BR102015023966A2

BR102015023966A2 - guided extraction process with purification and concentration of antioxidant substances extracted from the bark of himatanthus bracteantus (a. dc.) woodson

Info

Publication number: BR102015023966A2
Application number: BR102015023966A
Authority: BR
Inventors: Cláudia Fernandes Amaral Ana; Alles de Jesus Anderson; Valéria Farias Alves Angela; Moda De Almeida Bernadeth; Dariva Cláudio; Mendes De Andrade De Carvalho Felipe; Rocha De Andrade Silva Jefferson; Cordeiro Cardoso Juliana; Silva Santos Klebson; Fernandes Do Nascimento Marismar; Luiz Cavalcanti De Albuquerque Júnior Ricardo
Original assignee: Inst Tecnologia E Pesquisa; Soc De Educação Tiradentes Ltda
Priority date: 2015-09-17
Filing date: 2015-09-17
Publication date: 2017-03-21
Also published as: BR102015023966B1

Abstract

processo de extração guiada com purificaço e concentração de substâncias antioxidantes extraídas a partir das cascas do caule de himatanthus bracteatus (a. dc.) woodson. compreende-se a presente patente de invenção a um processo para extração em grande escala de um extrato etanólico concentrado de substâncias bioativas, a partir da planta himatanthus bracteatus (a. dc.) woodson,, objetivando seu uso como princípio ativo na composição de medicamentos, caracterizado pela secagem das cascas do caules, ou outras partes da planta da h.bracteatus temperatura ambiente e em seguida são trituradas em moinho de facas. onde o pó é submetido ao processo de extração com liquido pressurizado variando temperatura (20° e 70°) e fluxo (1 e 5 ml/min), com pressão constante de 100 bar e volume de 1ml a 1l, preferencialmenre 25 ml de cada solvente de polaridade crescente, melhor iniciando com hexano, diclorometano, acetato de etila e por último etanol. no intervalo de troca de solvente, passa-se um gás, preferencialmente co2 para retirada completa do solvente anterior. ao final do processo de limpeza obtêm-se um extrato etanólico com maior concentração em antioxidantes. a cada passagem do solvente, a solução extrativa resultante é recolhida em frascos separados. o extrato ou pó obtido, após secagem, pode ser utilizado na indústria farmacêutica, cosmética e alimentícia, por apresentar propriedades bioativas.guided extraction process with purification and concentration of antioxidant substances extracted from the bark of himatanthus bracteatus (a. dc.) woodson. The present invention relates to a process for the large-scale extraction of a concentrated ethanolic extract of bioactive substances from the himatanthus bracteatus (a. dc.) woodson plant for use as an active ingredient in the composition of medicaments. , characterized by drying the bark of the stems, or other parts of the h.bracteatus plant at room temperature and then grinding in a knife mill. where the powder is subjected to the pressurized liquid extraction process varying temperature (20 ° and 70 °) and flow (1 and 5 ml / min), with constant pressure of 100 bar and volume of 1ml to 1l, preferably 25 ml of each solvent of increasing polarity, best starting with hexane, dichloromethane, ethyl acetate and lastly ethanol. In the solvent exchange interval, a gas, preferably CO2, is passed for complete removal of the above solvent. At the end of the cleaning process, an ethanolic extract with higher antioxidant concentration is obtained. At each solvent pass, the resulting extractive solution is collected in separate vials. The extract or powder obtained after drying can be used in the pharmaceutical, cosmetic and food industry, as it has bioactive properties.

