BR102014010268A2

BR102014010268A2 - use of pntx-19 synthetic peptide for pain treatment

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Publication number: BR102014010268A2
Application number: BR102014010268A
Authority: BR
Inventors: Cristina Nogueira Freitas Ana; Da Fonseca Pacheco Daniela; Dimitri Gama Duarte Igor; Elena De Lima Perez Garcia Maria
Original assignee: Fund Amparo Pesquisa Estado Minas Gerais Fapemig; Univ Federal De Minas Gerais Ufmg
Priority date: 2014-04-29
Filing date: 2014-04-29
Publication date: 2018-10-09
Also published as: BR102014010268B1

Abstract

uso do peptídeo sintético pntx-19 para tratamento de dor. a presente invenção refere-se uso do peptídeo sintético pntx-19 na preparação de medicamentos analgésicos para o tratamento de pacientes portadores de dor neuropática, dor nociceptiva (sensibilização de nociceptores por prostaglandina e2) e inflamatória. o peptídeo sintético pntx- 19 é uma ferramenta farmacológica bastante interessante para o uso como medicamento analgésico uma vez que desencadeia resposta antinociceptiva via canabinoide e opioide e provavelmente não desencadeia tolerância nem dependência.use of synthetic peptide pntx-19 for pain management. The present invention relates to the use of synthetic peptide pntx-19 in the preparation of analgesic medicaments for the treatment of patients with neuropathic pain, nociceptive pain (prostaglandin e2 sensitization of nociceptors) and inflammatory pain. The synthetic peptide pntx-19 is a very interesting pharmacological tool for use as an analgesic drug since it triggers cannabinoid and opioid antinociceptive response and probably does not trigger tolerance or dependence.

Description

“USO DO PEPTÍDEO SINTÉTICO PnTx-19 PARA TRATAMENTO DE DOR” [01] A presente invenção refere-se uso do peptídeosintéticoPnTx-19 na preparação de medicamentos analgésicospara o tratamento de pacientesportadores de dor neuropática, dor nociceptiva (sensibilização de nociceptores por prostaglandina E2) e inflamatória. O peptídeo sintético PnTx-19 é uma ferramenta farmacológica bastante interessante para o uso como medicamento analgésico uma vez que desencadeia resposta antinociceptiva via canabinoide e opioide e provavelmente não desencadeia tolerância nem dependência."USE OF SYNTHETIC PEPTIDE PnTx-19 FOR PAIN TREATMENT" [01] The present invention relates to the use of synthetic peptide PnTx-19 in the preparation of analgesic drugs for the treatment of patients with neuropathic pain, nociceptive pain (prostaglandin E2 nociceptor sensitization) and inflammatory. Synthetic peptide PnTx-19 is a very interesting pharmacological tool for use as an analgesic drug as it triggers cannabinoid and opioid antinociceptive response and probably does not trigger tolerance or dependence.

[02] A dor foi conceituada em 1986 pela Associação Internacional para o estudo da Dor (IASP) como uma “experiência sensorial e emocional desagradável associada a lesões reais ou potenciais ou descrita em termos de tais lesões”. Ela pode variar na intensidade (leve, moderada e intensa), caracterização (aguda, em queimação, lancinante), duração (transiente, intermitente ou persistente) e localização (superficial ou profunda, localizada oudifusa) (WOOLF, C.J. Pain: movingfromsymptomcontroltowardmechanism-specificpharmacologicmanagement. Ann. Intern. Med., 140: 441-451, 2004). Essa definição, atualmente muito utilizada, pressupõe a existência de dois componentes, a sensação dolorosa propriamente dita ou nocicepção e a reatividade emocional à dor (HELLEBREKERS, L. J. Dor em Animais. São Paulo: Manole, 2002. p. 69-79; KANDEL, E.R, etal.Princípios da Neurosciência. São Paulo: Manole. p. 73-491, 2003).[02] Pain was conceptualized in 1986 by the International Association for the Study of Pain (IASP) as an "unpleasant sensory and emotional experience associated with actual or potential injury or described in terms of such injury". It may vary in intensity (mild, moderate and intense), characterization (acute, burning, nagging), duration (transient, intermittent or persistent) and location (superficial or deep, localized or diffuse) (WOOLF, CJ Pain: movingfromsymptomcontroltowardmechanism-specificpharmacologicmanagement Ann Intern Intern, 140: 441-451, 2004). This currently widely used definition presupposes the existence of two components, the painful sensation itself or nociception and the emotional reactivity to pain (HELLEBREKERS, LJ Pain in Animals. São Paulo: Manole, 2002. p. 69-79; KANDEL, ER, et al.Principles of Neuroscience São Paulo: Manole, pp. 73-491, 2003).

[03] A nocicepção refere-se à atividade do sistema aferente, induzida por estímulos nocivos, tanto exógenos (mecânicos, químicos, físicos e biológicos) quanto endógenos (inflamação, aumento do peristaltismo, isquemia tecidual) sendo quea percepção periférica ocorre pela ativação de estruturas específicas, localizadas nas terminações nervosas livres de fibras aferentes primárias denominadas nociceptores. Na sequência, os estímulos são conduzidos através de vias nervosas sensitivas até o sistema nervoso central e ao nível talâmico e cortical ocorre a integração da sensação dolorosa (FÜRST, S. Transmittersinvolved in antinociception in thespinalcord. Brain Res. Bull, 48:129-141, 1999). Por sua vez, a reatividade emocional à dor corresponde à interpretação afetiva dessa condição, tendo caráter individual e sendo influenciada por estados psicológicos, experiências prévias e fatores culturais, sociais e ambientais. Esses fatores são capazes de modular ou distorcer a sensação dolorosa, que seria aproximadamente igual em todos os indivíduos com vias nervosas íntegras (KLAUMANNetal.Patofisiologia da dor.[03] Nociception refers to the activity of the afferent system induced by noxious stimuli, both exogenous (mechanical, chemical, physical and biological) and endogenous (inflammation, increased peristalsis, tissue ischemia) and peripheral perception occurs through activation of specific structures located at the nerve endings free of primary afferent fibers called nociceptors. Following, the stimuli are conducted through sensory nerve pathways to the central nervous system and at the thalamic and cortical level occurs the integration of painful sensation (FÜRST, S. Transmittersinvolved in antinociception in thespinalcord. Brain Res. Bull, 48: 129-141 , 1999). In turn, the emotional reactivity to pain corresponds to the affective interpretation of this condition, having an individual character and being influenced by psychological states, previous experiences and cultural, social and environmental factors. These factors are capable of modulating or distorting painful sensation, which would be approximately the same in all individuals with intact nerve pathways (KLAUMANNetal. Pathophysiology of pain.

ArchivesofVeterinary Science, 13(1): 1-12, 2008).Sendo assim, os termos nocicepção e antinocicepção, equivalentes aos termos dor e analgesia respectivamente, são mais adequados para estudos envolvendo animais de experimentação.ArchivesofVeterinary Science, 13 (1): 1-12, 2008). Therefore, the terms nociception and antinociception, equivalent to the terms pain and analgesia respectively, are more suitable for studies involving experimental animals.

[04] Em condições normais, a dor induz respostas protetoras importantes em termos de sobrevida, como o reflexo de retirada (ou reação de fuga), com intuito de interromper a exposição ao estímulo nocivo. Entretanto, a dor persistente pode levar a um estado de depressão semelhante ao desencadeado por estímulos estressantes inevitáveis, não podendo ser considerada como uma resposta adaptativa. Desse modo, em muitos quadros de dor existe a necessidade do uso de fármacos analgésicos (KLAUMANN, P. R., etal.Patofisiologia da dor. ArchivesofVeterinary Science, 13(1): 1-12, 2008).[04] Under normal conditions, pain induces important protective responses in terms of survival, such as the withdrawal reflex (or escape reaction), in order to interrupt exposure to the noxious stimulus. However, persistent pain can lead to a state of depression similar to that triggered by unavoidable stressful stimuli and cannot be considered as an adaptive response. Thus, in many pain conditions there is a need for the use of analgesic drugs (KLAUMANN, P. R., et al. Pathophysiology of pain. ArchivesofVeterinary Science, 13 (1): 1-12, 2008).

[05] Segundo a Organização mundial da saúde, o Brasil é um dos países que mais consomem analgésicos no mundo. As duas principais classes utilizadas são os anti-inflamatórios não-esteroidais (AINES) e os opióides, entretanto, apesar da eficácia em muitos quadros, as reações adversas relacionadas ao uso podem limitar a utilização clínica (FUCHS, F.D, et al.[05] According to the World Health Organization, Brazil is one of the countries that use the most painkillers in the world. The two major classes used are non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) and opioids; however, despite efficacy in many settings, adverse reactions related to use may limit clinical use (FUCHS, F.D, et al.

Farmacologia Clínica. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2006. 1074p). Assim, nota-se ser de grande importância a busca por novas substâncias analgésicas que tenham menores reações adversas e que sejam eficazes nos quadros não responsivos aos analgésicos convencionais.Clinical Pharmacology. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2006. 1074p). Thus, it is noted that the search for new analgesic substances that have less adverse reactions and that are effective in cases not responsive to conventional analgesics is of great importance.

[06] Os agonistas dos receptores opióides constituem a principal classe de fármacos utilizada no controle agudo da dor moderada a intensa. Eles exercem seus efeitos ao se ligarem, principalmente, aos receptores μ, δ e κ localizados na periferia, medula espinal e estruturas supra-espinais (SINGH, V.K., et al. Molecular biologyofopioidreceptors: recentadvances. Neuroimmunomodulation, 4: 285-297, 1997). A morfina, agonista de ocorrência natural de maior importância histórica, purificado a partir da planta Papaversomniferum, continua sendo amplamente utilizada, entretanto, opióides sintéticos e semi-sintéticos contribuem para a versatilidade farmacocinética e farmacodinâmica (FUCHSet al.[06] Opioid receptor agonists are the major class of drugs used for acute control of moderate to severe pain. They exert their effects by binding mainly to μ, δ, and κ receptors located on the periphery, spinal cord, and supraspinatus structures (SINGH, VK, et al. Molecular biologyofopiohydreceptors: recentadvances. Neuroimmunomodulation, 4: 285-297, 1997 ). Morphine, a naturally occurring agonist of major historical importance, purified from the Papaversomniferum plant, is still widely used. However, synthetic and semi-synthetic opioids contribute to pharmacokinetic and pharmacodynamic versatility (FUCHSet al.

