BR102016007399A2

BR102016007399A2 - PROCESS FOR OBTAINING HYDROSOLOUS SOLUTION FROM AZADIRACHTIN BY PROCESS COMPATIBLE WITH THE PRINCIPLES OF GREEN CHEMISTRY

Info

Publication number: BR102016007399A2
Application number: BR102016007399-5A
Authority: BR
Inventors: Harand Wolfgang
Original assignee: Phytotec Tecnologia Ltda.
Priority date: 2016-04-04
Filing date: 2016-04-04
Publication date: 2017-10-10

Abstract

a invenção descreve um processo combinado de extração e purificação de azadirachtinas a partir de sementes da espécie azadirachta indica a. juss., que rende um produto hidrossolúvel e com concentração de azadirachtin a maior que óleo de nim, obtido por prensagem mecânica. ainda oferece redução significativa de perdas de princípio ativo durante o processo comparado com o estado da arte. além disso, o processo se destaca pela total compatibilidade com os princípios de química verde, por combinar altos rendimentos com ausência de solventes nocivos, reciclagem dos insumos e baixa necessidade energética.The invention describes a combined process for extracting and purifying azadirachtins from seeds of azadirachta indica a. juss., which yields a water soluble product with a higher azadirachtin concentration than neem oil obtained by mechanical pressing. It still offers significant reduction of active principle losses during the process compared to the state of the art. Furthermore, the process stands out for its full compatibility with green chemistry principles, for combining high yields with no harmful solvents, input recycling and low energy requirements.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção "PROCESSO DE OBTENÇÃO DE UMA SOLUÇÃO HIDROSSOLÚVEL DE AZADIRACHTIN A POR PROCESSO COMPATÍVEL COM OS PRINCÍPIOS DE QUÍMICA VERDE".Report of the Invention Patent "PROCESS FOR OBSERVATION OF A HYDESOLUBLE SOLUTION OF AZADIRACHTIN A BY PROCESS COMPATIBLE WITH THE PRINCIPLES OF GREEN CHEMISTRY".

Campo da invenção [001] A presente invenção refere-se a um processo de obtenção de uma solução polar de azadirachtin A e compostos relacionados a partir de sementes da espécie botânica Azadirachta indica A. Juss conforme os princípios de química verde.Field of the Invention The present invention relates to a process for obtaining a polar solution of azadirachtin A and related compounds from seeds of the botanical species Azadirachta indica A. Juss according to the principles of green chemistry.

Fundamentos da invenção [002] Pesticidas botânicos obtidos de plantas são uma alternativa aos produzidos sinteticamente, e azadirachtin A proveniente da espécie nim, Azadirachta indica A. Juss, é os mais estudado e mais conhecido mundialmente. Essa substância já é comercializada em diversos países do mundo em formulações diferentes e com concentrações diferentes do princípio ativo, azadirachtin A é encontrado em maior concentração nas sementes dessa espécie, porém existem outras substâncias com estrutura molecular semelhante em Azadirachta indica e em outras espécies desse mesmo gênero botânico que também apresentam atividade biológica. A atividade biológica mais estudada e mais aproveitada é a atividade contra insetos, na qual foram descritas atividades dissuasórias e de regulação de crescimento.Background of the invention Botanical plant-derived pesticides are an alternative to synthetically produced ones, and azadirachtin A from the neem species, Azadirachta indica A. Juss, is the most studied and best known worldwide. This substance is already marketed in different countries of the world in different formulations and with different concentrations of the active principle, azadirachtin A is found in higher concentration in seeds of this species, but there are other substances with similar molecular structure in Azadirachta indica and in other species of this same. botanical genus that also have biological activity. The most studied and most used biological activity is the activity against insects, in which deterrent and growth regulation activities have been described.

