BR102015028438A2 - novos derivados da naftoquinona e avaliação de suas atividades tripanocida - Google Patents

Abstract

novos derivados da naftoquinona e avaliação de suas atividades tripanocida. a presente invenção se refere a obtenção de novos derivados da naftoquinona, especificamente a partir da 2-hidroxi-1,4-naftoquinona e ácidos carboxílicos (3,y insaturados de cadeia longa e posterior ciclização com inbr3 com atividade tripanocida. como a doença de chagas é caracterizada pela falta de tratamento adequado, péssima qualidade de vida dos pacientes acometidos e baixo incentivo na pesquisa de novos agentes terapêuticos mas, que por outro lado existem indícios de que novas naftoquinonas análogas da 2-hidroxi-1,4-naftoquinona, a-lapachona e (-lapachona podem constituir em protótipos de fármacos com importantes atividades farmacológicas, o presente invenção vem a contribuir com o planejamento e a síntese de novos derivados das naftoquinonas com potencial tripanocida.

Description

NOVOS DERIVADOS DA NAFTOQUINONA E AVALIAÇÃO DE SUAS ATIVIDADES TRIPANOCIDA Setor técnico [001] A presente invenção se refere ao processo de obtenção de derivados da naftoquinona, especificamente a partir da 2-hidroxi-l,4-naftoquinona, avaliados quanto a suas aplicações como agentes tripanocida.

Estado da técnica [002] As naftoquinonas são substâncias de origem natural consideradas especiais na química medicinal em virtude de suas propriedades biológicas e estão amplamente distribuídas em plantas como das famílias Bignoniaceae e Verbanaceae. Estas substâncias possuem um anel quinonoídico sustentado por um anel naftalênico que podem apresentar isomerias 1,2 ou orto-quinonoídica e 1,4 ou /^/-a-quinonoídica, que estão representadas na Figura 1.

[003] O amplo espectro de atividades biológicas das naftoquinonas inclui atividade antiviral, antibacteriana, anticâncer, inseticida, tripanocida e leishmanicida. Dentre as naftoquinonas bioativas estão o lapachol, a α-lapachona e a β-lapachona (Figura 2), isômeros constitucionais muito conhecidos na química medicinal.

[004] Estes compostos além de serem obtidos de fontes naturais podem ser facilmente sintetizados, o que têm favorecido a síntese de diversas substâncias com potencial atividade farmacológica, incluindo o desenvolvimento de candidatos a fármacos contra doenças negligenciadas e outras enfermidades.

[005] A patente PI 1003106-5 A2 se refere ao método de preparação de derivados 3-alquilados ou C-alquilados a partir da condensação de 2-hidroxi-l,4-naftoquinonas substituídas no anel aromático com aldeídos formando quinonas metídios que são reduzidas no meio reacional com ácido fórmico em reator fechado e em solventes polares e apoiares.

[006] A patente PI0802213-5 A2 se refere a obtenção de derivados das lapachonas, onde propõe um processo de obtenção de β-lapachonas utilizando como composto de partida a 2-hidroxi-naftoquinona e como reagentes o paraformaldeído e o gás issobutileno.

[007] A patente BR 10 2012 019793-6 A2 refere-se ao processo inédito de obtenção do norlapachol e seus derivados químicos com um átomo de nitrogênio ou de enxofre ou qualquer heteroátomo na posição 2, contendo pares de elétrons capazes de conjugar com um sistema insaturado, empregando uma reação de condensação entre um núcleo naftoquinoídico, preferencialmente a lawsona e um aldeído, preferencial mente o isobutiraldeído, em meio ácido e a altas temperatura.

[008] A patente WO 2013/016661 se refere a um método de inibição do Trypanossoma cruzi por meio da administração de uma quantidade efetiva de 1,4-naftoquinona imido-substituídas aos pacientes, de forma profilática ou como tratamento antitripanossoma.

[009] A patente WO 2013/074930 Al refere-se a métodos para inibir a proliferação de parasitas do gênero Leishmania, em particular a Leishmania donovani com 1,4-naftoquinonas imido-substituídas, incluindo novos compostos. A administração de uma 1,4-naftoquinona imido-substituída por ser utilizada como profilaxia ou para o tratamento de pacientes que necessitam de tratamento contra a leishmaniose.

Problemas técnicos existentes [010] Na presente invenção o problema técnico identificado está relacionado com a não obtenção de altos rendimentos das reações que fornecem os compostos alvo.

Objetivos da invenção/vantagens [011] A presente invenção tem por objetivo relatar a obtenção de novos compostos derivados da naftoquinona obtidos por meio da reação radicalar da 2-hidroxi-l ,4-naftoquinona e ácidos carboxílicos β,γ insaturados de cadeia longa e os obtidos também pela posterior ciclização utilizando um ácido de Lewis. Os compostos são apresentados como agentes tripanocida. As vantagens da invenção englobam o emprego de reações relativamente simples e rápidas que fornecem dois compostos em cada reação, compostos estes que podem ser empregados como agentes tripanocida.

Novidade [012] O que difere a presente invenção das demais é a obtenção de compostos a partir da reação entre a 2-hidroxi-1,4-naftoquinona com ácidos carboxílicos β,γ insaturados de cadeia longa e os obtidos também pela posterior ciclização utilizando um ácido de Lewis. Os compostos podem servir como adjuvantes para resolver problemas de ineficiência no tratamento eficaz da Doença de Chagas.

Breve Descrição [013] A invenção se refere a obtenção de novos compostos derivados da 2-hidroxi-l,4-naftoquinona provenientes da reação de acoplamento radicalar entre a 2-hidroxi-l,4-naftoquinona e ácidos carboxilicos β,γ insaturados de cadeia longa. Os demais compostos, naftoquinonas heterocíclicas derivadas da β-lapachona, foram obtidos pela reação de ciclização intramolecular dos novos compostos derivados da 2-hidroxi-l,4-naftoquinona utilizando o ácido de Lewis brometo de índio III (InBr3). Os compostos obtidos foram avaliados sobre o Trypanosoma cruzi na qual apresentam potencial atividade biológica sobre o referido parasita.

