BR102016016535A2

BR102016016535A2 - Process for Obtaining Ruthenium Compounds, Ruthenium Compounds Obtained and Their Use

Info

Publication number: BR102016016535A2
Application number: BR102016016535-0A
Authority: BR
Inventors: Mara De Oliveira Katia; Ellen Graminha Angelica; Regina Cominetti Márcia; Azevedo Batista Alzir
Original assignee: Fundação Universidade Federal De São Carlos
Priority date: 2016-07-15
Filing date: 2016-07-15
Publication date: 2018-02-06

Abstract

processo de obtenção de compostos de rutênio, compostos de rutênio obtidos e seu uso. a presente invenção descreve um processo de obtenção de compostos de rutênio compreendendo lapachol ou lausona, ligantes bipiridínicos e fosfínicos e um contra íon em suas estruturas, que se caracterizam pela reação de precursores do tipo cis-[rucl2(p)(n-n)] e cis-[rucl2(p)2], em que p corresponde a fosfinas e n-n à 2,2?-bipiridina e derivados, utilizando solventes orgânicos como diclorometano, metanol, éter etílico e água. ainda, a presente invenção refere-se aos compostos de rutênio obtidos e seu uso para o preparo de um medicamento para tratar câncer de mama, próstata e pulmão, preferencialmente câncer de mama.process of obtaining ruthenium compounds, obtained ruthenium compounds and their use. The present invention describes a process for obtaining ruthenium compounds comprising lapachol or lausone, bipyridine and phosphine ligands and a counter ion in their structures, characterized by the reaction of cis- [rucl2 (p) (nn)] and cis- [rucl2 (p) 2] wherein p is phosphines and nn 2,2'-bipyridine and derivatives using organic solvents such as dichloromethane, methanol, ethyl ether and water. further, the present invention relates to the obtained ruthenium compounds and their use for the preparation of a medicament for treating breast, prostate and lung cancer, preferably breast cancer.

Description

(54) Título: PROCESSO DE OBTENÇÃO DE COMPOSTOS DE RUTÊNIO, COMPOSTOS DE RUTÊNIO OBTIDOS E SEU USO (51) Int. Cl.: C07F 15/00; A61P 35/00 (73) Titular(es): FUNDAÇÃO UNIVERSIDADE FEDERAL DE SÃO CARLOS (72) Inventor(es): ALZIR AZEVEDO BATISTA; KATIA MARA DE OLIVEIRA; ANGÉLICA ELLEN GRAMINHA; MÁRCIA REGINA COMINETTI (57) Resumo: PROCESSO DE OBTENÇÃO DE COMPOSTOS DE RUTÊNIO, COMPOSTOS DE RUTÊNIO OBTIDOS E SEU USO. A presente invenção descreve um processo de obtenção de compostos de rutênio compreendendo lapachol ou lausona, ligantes bipiridínicos e fosfínicos e um contra íon em suas estruturas, que se caracterizam pela reação de precursores do tipo cis-[RuCI2(P)(N-N)] e cis-[RuCI2(P)2], em que P corresponde a fosfinas e N-N à 2,2?-bipiridina e derivados, utilizando solventes orgânicos como diclorometano, metanol, éter etílico e água. Ainda, a presente invenção refere-se aos compostos de rutênio obtidos e seu uso para o preparo de um medicamento para tratar câncer de mama, próstata e pulmão, preferencialmente câncer de mama.(54) Title: PROCESS OF OBTAINING RUTENE COMPOUNDS, RUTENE COMPOUNDS OBTAINED AND THEIR USE (51) Int. Cl .: C07F 15/00; A61P 35/00 (73) Holder (s): UNIVERSIDADE FEDERAL DE SÃO CARLOS FOUNDATION (72) Inventor (s): ALZIR AZEVEDO BATISTA; KATIA MARA DE OLIVEIRA; ANGÉLICA ELLEN GRAMINHA; MÁRCIA REGINA COMINETTI (57) Abstract: PROCESS OF OBTAINING RUTENE COMPOUNDS, RUTENE COMPOUNDS OBTAINED AND THEIR USE. The present invention describes a process for obtaining ruthenium compounds comprising lapachol or lausone, bipyridine and phosphine ligands and a counter ion in their structures, which are characterized by the reaction of precursors of the cis- [RuCI2 (P) (NN)] type and cis- [RuCI2 (P) 2], where P corresponds to phosphines and NN to 2,2? -bipyridine and derivatives, using organic solvents such as dichloromethane, methanol, ethyl ether and water. In addition, the present invention relates to the ruthenium compounds obtained and its use for the preparation of a drug to treat breast, prostate and lung cancer, preferably breast cancer.

Controle 0,01 μΜ 0,06 μΜ 1 μΜ 5μΜ 15 μΜControl 0.01 μΜ 0.06 μΜ 1 μΜ 5μΜ 15 μΜ

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PROCESSO DE OBTENÇÃO DE COMPOSTOS DE RUTÊNIO, COMPOSTOS DE RUTÊNIO OBTIDOS E SEU USOPROCESS OF OBTAINING RUTENE COMPOUNDS, RUTENE COMPOUNDS OBTAINED AND THEIR USE

Campo da invenção:Field of the invention:

[001] A presente invenção se insere no campo de aplicação da biologia, da farmácia e da medicina, mais especificamente, da química bioinorgânica, uma vez que se refere a um processo de obtenção de compostos de rutênio compreendendo ligantes bifosfínicos, bipiridínicos, lapachol ou lausona, assim como os compostos obtidos e o seu uso.[001] The present invention falls within the field of application of biology, pharmacy and medicine, more specifically, bioinorganic chemistry, since it refers to a process for obtaining ruthenium compounds comprising biphosphine, bipyridine, lapachol or lausone, as well as the compounds obtained and their use.

Fundamentos da invenção:Fundamentals of the invention:

[002] A utilização de compostos metálicos para o tratamento de câncer se desenvolveu a partir da descoberta das propriedades antitumorais da cisplatina, que atualmente é um dos fármacos mais empregado no tratamento do câncer.[002] The use of metallic compounds for the treatment of cancer was developed from the discovery of the antitumor properties of cisplatin, which is currently one of the most used drugs in the treatment of cancer.

[003] A cisplatina mostrou-se muito ativa principalmente para câncer de testículo, ovário, bexiga e cabeça. Contudo alguns inconvenientes foram observados ao longo do tratamento com este fármaco, tais como problemas de resistência e efeitos colaterais dentre nefrotoxicidade, ototoxicidade, náuseas, vômitos, entre outros.[003] Cisplatin was shown to be very active mainly for testicular, ovarian, bladder and head cancer. However, some inconveniences were observed during the treatment with this drug, such as resistance problems and side effects among nephrotoxicity, ototoxicity, nausea, vomiting, among others.

[004] Diante disso, para minimizar os problemas de resistência associados ao uso deste fármaco de platina, estudos propuseram o emprego de outros metais de transição como agentes antitumorais e um dos metais que tem se destacado é o rutênio.[004] Therefore, in order to minimize the resistance problems associated with the use of this platinum drug, studies have proposed the use of other transition metals as antitumor agents and one of the metals that has stood out is ruthenium.

[005] O rutênio é altamente versátil para o design de novos fármacos, visto que pode apresentar vários estados de oxidação, podendo ir de -II (d¹⁰) a +VIII (d⁰) , sendo os mais comuns +II, +III e +IV em condições fisiológicas, além[005] Ruthenium is highly versatile for the design of new drugs, since it can present several oxidation states, ranging from -II (d ¹⁰ ) to + VIII (d ⁰ ), the most common ones being + II, + III and + IV in physiological conditions, in addition to

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2/20 da geometria octaédrica, que permite a coordenação de diferentes ligantes, podendo avaliar a reatividade química em termos de cinética (velocidade na troca de ligantes) e termodinâmica (forças de ligação metal-ligante, potencial redox, etc.).2/20 of octahedral geometry, which allows the coordination of different ligands, being able to evaluate chemical reactivity in terms of kinetics (speed in the exchange of ligands) and thermodynamics (metal-ligand binding forces, redox potential, etc.).

[006] Vale ressaltar que não só o metal desempenha papel importante na busca por novos fármacos, os ligantes também podem ser fundamentais para a atividade biológica, auxiliando no reconhecimento do alvo para a atividade.[006] It is noteworthy that not only does metal play an important role in the search for new drugs, binders can also be fundamental for biological activity, helping to recognize the target for the activity.

