"PROCESSO PARA OBTENçãO DE SORO ANTIBOTULISMO E PRODUTO OBTIDO". Caracterizado por compreender a confecção do soro em vários estágios, sendo o modo de elaboração do produto um processo de fabricação que é realizado em duas etapas: produção de plasmas e processamento de plasmas, sendo que na primeira etapa, de produção em eq³inos de plasmas hiperimunes, se realiza a campo em local apropriado destinado especificamente para produção de plasmas, já a segunda é feita em local isolado; a produção dos plasmas hiperimunes obedece à inoculação de toxinas e toxóides botulínicos que é feita em cavalos normais não portadores de doenças contagiosas, para obtenção de antitoxinas específicas contra as toxinas botulínicas C e D, no esquema de imunização e reimunização os animais soroprodutores não devem ser medicados com produtos biológicos, antibióticos ou agentes quimioterápicos durante o período de hiperimunização e sangrias de coletas de plasmas, para se evitar presença de substâncias estranhas no sangue do animal, na hiperimunização de base, os animais selecionados para produção de soro antibotulínico tipo C e D, são previamente inoculados com um volume de 10 ml de toxóide botulínico tipo C e 10 ml de toxóide botulínico tipo D, ambos adicionados de precipitado de alúmen a 0,5%, por via intramuscular, após 90 dias repete-se a mesma dose, este procedimento visa obter um estímulo imunológico primário no animal, no trigésimo sétimo dia após a inoculação da segunda dose, o cavalo recebe um inoculo de 50 ml de toxóide precipitado com alúmen a 0,5 % por via intramuscular, a seguir, com cinco dias de intervalo entre cada uma, são inoculados pela mesma via 100 ml na quarta e quinta inoculações; 150 ml na Sexta; 200 ml na sétima; 250 ml na oitava; 250 ml de toxina precipitada com cloreto de cálcio a 0,5%, no modo e na via de inoculações é utilizada a via subcutânea sendo que nas hiperimunização de base, as duas primeiras doses são injetadas em oito pontos diferentes dos animais, enquanto as demais são aplicadas ao redor dos granulomas formados pelas duas primeiras inoculações, estas inoculações são feitas em três etapas separadas com duas horas de intervalo entre elas, nas reimunizações, as mesmas também são feitas em três etapas, também separadas com duas horas de intervalo entre elas, após esse procedimento e efetuada a sangria de prova que após sete dias após a última inoculação da série, procede-se uma sangria exploradora para se definir a produção de antitoxina e assim sangrar ou não o animal, com base na sangria de prova são sangrados os animais que apresentarem 200 U I no mínimo no titulo de antitoxina, a sangria é processada coletando-se de forma estéril, um volume de sangue de 6% do peso do animal, em três etapas com intervalo de 24 horas, assim mantém-se os sangues sob refrigeração de 2 a 8 <198>C quando não estão sendo manipulados, aquecer a parte figurada para plasmaferese da seguinte forma; o sangue do animal é coletado em frascos estéreis com solução anticoagulante de citrato de sódio e ácido cítrico, o plasma obtido na primeira etapa da sangria, após 24 de sedimentação, tem o seu plasma separado por sifonagem, e os elementos figurados (Hemácias, Leucócitos, Linfócitos e Plaquetas), retornam ao mesmo animal após a segunda etapa da sangria, os elementos figurados obtidos na segunda e terceira etapas da sangria retomam ao animal do mesmo modo, dessa maneira ocorre uma rápida reposição desses elementos e uma rápida recuperação da volemia, alem disso, esse procedimento aumenta a produtividade do animal e evita anemia provocada por perda de sangue, na conservação do plasma é feito um grupo de plasmas imediatamente a sua retirada e adicionado uma solução de fenol a 20%, na proporção de 20 ml de solução de fenol 20% para cada litro de plasma, encaminha-se para o laboratório para a segunda etapa da produção, efetua-se o processamento do plasma hiperimune para purificação e concentração do plasma, onde na purificação visa a retirada das frações protéicas do plasma de cavalo que não contém anticorpos específicos para a toxina inoculada, três métodos podem ser utilizados para essa finalidade sendo o primeiro a purificação das imunoglobulinas pelo sulfato de amónia e diálise; o segundo purificação das imunoglobulinas por sulfato de amónia, a seguir, diálise, e finalmente digestão péptica, na terceira a purificação das imunoglobulinas por digestão péptica do plasma hiperimune, seguida de aumento de temperatura, sulfato de amónia, e finalmente diálise, este último método obtendo-se um produto sem contaminação e de menor peso molecular, sendo então, menos antigênico, diminuindo os riscos de reações adversas na soroterapia, as drogas utilizadas na purificação do plasma, detêm assim suas concentrações e finalidades; pepsina, para digestão da proteina, 5g/1000g de plasma; tolueno: facilita a precipitação de lipóides. 