Descrição detalhada [014] A presente invenção se refere a síntese de derivados da 2-hidroxi-1.4-naftoquinona aplicando o método de acoplamento radicalar entre a 2-hidroxi-l,4-naftoquinona e ácidos carboxilicos β,γ insaturados de cadeia longa, onde a utilização de ácidos carboxilicos β,γ insaturados de cadeia longa neste tipo de procedimento é apresentado como novidade nesta invenção. Posteriormente, os derivados da 2-hidroxi-1,4-naftoquinona obtidos nesta invenção foram submetidos a reação de ciclização intramolecular utilizando o catalisador InBr3, na qual foram obtidas naftoquinonas heterocíclicas derivadas da β-lapachona. Outra novidade apresentada por esta invenção é a obtenção de naftoquinonas heterocíclicas com anéis pirânicos e furânicos ambos orto-quinonoídico, pois até então a literatura relata que o InBr3 é capaz de catalisar a ciclização do lapachol em α-lapachona (anel pirânico /?ara-quinonoídico) e β-lapachona (anel pirânico orto-quinonoídico).

[015] Para o desenvolvimento dos objetivos deste invento foram necessárias a utilização de duas rotas sintéticas, representadas pela Figura 3 e Figura 4.

[016] De acordo com a Figura 3, foram sintetizados os ácidos carboxilicos β,γ insaturados de cadeia longa previamente relatados na literatura, cujo grupamento R é referente a cadeia alquílica a partir de 7 átomos de carbono. Posteriormente, os ácidos carboxilicos β,γ insaturados de cadeia longa foram submetidos a reação de acoplamento radicalar com 2-hidroxi-l,4-naftoquinona na qual foram obtidos os derivados da 2-hidroxi-l,4-naftoquinona cujos grupamentos R se referem a cadeia alquílica a partir de 7 carbonos.

[017] De acordo com o Figura 4, os derivados da 2-hidroxi-l,4-naftoquinona apresentados na Figura 3 foram submetidos a reação de ciclização intramolecular utilizando o InBr3 como catalisador, obtendo-se as naftoquinonas heterocíclicas cujos grupamentos R2 e R3 correspondem a cadeia alquílica a partir de 8 carbonos e 7 carbonos, respectivamente.

[018] Os resultados dos ensaios biológicos in vitro mostraram que os compostos 7 e 9 foram ativos sobre a forma amastigota de Trypanosoma cruzi e apresentaram baixa citotoxicidade sobre fíbroblastos LLCMK2, o que os tornam candidatos promissores no tratamento da Doença de Chagas. Os demais compostos também apresentaram baixa citotoxicidade, apresentando potencial atividade tripanocida.