Description

“PROCESSO DE EXTRAÇÃO GUIADA COM Pl RI MC AÇO E CONCENTRAÇÃO DE SUBSTÂNCIAS ANTIOXIDANTES EXTRAÍDAS A PARTIR DAS CASCAS DO CAULE DE Himatanthus bracteatus (A. DC.) Woodson.” CAMPO DA INVENÇÃO 001. A presente invenção, objeto de pedido de patente, contempla o campo de processos industriais, refere-se a processo de extração de uma ou mais frações de partes da planta Himatanthus bracteatus (A. DC.) Woodson e concentração de substâncias com elevado potencial antioxidante presentes no extrato de interesse comercial.FIELD OF GUIDED EXTRACTION WITH PL RI MC STEEL AND CONCENTRATION OF ANTIOXIDANT SUBSTANCES EXTRACTED FROM HIMATANTHUS BRACCATUSUS CAKES (A. DC.) WOOD OF INVENTION 001. The present invention, the subject of a patent application, contemplates The field of industrial processes refers to the process of extracting one or more fractions of parts of the Himatanthus bracteatus (A. DC.) Woodson plant and concentration of substances with high antioxidant potential present in the extract of commercial interest.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO E ESTADO DA TÉCNICA 002. A invenção refere-se a um processo de extração de uma ou mais frações, a partir de partes da planta Himatanthus bracteatus (A. DC.) Woodson e concentração de substâncias com elevado potencial antioxidante de interesse comercial. 003. As plantas possuem alta capacidade de produzir moléculas biologicamente ativas. Muitos estudos referentes a obtenção de produtos naturais a partir destas têm sido relatados, comprovando que esses vegetais, através do metabolismo secundário são uma fonte de novos produtos farmacêuticos. Contudo, a estrutura destes compostos bioativos frequentemente é extremamente complexa, e a síntese através da quimica sintética em geral não é viável economicamente, sendo assim necessário realizar extrações a partir das plantas. Sendo assim, o desenvolvimento de pesquisas de prospecção por produtos naturais, como fármacos, comésticos e alimentos tem sido uma estratégia para construção de um modelo de exploração sustentável do bioma, aliado à geração de renda. 004. Dentre as populações de plantas que têm sido descritas como uma das mais importantes fontes vegetais de compostos com atividade farmacológica, está o gênero botânico Himatanthus, o qual sofreu a última revisão em 2004, apresentando nove expécies para o gênero: Himatanthus articulatus (Vahl)Woodson, Himatanthus attenuatus (Benth) Woodson, Himatanthus Bracteatus (A. DC.) Woodson, Himatanthus drasticus (Mart.) Plumel, Himatanthus obovatus (Mull Arg.) Woodson, Himatanthus phagedaenicus (Mart.) Woodson, Himatanthus revolutus (Huber) Spina & Kinoshita, Himatanthus semilunatus Markgr., e Himatanthus tarapotensis (Schum. Ex Markgr.) Plumel. 005. Este gênero possui distribuição restrita, encontrada exclusivamente no continente sul-americano, desde o Panamá até o sudeste brasileiro, distribuindo-se principalmente na amazônia. Destaca-se pelo seu difundido uso como planta medicinal onde são utilizados terapêuticamente pela população, como, cicatrizante, antiinflamatório, antimaláricos, antiespasmódico, antisifílico, antitumoral entre outras, dependendo da espécie, quanto pela diversidade de compostos farmacologicamente ativos. 006. Há poucas citações descrevendo a constituição química das espécies de Himatanthus. O gênero destaca-se por sua composição rica em alcalóides, ésteres triterpênicos e iridóides, isolados das cascas do caule, látex, folhas e raizes. Com relação às atividades biológicas, possuem diversas indicações populares para o tratamento de várias enfermidades, porém pouco pesquisadas cientificamente a fim de comprovar tais efeitos terapêuticos. 007. Quanto à espécie Himatanthus bracteatus (A. DC.) Woodson é uma espécie nativa do bioma Amazônico e Mata Atlântica, ocorrendo freqüentemente no Norte e Nordeste brasileiro, apresentando grande potencial paisagístico e para o reflorestamento de áreas, degradadas. Popularmente conhecida na região norte como, sucuba, janaúba, e na região nordeste como banana de papagaio, habitualmente encontrada em bordas de matas, exposta à luminosidade e ao vento. Não existe nenhum estudo em relação ao potencial antioxidante e composição quimica. 008. Processos de extração de compostos antioxidantes em plantas já são bastante conhecidos no estado da técnica. É frequente o uso de métodos convencionais de extração (maceração, infusão, decocção) da biomassa, em geral usando solventes aquosos e orgânicos, que quase invariavelmente resultam em um extrato complexo em que o composto alvo é diluído por uma variedade de outros fitoquímicos indesejados derivados da planta, incluindo proteínas, açúcares e outros hidratos de carbono. A diferenciação dos métodos de extração e/ou concentração realizada, se dá pelo nível de concentração de antioxidantes, quantidade de solvente que é utilizado e o tempo gasto para a realização do procedimento. 009. Em prospecção tecnológica realizada nas principais bases de patentes mundiais não foi encontrado nenhum registro de patente de processo de extração similar, padronizada a partir de extrato obtido através da metodologia de clean up usando extração com solventes pressurizados (PLE) da casca do caule ou de qualquer parte de plantas do gênero Himatanthus. Assim como, não há registro de substâncias antioxidantes obtidas a partir da espécie Himatanthus bracteatus, com exceção de estudos conduzidos pelos requerentes do presente pedido. 010. Apenas um depósito de patente na base de dados do Instituto Nacional da Propriedade Industrial (INPI) PI08051801 A2, que descreve uma patente de invenção para utilização do princípio ativo de uma outra espécie, pertencente ao mesmo gênero, a Himatanthus sucuuba (Spruce) Woodson, na sua forma impregnada em prata ou ainda na sua forma encapsulada em lipossomas para aplicação, por via oral ou tópica, ou na fabricação de medicamentos cicatrizantes. Contudo, este pedido não pressupõe o processo de obtenção do extrato da referida planta através do método de extração com líquidos pressurizados como será usado em nossa invenção. 011. A patente PI 1003060-3 A2 versa sobre um processo de obtenção de extratos parcialmente purificados de compostos antioxidantes de frutos de palmeiras do gênero Euterpe, o qual contempla as seguintes etapas: seleção, purificação e desidratação da biomassa, aumento da superfície de contato através (trituração), adição de veículo apoiar (óleos), exposição à radiação micro-ondas e filtração. Nesse processo é realizada a extração através de uma etapa de maceração onde o fruto é colocado em água quente até 80°C e em seguida segue um despolpamento obtendo um extrato aquoso bruto, posteriormente é levado a adsorção sobre resina macroporosa, precedida de uma eluição em água e posterior dessorção dos compostos antioxidante adsorvidos sobre a resina com solventes de menor polaridade que a água (álcool, aldeídos, cetona, ácidos e ésteres em concentrações de 10 a 100%). Após esta etapa, ocorre a concentração das moléculas antioxidantes, obtidas por destilação sob temperatura de acordo com os solventes, e depois o processo de secagem por atomização ou por liofilização. As desvantagens deste processo estão relacionadas ao uso de temperaturas elevadas que podem levar a perdas de alguns compostos termoinstáveis, reduzindo assim a concentração. Sabemos também que os antioxidantes são fotosensíveis, são degradados em presença de luminosidade. No processo objeto deste pedido de patente diferencia-se deste, pelo fato da biomassa ficar totalmente protegida da luz no interior de uma célula extratora em aço inox, do início ao fim do processo. Outra vantagem, é que as temperaturas que utilizamos estão na faixa abaixo do que é relatado na literatura como causa de degradação de moléculas termosensíveis. 012. O pedido de patente internacional WO 2013/159167 A8, apresenta um processo para concentração e purificação de carotenoides a partir de fibras de caju, utiliza condições controladas, usando como solvente a água. O processo envolve uma pré-maceração das fibras de caju com uso de enzimas desagregadoras de estruturas celulares, que atuam sobre os tecidos fibrosos em combinação com prensagens controladas em ciclos sucessivos de extração aquosa. A concentração do extrato bruto obtido por maceração/prensagem é realizada à temperatura ambiente com uso de membranas de microfiltração em fluxo tangencial. O produto concentrado é então tratado por técnicas de filtração para ser purificado. Os recursos são muito diferentes dos quais abordamos em nosso trabalho e exigem uma maior demanda de tempo para a realização do processo. 013. A patente W02009077207 (A2) refere-se a um processo para extração de componentes de plantas, o qual envolve a trituração da planta, adição de um solvente ao material, submetimento desta mistura de material vegetal triturado e solvente a uma temperatura ultra-elevada de tratamento a 95-150°C durante um período de 5 a 300 segundos. Esse processo apresenta como desvantagem o uso de temperaturas elevadas, as quais promovem degradação de moléculas termosensíveis, o que não ocorre no processo aqui proposto, o qual contempla uma faixa de temperatura que não causa degradação destas referidas moléculas, comumente encontradas em extratos com potencial antioxidante. 