activity. These data corroborate the healing activity presented by the hexane extract of the plant (JONATHAN PARISOTTO PETERLE, Study of the healing activity of hydrogel containing nanoemulsified β-caryophyllene, Master's Dissertation, UFRS, 2017, 159p. and LEILA MARIA LEAL PARENTE, Angiogenic, anti-inflammatory activities , healing and antibacterial of the ethanol extract and fractions of Calendula officinalis L. flowers cultivated in Brazil, Doctoral Thesis, UFG, 2008, 72p.).

Análise toxicológicatoxicological analysis

88. Além das propriedades físicas, químicas e farmacológicas de um fitoterápico, é importante considerar as características biológicas do indivíduo que irá receber esse composto a fim de avaliar o grau de segurança deste (VIEIRA, 2015). Nesse sentido, para avaliar o efeito do extrato de V. erythropappa Schultz – Bip no processo de cicatrização de feridas foi realizada a avaliação de parâmetros bioquímicos e hematológicos dos grupos (G1, G2, G3, G4 e G5) de animais deste estudo ao longo dos vinte e um dias após ferida cirúrgica. As figuras 14, 15, 16, 17, 18 e 19 representam tais parâmetros, a saber: Creatinina e Ureia, Leucócitos Globais, TGO, TGP e Ácido úrico.88. In addition to the physical, chemical and pharmacological properties of an herbal medicine, it is important to consider the biological characteristics of the individual who will receive this compound in order to assess its degree of safety (VIEIRA, 2015). In this sense, to evaluate the effect of the extract of V. erythropappa Schultz – Bip on the wound healing process, the evaluation of biochemical and hematological parameters of the groups (G1, G2, G3, G4 and G5) of animals in this study was carried out. twenty-one days after surgical wound. Figures 14, 15, 16, 17, 18 and 19 represent such parameters, namely: Creatinine and Urea, Global Leukocytes, TGO, TGP and Uric acid.

89. A análise bioquímica de creatinina e ureia é importante para avaliar se o tratamento proposto afetou a função renal dos animais, já a análise de TGO e TGP avalia se os animais tiveram sua função hepática afetada pelo tratamento. Os leucócitos globais, também conhecidos como glóbulos brancos, são células responsáveis pela defesa do organismo, e sua análise mostra se houve desenvolvimento de infecção ao longo do tratamento. Embora se espere que os parâmetros bioquímicos de ratos de laboratórios sigam padrões semelhantes, alguns autores relatam que fatores como a dieta, o ambiente, a idade, o gênero, a linhagem, o genótipo, os fatores ecológicos e o estresse durante o tratamento afetam os valores hematológicos e bioquímicos e dessa forma, não é possível definir um valor de referência universal para tais parâmetros (NUNES, D. C. S.; FAVALI, C. B. F.; SOUZA-FILHO, A. A.; SILVA, A. C. M.; FILGUEIRAS, T. M.; LIMA, M. G. S. Evaluation of cellular profile and main constituents the rat and mouse blood from the animal house of the Federal University of Ceará, Brazil. Revista Medicina UFC, v.34, n.1, p.21-29, 2004). Assim, é necessário que cada laboratório ou biotério estabeleça seus valores de referência com base em suas próprias condições e características dos animais utilizados (CASTELLO BRANCO, A. C. S.; DINIZ, M. F. F. M.; ALMEIDA, R. N.; SANTOS, H. B.; OLIVEIRA, K. M.; RAMALHO, J. A.; DANTAS, J. G. Parâmetros bioquímicos e hematológicos de Ratos Wistar e Camundongos Swiss do biotério Professor Thomas George. Revista Brasileira de Ciências da Saúde, v.15, n.2, p.209-214, 2011).89. The biochemical analysis of creatinine and urea is important to assess whether the proposed treatment affected the renal function of the animals, whereas the analysis of TGO and TGP assesses whether the animals had their liver function affected by the treatment. Global leukocytes, also known as white blood cells, are cells responsible for defending the body, and their analysis shows whether infection developed during treatment. Although the biochemical parameters of laboratory rats are expected to follow similar patterns, some authors report that factors such as diet, environment, age, gender, lineage, genotype, ecological factors and stress during treatment affect the hematological and biochemical values and thus, it is not possible to define a universal reference value for such parameters (NUNES, DCS; FAVALI, CBF; SOUZA-FILHO, AA; SILVA, ACM; FILGUEIRAS, TM; LIMA, MGS Evaluation of cellular profile and main constituents the rat and mouse blood from the animal house of the Federal University of Ceará, Brazil. Revista Medicina UFC, v.34, n.1, p.21-29, 2004). Thus, it is necessary that each laboratory or vivarium establish its reference values based on its own conditions and characteristics of the animals used (CASTELLO BRANCO, ACS; DINIZ, MFFM; ALMEIDA, RN; SANTOS, HB; OLIVEIRA, KM; RAMALHO, JA ; DANTAS, JG Biochemical and hematological parameters of Wistar Rats and Swiss Mice from the vivarium Professor Thomas George. Brazilian Journal of Health Sciences, v.15, n.2, p.209-214, 2011).