Procedimentos Químicos EXEMPLO 1 Síntese de (E)-2-(Dec-2-enil)-3-hidroxinaftaleno-l,4-diona (1) e 2-(Dec-l-en~3-il)-3-hidroxinaftaleno-1,4-diona (4) [019] Em um balão de fundo redondo, foi adicionado nitrato de prata (250 mg, 1,5 mmol), 2-hidroxi-l,4-naftoquinona (200 mg, 1,1 mmol), ácido (£)-3-undecenóico (600 mg, 3,2 mmol), água destilada (10 mL) e acetonitrila (20 mL). Em seguida, com o auxílio de um funil de adição, foi adicionado gota a gota por um período de 90 a 120 minutos uma solução de persulfato de amônio (1 g, 4 mmol) em água destilada à temperatura de 70-80 °C sob agitação. Após este período, a mistura reagente foi mantida sob agitação por mais 30 minutos e resfriada à temperatura ambiente. Posteriormente, a mistura reagente foi lavada com água destilada, extraída com acetato de etila, a fase orgânica foi seca com sulfato de magnésio anidro, filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em coluna de sílica “flash” (200-400 mesh) utilizando como eluente mistura de hexano e acetato de etila com gradiente 9:1. Frações obtendo a mistura dos isômeros 1 e 4 foram purificadas em placa preparativa de sílica gel GF DE 500 mícrons Uniplat® utilizando como eluente mistura de hexano e acetato de etila com gradiente 9:1. Composto 1: Óleo laranjado, 22% de rendimento. IV (KBr, cm’1): vmax 3440, 2962-2854, 1670-1647, 1600-1500, 725. RMN de 'H (300 MHz, CDC13) δ: 0,83 (3H, t, J= 6.0 Hz, CH3, H-20), 1,00-1,50 (2H, m, CH2, H-19), 1,00-1,50 (2H, m, CH2,H-18), 1,00-1,50 (6H, m, CH2, H15-H17), 1,95 (2Η, q, J= 15,0 Hz e J= 6,0 Hz CH2,H-14), 3,28 (2H, d, /= 6,3 Hz, CH2, H-ll), 5,35- 5,65 (1H, m, CH, H-13), 5,35-5,65 (1H, m, CH, H-12), 7,32 (1H, br s, OH), 7,65 (1H, td, J0= 7,5 Hz, 1,5 Hz, CH, H-7), 7,75 (1H, td, 7,5 Hz, Jm= 1,5 Hz, CH, H-6), 8,06 (1H, dd, J0- 7,5 Hz, Jm= 1,5 Hz, CH, H-8), 8,11 (1H, dd, J0= 7,5 Hz, = 1,5 Hz, CH, H-5). RMN de ,3C (75 MHz, CDC13) δ: 14,05 (CH3, C-20), 22,60 (CH2. C-19), 26,41 (CH2> C-ll), 29,00-30,00 (3CH2, C15-C17), 31,79 (CH2, C-14), 32,46 (CH2, C-18), 122,82 (C, C-3), 124,69 (CH, C-12), 126,07 (CH, C-8), 126,81 (CH, C-5), 129,44 (2C, C9-C10), 132,86 (CH, C-13), 133,05 (CH, C-7), 134,87 (CH, C-6), 152,84 (C-OH, C-2), 181,64 (C=0, C-l), 184,34 (C=0, C-4). MS (EI) m/z 312 (JVT*, 20%), 213 (100), 188 (27), 159 (7), 55 (9). HRMS (EI) m/z [M]+* calcd. para C20H24O3: 312,1725, encontrado: 312,1725. Composto 4\ Óleo laranjado, 5% de rendimento. IV (KBr, cm'1): vmax 3371, 2954-2854, 1666-1650, 1600-1500, 725. RMN de ’H (300 MHz, CDC13) δ: 0,84 (3H, t, /= 6,0 Hz, CH3j H-20), 1,00-1,50 (2H, m, CH2H-19), 1,00-1,50 (2H, m, CH2, H-18), 1,00-1,50 (6H, m, CH2. H15-H17), 1,79 (2H, q, J= 16,8 Hz e J= 8,1 Hz, CH2, H-14), 3,80 (1H, q, J- 15,9 Hz e J= 8,7 Hz, CH, H-ll), 4,99 (1H, dd, Jcis= 10,2 Hz, Jgem = 1,2 Hz, CH2 H-13), 5,09 (1H, dd, Jtrans = 17,1 Hz, Jgem = 1,2 Hz, CH2>H-13), 6,18 (1H, ddd, Jtram = 17,1 Hz, Jcis= 9,3 Hz, Jvic = 8,7 Hz, CH, H-12), 7,44 (1H, br s, OH), 7,64 (1H, td, J0= 7,5 Hz, J= 7,5 Hz, Jm= 1,2 Hz, CH, H-7), 7,72 (1H, td, J0= 7,5 Hz, JQ = 7,5 Hz, Jm = 1,2 Hz, CH, H-6), 8,04 (1H, dd, J0= 7,5 Hz, 1,2 Hz, CH, H-8), 8,09 (1H, dd, J0= 7,5 Hz, Jm= 1,2 Hz, CH, H-5). RMN de 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ: 14,06 (CH3 C-20), 22,62 (CH2,C-19), 27,00-30,00 (3CH2, C15-C17), 31,82 (CH2C-18), 32,33 (ClI2 C-14), 40,41 (CH, C-ll), 115,40 (CH2>C-13), 125,70 (C, C-3), 126,01 (CH, C-8), 126,97 (CH, C-5), 129,22 (C, C-9), 132,83 (CH, C-7), 133,01 (C, C-10), 134,98 (CH, C-6), 139,07 (CH, C-12), 152,68 (C-OH, C-2), 181,73 (C=0, C-l), 184,18 (C=0, C-4). MS (EI) m/z 312 (M+>, 61%), 241 (61), 213 (100), 188 (34), 159 (66), 55 (87). HRMS (EI) m/z [M]+* calcd. Para C2oH2403: 312,1725, encontrado: 312,1726. EXEMPLO 2 Síntese de (E)-2-(Undec-2-enil)-3-hidroxinaftaleno-l,4-diona (2) e 2-(Undec-l-en-3-il)-3-hidroxinaftaleno-1,4-diona (5) [020] Em um balão de fundo redondo, foi adicionado nitrato de prata (250 mg, 1,5 mmol), 2-hidroxi-l,4-naftoquinona (200 mg, 1,1 mmol), ácido (£)-3-dodecenóico (600 mg, 3,02 mmol), água destilada (10 mL) e acetonitrila (20 mL). Em seguida, com o auxílio de um funil de adição, foi adicionado gota a gota por um período de 90 a 120 minutos uma solução de persulfato de amônio (1 g, 4 mmol) em água destilada