Farmacologia Clínica. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2006. 1074p.). Desse modo, a eficácia analgésica das diferentes substâncias pode variar segundo a característica, duração, intensidade do estímulo, dosagem e espécie e tem sido observado que eles não são igualmente eficazes para todo tipo de dor. Por exemplo, na dor neuropática, um tipo de dor que resulta de lesão ou disfunção do sistema nervoso central ou periférico, a resposta aos opióides é pobre ou de curta duração (RIBEIRO et al. O uso de opióides no tratamento da dor crônica não oncológica: o papel da metadona. Revista BrasileiradeAnestesiologia, 52(5): 644-651, 2002; BASSANEZIet al. Analgesia pós-operatória. Revista do ColégioBrasileiro de Cirurgia, 33(2): 116-122, 2006). Tal achado pode ser explicado pelo fato de que a lesão do nervo periférico causa uma diminuição na expressão de receptores opióides da membrana, estando a presença de receptores μ-opióides reduzida em cerca de 70% nos terminais nervosos pré-sinápticos (DELLEMIJN P. Are opioidseffective in relievingneuropathicpain?Clinical Pharmacology. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2006. 1074p.). Thus, the analgesic efficacy of different substances may vary according to the characteristic, duration, stimulus intensity, dosage and species and it has been observed that they are not equally effective for all types of pain. For example, in neuropathic pain, a type of pain that results from central or peripheral nervous system injury or dysfunction, the response to opioids is poor or short-lived (RIBEIRO et al. The use of opioids in the treatment of chronic non-cancer pain. : the role of methadone Revista BrasileiradeAnestesiologia, 52 (5): 644-651, 2002; BASSANEZIet al., Postoperative analgesia, Journal of the Brazilian College of Surgery, 33 (2): 116-122, 2006). This finding may be explained by the fact that peripheral nerve injury causes a decrease in membrane opioid receptor expression, and the presence of μ-opioid receptors is reduced by about 70% in presynaptic nerve terminals (DELLEMIJN P. Are opioidseffective in relievingneuropathicpain?

Pain,80(3):453-462, 1999). Além disso, os receptores μ e δ são responsáveis pela maior parte do efeito analgésico dos opióides e por alguns dos principais efeitos indesejáveis (depressão respiratória, euforia, sedação e dependência) (RANGetal.Fármacos analgésicos. In: RANG, H.P.; DALE, M.M.; RITTER, J.M. Farmacologia. 5.ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2004, p.640-663; WALDHOERetal.OpioidReceptors. Annu. Rev. Biochem., 73: 953-90, 2004).Pain, 80 (3): 453-462, 1999). In addition, μ and δ receptors are responsible for most of the analgesic effect of opioids and for some of the major undesirable effects (respiratory depression, euphoria, sedation and dependence) (RANGetal. Analgesic drugs. In: RANG, HP; DALE, MM RITTER, JM Pharmacology 5. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2004, p.640-663; WALDHOERetal.Opioid Receptors. Annu. Rev. Biochem., 73: 953-90, 2004).

[07] A dependência, um dos principais problemas associados ao uso de opióides, pode ser definida como um quadro que se desenvolve em consequência da adaptação produzida pelo reajuste dos mecanismos homeostáticos em resposta ao uso repetido de uma droga. Nesse estado de adaptação, o indivíduo necessita da administração contínua da droga para manter suas funções normais (FUCHSetal.Farmacologia Clínica. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2006. 1074p). O aumento de dopamina no sistema mesolímbico desencadeado pelo uso de opióides, com consequente aumento da transmissão dopaminérgica é considerado primordial para o desenvolvimento de dependência (HEIT, H.A. The truthaboutpain management: thedifferencebetween a painpatientand na addictedpatient. Eur J Pain, 5:27-9, 2001). Além disso, o uso de opióides está frequentemente associado ao desenvolvimento de tolerância, situação em que o uso repetido de uma dose constante do fármaco resulta em diminuição de seu efeito terapêutico. Os mecanismos moleculares responsáveis pela tolerância continuam sendo objeto de controvérsia e podem envolver a redução do número de receptores e modificação na via de transdução de sinal. Á curto prazo, as alterações no número de receptores ou na afinidade de ligação podem ser causadas por inativação de receptores através da fosforilação, interiorização e degradação dos receptores da superfície celular (GOLANet al. Princípios de Farmacologia. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2009. 952p).[07] Addiction, one of the major problems associated with opioid use, can be defined as a condition that develops as a result of the adaptation produced by readjusting homeostatic mechanisms in response to repeated drug use. In this state of adaptation, the individual needs continuous administration of the drug to maintain their normal functions (FUCHSetal. Clinical Pharmacology. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2006. 1074p). The increase in dopamine in the mesolimbic system triggered by opioid use, with consequent increase in dopaminergic transmission is considered primordial for the development of addiction (HEIT, HA). The truthaboutpain management: thedifferencebetween a painpatientand in addictedpatient. , 2001). In addition, opioid use is often associated with the development of tolerance, in which repeated use of a constant dose of the drug results in decreased therapeutic effect. The molecular mechanisms responsible for tolerance remain controversial and may involve the reduction of receptor numbers and modification of the signal transduction pathway. In the short term, changes in receptor numbers or binding affinity may be caused by receptor inactivation through cell surface receptor phosphorylation, internalization, and degradation (GOLANet al. Principles of Pharmacology. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2009 952p).

[08] De maneira interessante, a administração prolongada de opiorfina, um inibidor de encefalinase (enzima que cliva o opióide endógeno encefalina), permite que a encefalina permaneça biodisponível por mais tempo produzindo analgesia, sem indução de tolerância (ROUGEOT etal.Systemicallyactivehumanopiorphinis a potentyet non- addictiveanalgesicwithoutdrugtoleranceeffects.[08] Interestingly, prolonged administration of opiorphin, an encephalinase inhibitor (enzyme that cleaves endogenous opioid enkephalin), allows encephalin to remain bioavailable longer producing analgesia without tolerance induction (ROUGEOT etal.Systemicallyactivehumanopiorphinis a potentyet) non-addictiveanalgesicwithoutdrugtoleranceeffects.

Journalofphysiologyandpharmacology, 61(4): 483-490, 2010). Tais achados sugerem que ativação de receptores opióides por peptídeos opióides endógenos não está relacionada ao mecanismo de tolerância, ao passo que, a ativação direta de receptores opióides por agonistas exógenos sim, como acontece com a administração de morfina.Journalofphysiologyandpharmacology, 61 (4): 483-490, 2010). These findings suggest that activation of opioid receptors by endogenous opioid peptides is not related to the tolerance mechanism, whereas direct activation of opioid receptors by exogenous agonists does, as with morphine administration.

[09] Os canabinóidestambém são compostos que apresentam, dentre uma variedade de efeitos farmacológicos, o efeito antinociceptivo.Esses efeitos estão relacionados às atividades biológicas do Δ9- tetrahidrocanabinol (THC), um princípio ativo da planta Cannabis sativa. Eles exercem seus efeitos ao se ligarem a receptores CB1 e CB2 (DEWEY, W.L. Cannabinoidpharmacology. Pharmacol. Rev., 38: 151-155, 1986). Os receptores CB1 são expressos principalmente em neurônios centrais e periféricos e os receptores CB2, em células imunes (HOWLETTetal.International Union ofPharmacology XXVII.[09] Cannabinoids are also compounds that have, among a variety of pharmacological effects, the antinociceptive effect. These effects are related to the biological activities of Δ9-tetrahydrocannabinol (THC), an active ingredient in the Cannabis sativa plant. They exert their effects by binding to CB1 and CB2 receptors (DEWEY, W.L. Cannabinoidpharmacology. Pharmacol. Rev., 38: 151-155, 1986). CB1 receptors are mainly expressed in central and peripheral neurons and CB2 receptors in immune cells (HOWLETTetal.International Union ofPharmacology XXVII.

Classificationofcannabinoidreceptors. Pharmacol. Rev., 54: 161-202, 2002), embora estudos posteriores tenham demonstrado a presença desses receptores em muitas regiões cerebrais (ONAIVIetal.Discoveryofthepresenceandfunctionalexpressionofcannabinoid CB2 receptors in brain. Ann. N Y Acad. Sci., 1074: 514-536, 2006; GONG et al.Cannabinoid CB2 receptors: immunohistochemical localization in rat brain. Brain Res., 1071: 10-23, 2006). A descoberta e caracterizaçãodestesreceptoresjuntamente com aidentificação de canabinóidesendógenos (DEVANEetal.Isolation and structure of a brain constituent that binds to the cannabinoid receptor. Science, 258: 19461949, 1992; MECHOULAet al. Identification of an endogenous 2-monoglyceride, present in canine gut, that binds cannabinoid receptors. Biochem. Pharmacol., 50: 83-90, 1995) estabeleceu a existência de um sistema analgésico modulatórioendocanabinóide.Na dor neuropática, a utilização de canabinóides para o alívio da dor está bem caracterizada. Porexemplo, o uso do canabinóideSativex (NURMIKKOetal.Sativex successfully treats neuropathic pain characterized by allodynia: A randomised, double-blind, placebo-controlled clinicai trial. Pain, 133: 210220, 2007), que ativa principalmente receptores canabinóides do tipo CB1, mostra sucesso no seu tratamento.Classificationofcannabinohydreceptors. Pharmacol. Rev., 54: 161-202, 2002), although further studies have shown the presence of these receptors in many brain regions (ONAIVIetal.Discoveryofthepresenceandfunctionalexpressionofcannabinoid CB2 receptors in the brain. Ann. NY Acad. Sci., 1074: 514-536, 2006; GONG et al.Cannabinoid CB2 receptors: immunohistochemical localization in rat brain (Brain Res., 1071: 10-23, 2006). The discovery and characterization of these receptors together with the identification of endogenous cannabinoids (DEVANEetal.Isolation and structure of a brain constituent that binds to the cannabinoid receptor. Science, 258: 19461949, 1992; MECHOULA et al. Identification of an endogenous 2-monoglyceride, present in canine gut cannabinoid binds receptors (Biochem. Pharmacol., 50: 83-90, 1995) established the existence of a modulatory endocannabinoid analgesic system. In neuropathic pain, the use of cannabinoids for pain relief is well characterized. For example, the use of cannabinoidSativex (NURMIKKOetal.Sativex successfully treats neuropathic pain characterized by allodynia: A randomized, double-blind, placebo-controlled clinical trial. Pain, 133: 210220, 2007), which primarily activates CB1 type cannabinoid receptors, shows success in your treatment.

