BR102013002190A2

BR102013002190A2 - bergenin production process, bergenin obtained by extraction process

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Publication number: BR102013002190A2
Application number: BR102013002190A
Authority: BR
Inventors: Adam Macedo Martins; Danielle Rachel Silva Dos Santos; Luciana De Boer Pinheiro De Souza; Luciano Fernandes; Sandra Patricia Zanotto; Walber Souza Da Silva
Original assignee: Univ Do Estado Do Amazonas Uea
Priority date: 2013-01-29
Filing date: 2013-01-29
Publication date: 2016-05-31

Abstract

processo de obtenção da bergenina, produto bergenina obtido por processo de extração a presente invenção descreve novos e inventivos processos de extração e purificação de bergenina. especificamente, a presente invenção compreende o uso de cascas de e. uchi para submissão das mesmas a diferentes processos de extração e purificação de bergenina. o presente processo se situa nos campos da bioquímica e da prospecção de produtos naturaisbergenin extraction process, bergenin product obtained by extraction process The present invention describes novel and inventive bergenin extraction and purification processes. Specifically, the present invention comprises the use of peels of e.g. Uchi for submission to different extraction and purification processes of bergenin. the present process is in the fields of biochemistry and natural product prospecting

Description

Relatório Descritivo de Patente de Invenção Processo de Obtenção da bergenina, Produto Bergenina obtido por Processo de Extração Campo da Invenção [001] O presente processo descreve novos e inventivos métodos de extração e purificação da bergenina. Especificamente, o processo compreende o uso de cascas de Endopleura uchi (Huber) Cuatrecasas (Humiriaceae), realizando a extração e purificação da bergenina através de extratos aquosos juntamente com carvão ativado. O presente processo se situa nos campos da bioquímica e da prospecção de produtos naturais.Disclosure of Patent Application Invention Process of Bergenin, Bergenin Product Obtained by Extraction Process Field of the Invention This process describes novel and inventive methods of extraction and purification of bergenin. Specifically, the process comprises the use of Endopleura uchi (Huber) Cuatrecasas (Humiriaceae) barks, performing the extraction and purification of bergenin through aqueous extracts together with activated charcoal. The present process is in the fields of biochemistry and natural product prospecting.

Antecedentes da Invenção [002] A utilização de plantas com fins medicinais, para tratamento, cura e prevenção de doenças, é uma das mais antigas formas de prática medicinal da humanidade (JUNIOR et al., 2005). Desde a antiguidade o uso medicinal de vegetais já era incorporado às práticas cotidianas. Existem relatos do uso de plantas medicinais em civilizações antigas, como a egípcia (1600 a.C.) com o uso do coentro (Coriandrum sativum L.) e do funcho (Foeniculum vulgare Karst.) bem como o uso do óleo de rícino (Ricinus communis) e mirra (Commiphora myrrha Engl.) na Mesopotâmia. Apesar dos grandes avanços observados na medicina moderna nas últimas décadas, as plantas continuam sendo utilizadas e estima-se que, sendo que cerca de 25% a 30% de todas as drogas avaliadas como agentes terapêuticos são derivadas de produtos naturais (CALIXTO, 2005).Background of the Invention The use of medicinal plants for the treatment, cure and prevention of diseases is one of the oldest forms of medicinal practice of humanity (JUNIOR et al., 2005). From ancient times the medicinal use of vegetables was already incorporated into everyday practices. There are reports of the use of medicinal plants in ancient civilizations such as Egyptian (1600 BC) with the use of coriander (Coriandrum sativum L.) and fennel (Foeniculum vulgare Karst.) As well as the use of castor oil (Ricinus communis). and myrrh (Commiphora myrrha Engl.) in Mesopotamia. Despite the great advances observed in modern medicine in recent decades, plants continue to be used and it is estimated that around 25% to 30% of all drugs evaluated as therapeutic agents are derived from natural products (CALIXTO, 2005). .

[003] O Brasil é um ambiente propício para a realização de pesquisas em produtos naturais, e a Amazônia, detentora da mais rica biodiversidade de todo o mundo, faz com que os naturalistas possam estimar que nesta região possa existir um total superior a cinco milhões de espécies botânicas diferentes (MIRANDA, 2005).[003] Brazil is a conducive environment for research into natural products, and the Amazon, which has the richest biodiversity in the world, allows naturalists to estimate that there may be a total of over five million in this region. of different botanical species (MIRANDA, 2005).

