BR102012026503B1

BR102012026503B1 - pharmaceutical formulations and pharmaceutical formulation production process

Info

Publication number: BR102012026503B1
Application number: BR102012026503A
Authority: BR
Inventors: Dolivar Coraucci Neto
Original assignee: Ouro Fino Participações E Empreendimentos S A; Ouro Fino Saúde Animal Participações S A
Priority date: 2012-10-16
Filing date: 2012-10-16
Publication date: 2016-08-09
Also published as: CO6930059A1; UY35077A; BR102012026503A2; AR092969A1

Abstract

formulações farmacêuticas e processo de produção de formulações farmacêuticas - a presente invenção está relacionada a adjuvantes a serem usados em emulsões água em óleo (a/o), ao método para preparar esta emulsão e a vacinas que fazem o uso de adjuvantes em sua formulação.Pharmaceutical Formulations and Pharmaceutical Formulation Process - The present invention relates to adjuvants for use in water-in-oil (w / o) emulsions, the method for preparing this emulsion, and vaccines which use adjuvants in its formulation.

Description

Relatório Descritivo de Patente de Invenção Formulações Farmacêuticas e Processo de Produção de Formulações Farmacêuticas Campo da Invenção A presente invenção está relacionada a adjuvantes a serem usados em emulsões água em óleo {NO), ao método para preparar esta emulsão e a vacinas que fazem o uso de adjuvantes em sua formulação. A presente invenção se situa no campo da bioquímica, farmácia e engenharia química.Field of the Invention The present invention relates to adjuvants for use in water-in-oil (NO) emulsions, the method for preparing this emulsion and to vaccines in use. of adjuvants in its formulation. The present invention is in the field of biochemistry, pharmacy and chemical engineering.

Antecedentes da Invenção Compreende-se por emulsão um sistema disperso grosseiro que ocorre através da junção de dois ou mais líquidos não míscíveis entre si, sendo um de característica hidrofílica e o outro de característica hidrofóbica. Quando a fase contínua é hidrofílica a emulsão é do tipo óleo em água (O/A) e no caso contrário, quando a fase contínua é hidrofóbica a emulsão é do tipo água em óleo {NO).Background of the Invention An emulsion is understood to be a coarse dispersed system which occurs by joining two or more non-miscible liquids together, one being hydrophilic and the other hydrophobic. When the continuous phase is hydrophilic the emulsion is of the oil in water (O / W) type and in the opposite case, when the continuous phase is hydrophobic the emulsion is of the water in oil (NO) type.

Neste tipo de formulação a fase dispersa apresenta-se como gotículas suspensas na fase contínua. Por se tratar de um sistema termodinamicamente instável (energia livre de gibbs é positiva) a suspensão da fase dispersa não ocorre de maneira espontânea na fase contínua sendo necessária a aplicação de energia no sistema, podendo esta ser proveniente da agitação mecânica por exemplo. Além disso, as gotículas precisam permanecer o maior tempo possível suspensas, desta maneira é necessária a adição de uma substância capaz de diminuir a tensão superficial do sistema, apresentando certa afinidade com a fase contínua e dispersa. Esta substância recebe a denominação de tensoativo, como os aniônicos, catiônicos, não iônicos e poliméricos. Emulsões NO são amplamente aplicadas em formulações farmacêuticas, veterinárias e cosméticas. No caso em que o ativo for solúvel em água este tipo de formulação poderá promover uma liberação sustentada do mesmo. Em vacinas, emulsões são comumente usadas como veículos para estimularem a resposta imune. Um dos primeiros veículos utilizados foi o Adjuvante Completo de Freud que contém em sua formulação óleo mineral, Micobacteria e tensoativo, sendo que o mesmo futuramente foi modificado para Adjuvante Incompleto de Freud onde não há presença de Micobacteria. A partir de então, inúmeras formulações foram desenvolvidos para o uso regularem vacinas. A Febre Aftosa (FA) uma doença viral altamente contagiosa que afeta bovinos, búfalos, caprinos, ovinos, cervídeos, suínos e outros animais que possuem cascos fendidos. O vírus da FA pertence ao gênero Aphtovirus da família Picornavirídae e está entre os menores vírus conhecidos. Os vírions apresentam capsídeo de simetria icosaédrica, não envelopados e seu genoma é um RNA de fita única.In this type of formulation the dispersed phase appears as droplets suspended in the continuous phase. Because it is a thermodynamically unstable system (gibbs-free energy is positive), the dispersed phase suspension does not occur spontaneously in the continuous phase and energy is required to be applied to the system. In addition, the droplets must remain suspended for as long as possible, so it is necessary to add a substance capable of decreasing the surface tension of the system, showing some affinity with the continuous and dispersed phase. This substance is called surfactant, such as anionic, cationic, nonionic and polymeric. NO emulsions are widely applied in pharmaceutical, veterinary and cosmetic formulations. In case the active is water soluble this type of formulation can promote a sustained release of the same. In vaccines, emulsions are commonly used as vehicles to stimulate the immune response. One of the first vehicles used was Freud's Complete Adjuvant, which contains in its formulation mineral oil, Mycobacteria and surfactant, and in the future it was changed to Incomplete Freud's Adjuvant where there is no presence of Mycobacteria. Since then, numerous formulations have been developed for regular use in vaccines. Foot-and-mouth disease (AF) is a highly contagious viral disease that affects cattle, buffalo, goats, sheep, deer, swine and other animals that have cracked hooves. The AF virus belongs to the genus Aphtovirus of the Picornavirídae family and is among the smallest known viruses. Virions have non-enveloped icosahedral symmetry capsid and their genome is single-stranded RNA.

Existem sete diferentes sorotipos de vírus da FA: O (mais comum), A, C, SAT (South African Territory)-1, SAT-2, SAT-3 e Ásia-1. Os quatro últimos são considerados exóticos no Brasil, os que tem mais influência na América Latina são os O, A e C, sendo que os últimos isolamentos no Brasil demonstraram a presença do tipo O. A estratégia de vacinação contra a Febre Aftosa (FA) pode ser feita com duas diferentes abordagens: a vacinação profilática, antes da ocorrência de um surto, e a vacinação reativa, feita após a detecção de um surto. Neste caso, a eliminação do rebanho doente deve ser complementada pela vacinação para proteger os animais sensíveis contra a estirpe do vírus em particular prevalente na área do surto.There are seven different AF virus serotypes: O (most common), A, C, SAT (South African Territory) -1, SAT-2, SAT-3, and Asia-1. The last four are considered exotic in Brazil, the most influential in Latin America are O, A and C, and the latest isolations in Brazil have shown the presence of type O. The FMD vaccination strategy It can be done with two different approaches: prophylactic vaccination before an outbreak and reactive vaccination after an outbreak is detected. In this case, elimination of the diseased herd should be complemented by vaccination to protect sensitive animals against the particular virus strain prevalent in the outbreak area.

Os principais determinantes da eficácia da vacinação profilática são o grau de cobertura da vacinação (a proporção de animais vacinados) e a eficácia (a proporção de animais vacinados que são protegidos).The main determinants of the effectiveness of prophylactic vaccination are the degree of vaccination coverage (the proportion of vaccinated animals) and the effectiveness (the proportion of vaccinated animals that are protected).