[010] Na presente invenção foi testado o efeito antinociceptivo do peptídeosintéticoPnTx-19 e os resultados sugerem que esse peptídeo induz a liberação de opióides endógenos, já que não houve reversão total do efeito analgésico quando foram administrados antagonistas opióides, podendo ser um indício que o peptídeo produza antinocicepção sem tolerância. Foi demonstrado,ainda,queo mecanismo antinociceptivo de PnTx-19também está relacionado à via canabinóide. É possível que o peptídeo sintético PnTx-19 seja uma substância promissora no tratamento de neuropatias, visto que, os dados da presente invenção mostraram que o peptídeo ativa receptores periféricos do tipo CB1. Importante ressaltar a importância do efeito periférico de PnTx-19, que leva a importantes benefícios clínicos como menor risco de reações adversas sistêmicas. Já foi demonstrado que, a ativação de receptores CB1 centrais leva ao aparecimento de efeitos psicotrópicos, como mudanças na percepção, euforia leve, diminuição da capacidade de raciocínio, dentre outros (ALVESetal.Canabinoides sintéticos: drogas de abuso emergentes / Syntheticcannabinoids: emergingdrugsofabuse.Rev. psiquiatr. clín., 39(4): 142-148, 2012). Tais efeitos poderiam ser evitados pelo uso de substâncias que exercem seu efeito apenas localmente. Em nosso estudo foi possível delimitar uma dose do peptídeo PnTx-19 que desencadeia resposta antinociceptiva pela ativação local de receptores CB1.[010] In the present invention the antinociceptive effect of the synthetic peptide PnTx-19 was tested and the results suggest that this peptide induces the release of endogenous opioids, as there was no total reversal of the analgesic effect when opioid antagonists were administered, which may indicate that peptide produces antinociception without tolerance. It has also been shown that the antinociceptive mechanism of PnTx-19 is also related to the cannabinoid pathway. It is possible that the synthetic peptide PnTx-19 is a promising substance in the treatment of neuropathies, since the data of the present invention showed that the peptide activates CB1-type peripheral receptors. Importantly, the importance of the peripheral effect of PnTx-19, which leads to important clinical benefits such as lower risk of systemic adverse reactions, is important. Activation of central CB1 receptors has been shown to lead to the appearance of psychotropic effects such as changes in perception, mild euphoria, decreased ability to reason, among others (Syntheticcannabinoids: emergingdrugsofabuse.Rev. Psychiatry, Cl., 39 (4): 142-148, 2012). Such effects could be prevented by the use of substances that exert their effect only locally. In our study it was possible to delimit a dose of PnTx-19 peptide that triggers antinociceptive response by local activation of CB1 receptors.

[011] O peptídeo sintético PnTx-19 foi desenvolvido a partir da estrutura tridimensional provável da toxina PnTx2-6 nativa, da aranha Phoneutrianegriventer. O PnTx-19 é constituído de uma curta cadeia polipeptídica de somente 19 aminoácidos o que permite sua fácil obtenção para fins comerciais, propiciando o desenvolvimento de composições farmacêuticas. O desenvolvimento deste peptídeo PnTx-19, está descrito no pedido de patente BR102012020800-8, porém, seu uso está reivindicado para o tratamento da disfunção erétil e/ou na potencialização da função erétil assim como a toxina TX2-6 referente à PI 0800596-6. Não há relatos, no estado da técnica, do efeito antinociceptivo induzido pelo PnTx-19.The synthetic peptide PnTx-19 was developed from the probable three-dimensional structure of the native PnTx2-6 toxin from the Phoneutrianegriventer spider. PnTx-19 is made up of a short polypeptide chain of only 19 amino acids which allows its easy commercialization, enabling the development of pharmaceutical compositions. The development of this PnTx-19 peptide is described in patent application BR102012020800-8, but its use is claimed for the treatment of erectile dysfunction and / or the enhancement of erectile function as well as the PI 0800596- toxin TX2-6. 6 There are no reports in the state of the art of the antinociceptive effect induced by PnTx-19.

[012] No estado da técnica, encontram-se outras formulações baseadas em polipeptídeos derivados de peçonhas de aranha. O documento PI 0605484-6refere-se ao uso da toxina PhalB, PnTx3-6, em composições farmacêuticas, incluindo para tratamento de processos dolorosos. O documento US2012015886 refere-se a formulações farmacêuticas contendo o peptídeo GsMTx4, derivado de toxina de aranha, para o alívio da dor. No entanto, não foi encontrado no estado da técnica peptídeo semelhante ao da presente invenção para o tratamento da dor.In the prior art, other formulations based on spider venom-derived polypeptides are found. PI 0605484-6 relates to the use of PhalB toxin, PnTx3-6, in pharmaceutical compositions, including for treatment of painful processes. US2012015886 relates to pharmaceutical formulations containing the spider toxin derived peptide GsMTx4 for pain relief. However, no prior peptide similar to that of the present invention has been found for the treatment of pain.

[013] Há também documentos, no estado da técnica, que referem-se ao desenvolvimento de novos compostos analgésicos utilizando agonistas dos receptores opióides e que buscam apresentar efeitos colaterais limitados e diminuição da susceptibilidade à tolerância. O documento US2004024005refere-se a uma composição para reduzir, prevenir ou retardar o desenvolvimento de tolerância e / ou dependência física a determinados medicamentos que se destinam aos receptores opióides.Trata-se de composições farmacêuticas incluindo: uma droga que tem como alvo um GPCR (G protein-coupledreceptors) , um agonista para o GPCR e um veículo farmaceuticamente aceitável. O documento USRE36547E refere-se a um método para aumentar seletivamente a potência analgésica da morfina e agonistas opióides bimodais utilizados clinicamente e, simultaneamente, atenuar o desenvolvimento de dependência física, tolerância e de outros efeitos secundários indesejáveis através da co - administração de um agonista de opióide e um antagonista de receptor de opióide que inativa seletivamente efeitos colaterais mediados por receptores opióides excitatórios. O documento PI9610248 provê compostos de peptídeos semelhantes aopióides associados com os analgésicos convencionais atuando perifericamente e que se ligam seletivamente ao receptor opióide-μ. Referindo-se a receptores canabinóides, o documento US2007060638 descreve terapias de combinação de um agonista do receptor de canabinóide e um antagonista de canabinóides, numa quantidade eficaz para potenciar, mas não antagonizar o efeito terapêutico do receptor agonista. Um estudo indica que uma terapia com canabinóide / opióide pode ser capaz de produzir efeitos antinociceptivos de longo prazo em doses desprovidas de efeitos secundários significativos, evitando as alterações bioquímicas neuronais que acompanham a tolerância( WELCH, SP, Interactionofthecannabinoid andopioid systems in themodulationofnociception. InternationalReviewOfPsychiatry, V 21, Edição: 2, 143-151, artigo PII 910429375, 2009). Outros documentos como US 2009311227, US2009029984 e WO2008045556 propõem composições que compreendem a combinação sinérgica de agonistas de receptores opióides e canabinóides para utilização no tratamento da dor. Já o documento US 2008188508 compreende a combinação de agonista do receptor opióide com antagonista do receptor canabinoide. Todas estas combinações têm o objetivo de potenciar o efeito terapêutico da droga e/ou reverter a tolerância através da administração simultânea ou não das mesmas. Portanto, o uso de um agonista atuando, ao mesmo tempo, via opioide e via canabinoide se torna uma grande vantagem em relação aos demais tratamentos para dor. E, no entanto, não foi encontrado no estado da técnica peptídeo semelhante ao da presente invenção que atue no mecanismo da dor.[013] There are also prior art documents relating to the development of new analgesic compounds using opioid receptor agonists and which seek to have limited side effects and decreased susceptibility to tolerance. US2004024005 relates to a composition for reducing, preventing or delaying the development of tolerance and / or physical dependence on certain opioid receptor medicinal products. These are pharmaceutical compositions including: a drug targeting a GPCR ( G protein-coupled receptors), a GPCR agonist and a pharmaceutically acceptable carrier. USRE36547E relates to a method for selectively increasing the analgesic potency of clinically used bimodal morphine and opioid agonists while simultaneously attenuating the development of physical dependence, tolerance and other undesirable side effects through co-administration of a opioid is an opioid receptor antagonist that selectively inactivates excitatory opioid receptor-mediated side effects. PI9610248 provides opioid-like peptide compounds associated with conventional peripherally acting analgesics that selectively bind to the μ-opioid receptor. Referring to cannabinoid receptors, US2007060638 describes combination therapies of a cannabinoid receptor agonist and a cannabinoid antagonist in an amount effective to potentiate but not antagonize the therapeutic effect of the agonist receptor. One study indicates that cannabinoid / opioid therapy may be capable of producing long-term antinociceptive effects at doses devoid of significant side effects, avoiding tolerant neuronal biochemical changes (WELCH, SP, Interactionofthecannabinoid andopioid systems in themodulationofnociception. InternationalReviewOfPsychiatry V 21, Edition: 2, 143-151, PII Article 910429375, 2009). Other documents such as US 2009311227, US2009029984 and WO2008045556 propose compositions comprising the synergistic combination of opioid and cannabinoid receptor agonists for use in the treatment of pain. US 2008188508 comprises the combination of opioid receptor agonist and cannabinoid receptor antagonist. All of these combinations are intended to enhance the therapeutic effect of the drug and / or to reverse tolerance through simultaneous or non-simultaneous administration thereof. Therefore, the use of an agonist acting at the same time via opioid and cannabinoid becomes a great advantage over other pain treatments. And yet it has not been found in the state of the art peptide similar to that of the present invention that acts on the pain mechanism.