[003] É de conhecimento geral que, além de azadirachtin A, sementes de nim também contém quantidades consideráveis de triglicerídeos e outros lipídeos, e que azadirachtin A representa o principal componente responsável pelos diversos efeitos de extratos de nim contra insetos.It is well known that, in addition to azadirachtin A, neem seeds also contain considerable amounts of triglycerides and other lipids, and that azadirachtin A represents the major component responsible for the various effects of neem extracts against insects.

[004] Um dos grandes diferenciais de extratos de nim no controle de insetos é sua compatibilidade com os conceitos da agricultura orgânica, por serem originário de fontes naturais e renováveis, degradáveis e com ação seletiva contra insetos. Porém, os processos atuais de obtenção de extratos de nim são ou ineficientes, como a prensagem de óleo, ou incompatéiveis com os princípios de química verde, como o processo descrito por Kleeberg (1992), que exige a aplicação de solventes orgânicos tóxicos e de origem fóssil.One of the great differentials of neem extracts in insect control is their compatibility with the concepts of organic agriculture, as they originate from natural and renewable sources, degradable and with selective action against insects. However, current processes for obtaining neem extracts are either inefficient, such as oil pressing, or incompatible with green chemistry principles, such as the process described by Kleeberg (1992), which requires the application of toxic organic solvents and fossil origin.

[005] O processo tradicional de obtenção de azadirachtinas é a extração do óleo por prensagem mecânica. Esse processo, a pesar de ser compatível com os princípios de química verde, tem duas grandes desvantagens: 1) O óleo não mistura prontamente com água e, consequentemente, precisa de um emulsificante ou tensoatívo na formulação para aplicação como inseticida. 2) A maior parte das azadirachtinas permanece na torta, resíduo sólido da prensagem do óleo.[005] The traditional process for obtaining azadirachtins is the extraction of oil by mechanical pressing. This process, despite being compatible with the principles of green chemistry, has two major disadvantages: 1) The oil does not readily mix with water and therefore needs an emulsifier or surfactant in the formulation for insecticide application. 2) Most azadirachtins remain in the cake, solid residue from oil pressing.

[006] Vários procedimentos para a obtenção de extratos hidrossolúveis de nim foram descritos na literatura que involvem a utilização de solventes orgânicos de baixa polaridade, como, por exemplo, Schroeder & Nakanishi (1987), Kleeberg (1992) ou Melwita & Ju (2010). Estes processos rendem Azadirachtin A de alta concentração, que atinge mais que 40% do peso do produto final, porém a aplicação de solventes orgânicos apoiares, tais como hidrocarbonetos alifáticos (pentano, hexano, heptano etc.) torna esses processos perigosos para o meio ambiente e a saúde humana, além de consumir quantidades consideráveis de energia em processos de destilação para a recirculação desses solventes.Various procedures for obtaining water soluble neem extracts have been described in the literature involving the use of low polarity organic solvents, such as, for example, Schroeder & Nakanishi (1987), Kleeberg (1992) or Melwita & Ju (2010). ). These processes yield high concentration Azadirachtin A, which reaches more than 40% of the weight of the final product, but the application of supporting organic solvents such as aliphatic hydrocarbons (pentane, hexane, heptane etc.) makes these processes hazardous to the environment. and human health, and consume considerable amounts of energy in distillation processes for the recirculation of these solvents.

[007] Em alguns processos publicados, solventes convencionais foram substituídos por solventes pressurizados para aumentar a eficiência da extração. Exemplos para esses processos são extração com dióxido de carbono supercrítico, descrito, por exemplo, por Ambrosino et al. (1999) ou Rembold (1997), ou metanol pressurizado (Jadeja et al. 2011). Esses processos foram comprovados de serem eficientes na extração de azadirachtinas, porém dependem de equipamentos caros que reduzem significativamente a eficiência econômica do processo.In some published processes, conventional solvents have been replaced by pressurized solvents to increase extraction efficiency. Examples for such processes are supercritical carbon dioxide extraction, described for example by Ambrosino et al. (1999) or Rembold (1997), or pressurized methanol (Jadeja et al. 2011). These processes have been proven to be efficient in azadirachtin extraction, but they rely on expensive equipment that significantly reduces the economic efficiency of the process.