à temperatura de 70-80 °C sob agitação. Após este período, a mistura reagente foi mantida sob agitação por mais 30 minutos e resfriada à temperatura ambiente. Posteriormente, a mistura reagente foi lavada com água destilada, extraída com acetato de etila, a fase orgânica foi seca com sulfato de magnésio anidro, filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em coluna de sílica “flash” (200-400 mesh) utilizando como eluente mistura de hexano e acetato de etila com gradiente 9:1. Frações obtendo a mistura dos isômeros 2 e 5 foram purificadas em placa preparativa de sílica gel GF DE 500 mícrons Uniplat® utilizando como eluente mistura de hexano e acetato de etila com gradiente 9:1. Composto 2\ óleo laranjado, 20% de rendimento. IV (KBr, cm'1): vmay 3317, 2954-2854, 1662-1616, 1600-1550, 725. RMN de 'H (300 MHz, CDC13) ô: 0,85 (3H, t, / = 6,0 Hz, CH3, H-21), 1,00-1,50 (2H, m, CH2 H-20), 1,00-1,50 (2H, m, CH2,H-19), 1,00-1,50 (8H, m, CH2 H15-H18), 1,94 (2H, q, J= 12,0 Hz e J = 6,0 Hz, CH2> H-14), 3,27 (2H, d, J = 6,6 Hz, C% H-l 1), 5,35- 5,65 (1H, m, CH, H-13), 5,35-5,65 (1H, m, CH, H-12), 7,37 (1H, br s, OH), 7,64 (1H, td, J0= 7,5 Hz, Jm= 1,5 Hz, CH, H-7), 7,74 (1H, td, J0 = 7,5 Hz, Jm= 1,5 Hz, CH, H-6), 8,05 (1H, dd, J0= 7,5 Hz, Jm= 0,9 Hz, CH, H-8), 8,10 (1H, dd, /„=7,5 Hz, /„=0,9 Hz, CH, H-5), RMN de 13C (75 MHz, CDCI3) δ: 14,04 (CH3< C-21), 22,61 (CH2; C-20), 26,37 (CH2, C-ll), 29,00-30,00 (4CH2, C15-C-18), 31,85 (CH2, C-14), 32,45 (CH2, C-19), 122,79 (C, C-3), 124,67 (CH, C-12), 126,03 (CH, C-8), 126,74 (CH, C-5), 129,41 (2C, C9-C10), 132,83 (CH, C-13), 133,00 (CH, C-7), 134,83 (CH, C-6), 152,83 (C-OH, C-2), 181,56 (C=0, C-l), 184,35 (C=0, C-4). MS (EI) m/z 326 (VT*, 0,8%), 213 (100), 188 (27), 159 (6), 55 (45). HRMS (EI) m/z [M]+* calcd. para C21II2603: 326,1881, encontrado: 326,1879. Composto 5: Óleo laranjado, 6% de rendimento. IV (KBr, cm'1): vraax 3317, 2954-2854, 1666-1650, 1600-1500, 725. RMN de *H (300 MHz, CDC13) Ô: 0,84 (3H, t, /=6,0 Hz, CH3, H-21), 1,00-1,50 (2H, m, CH2> H-20), 1,00-1,50 (2H, m, CH2 H-19), 1,00-1,50 (8H, m, CH2 H15-H18), 1,79 (2H, q, / = 15,0 Hz e /= 9,0 Hz, CH2 H-14), 3,80 (1H, q, /= 15,9 Hze/ = 8,4 Hz, CH, H-ll), 5,00 (1H, dd,JCIS= 10,2 Hz, Jgem = 0,9 Hz, CH2i H-13), 5,11 (1H, dd, Jtram = 17,1 Hz, Jgem = 0,9 Hz, CH2, H-13), 6,18 (1Η, ddd, Jtrans =17,1 Hz, Jcis= 9,6 Hz, Jvic = 8,4 Hz, CH, H-12), 7,42 (1H, br s, OH), 7,65 (1H, td, J0= 7,5 Hz, Jm= 1,5 Hz, CH, H-7), 7,76 (1H, td, J0= 7,5 Hz, Jm= 1,5 Hz, CH, H-6), 8,04 (1H, dd, Ja= 7,5 Hz, Jm = 1,2 Hz, CH, H-8), 8,10 (1H, dd, Ja= 7,5 Hz, 1,2 Hz, CH, H-5). RMN de ,3C (75 MHz, CDC13) δ: 14,08 (CH3, C-21), 22,63 (CH2i C-20), 27,00-30,00 (4CH2i C15-C18), 31,83 (CH2, C-19), 32,33 (CH2, C-14), 40,41 (CH, C-ll), 115,39 (CH2>C-13), 125,69 (C, C-3), 126,00 (CH, C-8), 126,96 (CH, C-5), 129,21 (C, C-9), 132,83 (CH, C-7), 133,00 (C, C-10), 134,97 (CH, C-6), 139,07 (CH, C-12), 152,68 (C-OH, C-2), 181,72 (C=0, C-l), 184,17 (C=0, C-4). MS (EI) m/z 326 (M+·, 22%), 241 (2), 213 (100), 188 (31), 159 (7), 55 (11). HRMS (EI) m/z [M]+* calcd. para C2iH2603 326,1881, encontrado: 326,1877. EXEMPLO 3 Síntese de (E)-2-(Dodec-2-enil)-3-hidroxinaftaleno-1,4-diona (3) e 2-(Dodec-l-en-3-il)-3-hidroxinaftaleno-1,4-diona (6) [021] Em um balão de fundo redondo, foi adicionado nitrato de prata (250 mg, 1,5 mmol), 2-hídroxi-l,4-naftoquinona (200 mg, 1,1 mmol), ácido (£')-3-tridecenóico (600 mg, 2,82 mmol), água destilada (10 mL) e acetonitrila (20 mL). Em seguida, com o auxílio de um funil de adição, foi adicionado gota a gota por um período de 90 a 120 minutos uma solução de persulfato de amônio (1 g, 4 mmol) em água destilada à temperatura de 70-80 °C sob agitação. Após este período, a mistura reagente foi mantida sob agitação por mais 30 minutos e resfriada à temperatura ambiente. Posteriormente, a mistura reagente foi lavada com água destilada, extraída com acetato de etila, a fase orgânica foi seca com sulfato de magnésio anidro, filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em coluna de sílica “flash” (200-400 mesh) utilizando como eluente mistura de hexano e acetato de etila com gradiente 9:1. Frações obtendo a mistura dos isômeros 3 e 6 foram purificadas em placa preparativa de sílica gel