014. Foi observado uma outra patente, US2012/0070519 Al, a qual trata de um método de extração contendo frações com ingredientes farmacologicamente ativos de várias plantas utilizando vários solventes com polaridades diferentes, sendo que utiliza a produção de um extrato bruto pelo método de maceração e posterior partição liquido-liquido com solventes de diferentes polaridades. Sendo assim, nossa invenção representa uma inovação, visto que elimina todas as pré-etapas usadas nos processos tradicionais, reduzindo o tempo para a produção dos extratos, reduz significativamente o volume de solvente em gasto e em consequência, reduz os custos ampliando a possibilidade de produção em escala industrial e inserção no mercado. 015. Como pode ser observado, a grande desvantagem dos processos de obtenção de compostos antioxidantes a partir de plantas existentes no estado da técnica, está no fato da produção de extratos antioxidantes por meio de soluções extratoras, uso excessivo de solventes, múltiplas etapas entre o preparo de um extrato bruto e posterior partição, com isso, o tempo que se gasta é elevado para a realização do processamento e posterior concentração.BACKGROUND OF THE INVENTION AND BACKGROUND 002. The invention relates to a process for extracting one or more fractions from parts of the Himatanthus bracteatus (A. DC.) Woodson plant and concentration of substances with high antioxidant potential of interest. commercial. 003. Plants have a high capacity to produce biologically active molecules. Many studies referring to obtaining natural products from these have been reported, proving that these vegetables, through secondary metabolism are a source of new pharmaceutical products. However, the structure of these bioactive compounds is often extremely complex, and synthesis by synthetic chemistry is generally not economically viable, so extractions from plants are required. Thus, the development of prospecting research for natural products such as pharmaceuticals, food and food has been a strategy to build a model of sustainable exploitation of the biome, combined with income generation. 004. Among the plant populations that have been described as one of the most important plant sources of compounds with pharmacological activity is the botanical genus Himatanthus, which underwent the last revision in 2004, presenting nine species for the genus: Himatanthus articulatus (Vahl). ) Woodson, Himatanthus attenuatus (Benth) Woodson, Himatanthus Bracteatus (A. DC.) Woodson, Himatanthus drasticus (Mart.) Plumel, Himatanthus obovatus (Mull Arg.) Woodson, Himatanthus phagedaenicus (Mart.) Woodson, Himatanthus revolutus Spina & Kinoshita, Himatanthus semilunatus Markgr., And Himatanthus tarapotensis (Schum. Ex Markgr.) Plumel. 005. This genus has a restricted distribution, found exclusively in the South American continent, from Panama to southeastern Brazil, and is mainly distributed in the Amazon. It stands out for its widespread use as a medicinal plant where they are used therapeutically by the population, such as healing, anti-inflammatory, antimalarial, antispasmodic, antisiphilic, antitumor among others, depending on the species, as well as the diversity of pharmacologically active compounds. 006. There are few citations describing the chemical constitution of the Himatanthus species. The genus stands out for its rich composition of alkaloids, triterpene esters and iridoids, isolated from stem barks, latex, leaves and roots. Regarding biological activities, they have several popular indications for the treatment of various diseases, but little scientifically researched to prove such therapeutic effects. 007. As for the species Himatanthus bracteatus (A. DC.) Woodson is a native species of the Amazonian and Atlantic Forest biome, occurring frequently in the North and Northeast of Brazil, presenting great landscape potential and for the reforestation of degraded areas. Popularly known in the northern region as, sucuba, janaúba, and in the northeast region as a parrot banana, commonly found in forest edges, exposed to light and wind. There are no studies regarding antioxidant potential and chemical composition. 008. Processes for extracting antioxidant compounds from plants are well known in the art. Conventional biomass extraction (maceration, infusion, decoction) methods are often used, often using aqueous and organic solvents, which almost invariably result in a complex extract in which the target compound is diluted by a variety of other undesired phytochemicals derived from it. including protein, sugars and other carbohydrates. The differentiation of extraction methods and / or concentration performed, is given by the level of concentration of antioxidants, amount of solvent that is used and the time taken to perform the procedure. 009. No technological patenting was carried out in the main worldwide patent databases of a similar extraction process, standardized from extract obtained through the clean up methodology using pressurized solvent extraction (PLE) from stem bark or from any part of plants of the genus Himatanthus. As well as, there is no record of antioxidant substances obtained from the species Himatanthus bracteatus, except for studies conducted by the applicants of the present application. 010. Only one patent filing in the National Institute of Industrial Property (INPI) database PI08051801 A2, which describes a patent for the use of the active principle of another species belonging to the same genus, Himatanthus sucuuba (Spruce). Woodson in its silver-impregnated or liposome-encapsulated form for oral or topical application or in the manufacture of healing medicaments. However, this application does not presuppose the process of obtaining the extract of said plant by the pressurized liquid extraction method as will be used in our invention. 011. The patent PI 1003060-3 A2 deals with a process of obtaining partially purified extracts of antioxidant compounds from palm fruits of the genus Euterpe, which comprises the following steps: selection, purification and dehydration of biomass, increase of contact surface through (crushing), addition of carrier vehicle (oils), microwave radiation exposure and filtration. In this process extraction is carried out through a maceration step where the fruit is placed in hot water to 80 ° C and then pulped to obtain a crude aqueous extract, then adsorbed onto macroporous resin, followed by elution in water and subsequent desorption of the antioxidant compounds adsorbed on the resin with lower polarity solvents than water (alcohol, aldehydes, ketone, acids and esters in concentrations of 10 to 100%). After this step, the concentration of antioxidant molecules obtained by distillation under temperature according to the solvents occurs, followed by the spray drying or freeze drying process. The disadvantages of this process are related to the use of high temperatures which may lead to losses of some thermo-unstable compounds, thus reducing the concentration. We also know that antioxidants are photosensitive, degraded in the presence of light. In the process object of this patent application it differs from this in that the biomass is totally protected from light inside a stainless steel extraction cell from the beginning to the end of the process. Another advantage is that the temperatures we use are in the range below what is reported in the literature as a cause of degradation of thermosensitive molecules. 012. International patent application WO 2013/159167 A8, discloses a process for concentrating and purifying carotenoids from cashew fibers, utilizes controlled conditions using water as a solvent. The process involves pre-macerating the cashew fibers using cell-structure disaggregating enzymes that act on fibrous tissues in combination with controlled pressing in successive cycles of aqueous extraction. The concentration of the crude extract obtained by maceration / pressing is performed at room temperature using tangential flow microfiltration membranes. The concentrated product is then treated by filtration techniques to be purified. The resources are very different from the ones we cover in our work and require a greater demand for time to complete the process. W02009077207 (A2) relates to a process for extracting plant components, which involves milling the plant, adding a solvent to the material, subjecting this mixture of ground material and solvent to an ultra-high temperature. treatment at 95-150 ° C for a period of 5 to 300 seconds. This process has as disadvantage the use of high temperatures, which promote degradation of thermosensitive molecules, which does not occur in the process proposed here, which contemplates a temperature range that does not cause degradation of these molecules, commonly found in extracts with antioxidant potential. . 014. Another patent, US2012 / 0070519 A1, which deals with an extraction method containing fractions with pharmacologically active ingredients from various plants using various solvents with different polarities, has been observed and utilizes the production of a crude extract by the maceration method. and later liquid-liquid partition with solvents of different polarities. Therefore, our invention represents an innovation, since it eliminates all the pre-steps used in traditional processes, reducing the time for the production of extracts, significantly reduces the volume of solvent spent and, consequently, reduces costs by increasing the possibility of industrial scale production and market insertion. 015. As can be seen, the major disadvantage of the processes of obtaining antioxidant compounds from plants existing in the state of the art is the fact that the production of antioxidant extracts by means of extractor solutions, excessive use of solvents, multiple steps between preparation of a crude extract and subsequent partitioning, thus the time spent is high for processing and subsequent concentration.