[008] Como a grande maioria dos produtos naturais, azadirachtin A também pode ser purificado por métodos cromatográficos. Um exemplo para um método de purificação de azadirachtin A por cromatografia em coluna foi descrito por Sharma et al. 2003. Esses métodos, a pesar de serem capazes de render purezas acima de 90%, têm um custo bastante elevado que inviabiliza uma aplicação industrial.Like the vast majority of natural products, azadirachtin A can also be purified by chromatographic methods. An example for a method of purifying azadirachtin A by column chromatography has been described by Sharma et al. 2003. Although these methods are capable of yielding purity above 90%, they have a very high cost that makes industrial application unfeasible.

[009] Os princípios de química verde, definidos por Anastas & Warner (1998), são conhecidos por pessoas formadas na área. Os princípios relevantes para essa patente são: evitar resíduos, minimizar o uso de solventes e usar solventes inofensivos, aumentar a eficiência energética, usar matérias primas renováveis e minimizar os riscos de acidentes.[009] The principles of green chemistry, defined by Anastas & Warner (1998), are known to people trained in the field. Relevant principles for this patent are: avoid waste, minimize solvent use and use harmless solvents, increase energy efficiency, use renewable raw materials and minimize the risk of accidents.

[010] Até agora, não existe descrição de um processo econômico para obtenção de um extrato hidrossolúvel de azadirachtin A que obedeça aos princípios de química verde, sem aplicação de solventes apoiares, sem aplicação de tensoativos, sem aplicação de alta pressão e sem métodos cromatográficos, fatores que encarecem a produção significativamente.[010] So far, there is no description of an economical process for obtaining a water soluble azadirachtin A extract that complies with the principles of green chemistry, no backing, no surfactants, no high pressure and no chromatographic methods. , factors that make production significantly more expensive.

[011] O desafio a ser resolvido nessa invenção é dispor de um processo econômico para obtenção de um extrato hidrossolúvel e rico em azadirachtin A que obedece aos princípios de química verde.[011] The challenge to be solved in this invention is to have an economical process for obtaining a water soluble azadirachtin A rich extract that obeys the principles of green chemistry.

Descrição detalhada da invenção [012] O problema é resolvido por disponibilizar um processo que gera fases separadas a partir de um extrato de sementes da espécie Azadirachta indica por adição de solventes verdes polares e que consiste das seguintes etapas: [013] (a) Diminuição das partículas da matéria prima [014] (b) Extração com um solvente do grupo [etanol; acetato de etila].DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The problem is solved by providing a process which generates separate phases from a seed extract of the species Azadirachta indica by adding polar green solvents and consisting of the following steps: [013] (a) Decrease (b) Extraction with a solvent from the group [ethanol; ethyl acetate].

[015] (c) Remoção de pelo menos 80% do solvente de extração.(C) Removal of at least 80% of the extraction solvent.

[016] (d) Adição de um ou mais solventes do grupo [glicerol; água].(D) Addition of one or more solvents from the [glycerol; Water].

[017] (e) Separação da fase polar.[017] (e) Polar phase separation.

[018] Essas etapas são descritas detalhadamente a seguir: [019] - Sementes de Azadirachta indica, ou subprodutos delas, devem ser trituradas. Exemplos para subprodutos das sementes, para os quais essa patente não é limitada, são amêndoas descascadas ou a torta que sobra como resíduo da obtenção de óleo por esmagamento das sementes. A quebra das sementes é fundamental para garantir o acesso do solvente ao princípio ativo. Pessoas formadas na área conhecem essa relação: Quanto menor a partícula, melhor o acesso para o solvente e então melhor a eficiência da extração, porém partículas muito pequenas levam à formação de aglomerados e canais preferenciais dos solventes, fatos que reduzem a eficiência da extração. Num processo conforme essa patente, as partículas das sementes pre-processadas têm um tamanho entre mesh 4 e mesh 140, preferencialmente entre mesh 10 e mesh 20.[018] These steps are described in detail below: [019] - Azadirachta indica seeds, or byproducts of them, must be ground. Examples for seed by-products, for which this patent is not limited, are peeled almonds or leftover cake as a residue from obtaining oil by crushing the seeds. Seed breakage is critical to ensure solvent access to the active ingredient. People trained in the field know this relationship: The smaller the particle, the better the access to the solvent and then the better the extraction efficiency, but very small particles lead to the formation of preferred solvent clusters and channels, facts that reduce the extraction efficiency. In a process according to this patent, the preprocessed seed particles have a size between mesh 4 and mesh 140, preferably between mesh 10 and mesh 20.