Inicialmente a vacina contra FA era composta de uma formulação com hidróxido de alumínio, que oferecia uma resposta rápida, mas com uma duração de imunidade curta, de 2 a 3 meses somente. Entretanto a vacina contra a FA foi modificada pelo Centro Panamericano de Febre Aftosa (PAFMDC), devido à necessidade do aumento da duração da imunidade contra FA, especialmente em manejos de animais criados em longas extensões terra, isso facilitou a vacinação e também aumentou a proteção desses animais.Initially the AF vaccine was composed of an aluminum hydroxide formulation, which offered a rapid response but with a short immunity duration of 2 to 3 months only. However, the AF vaccine has been modified by the Pan American Foot-and-Mouth Disease Center (PAFMDC) due to the need for increased duration of immunity against AF, especially in the management of animals raised on long land, this facilitated vaccination and also increased protection. of these animals.

Com o uso dessa formulação de emulsão A/O a imunidade passou de 2-3 meses para 6 meses.With the use of this A / O emulsion formulation immunity went from 2-3 months to 6 months.

Inicialmente, a formulação proposta no presente pedido de patente foi baseada no Adjuvante Incompleto de Freud. Nesta formulação utilizava-se óleo mineral refinado com um agente tensoativo, o monooleato de manitol (Arlacel A, produzido pela empresa CRODA ou Montanide 80 (produzido pela empresa SEPPIC), sendo utilizada a concentração de 10% de tensoativo e 90% de óleo mineral, em uma formulação 50% fase aquosa e 50% fase oleosa (óleo mineral + monooleato de manitol). Para que a emulsão possa ser formada a mistura da fase aquosa a fase oleosa deve ser homogeneizada em alta velocidade através de um processo mecânico industrial utilizando um emusilficador industrial especialmente desenvolvido para este processo.Initially, the formulation proposed in the present patent application was based on Freud's Incomplete Adjuvant. This formulation used refined mineral oil with a surfactant, mannitol monooleate (Arlacel A, produced by CRODA or Montanide 80 (produced by SEPPIC), using a concentration of 10% surfactant and 90% mineral oil. , in a formulation 50% aqueous phase and 50% oil phase (mineral oil + mannitol monooleate) In order for the emulsion to be formed the mixture of the aqueous phase the oil phase must be homogenized at high speed through an industrial mechanical process using an industrial emusilifier specially developed for this process.

Entretanto, a emulsão resultante desse processo apresenta algumas desvantagens: alta viscosidade, entre 2000 a 2400 cps, o que dificulta o manejo e a injeção da vacina por via intramuscular ou subcutânea; e uma intensa reação local nos animais, o que acarreta grandes prejuízos na produção leiteira e no ganho de peso em animais para engorda. Além disso, esta emulsão apresentava-se com baixa estabilidade físico-química, visto a ocorrência de formação de separação da fase oleosa na parte superior da emulsão, fenômeno conhecido por “creaming”.However, the emulsion resulting from this process has some disadvantages: high viscosity, between 2000 and 2400 cps, which makes it difficult to handle and inject the vaccine intramuscularly or subcutaneously; and an intense local reaction in the animals, which causes great losses in milk production and weight gain in animals for fattening. In addition, this emulsion had poor physical and chemical stability, since the formation of oil phase separation occurred in the upper part of the emulsion, a phenomenon known as “creaming”.

Na tentativa de solucionar este problema a empresa SEPPIC desenvolveu outro tensoativo chamado anhydromannide octodocenate (Montanide 888), usando óleo mineral mais 10% de Montanide 888, em uma em uma formulação 50% fase aquosa e 50% fase oleosa (óleo mineral + montanide 888). Esta mistura também passa por um processo de emulsificação mecânico utilizando um emulsificador industrial desenvolvido para este propósito.In an attempt to solve this problem, SEPPIC has developed another surfactant called anhydromannide octodocenate (Montanide 888), using 10% more Montanide 888 mineral oil, in a 50% aqueous phase and 50% oily phase formulation (mineral oil + montanide 888). ). This mixture also undergoes a mechanical emulsification process using an industrial emulsifier developed for this purpose.

Utilizando-se este agente emulsificante menores viscosidades são obtidas (200 a 300 cps contra 2400 cps com o Montanide 80 ou Arlacel A) facilitando assim a injeção da vacina contra FA nos animais.Using this emulsifying agent lower viscosities are obtained (200 to 300 cps against 2400 cps with Montanide 80 or Arlacel A) thus facilitating the injection of the FA vaccine into animals.

Entretanto um problema ainda permanece: reação local muito intensa nos animais, especialmente na vacina com dose de 5 ml por animal.However a problem still remains: very intense local reaction in the animals, especially in the 5 ml vaccine dose per animal.

No ano de 2007 um novo desafio surge para os produtores de vacina contra FA que é a purificação do antígeno onde a completa remoção de proteínas não estruturais se faz necessária para diferenciar animais vacinados de não vacinados. Com este desafio e com a purificação dos antígenos utilizados na vacina, ocorreu também a perda de potência das vacinas, ou seja, uma maior quantidade de antígeno purificado se fez necessária em cada vacina para se atingir o grau de proteção exigido pelos órgãos de fiscalização mundial.In 2007 a new challenge arises for FA vaccine producers which is antigen purification where complete removal of nonstructural proteins is necessary to differentiate between vaccinated and unvaccinated animals. With this challenge and with the purification of the antigens used in the vaccine, there was also the loss of potency of the vaccines, that is, a greater amount of purified antigen was needed in each vaccine to reach the degree of protection required by the world surveillance agencies. .

Com isso a empresa SEPPIC desenvolveu um veículo pronto para uso especialmente indicado para antígenos purificados chamados Montanide ISA 70 que apresenta em sua composição óleo mineral associado com um ou mais agentes emulsificantes de origem vegetal extremamente refinados. A emulsão desenvolvida com o Montanide ISA 70 apresenta em sua composição 30% de fase aquosa e 70% de fase oleosa. Com isso uma melhor imunidade foi conseguida, entretanto um aumento exacerbado das reações locais nos animais também ocorreu, acarretando grandes prejuízos para o produtor pecuário.As a result, SEPPIC has developed a ready-to-use vehicle especially suitable for purified antigens called Montanide ISA 70 which has in its composition mineral oil associated with one or more highly refined emulsifying agents of plant origin. The emulsion developed with Montanide ISA 70 has in its composition 30% aqueous phase and 70% oil phase. With this a better immunity was achieved, however an exacerbated increase of local reactions in animals also occurred, causing great damage to the livestock producer.

