BG61475B1

BG61475B1 - средство за лечение на спин и метод за прилагането му

Info

Publication number: BG61475B1
Application number: BG94567A
Authority: BG
Inventors: Любомир Шиндаров; Михаил Александров; Михаил Будоров; Веселин Русев; Душка Стойчева; Христо Дончев
Original assignee: Любомир Шиндаров; Михаил Александров
Priority date: 1991-06-04
Filing date: 1991-06-04
Publication date: 1997-09-30
Also published as: BG94567A

Abstract

1. Средство за лечение на СПИН, характеризиращо се с това, че включва от 10 до 20% воден разтвор нанатриев тиосулфат и аскорбинова киселина или всеки от тези разтвори, поставени в изотоничен разтворв съотношение 4:1/ 0,5/ и смесвани непосредственопреди прилагането.

Description

Изобретението се отнася до средство за лечение на СПИН и метод за прилагането му при болни и безсимптомни лица, инфектирани с човешки имунодефицитен вирус /HIV/.

Познати са различни по химически състав средства, селекционирани при скрининг в опити in vitro, които инхибират отделни фази от репликацията на HIV в клетъчни култури. Преобладаващата част от тези инхибитори имат силно изразена цитотоксичност, която е контраиндицирана за терапевтичното им приложение, а други се оказват неефективни при третиране на лица с HIV инфекция /1/.

В момента единственото средство, което се прилага с известен успех при СПИН, е препаратът азидотимидин /зидовудин/ - аналог на тимидина, с потискащ ефект върху репликацията на HIV, но неспособен да прекрати инфекцията /2/.

Недостатък на това средство е, че продължителното му прилагане води до животозастрашаващи увреждания на организма, поради което не е подходящо за поддържаща хронична терапия, и в най-добрия случай може да подобри временно състоянието на пациента и само да удължи живота му в ограничен срок /3,4/.

Едновременно с продължаващото търсене на нови, потенциално активни антивирусни средства или на подходящи комбинации от вече познати инхибитори се счита, че откриването на средство срещу СПИН, характеризиращо се с минимална токсичност при режим на хронична терапия, би представлявало значителен успех.

Задачата на изобретението е да се създадат средство за лечение на СПИН, което да действа в активно антивирусно състояние при освобождаването му от смесването на химически съединения, всяко от които не притежава антивирусно свойство и е в безвредно за организма количество, и метод за приложение на средството, обезпечаващ терапевтичния му ефект и безвредността за организма.

Задачата се решава със средство на база натриев тиосулфат /Na₂S₂0₃.5H₂0/ и аскорбинова киселина.

Натриевият тиосулфат се използва като антидот при някои видове отравяния и няма анти-HIV свойства. Аскорбиновата киселина е нормално потребна за организма, прилага се при различни болестни състояния и няма анти- HIV свойства.

В резултат на предварителни опити е установена като подходяща форма от 10% до 20% воден разтвор на всяко от двете съединения, които непосредствено преди приложението се смесват в съотношението натриев тиосулфат към аскорбинова киселина 4:1 /± 0,5/.

Друга подходяща форма се приготвя, като водните разтвори на всяко от двете съединения се вливат в изотонични разтвори, които преди приложението се смесват в посоченото съотношение между двата компонента. Сместа, получена от водните или от изотоничните им разтвори, представлява лечебно средство.

Методът за прилагане на лечебното средство е венозното му въвеждане в количество от 4 до 10 g дневна доза в зависимост от клиничното състояние и теглото на пациента. Той е приложим и при показания за провеждане на поддържаща хронична терапия.

Предимствата на изобретението се състоят в това, че средството има ниска токсичност, добра поносимост и терапевтичен ефект.

Изобретението се пояснява със следващите примери.

Пример 1. Остра токсичност на мишки

Лечебното средство представлява смес от водни разтвори на двата компонента в съотношение 4:1 и се приготвя непосредствено преди инжектиране. Въвежда се в опашната вена на бели мишки Balbc, в обем 0,10 до 0,25 ml. Изпитани са дози 500, 1000, 1500, 2000 и 2500 mg/kg телесно тегло, всяка от които представлява сума в mg на двата компонента, съдържащи се във въведения обем на сместа. Въз основа на смъртността, настъпваща почти мигновено след инжектирането, по метода на Першин бе изчислено ЛД_Я- 1440 mg/kg телесно тегло.

Пример 2. Венозна поносимост на зайци и плъхове.

Проверява се венозната поносимост на 4 бели зайци, порода Новозеландска, с телесно тегло 4,0 - 4,8 kg. Лечебното средство, представляващо смес от водни разтвори на двата компонента в съотношение 4:1, непосредствено след смесването се инжектира в маргиналната ушна вена, в обем 1,2-4,1 ml съобразно теглото на животните и големината на дозата. Изпитват се дози 50 mg/kg, 100 mg/kg, 150 mg/kg, 200 mg/kg като всяка от тях представлява сума в mg на двата компонента във въвеждания обем на сместа. При дозите, включително 150 mg/kg се наблюдава поносимост. При заека, получил 200 mg/kg, освен силна възбуда се наблюдава атаксия с пареза на задните крайници.