[007] Desse modo, uma classe muito interessante para ligantes são as quinonas, produtos naturais que estão amplamente distribuídos na natureza e apresentam uma variedade de funções no organismo. Essas substâncias apresentam propriedades importantes, tais como: microbicidas, tripanossomicidas, viruscidas, antitumorais e inibidoras de sistemas celulares reparadores, pela formação de espécies bioativas derivadas do oxigênio (O2, OH, O2^- e H2O2).[007] Thus, a very interesting class for binders are quinones, natural products that are widely distributed in nature and have a variety of functions in the body. These substances have important properties, such as: microbicides, trypanosomicides, virus acids, antitumor and inhibitors of repairing cellular systems, by the formation of bioactive species derived from oxygen (O2, OH, O2 ^- and H2O2).

[008] O interesse nestas substâncias intensificouse nos últimos anos visto os relatos da avaliação biológica de quinonas sintéticas e naturais. Importantes fármacos anticancerígenos como a daunorrubicina e mitomicina C apresentam o grupo quinona como parte da sua estrutura. De acordo com a sua estrutura molecular, as quinonas são divididas em três grupos: benzoquinonas - um anel benzênico, naftoquinonas - um anel naftalênico e antraquinonas - um anel antracênico linear ou angular.[008] The interest in these substances has intensified in recent years, given the reports of the biological evaluation of synthetic and natural quinones. Important anticancer drugs such as daunorubicin and mitomycin C present the quinone group as part of its structure. According to their molecular structure, quinones are divided into three groups: benzoquinones - a benzene ring, naphthoquinones - a naphthalene ring and anthraquinones - a linear or angular anthracene ring.

[009] Dentre as naftoquinonas naturais destaca-se o lapachol (2-hidroxi-3-(3-metil-but-2-en-1-il)-1,4naftoquinona), encontrado em árvores do gênero Tabebuia[009] Among the natural naphthoquinones stands out lapachol (2-hydroxy-3- (3-methyl-but-2-en-1-yl) -1,4naphthoquinone), found in trees of the genus Tabebuia

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3/20 avellanedeae, sendo facilmente extraído da serragem de várias espécies de ipê, planta do Brasil e da fronteira com a Argentina.3/20 avellanedeae, being easily extracted from the sawdust of several species of ipe, plant from Brazil and from the border with Argentina.

[010] Outra naftoquinona que se destaca é a lausona (2-hidroxi-1,4-naftoquinona), a qual é extraída das folhas de henna, principalmente do gênero Lawsonia Alba. Estas naftoquinonas apresentam muitas atividades biológicas, e entre os efeitos citotóxicos mais proeminentes podem-se destacar as propriedades anticancerígenas e antitripanossomicida.[010] Another naphthoquinone that stands out is lausone (2-hydroxy-1,4-naphthoquinone), which is extracted from henna leaves, mainly from the Lawsonia Alba genus. These naphthoquinones have many biological activities, and among the most prominent cytotoxic effects can be highlighted the anti-cancer and anti-trypanosomicidal properties.

[011] O principal interesse nestas naftoquinonas reside na capacidade que elas apresentam de induzir o estresse oxidativo através da formação intracelular de espécies reativas de oxigênio, como o peróxido de hidrogênio (H2O2), o superóxido (O2^-) e o radical hidroxila (HO). Estas espécies apresentam a capacidade de danificar componentes celulares importantes, interferindo na divisão celular e dessa forma podem induzir a apoptose. Essas naftoquinonas também apresentam a capacidade de inibir as topoisomerases I e II, que são enzimas fundamentais para o funcionamento normal da célula, pois elas mantem a integridade do DNA, reparando-o quando danificado. Desta forma, qualquer alteração no balanço entre estas enzimas é suficiente para induzir a apoptose.[011] The main interest in these naphthoquinones lies in their ability to induce oxidative stress through the intracellular formation of reactive oxygen species, such as hydrogen peroxide (H2O2), superoxide (O2 ^- ) and the hydroxyl radical (HO ). These species have the ability to damage important cellular components, interfering with cell division and thus can induce apoptosis. These naphthoquinones also have the ability to inhibit topoisomerases I and II, which are fundamental enzymes for the normal functioning of the cell, as they maintain the integrity of DNA, repairing it when damaged. Thus, any change in the balance between these enzymes is sufficient to induce apoptosis.

[012] Desse modo, uma vez que os fármacos atuais no mercado usados no tratamento de câncer apresentam inconvenientes tais como efeitos colaterais e problemas de resistência, a presente invenção propõe um processo de obtenção de compostos de rutênio compreendendo como ligantes os produtos lapachol e lausona, bem como ligantes[012] Thus, since the current drugs on the market used in the treatment of cancer have drawbacks such as side effects and resistance problems, the present invention proposes a process for obtaining ruthenium compounds comprising lapachol and lausone products as binders as well as binders

Petição 870160036772, de 15/07/2016, pág. 7/41Petition 870160036772, of 7/15/2016, p. 7/41

4/20 bipiridínicos e fosfínicos.4/20 bipyridines and phosphines.

[013] Assim, os compostos desenvolvidos apresentam elevada toxicidade frente a linhagens celulares de câncer de mama, próstata e pulmão, principalmente frente ao câncer de mama. Portanto, uma vez que este último é o mais frequente em mulheres, sendo a maior causa de morte por câncer nas mulheres em todo o mundo, com cerca de 52 0 mil mortes estimadas por ano, os compostos de rutênio aqui obtidos são muito importantes para buscar contornar esse mal.[013] Thus, the compounds developed have high toxicity against breast, prostate and lung cancer cell lines, especially against breast cancer. Therefore, since the latter is the most frequent in women, being the major cause of cancer death in women worldwide, with an estimated 52,000 deaths per year, the ruthenium compounds obtained here are very important for seek to get around this evil.

Estado da técnica:State of the art:

[014] [014] Alguns documentos Some documents do of estado state da gives técnica technique descrevem compostos de rutênio describe ruthenium compounds que what apresentam atividade have activity antitumoral. antitumor. [015] [015] O documento BR 10 The document BR 10 2013 2013 033604 1 033604 1 A2 A2 descreve describe composições compositions farmacêuticas à base pharmaceutical-based de in derivados derivatives de in rutênio ruthenium

divalente, com fórmula geral [Ru(AA)(dppb)(bipy)]PF6, onde AA equivale a aminoácidos, dppb equivale a 1,4'bís(difenilfosfina)butano) e N-N equivale a ligantes bipiridínicos, bem como o uso das mesmas.divalent, with general formula [Ru (AA) (dppb) (bipy)] PF6, where AA is equivalent to amino acids, dppb is equivalent to 1,4'bis (diphenylphosphine) butane) and NN is equivalent to bipyridine ligands, as well as the use of same.

[016] Diferentemente da presente invenção, os compostos de rutênio descritos neste documento apresentam valores de IC50 maiores do que os valores encontrados para os compostos descritos na presente invenção, conforme pode ser observado na Tabela 1 abaixo.[016] Unlike the present invention, the ruthenium compounds described in this document have IC 50 values greater than the values found for the compounds described in the present invention, as can be seen in Table 1 below.

TABELA 1. Valores de IC50 (μΜ) para os complexos de rutênio contendo aminoácidos, na linhagem tumoral MDA-MB-231.TABLE 1. IC50 values (μΜ) for ruthenium complexes containing amino acids, in the tumor line MDA-MB-231.

Compostos Compounds IC50 (μΜ) IC50 (μΜ) [Ru(Gly)(dppb)(bipy)]PF6 [Ru (Gly) (dppb) (bipy)] PF6 (14,5 ± 0,4) (14.5 ± 0.4) [Ru(L-Ala)(dppb)(bipy)]PF6 [Ru (L-Wing) (dppb) (bipy)] PF6 (28,5 ± 5,2) (28.5 ± 5.2)

Petição 870160036772, de 15/07/2016, pág. 8/41Petition 870160036772, of 7/15/2016, p. 8/41

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[Ru(L-Ser)(dppb)(bipy)]PF6 [Ru (L-Ser) (dppb) (bipy)] PF6 (24,1 ± 3,6) (24.1 ± 3.6) [Ru(L-Val)(dppb)(bipy)]PF6 [Ru (L-Val) (dppb) (bipy)] PF6 (26,2 ± 4,0) (26.2 ± 4.0) [Ru(L-Met)(dppb)(bipy)]PF6 [Ru (L-Met) (dppb) (bipy)] PF6 (5,0 ± 1,5) (5.0 ± 1.5) [Ru(L-Try)(dppb)(bipy)]PF6 [Ru (L-Try) (dppb) (bipy)] PF6 (21,3 ± 2,5) (21.3 ± 2.5) [Ru(L-Trp)(dppb)(bipy)]PF6 [Ru (L-Trp) (dppb) (bipy)] PF6 (28,2 ± 1,5) (28.2 ± 1.5)

[017] Desta forma, como os compostos contendo lapachol e lausona da presente invenção apresentam-se mais ativos, eles são candidatos mais promissores a novos metalofármacos.[017] Thus, as the compounds containing lapachol and lausone of the present invention are more active, they are more promising candidates for new metallopharmaceuticals.