[004] Apesar do nosso país apresentar reconhecida biodiversidade e do conhecimento tradicional indígena associado à utilização de produtos naturais, apenas uma fração diminuta de nossas plantas nativas foi devidamente estudada (ALMEIDA et ai., 2002), Um exemplo de planta medicinal utilizada por populações ribeirinhas e que possui seu potencial terapêutico já descrito na literatura é a Endopleura uchi (Huber) Cuatrecasas (Humiriaceae), popularmente conhecida como uchi amarelo, uma espécie originária da Amazônia brasileira, encontrada em estado silvestre em mata de terra firme, dispersa por toda a Bacia Amazônica (MAGALHÃES et al., 2007). Esta espécie pertence a uma pequena família de plantas que dão flores, chamada de Humiriaceae, que possui oito gêneros e aproximadamente 50 espécies (HERRERA et al., 2010). Estudos fitoquímicos efetuados com essa espécie descrevem a ocorrência das isocumarinas: bergenina e 8,10- dimetoxibergenina, dos triterpenóides pentacíclicos, ácido masílinico e o seu éster masilinato de metila, além de uma mistura de esteróides, β-sitosterol (75,5%) e estigmasterol (24,5%) e dos triterpenos pentacíclicos 3-oxo-friedelina e pseudotaraxasterol (MAGALHÃES et al., 2007; LAGOS, 2006). Na medicina popular, o chá da casca de E. uchi, que é rico em bergenina, é usado como anti-inflamatório, contra tumores e infecções uterinas, sendo vendido também como remédio para artrite, colesterol e diabete (SILVA, 2009; SHANLEY et al., 1998). Além da família Humiriaceae, existem relatos que a bergenina está presente em várias outras famílias de plantas, encontrando-se de forma abundante nas famílias Euphorbiaceae, Saxifragaceae e Myrsinaceae (RASTOGI et al., 2008). A bergenina (4-metoxi-2-[(1 S,2R,3S,4S,5R)-3,4,5,6-tetrahidro-3,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)-2H-piran-2-il]-a-resorcíclico ácido õ-lactona monohidratado) é um C-glicosídeo do ácido 4-O-metilgálico que exibe uma grande variedade de atividades farmacológicas descritas na literatura, como por exemplo: potencial hepatoprotetor, antiviral, antiúlcera, antioxidante, cicatrizante, antiinflamatória, anti-diabetes e antimicrobiana (PIACENTE et al., 1996; LIM et al., 2000; GOEL et al., 2002; MADUKA et al., 2003; KIMURA et al., 2007; NAZIR et al., 2007; RASTOGI, 2008; KUMAR et al., 2011; NAZIR et al., 2011). Tendo em vista esta série de propriedades farmacológicas apresentadas pela bergenina é de grande importância o isolamento de grandes quantidades desta substância, visando a avaliação mais detalhada de seu potencial biológico e também a obtenção de seus derivados.[004] Although our country has recognized biodiversity and traditional indigenous knowledge associated with the use of natural products, only a tiny fraction of our native plants have been properly studied (ALMEIDA et al., 2002). An example of a medicinal plant used by populations and its therapeutic potential already described in the literature is the Endopleura uchi (Huber) Cuatrecasas (Humiriaceae), popularly known as yellow uchi, a species originating from the Brazilian Amazon, found in a wild state in terra firme forest, dispersed throughout the Amazon Basin (MAGALHÃES et al., 2007). This species belongs to a small family of flowering plants called Humiriaceae, which has eight genera and approximately 50 species (HERRERA et al., 2010). Phytochemical studies performed with this species describe the occurrence of isocoumarins: bergenin and 8,10-dimethoxybergenin, pentacyclic triterpenoids, masylic acid and its methyl masylinate ester, and a mixture of steroids, β-sitosterol (75.5%) and stigmasterol (24.5%) and the 3-oxo-friedelin and pseudotaraxasterol pentacyclic triterpenes (MAGALHÃES et al., 2007; LAGOS, 2006). In folk medicine, bergenin-rich E. uchi bark tea is used as an anti-inflammatory, against tumors and uterine infections, and is also sold as a medicine for arthritis, cholesterol and diabetes (SILVA, 2009; SHANLEY et al., 1998). In addition to the Humiriaceae family, there are reports that bergenin is present in several other plant families and is abundantly found in the Euphorbiaceae, Saxifragaceae and Myrsinaceae families (RASTOGI et al., 2008). Bergenine (4-methoxy-2 - [(1S, 2R, 3S, 4S, 5R) -3,4,5,6-tetrahydro-3,4,5-trihydroxy-6- (hydroxymethyl) -2H-pyran -2-yl] -α-resorcylic acid (β-lactone monohydrate) is a 4-O-methylgalic acid C-glycoside that exhibits a wide variety of pharmacological activities described in the literature, such as: hepatoprotective potential, antiviral, antiulcer, antioxidant, healing, anti-inflammatory, anti-diabetes and antimicrobial (PIACENTE et al., 1996; LIM et al., 2000; GOEL et al., 2002; MADUKA et al., 2003; KIMURA et al., 2007; NAZIR et al. ., 2007; RASTOGI, 2008; KUMAR et al., 2011; NAZIR et al., 2011). Given this series of pharmacological properties presented by bergenine, it is of great importance the isolation of large quantities of this substance, aiming at a more detailed evaluation of its biological potential and also to obtain its derivatives.