No âmbito patentário, foram encontrados alguns documentos discorrendo sobre o tema da presente invenção. A PI0207698 (equivalente ao WO2002/67899) reivindica o uso de agente emulsificante na forma de copolímeros em bloco. Esses copolímeros são Arlacel P135 e Atlox 4912 ambos derivados da molécula de PEG30 Dipolyhydroxysterate, para emulsões A/O em vacinas. Nesse documento a concentração de agente emulsificante variou de 0,01 a 15% com óleo mineral e a quantidade de água na emulsão de 30% a 50%. A desvantagem desse copolímero é que para sua utilização é necessário aquecer a mistura de óleo mineral com agente emulsificante até 60°C, o que pode gerar impactos em certos componentes da emulsão que são sensíveis a temperatura como, por exemplo, antígenos virais e fármacos. Esse aquecimento podería destruir ou alterar a composição química do princípio ativo a ser formulado na emulsão, tendo-se assim uma emulsão estável, porém sem atividade imunológica ou farmacológica. Outro ponto a ser considerado é que o fato de que aquecer a emulsão pode gerar uma fusão incompleta em alguns casos entre o copolímero em bloco e o óleo mineral, criando diferenças entre partidas e a formação de “creaming” (separação de fase). O pedido de patente publicado W02011/031850 reivindica novas formulações de vacinas baseadas em emulsão óleo em água com estabilidade melhorada por utilização de adjuvantes contendo saponinas. A nova composição (emulsão injetável O/A) descrita no referido documento compreende: - uma solução aquosa contendo pelo menos 1 imunógeno; - uma solução aquosa contendo um surfactante iônico hidrofílico (por ex., a saponina) na dose de 0,35-3,0 mg/dose; - uma solução aquosa opcional contendo hidróxido de alumínio, na concentração de 0-1% (p/v); - um óleo mineral (por ex., óleo parafina) na concentração de 20-40% (v/v); - um surfactante lipofílico não iônico (por ex., monooleato de sorbitano), na concentração de 0,1-2,5% p/v; - um surfactante hidrofílico não iônico tendo alto balanço hidrofílico-lipofilico (HLB) entre 13 e 40 (por ex., polímero de polioxietileno/polioxilpropileno ou POE-POP) na concentração de 0,1-1,5% (p/v); e, - um surfactante hidrofílico não iônico tendo baixo balanço hidrofílico-lipofilico (HLB) entre 9 e 13 (por ex., trioleato etoxilado de sorbitan) na concentração de 1-8% (p/v). A emulsão tem temperatura de inversão de fase de 33-66°C. A nova emulsão pode ser utilizada para vacina contra FA, Micoplasma e PCV-2.In the patent area, some documents were found discussing the subject of the present invention. PI0207698 (equivalent to WO2002 / 67899) claims the use of emulsifying agent in the form of block copolymers. These copolymers are Arlacel P135 and Atlox 4912, both derived from the PEG30 Dipolyhydroxysterate molecule, for A / O emulsions in vaccines. In this document the concentration of emulsifying agent ranged from 0.01 to 15% with mineral oil and the amount of water in the emulsion from 30% to 50%. The disadvantage of this copolymer is that for its use it is necessary to heat the mixture of mineral oil with emulsifying agent to 60 ° C, which can impact on certain temperature sensitive emulsion components such as viral antigens and drugs. Such heating could destroy or alter the chemical composition of the active ingredient to be formulated in the emulsion, thus having a stable emulsion, but without immunological or pharmacological activity. Another point to consider is that the fact that heating the emulsion can lead to incomplete fusion in some cases between the block copolymer and mineral oil, creating differences between starters and the formation of creaming. Published patent application WO2011 / 031850 claims new oil-in-water emulsion-based vaccine formulations with improved stability by using saponin-containing adjuvants. The novel composition (injectable emulsion O / W) described in said document comprises: - an aqueous solution containing at least 1 immunogen; - an aqueous solution containing a hydrophilic ionic surfactant (eg saponin) at a dose of 0.35-3.0 mg / dose; - an optional aqueous solution containing aluminum hydroxide, at a concentration of 0-1% (w / v); - a mineral oil (eg paraffin oil) at a concentration of 20-40% (v / v); - a nonionic lipophilic surfactant (eg sorbitan monooleate) at a concentration of 0,1-2,5% w / v; - a nonionic hydrophilic surfactant having a high hydrophilic lipophilic balance (HLB) between 13 and 40 (eg polyoxyethylene / polyoxypropylene polymer or POE-POP) at a concentration of 0.1-1.5% (w / v) ; and a nonionic hydrophilic surfactant having a low hydrophilic lipophilic balance (HLB) between 9 and 13 (e.g., ethoxylated sorbitan trioleate) at a concentration of 1-8% (w / v). The emulsion has a phase inversion temperature of 33-66 ° C. The new emulsion can be used for vaccine against AF, Mycoplasma and PCV-2.

Anteriormente o pedido publicado W02005/009462 reivindicou composição semelhante, porém não compreendendo adição de saponina e hidróxido de alumínio. A patente PI 9608199 descreve uma vacina composta de um antígeno, associado a fração imunologicamente ativa da saponina e um esterol (colesterol). O pedido publicado W01995/17209 descreve uma composição vacinai compreendendo antígeno, saponina, 3De-0-acylated monoposphoryl Lipid A e emulsão O/A formada por óleo metabolizável (esqualeno), alfa tocoferol e Tween 80. A tabela 1 resume e exemplifica as composições do estado da técnica.Previously published application W02005 / 009462 claimed similar composition, but not comprising addition of saponin and aluminum hydroxide. PI 9608199 describes a vaccine composed of an antigen associated with the immunologically active fraction of saponin and a sterol (cholesterol). Published Application W01995 / 17209 describes a vaccine composition comprising antigen, saponin, 3De-0-acylated monoposphoryl Lipid A and O / A emulsion formed by metabolizable oil (squalene), alpha tocopherol and Tween 80. Table 1 summarizes and exemplifies the compositions. of the state of the art.

Tabela 1: Formulações A/O possíveis.Table 1: Possible A / O Formulations.

Fase aquosa 10-70% A fase imunogênica pode ser selecionada do grupo consistindo de patógenos inativados, patógenos atenuados, subunidades de antígenos, antígenos purificados, antígenos sem purificação ou antígenos produzidos de forma recombinante usando bactérias, extrato de leveduras, células de insetos ou de origem animal, plasmídeos de expressão e vetores. Os antígenos podem ser purificados, mas não limitados por meio de ultra filtração, ultra centrifugação, exclusão por tamanho ou filtração por gel, cromatografia iônica, e purificação por PEG.Aqueous phase 10-70% The immunogenic phase can be selected from the group consisting of inactivated pathogens, attenuated pathogens, antigen subunits, purified antigens, unpurified antigens or recombinantly produced antigens using bacteria, yeast extract, insect cells or animal origin, expression plasmids and vectors. Antigens may be purified, but not limited, by ultra filtration, ultra centrifugation, size exclusion or gel filtration, ion chromatography, and PEG purification.

Os patógenos podem ser bactérias, vírus, protozoários, fungos ou imunogênicos que constituídos de antitoxinas.The pathogens can be bacteria, viruses, protozoa, fungi or immunogens that consist of antitoxins.