[018] O resumo apresentado em congresso intitulado Antímetastatíc properties of a new ruthenium complex with lapachol, a natural product”, de Ribeiro et al (2013), descreve a avaliação da atividade citotóxica de compostos de rutênio contendo lapachol em suas estruturas. Os compostos descritos neste resumo apresentam duas monofosfinas como ligantes, logo, estruturas diferentes dos compostos da presente invenção.[018] The summary presented at a conference entitled Antímetastatíc properties of a new ruthenium complex with lapachol, a natural product ”, by Ribeiro et al (2013), describes the evaluation of the cytotoxic activity of ruthenium compounds containing lapachol in their structures. The compounds described in this summary have two monophosphines as linkers, therefore, different structures from the compounds of the present invention.

[019] Diferentemente, a presente invenção relata a atividade citotóxica dos compostos de rutênio em diferentes linhagens tumorais, sendo que na linhagem MDA-MB-231 os compostos mostraram-se mais ativos, apresentando uma maior seletividade para as células tumorais, se comparado com as normais.[019] Differently, the present invention reports the cytotoxic activity of ruthenium compounds in different tumor lines, and in the MDA-MB-231 line the compounds were more active, showing a higher selectivity for tumor cells, compared to normal ones.

[020] O composto [Ru(lau)(dppf)(bipy)]PF6 mostrouse 8 vezes mais ativos contra a linhagem tumoral MDA-MB-231 do que na linhagem normal FGH. Já o composto [Ru(lau)(dppb)(fen)]PF6 mostrou-se 23 vezes mais ativo contra a linhagem tumoral MDA-MB-231 do que na linhagem normal L929.[020] The compound [Ru (lau) (dppf) (bipy)] PF6 was shown to be 8 times more active against the tumor line MDA-MB-231 than in the normal FGH line. The compound [Ru (lau) (dppb) (fen)] PF6 was 23 times more active against the tumor line MDA-MB-231 than in the normal line L929.

[021] O fármaco cisplatina é 0,61 vezes mais ativo[021] The drug cisplatin is 0.61 times more active

Petição 870160036772, de 15/07/2016, pág. 9/41Petition 870160036772, of 7/15/2016, p. 9/41

6/20 na linhagem MDA-MB-231 do que na linhagem FGH e 8 vezes mais ativo do que na linhagem L929. Diante disso, verificase que a maioria dos compostos de rutênio sintetizados são mais seletivos para as células tumorais do que o fármaco de referência usado (cisplatina), apresentando, também, melhor índice de seletividade que o fármaco comercial.6/20 in the MDA-MB-231 line than in the FGH line and 8 times more active than in the L929 line. Therefore, it appears that most of the synthesized ruthenium compounds are more selective for tumor cells than the reference drug used (cisplatin), also showing a better selectivity index than the commercial drug.

[022] Portanto, nenhum dos documentos encontrados no estado da técnica descreve compostos de rutênio compreendendo ligantes bifosfínicos, bipiridínicos, lapachol ou lausona, assim como os compostos obtidos e seu uso, tais como propostos pela presente invenção.[022] Therefore, none of the documents found in the state of the art describes ruthenium compounds comprising bisphosphine, bipyridine, lapachol or lausone ligands, as well as the compounds obtained and their use, as proposed by the present invention.

Breve descrição da invenção:Brief description of the invention:

[023] A presente invenção descreve um processo de obtenção de compostos de rutênio compreendendo lapachol ou lausona, ligantes bipiridínicos e fosfínicos e um contra íon em suas estruturas, que se caracterizam pela reação de precursores do tipo cis-[RuCl2(P)(N-N)] e cis-[RuCl2(P)2], em que P corresponde a fosfinas e N-N à 2,2'-bipiridina e derivados, utilizando solventes orgânicos como diclorometano, metanol, éter etílico e água. Ainda, a presente invenção refere-se aos compostos de rutênio obtidos e seu uso para o preparo de um medicamento para tratar câncer de mama, próstata e pulmão, preferencialmente câncer de mama.[023] The present invention describes a process for obtaining ruthenium compounds comprising lapachol or lausone, bipyridine and phosphine ligands and a counter ion in their structures, which are characterized by the reaction of precursors of the cis- [RuCl2 (P) type (NN )] and cis- [RuCl2 (P) 2], where P corresponds to phosphines and NN to 2,2'-bipyridine and derivatives, using organic solvents such as dichloromethane, methanol, ethyl ether and water. In addition, the present invention relates to the ruthenium compounds obtained and its use for the preparation of a drug to treat breast, prostate and lung cancer, preferably breast cancer.

Breve descrição das figuras:Brief description of the figures:

[024] Para obter uma total e completa visualização do objeto desta invenção, são apresentadas as figuras as quais se faz referências, conforme se segue.[024] In order to obtain a total and complete visualization of the object of this invention, the figures to which reference is made are presented, as follows.

[025] A Figura 1 representa um conjunto de imagens da morfologia celular da linhagem MDA-MB-231 tratada com o[025] Figure 1 represents a set of images of cell morphology of the MDA-MB-231 lineage treated with

Petição 870160036772, de 15/07/2016, pág. 10/41Petition 870160036772, of 7/15/2016, p. 10/41

7/20 composto [Ru(lau)(dppf)(bipy)]PF6.7/20 compound [Ru (lau) (dppf) (bipy)] PF6.

[026] A Figura 2 representa graficamente os espectros de titulação espectroscópica (A) e os espectros de dicroísmo circular (B) para avaliação da interação do complexo [Ru(lau)(dppf)(bipy)]PF6 com ct-DNA.[026] Figure 2 graphically represents the spectroscopic titration spectra (A) and the circular dichroism spectra (B) to evaluate the interaction of the [Ru (lau) (dppf) (bipy)] PF6 complex with ct-DNA.

Descrição detalhada da invenção:Detailed description of the invention:

[027] A presente invenção refere-se a um processo de obtenção de compostos de rutênio que compreende as etapas de:[027] The present invention relates to a process for obtaining ruthenium compounds that comprises the steps of:

a) Solubilizar os precursores em uma mistura de diclorometano e metanol em uma proporção de 1:1 em agitação e temperatura ambiente;a) Solubilize the precursors in a mixture of dichloromethane and methanol in a ratio of 1: 1 under stirring and at room temperature;

b) Adicionar o ligante lapachol ou lausona, junto com uma base, tal como trietilamina, NaOH ou KOH, e o contra íon sob agitação;b) Add the lapachol or lausone binder, together with a base, such as triethylamine, NaOH or KOH, and the counter ion under agitation;

c) Reduzir o volume da solução;c) Reduce the volume of the solution;

d) Precipitar os compostos com água destilada;d) Precipitate the compounds with distilled water;

e) Filtrar os sólidos de coloração escura obtidos; ee) Filter the obtained dark colored solids; and

f) Lavar os sólidos com água destilada e éter etílico e secar sob vácuo.f) Wash the solids with distilled water and ethyl ether and dry under vacuum.

[028] Em uma modalidade preferida da invenção, utilizou-se, na etapa “a”, 1 g de precursores que foram solubilizados em uma mistura de 1 L de diclorometano e metanol, em uma proporção de (1:1).[028] In a preferred embodiment of the invention, in step "a", 1 g of precursors were used, which were solubilized in a mixture of 1 L of dichloromethane and methanol, in a ratio of (1: 1).

[029] Os referidos precursores compreendem as estruturas I e II:[029] These precursors comprise structures I and II:

cis-[RuCl2(P)(N-N)] (I) cis-[RuCl2(P)2] (II) em que:cis- [RuCl2 (P) (N-N)] (I) cis- [RuCl2 (P) 2] (II) where:

P é uma fosfina; eP is a phosphine; and

Petição 870160036772, de 15/07/2016, pág. 11/41Petition 870160036772, of 7/15/2016, p. 11/41

8/208/20

N-N é uma 2,2'-bipiridina e derivados.N-N is a 2,2'-bipyridine and derivatives.

[030] As fosfinas são selecionadas do grupo que consiste em bis(difenilfosfina)metano; 1,2bís(difenilfosfina)etano; l,3-bis(difenilfosfina)propano; 1,Ί-bís(difenilfosfina)butano; e 1,1'bís(difenilfosfina)ferroceno.[030] Phosphines are selected from the group consisting of bis (diphenylphosphine) methane; 1,2 bis (diphenylphosphine) ethane; 1,3-bis (diphenylphosphine) propane; 1, Ί-bis (diphenylphosphine) butane; and 1,1'bis (diphenylphosphine) ferrocene.