Влиянието върху артериалното налягане и сърдечната честота се изследва на 13 наркотизирани с хексобарбитал плъхове Вистар, с телесно тегло от 200 до 300 g. Лечебното средство се приготвя като смес от водните разтвори на двата компонента в съотношение 4:1. Животните се инжектират венозно с дози 50 mg/kg, 100 mg/kg и 200 mg/kg, всяка от които представлява сума в mg на двата компонента във въвеждания обем на сместа. При дози 50 mg/kg и 100 mg/kg не се наблюдават статистически значими промени в артериалното налягане до 14-ия час, а също така и в сърдечната честота. При доза 200 mg/kg се наблюдава значително повишаване на артериалното налягане, което се снижава постепенно, но остава над изходното, докато в сърдечната честота липсват статистически значими промени.

Пример 3. Подостра токсичност на кучета

Изпитването се провежда на 6 кучета порода Бигьл, с телесно тегло от 10 до 17 kg. Лечебното средство, представляващо смес от водни разтвори на двата компонента в съотношение 4:1, непосредствено след смесването се инжектира венозно. Изпитват се дози 50 mg/kg и 100 mg/kg, всяка от които представлява сума в mg на двата компонента във въвеждания обем на сместа. Две от кучетата се инжектират с ежедневна доза 50 mg/kg, другите две - с ежедневна доза 100 mg/kg, а останалите две не се инжектират за контрола. Ежедневните дози се инжектират в течение на 30 дни, при което на 7-ия ден от началото и на 48-ия час след завършването се взема венозна кръв за хематологични и биохимични изследвания: хемоглобин, еритроцити, левкоцити, диференциална кръвна картина, утаяване на кръвта, тромбоцити, протромбиново време, фибриноген, електролити /натрий, калий, хлор, калций, фосфор/, азотсъдържащи вещества /урея, креатинин, пикочна киселина/, общ белтък, албумин, кръвна захар, билирубин, аспартак, аминотрансфераза, глутаматпируваттрансаминаза, глутаматтрансфераза, холестерол, триглицериди, показатели на алкално-киселинното равновесие.

При тези изследвания не са получени резултати за проявена токсичност и при двете изпитани дози на лечебното средство. Вътрешните органи на третираните и контролните кучета, убити на 48-ия час след 30-ия ден, изследвани макроскопски, хистологично и електронномикроскопски, не показват дистрофични и дегенеративни промени.

Пример 4. Интерферониндуцираща активност

Инбредни мишки Balbc, 20-25 g, по 15 в групата, се инжектират венозно с лечебното средство, приготвено по описания начин и съдържащо съответно 100, 10 и 1 mg/kg тегло, изчислени като сума в mg на двата компонента във въвеждания обем на сместа. Придружаващи опита са контролни групи от нетретирани мишки и мишки, третирани с референтен интерферониндуктор поли: А-поли:С. Серумни проби, взети от 5 мишки от всяка група на 12, 24 и 48-ия час, се третират за наличие на интерферон по плакова техника, с детектор вируса на везикуларен стоматит щам “Индиана”. В резултат на изследването се установява, че лечебното средство не е индуктор на ендогенен интерферон.

Пример 5. Терапевтичен ефект

Осем пациенти доброволци, серопозитивни за HIV инфекция по ЕЛИЗА и Уестърн блот, се третират с лечебното средство при болничен режим. Лечебното средство се въвежда венозно, непосредствено след смесването на 10% воден разтвор на натриев тиосулфат и 10% воден разтвор на аскорбинова киселина в съотношение 4:1 и/или чрез венозна инфузия на смесвани преди въвеждането изотонични разтвори, обикновено 200-250 ml, във всеки от които е поставен воден разтвор на единия от двата компонента, при спазване на същото съотношение.

Дневната доза на лечебното средство в зависимост от теглото на пациента и тежестта на заболяването варира от 2,5 - 5,0 g на човек до 7,5-10 g, разделена на 3-4 инжекции през няколко часа при въвеждане на смес от водни разтвори или на 2 инфузии през 12 часа при изотонични разтвори.

В хода на лечението не е приложен азидотимидин или друг препарат с инхибиторно действие срещу H1V, но при по-сериозни и упорити опортюнистични инфекции са използвани съответни антибиотици. 5

Пациентите, всички серопозитивни за HIV-1, се разпределят според клиническата тежест и напредналост на инфекцията:

два пациента /МС;ББ/: разгъната клинична картина на СПИН, наличие на СПИН деменция комплекс, консумативен синдром, съчетание на няколко опортюнистични инфекции, Т4:Т8 - 0,1 /МС/ и под 0,01 /ББ/; три пациента /НК; ЕБ;ВТ/: СПИН свързан комплекс, съчетание на 2-3 опортюнистични инфекции, Т4:Т8 - 0,4 /НК/, 0,4 /ЕБ/, 0,3 /ВТ/; три пациента /СК;ЛП;ХД/: оскъдна симптоматика, но с изразена лимфонодулопатия, дерматомикоза, Т4:Т8 - 0,4-0,3.