016. O processo aqui objeto de solicitação de patente, pode ser realizado em tempo reduzido, com menor quantidade de solvente, amostra encontra-se protegida da luz evitando perdas de moléculas fotossensíveis comumente observada nos compostos antioxidantes, gerando no final uma amostra concentrada de moléculas antioxidantes. SUMÁRIO DA INVENÇÃO 017. Para solucionar os problemas acima mencionados, a presente invenção propiciará vantagens significativas em relação aos processos de obtenção e concentração de compostos antioxidantes a partir das cascas de planta do gênero Himatanthus, possibilitando um aumento no desempenho, redução do tempo e volume de solventes, apresentando uma relação custo/benefício mais favorável. 018. O processo de extração objeto deste pedido de patente, trata-se de um processo de concentração de compostos antioxidantes a partir da casca de Himatanthus bracteatus (A. DC.) Woodson, obtidos através extração com líquidos pressurizados associada a um clean up, o qual caracteriza-se pela passagem de vários solventes de polaridade crescente realizando uma limpeza, envolvendo diferentes condições de fluxo e temperatura, em ciclo fechado, protegido da luz, com objetivo de otimizar o processo de extração, obtendo extratos com elevado potencial antioxidante. Estima-se, baseando-se nas propriedades avaliadas no extrato final concentrado, que este material possui um potencial de aplicabilidade para as indústrias farmacêutica, cosmética e alimentícia.016. The process under patent application can be performed in a short time, with less solvent, the sample is protected from light avoiding losses of photosensitive molecules commonly observed in antioxidant compounds, generating in the end a concentrated sample of molecules. antioxidants. In order to solve the above problems, the present invention will provide significant advantages over the processes of obtaining and concentrating antioxidant compounds from Himatanthus bark, enabling increased performance, reduced time and volume. solvents, presenting a more favorable cost / benefit ratio. 018. The extraction process which is the subject of this patent application is a process of concentrating antioxidant compounds from the bark of Himatanthus bracteatus (A. DC.) Woodson, obtained by extraction with pressurized liquids associated with a clean up, which is characterized by the passage of several solvents of increasing polarity performing a cleaning, involving different flow and temperature conditions, in a closed cycle, protected from light, in order to optimize the extraction process, obtaining extracts with high antioxidant potential. It is estimated, based on the properties evaluated in the final concentrated extract, that this material has a potential applicability for the pharmaceutical, cosmetic and food industries.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS 019. A estrutura e operação da presente invenção, juntamente com vantagens adicionais da mesma podem ser mais bem entendidas mediante referência aos desenhos em anexo e a descrição, os quais são apenas para fins ilustrativos e não limitantes a matéria da presente invenção. 020. A figura 1 é um esquema da unidade de extração com solventes pressurizados, a qual é composta de: 1- Bomba isocrática; 2 - Bomba de seringa; 3 e 4 - Válvulas de retenção; 5 - Transdutor de pressão; 6 - Célula extratora revestida com manta de aquecimento; 7-Válvula agulha; 8 - Coletor de amostra; 9 - Reservatório de solvente líquido; 10 - Banho termostático; 11 - Cilindro de gás. 021. A figura 2 refere-se a um organograma do processo de extração com solvente pressurizado da casca de H. bracteatus, para obtenção de extratos brutos sem clean up e extratos com diferentes polaridades após clean up variando temperatura (25°C ou 50°C) e fluxo (1 ou 2 mL/min; pressão (100 bar) e volume (100 mL) constantes, que resultam ao final do processo extratos etanólicos com elevado potencial antioxidante. 022. A figura 3 são os gráficos em relação ao rendimento dos extratos da casca de H. bracteatus (%) obtidos através do processo de extração com líquidos pressurizados utilizando uma metodologia de “Clean up” (CLE) com variáveis: pressão (100 bar), o volume total (100 ml, 25 ml de cada solvente), a. Fração hexano (Hex); b. fração diclorometano (DIC); c. fração acetato de etila (EAC); d. fração etanol (ETH). 023. A figura 4 são os gráficos que expressam o rendimento dos extratos da casca de H. bracteatus (%) produzidos após extração líquido pressurizado comparando o extrato bruto etanólico (ECE), extrato Clean up (CLE) e a fração etanólica do Clean up (ECLE) com pressão fixa (100 bar).BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES 019. The structure and operation of the present invention, together with further advantages thereof may be better understood by reference to the accompanying drawings and description, which are for illustrative purposes only and not limiting the subject matter of the present invention. . 020. Figure 1 is a diagram of the pressurized solvent extraction unit which is composed of: 1- Isocratic pump; 2 - Syringe pump; 3 and 4 - Check valves; 5 - Pressure transducer; 6 - Extractor cell coated with heating blanket; 7-Needle valve; 8 - Sample collector; 9 - Liquid solvent reservoir; 10 - Thermostatic bath; 11 - Gas cylinder. 021. Figure 2 is an organization chart of the pressurized solvent extraction process of the H. bracteatus bark to obtain crude extracts without clean up and extracts with different polarities after clean up varying temperature (25 ° C or 50 ° C). C) and constant flow (1 or 2 mL / min; constant pressure (100 bar) and volume (100 mL) resulting in the end of the process with high antioxidant potential ethanolic extracts. 022. Figure 3 are the graphs in relation to yield H. bracteatus bark extracts (%) obtained by the extraction process with pressurized liquids using a Clean up (CLE) methodology with variables: pressure (100 bar), total volume (100 ml, 25 ml of hexane (Hex) fraction, dichloromethane fraction (DIC), ethyl acetate fraction (EAC), ethanol fraction (ETH) 023. Figure 4 are the graphs expressing the yield H. bracteatus bark extracts (%) produced after pre-liquid extraction comparing crude ethanolic extract (ECE), Clean up extract (CLE) and Clean up ethanolic fraction (ECLE) with fixed pressure (100 bar).