GF DE 500 mícrons UniplaC utilizando como eluente mistura de hexano e acetato de etila com gradiente 9:1. Composto 3: Óleo laranjado, 24% de rendimento. IV (KBr, cm'1): vmax 3355, 2919-2850, 1654-1643, 1600-1500, 725. RMN de *H (300 MHz, CDC13) δ: 0,84 (3H, t, J = 6,0 Hz, CH3>H-22), 1,00-1,50 (2H, m, CH2 H-21), 1,00-1,50 (2H, m, CH2> H-20), 1,00-1,50 (10H, m, CH2, H15-H19), 1,94 (2H, q,J = 12,0 Hz e J= 6,0 Hz, CH2 H-14), 3,27 (2H, d, J= 6,3 Hz, CH2,H-11), 5,35- 5,65 (1Η, m, CH, H-13), 5,35-5,65 (1H, m, CH, H-12), 7,38 (1H, br s, OH), 7,64 (1H, td, J0= 7,5 Hz, Jm= 1,5 Hz, CH, H-7), 7,74 (1H, td, J0= 7,5 Hz, Jm = 1,5 Hz, CH, H-6), 8.04 (1H, d, J0= 7,5 Hz, CH, H-8), 8,10 (1H, d, J0= 7,5 Hz, CH, H-5) RMN de I3C (75 MHz, CDC13) δ: 14,07 (CH3, C-22), 22,63 (CH2 C-21), 26,39 (CH2, C-ll), 29,00-30,00 (5CH2 C15-09), 31,85 (CH2C-14), 32,46 (CH2, C-20), 122,78 (C, C-3), 124,67 (CH, C-12), 126,04 (CH, C-8), 126,77 (CH, C-5), 129,41 (2C, C9-C10), 132,83 (CH, C-13), 133,02 (CH, C-7), 134,83 (CH, C-6), 152,84 (C-OH, C-2), 181,60 (C=0, C-l), 184,30 (C=0, C-4). MS (EI) m/z 340 (M4-*, 17%), 213 (100), 188 (34), 159 (11), 55 (24), HRMS (EI) m/z [M]+* calcd. para C22H2803: 340,2038, encontrado: 340,2039. Composto 6: Óleo laranjado, 4% de rendimento. IV (KBr, cm'1): vmax 3371, 2954-2850, 1666-1650, 1600-1500, 725. RMN de 'H (300 MHz, CDC13) 5: 0,85 (3H, t, J= 6,0 Hz, CH3,H-22), 1,00-1,50 (2H, m, CH2,H-21), 1,00-1,50 (2H, m, CH2 H-20), 1,00-1,50 (10H, m, CH2 H15-H19), 1,79 (2H, q, J- 15,0 Hz e J= 9,0 Hz, CH2,H-14), 3,80 (1H, q,J= 15,9 Hz e J = 8,4 Hz, CH, H-ll), 5,00 (1H, dd, Jcis = 9,3 Hz, Jgem = 0,9 Hz, CH2, H-13), 5,10 (1H, dd, 1H, Jtrans = 17,1 Hz, Jgem = 0,9 Hz, CH2; H-13), 6,18 (1H, ddd, Jlrans = 17,1 Hz, Jcis = 9,3 Hz, Jvjc = 8,4 Hz, CH, H-12), 7,43 (1H, br s, OH), 7,65 (1H, td, 1H, J0= 7,5 Hz, Jm = 1.5 Hz, CH, H-7), 7,76 (1H, td,J0= 7,5 Hz, Jm= 1,5 Hz, CH, H-6), 8,05 (1H, dd, 7,5 Hz, Jm= 0,9 Hz, CH, H-8), 8,10 (1H, dd, Ja= 7,5 Hz, Jm= 0,9 Hz, CH, H-5 RMN de 13C (75 MHz, CDCI3) δ: 14,08 (CH3, C-22), 22,65 (CH2, C-21), 27,00-30,00 (5CH2; C15-09), 31,84 (CH2> C-20), 32,33 (CH2. C-14), 40,41 (CH, C-ll), 115,38 (CH2i C-13), 125,70 (C, C-3), 125,99 (CH, C-8), 126,95 (CH, C-5), 129,22 (C, C-9), 132,82 (CH, C-7), 132,99 (C, C-10), 134,96 (CH, C-6), 139,07 (CH, C-12), 152,70 (C-O, C-2), 181,72 (C=0, C-l), 184,16 (C=0, C-4). MS (EI) m/z 340 (M+“, 64%), 241 (73), 213 (100), 188 (40), 159 (54), 55 (91). HRMS (EI) m/z [M]+* calcd. para C22H2803: 340,2038, encontrado: 340,2040. EXEMPLO 4 Síntese de 2-Octil-2,3-diidronafto[l,2-b]furcm-4,5-diona (7) e 2-Heptil-3,4-diidro-2II-benzo[h]cromeno-5,6-diona (10) [022] Em um balão de fundo redondo, foi adicionado o composto (£)-2-(dec-2-enil)-3-hidroxinaftaleno-l,4-diona (96 mg, 0,307 mrnol), brometo de índio III (200 mg 0,564 mmol) e diclorometano (20 mL) e mantido sob agitação à temperatura ambiente durante 24 h. Posteriormente, a mistura reagente foi lavada com água destilada, extraída com diclorometano, a fase orgânica foi seca com sulfato de magnésio anidro, filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi purificado em placa preparativa de sílica gel GF DE 500 mícrons Uniplaf utilizando como eluente mistura de hexano e acetato de etila com gradiente 5:1. Composto 7: Sólido laranjado, 26% de rendimento, pf: 95,6-100 °C. IV (KBr, cm'1): vma* 2954-2850, 1697-1608, 1600-1500, 725. RMN de 'H (300 MHz, CDC13) δ: 0,86 (3H, t, J= 6,0 Hz, CH3, H-20), 1,10-1,50 (2H, m, CH2 H-19), 1,10-1,50 (2H, m, CH2H-18), 1,10-1,50 (2H, m, CH2,H-17), 1,1 ΟΙ,50 (2H, m, CH2 H-16), 1,10-1,50 (2H, m, CH2, H-15), 1,40-1,60 (2H, m, CHZH-14), 1,65-1,81 (1H, m, CH2,H-13), 1,82-2,00 (1H, m, CH2,H-13), 2,77 (1H, dd,J= 15,0 Hz e J = 6,0 Hz, CH2 H-11), 3,21 (1H, dd, J = 15,0 Hz e J= 9,0 Hz, CH2, H-ll), 5,10 (1H, dddd,J= 9,0 Hz, J= 9,0 Hz, J = 6,0 Hz e J= 6,0 Hz, CH, H-12), 7,52-7,60 (IH, m, CH, H-7), 7,60-7,67 (2H, m, CH, H5-H6), 8,05 (1H, d, J0= 7,5 Hz, CH, H-8). RMN de 13C (75 MHz, CDC13) δ: 14,06 (CH3 C-20), 22,60 (CH2i C-19), 24,92 (CH2, C-14), 29,14 (CH2> C-15), 29,27 (CH2>C-17), 29,38 (CH2 C-16), 31,82 (CH2,C-11), 31,77 (CH2j C-18), 36,02 (CH2 C-13), 88,44 (CH, C-12), 115,30 (C, C-3), 124,48 (CH, C-5), 127,63 (C, C-10), 129,33 (CH, C-8), 130,71 (C, C-9), 131,86 (CH, C-7), 134,43 (CH, C-6), 169,87 (C, C-4), 175,43 (C=0, C-2), 181,29 (C=0, C-l). MS (EI) m/z 312 (M+*, 22%), 213 (10), 183 (18), 159 (100), 55 (19). HRMS (EI) m/z [Mj+* calcd. para C20H24O3: 312,1725, encontrado: 312,1727. Composto 10: Sólido laranja, 26% de rendimento, pf: 72,1-74,4 °C. IV (KBr, cm4): vmas 2943-2854, 1697-1600, 1600-1500, 729. RMN de !H (300 MHz, CDC13) δ: 0,88 (3H, t, J = 6,0 Hz, CH3> H-20), 1,20-1,40 (2H, m, CH2 H-19), 1,20-1,40 (2H, m, CH2 H-18), 1,20-1,40 (2H, m, CH2H-17), 1,20-1,40 (2H, m, CH2 H-16), 1,401,60 (2H, m, CH2 H-15), 1,60-1,80 (1H, m, CH2,H-12), 1,65-1,90 (2H, m, CH2j H-14), 2,00-2,12 (1H, m, CH2>H-12), 2,42 (IH, ddd, /= 18,0 Hz, J= 9,0 Hz e 7= 6,0 Hz, CH2> H-ll), 2,68 (IH, ddd, J = 18,0 Hz, J= 9,0 Hz e J= 6,0 Hz, CH2, H-ll), 4,22 (IH, dddd, J = 12,0 Hz, 7,5 Hz, .7=6,0 HzeJ=3,0Hz, CH, H-13), 7,49 (IH, td,/0=7,8 Hz,Jm = 1,5 Hz, CH, H-7), 7,63 (IH, td, J0= 7,8 Hz, Jm= 1,5 Hz, CH, H-6), 7,76 (IH, dd, J0= 7,8 Hz, Jm= 0,9 Hz, CH, H-5), 8,04 (IH, dd, J0= 7,8 Hz, Jm= 0,9 Hz, CH, H-8). RMN de ,3C (75 MHz, CDC13) δ: 14,05 (CH3, C-20), 17,95 (CH2> C-l 1), 22,59 (CH2 C-19), 25,27 (CH2 C-15), 25,94 (CH2j C-12), 29,14 (CH2>C-17), 29,39 (CH2iC-16), 31,74 (CH2jC-18), 34,73 (CII2 C-14), 79,03 (CH, C-13), 113,92 (C, C-3), 123,90 (CH, C-5), 128,59 (CH, C- 8), 130,00 (C, C-9), 130,62 (CH, C-7), 132,40 (C, C-10), 134,78 (CH, C-6), 162,87 (C, C-4), 178,58 (C=0, C-2), 179,72 (C=0, C-l). MS (EI) m/z 312 (M+*, 4%), 213 (5), 185 (4), 159 (100), 55 (9). HRMS (EI) m/z [M+2Hf calcd. para C20H24O3: 314,1881, encontrado; 314,1879. EXEMPLO 5 Síntese de 2-Nonii-2,3-diidronafto[ 1,2-b]furcm-4,5-diona (8) e 2-Octil-3,4-diidro-2H-benzo[h]cromeno-5,6-diona (11) [023] Em um balão de fundo redondo, foi adicionado do composto (£)-2-(undec-2-enil)-3-hidroxinaftaleno-l,4-diona (100 mg, 0,306 mmol), brometo de índio III (200 mg, 0,564 mmol) e diclorometano (20 mL) e mantido sob agitação à temperatura ambiente durante 24 h. Posteriormente, a mistura reagente foi lavada com água destilada, extraída com diclorometano, a fase orgânica foi seca com sulfato de magnésio anidro, filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi purificado em placa preparativa de sílica gel GF DE 500 mícrons Uniplat* utilizando como eluente mistura de hexano e acetato de etila com gradiente 5:1. Composto 8: Sólido laranja, 25% de rendimento, pf; 90,5-95,8 °C. IV (KBr, cm'1): vmax 2954-2854, 1697-1608, 1600-1500, 725. RMN de 'H (300 MHz, CDC13) δ; 0,87 (3H, t, J = 9,0 Hz, CH3, H-21), 1,10-1,50 (2H, m, CH2, H-2Q), 1,10-1,50 (2H, m, CH2, H-19), 1,10-1,50 (2H, m, CH2, H-18), l, 10-1,50 (2H, m, CH2, H-17), 1,10-1,50 (2H, m, CH2, H-16), 1,10-1,50 (2H, m, CH2, H-15), 1,40-1,60 (2H, m, CH2,, H-14), 1,62-1,81 (III, m, CH2, H-13), 1,82-2,00 (1H, m, CH2, H-13), 2,78 (1H, dd, J= 15,0 Hz eJ= 6,0 Hz, CH2, H-ll), 3,22 (1H, dd, CH2J = 15,0 Hz e J= 9,0 Hz, CH2, H-ll), 5,11 (1H, dddd, J = 9,0 Hz, J = 9,0 Hz, J= 6,0 Hz e J= 6,0 Hz, CH, H-12), 7,50-7,60 (1H, m, CH, H-7), 7,60-7,67 (2H, m, CH, H5-H6), 8,06 (1H, d, J0= 1,2 Hz, CH, H-8). RMN de 13C (75 MHz, CDC13) δ: 14,07 (CH3, C-21), 22,64 (CH2, C-20), 24,94 (CH2, C-14), 29,24 (CH2, C-15), 29,30 (CH2, C-18), 29,45 (2CH2, C16-C17), 31,84 (CH2, C-19), 31,85 (CH2, C-ll), 36,04 (CH2, C-13), 88,46 (CH, C-12), 115,34 (C, C-3), 124,49 (CH, C-5), 127,67 (C, C-10), 129,38 (CH, C-8), 130,77 (C, C-9), 131,88 (CH, C-7), 134,43 (CH, C-6), 169,87 (C, C-4), 175,48 (C=0, C-2), 181,32 (C=0, C-l). MS (EI) m/z 326 (M+>, 34%), 213 (9), 185 (13), 159 (100), 55 (14). HRMS (EI) m/z [M]+* calcd. para C2|H2603: 326,1881, encontrado: 326,1880. Composto 11: Sólido laranja, 20% e rendimento, pf: 64,5-67,7 °C. IV (KBr, cm"1): vmax 2923-2854, 1693-1600, 1600-1500, 721. RMN de 'H (300 MHz, CDC13) δ: 0,88 (3H, t, J = 9,0 Hz, CH3, H-21), 1,20-1,40 (2H, m, CH2, H-20), 1,20-1,40 (2H, m, CH2, H-19), 1,20-1,40 (2H, m, CH2, H-18), 1,20-1,40 (2H, m, CH2, H-17), 1,20-1,40 (2H, m, CH2, H-16), 1,40-1,60 (2H, m, CH2, H-15), 1,60-1,80 (1H, m, CH2, H-12), 1,60-1,95 (2H, m, CH2, H-14), 2,00-2,15 (1H, m, CH2, H-12), 2,42 (1H, ddd, J= 18,0 Hz, /= 9,0 Hz e J = 6,0 Hz, CH2, H-ll), 2,68 (1H, ddd, J= 18,0 Hz, J= 9,0 Hze/ = 6,0 Hz, CH2, H-ll), 4,22 (1H, dddd, J = 12,0 Hz, J= 6,0 Hz, J= 6,0 Hz e J= 3,0 