0,1%; pirofosfato de sódio: inibe a oxidação catalítica do ferro pelo fenol utilizado como preservativo do plasma.0,2%;sulfato de amónia: Agente precipitante.30%; ácido clorídrico: para ajuste do pH; hidróxido de sódio: para ajuste do pH; feita a primeira precipitação, filtra-se e descarta-se o precipitado, passando-se a segunda precipitação, que consiste na precipitação das frações ativas das globulinas, filtra-se em lona, e o precipitado que se obtêm, é levemente prensado mecanicamente em prensa de aço inox, para se obter uma massa seca, retendo-se as globulinas, o material assim obtido é dialisado em câmara de água corrente refrigerada a 5 <198>C, por 2 dias, até não haver resíduos de sulfato de amónia, utiliza-se o fenol a 0,35g% como preservativo, o produto obtido na diálise, ou um grupo desses obtidos, devem ser devidamente filtrados em filtro clarificador, e em seguida em filtro esterilizante e despirogenizante, cada processamento, ou um grupo de diversos processamentos são dosadas à potência e esterilidade, após a filtração para recipientes de vidro para estoques, dotados de equipamentos especiais que lhes são adaptados, são mantidos em câmara fria de 2 a 8<198>C, para comporem o produto final, o preparo do soro se da após a padronização e, da aprovação da qualidade, dos dois soros que comporão o produto, transvasa-se os mesmos para tanque de aço inoxidável, estéril, hermético, em ambiente estéril, através transvase em circuito fechado, utilizando-se pressão positiva pela injeção de ar filtrado estéril, dos diferentes recipientes de estoque, sob a proteção do fluxo laminar, completa-se o volume com salina estéril, o produto final deverá ser homogeneizado e devidamente diluído para as potências exigidas conforme o prazo de validade de sendo este prazo assim estipulado; para validade de 1 ano excesso de atividade maior de 10%; para validade de 2 anos excesso de atividade maior de 15%; para validade de 3 anos excesso de atividade maior de 20%;para validade de 4 anos excesso de atividade maior de 25%; para validade de 5 anos excesso de atividade maior de 30%; e deverá conter para 3 anos de validade para doses de 5 ml; imunoglobulinas específicas do clostridium botulinum C ......... 600 U.I./ml imunoglobulinas específicas do clostridium botulinum D ......... 600 U.I./ml fenol ...........................................................< 5,0 mg solução isotónica QSP ........................................... 5 ml."PROCESS FOR OBTAINING ANTIBOTULISM SERUM AND PRODUCE OBTAINED". Characterized by understanding the preparation of the serum in various stages, the method of preparation of the product is a manufacturing process that is carried out in two steps: plasma production and plasma processing, and in the first stage, production of equine hyperimmune plasmas. , is carried out in the field in an appropriate place specifically intended for the production of plasmas, while the second is done in an isolated place; The production of hyperimmune plasmas obeys the inoculation of botulinum toxins and toxoids that is made in normal horses without contagious diseases, to obtain specific antitoxins against botulinum toxins C and D, in the immunization and reimmunization scheme the seroproductive animals should not be medicated with biological products, antibiotics or chemotherapeutic agents during the period of hyperimmunization and plasma collection bleedings, to avoid the presence of foreign substances in the animal's blood, in the base hyperimmunization, the animals selected for the production of type C and D antibotulin serum. are previously inoculated with a volume of 10 ml botulinum toxoid type C and 10 ml botulinum toxoid type D, both added with 0.5% alum precipitate intramuscularly, after 90 days the same dose is repeated, This procedure aims at obtaining a primary immunological stimulus in the animal, in the thirty-seventh day after inoculation of the second dose, the horse receives a 50 ml inoculum of 0.5% alum precipitated toxoid intramuscularly, then five days apart each fourth and fifth inoculations; 150 ml on Friday; 200 ml on the seventh; 250 ml on the eighth; 250 ml of 0.5% calcium chloride precipitated toxin, the subcutaneous route and route of inoculation is used and in the base hyperimmunization, the first two doses are injected at eight different points of the animals, while the other are applied around the granulomas formed by the first two inoculations, these inoculations are done in three separate steps with two hours apart, in reimmunizations, they are also made in three steps, also separated with two hours apart, After this procedure and the test bleed is performed that after seven days after the last inoculation of