[005] Contudo, os métodos fitoquímicos de extração e purificação apresentados na literatura até o momento, são morosos, necessitam de grandes quantidades de solventes orgânicos, utilizam partes nobres da planta e levam, em média, a obtenção de apenas 19 mg/Kg de casca de bergenina, por exemplo. Inúmeras empresas fornecem esta substância, com grau de pureza de 30 a 99%, em valores que variam de U$ 1,00 a 1.000,00 por quilograma do produto, tornando desta forma a sua obtenção comercial relativamente inviável para sua utilização em grande escala laboratorial. Desta forma, estudos para a obtenção da bergenina via métodos laboratoriais economicamente viáveis, vem sendo realizados por diferentes grupos de pesquisa. A presente invenção apresenta uma nova e inventiva forma de obtenção de bergenina a partir da casca em um método barato e rápido de obtenção.However, the phytochemical extraction and purification methods presented in the literature to date are time consuming, require large amounts of organic solvents, use noble parts of the plant and lead on average to obtain only 19 mg / kg of bergenine bark, for example. Numerous companies supply this substance, with a purity of 30 to 99%, in values ranging from US $ 1.00 to 1.000.00 per kilogram of the product, thus making its commercial obtaining relatively unfeasible for its large-scale use. laboratory Thus, studies to obtain bergenin via economically viable laboratory methods have been performed by different research groups. The present invention presents a new and inventive way of obtaining bergenin from the bark in a cheap and fast method of obtaining.