Veículo: água, solução salina, solução tampão, sais), alcoóis e seus condensados (éster e éter) etoxilados, propoxilados, sulfatados, fosfatados e carbonatados, quaternários de amônio; derivados de amina e amida; derivados de aminoácidos; alquilglicosídeo, lecitina, colesterol; derivados de saponinas. O pedido de patente US 2003/0044372 descreve soluções aquosas estáveis de fluidos alcoxitrimetilsilano compreendendo uma fase aquosa continua, uma fase orgânica descontínua e/ou fase alcoxitrimetilsilano e um sistema de emulsificação. O sistema de emulsificação compreende dois agentes emulsificantes, sendo um emulsificante de organossilicone hidrofóbico e um agente emulsificante de organossilicone hidrofílico. As emulsões são especialmente utilizadas para entrega de alcoxitrimetilsilano líquido na superfície e camada superior córnea. Dentre os possíveis surfactantes hidrofóbicos de organossilicone encontra-se o copolímero derivado “Cetyl PEG/PPG-10/1 Dimethicone”. O pedido de patente US2012/0003277 descreve fármacos e composições compreendendo determinadas formas físicas para nanoemulsão de vacinas. É descrita uma composição imunogência compreendendo fase aquosa, fase oleosa e um ou mais imunogênicos localizados na fase oleosa da emulsão. A composição pode compreender silicones localizados na fase aquosa, como dimeticona. O documento AU 1996/077058 descreve surfactantes úteis como adjuvantes, principalmente na agricultura, em uma mistura de 60% a 95% de compostos organossilicones e 5% a 30% de surfactantes contendo não-silicones. O documento US 2011/0038822 descreve produtos antiperspirantes compreendendo emulsões água-em-óleo, tendo uma fase aquosa e uma fase oleosa. A fase aquosa compreende ativo antiperspirante e água, enquanto a fase oleosa compreende derivado “Cetyl PEG/PPG-10/1 Dimethicone” e um carreador hidrofóbico. O documento US 2011/0294734 descreve composições farmacêuticas tendo como ativo peptídeos inibidores de TGF-Beta. Em uma realização preferencial, a formulação farmacêutica da presente invenção compreende 0,01-1% p/p de inibidor TGF-beta, 1-10% p/p de ciclodextrina, 0,5-6% p/p de derivado “Cetyl PEG/PPG-10/1 Dimethicone”, 0,005-0,6% de conservante, silicone em quantidade de 3-20% p/p, 10-40% de óleo mineral e água q.s.p. 100%. A presente invenção vem resolver diversos problemas encontrados no estado da técnica em relação a adjuvantes vacinais, incluindo o problema de reações locais em animais devido ao uso de adjuvantes inadequados, trazendo uma nova e inventiva composição adjuvante para ser utilizada, preferencialmente, na produção de vacinas contra febre aftosa, compreendendo composição com quantidades e associações não descritas anteriormente.Vehicle: water, saline, buffer solution, salts), ethoxylated, propoxylated, sulfated, phosphate and carbonated, quaternary ammonium alcohols and their condensates (ester and ether); amine and amide derivatives; amino acid derivatives; alkylglycoside, lecithin, cholesterol; saponin derivatives. US 2003/0044372 describes stable aqueous solutions of alkoxytrimethylsilane fluids comprising a continuous aqueous phase, a discontinuous organic phase and / or alkoxytrimethylsilane phase and an emulsification system. The emulsification system comprises two emulsifying agents, one being a hydrophobic organosilicone emulsifier and a hydrophilic organosilicone emulsifier. Emulsions are especially used for delivery of liquid alkoxytrimethylsilane to the corneal surface and upper layer. Possible hydrophobic organosilicone surfactants include the "Cetyl PEG / PPG-10/1 Dimethicone" derived copolymer. US2012 / 0003277 describes drugs and compositions comprising certain physical forms for vaccine nanoemulsion. An immunogen composition comprising the aqueous phase, oil phase and one or more immunogenic agents located in the oil phase of the emulsion is described. The composition may comprise silicones located in the aqueous phase, such as dimethicone. AU 1996/077058 describes surfactants useful as adjuvants, mainly in agriculture, in a mixture of 60% to 95% organosilicon compounds and 5% to 30% non-silicon-containing surfactants. US 2011/0038822 describes antiperspirant products comprising water-in-oil emulsions having an aqueous phase and an oil phase. The aqueous phase comprises antiperspirant active and water, while the oil phase comprises derivative “Cetyl PEG / PPG-10/1 Dimethicone” and a hydrophobic carrier. US 2011/0294734 describes pharmaceutical compositions having TGF-Beta inhibitor peptides as their active ingredient. In a preferred embodiment, the pharmaceutical formulation of the present invention comprises 0.01-1% w / w TGF-beta inhibitor, 1-10% w / w cyclodextrin, 0.5-6% w / w Cetyl derivative PEG / PPG-10/1 Dimethicone ”, 0.005-0.6% preservative, 3-20% w / w silicone, 10-40% mineral oil and water qsp 100% The present invention solves several problems encountered in the prior art with regard to vaccine adjuvants, including the problem of local reactions in animals due to the use of inappropriate adjuvants, bringing a novel and inventive adjuvant composition to be preferably used in vaccine production. against foot-and-mouth disease, comprising composition with amounts and combinations not previously described.

Do que se depreende da literatura pesquisada, não foram encontrados documentos antecipando ou sugerindo os ensinamentos da presente invenção, de forma que a solução aqui proposta possui novidade e atividade inventiva frente ao estado da técnica.From what can be inferred from the researched literature, no documents were found anticipating or suggesting the teachings of the present invention, so that the solution proposed here has novelty and inventive activity in relation to the state of the art.

Sumário da Invenção Em um aspecto, a presente invenção proporciona novas e inventivas composições adjuvantes capazes de resolver o problema de alta viscosidade das formulações farmacêuticas, falta de estabilidade físico química, curta duração de imunidade e muita reação local. Visando atender esses requisitos foram desenvolvidas diversas emulsões A/O mantendo-se a fase aquosa com antígeno, preferencialmente altamente purificado, e variando a fase oleosa composta basicamente de veículo lipofílico e agentes emulsificantes diversos, gerando diversos exemplos de utilização do referido adjuvante em vacinas. Na presente invenção é desnecessário o aquecimento da formulação para mistura dos componentes da mesma. É, portanto, um objeto da presente invenção uma composição compreendendo: a) fase aquosa compreendendo: - de 30 - 40% de antígeno, preferencialmente 40%, mais preferencialmente Vírus Inativado 01 Campos, A24 Cruzeiro e C3 Indaial; - de 0 a 10% de veículo aquoso, mais preferencialmente, solução salina; - de 0 a 1% de adjuvante, preferencialmente 1%, mais preferencialmente saponina; b) fase oleosa compreendendo: - de 50% a 70% de veículo oleoso, preferencialmente 60%, mais preferencialmente óleo mineral; - de 0,01% a 20% de tensoativo polimérico, preferencialmente 1 a 3%, mais preferencialmente tensoativo polimérico derivado de Dimethicone. É também um objeto da presente invenção um processo de produção da formulação compreendendo a etapa de misturar os elementos da fase aquosa (A) compreendendo: - de 30 - 40% de antígeno, preferencialmente 40%, mais preferencialmente Vírus Inativado 01 Campos, A24 Cruzeiro e C3 Indaial; - de 0 a 10% de veículo aquoso, mais preferencialmente, solução salina; - de 0 a 1% de adjuvante, preferencialmente 1%, mais preferencialmente saponina; com os elementos da fase oleosa (B) compreendendo: - de 50% a 70% de veículo oleoso, preferencialmente 60%, mais preferencialmente óleo mineral; - de 0,01% a 20% de tensoativo polimérico, preferencialmente 1 a 3%, mais preferencialmente tensoativo polimérico derivado de Dimethicone; durante cerca de 20 minutos (escala laboratorial) a 12 horas (escala industrial) em baixas temperaturas, preferencialmente temperatura de 2 - 8°C.Summary of the Invention In one aspect, the present invention provides novel and inventive adjuvant compositions capable of solving the problem of high viscosity of pharmaceutical formulations, lack of physical chemical stability, short immunity duration and much local reaction. In order to meet these requirements, several A / O emulsions were developed maintaining the preferably highly purified antigen aqueous phase and varying the oil phase composed basically of lipophilic carrier and various emulsifying agents, generating several examples of the use of said adjuvant in vaccines. In the present invention it is unnecessary to heat the formulation to mix the components thereof. It is therefore an object of the present invention a composition comprising: a) aqueous phase comprising: 30-40% antigen, preferably 40%, more preferably 01 Campos, A24 Cruzeiro and C3 Indaial Inactivated Virus; from 0 to 10% aqueous vehicle, more preferably saline; from 0 to 1% adjuvant, preferably 1%, more preferably saponin; b) an oil phase comprising: - from 50% to 70% oily vehicle, preferably 60%, more preferably mineral oil; - from 0.01% to 20% polymeric surfactant, preferably 1 to 3%, more preferably Dimethicone-derived polymeric surfactant. Also an object of the present invention is a process for producing the formulation comprising the step of mixing the elements of the aqueous phase (A) comprising: - 30 - 40% antigen, preferably 40%, more preferably Inactivated Virus 01 Campos, A24 Cruzeiro and C3 Indaial; from 0 to 10% aqueous vehicle, more preferably saline; from 0 to 1% adjuvant, preferably 1%, more preferably saponin; with the oil phase elements (B) comprising: - from 50% to 70% oily vehicle, preferably 60%, more preferably mineral oil; - from 0.01% to 20% polymeric surfactant, preferably 1 to 3%, more preferably Dimethicone-derived polymeric surfactant; for about 20 minutes (laboratory scale) to 12 hours (industrial scale) at low temperatures, preferably 2-8 ° C.