[031] Em uma modalidade preferida da invenção, na etapa b, adiciona-se 0,4 g do ligante desejado (lapachol ou lausona) , 400 pL de trietilamina e 0,5 g do contra ion desejado na mistura obtida na etapa a, que foi mantida sob agitação constante e temperatura ambiente durante 12 horas.[031] In a preferred embodiment of the invention, in step b, 0.4 g of the desired binder (lapachol or lausone), 400 pL of triethylamine and 0.5 g of the desired counter ion are added to the mixture obtained in step a, which was kept under constant stirring and at room temperature for 12 hours.

[032] A proporção ligante:precursor é de 1:1,2; a proporção ligante: trietilamina é de 1:1 e a proporção de precursor:contra ion é de 1:2.[032] The binder: precursor ratio is 1: 1.2; the binder: triethylamine ratio is 1: 1 and the precursor: against ion ratio is 1: 2.

[033] Os referidos contra ions são selecionados do grupo que consiste em ion hexafluoreto de fósforo (KPF6) , cloreto, perclorato, tetrafluoroborato (BF/), acetato, sacarinato ou nitrato.[033] Those against ions are selected from the group consisting of phosphorus hexafluoride ion (KPF6), chloride, perchlorate, tetrafluoroborate (BF /), acetate, saccharate or nitrate.

[034] Posteriormente, na etapa c, o volume da solução obtida na etapa anterior foi rotaevaporado e, na etapa d, os compostos foram precipitados com água destilada em quantidade suficiente.[034] Subsequently, in step c, the volume of the solution obtained in the previous step was rotated and, in step d, the compounds were precipitated with enough distilled water.

[035] Assim, na etapa d, os sólidos de coloração escura obtidos são filtrados, preferencialmente em funil de placa sinterizada.[035] Thus, in step d, the dark colored solids obtained are filtered, preferably in a sintered plate funnel.

[036] Desse modo, na etapa e, os sólidos obtidos são lavados com água destilada e, na etapa f, secos sob vácuo.[036] Thus, in step e, the solids obtained are washed with distilled water and, in step f, dried under vacuum.

[037] Adicionalmente, a presente invenção se[037] Additionally, the present invention

Petição 870160036772, de 15/07/2016, pág. 12/41Petition 870160036772, of 7/15/2016, p. 12/41

9/20 refere aos compostos de rutênio obtidos pelo processo aqui descrito, os quais compreendem estrutura III e IV:9/20 refers to the ruthenium compounds obtained by the process described here, which comprise structure III and IV:

[Ru(L)(P)(N-N)]+ (III) [Ru(L)(P)2]+ (IV) em que:[Ru (L) (P) (N-N)] + (III) [Ru (L) (P) 2] + (IV) where:

Ru é o rutênio;Ru is ruthenium;

P é uma fosfina;P is a phosphine;

L é o lapachol ou lausona; eL is lapachol or lausone; and

As fosfinas são selecionadas do grupo que em bis(difenilfosfina)metano; 1,2[038] consiste bis(difenilfosfina)etano; 1,3-bis(difenilfosfina)propano; 1,4-bis(difenilfosfina)butano; e 1,1'bis(difenilfosfina)ferroceno.The phosphines are selected from the group that in bis (diphenylphosphine) methane; 1.2 [038] consists of bis (diphenylphosphine) ethane; 1,3-bis (diphenylphosphine) propane; 1,4-bis (diphenylphosphine) butane; and 1,1'bis (diphenylphosphine) ferrocene.

[039] Em uma modalidade preferida da presente invenção, o referido composto de rutênio compreende estrutura V:[039] In a preferred embodiment of the present invention, said ruthenium compound comprises structure V:

[Ru(lau)(dppf)(bipy)]PF6 (V) em que:[Ru (lau) (dppf) (bipy)] PF6 (V) where:

Ru é o rutênio;Ru is ruthenium;

lau é a lausona;lau is lausona;

dppf é o 1,1'-bis(difenilfosfina)ferroceno; bipy é a 2,2'-bipiridina; e o contra íon é o PF6.dppf is 1,1'-bis (diphenylphosphine) ferrocene; bipy is 2,2'-bipyridine; and the counter ion is PF6.

[040] A presente invenção é explicada em mais detalhes pelos exemplos a seguir, porém não é limitada pelos referidos exemplos.[040] The present invention is explained in more detail by the following examples, but is not limited by said examples.

Exemplos da Invenção:Examples of the Invention:

- Compostos de fórmula geral [Ru(L)(P)(N-N)] + :- Compounds of general formula [Ru (L) (P) (N-N)] +:

[041] Os compostos com formula geral [Ru(L)(P)(NPetição 870160036772, de 15/07/2016, pág. 13/41[041] Compounds with general formula [Ru (L) (P) (NPetition 870160036772, of 7/15/2016, page 13/41

10/2010/20

N)]+, onde L = lapachol (lap) ou lausona (lau), P = 1,2'bís(difenilfosfina)etano (dppe), 1,4bís(difenilfosfina)butano (dppb) e 1,1'bis(difenilfosfina)ferroceno (dppf), N-N = 2,2'-bipiridina (bipy), 4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina (mebipy), 1,10fenantrolina (fen).N)] +, where L = lapachol (lap) or lausone (lau), P = 1,2'bis (diphenylphosphine) ethane (dppe), 1,4bis (diphenylphosphine) butane (dppb) and 1,1'bis ( diphenylphosphine) ferrocene (dppf), NN = 2,2'-bipyridine (bipy), 4,4'-dimethyl-2,2'-bipyridine (mebipy), 1,10-phenanthroline (phen).

[042] Em um Schlenk contendo 50 mL de uma mistura de diclorometano/metanol (1:1) foi adicionado (50 mg; 0,13 mmol) do precursor cis-[RuCl2(P)(bipy)], (20, 00 mg; 0,16 mmol) do ligante lapachol, 50 pL de trietilamina e (25 mg; 0,27 mmol) de KPF6. A reação foi mantida por 12 horas em agitação.[042] In a Schlenk containing 50 mL of a mixture of dichloromethane / methanol (1: 1) was added (50 mg; 0.13 mmol) of the precursor cis- [RuCl2 (P) (bipy)], (20, 00 mg; 0.16 mmol) of the lapachol binder, 50 µl of triethylamine and (25 mg; 0.27 mmol) of KPF6. The reaction was kept under stirring for 12 hours.

[043] Posteriormente, o volume de solvente foi reduzido restando praticamente a solução metanólica, e o composto de coloração escura foi precipitado com água. O produto obtido foi lavado com água destilada e éter etílico com o intuito de eliminar excesso de ligante. O mesmo procedimento foi empregado para a síntese dos compostos contendo a dppb, dppf, mebipy e fen. Rendimento: ~ 70%.[043] Subsequently, the volume of solvent was reduced, leaving practically the methanolic solution, and the dark colored compound was precipitated with water. The product obtained was washed with distilled water and ethyl ether in order to eliminate excess binder. The same procedure was used for the synthesis of compounds containing dppb, dppf, mebipy and fen. Yield: ~ 70%.

- Compostos de fórmula geral [Ru(L)(P)2]PFe:- Compounds of general formula [Ru (L) (P) 2] PFe:

[044] Os compostos com fórmula geral [Ru(L)(P)2]PF6 foram obtidos a partir da reação com os seguintes precursores: cis-[RuCl2(dppm)2] e cis[RuCl2(dppe)2], onde dppm = bis(difenilfosfina)metano e dppe = 1,2-bis(difenilfosfina)etano.[044] The compounds with the general formula [Ru (L) (P) 2] PF6 were obtained from the reaction with the following precursors: cis- [RuCl2 (dppm) 2] and cis [RuCl2 (dppe) 2], where dppm = bis (diphenylphosphine) methane and dppe = 1,2-bis (diphenylphosphine) ethane.

[045] Em um recipiente do tipo Schlenk contendo 30 mL de metanol sob atmosfera inerte foram adicionados (24 mg; 0,14 mmol) de lausona e 50 pL de trietilamina para desprotonação do mesmo.[045] In a Schlenk-type container containing 30 ml of methanol under an inert atmosphere, lausone (24 mg; 0.14 mmol) and 50 pL of triethylamine were added for deprotonation.