024. A figura 5 são os gráficos da atividade antioxidante de extratos da casca de H. bracteatus comparando extrato etanólico bruto (ECE) e fração etanólica do extrato clean up(ECLE) com pressão fixa (100 bar), utilizando DPPH (A) e método ABTS (B). Os valores foram expressos como TEAC (Trolox Equivalente capacidade antioxidante). DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO 025. O presente pedido de patente de invenção se distingue do estado da técnica por meio da proposição de um processo que acopla procedimentos de concentração de substâncias bioativas às técnicas usuais de obtenção de extrato concentrado a partir de partes da planta de Himatanthus bracteatus. A espécie foi identificada e a exsicata encontra-se depositada no Herbário da Universidade Federal de Sergipe, registrada sob o número ASE-26808. 026. O presente processo permite a produção em escala industrial de um pó de coloração marrom-brilhante para usos diversos, tais como antioxidante natural nas indústrias alimentícia, cosmética e farmacêutica. 027. O processo objeto deste pedido de patente consta de um conjunto de operações que visam à obtenção de extrato concentrado de substâncias com potencial antioxidante. 028. As partes da planta da Himatanthus bracteatus foram coletadas no município de Óbidos, Pará, Brasil, no mês de fevereiro de 2013. O material foi seco à sombra para estabilização, triturado utilizando um moinho de facas, passado em tamis entre 18 e 32 mesh e conservado ao abrigo de luz e umidade. O processo proposto compreende as seguintes etapas, correspondentes às indicações presentes na Figura 1: Obtenção do extrato bruto da casca de Himatanthus bracteatus 029. A presente invenção refere-se ao processo de obtenção dos extratos da casca do caule da planta podendo ser realizado das outras partes como - raízes, folhas, flores, frutos, sementes - da espécie Himatanthus bracteatus por mecanismo de extração em ciclo fechado com solvente polar, preferencialmente etanol P.A., em uma unidade de extração com solvente pressurizado. Na figura 1 pode ser observado um esquema do módulo experimental utilizado nas extrações empregando líquidos pressurizados. 030. A célula extratora, consiste de um vaso adequado para operar a alta pressão, que pode ser de qualquer material adequado para tal fim, mas preferencialmente de aço inoxidável. O processo, conforme desenhado, tem total flexibilidade de tamanho/volume do reator, dependendo exclusivamente da escala que se deseja operar o sistema. Da mesma forma, a massa de matéria prima a ser acondicionada dentro do extrator vai depender do seu volume. A matéria prima pode ser acondicionada in natura, ou passar por processamento para remoção de umidade; pode variar de 1 mL a 10 L, preferencialmente 25 mL de aço inox com capacidade de 157,3 cm3, a granulometria pode ser a original da planta, ou a matéria prima pode passar por um processo de padronização do tamanho das partículas. Um sistema para controle da temperatura deve estar presente na célula extratora, que pode ser uma camisa de aquecimento, um banho térmico ou qualquer outro aparato adequado para tal. O controle da pressão no final do vaso extrator é realizado por sistemas adequados para tal fim, que podem ser válvulas de controle manuais ou automáticas, reguladores de pressão ou restrições. 031. O solvente do processo é um líquido que é deslocado continuamente para o interior da célula de extração por meio de uma bomba de alta pressão. Os solventes são líquidos polares como álcoois, água, ácidos, cetonas ou qualquer mistura de solventes polares. As bombas para deslocamento do fluido são equipamentos que continuamente fazem fluir o solvente, podendo ser bombas de engrenagem, de pistão, tipo buster ou qualquer equipamento que sirva para deslocar o solvente do processo. 032. O processo se inicia carregando a célula extratora com a matéria prima. Posteriormente, o sistema de controle da temperatura é acionado para operar entre 20 e 100°C, tipicamente na faixa de 20 a 70°C e preferencialmente entre 30 e 50°C. O solvente é deslocado para dentro do extrator até a pressão de trabalho que pode ser qualquer valor acima da pressão de vapor do solvente na temperatura de trabalho, preferencialmente na faixa de 100 bar. Uma vez atingida a temperatura e pressão de trabalho, a válvula de controle de pressão/vazão do processo é aberta e o solvente continuamente flui pelo leito fixo de matéria prima a temperatura e pressão especificadas. Na saída do extrator, a mistura solvente/extrato é despressurizada e coletada em recipientes adequados. O solvente é removido da mistura final por uma metodologia adequada como evaporação a vácuo, evaporação com nitrogênio, liofilização ou qualquer outro método de separação. Obtenção do extrato etanólico Clean-up (ECLE) 033. A presente invenção refere-se ao processo de obtenção dos extratos da casca do caule da planta podendo ser realizado das outras partes como - raízes, folhas, flores, frutos, sementes - da espécie Himatanthus bracteatus por mecanismo de extração em ciclo fechado usando solventes de polaridade crescente, preferencialmente hexano, diclorometano, acetato de etila e etanol, em uma unidade de extração pressurizada, realizando-se um clean up na amostra, obtendo-se extratos de diversas polaridades e concentração de substâncias com elevado potencial antioxidante no extrato etanólico clean up (ECLE). 034. Na figura 1 pode ser observado um esquema da unidade extratora utilizada nas extrações com líquidos pressurizados e na figura 2, um esquema das etapas do processo de extração com clean up. 035. A massa de matéria prima a ser acondicionada dentro do extrator vai depender do seu volume, preferencialmente 10 g da casca da planta seca. A granulometria pode ser a original da planta, ou a matéria prima pode passar por um processo de padronização do tamanho das partículas, preferencialmente entre 18 e 32 mesh. O espaço vazio restante na célula extratora após a colocação da matéria prima, pode ser preenchido preferencialmente com esferas de vidro, com objetivo de reduzir a quantidade de solvente durante o processo de enchimento de cada solvente a ser usado durante o processo. Um sistema para controle da temperatura (20 a 70°C), melhor entre 30 e 50°C deve estar presente na célula extratora, que pode ser uma camisa de aquecimento, um banho térmico ou qualquer outro aparato adequado para tal. O controle da pressão no final do vaso extrator é realizado por sistemas adequados para tal fim, que podem ser válvulas de controle manuais ou automáticas, reguladores de pressão ou restrições. 036. O cilindro contendo gás carbônico deve ser conectado à bomba de seringa por uma tubulação de preferência de metal de aço inox, possibilitando o deslocamento do solvente até a bomba de alta pressão. O gás deve ser utilizado quando fizer a troca de solvente, com a finalidade de retirar totalmente o solvente anterior. Para cada solvente a ser usado, deverá ser colocado em um recipiente individual, que alimenta uma bomba isocrática de fluxo positivo por um tubo flexível. As tubulações são interligadas por um "T" de preferência em aço inox, fazendo com que cada solvente seja guiado para o extrator de acordo com o processo. A unidade possui total flexibilidade para trabalhar com apenas um tipo de solvente, seja gás ou líquido. Ao final do extrator uma válvula de agulha deve ser colocada para controle da vazão e/ou da pressão do sistema. 037. O primeiro solvente a ser usado é preferencialmente o Hexano P.A com volume de lmL a 1L, preferencialmente lOOmL, inicia-se o processo de enchimento da célula de extração, e aguarda-se a pressurização da unidade de extração até atingir 100 bar. Aguarda-se por 20 minutos para estabilização da pressão. Faz-se os ajustes das váriáveis: fluxo 1-5 mL/min, melhor 2 mL/min, temperatura 20 - 70°C, melhor entre 30 e 50°C e pressão constante de 100 bar. 038. O solvente é deslocado para dentro do extrator até a pressão de trabalho que pode ser qualquer valor acima da pressão de vapor do solvente na temperatura de trabalho, preferencialmente na faixa de 100 bar. Uma vez atingida a temperatura e pressão de trabalho, a válvula de controle de pressão/vazão do processo é aberta e o solvente continuamente flui pelo leito fixo de matéria prima a temperatura e pressão especificadas. 039. Na saída do extrator, a mistura solvente/extrato é despressurizada e coletada em recipientes adequados. 040. Posteriormente, despressuriza-se a unidade de extração abrindo-se totalmente a válvula de agulha para retirada total do solvente apoiar, preferencialmente hexano que ficou retido no interior da célula de extração em seguida, abre-se a válvula para passagem de gás carbônico para limpar possível resíduo do solvente na matéria prima. 041. Fecha-se todas as válvulas e coloca-se o novo solvente, preferencialmente diclorometano em uma proveta e começa o procedimento de enchimento da célula extratora. 042. Repete-se todo o processo trocando o solvente liquido seguindo a polaridade crescente: preferencialmente hexano, seguindo-se o diclorometano P.A., depois o acetato de etila PA. e por último o etanol PA, mantendo-se o volume constante e pressão de 100 bar, variando-se apenas fluxo e temperatura como descrito anteriormente. 043. A cada passagem de solvente, coleta-se cada extrato em um frasco individual. Ao final da extração clean up se obtêm quatro tipos de extratos com polaridades diferentes. 044. O solvente é removido da mistura final por uma metodologia adequada como evaporação a vácuo, evaporação com nitrogênio, liofilização ou qualquer outro método de separação.024. Figure 5 are graphs of the antioxidant activity of H. bracteatus bark extracts comparing crude ethanolic extract (ECE) and ethanolic fraction of clean up extract (ECLE) with fixed pressure (100 bar) using DPPH (A) and ABTS method (B). Values were expressed as TEAC (Trolox Equivalent Antioxidant Capacity). DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION 025. The present application is distinguished from the state of the art by proposing a process that combines bioactive substance concentration procedures with the usual techniques of obtaining concentrated extract from parts of the Himatanthus plant. bracteatus. The species has been identified and the exsicata is deposited in the Herbarium of the Federal University of Sergipe, registered under number ASE-26808. 026. The present process allows the industrial-scale production of a bright brown colored powder for various uses, such as natural antioxidant in the food, cosmetic and pharmaceutical industries. 027. The process object of this patent application consists of a set of operations aimed at obtaining concentrated extract of substances with antioxidant potential. 028. Parts of the Himatanthus bracteatus plant were collected in the municipality of Óbidos, Pará, Brazil, in February 2013. The material was shade-dried for stabilization, ground using a knife mill, sieved between 18 and 32 mesh and kept away from light and moisture. The proposed process comprises the following steps, corresponding to the indications shown in Figure 1: Obtaining crude Himatanthus bracteatus 029 bark extract. The present invention relates to the process of obtaining plant stem bark extracts which can be carried out from the others. parts such as - roots, leaves, flowers, fruits, seeds - of the species Himatanthus bracteatus by closed-loop polar solvent extraction mechanism, preferably ethanol PA, in a pressurized solvent extraction unit. Figure 1 shows a scheme of the experimental module used in extractions employing pressurized liquids. 030. The extractor cell consists of a vessel suitable for operating at high pressure, which may be of any material suitable for this purpose, but preferably of stainless steel. The process, as designed, has full reactor size / volume flexibility, depending solely on the scale you wish to operate the system. Likewise, the mass of raw material to be packed inside the extractor will depend on its volume. The raw material may be packaged fresh or processed for moisture removal; may vary from 1 mL to 10 L, preferably 25 mL of 157.3 cm 3 stainless steel, the particle size may be the original of the plant, or the raw material may undergo a particle size standardization process. A temperature control system must be present in the extraction cell, which may be a heating jacket, a thermal bath or any other suitable apparatus for such. Pressure control at the end of the extraction vessel is carried out by systems suitable for this purpose, which may be manual or automatic control valves, pressure regulators or restrictions. 031. Process solvent is a liquid that is continuously displaced into the extraction cell by means of a high pressure pump. Solvents are polar liquids such as alcohols, water, acids, ketones or any mixture of polar solvents. Fluid displacement pumps are equipment that continuously flows the solvent, and may be gear, piston, buster type pumps or any equipment that serves to displace the process solvent. 032. The process begins by loading the extracting cell with the raw material. Thereafter, the temperature control system is operated to operate between 20 and 100 ° C, typically in the range of 20 to 70 ° C and preferably between 30 and 50 ° C. The solvent is moved into the extractor to working pressure which may be any value above the vapor pressure of the solvent at working temperature, preferably in the range of 100 bar. Once the working temperature and pressure have been reached, the process pressure / flow control valve is opened and the solvent continuously flows through the fixed bed of raw material at the specified temperature and pressure. At the extractor outlet, the solvent / extract mixture is depressurized and collected in suitable containers. The solvent is removed from the final mixture by a suitable methodology such as vacuum evaporation, nitrogen evaporation, lyophilization or any other separation method. Obtaining the Clean-up Ethanolic Extract (ECLE) 033. The present invention relates to the process of obtaining plant stem bark extracts which can be performed from other parts such as - roots, leaves, flowers, fruits, seeds - of the species. Himatanthus bracteatus by closed-loop extraction mechanism using solvents of increasing polarity, preferably hexane, dichloromethane, ethyl acetate and ethanol, in a pressurized extraction unit, cleansing the sample, obtaining extracts of various polarities and concentration of substances with high antioxidant potential in the clean up ethanolic extract (ECLE). 034. Figure 1 shows a diagram of the extraction unit used for pressurized liquid extraction and Figure 2 a diagram of the steps of the clean up extraction process. 035. The mass of raw material to be packed within the extractor will depend on its volume, preferably 10 g of the dried plant bark. The particle size may be the original of the plant, or the raw material may undergo a particle size standardization process, preferably between 18 and 32 mesh. Remaining void space in the extracting cell after placement of the raw material may preferably be filled with glass beads to reduce the amount of solvent during the filling process of each solvent to be used during the process. A temperature control system (20 to 70 ° C), best between 30 and 50 ° C, must be present in the extractor cell, which may be a heating jacket, a thermal bath or any other suitable apparatus. Pressure control at the end of the extraction vessel is carried out by systems suitable for this purpose, which may be manual or automatic control valves, pressure regulators or restrictions. 036. The cylinder containing carbon dioxide should be connected to the syringe pump by a preferably stainless steel metal tubing, allowing the solvent to travel to the high pressure pump. The gas should be used when changing the solvent in order to completely remove the previous solvent. For each solvent to be used, it should be placed in an individual container, which feeds an isocratic positive flow pump through a flexible tube. The pipes are interconnected by a "T" preferably stainless steel, causing each solvent to be guided to the extractor according to the process. The unit has full flexibility to work with only one type of solvent, either gas or liquid. At the end of the extractor a needle valve should be placed to control system flow and / or pressure. 037. The first solvent to be used is preferably Hexane P.A with a volume of 1mL to 1L, preferably 100mL, the extraction cell filling process is started, and the extraction unit is pressurized to 100 bar. Wait for 20 minutes for pressure stabilization. Variables are adjusted: flow 1-5 mL / min, best 2 mL / min, temperature 20 - 70 ° C, best between 30 and 50 ° C and constant pressure 100 bar. 038. The solvent is moved into the extractor to the working pressure which may be any value above the vapor pressure of the solvent at the working temperature, preferably in the range of 100 bar. Once the working temperature and pressure have been reached, the process pressure / flow control valve is opened and the solvent continuously flows through the fixed bed of raw material at the specified temperature and pressure. 039. At the extractor outlet, the solvent / extract mixture is depressurized and collected in suitable containers. 040. Subsequently, the extraction unit is depressurized by fully opening the needle valve for full solvent removal, preferably hexane which has been trapped within the extraction cell then opening the carbon dioxide flow valve. to clean possible solvent residue on the raw material. 041. Close all valves and place the new solvent, preferably dichloromethane in a beaker and begin the extraction cell filling procedure. 042. The whole process is repeated by exchanging the liquid solvent following increasing polarity: preferably hexane, followed by dichloromethane P.A., then ethyl acetate PA. and lastly ethanol PA, maintaining a constant volume and pressure of 100 bar, varying only flow and temperature as described above. 043. At each solvent pass, each extract is collected in an individual vial. At the end of the clean up extraction four types of extracts with different polarities are obtained. 044. The solvent is removed from the final mixture by a suitable methodology such as vacuum evaporation, nitrogen evaporation, lyophilization or any other separation method.