Estes e outros objetos da invenção serão imediatamente valorizados pelos versados na arte e pelas empresas com interesses no segmento, e serão descritos em detalhes suficientes para sua reprodução na descrição a seguir.These and other objects of the invention will be immediately appreciated by those skilled in the art and companies having an interest in the segment, and will be described in sufficient detail for their reproduction in the following description.

Breve Descrição das Figuras Figura 1: Estrutura básica derivados de Dimethicone.Brief Description of the Figures Figure 1: Basic structure derived from Dimethicone.

Figura 2: Media das reações locais das formulações 1 ((♦) - estado da técnica), 2 ((■) - estado da técnica) e 3 ((A) - exemplo de formulação da presente invenção), descritas a seguir no relatório descritivo.Figure 2: Mean local reactions of formulations 1 ((♦) - prior art), 2 ((■) - prior art) and 3 ((A) - exemplary formulation of the present invention), described below in the report descriptive.

Figura 3: Média de reações locais comparando a Formulação 3 da presente invenção em escala de 1000 litros com a vacina industrial.Figure 3: Average of local reactions comparing Formulation 3 of the present invention on a 1000 liter scale with the industrial vaccine.

Figura 4: Resultados testes oficiais de potência em EPP (Expectativa de Proteção Percentual) comparando a Formulação 3, da presente invenção, em escala de 1000 litros com a vacina industrial.Figure 4: Results of official EPP potency tests (Percentage Protection Expectation) comparing Formulation 3 of the present invention on a 1000 liter scale with the industrial vaccine.

Descrição Detalhada da Invenção Os exemplos aqui mostrados têm o intuito somente de exemplificar uma das inúmeras maneiras de se realizar a invenção, contudo, sem limitar o escopo da mesma.Detailed Description of the Invention The examples shown herein are intended solely to exemplify one of the numerous ways of carrying out the invention, however without limiting the scope thereof.

Exemplo 1. Realização Preferencial Em uma realização preferencial, as formulações feitas nessa presente invenção consistem de duas fases a fase aquosa e a fase oleosa. A fase aquosa é composta de: - 30 - 40% de Antígeno; - Ο - 10% de veículo aquoso; - 0 % -1 % de adjuvante.Example 1. Preferred Embodiment In a preferred embodiment, the formulations made in this invention consist of two phases the aqueous phase and the oil phase. The aqueous phase is composed of: - 30 - 40% of Antigen; - Ο - 10% aqueous vehicle; - 0% -1% adjuvant.

Em uma realização preferencial, os antígenos utilizados na presente invenção são Vírus Inativado 01 Campos, A24 Cruzeiro e C3 Indaial, entretanto outros antígenos podem ser utilizados.In a preferred embodiment, the antigens used in the present invention are Inactivated Virus 01 Campos, A24 Cruzeiro and C3 Indaial, however other antigens may be used.

Em uma realização preferencial, o veículo aquoso da presente invenção é solução salina, entretanto outros veículos aquosos conhecidos do estado da técnica poderão ser utilizados na presente invenção.In a preferred embodiment, the aqueous vehicle of the present invention is saline, however other prior art aqueous vehicles may be used in the present invention.

Em uma realização preferencial, o adjuvante utilizado na presente invenção é saponina, entretanto outros adjuvantes conhecidos do estado da técnica também podem ser utilizados. A fase oleosa foi composta de tensoativos diferentes, dependendo da formulação, que serão descritas abaixo: - 50 - 70% de veículo oleoso; - 0,01 - 20% de tensoativo.In a preferred embodiment, the adjuvant used in the present invention is saponin, however other adjuvants known from the prior art may also be used. The oily phase was composed of different surfactants, depending on the formulation, which will be described below: - 50 - 70% oily vehicle; - 0.01 - 20% surfactant.

Em uma realização preferencial, o veículo oleoso é óleo mineral, entretanto outros veículos oleosos poderão ser utilizados.In a preferred embodiment, the oily vehicle is mineral oil, however other oily vehicles may be used.

Em uma realização preferencial, o tensoativo utilizado na presente invenção é escolhido do grupo que compreende (polimérico derivado de Dimethicone, monooleato de sorbitano, monooleato de sorbitano etoxilado, montanide ISA 70, mas não se restringindo aos mesmos, sendo que outros tensoativos conhecidos do estado da técnica podem ser utilizados. FORMULAÇÃO 1 Emulsão padrão hoje utilizada para a vacina contra febre aftosa, composta de Montanide ISA 70, na proporção de 30% de água em 70% de óleo.In a preferred embodiment, the surfactant used in the present invention is chosen from the group comprising (but not limited to, dimethicone-derived polymer, sorbitan monooleate, ethoxylated sorbitan monooleate, montanide ISA 70, but other surfactants known from the state FORMULATION 1 Standard emulsion used today for the foot-and-mouth disease vaccine, composed of Montanide ISA 70, in a ratio of 30% water to 70% oil.

Modo de preparo: A fase aquosa deve ser misturada na fase oleosa, lentamente por 5 minutos, originando uma pré mistura que deve ficar sob agitação por no mínimo 20 minutos. Em seguida essa pré mistura deve passa por um homogenizador de alta velocidade tipo Silverson “in line” por no mínimo 3 passagens a uma velocidade de 9000 RPM.Preparation: The aqueous phase should be mixed in the oil phase slowly for 5 minutes, giving a premix which should be stirred for at least 20 minutes. This premix must then pass through an inline Silverson high speed homogenizer for at least 3 passes at a speed of 9000 RPM.