[006] Estudos fitoquímicos realizados por Luna e colaboradores (2000) com essa espécie, a partir do extrato etanólico bruto das cascas de E. uchi, descreveram a ocorrência das isocumarinas: bergenina e 8,10- dimetoxibergenina (1) (Figura 4) e dos triterpenóides pentacíclicos, ácido masílinico (2) e o seu éster masilinato de metila, em espécime coletado no Pará. Um estudo posterior onde foi realizado fracionamento cromatográfico dos extratos da casca de E. uchi resultou no isolamento de uma mistura de esteróides constituída por β-sitosterol (75,5%) (3) e estigmasterol (24,5%) (4), dos triterpenos pentacíclicos 3-oxo-friedelina (5) e pseudotaraxasterol (6) e da bergenina (LAGOS, 2006). Já Nunomura e colaboradores (2009) analisaram o extrato aquoso obtido a partir das cascas de E. uchi, na tentativa de determinar a quantidade de bergenina. Através deste estudo, foi possível confirmar que a bergenina é o constituinte principal do chá da casca de E. uchi, com uma concentração máxima de 3%. Marx e colaboradores (2002) realizaram estudos com a polpa dos frutos do uchi que o indicaram como fonte de ácidos graxos, fibras, esteróides, sais minerais, vitaminas C e E. Os principais ácidos graxos identificados foram o ácido oléico (7,38%) e ácido palmítico (3,78%), além disso, apresenta carotenóides, na maioria trans-^-caroteno. Magalhães e colaboradores (2007) comprovaram que os frutos do uchi contêm os carotenoides: β-caroteno e α-caroteno, os quais apresentam atividades pró-vitamina A. Verificou-se ainda, que o β-caroteno, majoritário na amostra de uchi, apresentando concentração com valores médios de 16,57 pg/g, pode contribuir com aproximadamente 27,6% das necessidades diárias de vitamina A (100 pg/g/RE) para um homem adulto. A composição do aroma nos frutos também foi avaliada por Marx e colaboradores (2002), sendo identificados 42 componentes com predominância de 3,3-dimetil-2-butanol (18,8%) e eugenol (14,0%) (MAGALHÃES et al„ 2007).Phytochemical studies conducted by Luna et al. (2000) with this species from the crude ethanolic extract of E. uchi barks described the occurrence of isocoumarins: bergenine and 8,10-dimethoxybergenine (1) (Figure 4) and pentacyclic triterpenoids, butylic acid (2) and its methyl masylinate ester, in a specimen collected in Pará. A subsequent study where chromatographic fractionation of E. uchi bark extracts resulted in the isolation of a steroid mixture consisting of β-sitosterol (75.5%) (3) and stigmasterol (24.5%) (4), 3-oxo-friedelin pentacyclic triterpenes (5) and pseudotaraxasterol (6) and bergenine (LAGOS, 2006). Nunomura et al. (2009) analyzed the aqueous extract obtained from the barks of E. uchi in an attempt to determine the amount of bergenin. Through this study, it was possible to confirm that bergenin is the main constituent of E. uchi bark tea, with a maximum concentration of 3%. Marx and collaborators (2002) conducted studies with the uchi fruit pulp that indicated it as a source of fatty acids, fibers, steroids, minerals, vitamins C and E. The main fatty acids identified were oleic acid (7.38%). ) and palmitic acid (3.78%), moreover, present carotenoids, mostly trans - carotene. Magalhães et al. (2007) found that uchi fruits contain the carotenoids: β-carotene and α-carotene, which have pro-vitamin A activities. It was also found that β-carotene, which is the majority in the uchi sample, With a concentration of 16.57 pg / g on average, it can contribute approximately 27.6% of daily vitamin A requirements (100 pg / g / RE) for an adult male. Fruit aroma composition was also evaluated by Marx and collaborators (2002), and 42 components with predominance of 3,3-dimethyl-2-butanol (18.8%) and eugenol (14.0%) were identified (MAGALHÃES et al „2007).

[007] Nunomura (2009) desenvolveu uma metodologia para extração da bergenina a partir da planta E. uchi. Nesse processo, a casca do tronco da E. uchi (2,9 Kg) em pó seca foi macerada em hexano por três semanas e o solvente substituído três vezes. Após o tratamento com hexano, a bergenina é extraída da casca com metanol, durante 3 semanas e o solvente substituído três vezes. O extrato metanólico foi então concentrado à vácuo e purificado em coluna cromatográfica (sílica), a qual é eluída com 100% de acetato de etila, seguido de AcOEt/MeOH (9:1) e finalmente 100% metanol. As frações contendo bergenina foram secas e recristalizadas com acetato de etila, obtendo-se ao final do processo 0,0013% de bergenina. Podemos observar que trata-se de um método trabalhoso e moroso, com o uso de quantidades relativamente grande de diferente solventes com grau de toxicidade elevada.[007] Nunomura (2009) developed a methodology for bergenin extraction from the E. uchi plant. In this process, the dried E. uchi stem bark (2.9 kg) was macerated in hexane for three weeks and the solvent replaced three times. After hexane treatment, bergenin is extracted from the shell with methanol for 3 weeks and the solvent replaced three times. The methanolic extract was then concentrated in vacuo and purified by column chromatography (silica), which is eluted with 100% ethyl acetate, followed by EtOAc / MeOH (9: 1) and finally 100% methanol. The fractions containing bergenin were dried and recrystallized with ethyl acetate, obtaining at the end of the process 0.0013% bergenin. We can observe that this is a laborious and time consuming method, with the use of relatively large quantities of different solvents with high degree of toxicity.