[020] - Para que o processo esteja compatível com os princípios de química verde, a extração precisa ser realizada com um solvente que seja pouco nocivo para o meio ambiente e a saúde humana e, ainda, renovável. Solventes facilmente disponíveis com essas características são água, etanol, acetato de etila e dióxido de carbono. Azadirachtin A é uma substância de polaridade média. As condições ideais para a extração de uma substância de polaridade média são conhecidas por pessoas formadas na área: Água é um solvente muito polar, a solubilidade de azadirachtin A nela é muito baixa, consequentemente a eficiência da extração também é baixa. Por isso, água não é um solvente ideal para a extração de azadirachtin A. Dióxido de carbono também apresenta baixa solubilidade para azadirachtin A, por ser muito apoiar. Para servir como solvente de extração, dióxido de carbono precisa ser liquefeito ou em estado supercrítico. Esses estados físicos somente podem ser alcançados através de aplicação alta pressão. A exigência de alta pressão reduz a eficiência energética e aumenta os riscos de acidentes, fatores desfavoráveis aos conceitos de química verde. Pelo exposto, os solventes mais indicados para um processo verde de extração de azadirachtin A são etanol e acetato de etila. Por ser menos nocivo, etanol é mais indicado que acetato de etila.[020] - For the process to be compatible with the principles of green chemistry, extraction must be carried out with a solvent that is environmentally and humanly harmful and renewable. Easily available solvents with these characteristics are water, ethanol, ethyl acetate and carbon dioxide. Azadirachtin A is a substance of average polarity. Ideal conditions for the extraction of a medium polarity substance are known to those of skill in the art: Water is a very polar solvent, the solubility of azadirachtin A in it is very low, therefore the extraction efficiency is also low. Therefore, water is not an ideal solvent for azadirachtin A extraction. Carbon dioxide also has low solubility for azadirachtin A because it is very supportive. To serve as an extraction solvent, carbon dioxide must be liquefied or supercritical. These physical states can only be achieved by applying high pressure. The high pressure requirement reduces energy efficiency and increases the risk of accidents, unfavorable to green chemistry concepts. Therefore, the most suitable solvents for a green azadirachtin A extraction process are ethanol and ethyl acetate. Because it is less harmful, ethanol is more indicated than ethyl acetate.

[021] - Processos de extração são conhecidos por pessoas formadas na área. Exemplos para esses métodos de extração, para as quais a invenção não deve ser limitada, são maceração simples e percolação.[021] - Extraction processes are known to people trained in the area. Examples for such extraction methods, for which the invention should not be limited, are simple maceration and percolation.