[014] O peptídeo sintético PnTx-19 é uma ferramenta farmacológica bastante interessante para o uso como medicamento analgésico uma vez que desencadeia resposta antinociceptiva via canabinoide e opioide. A ativação específica de receptores CB1 e sua ação localtornam o peptídeo promissor para o tratamento de dor neuropática, porém pode ser utilizado também para outros modelos de dor, como a nociceptiva (sensibilização de nociceptores por prostaglandina E2) e inflamatória. E ainda, apesar de ativar a via opioidérgica ativando a resposta dos receptores μ- e δ-opioides, é provável que o peptídeo não desencadeie tolerância e nem dependência devido à hipótese de que o mesmo seja incapaz de ativar diretamente estes receptores.[014] The synthetic peptide PnTx-19 is a very interesting pharmacological tool for use as an analgesic drug as it triggers cannabinoid and opioid antinociceptive response. Specific activation of CB1 receptors and their local action make the promising peptide for the treatment of neuropathic pain, but can also be used for other pain models, such as nociceptive (prostaglandin E2 sensitization of nociceptors) and inflammatory. Moreover, despite activating the opioid pathway by activating the response of the μ- and δ-opioid receptors, it is likely that the peptide does not trigger tolerance or dependence due to the hypothesis that it is unable to directly activate these receptors.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURASBRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES

[015] Figura 1- Administração intracerebroventricular do peptídeo sintético Pntx-19: Apenas duas doses (0,4 nmol e 0,2 nmol) foram capazes de aumentar o limiar nociceptivo dos animais por até 15 min. O grupo controle recebeu solução salina (0,9% m/v de NaCl). Cada símbolo representa a média ± E.P.M. da medida do limiar nociceptivo expresso em segundos(s), referente ao N de 4 animais. * P< 0,05 em relação ao grupo Salina.[015] Figure 1- Intracerebroventricular administration of synthetic peptide Pntx-19: Only two doses (0.4 nmol and 0.2 nmol) were able to increase the nociceptive threshold of animals for up to 15 min. The control group received saline (0.9% w / v NaCl). Each symbol represents the mean ± E.P.M. of the nociceptive threshold measurement expressed in seconds (s) for the N of 4 animals. * P <0.05 compared to the Saline group.

[016] Figura 2 - Administração intratecal do peptídeo sintético Pntx-19: Nenhuma das doses administradas foi capaz de alterar o limiar nociceptivo dos animais. O grupo controle recebeu solução salina (0,9% m/v de NaCl). Cada símbolo representa a média ± E.P.M. da medida do limiar nociceptivo expresso em segundos(s), referente ao N de 2 animais. * P< 0,05 em relação ao grupo Salina.[016] Figure 2 - Intrathecal administration of synthetic peptide Pntx-19: None of the doses administered were able to alter the nociceptive threshold of the animals. The control group received saline (0.9% w / v NaCl). Each symbol represents the mean ± E.P.M. of the nociceptive threshold measurement expressed in seconds (s) for the N of 2 animals. * P <0.05 compared to the Saline group.

[017] Figura 3- Administração intraplantar do peptídeo sintético Pntx-19: As duas doses administradas (4nmol e 2nmol) foram capazes de alterar o limiar nociceptivo dos animais. A dose de 8nmol foi capaz de prolongar o efeito antinociceptivo de 5min. para 10min. Grupo controle recebeu 2 μg de PGE2. Cada símbolo representa a média ± E.P.M. da medida do limiar nociceptivo expresso em gramas(g), referente ao N de 4 animais. * P< 0,05 em relação ao grupo controle.[017] Figure 3- Intraplantar administration of synthetic peptide Pntx-19: The two doses administered (4nmol and 2nmol) were able to alter the nociceptive threshold of the animals. The 8nmol dose was able to prolong the antinociceptive effect of 5min. to 10min. Control group received 2 μg of PGE2. Each symbol represents the mean ± E.P.M. of the nociceptive threshold expressed in grams (g) for the N of 4 animals. * P <0.05 compared to the control group.

[018] Figura 4 - Teste de exclusão do efeito não local pela dose de 4nmol do peptídeo sintético Pntx-19: O peptídeo apresentou efeito antinociceptivo apenas local quando administrado via intraplantar na dose de 4nmol. Grupo controle recebeu 2 μg de PGE2. Veic: solução salina fisiológica (0,9% m/v de NaCl); PD: pata direita; PE: pata esquerda. Cada símbolo representa a média ± E.P.M. da medida do limiar nociceptivo expresso em gramas(g), referente ao N de 4 animais. * P<0,05 em relação ao grupo Salina + PGE2.[018] Figure 4 - Non-local effect exclusion test by 4nmol dose of synthetic peptide Pntx-19: The peptide had only local antinociceptive effect when administered via intraplantar at 4nmol dose. Control group received 2 μg of PGE2. Veic: physiological saline (0.9% w / v NaCl); PD: right paw; PE: left paw. Each symbol represents the mean ± E.P.M. of the nociceptive threshold expressed in grams (g) for the N of 4 animals. * P <0.05 compared to the Saline + PGE2 group.

[019] Figura 5 - Efeito sobre o limiar nociceptivo causado pelo peptídeo sintético Pntx-19 frente à antagonistas de receptores opioides: a naloxona (antagonista inespecífico de receptores opioides) foi capaz de reverter parcialmente o efeito antinociceptivo do peptídeo de maneira dose dependente. Grupo controle recebeu 2 μg de PGE2. Veicl: solução salina (0,9% m/v de NaCl) aplicada 30 min antes da terceira hora da PGE2. Veic2: solução salinaaplicada 5 min antes da terceira hora da PGE2. Naloxona foi aplicado 30 min antes da terceira hora da PGE2.PnTx-19 foi aplicado 5 min antes da terceira hora da PGE2. Cada símbolo representa a média ± E.P.M. da medida do limiar nociceptivo expresso em gramas, referente ao N de 4 animais. * P< 0,05 em relação ao grupo Veic1+Veic2+PGE2.# P< 0,05 em relação ao grupo PGE2+Veic1+PnTx-19 (4 nmol).[019] Figure 5 - Effect on nociceptive threshold caused by synthetic peptide Pntx-19 against opioid receptor antagonists: naloxone (nonspecific opioid receptor antagonist) was able to partially reverse the antinociceptive effect of the peptide in a dose-dependent manner. Control group received 2 μg of PGE2. Veicl: saline (0.9% w / v NaCl) applied 30 min before the third hour of PGE2. Veic2: saline applied 5 min before the third hour of PGE2. Naloxone was applied 30 min before the third hour of PGE2. PnTx-19 was applied 5 min before the third hour of PGE2. Each symbol represents the mean ± E.P.M. of the nociceptive threshold expressed in grams for the N of 4 animals. * P <0.05 relative to the Veic1 + Veic2 + PGE2 group. # P <0.05 relative to the PGE2 + Veic1 + PnTx-19 group (4 nmol).

[020] Figura 6 - Efeito sobre o limiar nociceptivo causado pelo peptídeo sintético Pntx-19 frente ao antagonismo de receptores μ-opioides: o clocinamox (antagonista específico de receptores μ-opioides) foi capaz de reverter parcialmente o efeito antinociceptivo do peptídeo. Grupo controle recebeu 2 μg de PGE2. Veicl: solução salina (0,9% m/v de NaCl) aplicada 35 min antes da terceira hora da PGE2. Veic2: solução salina aplicada 5 min antes da terceira hora da PGE2. Clocinamox foi aplicado 35 min antes da terceira hora da PGE2.PnTx-19 foi aplicado 5 min antes da terceira hora da PGE2. Cada símbolo representa a média ± E.P.M. da medida do limiar nociceptivo expresso em gramas(g), referente ao N de 4 animais. * P< 0,05 em relação ao grupo Veic1+Veic2+PGE2. . # P< 0,05 em relação ao grupo PGE2+Veic1+PnTx-19 (4 nmol).[020] Figure 6 - Effect on nociceptive threshold caused by synthetic peptide Pntx-19 against μ-opioid receptor antagonism: clocinamox (μ-opioid receptor specific antagonist) was able to partially reverse the antinociceptive effect of the peptide. Control group received 2 μg of PGE2. Veicl: saline (0.9% w / v NaCl) applied 35 min before the third hour of PGE2. Veic2: saline applied 5 min before the third hour of PGE2. Clocinamox was applied 35 min before the third hour of PGE2. PnTx-19 was applied 5 min before the third hour of PGE2. Each symbol represents the mean ± E.P.M. of the nociceptive threshold expressed in grams (g) for the N of 4 animals. * P <0.05 in relation to Veic1 + Veic2 + PGE2 group. . # P <0.05 relative to the PGE2 + Veic1 + PnTx-19 (4 nmol) group.