[008] Portanto, a busca por uma nova metodologia, mais econômica, eficiente e ambientalmente correta, para a obtenção da bergenina a partir de plantas, se torna de fundamental importância visto que apresenta uma grande variedade de atividades biológicas descritas na literatura (PIACENTE et al., 1996; LIM et al., 2000; GOEL et al., 2002; MADUKA et al., 2003; KIMURA et al., 2007; NAZIR et al., 2007; RASTOGI, 2008; KUMAR et al., 2011; NAZIR et al., 2011).Therefore, the search for a new, more economical, efficient and environmentally correct methodology for obtaining bergenin from plants becomes of fundamental importance since it presents a wide variety of biological activities described in the literature (PIACENTE et al., 1996; LIM et al., 2000; GOEL et al., 2002; MADUKA et al., 2003; KIMURA et al., 2007; NAZIR et al., 2007; RASTOGI, 2008; KUMAR et al., 2011 ; NAZIR et al., 2011).

[009] O presente processo de extração/purificação vem de encontro a resolver o problema de obtenção racional da bergenina a partir da casca da E. Uchi, apontando um novo método de extração/purificação. No presente processo de extração/purificação a bergenina é obtida a partir das cascas da E. uchi seguido de extração contínua por solvente (água) com posterior purificação.[009] The present extraction / purification process addresses the problem of rationally obtaining bergenin from E. Uchi bark by pointing out a new extraction / purification method. In the present extraction / purification process bergenin is obtained from E. uchi peels followed by continuous solvent (water) extraction with further purification.

[010] Do que se depreende da literatura pesquisada, não foram encontrados documentos antecipando ou sugerindo os ensinamentos da presente invenção, de forma que a solução aqui proposta possui novidade e atividade inventiva frente ao estado da técnica.[010] From what is clear from the researched literature, no documents were found anticipating or suggesting the teachings of the present invention, so that the solution proposed here has novelty and inventive activity in the state of the art.

Sumário da Invenção [011] Em um aspecto, a presente proporciona novos e inventivos processos de extração e purificação de bergenina a partir do uso de material vegetal obtido de Endopleura uchi, proporcionando a obtenção de grandes quantidades de bergenina, com alto grau de pureza, por um baixo custo operacional e em tempos reduzidos, além da utilização de menores quantidades de solventes com grau de toxicidade elevada quando comparado com a literatura (Nunomura et al., 2009; MAGALHÃES et al., 2007).Summary of the Invention In one aspect, the present provides novel and inventive processes of extraction and purification of bergenin from the use of plant material obtained from Endopleura uchi, providing large quantities of bergenin with high purity, for a low operational cost and in short times, besides the use of smaller amounts of solvents with high degree of toxicity when compared to the literature (Nunomura et al., 2009; MAGALHÃES et al., 2007).

[012] É um objeto da presente invenção, um processo de obtenção da bergenina compreendendo as etapas de: a) obter pelo menos um material vegetal de Endopleura uchi; b) realizar extração contínua utilizando água como solvente; c) resfriar o extrato aquoso; d) adicionar carvão ativo ao extrato aquoso; e) agitar o extrato aquoso com carvão ativo a temperatura ambiente; f) filtrar o extrato aquoso para retirada do carvão ativo; g) secagem do carvão ativo; h) lavagem do carvão ativo com solvente orgânico; i) submeter o solvente a resfriamento para cristalização da bergenina.An object of the present invention is a process for obtaining bergenin comprising the steps of: a) obtaining at least one plant material from Endopleura uchi; b) perform continuous extraction using water as a solvent; c) cool the aqueous extract; d) add active charcoal to the aqueous extract; e) stirring the aqueous extract with activated charcoal at room temperature; f) filter the aqueous extract to remove the active charcoal; g) drying of active charcoal; h) washing the activated carbon with organic solvent; i) subjecting the solvent to cooling to bergenin crystallization.

[013] Em uma realização preferencial, o material vegetal compreende quaisquer partes da planta Endopleura uchi, mais preferencial, o material vegetal compreende a casca do Endopleura uchi.In a preferred embodiment, the plant material comprises any parts of the Endopleura uchi plant, more preferably, the plant material comprises the bark of Endopleura uchi.

[014] Em uma realização preferencial, a extração da bergenina utilizou 1,05g/3,0ml_ de solvente.In a preferred embodiment, the extraction of bergenine used 1.05g / 3.0ml of solvent.