[022] - Após extração, a maior parte do solvente é removido do extrato. A remoção conforme essa patente é feita por um processo de evaporação que pessoas formadas na área conhecem. Evaporação é um processo que exige bastante energia. Para ficar compatível com os princípios de química verde, o processo de evaporação conforme essa patente deve ser realizado sobre pressão reduzida, o que permite a redução do ponto de ebulição do solvente e assim a quantidade de energia que precisa ser introduzida no sistema. É vantajoso trabalhar com pressão abaixo de 225 mm Hg, pois reduz o ponto de ebulição do solvente abaixo de 50°C. Mais vantajoso ainda é uma pressão abaixo de 150 mm Hg, pois o ponto de ebulição é reduzido abaixo de 40°C. Outra vantagem além da economia de energia é que a redução da temperatura do processo ajuda a minimizar a degradação térmica do princípio ativo e, dessa maneira, aumenta a eficiência do processo. O processo de remoção do solvente por evaporação pode ser interrompido assim que a quantidade desejada de solvente for retirada. Num processo conforme essa patente, a quantidade de solvente que permanece após remoção não deve ultrapassar 100% do peso do extrato quando for totalmente livre de solvente. A permanência de uma parte do solvente usado para a extração melhora o balanço energético do processo.[022] - After extraction, most of the solvent is removed from the extract. Removal according to this patent is made by an evaporation process known to those skilled in the art. Evaporation is a process that requires a lot of energy. In order to be compatible with green chemistry principles, the evaporation process according to this patent must be carried out under reduced pressure, which allows the boiling point of the solvent to be reduced and thus the amount of energy that needs to be introduced into the system. It is advantageous to work with pressure below 225 mm Hg as it reduces the boiling point of the solvent below 50 ° C. Even more advantageous is a pressure below 150 mm Hg as the boiling point is reduced below 40 ° C. Another advantage besides energy saving is that reducing the process temperature helps to minimize the thermal degradation of the active ingredient and thereby increases the process efficiency. The evaporative solvent removal process may be stopped as soon as the desired amount of solvent is removed. In a process according to this patent, the amount of solvent remaining after removal should not exceed 100% of the weight of the extract when it is totally solvent free. The permanence of a part of the solvent used for extraction improves the energy balance of the process.

[023] - Para fins de compatibilidade com os princípios de química verde, o solvente evaporado num processo, conforme essa patente, é recuperado por condensação. Apesar de consumir energia, essa etapa de condensação de solvente evita a emissão do solvente para o meio ambiente e viabiliza a reutilização de um insumo importante do processo.[023] - For purposes of compatibility with green chemistry principles, the solvent evaporated in a process according to this patent is recovered by condensation. Despite consuming energy, this solvent condensation step avoids the emission of solvent into the environment and enables the reuse of an important process input.

[024] - Foi observado que um extrato de sementes de uma espécie do gênero Azadirachta, obtido conforme acima descrito, forma fases separadas após homogeneização com um ou, preferencialmente, mais solventes do grupo [água, glicerol] em quantidades que passam do peso seco (correspondente ao peso após remoção completa do solvente) do extrato. A fase polar é rica em azadirachtin A e é plenamente solúvel em água.[024] - It has been observed that a seed extract of a species of the genus Azadirachta, obtained as described above, forms separate phases upon homogenization with one or more solvents of the group [water, glycerol] in amounts exceeding dry weight. (corresponding to weight after complete removal of solvent) of the extract. The polar phase is rich in azadirachtin A and is fully soluble in water.

[025] - Processo de separação de fases é um processo mecânico conhecido por pessoas formadas na área que normalmente é realizado por simples repouso.[025] - Phase separation process is a mechanical process known to people formed in the area which is usually performed by simple rest.