[021] Figura 7 - Efeito sobre o limiar nociceptivo causado pelo peptídeo sintético Pntx-19 frente ao antagonismo de receptores δ-opioides: o Naltrindole (antagonista específico de receptores δ-opioides) foi capaz de reverter parcialmente o efeito antinociceptivo do peptídeo. Grupo controle recebeu 2 μg de PGE2. Veicl: solução salina (0,9% m/v de NaCl) aplicada 35min antes da terceira hora da PGE2. Veic2: solução salina aplicada 5 min antes da terceira hora da PGE2. Naltrindole foi aplicado 35 min antes da terceira hora da PGE2.PnTx-19 foi aplicado 5 min antes da terceira hora da PGE2. Cada símbolo representa a média ± E.P.M. da medida do limiar nociceptivo expresso em gramas, referente ao N de 4 animais. * P< 0,05 em relação ao grupo Veic1+Veic2+PGE2. # P< 0,05 em relação ao grupo PGE2+Veic1+PnTx-19 (4 nmol).[021] Figure 7 - Effect on nociceptive threshold caused by synthetic peptide Pntx-19 against δ-opioid receptor antagonism: Naltrindole (δ-opioid receptor specific antagonist) was able to partially reverse the antinociceptive effect of the peptide. Control group received 2 μg of PGE2. Veicl: saline (0.9% w / v NaCl) applied 35min before the third hour of PGE2. Veic2: saline applied 5 min before the third hour of PGE2. Naltrindole was applied 35 min before the third hour of PGE2. PnTx-19 was applied 5 min before the third hour of PGE2. Each symbol represents the mean ± E.P.M. of the nociceptive threshold expressed in grams for the N of 4 animals. * P <0.05 in relation to Veic1 + Veic2 + PGE2 group. # P <0.05 relative to the PGE2 + Veic1 + PnTx-19 (4 nmol) group.

[022] Figura 8 - Efeito sobre o limiar nociceptivo causado pelo peptídeo sintético Pntx-19 frente ao antagonismo de receptores κ-opioides: o NOR BNI (antagonista específico de receptores κ-opioides) não foi capaz de reverter o efeito antinociceptivo do peptídeo. Grupo controle recebeu 2 μg de PGE2. Veic1: solução salina (0,9% m/v de NaCl) aplicada 35 min antes da terceira hora da PGE2. Veic2: solução salina (0,9% m/v de NaCl) aplicada 5 min antes da terceira hora da PGE2. NOR BNI foi aplicado 35 min antes da terceira hora da PGE2.PnTx-19 foi aplicado 5 min antes da terceira hora da PGE2. Cada símbolo representa a média ± E.P.M. da medida do limiar nociceptivo expresso em gramas(g), referente ao N de 4 animais. * P< 0,05 em relação ao grupo Veic1+Veic2 + PGE2.[022] Figure 8 - Effect on nociceptive threshold caused by synthetic peptide Pntx-19 against κ-opioid receptor antagonism: NOR BNI (κ-opioid receptor-specific antagonist) was not able to reverse the antinociceptive effect of the peptide. Control group received 2 μg of PGE2. Veic1: saline (0.9% w / v NaCl) applied 35 min before the third hour of PGE2. Veic2: saline (0.9% w / v NaCl) applied 5 min before the third hour of PGE2. NOR BNI was applied 35 min before the third hour of PGE2. PnTx-19 was applied 5 min before the third hour of PGE2. Each symbol represents the mean ± E.P.M. of the nociceptive threshold expressed in grams (g) for the N of 4 animals. * P <0.05 in relation to Veic1 + Veic2 + PGE2 group.

[023] Figura 9- Efeito sobre o limiar nociceptivo causado pelo peptídeo sintético Pntx-19 frente ao antagonismo de receptores canabinóidesCB1 : o AM251 (antagonista específico de receptores canabinóides CB1) foi capaz de reverter parcialmente o efeito antinociceptivo do peptídeo. Grupo controle recebeu 2 μg de PGE2. Veicl: solução salina (0,9% m/v de NaCl) aplicada 15min antes da terceira hora da PGE2. Veic2: solução salina aplicada 5min antes da terceira hora da PGE2. AM251 foi aplicado 15 min antes da terceira hora da PGE2.PnTx-19 foi aplicado 5 min antes da terceira hora da PGE2. Cada símbolo representa a média ± E.P.M. da medida do limiar nociceptivo expresso em gramas(g), referente ao N de 4 animais. * P< 0,05 em relação ao grupo Veic1+Veic2 + PGE2 .# P< 0,05 em relação ao grupo PGE2+Veic1+PnTx-19 (4 nmol).[023] Figure 9- Effect on nociceptive threshold caused by synthetic peptide Pntx-19 against cannabinoid receptor antagonismCB1: AM251 (cannabinoid receptor specific antagonist CB1) was able to partially reverse the antinociceptive effect of the peptide. Control group received 2 μg of PGE2. Veicl: saline (0.9% w / v NaCl) applied 15min before the third hour of PGE2. Veic2: saline applied 5min before the third hour of PGE2. AM251 was applied 15 min before the third hour of PGE2. PnTx-19 was applied 5 min before the third hour of PGE2. Each symbol represents the mean ± E.P.M. of the nociceptive threshold expressed in grams (g) for the N of 4 animals. * P <0.05 relative to the Veic1 + Veic2 + PGE2 group. # P <0.05 relative to the PGE2 + Veic1 + PnTx-19 group (4 nmol).

[024] Figura 10- Efeito sobre o limiar nociceptivo causado pelo peptídeo sintético Pntx-19 frente ao antagonismo de receptores canabinóidesCB2: o AM630 (antagonista específico de receptores canabinóides CB2 ) não foi capaz de reverter o efeito antinociceptivo do peptídeo. Grupo controle recebeu 2 μg de PGE2. Veicl: solução salina (0,9% m/v de NaCl) aplicada 15 min antes da terceira hora da PGE2. Veic2: solução salina aplicada 5min antes da terceira hora da PGE2. AM630 foi aplicado 15 min antes da terceira hora da PGE2.PnTx-19 foi aplicado 5 min antes da terceira hora da PGE2. Cada símbolo representa a média ± E.P.M. da medida do limiar nociceptivo expresso em gramas(g), referente ao N de 4 animais. * P< 0,05 em relação ao grupo Veic1+Veic2 + PGE2 .[024] Figure 10- Effect on nociceptive threshold caused by synthetic peptide Pntx-19 against CB2 cannabinoid receptor antagonism: AM630 (CB2 specific cannabinoid receptor antagonist) was not able to reverse the antinociceptive effect of the peptide. Control group received 2 μg of PGE2. Veicl: saline (0.9% w / v NaCl) applied 15 min before the third hour of PGE2. Veic2: saline applied 5min before the third hour of PGE2. AM630 was applied 15 min before the third hour of PGE2. PnTx-19 was applied 5 min before the third hour of PGE2. Each symbol represents the mean ± E.P.M. of the nociceptive threshold expressed in grams (g) for the N of 4 animals. * P <0.05 in relation to Veic1 + Veic2 + PGE2 group.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA TECNOLOGIADETAILED DESCRIPTION OF TECHNOLOGY

[025] A presente invenção refere-se ao uso do peptídeo PnTx-19(SEQ ID N° 1), derivado de toxina da aranha Phoneutrianegriventer, na preparação de medicamentos analgésicos.The present invention relates to the use of peptide PnTx-19 (SEQ ID NO: 1) derived from Phoneutrianegriventer spider toxin in the preparation of analgesic medicaments.

[026] Estes medicamentos compreendendo o peptídioPnTx-19 podem ser apresentados nasformas: sólida, como comprimidos, drágeas, cápsulas e supositório; líquida, como soluções, suspensões, xaropes, bem com aerossóis, pastas, cremes, ungüentos e loções para aplicação local ou com dispositivos transdérmicos, e ainda na forma líquida injetável. Os medicamentos compreendendo o peptídioPnTx-19 podem ser usados individualmente ou em combinação com outros analgésicos, podendo ser administrado pelas vias: oral, retal, intramuscular, subcutânea, intravenosa. [027] A ação antinociceptiva do PnTx-19 foi demonstrada aqui através de ensaios algesimétricos após a administração deste peptídeo em modelos murinos.These drugs comprising PnTx-19 peptide may be presented in the following forms: solid, such as tablets, dragees, capsules and suppository; as solutions, suspensions, syrups, as well as aerosols, pastes, creams, ointments and lotions for local application or with transdermal devices, and in injectable liquid form. Medicaments comprising PnTx-19 peptide may be used individually or in combination with other analgesics and may be administered by the oral, rectal, intramuscular, subcutaneous, intravenous routes. The antinociceptive action of PnTx-19 has been demonstrated here by algesimetric assays following administration of this peptide in murine models.

[028] Osensaiosalgesimétricos aplicados foram o teste de estimulação térmica “TailFlick” e o testede “Randall e Selitto” (RANDALL, L.O.; SELITTO, J. J. A method for measurementofanalgesicactivityoninflamedtissues.[028] The applied algebraic assays were the TailFlick thermal stimulation test and the Randall and Selitto test (RANDALL, L.O; SELITTO, J.J. A method for measurementofanalgesicactivityoninflamedtissues.

ArchIntPharmacodynTher, Ghent v.111, p. 409-419, Sep 1957). O teste“Tail Flick” é o teste de D'amour & Smith modificado (D'AMOUR F.E.; SMITH D.L.A, A method for determining loss of pain sensation. J PharmacolExpTher. Baltimore, v. 72, p.74-79, May 1941), queconsiste na determinação do tempo de latência para que o animal retire a cauda após um estímulo térmico nociceptivo. Este teste foi utilizado para o estudo da antinocicepção central, através da administração do peptídeo sintético PnTx-19 pelas vias intracerebroventricular e intratecal. O teste de “Randall e Selitto”(1957) consiste na determinação do tempo de latência para que o animal retire a pata após o estímulo mecânico nociceptivo. Este teste foi utilizado para o estudo da antinocicepção periférica através da administração do peptídeo PnTx-19 pela via intraplantar.ArchIntPharmacodynTher, Ghent v.111, p. 409-419, Sep 1957). The Tail Flick test is the modified D'amour & Smith test (D'AMOR FE; SMITH DLA, A method for determining loss of pain sensation. J PharmacolExpTher. Baltimore, v. 72, p.74-79, May 1941), which consists in determining the latency time for the animal to remove its tail after a nociceptive thermal stimulus. This test was used to study central antinociception by administering the synthetic peptide PnTx-19 by intracerebroventricular and intrathecal routes. The Randall and Selitto (1957) test consists of determining the latency time for the animal to remove its paw after nociceptive mechanical stimulation. This test was used for the study of peripheral antinociception through the administration of the PnTx-19 peptide intraplantar.