Hz, CH, H-13), 7,47 (1H, td, J0= 7,5 Hz, Jm= 0,9 Hz, CH, H-7), 7,64 (1H, td, J0 = 7,5 Hz, Jm= 0,9 Hz, CH, H-6), 7,76 (1H, d, J0= 7,5 Hz, CH, H-5), 8,04 (1H, d, J0 = 7,5 Hz, CH, H-8). RMN de 13C (75 MHz, CDC13) δ: 14,09 (CH3, C-21), 17,97 (CH2, C-ll), 22,65 (CH2, C-20), 25,30 (CH2, C-15), 25,98 (CH2, C-12), 29,22 (CH2, C-18), 29,46 (2CH2, C16-C17), 31,82 (CH2, C-19), 34,76 (CH2, C-14), 79,06 (CH, C-13), 113,95 (C, C-3), 123,92 (CH, C-5), 128,65 (CH, C-8), 130,04 (C, C-9), 130,67 (CH, C-7), 132,43 (C, C-10), 134,81 (CH, C-6), 162,93 (C, C-4), 178,63 (C=0, C-2), 179,77 (C=0, C-l). MS (El) m/z 326 (M+*, 3%), 213 (5), 185 (4), 159 (100), 55 (11). HRMS (EI) m/z [M+2H]+* calcd. para C21H2603: 328,2038, encontrado: 328,2037. EXEMPLO 6 Síntese de 2-Decil-2,3-diidronafto[l,2-b]furan-4,5-diona (9) e 2-Nonil-3,4-diidro-2H-benzojh]cromeno-5,6-diona (12) [024] Em um balão de fundo redondo, foi adicionado do composto (£)-2-(dodec-2-enil)-3-hidroxinaftaleno-l,4-diona (145 mg, 0,426 mmol), brometo de índio III (300 mg, 0,846 mmol) e diclorometano (30 mL) e mantido sob agitação à temperatura ambiente durante 24 h. Posteriormente, a mistura reagente foi lavada com água destilada, extraída com diclorometano, a fase orgânica foi seca com sulfato de magnésio anidro, filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi purificado em placa preparativa de sílica gel GF DE 500 mícrons Uniplat® utilizando como eluente mistura de hexano e acetato de etila com gradiente 5:1. Composto 9: Sólido laranja, 22% de rendimento, pf: 106,7-109 °C. IV (KBr, cm'1): vma;í 2954-2850, 1697-1608, 1600-1500, 721. RMN de *H (300 MHz, CDC13) δ: 0,86 (3H, t, J= 6,0 Hz, CH3, H-22), 1,10-1,50 (2H, m, CH2, H-21), 1,10-1,50 (2H, m, CH2, H-20), 1,10-1,50 (2H, m, CH2, H-19), 1,10-1,50 (2H, m, CH2, H-18), 1,10-1,50 (2H, m, CH2, H-17), 1,10-1,50 (2H, m, CH2, Η-16), 1,10-1,50 (2Η, m, CH2, H-15), 1,40-1,60 (2H, m, CH2, H-14), 1,65-1,82 (1H, m, CH2, H-13), 1,82-2,00 (1H, m, CH2, H-13) 2,77 (1H, dd, J = 15,0 Hz e J= 6,0 Hz, CH2, H-ll), 3,21 (1H, dd, J= 15,0 HzeJ=9,0 Hz, CH2, H-ll), 5,11 (1H, dddd,J=9,0 Hz,J = 9,0 Hz, 7=6,0 HzeJ = 6,0 Hz, CH, H-12), 7,52-7,60 (1H, m, CH, H-7), 7,60- 7,67 (2H, m, CH, H5-H7), 8,05 (1H, d, J0= 7,5 Hz, CH, H-8). RMN de l3C (75 MHz, CDC13) δ: 14,07 (CH3, C-22), 22,64 (CH2, C-21), 24,93 (CH2, C-14), 29,28 (2CH2, C-15 e C-19), 29,43 (CH2, C-18), 29,49 (CH2, C-17), 29,53 (CH2, C-16), 31,83 (CH2, C-20), 31,85 (CH2, C-ll), 36,03 (CH2, C-13), 88,46 (CH, C-12), 115,32 (C, C-3), 124,49 (CH, C-5), 127,65 (C, C-10), 129,37 (CH, C-8), 130,75 (C, C-9), 131,87 (CH, C-7), 134,43 (CH, C-6), 169,87 (C, C-4), 175,46 (C=0, C-2), 181,30 (C=0, C-l). MS (EI) m/z 340 (M+*, 45%), 213 (10), 188 (11), 159 (100), 55 (16). HRMS (EI) m/z [M]+e calcd. para C22H2803: 340,2038, encontrado: 340,2042. Composto 12: Sólido laranja, 25% de rendimento, pf: 64,7-66,7 °C. IR (KBr, cm’1): vmax 2923-2850, 1693-1604, 1600-1500, 721. RMN de *H (300 MHz, CDC13) δ: 0,88 (3H, t,J= 9,0 Hz, CH3, H-22), 1,20-1,40 (2H, m, CH2, H-21), 1,20-1,40 (2H, m. CH2, H-20), 1,20-1,40 (2H, m, CH2, H-19), 1,20-1,40 (2H, m, CH2, H-18), 1,20-1,40 (2H, m, CH2, H-17), 1,20-1,40 (2H, m, CH2, H-16), 1,40-1,60 (2H, m, CH2, h-15), 1,60-1,80 (1H, m, CH2, H-12), 1,60-1,95 (2H, m, CH2, H-14), 2,00 - 2,12 (1H, m, CH2, H-12), 2,41 (1H, ddd, J- 18,0 Hz, J= 9,0 Hz e7=6,0 Hz, CH2, H-ll), 2,68 (1H, ddd, J = 18,0 Hz, J= 9,0 Hz e J= 6,0 Hz, CH2, H-ll), 4,22 (1H, dddd, /= 12,0 Hz, J = 6,0 Hz, J = 6,0 Hz e J = 3,0 Hz, CH, H-13), 7,47 (1H, td, J0= 7,5 Hz, 1,2 Hz, CH, H-7), 7,64 (1H, td, J0= 7,5 Hz,Jm = 1,2 Hz, CH, H-6), 7,75 (1H, dd, JQ= 7,5 Hz, Jm = 1,2 Hz, CH, H-5), 8,02 (1H, dd, J0 = 7,5 Hz, Jm = 1,2 Hz, CH, H-8). RMN de ,3C (75 MHz, CDCI3) 6: 14,07 (CH3, C-22), 17,96 (CH2, C-ll), 22,63 (CH2, C-21), 25,27 (CH2, C-15), 25,95 (CH2, C-12), 29,26 (CH2, C-19), 29,42 (CH2, C-18), 29,49 (2CH2, C16-C17), 31,85 (CH2, C-20), 34,73 (CH2, C-14), 79,03 (CH, C-13), 113,92 (C, C-3), 123,90 (CH, C-5), 128,60 (CH, C-8), 130,00 (C, C-9), 130,63 (CH, C-7), 132,39 (C, C-10), 134,78 (CH, C-6), 162,88 (C, C-4), 178,59 (C=0, C-2), 179,73 (C=0, C-l). MS (EI) m/z 340 (M+·, 6%), 213 (4), 185 (5), 159 (100), 55 (13). HRMS (EI) m/z [M+2H]+* calcd. para C22H2803:342,2194, encontrado: 342,2190.