Após a homogenização a viscosidade dessa emulsão em particular deve ficar em tomo de 50 a 70 Cps, (viscosidade medida com viscosímetro SV-10 Vibro-viscometer-Malvern), com um tamanho de partícula de < 1 pc (realizada com um contador de partículas Zetasizer Nano S90® (Malvern)). FORMULAÇÃO 2 Emulsão tradicional que utiliza uma mistura de óleo mineral, monooleato de sorbitano (Agente biodegradável sulfactante baseado em ácidos graxos - óleo oléico e açúcares como sorbitol álcool aonde combinados são classificados de Ester de sorbitol) mais monooleato de sorbitano etoxiiado em proporções 40% de água e 60% de óleo mais tensoativos.After homogenization the viscosity of that particular emulsion should be around 50 to 70 Cps (viscosity measured with SV-10 Vibro-viscometer-Malvern viscometer) with a particle size of <1 pc (performed with a particle counter Zetasizer Nano S90® (Malvern)). FORMULATION 2 Traditional emulsion using a mixture of mineral oil, sorbitan monooleate (Fatty acid based biodegradable sulfate agent - oleic oil and sugars such as sorbitol alcohol where combined are classified as sorbitol ester) plus ethoxy sorbitan monooleate in proportions 40% of water and 60% more surfactant oil.

Modo de preparo: A fase aquosa deve ser misturada na fase oleosa, lentamente por 5 minutos, formando uma pré mistura que deve ser mantida sob agitação por no mínimo 20 minutos. Em seguida essa pré mistura deve passar por um homogenizador de alta velocidade, tipo Silverson “in line” por no mínimo 3 passagens a uma velocidade de 9000 RPM.Preparation: The aqueous phase should be mixed into the oil phase slowly for 5 minutes, forming a premix which should be kept under stirring for at least 20 minutes. Then this premix must pass a high-speed Silverson-type in-line homogenizer for at least 3 passes at a speed of 9000 RPM.

Após a homogenização a viscosidade dessa emulsão em particular deve ficar em torno de 100 a 150 Cps (viscosidade medida com viscosímetro SV-10 Vibro-viscometer - Malvern), com uma tamanho de partícula < 1 pc (realizada com um contador de partículas Zetasizer Nano S90® (Malvern)). FORMULAÇÃO 3 Exemplo de formulação da presente invenção que utiliza uma mistura de óleo mineral mais 1% de derivados da Cetyl PEG/PPG-10/1 Dimethicona como agente emulsificante na proporção de 40% de água com 60% de óleo mais tensoativo Modo de preparo: A fase aquosa deve ser misturada na fase oleosa, lentamente por 5 minutos, formando uma pré mistura que deve ser mantida sob agitação por no mínimo 20 minutos. Em seguida essa pré mistura deve passar por um homogenizador de alta velocidade, tipo Silverson “in line” por no mínimo 3 passagens a uma velocidade de 9000 RPM.After homogenization the viscosity of this particular emulsion should be around 100 to 150 Cps (viscosity measured with SV-10 Vibro-viscometer - Malvern viscometer) with a particle size <1 pc (performed with a Zetasizer Nano particle counter S90® (Malvern)). FORMULATION 3 Example of formulation of the present invention using a mixture of mineral oil plus 1% Cetyl PEG / PPG-10/1 Dimethicone derivatives as emulsifying agent in the proportion of 40% water with 60% more surfactant. : The aqueous phase should be mixed into the oil phase slowly for 5 minutes to form a premix which should be stirred for at least 20 minutes. Then this premix must pass a high-speed Silverson-type in-line homogenizer for at least 3 passes at a speed of 9000 RPM.

Após a homogenização a viscosidade dessa emulsão em particular deve ficar em torno de 20 a 50 Cps (viscosidade medida com viscosímetro SV-10 Vibro-viscometer - Malvern), com um tamanho de partícula de < 1 pc (realizada com um contador de partículas Zetasizer Nano S90® (Malvern)).After homogenization the viscosity of this particular emulsion should be around 20 to 50 Cps (viscosity measured with SV-10 Vibro-viscometer - Malvern viscometer) with a particle size of <1 pc (performed with a Zetasizer particle counter). Nano S90® (Malvern)).

No cenário atual para vacinas, especialmente para vacinas contra FA, o maior desafio é o desenvolvimento de uma formulação que consiga associar baixa viscosidade, estabilidade físico-química, prolongada duração de imunidade e pouca reação local. Visando atender esses requisitos foi desenvolvido uma série de emulsões A/O mantendo-se a fase aquosa com antígeno altamente purificado, variando a fase oleosa composta basicamente de veículo lipofílico e agentes emulsificantes diversos. A presente invenção tem como umas das novidades novidade o uso de um agente emulsificante sintético derivado da Dimeticona que pode ser usado para emulsões A/O e emulsões duplas A/O/A. Tem também a propriedade de se homogeneizar entre os demais componentes da fase oleosa a frio, ou seja, sem o risco de alterar ou degradar nenhum composto da emulsão. Com isso vacinas como a contra FA, entre outras com princípio ativo termicamente sensível, podem ser utilizadas sem a possibilidade de degradação do antígeno. Dimethicone também chamada de polidimetisiloxane (PDMS) pertence ao grupo de polímeros de organosilicatos comumente referidos como silicones. São comumente usados como silicones orgânicos baseados em polímeros orgânicos particularmente conhecidos por suas capacidades reológicas. A fórmula desse composto é descrita como Cetyl PEG/PPG-10/1 Dimethicone (nome comercial ABIL EM 90) com balanço hidrofilico/lipofilico (BHL) de 5.0, semelhante aos tensoativos previamente descritos. Sendo o mesmo um agente emulsificante não iônico extremamente estável devido a sua estrutura polimérica e polifuncional. A fórmula geral do composto com sua estrutura está exemplificada abaixo, na figura 1 onde: - O grupo A é um polieter, que se refere a polímeros que contém um grupo funcional de éter na sua cadeia principal. - O grupo B é um grupo estrutural de siloxano composto por R2SiO, aonde R é um átomo de hidrogênio ou um grupo de carbono que pertence a classe dos silicones orgânicos. Podem ser cadeias ramificadas ou não, com estrutura que pode variar de acordo com os átomos de oxigênio - Si-O-Si-O conectados com uma ligação o, e uma cadeia lateral R anexada ao átomo de silicone. - O grupo C é um grupo de Alkyl geralmente abreviado com um símbolo R que é um grupo funcional ou de cadeia lateral que consiste de carbonos combinados unicamente e átomos de hidrogênio.In the current scenario for vaccines, especially for AF vaccines, the biggest challenge is the development of a formulation that can combine low viscosity, physicochemical stability, prolonged immunity duration and poor local reaction. In order to meet these requirements a series of A / O emulsions was developed keeping the aqueous phase with highly purified antigen, varying the oil phase composed basically of lipophilic carrier and various emulsifying agents. Novelty of the present invention is the use of a synthetic emulsifier derived from Dimethicone which can be used for A / O emulsions and double A / O / A emulsions. It also has the property of being homogenized among the other components of the cold oil phase, ie without the risk of altering or degrading any emulsion compound. Thus, vaccines such as against AF, among others with thermally sensitive active principle, can be used without the possibility of antigen degradation. Dimethicone also called polydimethylsiloxane (PDMS) belongs to the group of organosilicate polymers commonly referred to as silicones. They are commonly used as organic silicones based on organic polymers particularly known for their rheological capabilities. The formula of this compound is described as Cetyl PEG / PPG-10/1 Dimethicone (trade name ABIL EM 90) with hydrophilic / lipophilic balance (BHL) of 5.0, similar to the surfactants previously described. Being the same an extremely stable nonionic emulsifying agent due to its polymeric and polyfunctional structure. The general formula of the compound with its structure is exemplified below, in Figure 1 where: - Group A is a polyether, which refers to polymers that contain an ether functional group in its main chain. - Group B is a siloxane structural group composed of R2 SiO, where R is a hydrogen atom or a carbon group that belongs to the class of organic silicones. They may be branched or unbranched chains, with structure which may vary according to the oxygen atoms - Si-O-Si-O connected with an o bond, and a side chain R attached to the silicone atom. - Group C is an Alkyl group generally abbreviated with an R symbol which is a functional or side chain group consisting of uniquely combined carbons and hydrogen atoms.