[029] A presente invenção pode ser melhor entendida pelos seguintes exemplos, que não são limitantes da tecnologia: Exemplo 1 - Obtenção do peptídeo sintético PnTx-19 [030] O peptídeoPnTx-19 (SEQ ID N°1) foisintetizado utilizando-se a técnica Fmoc/t-butila de síntese em suporte sólido (MERRIFIELD, R.B. Solidphasesynthesis. Science 232, 341-347; 1986; CHAN, W. C., WHITE, P. D. Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach. Publicadopor Oxford University Press, 2000). O peptídeo possui 19 resíduos de aminoácidos (Ac - GERRQYFWIAWYKLANSKK - NH2), é acetilado no N terminal e amidado no C terminal, e é derivado da toxina PnTx2-6 da aranha Phoneutrianegriventer. O peptídeo foi sintetizado inicialmente na Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte e depois maiores quantidades foram encomendadas de uma empresa (China Peptides). O peptídeo utilizado neste trabalho foi aquele obtido pela empresa, mas o controle de qualidade foi atestado por espectrometria de massas no Laboratório de Venenos e Toxinas Animais do Instituto de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG.[029] The present invention can be better understood by the following non-technology limiting examples: Example 1 - Obtaining Synthetic PnTx-19 Peptide [030] The PnTx-19 peptide (SEQ ID NO: 1) has been synthesized using Solid Support Synthesis Fmoc / t-Butyl Technique (MERRIFIELD, RB Solidphasesynthesis. Science 232, 341-347; 1986; CHAN, WC, WHITE, PD Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach. Published by Oxford University Press, 2000) . The peptide has 19 amino acid residues (Ac - GERRQYFWIAWYKLANSKK - NH2), is acetylated at the N terminus and amidated at the C terminus, and is derived from the Phoneutrianegriventer spider toxin PnTx2-6. The peptide was initially synthesized at the Federal University of Minas Gerais, Belo Horizonte and later larger quantities were ordered from a company (China Peptides). The peptide used in this work was the one obtained by the company, but the quality control was attested by mass spectrometry at the Animal Poison and Toxins Laboratory of the Institute of Biological Sciences of the Federal University of Minas Gerais - UFMG.

Exemplo 2 - Animais para experimentação: [031] Foram utilizados ratos machos da espécie RattusnorvegicusdalinhagemWistar, pesando entre 170 e 230 g; e camundongos machos da espécie Mus musculus, da linhagem Swiss, pesando entre25 e 30g. Ambos foram fornecidos pelo Centro de Bioterismo - CEBIO do Instituto de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte. Todos os animais foram mantidos em gaiolas de polipropileno com dimensões de 17 x 34 x 40 cm, com alimentação padrão e água potável ad libitum, e ciclo de 12 h de luz e 12 h de escuro.Example 2 - Animals for Experimentation: Male RattusnorvegicusdalinhagemWistar rats weighing between 170 and 230 g were used; and male Mus musculus mice, Swiss strain, weighing between 25 and 30g. Both were provided by the Center of Bioterismo - CEBIO of the Institute of Biological Sciences of the Federal University of Minas Gerais, Belo Horizonte. All animals were kept in 17 x 34 x 40 cm polypropylene cages, with standard feeding and ad libitum drinking water, and a 12 h light and 12 h dark cycle.

Exemplo 3 - Administração do peptídeoPnTx-19 e de drogas antagonistas de receptores opioides e canabinoides [032] Para a administração do peptídeo via intracerebroventricular (ICV) foram utilizados somente camundongos. Os camundongos foram tricotomizados na região que recebeu a injeção ICV, sendo posteriormente colocados em um contensor. Os animais foram manualmente imobilizados na região da cabeça e, em seguida, receberam a administração do peptídeo. A profundidade de 2mm foi controlada com uma trava colocada na agulha de uma microsseringa Hamilton® de 5,0 μΙ. O volume administrado no interior dos ventrículos foi de 2,0 μΙ, sendo o peptídeo veiculado em solução salina fisiológica (0,9% m/v de NaCl) e injetado nas quantidades de 0,4 nmol, 0,2 nmol e 0,1 nmol por camundongo. A escolha de camundongos para esta via de administração evita uma intervenção cirúrgica prévia para viabilizar o acesso aos ventrículos cerebrais, o que seria necessário caso se utilizasse ratos como modelo experimental.Example 3 - Administration of PnTx-19 Peptide and Opioid and Cannabinoid Receptor Antagonist Drugs [032] For the administration of the peptide via intracerebroventricular (ICV) mice were used only. The mice were trichotomized in the region that received the ICV injection and were then placed in a container. The animals were manually immobilized on the head region and then received the peptide administration. The 2mm depth was controlled with a lock placed on the needle of a 5.0 μΙ Hamilton® microsyringe. The volume administered within the ventricles was 2.0 μΙ, with the peptide carried in physiological saline solution (0.9% w / v NaCl) and injected in 0.4 nmol, 0.2 nmol and 0, 1 nmol per mouse. The choice of mice for this route of administration avoids previous surgical intervention to enable access to the cerebral ventricles, which would be necessary if rats were used as an experimental model.

[033] Para a administração intratecal foram utilizados ratos, estes possuem espaços intervertebrais maiores e de mais fácil acesso do que os de camundongos, diminuindo a chance de qualquer desconforto para o animal posteriormente ao procedimento. Previamente à administração dos fármacos, os ratos foramtricotomizados na região dorso-lombar, facilitando a palpação dos espaços intervertebrais. Após a sedação dos animais por inalação de isoflurano 3,5% (BioChimico®, Brasil), a injeção foi realizada utilizando-se agulha de 13 x 0,3 mm acoplada à seringa hipodérmica (BD®, Brasil)diretamente no espaço subaracnóide entre a quinta e a sexta vértebras lombares. O volume administrado foi de 20 μΙ, o peptídeo veiculado em solução salina fisiológicae injetado nas quantidades de 8,0 nmol, 10,0 nmol, 10,8 nmol, 12,0 nmol e 16,0 nmol.[033] For intrathecal administration rats were used, they have larger intervertebral spaces and easier access than mice, reducing the chance of any discomfort for the animal after the procedure. Prior to drug administration, rats were trichotomized in the dorsolumbar region, facilitating palpation of intervertebral spaces. After sedation of animals by inhalation of 3.5% isoflurane (BioChimico®, Brazil), injection was performed using a 13 x 0.3 mm needle attached to the hypodermic syringe (BD®, Brazil) directly into the subarachnoid space between the fifth and sixth lumbar vertebrae. The administered volume was 20 μΙ, the peptide delivered in physiological saline and injected in the amounts of 8.0 nmol, 10.0 nmol, 10.8 nmol, 12.0 nmol and 16.0 nmol.

[034] Para a administração via intraplantar (subcutânea) foram utilizados ratos. Foi primeiramente administrado o agente hiperalgésico prostaglandina E2 (PGE2) (ENZO, Life Sciences, USA) na superfície plantar da pata posterior dos ratos. A PGE2 foi mantida a -5 °C, em solução estoque com concentração de^g/μΐ em etanol. Anteriormente ao experimento, a PGE2 era diluída em solução salina fisiológica e mantida em gelo até o momento das injeções de 2μg/pata em volume de 100 μΙ. O pico de ação da PGE2 nesta dose ocorre na terceira hora após a administração da mesma, não variando muito seu efeito hiperalgésico até a quarta hora (MAGALHÃES, B.L.E. Efeito antinociceptivo da toxina PnTx4(6-1) isolada do veneno da aranha Phoneutrianigriventer. Dissertação (Mestrado em Bioquímica e Imunologia)- Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte, 2013). Dessa forma, para fazer a curva dose resposta para o peptídeo, o mesmo foi aplicado via intraplantar no volume de 50μ1 a partir da terceira hora após a administração da PGE2. O peptídeo Pntx-19 foi veiculado em solução salina fisiológica (0,9% m/v de NaCl) e administrado nas quantidades de 2 nmol, 4 nmol e 8 nmol a partir da terceira hora. Uma vez estabelecido o pico de ação do peptídeo e sua melhor dose, este passou a ser administrado via intraplantar de modo que o pico de sua ação coincidisse com o pico de ação da PGE2.For intraplantar (subcutaneous) administration rats were used. Prostaglandin E2 (PGE2) hyperalgesic agent (ENZO, Life Sciences, USA) was first administered to the plantar surface of the rat hind paw. PGE2 was kept at -5 ° C in a stock solution with concentration of ^ g / μΐ in ethanol. Prior to the experiment, PGE2 was diluted in physiological saline and kept on ice until injections of 2μg / paw in a volume of 100μΙ. The peak action of PGE2 at this dose occurs in the third hour after its administration, not varying its hyperalgesic effect until the fourth hour (MAGALHÃES, BLE Antinociceptive effect of PnTx4 (6-1) toxin isolated from the Phoneutrianigriventer spider venom. (Master in Biochemistry and Immunology) - Institute of Biological Sciences, Federal University of Minas Gerais, Belo Horizonte, 2013). Thus, to make the dose response curve for the peptide, it was applied via intraplantar at a volume of 50μ1 from the third hour after PGE2 administration. Pntx-19 peptide was delivered in physiological saline (0.9% w / v NaCl) and administered in the amounts of 2 nmol, 4 nmol and 8 nmol from the third hour. Once the peptide peak of action and its best dose were established, it was administered via intraplantar so that the peak of its action coincided with the peak of action of PGE2.