Exemplo 1 [026] Sementes de nim secas (Cruangi Neem do Brasil Ltda.) foram trituradas para partículas de mesh 18 em 1.600 rpm (Pulverisette 14, Fritsch GmbH, Alemanha). A partir desse momento, todo experimento foi executado em triplicata: 20g de sementes trituradas foram extraídos com 60 ml de etanol 99,5% por maceração durante 24 horas em temperatura ambiente (20°C). O extrato foi separado por filtração e o volume corrigido para 100 ml com etanol 99,5%. Subsequentemente, o mesmo material foi extraído mais duas vezes com 60 ml de etanol da mesma forma. De cada um dos três extratos, 2 ml foram retirados para análise por HPLC conforme Kaushik (2002) (HPLC: Agilent 1260 series com injetor automático; coluna: Agilent Zorbax C18; 4,6 x 250 mm; 5μ m). Em média, foram obtidos 25,1 ± 0,2 mg de azadirachtin A na primeira extração, 11,2 ± 0,2 mg na segunda extração e 4,8 ± 0,2 mg na terceira extração, totalizando 41,1 ± 0,3 mg de azadirachtin A. Os três extratos sequenciais foram unidos e submetidos à remoção completa do solvente por evaporação em pressão reduzida (Rocket evaporator, Genevac, UK, método para baixo ponto de ebulição). O peso do extrato seco foi 4,2 ± 0,lg. O teor de azadirachtin A no extrato etanólico seco foi de 9.793 ± 241ppm. Este extrato seco foi misturado com 50% (peso/peso) de etanol 99,5%, 250% (peso/peso) de glicerina bidestilada e 250% (peso/peso) de água destilada. Formaram-se duas fases, uma oleosa superior e uma aquosa inferior. As fases foram separadas num funil de separação. O peso da fase aquosa obtida foi de 24,2 ± 0,6g. 2 ml dessa fase aquosa foram completadas para 10 ml com água destilada, filtradas e submetidas à análise por HPLC nas condições idênticas às descritas em cima. A concentração de azadirachtin A observada para o produto da separação de fase foi de 1.649 ± 46 mg/g. Consequentemente, cada grama de semente rendeu 1,2 g de produto hidrossolúvel com mais que 1600 ppm de azadirachtin A. A perda total de Azadirachtin A no processo foi de 2,8%. O novo processo foi comparado com o processo publicado por Kleeberg (1992). Para fins de comparação, este processo foi executado com as mesmas quantidades de sementes e solvente de extração: 20g das sementes trituradas conforme descrito encima foram extraídas com 60 ml de água destilada por maceração durante 24 horas em temperatura ambiente (20°C). O extrato foi separado por filtração e o volume corrigido para 100 ml com água destilada. Subsequentemente, o mesmo material foi extraído mais duas vezes com 60 ml de água destilada da mesma forma. De cada um dos três extratos, 2 ml foram retirados para análise por HPLC pelo método descrito encima. Em média, foram obtidos 12,2 ± 0,2 mg de azadirachtin A na primeira extração, 15,0± 0,4 mg na segunda extração e 7,8 ± 0,3 mg na terceira extração, totalizando 35,0 ± 0,8 mg azadirachtin A. Consequentemente, a extração aquosa em condições iguais rendeu 15% menos azadirachtin A que a extração com etanol. Os três extratos sequenciais foram unidos e a solução resultante submetida à extração líquida-líqida com 50 ml de acetato de etila. A fase orgânica foi removida apos separação das fases. Este procedimento foi repetido mais duas vezes. Os tres extratos de acetato de etila foram unidos e o solvente removido sobre pressão reduzida (Rocket evaporator, Genevac, UK, método para baixo ponto de ebulição). O extrato seco foi dissolvido em 3 ml de acetato de etila e transferido para 30 ml de hexano num tubo de centrifugação. Formou-se um precipitado sólido. Após centrifugação (4000 rpm, 30 min), a fase líquida foi decantada e o resíduo de solvente evaporado. Ao alcançar constância de peso, a massa do precipitado seco foi determinado em balança analítica como 129 ± 22 mg. Após solubilização desse precipitado em metanol, o teor de azadirachtin A foi determinado pelo método descrito encima. Este precipitado continha, em média, 28 ± 3 mg de Azadirachtin A. Consequentemente, a perda total de azadirachtin A no processo foi de 31,5%, ou seja, mais