As emulsões A/O de acordo com a invenção utilizam uma variação deste agente emulsificante entre 0,01-20,00%, preferencialmente uma faixa entre 1 a 3% sendo suficiente para uma emulsão estável.The W / O emulsions according to the invention utilize a range of this emulsifying agent between 0.01-20.00%, preferably a range between 1 and 3% being sufficient for a stable emulsion.

Para vacinas baseadas em micro-organismos vivos, atenuados, inativados, intactos, subunidades, recombinantes, os adjuvantes podem ser utilizados para aumentar as respostas imunes. O material antigênico pode ser misturado ao adjuvante que pode estar na fase aquosa ou na fase oleosa da emulsão e estes podem ser também utilizados como veículos para agentes terapêuticos, especialmente os hidrossolúveis, ou outros ingredientes ativos solúveis. Assim, desencadeia respostas imunes ou respostas farmacológicas.For vaccines based on live, attenuated, inactivated, intact, subunit, recombinant microorganisms, adjuvants may be used to enhance immune responses. The antigenic material may be mixed with the adjuvant which may be in the aqueous or oil phase of the emulsion and these may also be used as carriers for therapeutic agents, especially water soluble, or other soluble active ingredients. Thus, it triggers immune responses or pharmacological responses.

Nos exemplos abaixo, para ilustrar a presente invenção comparamos duas formulações amplamente conhecidas para vacinas contra febre aftosa com a proposta inovação. A idéia é de mostrar os benefícios da invenção quando comparados com formulações mais largamente utilizadas.In the examples below, to illustrate the present invention we compare two widely known formulations for foot-and-mouth vaccines with the proposed innovation. The idea is to show the benefits of the invention as compared to more widely used formulations.

EXEMPLOS sintética etoxilados; derivados do álcool polivinílico; alcoóis de lanolina etoxilados; poloxâmeros; polietilenoglicóis etoxilados; alcoóis e seus condensados (éster e éter) etoxilados, propoxilados, sulfatados, fosfatados e carbonatados, derivados de amina e amida; derivados de aminoácidos; alquilglicosídeo, lecitina, ____________________________________________________________colesterol;________ TESTES CLÍNICOS FORM 1: emulsão A/O padrão composta de Montanide ISA 70; FORM 2: emulsão A/O composta da mistura de óleo mineral, monooleato de sorbitano e monooleato de sorbitan etoxilado; FORM 3 (invenção): emulsão A/O contendo agente derivado do Dimethicone. Para avaliação da invenção, os testes clínicos em animais seguiram a Instrução Normativa n°50 do MAPA (controle de qualidade da vacina contra Febre Aftosa, incluindo testes de tolerância (Alt 16), potência (Art. 17 e 18) e estabilidade da emulsão (Art. 23). O total de 162 animais, bovinos de 18 a 24 meses de idade, sem anticorpos contra FA, foi dividido em 3 grupos experimentais, com 54 animais cada um. Os animais foram vacinados pela via subcutânea com as formulações descritas como FORM 1, FORM 2 e FORM 3 acima. Nas formulações foi utilizando antígeno comercial da vacina contra FA, inócuo (vírus 01 Campos, C3 Indaial e A24 Cruzeiro). O sangue dos animais foi coletado no dia zero (momento prévio a aplicação da vacina) e após 28 dias da vacinação (T=0 e T=28), para avaliação da potência com o kit ELISA-CFL (Competição em Fase Líquida) fabricado pelo PANAFTOSA. Também foi avaliado o tamanho da reação local (medida do diâmetro da reação) em cada animal individualmente e a média foi comparada entre as 3 formulações testadas.EXAMPLES Synthetic ethoxylates; polyvinyl alcohol derivatives; ethoxylated lanolin alcohols; poloxamers; ethoxylated polyethylene glycols; ethoxylated, propoxylated, sulfated, phosphated and carbonated alcohols and their ethers (ester and ether), amine and amide derivatives; amino acid derivatives; alkylglycoside, lecithin, _______________________________________________________________________ CLINICAL TESTS FORM 1: standard A / O emulsion composed of Montanide ISA 70; FORM 2: A / O emulsion composed of the mixture of mineral oil, sorbitan monooleate and ethoxylated sorbitan monooleate; FORM 3 (invention): A / O emulsion containing Dimethicone-derived agent. For evaluation of the invention, clinical animal testing followed MAPA Normative Instruction No. 50 (FMD vaccine quality control, including tolerance (Alt 16), potency (Art. 17 and 18) and emulsion stability tests. (Art. 23) A total of 162 animals, 18-24 months-old bovine animals, without antibodies to AF, were divided into 3 experimental groups, with 54 animals each.The animals were subcutaneously vaccinated with the formulations described. as FORM 1, FORM 2 and FORM 3. In the formulations it was used innocuous commercial FA vaccine antigen (01 Campos, C3 Indaial and A24 Cruzeiro virus) .The blood of the animals was collected on day zero (time before 28 days after vaccination (T = 0 and T = 28), for potency evaluation with the ELISA-CFL (Liquid Phase Competition) kit manufactured by PANAFTOSA. reaction) in each animal individually and the mean was compared between the 3 formulations tested.

Devido às exigências regulatórias foi avaliada a presença de proteínas não estruturais (PNE). Nesse teste, 18 animais são previamente selecionados, para ausência total de proteínas não estruturais (no TO) com ELISA 3ABC, comercializado pelo PANAFTOSA aonde os mesmos não podem apresentar reações para PNE. Após essa seleção os animais são vacinados e re-vacinados 28 dias após a primeira vacinação (T28). Após 28 dias de re-vacinação (T56) são coletadas amostras e testadas para PNE com dois testes: ELISA 3 ABC (nome dado as proteínas não estruturais 3 A, 3 B e 3C) e um teste confirmatório chamado Imunoeletrotransferência (EITB).Due to regulatory requirements, the presence of non-structural proteins (PNE) was evaluated. In this test, 18 animals are previously selected for total absence of nonstructural proteins (in TO) with ELISA 3ABC, commercialized by PANAFTOSA where they can not present reactions for PNE. After this selection the animals are vaccinated and re-vaccinated 28 days after the first vaccination (T28). After 28 days of re-vaccination (T56) samples are collected and tested for PNE with two tests: ELISA 3 ABC (name given to non-structural proteins 3 A, 3 B and 3C) and a confirmatory test called Immunoelectrotransference (EITB).