[035] Nos experimentos em que foram utilizadas drogas antagonistas de receptores opioides e canabinoides, as mesmas foram veiculadas em solução salina fisiológica e administradas em volumes de 50μ^ de modo que o seu pico de ação coincidisse com o pico de ação da PGE2 e do peptídeo. A naloxona (50 μg, 100 μg e 200 μg) (Sigma) foi administrada 30 minutos antes da terceira hora da PGE2, já o clocinnamox (40 μg) (Tocris, USA), naltrindole (60 μg) (Tocris, USA) e nor-binaltorphimine (100μg) (Sigma), foram administrados 35 min antes da terceira hora da PGE2. O AM251 (1-(2,4-diclorofenil)-5-(iodofenil)-4-metil-N-(1-piperidil)pirazol-3- carboxamida) (Tocrisolve, EUA) (80μg e 160μg) e AM630 ([6-iodo-2-metil-1-[2-(4-morfolinil)etil]-1H-indol-3-il](4etoxifenil) metanona) (Tocrisolve, EUA) (100μg) foram administrados 15 minutos antes da terceira hora da PGE2. Em todos os experimentos foi utilizada a pata posterior direita dos animais, com exceção do protocolo utilizado para excluir a possibilidade de um efeito não local (sistêmico), no qual foram utilizadas ambas as patas.[035] In experiments using opioid and cannabinoid receptor antagonist drugs, they were delivered in physiological saline and administered in volumes of 50μ ^ so that their peak action coincided with the peak action of PGE2 and peptide. Naloxone (50 μg, 100 μg and 200 μg) (Sigma) was administered 30 minutes before the third hour of PGE2, while clocinnamox (40 μg) (Tocris, USA), naltrindole (60 μg) (Tocris, USA) and nor-binaltorphimine (100μg) (Sigma) were administered 35 min before the third hour of PGE2. AM251 (1- (2,4-dichlorophenyl) -5- (iodophenyl) -4-methyl-N- (1-piperidyl) pyrazol-3-carboxamide) (Tocrisolve, USA) (80μg and 160μg) and AM630 ([ 6-Iodo-2-methyl-1- [2- (4-morpholinyl) ethyl] -1H-indol-3-yl] (4ethoxyphenyl) methanone) (Tocrisolve, USA) (100μg) was administered 15 minutes before the third hour from PGE2. In all experiments, the right hind paw of the animals was used, except for the protocol used to exclude the possibility of a non-local (systemic) effect, in which both paws were used.

Exemplo 4 -Testealgesimétrico “TailFlick” [036] A cauda do animal foi posicionada junto a uma resistência helicoidal de níquel-cromo, de modo que um ponto da superfície dorsal da cauda, marcado previamente e distante 1,0 cm da extremidade da mesma, entrasse em contato com o fio da resistência elétrica. O aparelho, ao ser ligado, faz passar uma corrente pela resistência, de forma a aquecê-la. Simultaneamente, um cronômetro acoplado ao sistema é acionado. Quando o calor se torna suficiente para produzir nocicepção, o animal apresenta movimento reflexo de retirada da cauda. Nesse momento, o aparelho é desligado manualmente interrompendo seu aquecimento e o funcionamento do cronômetro. Esse procedimento tem o objetivo de determinar o tempo decorrido desde o início da estimulação até o aparecimento da resposta de reflexo de retirada da cauda (latência de resposta, medida em segundos). Se em nove segundos (tempo de corte) o animal não retirar a cauda, o aparelho é desligado automaticamente para evitar lesões teciduais.É importante ressaltar que o animal é ambientalizado ao aparelho no dia que antecede o teste, isto consiste em submeter o animal à mesma situação que será vivenciada no dia do experimento.Example 4 - TailFlick Testing [036] The tail of the animal was positioned next to a helical nickel-chromium resistor, so that a point of the dorsal surface of the tail, previously marked 1.0 cm from its end, contact the electrical resistance wire. When the device is switched on, a current is passed through the resistor in order to heat it. Simultaneously, a timer coupled to the system is triggered. When heat becomes sufficient to produce nociception, the animal exhibits reflex movement of tail removal. At this time, the device is switched off manually, interrupting its heating and the timer operation. This procedure aims to determine the time elapsed from the beginning of the stimulation until the appearance of the tail pull reflex response (response latency, measured in seconds). If within nine seconds (cut-off time) the animal does not remove the tail, the device is automatically turned off to avoid tissue damage. It is important to note that the animal is acclimatized to the device on the day before the test, this is to subject the animal to same situation that will be experienced on the day of the experiment.

[037] Este teste foi utilizado para o estudo da antinocicepção central, através da administração do peptídeo sintético PnTx-19 pelas vias intracerebroventricular (Figura 1) e intratecal (Figura 2).[037] This test was used to study central antinociception by administering the synthetic peptide PnTx-19 by intracerebroventricular (Figure 1) and intrathecal (Figure 2) routes.

[038] Na figura 1é possível observar que na dose de 0,4 nmoldopeptídeo,o seu pico de ação foi em 5 minutos após a administração do mesmo, e que ele foi capaz de quase triplicar o limiar nociceptivo dos animais. Na dose de 0,2 nmol o peptídeo ainda apresentou ação analgésica, porém em amplitude menor. Na dose de 0,1 nmol o peptídeo não apresentou nenhuma atividade que implicasse na via nociceptiva central, permanecendo igual ao controle.In Figure 1 it can be seen that at the dose of 0.4 nmoldopeptide, its peak action was within 5 minutes after administration of it, and that it was able to nearly triple the nociceptive threshold of the animals. At a dose of 0.2 nmol, the peptide still presented analgesic action, but in smaller amplitude. At a dose of 0.1 nmol, the peptide showed no activity that implied the central nociceptive pathway, remaining the same as the control.

[039] Na figura 2 observa-se que as doses de 8,0 nmol e 10,0 nmol não apresentaram nenhum efeito sobre o limiar nociceptivo dos animais, já as doses de 10,8 nmol, 12,0 nmol e 16,0 nmol fizeram com que os animais perdessem a mobilidade da cauda e dos membros posteriores, porém os mesmos recobraram a capacidade de movimento após algumas horas. Não foi possível estabelecer uma dose que apresentasse atividade antinociceptiva pelo método do “TailFlick”, entretanto há indício que o peptídeo também possui uma ação anestésica, mas são necessários mais experimentos para comprovar esta atividade.In Figure 2 it is observed that the doses of 8.0 nmol and 10.0 nmol had no effect on the nociceptive threshold of the animals, whereas the doses of 10.8 nmol, 12.0 nmol and 16.0 nmol caused the animals to lose their tail and hind limb mobility, but they recovered their ability to move after a few hours. It was not possible to establish a dose that showed antinociceptive activity by the TailFlick method, however there is evidence that the peptide also has an anesthetic action, but more experiments are needed to prove this activity.

Exemplo 5 - Teste algesimétrico “Randall e Selitto” [040] Para a aplicação do método, o animal é mantido cuidadosamente em posição horizontal sobre a bancada por uma das mãos do experimentador, enquanto a pata em teste é apresentada, por sua superfície plantar, à parte compressora do aparelho. Esta consiste de duas superfícies, sendo uma plana sobre a qual se apoia a pata do animal, e outra cônica com uma área de 1,75 mm2 na extremidade. A extremidade cônica é a responsável por aplicar a pressão na superfície plantar do rato, sendo que a intensidade dessa pressão aumenta a uma taxa constante de 32 g/s mediante o acionamento de um pedal pelo experimentador. Ao observar a resposta nociceptiva do animal, visualizada pelo movimento de retirada da pata, o experimentador desaciona o pedal. Interrompe-se, assim, o aumento da pressão imposta à pata, sendo que o último valor registrado correspondente ao limiar nociceptivo. Este fica indicado na escala do aparelho e é expresso em gramas. Este teste foi utilizado para o estudo da antinocicepção periférica através da administração do peptídeo PnTx-19 pela via intraplantar.Example 5 - “Randall and Selitto” Alesimetric Test [040] For the application of the method, the animal is carefully kept horizontally on the bench by one of the experimenter's hands, while the test foot is presented by its plantar surface, to the compressing part of the apparatus. It consists of two surfaces, one flat on which the animal's paw rests, and another conical with an area of 1.75 mm2 at the end. The tapered end is responsible for applying pressure to the plantar surface of the rat, and the intensity of this pressure increases at a constant rate of 32 g / s by the pedal being operated by the experimenter. By observing the animal's nociceptive response, visualized by the paw withdrawal movement, the experimenter disengages the pedal. This interrupts the increase in the pressure imposed on the paw, with the last recorded value corresponding to the nociceptive threshold. This is indicated on the scale of the appliance and is expressed in grams. This test was used for the study of peripheral antinociception through the administration of the PnTx-19 peptide intraplantar.

[041] Após determinada a dose do peptídeo a ser utilizada e o tempo de seu pico de ação, os experimentos posteriores realizados utilizando o método de Randall e Selitto para aferir o limiar nociceptivo foram realizados apenas na terceira hora após a administração de PGE2. Esse tempo também correspondia simultaneamente ao pico de ação do peptídeo e dos antagonistas testados. Posteriormente era calculada a variação do limiar nociceptivo dos animais, que corresponde ao limiar basal dos mesmos (medida antes da administração de qualquer fármaco) subtraído do limiar resultante da medida realizada no momento do pico de ação de todos os fármacos administrados.Na figura 3 é possível observar que o peptídeo aumentou o limiar nociceptivo dos animais quando comparados ao controle (teste algesimétricoRandall e Selitto) nas três doses testadas:2nmol,4nmol e 8nmol.O pico de ação do Pntx-19 foi em 5 minutos após a administração do mesmo nas doses de 2nmol e 4nmol, sendo que sua atividade antinociceptiva desapareceu completamente após 10 min, se igualando ao controle e permanecendo constante até 30 min após sua administração. Na dose de 8nmol, o limiar dos animais quase voltou completamente ao valor basal, e apresentou uma ação semelhante de quando foi administrada a dose de 4nmol. Entretanto, na dose de 8nmol é possível observar que o peptídeo ainda é capaz de reverter parcialmente o efeito da PGE2após decorridos 10 min de sua administração, o que não ocorre na dose de 4 nmol (Figura 3).Como não houve diferença significativa no tempo de 5 minutos entre as doses de 4nmol e 8nmol, todos os testes posteriores com o objetivo de elucidar o mecanismo de ação do peptídeo foram realizados utilizando-se a dose de 4 nmol, aplicada 5 minutos antes da terceira hora da PGE2. No teste de exclusão do efeito sistêmico causado pela dose de 4 nmol (dose selecionada para todos os testes posteriores), foi possível constatar que nesta dose o peptídeo tem ação antinociceptiva exclusivamente local (Figura 4).[041] After determining the dose of the peptide to be used and the time of its peak action, subsequent experiments performed using the Randall and Selitto method to measure the nociceptive threshold were performed only within the third hour after PGE2 administration. This time also corresponded simultaneously to the peak action of the peptide and the antagonists tested. Subsequently, the variation of the nociceptive threshold of the animals, which corresponds to their basal threshold (measured before administration of any drug), was subtracted from the threshold resulting from the measurement taken at the peak of action of all administered drugs. It was possible to observe that the peptide increased the nociceptive threshold of animals when compared to the control (Randall and Selitto algesimetric test) in the three doses tested: 2nmol, 4nmol and 8nmol. The peak action of Pntx-19 was 5 minutes after its administration in doses of 2nmol and 4nmol, and their antinociceptive activity disappeared completely after 10 min, equaling the control and remaining constant until 30 min after its administration. At the 8nmol dose, the animals' threshold almost completely returned to baseline, and showed a similar action as when the 4nmol dose was administered. However, at the 8nmol dose it can be seen that the peptide is still able to partially reverse the effect of PGE2 after 10 min of its administration, which does not occur at the 4 nmol dose (Figure 3). Since there was no significant difference in time After 5 minutes between the 4nmol and 8nmol doses, all subsequent tests aiming at elucidating the mechanism of action of the peptide were performed using the 4 nmol dose, applied 5 minutes before the third hour of PGE2. In the systemic effect exclusion test caused by the 4 nmol dose (dose selected for all subsequent tests), it was found that at this dose the peptide has exclusively local antinociceptive action (Figure 4).