[015] Em uma realização preferencial, a extração da bergenina é realizada a partir de três porções de 35,0 g de casca previamente triturada de Endopleura uchi em um sistema de extração contínua tipo soxhlet juntamente com 300,0 ml_ de água, em que cada porção de 35,0 g de casca de Endopleura uchi foi mantida por 3 horas no processo de extração contínua. O extrato aquoso obtido possui coloração âmbar intensa.In a preferred embodiment, extraction of bergenin is performed from three 35.0 g portions of previously crushed Endopleura uchi bark in a soxhlet continuous extraction system together with 300.0 ml water, wherein Each 35.0 g portion of Endopleura uchi bark was kept for 3 hours in the continuous extraction process. The aqueous extract obtained has intense amber color.

[016] Em uma realização preferencial, adiciona-se 50,0 g de carvão ativo no extrato aquoso obtido da extração de Endopleura uchi mantendo sob agitação magnética contínua à temperatura ambiente por 3 horas.In a preferred embodiment, 50.0 g of active charcoal is added to the aqueous extract obtained from Endopleura uchi extraction while under continuous magnetic stirring at room temperature for 3 hours.

[017] E m uma realização preferencial, após decorrido o tempo de agitação, a mistura é filtrada a vácuo em funil de Büchner. A solução aquosa filtrada apresentou-se límpida com uma leve tonalidade amarela. Esta foi analisada por cromatografia em camada delgada de sílica, utilizando acetato de etila como eluente, verificado a ausência de bergenina nesta solução.In a preferred embodiment, after the stirring time has elapsed, the mixture is vacuum filtered on a Büchner funnel. The filtered aqueous solution was clear with a slight yellow tint. This was analyzed by thin layer chromatography on silica using ethyl acetate as eluent, checking for the absence of bergenin in this solution.

[018] Em uma realização preferencial, o carvão ativo filtrado foi colocado em recipiente adequado para secagem (bandeja) e levado a estufa por 3 horas a 50°C.[018] In a preferred embodiment, the filtered active charcoal was placed in a suitable drying container (tray) and stoved for 3 hours at 50 ° C.

[019] Em uma realização preferencial, após total secura do carvão, este foi submetido a um processo de extração contínua tipo soxhlet juntamente com 200 ml_ de acetato de etila, em aquecimento mínimo por 3 horas. Após este processo, o acetato de etila foi filtrado em funil sinterizado contendo uma camada de celite, para retirar resíduos de carvão.In a preferred embodiment, after complete dryness of the coal, it was subjected to a continuous soxhlet extraction process together with 200 ml of ethyl acetate, at minimum heating for 3 hours. After this process, ethyl acetate was filtered through a sintered funnel containing a celite layer to remove charcoal residue.

[020] Em uma realização preferencial, o acetato de etila foi levado à geladeira por 2 dias ocorrendo a cristalização da bergenina pura como um sólido branco que foi filtrado a vácuo em funil de Büchner.In a preferred embodiment, ethyl acetate was refrigerated for 2 days with crystallization of pure bergenin as a white solid which was vacuum filtered on a Büchner funnel.

[021] É ainda um objeto adicional da presente invenção, a bergenina obtida pelo processo acima descrito, com rendimento de cerca de 700 mg de bergenina/105 g de casca de Endopleura uchi.It is a further object of the present invention the bergenin obtained by the above described process, yielding about 700 mg bergenin / 105 g of Endopleura uchi bark.

[022] Estes e outros objetos da invenção serão imediatamente valorizados pelos versados na arte e pelas empresas com interesses no segmento, e serão descritos em detalhes suficientes para sua reprodução na descrição a seguir.[022] These and other objects of the invention will be immediately appreciated by those skilled in the art and companies having an interest in the segment, and will be described in sufficient detail for reproduction in the following description.

Descrição Detalhada da Invenção [023] Os exemplos aqui mostrados têm o intuito somente de exemplificar uma das inúmeras maneiras de se realizar a invenção, contudo sem limitar, o escopo da mesma.Detailed Description of the Invention The examples shown herein are intended solely to exemplify one of the numerous ways of carrying out the invention, but without limiting the scope thereof.