Resultados do teste de potência: A vacina conforme formulação da presente invenção demonstrou resultados de potência dentro da faixa de proteção esperada (EPP = expectativa percentual de proteção).Potency Test Results: The vaccine according to the formulation of the present invention demonstrated potency results within the expected protection range (EPP = percent expectation of protection).

Tabela 2: Média de potência (EPP) aos 28 dias após vacinação.Table 2: Mean potency (EPP) at 28 days after vaccination.

Resultado dos testes de proteínas não estruturais Nenhum animal foi considerado positivo para ambos os testes.Non-Structural Protein Test Results No animals were found positive for both tests.

Resultado do teste de reação local: Conforme demonstrado na Figura 2, houve uma redução de aproximadamente 86% dos edemas nos animais que foram vacinados com a nova formulação.Local reaction test result: As shown in Figure 2, there was an approximately 86% reduction in edema in animals that were vaccinated with the new formulation.

ESTUDO DE ESTABILIDADE DAS FORMULAÇÕESSTABILITY STUDY OF FORMULATIONS

Segundo legislação do MAPA (Instrução Normativa n°50) todas as vacinas devem ser testadas quanto a estabilidade de suas emulsões (sem separação de fases) nas condições 2 a 8 °C por no mínimo 30 dias e 37°C por 15 dias. Além disso, durante o estudo, não pode ser visualizado gotículas ou bolhas no fundo do frasco.According to MAPA legislation (Normative Instruction No. 50) all vaccines must be tested for the stability of their emulsions (without phase separation) under conditions 2 to 8 ° C for at least 30 days and 37 ° C for 15 days. Also, during the study, no droplets or bubbles can be seen at the bottom of the vial.

Os resultados do estudo de estabilidade estão apresentados na Tabela 3.The results of the stability study are presented in Table 3.

No intuito de averiguar a robustez da invenção o teste de estabilidade foi estendido por 68 dias.In order to ascertain the robustness of the invention the stability test was extended for 68 days.

Tabela 3: Estabilidade das emulsões testadas: Para comprovação de que o escalonamento da presente patente é efetivo foi realizada uma partida de 1000 litros utilizando-se os equipamentos da produção e o sistema de produção e a mesma foi comprada com uma vacina industrial com volume de produção completo de aproximadamente 13000 litros. As formulações foram então submetidas aos testes oficiais com o mesmo numero de animais e comparados.Table 3: Stability of the emulsions tested: To prove that the staggering of the present patent is effective, a starting of 1000 liters was made using the production equipment and the production system and it was purchased with an industrial vaccine with volume of complete production of approximately 13000 liters. The formulations were then subjected to official testing with the same number of animals and compared.

Os resultados estão presentes abaixo: Tabela 4- Média de reações locais comparando a Formulação 3 da presente invenção em escala de 1000 litros com a vacina industrial.The results are presented below: Table 4- Average of local reactions comparing Formulation 3 of the present invention on a 1000 liter scale with the industrial vaccine.

Tabela 5 - Resultados testes oficiais de potência em EPP (Expectativa de Proteção Percentual) comparando a Formulação 3, da presente invenção, em escala de 1000 litros com a vacina industrial.Table 5 - Results of official EPP potency tests (Percentage Protection Expectation) comparing Formulation 3 of the present invention on a 1000 liter scale with the industrial vaccine.

Dessa forma, tem-se na presente invenção uma formulação nova e inventiva da qual conclui-se que: - as reações locais destas formulações quando comparadas com as formulações conhecidas (tensoativos baseado em ácidos graxos, óleo oléico e açúcares além de produtos comerciais como Montanide ISA 70) foram muito menores, o que leva a uma diminuição nas perdas de animais de produção; - com relação à potência, quando comparado com outros agentes emulsificantes teve o mesmo desempenho no campo, o que valida este produto como agente emulsificante com efeito adjuvante alternativo, tanto em escala de bancada como em escala semi-industrial em grandes volumes; - a formulação proposta quando utilizada com os mesmo equipamentos e condições da produção demonstra-se aplicável em larga escala e factível mesmo com os equipamentos e condições da produção. - a formulação proposta demonstra-se nova, aplicável industrialmente, solucionando vários desafios surgidos desde a primeira formulação da vacina contra febre aftosa e potencialmente para outros antígenos que venham a utilizar emulsões água em óleo em suas formulações.Thus, in the present invention there is a novel and inventive formulation which concludes that: - the local reactions of these formulations when compared to known formulations (surfactants based on fatty acids, oleic oil and sugars in addition to commercial products like Montanide). ISA 70) were much smaller, which leads to a decrease in losses of farm animals; - with respect to potency, when compared to other emulsifying agents, it had the same performance in the field, which validates this product as an emulsifying agent with alternative adjuvant effect, both on bench scale and on semi-industrial scale in large volumes; - the proposed formulation when used with the same production equipment and conditions is applicable on a large scale and feasible even with the production equipment and conditions. - The proposed formulation proves to be new, industrially applicable, solving several challenges that have arisen since the first FMD vaccine formulation and potentially for other antigens that will use water-in-oil emulsions in their formulations.

Os versados na arte valorizarão os conhecimentos aqui apresentados e poderão reproduzir a invenção nas modalidades apresentadas e em outros variantes, abrangidos no escopo das reivindicações anexas.Those skilled in the art will appreciate the knowledge presented herein and may reproduce the invention in the embodiments presented and in other embodiments within the scope of the appended claims.

ReivindicaçõesClaims

Claims

Pharmaceutical formulation comprising: (a) an aqueous phase containing: - 30 - 40% of antigens originating from the foot-and-mouth disease virus genus Aphtovirus: - from 0 to 10% aqueous vehicle; - from 0 to 1% saponin adjuvant; (b) an oil phase containing: - from 50% to 70% oily vehicle; - from 0.01% to 20% of dimethyl-derived polymeric surfactant.

Pharmaceutical formulation according to claim 1, characterized in that it comprises antigen selected from the group comprising G1 Inactivated Virus Campos, A24 Cruzeiro, C3 Indaial.

Pharmaceutical formulation according to claim 1, characterized in that it comprises mineral oil as an oil carrier.

Pharmaceutical formulation according to Claim 1, characterized in that it comprises 1 to 3% of dimethyl-derived polymeric surfactant.

Process for producing the formulation as defined in claims 1 to 4, characterized in that it comprises the step of mixing the elements of the aqueous phase (A) comprising: - 30 - 40% antigens from the foot-and-mouth disease virus genus Aphtovirus; - from 0 to 10% aqueous vehicle; - from 0 to 1% saponin adjuvant; with the oil phase elements (B) comprising: - from 50% to 70% oil vehicle; - from 0.01% to 20% of dimethicone-derived polymeric surfactant.

Process for producing the formulation according to claim 5, characterized in that it comprises mixing the elements of A with the elements of B for about 20 minutes to 12 hours at low temperatures.

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Process for producing the formulation according to claim 6, characterized in that it comprises mixing elements A with elements B at a temperature of 2 - 8 ° C.