Avaliação do rendimento dos extratos 045. O procedimento para cálculo do rendimento foi a partir da pesagem dos frascos de vidro vazios, seguido da pesagem após evaporação do solvente quantificando com isso, a massa seca do extrato bruto e frações obtidas. A determinação do percentual de rendimento (%) de cada extrato seco foi realizada utilizando a equação 1: Na qual, % R = Percentual de rendimento m es Massa do extrato sólido m pc = Massa do pó da casca da H. bracteatus (base seca) 046. Os valores de rendimento de extração da casca de H. bracteatus (n = 3) utilizando a metodologia de clean up são apresentados na Figura 3. Os extratos apresentaram rendimentos distintos quando foram utilizados solventes de polaridade diferentes. Podemos observar que o hexano (3,5-3,9%) (Figura 3 a) e etanol (1,7-2,4%) (Figura 3 d) frações apresentaram os maiores rendimentos. Este resultado demonstrou a H. bracteatus moléculas presentes com a polaridade relativamente diferente em sua composição justificando a utilização de uma extração de limpeza (ECE) para se obter compostos bioativos. A eliminação da fração apoiar fornece um extrato de alto potencial antioxidante. 047. O parâmetro de fluxo não influenciou o rendimento de extração para todas as condições utilizadas, exceto a 25°C usando solvente etanólico (figura 3 d), onde o fluxo de 1 mL/min apresenta melhor desempenho do que 2 mL/min. Neste caso, para os outros solventes (hexano, diclorometano e acetato de etilo). No entanto, para o solvente mais polar, tal como o etanol, o tempo de contato aumentou o rendimento, a baixa temperatura (25 ° C) (p <0,001). 048. A extração usando apenas etanol (extrato bruto etanólico - ECE) apresentaram os maiores valores de rendimento (6,6-9,6%), comparando a fração etanólica de CLE (ECLE) (1,7-2,4%) (p <0,0001) (Figura 4). A CLE elimina substâncias apoiares presentes no H. bracteatus, como mostrou anteriormente (Figura 3), purificando a amostra etanólico e, consequentemente, diminuindo o valor de rendimento em relação à ECE. Observou-se também que os rendimentos totais de CLE (frações Hex + Dic + EAc + Eth) foram inferiores aos encontrados no ECE em todas as condições estudadas (Figura 4). O tempo de contato de etanol a partir de biomassa em ECE (usando volume total de 100 mL de etanol, tanto embutida) foi quatro vezes maior do que em ECLE (usando volume total de 100 mL, sendo 25 mL cada solvente). 049. A ECE e CLE apresentaram valores de rendimento superiores aos encontrados na literatura usando a metodologia convencional. PLE apresentada em ambas as metodologias (CLE ou ECE) produz maior que 6%, enquanto Castilho et al. (2007) utilizando a técnica de maceração encontrado rendimento de 3%. Este resultado é comparável ao ECLE, onde temos uma concentração mais elevada de substâncias antioxidantes (Figura 5).Evaluation of the yield of extracts 045. The procedure for calculating the yield was from the weighing of the empty glass vials, followed by the weighing after evaporation of the solvent, quantifying with this the dry mass of the crude extract and fractions obtained. The percent yield (%) of each dry extract was determined using equation 1: In which,% R = Percent yield y es Mass of solid extract m pc = Mass of H. bracteatus bark powder (dry basis ) 046. H. bracteatus bark extraction yield values (n = 3) using the clean up methodology are shown in Figure 3. The extracts showed different yields when different polarity solvents were used. We can observe that hexane (3.5-3.9%) (Figure 3a) and ethanol (1.7-2.4%) (Figure 3d) fractions showed the highest yields. This result demonstrated H. bracteatus molecules present with relatively different polarity in their composition justifying the use of a cleaning extraction (ECE) to obtain bioactive compounds. The elimination of the supporting fraction provides a high potential antioxidant extract. 047. The flow parameter did not influence the extraction yield for all conditions except at 25 ° C using ethanolic solvent (Figure 3 d), where the flow rate of 1 mL / min is better than 2 mL / min. In this case for the other solvents (hexane, dichloromethane and ethyl acetate). However, for the more polar solvent, such as ethanol, contact time increased yield at low temperature (25 ° C) (p <0.001). 048. Extraction using only ethanol (crude ethanol extract - ECE) showed the highest yield values (6.6-9.6%), comparing the ethanol fraction of CLE (ECLE) (1.7-2.4%). (p <0.0001) (Figure 4). The CLE eliminates supportive substances present in H. bracteatus, as previously shown (Figure 3), purifying the ethanolic sample and, consequently, decreasing the yield value in relation to the ECE. It was also observed that the total CLE yields (Hex + Dic + EAc + Eth fractions) were lower than those found in the ECE in all conditions studied (Figure 4). The contact time of ethanol from biomass in ECE (using total volume of 100 mL of both embedded ethanol) was four times longer than in ECLE (using total volume of 100 mL, with 25 mL each solvent). 049. ECE and CLE showed higher yield values than those found in the literature using the conventional methodology. PLE presented in both methodologies (CLE or ECE) produces greater than 6%, while Castilho et al. (2007) using the maceration technique found yield of 3%. This result is comparable to ECLE, where we have a higher concentration of antioxidant substances (Figure 5).