90. O presente estudo utilizou como referência para esta análise os parâmetros definidos no estudo de Dantas et al. (2006). Assim, toda a análise bioquímica e imunológica realizada se mostrou dentro da normalidade para os quatro grupos estudados, e não houve variação significativa entre os valores desses marcadores renais, hepáticos e inflamatórios nos grupos tratados com o extrato, quando comparados com o grupo controle. Essa análise permite inferir que o tratamento com o extrato de V. erythropappa Schultz – Bip não causou nenhuma alteração patológica nos animais, de forma que não promoveu desenvolvimento de infecção, haja vista os valores de leucócitos globais dentro da normalidade, e também não foi tóxico ao sistema renal e hepático, uma vez que os valores de ureia, creatinina, TGO e TGP também se mostraram dentro dos valores de referência utilizados, sendo portanto, eficaz no tratamento de feridas cutâneas (DANTAS, J. A.; AMBIEL, C. R.; CUMAN, R. K. N.; BARONI, S.; BERSANI-AMADO, C. A. Valores de referência de alguns parâmetros fisiológicos de ratos do biotério central da Universidade Estadual de Maringá, Estado do Paraná. Acta Sci. Health Sci., v.28, n.2, p.165-170, 2006).90. The present study used as reference for this analysis the parameters defined in the study by Dantas et al. (2006). Thus, the entire biochemical and immunological analysis performed was within normal limits for the four groups studied, and there was no significant variation between the values of these renal, hepatic and inflammatory markers in the groups treated with the extract, when compared to the control group. This analysis allows us to infer that the treatment with the extract of V. erythropappa Schultz – Bip did not cause any pathological change in the animals, so that it did not promote the development of infection, given the values of global leukocytes within the normal range, and it was also not toxic to the renal and hepatic system, since the values of urea, creatinine, TGO and TGP were also within the reference values used, being therefore effective in the treatment of skin wounds (DANTAS, JA; AMBIEL, CR; CUMAN, RKN ; BARONI, S.; BERSANI-AMADO, CA Reference values of some physiological parameters of rats from the central vivarium of the State University of Maringá, State of Paraná Acta Sci. Health Sci., v.28, n.2, p. 165-170, 2006).

CONCLUSÃOCONCLUSION

91. Há evidências do efeito cicatrizante da composição obtida a partir do extrato hexânico de V. erythropappa e do potencial uso deste como medicamento fitoterápico.91. There is evidence of the healing effect of the composition obtained from the hexane extract of V. erythropappa and its potential use as a herbal medicine.

92. A composição obtida a partir do extrato hexânico de V. erythropappa apresenta atividade proliferativa para fibroblastos humanos NIH3T3 cultivados in vitro. Ela promoveu a cicatrização da ferida, sendo eficaz na fase proliferativa da cicatrização, apresentando melhor índice de contração.92. The composition obtained from the hexane extract of V. erythropappa has proliferative activity for in vitro cultivated NIH3T3 human fibroblasts. It promoted wound healing, being effective in the proliferative phase of healing, with a better rate of contraction.

93. Os parâmetros histomorfométricos indicam que a composição obtida a partir do extrato hexânico de V. erythropappa modulou o processo inflamatório e aumentou a proliferação de fibroblastos.93. Histomorphometric parameters indicate that the composition obtained from the hexane extract of V. erythropappa modulated the inflammatory process and increased fibroblast proliferation.

94. Em relação ao imunoensaio as pomadas com os extratos vegetais nas concentrações 1% e 3% promovem maior vascularização nas feridas induzidas, acelerando assim o processo de cicatrização nesses grupos.94. Regarding the immunoassay, ointments with plant extracts at 1% and 3% concentrations promote greater vascularization in induced wounds, thus accelerating the healing process in these groups.

95. A composição obtida a partir do extrato hexânico da planta se comportou como a composição fitoterápica (Fitoscar®) usada como controle, corroborando com o uso extrato hexânico de V. erythropappa para a atividade cicatrizante.95. The composition obtained from the hexane extract of the plant behaved like the herbal composition (Fitoscar®) used as a control, corroborating the use of hexane extract of V. erythropappa for the healing activity.

Claims (4)

COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA caracterizada por compreender extrato de Vanillosmopsis erythropappa e excipientes farmacológica e farmaceuticamente adequados.PHARMACEUTICAL COMPOSITION characterized by comprising Vanillosmopsis erythropappa extract and pharmacologically and pharmaceutically suitable excipients. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por compreender 0,1 a 10% de extrato de Vanillosmopsis erythropappa, 1 a 30% de lanolina anidra, 0,01 a 0,05% BHT, 0,1% de conservante e qsp 100% de vaselina.PHARMACEUTICAL COMPOSITION according to claim 1, characterized in that it comprises 0.1 to 10% of Vanillosmopsis erythropappa extract, 1 to 30% of anhydrous lanolin, 0.01 to 0.05% BHT, 0.1% of preservative and qsp 100% Vaseline. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por ser preparada na forma de pomada, creme, gel e loção.PHARMACEUTICAL COMPOSITION according to claim 1, characterized in that it is prepared in the form of an ointment, cream, gel and lotion. Uso da composição definida nas reivindicações 1 e 2 e do extrato de Vanillosmopsis erythropappa caracterizado por ser para a produção de medicamentos e ou fitoterápicos cicatrizantes.Use of the composition defined in claims 1 and 2 and the extract of Vanillosmopsis erythropappa characterized by being for the production of healing medicines and/or herbal medicines.
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