que dez vezes maior que no processo conforme essa patente.Example 1 Dried neem seeds (Cruangi Neem do Brasil Ltda.) Were ground to 18 mesh particles at 1,600 rpm (Pulverisette 14, Fritsch GmbH, Germany). Thereafter, the whole experiment was performed in triplicate: 20g of crushed seeds were extracted with 60 ml of 99.5% ethanol by maceration for 24 hours at room temperature (20 ° C). The extract was filtered off and the volume corrected to 100 ml with 99.5% ethanol. Subsequently, the same material was extracted twice more with 60 ml of ethanol in the same manner. From each of the three extracts, 2 ml were removed for HPLC analysis according to Kaushik (2002) (HPLC: Agilent 1260 series with automatic injector; column: Agilent Zorbax C18; 4.6 x 250 mm; 5μ m). On average 25.1 ± 0.2 mg azadirachtin A were obtained in the first extraction, 11.2 ± 0.2 mg in the second extraction and 4.8 ± 0.2 mg in the third extraction, totaling 41.1 ± 0. , 3 mg azadirachtin A. The three sequential extracts were joined and subjected to complete solvent removal by evaporation under reduced pressure (Rocket evaporator, Genevac, UK, low boiling method). The weight of the dried extract was 4.2 ± 0.1 g. The azadirachtin A content in the dry ethanolic extract was 9,793 ± 241ppm. This dried extract was mixed with 50% (w / w) 99.5% ethanol, 250% (w / w) bidistilled glycerin and 250% (w / w) distilled water. Two phases were formed, an upper oily and a lower aqueous. The phases were separated in a separatory funnel. The weight of the aqueous phase obtained was 24.2 ± 0.6g. 2 ml of this aqueous phase was made up to 10 ml with distilled water, filtered and subjected to HPLC analysis under the same conditions as described above. The azadirachtin A concentration observed for the phase separation product was 1,649 ± 46 mg / g. Consequently, each gram of seed yielded 1.2 g of water soluble product with more than 1600 ppm azadirachtin A. The total loss of Azadirachtin A in the process was 2.8%. The new process was compared to the one published by Kleeberg (1992). For comparison purposes, this process was performed with the same amount of seeds and extraction solvent: 20g of the ground seeds as described above were extracted with 60 ml of macerated distilled water for 24 hours at room temperature (20 ° C). The extract was filtered off and the volume corrected to 100 ml with distilled water. Subsequently, the same material was extracted twice more with 60 ml of distilled water in the same manner. From each of the three extracts, 2 ml were removed for HPLC analysis by the method described above. On average, 12.2 ± 0.2 mg azadirachtin A were obtained in the first extraction, 15.0 ± 0.4 mg in the second extraction and 7.8 ± 0.3 mg in the third extraction, totaling 35.0 ± 0. , 8 mg azadirachtin A. Consequently, aqueous extraction under equal conditions yielded 15% less azadirachtin A than extraction with ethanol. The three sequential extracts were combined and the resulting solution subjected to liquid-liquid extraction with 50 ml of ethyl acetate. The organic phase was removed after phase separation. This procedure was repeated twice more. The three ethyl acetate extracts were joined and the solvent removed under reduced pressure (Rocket evaporator, Genevac, UK, low boiling method). The dried extract was dissolved in 3 mL of ethyl acetate and transferred to 30 mL of hexane in a centrifuge tube. A solid precipitate formed. After centrifugation (4000 rpm, 30 min), the liquid phase was decanted and the solvent residue evaporated. Upon reaching weight constancy, the mass of the dry precipitate was determined by analytical balance as 129 ± 22 mg. After solubilization of this precipitate in methanol, azadirachtin A content was determined by the method described above. This precipitate contained on average 28 ± 3 mg of Azadirachtin A. Consequently, the total loss of azadirachtin A in the proceeding was 31,5%, ie more than ten times greater than in the proceeding under that patent.