Avaliação da atividade sequestrante de radical DPPH - l,l-difenil-2-picrilidrazil 050. A atividade antioxidante foi determinada utilizando a metodologia proposta por Brand-Willians; Cuvelier; Berset (1995) com algumas adaptações. Para tanto foi determinada a partir do preparo da solução estoque de 24 mg de DPPH dissolvidos em 100 mL de metanol. Em seguida, a solução de trabalho deve ser preparada a partir da mistura de 30 pL das diluições do extrato bruto etanólico (ECE) ou das frações a 3 mL da solução de DPPH. A mistura deve ser incubada por 10 minutos no escuro para posterior leitura das absorbâncias a 520 nm em espectrofotômetro. Os resultados foram expressos em mmol Trolox/g de massa fresca. Os ensaios foram realizados em triplicata. Avaliação da atividade sequestrante de radical ABTS - 2,2'- azinobis (3-etilbenzotiazolina-6-ácido sulfônico) 051. A atividade antioxidante foi determinada a partir da proposta metodológica de Re et al. (1999) com algumas adaptações. A atividade antioxidante foi medida através da captura do radical 2,2'- azinobis(3-etilbenzotiazolina-6-ácido sulfônico) - ABTS. O radical ABTS+ foi formado pela reação de ABTS (7 mM) com persulfato de potássio (concentração final 2,45 mM) e incubados à temperatura ambiente no escuro durante 12 horas. Uma vez formado o radical ABTS+, este foi diluído em etanol para se obter um valor de absorvância de 0,7 ± 0,01 em 734 nm. 30 pL do ECE ou das frações da H. bracteatus foi adicionado a 3 mL da solução de ABTS+ e a absorvância foi medida a 734 nm após 1 minuto. Foi usado Trolox (6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametilcromo-2-ácido carboxílico 97%, Aldrich Chemical Co., Gillingham, Dorset, UK) como antioxidante de referência. Os resultados foram expressos como valores de capacidade antioxidante equivalente Trolox (TEAC). 052. O ECLE em comparação com ECE, proporcionou os melhores valores antioxidantes a 50°C (Figura 5). As etapas de purificação (limpeza utilizando solventes não polares) ajudou a selecionar substâncias ativas e proporcionou melhores resultados antioxidantes em nosso estudo. O parâmetro de taxa de fluxo não influenciou o comportamento antioxidante de ECLE. Uma vez que 2 mL/min ocorre mais rapidamente do que 1 mL/min, a condição selecionada foi de 2 mL/min a 50°C utilizando metodologia ECLE.Evaluation of DPPH radical scavenging activity - 1,1-diphenyl-2-picrilidrazil 050. Antioxidant activity was determined using the methodology proposed by Brand-Willians; Cuvelier; Berset (1995) with some adaptations. For this purpose it was determined from the preparation of the 24 mg DPPH stock solution dissolved in 100 mL methanol. Thereafter, the working solution should be prepared from a 30 µL mixture of the crude ethanol extract (ECE) dilutions or 3 mL fractions of the DPPH solution. The mixture should be incubated for 10 minutes in the dark for subsequent absorbance reading at 520 nm in a spectrophotometer. Results were expressed as mmol Trolox / g fresh mass. Assays were performed in triplicate. Evaluation of ABTS - 2,2'-azinobis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) radical scavenging activity 051. The antioxidant activity was determined from the methodological proposal of Re et al. (1999) with some adaptations. Antioxidant activity was measured by capturing the 2,2'-azinobis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) - ABTS radical. The ABTS + radical was formed by reacting ABTS (7 mM) with potassium persulfate (final concentration 2.45 mM) and incubating at room temperature in the dark for 12 hours. Once the ABTS + radical was formed, it was diluted with ethanol to obtain an absorbance value of 0.7 ± 0.01 at 734 nm. 30 µl of ECE or H. bracteatus fractions was added to 3 ml of ABTS + solution and absorbance was measured at 734 nm after 1 minute. Trolox (6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchromo-2-carboxylic acid 97%, Aldrich Chemical Co., Gillingham, Dorset, UK) was used as the reference antioxidant. Results were expressed as Trolox equivalent antioxidant capacity (TEAC) values. 052. ECLE compared with ECE provided the best antioxidant values at 50 ° C (Figure 5). The purification steps (cleaning using non-polar solvents) helped to select active substances and provided better antioxidant results in our study. The flow rate parameter did not influence the antioxidant behavior of ECLE. Since 2 mL / min occurs faster than 1 mL / min, the selected condition was 2 mL / min at 50 ° C using ECLE methodology.