[046] O sistema foi mantido em agitação por 15[046] The system was kept under agitation for 15

Petição 870160036772, de 15/07/2016, pág. 14/41Petition 870160036772, of 7/15/2016, p. 14/41

11/20 minutos e posteriormente foram adicionados (100 mg; 0,11 mmol) do precursor cis-[RuCl2(dppm)2] e (39 mg; 0,21 mmol) de KPF6. A solução que inicialmente era avermelhada tornouse esverdeada. A reação foi mantida em refluxo por 18 horas e foi observado a formação de um precipitado de coloração escura, o qual foi filtrado e lavado com água destilada, éter etílico e seco sob vácuo. Rendimento: 70 %.11/20 minutes and then (100 mg; 0.11 mmol) of the precursor cis- [RuCl2 (dppm) 2] and (39 mg; 0.21 mmol) of KPF6 were added. The solution that was initially reddish turned greenish. The reaction was kept at reflux for 18 hours and the formation of a dark colored precipitate was observed, which was filtered and washed with distilled water, ethyl ether and dried under vacuum. Yield: 70%.

[047] O mesmo procedimento foi realizado para a síntese empregando o lapachol e para o precursor contendo a dppe. Rendimento: ~77%.[047] The same procedure was carried out for the synthesis using lapachol and for the precursor containing the dppe. Yield: ~ 77%.

[048] Adicionalmente, a presente invenção referese ao uso dos referidos compostos de rutênio para ser no preparo de um medicamento para tratar câncer de mama, próstata e pulmão, uma vez que os referidos compostos de rutênio apresentam elevada toxidade frente a linhagens celulares MDA-MB-231 (câncer de mama), DU-145 (câncer de próstata), e A549 (câncer de pulmão), preferencialmente frente à linhagem MDA-MB-231.[048] Additionally, the present invention relates to the use of said ruthenium compounds to be used in the preparation of a drug to treat breast, prostate and lung cancer, since the said ruthenium compounds have high toxicity against MDA- MB-231 (breast cancer), DU-145 (prostate cancer), and A549 (lung cancer), preferably compared to the MDA-MB-231 strain.

[049] Ainda, em uma modalidade preferida, a presente invenção refere-se ao uso do composto de rutênio de estrutura V para ser no preparo de um medicamento para tratar câncer de mama.[049] Still, in a preferred embodiment, the present invention relates to the use of the ruthenium compound of structure V to be in the preparation of a medication to treat breast cancer.

[050] Para avaliar o potencial dos compostos de rutênio da presente invenção, a seguir são apresentados os resultados dos testes realizados.[050] To evaluate the potential of the ruthenium compounds of the present invention, the results of the tests performed are presented below.

Testes Realizados:Tests:

- Espectroscopía de ressonância magnética nuclear (¹H, ¹³C e ³¹P {¹H}) :- Nuclear magnetic resonance spectroscopy ( ¹ H, ¹³ C and ³¹ P { ¹ H}):

[051] Inicialmente foram feitos experimentos de[051] Initially, experiments were carried out

RMN ³¹P{¹H} dos compostos sintetizados, empregando um ³¹ P { ¹ H} NMR of the synthesized compounds, employing a

Petição 870160036772, de 15/07/2016, pág. 15/41Petition 870160036772, of 7/15/2016, p. 15/41

12/20 capilar contendo em seu interior solução de D2O. Os compostos contendo a bifosfina dppb e os ligantes bipiridínicos bipy, mebipy e fen apresentaram comportamento semelhante, apresentando dois dubletos no espectro de RMN ³¹P{¹H}. A presença dos dois dubletos evidencia que os átomos de fósforos estão trans a átomos diferentes, ou seja, eles não são equivalentes.12/20 capillary containing D2O solution inside. The compounds containing biphosphine dppb and bipyridine ligands bipy, mebipy and fen showed similar behavior, presenting two doublets in the ³¹ P { ¹ H} NMR spectrum. The presence of the two doublets shows that the phosphorus atoms are trans to different atoms, that is, they are not equivalent.

[052] Os compostos obtidos contendo as bifosfinas dppe e dppf e a bipy apresentaram um comportamento um pouco diferente, apresentando no espectro de RMN ³¹P{¹H} quatro dubletos. A presença desses sinais pode ser explicada devido à formação de isômeros de ligação.[052] The compounds obtained containing the bisphosphins dppe and dppf and bipy showed a slightly different behavior, with four doublets in the ³¹ P { ¹ H} NMR spectrum. The presence of these signals can be explained due to the formation of binding isomers.

[053] Os compostos contendo as duas bifosfinas, dppm e dppe mostraram-se diferentes dos demais, sendo observado no RMN ³¹P{¹H} um conjunto de quatro sinais, sendo cada um referente a um átomo de fósforo.[053] The compounds containing the two bisphosphines, dppm and dppe were shown to be different from the others, with a set of four signals being observed in the ³¹ P { ¹ H} NMR, each referring to a phosphorus atom.

[054] Os dados de RMN de ¹H e ¹³C foram muito importantes na elucidação estrutural dos compostos obtidos.[054] The ¹ H and ¹³ C NMR data were very important in the structural elucidation of the compounds obtained.

- Eletroquímica:- Electrochemistry:

[055] As medidas foram realizadas em uma célula eletroquímica convencional de três eletrodos: um eletrodo de referência (Ag/AgCl), e eletrodos de trabalho e auxiliar de platina, mergulhados em solução de eletrólito de PTBA (0,1 mol L^-1 em CH2CB).[055] The measurements were performed in a conventional electrochemical cell with three electrodes: a reference electrode (Ag / AgCl), and platinum working and auxiliary electrodes, immersed in a PTBA electrolyte solution (0.1 mol L ^-1 in CH2CB).

[056] Todos os compostos apresentaram processos de oxidação Ru^II/Ru^III superiores a 1000 mV, indicando uma alta estabilidade dos mesmos.[056] All compounds showed oxidation processes Ru ^II / Ru ^III greater than 1000 mV, indicating a high stability of the same.

- Análise Elementar (C, H e N):- Elementary Analysis (C, H and N):

[057] As determinações dos teores de carbono, hidrogênio e oxigênio estão de acordo com a estrutura[057] The determinations of the levels of carbon, hydrogen and oxygen are in accordance with the structure

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13/20 proposta para todos os compostos sintetizados, conforme apresentado na Tabela 2 abaixo.13/20 proposal for all synthesized compounds, as shown in Table 2 below.

Tabela 2. Dados percentuais para os teores de C, H e N, teóricos e experimentais, para os compostos contendo lapachol e/ou lausonaTable 2. Percentage data for C, H and N, theoretical and experimental, for compounds containing lapachol and / or lausone

Compostos Compounds % C % Ç % % H H % % N N (56, 68) (56, 68) (4, (4, 53) 53) (2, (2, 45) 45) [Ru(lap)(dppb)(bipy)]PF6 [Ru (lap) (dppb) (bipy)] PF6 57,12 57.12 4, 4, 21 21 2, 2, 52 52 [Ru(lap)(dppb)(mebipy)] [Ru (lap) (dppb) (mebipy)] (60,16) (60.16) (4, (4, 87) 87) (2, (2, 55) 55) PF6 PF6 60,09 60.09 5, 5, 17 17 2, 2, 64 64 (59,41) (59.41) (4, (4, 62) 62) (2, (2, 52) 52) [Ru(lap)(dppb)(fen)]PF6 [Ru (lap) (dppb) (fen)] PF6 59,36 59.36 4, 4, 56 56 2, 2, 63 63 (53,14) (53.14) (3, (3, 95) 95) (2, (2, 51) 51) [Ru(lau)(dppb)(bipy)]PF6 [Ru (lau) (dppb) (bipy)] PF6 53,36 53.36 3, 3, 80 80 2, 2, 62 62 [Ru(lau)(dppb)(mebipy)] [Ru (lau) (dppb) (mebipy)] (56,01) (56.01) (4, (4, 30) 30) (2, (2, 58) 58) PF6 PF6 55,77 55.77 4, 4, 03 03 2, 2, 70 70 (58,36) (58.36) (4, (4, 80) 80) (2, (2, 65) 65) [Ru(lau)(dppb)(fen)]PF6 [Ru (lau) (dppb) (fen)] PF6 57,90 57.90 4, 4, 29 29 2, 2, 78 78 (61,24) (61.24) (4, (4, 39) 39) [Ru(lau)(dppe)2]PF6 [Ru (lau) (dppe) 2] PF6 61,26 61.26 4, 4, 44 44 (60, 66) (60, 66) (4, (4, 20) 20) [Ru(lau)(dppm)2]PF6 [Ru (lau) (dppm) 2] PF6 61,14 61.14 4, 4, 73 73 (62,15) 61, (62.15) 61, (4, (4, 57) 57) [Ru(lap)(dppm)2]PF6 [Ru (lap) (dppm) 2] PF6 74 74 4, 4, 80 80 (57,31) 57, (57.31) 57, (4, (4, 52) 52) (2, (2, 67) 67) [Ru(lau)(dppe)(bipy)]PF6 [Ru (lau) (dppe) (bipy)] PF6 69 69 4, 4, 26 26 2, 2, 64 64 (59,19) (59.19) (4, (4, 97) 97) (2, (2, 51) 51) [Ru(lap)(dppe)(bipy)]PF6 [Ru (lap) (dppe) (bipy)] PF6 59,22 59.22 5, 5, 51 51 2, 2, 43 43 (57,41) (57.41) (3, (3, 66) 66) (2, (2, 48) 48) [Ru(lau)(dppf)(bipy)]PF6 [Ru (lau) (dppf) (bipy)] PF6 57,51 57.51 3, 3, 99 99 2, 2, 25 25

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(59,16) (59.16) (4, (4, 12) 12) (2,34) (2.34) [Ru(lap)(dppf)(bipy)]PF6 [Ru (lap) (dppf) (bipy)] PF6 59,35 59.35 4, 4, 32 32 2,24 2.24

★Valores teóricos estão entre parênteses.★ Theoretical values are in parentheses.