[042] Com o intuito de avaliar se o sistema opioidérgico está associado à ação antinociceptiva do peptídeo, foi administrada naloxona, um antagonista inespecífico de receptores opioides, em diferentes doses (Figura 5). A naloxona foi capaz de reverter somente parcialmente o efeito antinociceptivo do peptídeo em todas as doses testadas. Desta forma é possível concluir que a ação antinociceptiva do peptídeo é devida a participação de opioides endógenos, mas que esse não é o único mecanismo envolvido, já que o antagonismo foi apenas parcial.Para a análise de quais os receptores opioides estariam envolvidos na ação antinociceptiva do peptídeo e tornar possível a inferência de quais opioides endógenos estariam envolvidos na via, foramadministrados antagonistas específicos para cada tipo de receptor opioide. Somente os receptores μ- e δ-opioides estão envolvidos na via (Figura 6 e 7), não houve nenhum antagonismo do efeito antinociceptivo do peptídeo frente a administração de antagonistas κ-opioides (Figura 8). Os opioides endógenos que se ligam aos receptores μ- e δ-opioides são as β-endorfinas e, principalmente, as encefalinas. É provável que o peptídeo leve à liberação destes opioides endógenos ao invés de se ligar diretamente aos seus receptores, uma vez que a utilização dos antagonistas foi capaz de inibir o efeito analgésico do peptídeo apenas parcialmente. Mas não se pode descartar ainda uma possível interação com estes receptores.[042] In order to assess whether the opioid system is associated with the antinociceptive action of the peptide, naloxone, a nonspecific opioid receptor antagonist, was administered at different doses (Figure 5). Naloxone was only partially able to reverse the antinociceptive effect of the peptide at all doses tested. Thus it can be concluded that the antinociceptive action of the peptide is due to the participation of endogenous opioids, but this is not the only mechanism involved, since antagonism was only partial. For the analysis of which opioid receptors would be involved in antinociceptive action of the peptide and make it possible to infer which endogenous opioids would be involved in the pathway, specific antagonists were administered for each type of opioid receptor. Only μ- and δ-opioid receptors are involved in the pathway (Figures 6 and 7), there was no antagonism of the peptide antinociceptive effect against the administration of κ-opioid antagonists (Figure 8). Endogenous opioids that bind to the μ- and δ-opioid receptors are β-endorphins and, especially, encephalins. The peptide is likely to lead to the release of these endogenous opioids rather than to bind directly to their receptors, since the use of antagonists was able to inhibit the analgesic effect of the peptide only partially. But one cannot rule out yet a possible interaction with these receptors.

[043] Quando foram testados antagonistas específicos de receptores canabinoides CB1 e CB2, somente o antagonista de CB1 foi capaz de reverter parcialmente a ação antinociceptiva do peptídeo (Figuras 9 e 10).[043] When specific cannabinoid receptor antagonists CB1 and CB2 were tested, only the CB1 antagonist was able to partially reverse the antinociceptive action of the peptide (Figures 9 and 10).

[044] A açãoantinociceptiva do peptídeo foi devida parcialmente à ativação de receptores μ- e δ-opioides e canabinóide CB1. A ativação tanto da via opioide quanto da via canabinoide pelo peptídeo PnTx-19mostrou queas duas viassãocomplementares, sendo responsável pela atividade antinociceptiva total do peptídeo. A ativação concomitante destas duas vias já é bastante discutida na literatura, tanto via sistema nervoso central (PACHECOef. al. Central antinociception induced by μ-opioid receptor agonist, butnotK- orô-, is mediated by canabinoid CB1 receptor. BrJ.Pharmacol, London, v. 158, p. 225-231, Sep 2009), quanto via sistema nervoso periférico (REIS ef. al. Opioid receptor and NO/cGMP pathway as a mechanism of peripheral antinociceptive action of the cannabinoid receptor agonist anandamide. Life Sci, Oxford, v. 85, p. 351-356, Aug 2009; PACHECO ef al. The μ-opioid receptor agonist morphine, but not agonists at delta- or kappa opioid receptors, induces peripheral antinociception mediated by cannabinoid receptors. Br J Pharmacol , London, v. 154, p. 1143-1149, May 2008). É provável que o peptídeo ative estas duas vias, mas não se ligue diretamente aos sítios receptores dosopioides oudoscanabinóides, uma vez que o antagonismo nas duas vias foi apenas parcial, sendo necessária uma resposta complementar entre os opioides e os canabinoides endógenos para que o peptídeo tenha sua ação analgésica máxima desencadeada. Este mecanismo deverá ser melhor estudado para verificar uma possível interação do peptídeo com diferentes sitíos nestes receptores.[044] The antinociceptive action of the peptide was partially due to the activation of μ- and δ-opioid and cannabinoid CB1 receptors. Activation of both the opioid and cannabinoid pathways by the PnTx-19 peptide showed that two complementary pathways were responsible for the total antinociceptive activity of the peptide. The concomitant activation of these two pathways is already widely discussed in the literature, both via the central nervous system (PACHECOef. Al. Central antinociception induced by μ-opioid receptor agonist, butnotK-oró-, is mediated by cannabinoid CB1 receptor. BrJ.Pharmacol, London , v. 158, pp. 225-231, Sep 2009), regarding via peripheral nervous system (REIS et al. Opioid receptor and NO / cGMP pathway as a mechanism of peripheral antinociceptive action of the cannabinoid receptor agonist anandamide. Life Sci, Oxford, v. 85, pp 351-356, Aug 2009; PACHECO et al.The μ-opioid receptor agonist morphine, but not agonists at delta- or kappa opioid receptors, induces peripheral antinociception mediated by cannabinoid receptors. London, v. 154, pp. 1143-1149, May 2008). It is likely that the peptide activates these two pathways, but does not bind directly to the opioid or cannabinoid receptor sites, since antagonism in both pathways was only partial, and a complementary response between opioids and endogenous cannabinoids is required for the peptide to have its maximum analgesic action triggered. This mechanism should be further studied to verify a possible interaction of the peptide with different sites on these receptors.

Exemplo 6 - Análise estatística [045] Os resultados foram apresentados como a média ± EPM da intensidade de hiperalgesia e a análise de variância (ANOVA), seguida pelo teste de Bonferroni. Deste modo foi possível verificar a significância das diferenças entre as médias (comparações múltiplas), sendo consideradas significantes quando os valores de P fossem menores que 0,05. Para a construção dos gráficos e aplicação das análises estatísticas foi utilizado o programa Prisma. Fixando-se a confiabilidade do estudo em 90% e considerando-se um erro absoluto de 10,4 g, foi possível realizar o cálculo do N amostral que foi definido em quatro animais para cada grupo experimental.Example 6 - Statistical Analysis Results were presented as mean ± SEM of hyperalgesia intensity and analysis of variance (ANOVA) followed by Bonferroni test. Thus it was possible to verify the significance of the differences between the means (multiple comparisons), being considered significant when the P values were less than 0.05. For the construction of graphs and application of statistical analysis, the Prisma program was used. Assuming the study reliability to be 90% and considering an absolute error of 10.4 g, it was possible to calculate the sample N, which was defined in four animals for each experimental group.

REIVINDICAÇÕES

Claims

1. USE OF SYNTHETIC PEPTIDE PnTx-19, characterized by the preparation of analgesic drugs for the treatment of mild, moderate or severe pain.

Use of synthetic peptide PnTx-19 according to claim 1, characterized in that the peptide comprises the sequence GERRQYFWIAWYKLANSKK (SEQ ID NO: 1).

USE OF THE SYNTHETIC PEPTIDE PnTx-19 according to Claim 2, characterized in that it has modifications in the N-terminal (acetylation) and C-terminal (amidation) moieties.

USE OF SYNTHETIC PEPTIDE PnTx-19 according to claims 1 to 3, characterized in that the medicaments are in solid forms such as tablets, dragees, capsules and suppository; as solutions, suspensions, syrups, as well as aerosols, pastes, creams, ointments and lotions for local application or with transdermal devices. Or even in injectable liquid form.

USE OF SYNTHETIC PEPTIDE according to any one of claims 1 to 4, characterized in that it is used individually or in combination with other analgesics.

USE OF SYNTHETIC PEPTIDE PnTx-19 according to Claims 1 to 5, characterized in that it is administered by the oral, rectal, intramuscular, subcutaneous, intravenous routes.