REIVINDICAÇÕES

Claims

1. GUIDED EXTRACTION PROCESS WITH PURIFICATION AND CONCENTRATION OF ANTIOXIDANT SUBSTANCES EXTRACTED FROM Himatanthus bracteatus (A. DC.) WOOD SHELLS, characterized by the following step: • Driving under process conditions involving temperature in the range of 20 ° C and 100 ° C, pressure at any value above solvent vapor pressure, flow to operate between 1 and 5 mL / min, with biomass ratio ranging from 0.01 g / mL to 10 g / mL and organic solvent of polarity increasing for the extraction / purification module to extract and purify the extract after time ranging from 10 to 100 min, separate the extract from the effluent product;

Guided extraction process according to claim 1, characterized in that the collection may be carried out with other parts of Himatanthus bracteatus, such as roots, leaves, fruit, flowers and seeds, preferably the stem bark.

Guided extraction process according to claim 1, characterized by the concentration (w / v) of biomass: solvent may range from 0.01 g / ml to 10 g / ml, preferably using 0.1 g / ml and extraction time may range from 10 to 100 min, preferably 25 min.

Guided extraction process according to claim 1, characterized in that the temperature control must operate between 20 and 100 ° C, typically in the range of 20 to 70 ° C and preferably between 30 and 50 ° C.

Guided extraction process according to claim 1, characterized in that the flow rate is preferably 2 mL / min.

Guided extraction process according to claim 1, characterized in that the pressure is preferably 100 bar.

Guided extraction process according to Claim 1, characterized in that the concentration of the plant extract is through the passage of increasing polarity solvents, continuously flowing through the fixed bed of raw material, preferably starting with hexane, followed by dichloromethane. , ethyl acetate and ethanol.

Guided extraction process according to claim 1, characterized in that the evaporation process is carried out under vacuum, nitrogen evaporation, lyophilization or any other drying method.