- Ensaios de citotoxidade:- Cytotoxicity tests:

[058] Os ensaios de proliferação celular foram realizados frente as linhagens MDA-MB-231 - câncer de mama, DU-145 - câncer de próstata, A549 - câncer de pulmão, L929 - normal de fibroblastos de camundongo e FGH - Normal de fibroblasto de gengiva humana.[058] Cell proliferation assays were performed against strains MDA-MB-231 - breast cancer, DU-145 - prostate cancer, A549 - lung cancer, L929 - normal mouse fibroblasts and FGH - normal fibroblast of human gum.

[059] Na Tabela 3 são apresentados resultados de IC50 (concentração de composto que consegue inibir 50% do crescimento celular) referentes aos compostos contendo o ligante fosfínico dppb. Na tabela 4, são apresentados os resultados de IC50 para os compostos as bifosfinas dppe, dppf e dppm.[059] Table 3 shows IC50 results (concentration of compound that can inhibit 50% of cell growth) for compounds containing the phosphine ligand dppb. Table 4 shows the IC 50 results for the compounds, the bisphosphins dppe, dppf and dppm.

Tabela 3 - Valores de IC50 (gmolL^-1) para os ligantes lap e lau e seus respectivos compostos contendo a dppb.Table 3 - IC 50 values (gmolL ^-1 ) for the lap and lau ligands and their respective compounds containing dppb.

Compostos Compounds MCF-7 MCF-7 DU-145 DU-145 MDA-MB- 231 MDA-MB- 231 L929 L929 IS# IS # 74, 74, 26 ± 26 ± 4,05 ± 4.05 ± lap lap 0 0 ,25 , 25 > 200 > 200 > 200 > 200 0,21 0.21 173,80 ± 173.80 ± lau lau > > 200 200 > 200 > 200 > 200 > 200 0,31 0.31 0,56 ± 0.56 ± 0,14 ± 0.14 ± 0,79 ± 0.79 ± [Ru(lap)(dppb)(bipy)]PF₆ [Ru (lap) (dppb) (bipy)] PF ₆ 0, 0, 21 21 ± 0, ± 0, 05 05 0,02 0.02 0,01 0.01 0,03 0.03 5,64 5.64 [Ru(lap)(dppb)(mebipy)]PF [Ru (lap) (dppb) (mebipy)] PF 0, 0, 24 24 ± 0, ± 0, 03 03 0,12 ± 0.12 ± 0,12 ± 0.12 ± 0,19 ± 0.19 ± 1,58 1.58 6 6 0,01 0.01 0,02 0.02 0,01 0.01 0,10 ± 0.10 ± 0,10 ± 0.10 ± 0,85 ± 0.85 ± [Ru(lap)(dppb)(fen)]PF6 [Ru (lap) (dppb) (fen)] PF6 0, 0, 62 62 ± 0, ± 0, 28 28 0,01 0.01 0,01 0.01 0,03 0.03 8,5 8.5 [Ru(lau)(dppb)(bipy)]PF₆ [Ru (lau) (dppb) (bipy)] PF ₆ 0, 0, 30 30 ± 0, ± 0, 18 18 0,23 ± 0.23 ± 0,076 ± 0.076 ± 0,68 ± 0.68 ± 8,95 8.95

Petição 870160036772, de 15/07/2016, pág. 18/41Petition 870160036772, of 7/15/2016, p. 18/41

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0,01 0.01 0,005 0.005 0,12 0.12 [Ru(lau)(dppb)(mebipy)]PF [Ru (lau) (dppb) (mebipy)] PF 0,22 ± 0,12 0.22 ± 0.12 0,16 ± 0.16 ± 0,073 ± 0.073 ± 0,25 ± 0.25 ± 3,42 3.42 6 6 0,03 0.03 0,008 0.008 0,01 0.01 0,18 ± 0.18 ± 0,048 ± 0.048 ± 1,11 ± 1.11 ± 23,1 23.1 [Ru(lau)(dppb)(fen)]PF₆ [Ru (lau) (dppb) (fen)] PF ₆ 0,12 ± 0,05 0.12 ± 0.05 0,01 0.01 0,008 0.008 0,10 0.10 2 2 13,98 ± 13.98 ± 2,00 ± 2.00 ± 2,33 ± 2.33 ± 20,14 ± 20.14 ± Cisplatina Cisplatin 2,02 2.02 0,47 0.47 0,40 0.40 0,19 0.19 8,64 8.64

IS# - índice de seletividade = IC50^L929/IC50^MDA-MB-231 IS # - selectivity index = IC50 ^L929 / IC50 ^MDA-MB-231

Tabela 4 - Valores de IC50 ^molL^-1) para os compostos contendo lap e lau e bifosfinas dppe, dppf e dppm.Table 4 - IC50 values ^ molL ^-1 ) for the compounds containing lap and lau and bisphosphines dppe, dppf and dppm.

Compostos Compounds MDA-MB- 231 MDA-MB- 231 DU-145 DU-145 A549 A549 FGH FGH IS# IS # lap lap > 200 > 200 > 200 > 200 > 200 > 200 > 200 > 200 _-- lau lau > 200 > 200 > 200 > 200 > 200 > 200 > 200 > 200 - - 0,15 ± 0.15 ± 0,39 ± 0.39 ± 0,53 ± 0.53 ± 0,78 ± 0.78 ± [Ru(lap)(dppe)(bipy)]PF_s [Ru (lap) (dppe) (bipy)] PF _s 0,01 0.01 0,07 0.07 0,05 0.05 0,04 0.04 5,2 5.2 0,11 ± 0.11 ± 0,42 ± 0.42 ± 0,58 ± 0.58 ± 1,31 ± 1.31 ± [Ru(lau)(dppe)(bipy)]PF₆ [Ru (lau) (dppe) (bipy)] PF ₆ 0,04 0.04 0,17 0.17 0,02 0.02 0,03 0.03 11,9 11.9 0,07 ± 0.07 ± 0,12 ± 0.12 ± 0,062 ± 0.062 ± 0,29 ± 0.29 ± [Ru(lap)(dppf)(bipy)]PF_s [Ru (lap) (dppf) (bipy)] PF _s 0,03 0.03 0,04 0.04 0,012 0.012 0,05 0.05 4,1 4.1 0,06 ± 0.06 ± 0,18 ± 0.18 ± 0,32 ± 0.32 ± 0,48 ± 0.48 ± [Ru(lau)(dppf)(bipy)]PF_s [Ru (lau) (dppf) (bipy)] PF _s 0,01 0.01 0,01 0.01 0,06 0.06 0,03 0.03 8,0 8.0 0,08 ± 0.08 ± 0,040 ± 0.040 ± 0,043 ± 0.043 ± 0,14 ± 0.14 ± [Ru(lau)(dppe)₂]PF₆ [Ru (lau) (dppe) ₂ ] PF ₆ 0,02 0.02 0,003 0.003 0,007 0.007 0,01 0.01 1,7 1.7 0,09 ± 0.09 ± 0,064 ± 0.064 ± 0,030 ± 0.030 ± 0,19 ± 0.19 ± [Ru(lau)(dppm)₂]PF₆ [Ru (lau) (dppm) ₂ ] PF ₆ 0,02 0.02 0,016 0.016 0,01 0.01 0,14 0.14 2,1 2.1 0,13 ± 0.13 ± 0,11 ± 0.11 ± 0,063 ± 0.063 ± 0,25 ± 0.25 ± [Ru(lap)(dppm)2]PF₆ [Ru (lap) (dppm) 2] PF ₆ 0,01 0.01 0,05 0.05 0,018 0.018 0,09 0.09 1,9 1.9 2,33 ± 2.33 ± 2,00 ± 2.00 ± 11,54 ± 11.54 ± 1,42 ± 1.42 ± Cisplatina Cisplatin 0,40 0.40 0,47 0.47 1,19 1.19 0,99 0.99 0,6 0.6