Exemplo 1. Realização Preferencial Coleta e Identificação do Material Botânico [024] O material vegetal utilizado para extração da bergenina, cascas da E. Uchi foi coletado na Reserva Adolpho Ducke do Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia-INPA, localizada no quilômetro 26 da rodovia AM-010, no estado do Amazonas, Brasil. O ponto de coleta foi geoposicionado, utilizando-se GPS de navegação (modelo 12 XL da Garmin), com localização 02°55’37”S/ 59°59’57”W.Example 1. Preferred Realization Collection and Identification of Botanical Material [024] The plant material used for the extraction of bergenin, bark from E. Uchi was collected from the Adolpho Ducke Reserve of the National Institute for Amazonian Research - INPA, located at kilometer 26 of the highway. AM-010, in the state of Amazonas, Brazil. The collection point was geo-positioned using GPS navigation (Garmin model 12 XL) with location 02 ° 55'37 ”S / 59 ° 59'57” W.

[025] A identificação taxonômica do material coletado foi realizada por José Ferreira Ramos, no Herbário da Coordenação de Pesquisas em Botânica do IN PA e a exsicata encontra-se depositada no herbário desta instituição sob código n°: 243141.[025] The taxonomic identification of the collected material was performed by José Ferreira Ramos, at the Herbarium of the Coordination of Research in Botany of IN PA and the exsiccata is deposited in the herbarium of this institution under code: 243141.

Extração e Isolamento da Bergenina [026] Para a extração da bergenina, utilizou-se três porções de 35 gramas de casca triturada de E. uchi com 300 ml_ de água destilada.Bergenin Extraction and Isolation For the extraction of bergenin, three 35 gram portions of crushed E. uchi bark with 300 ml of distilled water were used.

[027] A primeira porção da casca foi submetida a um sistema de extração contínua (soxhlet) por 3 horas, Esse procedimento foi repetido mais duas vezes, trocando-se apenas o cartucho que contem a casca de E. uchi. Após esse processo, deixou-se o chá esfriar e então, adicionou-se 50 g de carvão ativo. Este extrato aquoso ficou sob a agitação magnética à temperatura ambiente por 3 horas. Após esse período de agitação, a mistura foi filtrada a vácuo em funil de Büchner, para retirada do carvão ativo, que então foi colocado em estufa, a 50 UC, para secagem por 3 horas. Após este período, o carvão ativo seco foi transferido para um cartucho de papel e levado ao soxhlet com 200 ml_ de acetato de etila, em aquecimento mínimo por 3 horas. Após este processo, filtrou-se o acetato de etila em funil sinterizado com uma camada de celite, para retirar os resíduos de carvão. O acetato de etila foi levado à geladeira por 2 dias ocorrendo a cristalização da bergenina pura como um sólido branco (700 mg) que foi filtrado a vácuo em funil de Büchner. O rendimento da presente inverção é de 700 mg de bergenina/105g de casca, ou seja, 6,67g de bergenina/kg de casca.[027] The first portion of the shell was subjected to a continuous extraction system (soxhlet) for 3 hours. This procedure was repeated two more times, changing only the cartridge containing the E. uchi shell. After this process, the tea was allowed to cool and then 50 g of active charcoal was added. This aqueous extract was stirred at room temperature for 3 hours. After this stirring period, the mixture was vacuum filtered on a Büchner funnel to remove the active charcoal, which was then placed in an oven at 50 ° C for drying for 3 hours. After this time, the dried active charcoal was transferred to a paper cartridge and brought to the soxhlet with 200 ml of ethyl acetate under minimal heating for 3 hours. After this process, ethyl acetate was filtered through a sintered funnel with a pad of celite to remove charcoal residue. Ethyl acetate was refrigerated for 2 days with crystallization of pure bergenin as a white solid (700 mg) which was vacuum filtered on a Büchner funnel. The yield of this inversion is 700 mg bergenin / 105g bark, ie 6.67g bergenin / kg bark.