За проследяване състоянието на пациентите, третирани с лечебното средство, се използват комплексни изследвания: хематологични, биохимични, клинико-инструментални, имунологични, микробиологични, полимеразна верижна реакция. Последната реакция е извършена на лимфоцитни проби от пациентите, като се използват праймери СК 38/39 и хибридизация на амплифицираната провирусна ДНК с белязана с Р³² сонда.

От проведените продължителни клинични наблюдения и многократни системни изследвания на пациентите, третирани в условията на болничен режим, са получени значими данни за терапевтичния ефект на изпитваното средство за лечение на СПИН и метода на прилагането му, които се привеждат последователно в обобщен вид:

Изчезване на вируса на СПИН в периферната кръв, респективно неговия ДНК провирус в прицелните кръвни клетки, за даден период от време, установено чрез полимеразна верижна реакция /ПВР/ при изследване на лекуваните пациенти както следва:

МС/наблюдение 426 дни/: негативна ПВР/след 137 дни, от които 83 с лечение/, позитивна ПВР/трикратно след последващи 119, 69 и 33 дни, от които общо 129 без лечение/, негативна ПВР/ след последващи 9 дни, всички лечебни/, позитивна ПВР/след последващи 23, от които 16 дни без лечение/;

ББ/наблюдение 242 дни/: позитивна ПВР/след 72 дни, от които 50 с лечение/, не10 гативна ПВР/след последващи 118 дни, от които 74 с лечение/, в следващите 50 дни ПВР не е проверена поради екзитус;

НК/наблюдение 351 дни/: позитивна ПВР/след 72 дни от които 23 лечебни/, негативна ПВР/ след последващи 119 дни, от които 70 лечебни/, позитивна ПВР/двукратно след последващи 68 и 33 дни, от които 75 без лечение/;

ЕБ/наблюдение 269 дни/: позитивна ПВР/след 45 дни, от които 32 лечебни/, негативна ПВР/след последващи 112 дни, от които 76 лечебни/, позитивна ПВР/трикратно след последващи 69, 32 и 31 дни, от които общо 108 без лечение/;

СК/наблюдение 248 дни/: негативна ПВР/двукратно след 88 и последващи 69 дни, от които общо 100 лечебни/, позитивна ПВР/ трикратно след последващи 33, 31 и 27 дни, от които общо 83 без лечение/;

ВТ/наблюдение 255 дни/: позитивна ПВР/след 89 дни, от които 58 лечебни/, негативна ПВР/след последващи 70 дни, от които 39 лечебни/, позитивна ПВР/двукратно след последващи 63 и още 32 дни, от които общо 81 без лечение/;

ЛП/наблюдение 253 дни/: позитивна ПВР/4-кратно след 198 дни, от които 125 лечебни/, негативна ПВР/двукратно след последващи 23 и още 32 дни, от които общо 46 лечебни/.

ХД/наблюдение 72 дни/: позитивна ПВР/след 22 дни, от които 20 лечебни/, негативна ПВР/двукратно след последващи 23 и още 27 дни, от които общо 45 лечебни/.

Клиничните наблюдения и изследвания показват при лекуваните болни инволюция на лимфонодулопатията, задържане на спадането на Т4:Т8, частично възвръщане на кожната алергия, нормализиране на температурата и изчезване на интоксикацията, адинамията, изпотяванията и диариите при повечето болни, прекратяване на консумативния синдром и възстановено тегло, намаляване на увеличените размери на черния дроб и слезката при повечето болни, намаляване на диспротеинемията, по-специално на хипергамаглобулинемията, излекуване на генерализиран херпес за 4-5 дни, нормализиране на скенеграмата и подобрена периферна невропатия при болен с начален СПИН деменция комплекс. Един от болните с клинически разгънат СПИН/ Т4:Т8 под

0,01/ е починал след негативирането на ПВР.

Клиничните наблюдения и изследванията на състоянието и функциите на различни органи и системи свидетелстват, че продължителното по време прилагане на лечебното средство не причинява странични явления на интоксикация на организма.

Claims

1. Средство за лечение на СПИН, характеризиращо се с това, че включва от 10% до 20% воден разтвор на натриев тиосулфат и аскорбинова киселина или всеки от тези разтвори, поставен в изотоничен разтвор, в съотношение 4:1/± 0,5/, които се смесват непосредствено преди прилагането.

2. Метод за приложение на средството съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че средството се въвежда венозно в количество от 4 до 10 g дневна доза в зависи мост от клиничното състояние и теглото на пациента и че методът е приложим и при показания за провеждане на поддържаща хронична терапия.