Petição 870160036772, de 15/07/2016, pág. 19/41Petition 870160036772, of 7/15/2016, p. 19/41

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IS# - índice de seletividade = IC50^FGH/IC50^MDA-MB-231 [060] Como observado nas Tabelas 3 e 4 houve um aumento significativo da atividade citotóxica dos compostos se comparado aos ligantes lapachol e lausona livres. Também se comparado ao fármaco de referência, a cisplatina, os compostos de rutênio foram muito mais ativos. Isso mostra que os compostos de rutênio contendo os ligantes lapachol e/ou lausona são promissores candidatos a novos metalofármacos.IS # - selectivity index = IC50 ^FGH / IC50 ^MDA-MB-231 [060] As seen in Tables 3 and 4, there was a significant increase in the cytotoxic activity of the compounds when compared to the free lapachol and lausone ligands. Also compared to the reference drug, cisplatin, ruthenium compounds were much more active. This shows that ruthenium compounds containing lapachol and / or lausone ligands are promising candidates for new metallopharmaceuticals.

[061] Analisando os resultados de IC50 obtidos para os compostos contendo a dppb (Tabela 3), nota-se que todos mostraram-se mais ativos para as células tumorais MDA-MB-231, onde o composto [Ru(lau)(dppb)(fen)]PF6 mostrou-se mais ativo. Analisando os dados obtidos para os compostos da Tabela 4, verifica-se também que eles mostraram mais ativos para as células tumorais MDA-MB-231, e o composto [Ru(lau)(dppf)(bipy)]PF6 mostrou-se o mais ativo.[061] Analyzing the IC50 results obtained for compounds containing dppb (Table 3), it can be seen that all were more active for tumor cells MDA-MB-231, where the compound [Ru (lau) (dppb ) (fen)] PF6 was more active. Analyzing the data obtained for the compounds in Table 4, it also appears that they showed more active for tumor cells MDA-MB-231, and the compound [Ru (lau) (dppf) (bipy)] PF6 was shown to be the more active.

[062] Como os compostos mostraram-se mais ativos na linhagem MDA-MB-231, fez-se uma análise morfológica desta célula na presença de diferentes concentrações dos compostos e em diferentes intervalos de tempos.[062] As the compounds were more active in the MDA-MB-231 strain, a morphological analysis of this cell was carried out in the presence of different concentrations of the compounds and at different time intervals.

[063] A Figura 1 representa as imagens, registradas usando um microscópio invertido, do efeito do composto [Ru(lau)(dppf)(bipy)]PF6 na morfologia da linhagem[063] Figure 1 represents the images, recorded using an inverted microscope, of the effect of the compound [Ru (lau) (dppf) (bipy)] PF6 on the lineage morphology

MDA-MB-231.MDA-MB-231.

[064] Como pode-se observar, em duas horas de incubação com o composto nas concentrações de 5 e 15 μΜ verifica-se a perda de aderência das células (a morfologia está em bolinhas e não mais esticadas e aderidas como no[064] As can be seen, in two hours of incubation with the compound in concentrations of 5 and 15 μΜ, the loss of cell adhesion occurs (the morphology is in balls and no longer stretched and adhered as in

Petição 870160036772, de 15/07/2016, pág. 20/41Petition 870160036772, of 7/15/2016, p. 20/41

17/20 controle), indicando a morte celular. Com 48 horas de incubação verifica-se que na concentração de 0,01 μΜ a morfologia é semelhante à do controle, contudo na concentração de 0,06 μΜ verifica-se uma inibição do crescimento celular (apresenta menos células do que o controle) e algumas células encontram-se com a morfologia em bolinhas, com perda de aderência.17/20 control), indicating cell death. After 48 hours of incubation, it is verified that at the concentration of 0.01 μΜ the morphology is similar to that of the control, however at the concentration of 0.06 μΜ there is an inhibition of cell growth (it has fewer cells than the control) and some cells meet the morphology in balls, with loss of adhesion.

- Estudos de interação com ct-DNA:- Interaction studies with ct-DNA:

[065] Estudos de interação com o ct-DNA foram realizados com o intuito de buscar entender qual o possível alvo dos compostos obtidos. O DNA é um alvo muito estudado tendo em vista que um dos mecanismos de ação da cisplatina e via ligação com os nitrogênios das bases nitrogenadas do DNA, impedindo dessa forma a replicação e acarretando a apoptose. Duas técnicas foram empregadas para realização deste estudo, a titulações espectroscópicas e dicroísmo circular.[065] Interaction studies with ct-DNA were carried out in order to seek to understand the possible target of the compounds obtained. DNA is a well-studied target considering that one of the mechanisms of action of cisplatin is linked to the nitrogenous nitrogenous bases of DNA, thus preventing replication and causing apoptosis. Two techniques were used to carry out this study, spectroscopic titrations and circular dichroism.

[066] As titulações foram realizadas empregando uma solução de ct-DNA de concentração conhecida. Em uma cubeta de quartzo foi adicionado o composto em uma concentração conhecida e foram realizadas adições sucessivas de ct-DNA à cubeta e a cada adição registrou-se um espectro de ultravioleta visível. A partir do tratamento de dados empregando a Equação I, obteve-se os valores de constantes de ligação com o ct-DNA.[066] The titrations were performed using a ct-DNA solution of known concentration. In a quartz cuvette the compound was added at a known concentration and successive additions of ct-DNA were made to the cuvette and with each addition a visible ultraviolet spectrum was recorded. From the data treatment using Equation I, the values of binding constants with ct-DNA were obtained.

[DNA]_ [DNA] (£_a-£_f) (£_b-c_f)' [K_b(e_b-e_f)] em que:[DNA] _ [DNA] (£ _a - £ _f ) (£ _b -c _f ) '[K _b (and _b -e _f )] where:

s_a é o corresponde à coeficiente de razão entre a extinção aparente, que absorbância medida e as _a is o corresponds to the coefficient of ratio between apparent extinction, which measured absorbance

Petição 870160036772, de 15/07/2016, pág. 21/41Petition 870160036772, of 7/15/2016, p. 21/41

18/20 concentração do complexo (Aobservada/[Complexo]);18/20 concentration of the complex (Observed / [Complex]);

£f = absortividade molar do complexo livre (sem adição de DNA);£ f = molar absorptivity of the free complex (without addition of DNA);

Sb = absortividade molar do complexo ligado ao DNA; eSb = molar absorptivity of the DNA-bound complex; and

Kb = constante de ligação.Kb = connection constant.

[067] Outra técnica empregada nesse estudo foi o dicroísmo circular e para a análise foi empregada uma solução de ct-DNA com concentração fixa e a concentração de composto foi variada. Na Figura 2 (A e B) são observados os espectros de titulação espectroscópica e os espectros de dicroísmo circular para o complexo [Ru(lau)(dppf)(bipy)]PF6.[067] Another technique used in this study was circular dichroism and for the analysis, a fixed concentration ct-DNA solution was used and the compound concentration was varied. In Figure 2 (A and B), spectroscopic titration spectra and circular dichroism spectra for the [Ru (lau) (dppf) (bipy)] PF6 complex are observed.

[068] As constantes de ligação obtidas através dos dados de titulação espectroscópicas para os compostos de rutênio sintetizados foram da ordem de 10³ - 10⁴ M^-1, mostrando um comportamento similar de todos os compostos frente ao ct-DNA. Os espectros de dicroísmo circular obtidos para os compostos também não apresentaram alterações significativas nas bandas do ct-DNA.[068] The binding constants obtained through spectroscopic titration data for the synthesized ruthenium compounds were in the order of 10 ³ - 10 ⁴ M ^-1 , showing a similar behavior of all compounds against ct-DNA. The circular dichroism spectra obtained for the compounds also did not show significant changes in the ct-DNA bands.

[069] Diante desses resultados podemos dizer que os compostos de rutênio apresentam uma fraca interação com o DNA, podendo ser interações eletrostáticas visto que os compostos apresentam uma carga positiva enquanto o DNA apresenta carga negativa.[069] Given these results, we can say that ruthenium compounds have a weak interaction with DNA, which may be electrostatic interactions since the compounds have a positive charge while DNA has a negative charge.