Identificação e caracterização da bergenina [028] A bergenina foi identificada através de cromatografia em camada delgada (CCD) com cromatofolhas de alumínio em sílica gel, da marca MERCK e de técnicas espectroscópicas de Ressonância Magnética Nuclear (RMN) de hidrogênio (1H) e carbono (13C), em um aparelho Varian AS-400 (400 e 100 MHz, respectivamente), e Infravermelho (IV), em espectrômetro ABB Bomen FTLA 2000-100 (Central de Análises - Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC), CLAE preparativo, da marca Shimadzu (Central de Análises -Universidade do Estado do Amazonas) e CLAE semi preparativo, da marca Shimadzu (Central de Análises - Universidade do Estado do Amazonas), sendo os mesmos comparados com dados já reportados na literatura (NUNOMURA et al., 2009).Identification and characterization of bergenin [028] Bergenin was identified by thin layer chromatography (CCD) with aluminum silica gel chromatographs of the MERCK brand and by hydrogen (1H) and carbon Nuclear Magnetic Resonance (NMR) spectroscopic techniques. (13C), on a Varian AS-400 (400 and 100 MHz, respectively) and Infrared (IR), on an ABB Bomen FTLA 2000-100 spectrometer (Central Analysis - Federal University of Santa Catarina - UFSC), preparative HPLC , from the Shimadzu brand (Analysis Center - Amazonas State University) and semi-preparative HPLC, from the Shimadzu brand (Analysis Central - Amazonas State University), which are compared with data already reported in the literature (NUNOMURA et al. , 2009).

[029] Os versados na arte valorizarão os conhecimentos aqui apresentados e poderão reproduzir a invenção nas modalidades apresentadas e em outros variantes, abrangidos no escopo das reivindicações anexas.Those skilled in the art will enhance the knowledge presented herein and may reproduce the invention in the embodiments disclosed and in other embodiments within the scope of the appended claims.

Reivindicações Processo de Obtenção da bergenina, Produto Bergenina obtido por Processo de ExtraçãoClaims Process for Obtaining Bergenin, Bergenin Product Obtained by Extraction Process

Claims

Process for obtaining bergenin comprising the steps of: a) obtaining at least one Endopleura uchi plant material; b) performing continuous extraction using water as a solvent; c) cool the aqueous extract; d) add active charcoal to the aqueous extract; e) stirring the aqueous extract with activated charcoal at room temperature; f) filter the aqueous extract to remove the active charcoal; g) drying of active charcoal; h) washing the activated carbon with organic solvent; i) subjecting the solvent to cooling to bergenin crystallization.

Process according to Claim 1, characterized in that the plant material comprises any parts of the Endopleura uchi plant.

Process according to Claim 1, characterized in that the plant material comprises the bark of Endopleura uchi.

Process according to Claim 1, characterized in that the extraction of bergenin uses 1.05 g / 3.0 ml of solvent.

Process according to Claim 1, characterized in that the extraction of bergenin is carried out by the addition of three 35 gram portions of previously crushed Endopleura uchi bark in a soxhlet-type continuous extraction system together with 300.0 ml. Water.

Process according to Claim 1, characterized in that the continuous extraction process is maintained for 9 hours, each 35 g portion of bark being maintained for 3 hours.

Process according to Claim 1, characterized in that the aqueous extract obtained has an intense amber color.

Process according to Claim 1, characterized in that 50.0 g of active charcoal is added to the aqueous extract obtained from the extraction of Endopleura uchi and kept under continuous magnetic stirring at room temperature for 3 hours.

Process according to Claim 1, characterized in that, after the stirring time has elapsed, the mixture is vacuum filtered on a Büchner funnel.

Process according to Claim 1, characterized in that the filtered aqueous solution is clear with a slight yellow tint.

Process according to Claim 1, characterized in that the filtered activated carbon is placed in a suitable drying container (tray) and taken to the oven where it remained for 3 hours at 50,0 ° C.

Process according to Claim 1, characterized in that, after complete dryness of the coal, it is subjected to continuous extraction (soxhlet) with 200.0 mL of ethyl acetate for 3 hours.

Process according to Claim 1, characterized in that the sintered funnel mixture containing celite is filtered off to remove any charcoal residue.

Process according to Claim 1, characterized in that ethyl acetate is refrigerated for 2 days with crystallization of pure bergenin as a white solid which was vacuum filtered on a Büchner funnel.

Product characterized in that it is obtained by the process described in any one of claims 1 to 14, and has a yield of about 700 mg of bergenin / 105 g of Endopleura uchi bark.