the series, an exploratory bleed is performed to define the antitoxin production and thus to bleed the animal or not, based on the test bleed the In animals presenting at least 200 IU in the antitoxin titre, bleeding is processed by sterile collection, a blood volume of 6% In the case of the animal, in three 24-hour intervals, the blood is kept refrigerated at 2 to 8 ° C when not being handled, heating the figured part for plasmapheresis as follows; the blood of the animal is collected in sterile vials with anticoagulant solution of sodium citrate and citric acid, the plasma obtained in the first bleeding stage, after sedimentation 24, has its plasma separated by siphoning, and the figurative elements (red blood cells, leukocytes). , Lymphocytes and Platelets), return to the same animal after the second bleed stage, the figurative elements obtained in the second and third bleed stages return to the animal in the same way, thus there is a quick replacement of these elements and a rapid recovery of blood volume, In addition, this procedure increases the productivity of the animal and avoids anemia caused by blood loss. In plasma conservation, a group of plasmas is immediately removed and a 20% phenol solution is added, in the proportion of 20 ml solution. of 20% phenol for each liter of plasma, is sent to the laboratory for the second stage of production, the hip plasma is processed erimune for plasma purification and concentration, where purification aims to remove protein fractions from horse plasma that do not contain antibodies specific for the inoculated toxin, three methods can be used for this purpose, the first being the purification of immunoglobulins by ammonium sulfate. and dialysis; the second purification of immunoglobulins by ammonium sulfate, following dialysis, and finally peptic digestion, in the third purification of immunoglobulins by hyperimmune plasma peptide digestion, followed by temperature increase, ammonium sulfate, and finally dialysis, the latter method obtaining a product without contamination and of lower molecular weight, thus being less antigenic, reducing the risks of adverse reactions in serotherapy, the drugs used in plasma purification, thus have their concentrations and purposes; pepsin, for protein digestion, 5g / 1000g plasma; toluene: facilitates lipid precipitation. 0.1%; sodium pyrophosphate: inhibits the catalytic oxidation of iron by phenol used as a plasma preservative.0.2%, ammonium sulfate: precipitating agent.30%; hydrochloric acid: for pH adjustment; sodium hydroxide: for pH adjustment; After the first precipitation, the precipitate is filtered and discarded, the second precipitation, which consists of the precipitation of the active fractions of the globulins, is filtered on canvas, and the precipitate that is obtained is lightly mechanically pressed in stainless steel press, to obtain a dry mass, retaining the globulins, the material thus obtained is dialyzed in a cold running water chamber at 5 <198> C for 2 days, until there is no residue of ammonium sulfate, 0.35g% phenol is used as a preservative, the product obtained from dialysis, or a group of these obtained, should be properly filtered through a clarifying filter, and then through a sterilizing and pyrogenizing filter, each processing, or a group of several The processes are dosed for potency and sterility, after filtration to glass storage containers, equipped with special equipment adapted to them. They are kept in a cold chamber from 2 to 8 <198> C, to compose the product. Finally, the preparation of the serum takes place after standardization and, after the approval of the quality, of the two serums that will compose the product, they are transferred to sterile, hermetic stainless steel tank, in a sterile environment, through a circuit overflow. closed, using positive pressure by injecting sterile filtered air from the different stock containers under the protection of laminar flow, the volume is completed with sterile saline, the final product should be homogenized and properly diluted to the required powers as required. the period of validity of this period being so stipulated; for validity of 1 year excess of activity greater than 10%; for validity of 2 years excess activity greater than 15%; for validity of 3 years excess of activity greater than 20%, for validity of 4 years excess of activity greater than 25%; for validity of 5 years excess activity greater than 30%; and shall contain for 3 years of validity for 5 ml doses; clostridium botulinum D specific immunoglobulins ......... 600 IU / ml clostridium botulinum D specific immunoglobulins ......... 600 IU / ml phenol ........... ................................................ <5 .0 mg QSP isotonic solution ............................... 5 ml.