- Interação com a Albumina de Soro Bovino (BSA):- Interaction with Bovine Serum Albumin (BSA):

[070] A BSA é uma proteína mais abundante no plasma sanguíneo, apresentando uma importância muito grande, pois participa de várias funções fisiológicas, como a regulação da pressão osmótica sanguínea e manutenção do pH do sangue. Outra propriedade interessante desta proteína[070] BSA is a protein that is more abundant in blood plasma and is very important because it participates in various physiological functions, such as regulating blood osmotic pressure and maintaining blood pH. Another interesting property of this protein

Petição 870160036772, de 15/07/2016, pág. 22/41Petition 870160036772, of 7/15/2016, p. 22/41

19/20 é a capacidade que ela apresenta de ligar-se a uma grande variedade de moléculas, e realizar o transporte e distribuição de várias substâncias endógenas e exógenas como hormônios, aminoácidos, íons metálicos e fármacos.19/20 is the ability it has to bind to a wide variety of molecules, and to carry out and transport various endogenous and exogenous substances such as hormones, amino acids, metal ions and drugs.

[071] A BSA apresenta uma similaridade estrutural muito grande com a HSA (Albumina de Soro Humana), e por isso é muito utilizada em sistemas biomiméticos.[071] BSA has a very strong structural similarity to HSA (Human Serum Albumin), and is therefore widely used in biomimetic systems.

[072] Neste contexto, os compostos sintetizados foram avaliados quanto à interação com a BSA em diferentes temperaturas. O espectro de fluorescência da BSA foi obtido na presença de diferentes quantidades dos compostos, numa faixa de 300 a 450 nm sobre uma excitação em 280 nm.[072] In this context, the synthesized compounds were evaluated for interaction with BSA at different temperatures. The fluorescence spectrum of the BSA was obtained in the presence of different amounts of the compounds, in a range of 300 to 450 nm over an excitation in 280 nm.

[073] A extinção da fluorescência pode ser oriunda de dois mecanismos: dinâmico, quando ocorre a colisão entre o fluoróforo (BSA) e o supressor (complexos de rutênio) no estado excitado e estático, quando ocorre a formação de um complexo entre o fluoróforo e o supressor, no estado fundamental.[073] The fluorescence extinction can come from two mechanisms: dynamic, when the collision between fluorophore (BSA) and suppressor (ruthenium complexes) occurs in the excited and static state, when the formation of a complex between fluorophore and the suppressor, in the fundamental state.

[074] Os mecanismos dinâmico ou estático podem ser distinguidos pela diferente dependência da temperatura e viscosidade. Um mecanismo dinâmico depende da difusão, assim altas temperaturas resultam em um coeficiente de difusão alto, e consequentemente as constantes de supressão devem aumentar com o aumento da temperatura. Em contrapartida, na supressão estática um aumento da temperatura resulta em valores baixos das constantes de supressão [075] Os compostos de rutênio avaliados apresentaram um mecanismo de interação estático, exceto os compostos contendo a dppf que apresentaram os mecanismos[074] The dynamic or static mechanisms can be distinguished by the different dependence on temperature and viscosity. A dynamic mechanism depends on diffusion, so high temperatures result in a high diffusion coefficient, and consequently the suppression constants must increase with increasing temperature. In contrast, in static suppression an increase in temperature results in low values of the suppression constants [075] The ruthenium compounds evaluated showed a static interaction mechanism, except for compounds containing the dppf that presented the mechanisms

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20/20 estático e dinâmico simultaneamente. Todos os compostos apresentaram uma constante de ligação da ordem de 10⁴ - 10⁵M^-1, indicando uma interação moderada com a BSA. Além disso, os compostos contendo as bifosfinas dppb, dppm e dppe apresentaram o envolvimento de forças hidrofóbicas. Já os compostos contendo a bifosfina dppf apresentaram interações eletrostáticas. A interação dos compostos com a BSA é espontânea, uma vez que os valores de energia livre de Gibbs (AG°) são negativos.20/20 static and dynamic simultaneously. All compounds showed a binding constant of 10 ⁴ - 10 ⁵ M ^-1 , indicating a moderate interaction with BSA. In addition, the compounds containing the bisphosphins dppb, dppm and dppe showed the involvement of hydrophobic forces. The compounds containing biphosphine dppf showed electrostatic interactions. The interaction of compounds with BSA is spontaneous, since Gibbs free energy (AG °) values are negative.

[076] Portanto, a presente invenção tem por objetivo o desenvolvimento de novos compostos de rutênio compreendendo como ligantes os produtos naturais lapachol e lausona, bem como ligantes bipiridínicos e fosfínicos, os quais mostraram-se bastante promissores, pois apresentaram elevada toxicidade frente a linhagens celulares de câncer de mama, próstata e pulmão.[076] Therefore, the present invention aims at the development of new ruthenium compounds comprising the natural lapachol and lausone products as binders, as well as bipyridine and phosphine ligands, which have shown to be quite promising, as they presented high toxicity against strains breast, prostate and lung cancer cells.

Os versados na arte valorizarão os conhecimentos aqui apresentados e poderão reproduzir a invenção nas modalidades apresentadas e em outras variantes, abrangidas no escopo das reivindicações anexas.Those skilled in the art will value the knowledge presented here and will be able to reproduce the invention in the modalities presented and in other variants, covered by the scope of the attached claims.

Petição 870160036772, de 15/07/2016, pág. 24/41Petition 870160036772, of 7/15/2016, p. 24/41

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Claims

1. Process for obtaining ruthenium compounds characterized by the fact that it comprises the steps of:

a) Solubilize the precursors in a mixture of dichloromethane and methanol in a ratio of 1: 1 under stirring and at room temperature;

b) Add the lapachol or lausone binder, together with a base, such as triethylamine, NaOH or KOH, and the counter ion under agitation;

c) Reduce the volume of the solution;

d) Precipitate the compounds with distilled water;

e) Filter the obtained dark colored solids; and

f) Wash the solids with distilled water and ethyl ether and dry under vacuum.

2. Process, according to claim 1, characterized by the fact that said precursors comprise formulas I and II:

cis- [RuCl2 (P) (N-N)] (I) cis- [RuCl2 (P) 2] (II) where:

P is a phosphine; and

N-N is a 2,2'-bipyridine and derivatives.

3. Process, according to claim 2, characterized by the fact that the phosphines are selected from the group consisting of bis (diphenylphosphine) methane; 1,2bis (diphenylphosphine) ethane; 1,3-bis (diphenylphosphine) propane; 1,4-bis (diphenylphosphine) butane; and 1,1'bis (diphenylphosphine) ferrocene.

4. Process according to claim 1, characterized in that, in step b, add 0.4 g

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2/3 of the desired binder (lapachol or lausone), 400 pL of triethylamine and 0.5 g of the desired counter ion in the mixture obtained in step a under stirring for 12 hours, in which the binder: precursor ratio is 1: 1, 2; the binder: triethylamine ratio is 1: 1 and the precursor: against ion ratio is 1: 2.

5. Process according to claim 4, characterized by the fact that said counter ions are selected from the group consisting of phosphorus hexafluoride (KPF6), chloride, perchlorate, tetrafluoroborate (BF4), acetate, saccharate or nitrate.

6. Process, according to claim 1, characterized by the fact that, in step c, the volume of the solution obtained in the previous step was rotated and, in step d, the compounds were precipitated with distilled water.

7. Process, according to claim 1, characterized in that, in step d, the dark colored solids obtained are filtered, preferably in a sintered plate funnel.

8. Ruthenium compounds produced by the process as defined in any of claims 1 to 7, characterized by the fact that they comprise formulas III and

IV:

[Ru (L) (P) (NN)] + (III) [Ru (L) (P) ₂ ] + (IV) where:

Ru is ruthenium;

P is a phosphine;

L is a lapachol or lausone; and

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N-N is a 2,2'-bipyridine and derivatives.

9. Ruthenium compounds, according to claim 8, characterized by the fact that the phosphines are selected from the group consisting of bis (diphenylphosphine) methane; 1,2-bis (diphenylphosphine) ethane; 1,3-bis (diphenylphosphine) propane; 1,4bis (diphenylphosphine) butane; and 1,1'bis (diphenylphosphine) ferrocene.

10. Ruthenium compounds according to claim 8 or 9, characterized by the fact that it comprises structure V:

[Ru (lau) (dppf) (bipy)] PF6 (V) where:

Ru is ruthenium;

lau is lausona;

dppf is 1,1'-bis (diphenylphosphine) ferrocene; bipy is 2,2'-bipyridine; and the PF6 counter ion.

11. Use of ruthenium compounds as defined in any one of claims 8 to 10, characterized by the fact that it is in the preparation of a medication to treat breast, prostate and lung cancer, preferably of the compound of structure V in the preparation of a medication for treat breast cancer.

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