Ensaio biológico [025] Ensaio de atividade tripanocida - formas amastigotas de Trypanosoma cruzi: Etapa 1: Os compostos 1-12 foram submetidos a uma avaliação de triagem para análise direta dos compostos sob linhagens de células infectadas com T. cruzi em uma única concentração, permitindo em um só sistema o monitoramento dos efeitos em formas tripomastigotas e amastigotas. Os compostos foram avaliados na concentração de 3,8 μΜ e comparados com o fármaco de referência, o benznidazol, na mesma concentração. Os compostos que apresentaram efeito tripanocida similar, ou melhor, (3, 7, 8, 9, 10, 11) que o benznidazol, nessa concentração avaliada foram submetidos à segunda etapa de avaliação para determinação do IC50 (concentração da substância que alcança a inibição de 50% dos parasitas). Etapa 2: Previamente, células LLCMK2 foram infectadas com aproximadamente 106 formas tripomastigotas sanguíneas da cepa CLB5, obtidas de sangue de camundongos swiss infectados, no pico de parasitemia. Após um período de aproximadamente 15 dias, grandes quantidades de formas tripomastigotas foram obtidas do sobrenadante dessas culturas, em consequência da lise das células repletas de parasitas. O sobrenadante obtido destes cultivos, contendo as formas tripomastigotas juntamente com algumas células, foi submetido à centrifugação (115 g por 8min, a 10°C) onde o sedimento, contendo principalmente células, foi desprezado e o sobrenadante foi novamente centrifugado (1,620 g por 30min a 10 °C). Então, o sedimento foi ressuspendido em meio RPMI 1640 suplementado e as formas tripomastigotas purificadas submetidas à contagem em hemocitômetro de Neubauer, para ajustar as quantidades de parasitas utilizadas nos procedimentos experimentais. Os ensaios foram realizados em placas de 96 poços, células LLCMK2 foram cultivadas (2,5x103 células/poço). Formas tripomastigotas da cepa CLB5, obtidas de cultivo, foram adicionadas na proporção de 1:10 e incubadas por 24h a 37 °C com 5% C02. Os poços foram então lavados com PBS para remoção das formas tripomastigotas extracelulares e os compostos em análise (3, 7, 8, 9, 10, 11,) foram adicionados obtendo as concentrações finais de 0,5; 2,0; 8,0 e 32,0 μΜ. As placas foram incubadas por 5 dias a 37 °C, em ambiente de C02 a 5%. Após este período, foi adicionado a cada poço, 10 uL de solução de FluoReporter lacZ/galactosidase quantittation Kit (Life Technologies), e as placas foram novamente incubadas por 30 minutos até que ocorresse a marcação fluorescente da β-galactosidase produzida pelos parasitas. A reação colorimétrica foi quantificada em espectrofotômetro de fluorescência (BIOTEK) a 386 nm de excitação e 448 nm de emissão. Após as leituras, as porcentagens de lise parasitária, causadas pelas formulações foram determinadas a partir da seguinte fórmula: [026] , na qual: [027] X = Valor de densidade óptica das amostras;

[028] CP = Valor de densidade óptica dos controles positivos;

[029] CN = Valor de densidade óptica dos controles negativos.

[030] Os ensaios tiveram como controle positivo, poços contendo apenas meio de cultura e como controle negativo, tratamento com DMSO 1,6%. Todos os ensaios foram realizados em triplicata. Todas as amostras foram comparadas ao benznidazol, avaliado nas mesmas concentrações.

REIVINDICAÇÕES

Claims (3)

1. Novos Derivados da Naftoquinona e Avaliação de suas Atividades Tripanocida, caracterizado por apresentar processo sintético para obtenção de novos derivados da naftoquinona como agentes anü-Trypanosoma cruzi.

2. Novos Derivados da Naftoquinona, conforme reivindicação 1, caracterizado por fornecer novos derivados da naftoquinona, especificam ente a partir da 2-hidroxi-l,4-naftoquinona e ácidos carboxílicos β,γ insaturados de cadeia longa e posterior ciclização com InBr3

3. Novos Derivados da Naftoquinona, conforme reinvindicação 2, caracterizado por obter novos derivados da naftoquinona com atividade tripanocida.