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[034] Schmutterer, H. (ed.). 1995. The Neem Tree Azadirachta indica A. Juss. and Other Meliaceous Plants. VCH, Weinheim, 696 p.Schmutterer, H. (ed.). 1995. The Neem Tree Azadirachta indicates A. Juss. and Other Meliaceous Plants. VCH, Weinheim, 696 p.

[035] Schroeder D.R., Nakanishi K., 1987: A simplified isolation procedure for Azadirachtin. Journal of Natural Products 50, 241-244.[035] Schroeder D.R., Nakanishi K., 1987: A Simplified Isolation Procedure for Azadirachtin. Journal of Natural Products 50, 241-244.

[036] Sharma V., Walia S., Kumar J., Nair M.G., Parmar B.S., 2003: An Efficient Method for the Purification and Characterization of Nematicidal Azadirachtins A, B, and H, Using MPLC and ESIMS. Journal of Agricultural and Food Chemistry 51,3966-3972.Sharma V., Walia S., Kumar J., Nair M.G., Parmar B.S., 2003: An Efficient Method for the Purification and Characterization of Nematicidal Azadirachtins A, B, and H, Using MPLC and ESIMS. Journal of Agricultural and Food Chemistry 51,3966-3972.

REIVINDICAÇÕES

Claims

1. "Process for obtaining a water soluble solution of azadirachtin A by a method against green chemistry", characterized in that it is made from seeds of Azadirachta indica A. Juss. and comprising the following steps: Step 1: Pretreatment of the raw material to achieve a particle size between mesh 4 and mesh 140; Step 2: Extraction of the raw material with medium polarity solvent belonging to the group of renewable alcohols and esters; Step 3: Remove most of the solvent; Step 4: Homogenization of the extract in a renewable polar solvent; Step 5: Phase Separation.

2. "Process for obtaining a water soluble azadirachtin A solution by combating the principles of green chemistry" according to claim 1, characterized in that the seeds are preprocessed by one or more of the husking processes; crushing or grinding; preferably the seeds are shredded to a particle size between mesh 4 and mesh 140, with a particle size between mesh 10 and mesh 20 being more advantageous.

3. A process for obtaining a water soluble azadirachtin A solution by combating with the principles of green chemistry according to claim 1, characterized in that the extraction is carried out with a solvent of the group [ethanol; ethyl acetate].

4. A process for obtaining a water soluble azadirachtin A solution by combating the principles of green chemistry according to claim 1, characterized in that ethanol contains 0-20% water, preferably 0-5%. of water.

"Process for obtaining a water-soluble azadirachtin A solution by a green-chemical fighting method" according to Claim 1, characterized in that the extraction is carried out at ambient temperature and atmospheric pressure.

6. A process for obtaining a water soluble azadirachtin A solution by combating the principles of green chemistry according to claim 1, characterized in that the solvent is removed by evaporation.

7. A process for obtaining a water soluble azadirachtin A solution by combating with the principles of green chemistry according to claim 1, characterized in that the solvent is removed under reduced pressure.

8. A process for obtaining a water soluble azadirachtin A solution by combating with the principles of green chemistry according to claim 1, characterized in that the removal of the solvent is incomplete or complete, preferably incomplete.

9. "Process for obtaining a water soluble azadirachtin A solution by combating with the principles of green chemistry" according to claims 1 and 8, characterized in that an amount of solvent remains in the extract which corresponds to up to 100%. of the weight of the fully dried extract, preferably up to 50% of the weight of the fully dried extract.

10. "Process for obtaining a water soluble azadirachtin A solution by combating with the principles of green chemistry" according to claim 1, characterized in that the solvent removed by evaporation is recovered by a condensation process.

11. "Process for obtaining a water soluble azadirachtin A solution by combating the principles of green chemistry" according to claim 1, characterized in that the extract, containing the reduced amount of extraction solvent or not, is homogenized. with renewable polar solvent.

12. "Process for obtaining a water soluble azadirachtin A solution by combating the green chemistry principles" according to claims 1 and 11, characterized in that the renewable polar solvent is one or two solvents of the group [glycerol, water ], preferably a combination of the two.

13. A process for obtaining a water soluble azadirachtin A solution by combating with the principles of green chemistry according to claims 1,11 and 12, characterized in that the renewable polar solvent is composed of glycerol and water in a ratio between 90:10 to 10:90, preferably between 70:30 and 30:70.

A process for obtaining a water-soluble azadirachtin A solution by a process which is compatible with the principles of green chemistry according to claim 1, characterized in that the polar phase is separated by a mechanical method.