Amidines
La présente invention concerne des analogues de la mitomycine qui contiennent un ou plusieurs radicaux amidino (classe 260, sous-classe 326.24). Ces composés sont des dérivés de la mitomycine C dans lesquels le radical 7-amino et/ou l'atome d'azote du radical carbamido font partie d'un radical amidino. Ces composés manifestent de l'activité contre les tumeurs expérimentales chez les animaux.
Suivant la nomenclature systématique de Chemical Abstracts, la mitomycine C est appelée la
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numération du système cyclique azirinopyrroloindole étant la suivante:
<EMI ID=2.1>
Chemical Abstracts
Suivant une terminologie courante dans le domaine des mitomycines, ce système cyclique portant différents substituants caractéristiques des mitomycines est appelé mitosane.
�
<EMI ID=3.1>
Mitosane
Cette nomenclature convient pour des dérivés simples comme ceux portant des substituants sur l'atome d'azote du radical azirino et aux positions 7 et 9a, mais expose à quelques ambiguïtés et inconvénients. Aucun système de numération traditionnel ne fait la distinction entre 1'.atome d'azote du radical azirino et l'atome d'azote
du radical carbamoyle en chaîne latérale qui portent l'un et l'autre des substituants dans certains des composés de l'invention. Pour cette raison, l'atome d'azote <EMI ID=4.1>
<EMI ID=5.1>
des mitosanes aux fins de l'invention. Lorsque les composés de l'invention sont identifiés par le terme "mitosane" ou par la formule de structure, leur configuration stéréochimique est celle de la mitomycine C.
La mitomycine C est un antibiotique produit par fermentation et actuellement utilisé notamment aux Etats-Unis d'Amérique pour le traitement de l'adénocarcinome dissiminé de l'estomac ou du pancréas dans des combinaisons éprouvées avec d'autres agents chimiothérapeutiques reconnus, de même que pour le traitement palliatif après l'échec d'une autre thérapeutique
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13201, Physicians' Desk Référence 35e édition, 1981, pages 717 et 718). La mitomycine C et sa préparation par fermentation font l'objet du brevet des Etats-Unis d'Amérique n[deg.] 3.660.578 fondé notamment sur une demande de brevet au Japon du 6 avril 1957.
Les structures des mitomycines A, B et C et de la porfiromycine ont été publiées par J.S. Webb et al. de la société Lederle Laboratories Division American Cyanamid Company, J. Amer. Chem. Soc. 84, 3185-3187
(1962). L'une des transformations chimiques effectuées lors de cette étude de structure pour établir la relation entre la mitomycine A et la mitomycine C est la conversion de la première ou 7-9�-diméthoxymitosane, par réaction avec l'ammoniac en la seconde ou 7-amino9o(-méthoxymitosane. L'élimination du radical 7-méthoxy de la mitomycine A s'est révélée être une réaction d'un intérêt considérable pour préparer les dérivés antitumoraux de la mitomycine C. Les articles et brevets indiqués ci-après concernent tous la.conversion de la mitomycine A en une 7-(amino substitué)-mitomycine C antitumorale.
Ces recherches visaient à préparer des dérivés plus actifs, mais moins toxiques que la mitomycine C: Matsui et al. "The Journal of Antibiotics", XXI, 189-198 (1968). Kinoshita et al. "J. Med. Chem."
14, 103-109 (1971). Iyengar et al. "J.Med. Chem."
24, 975-981 (1981). Iyengar, Sami, Remers, et Bradner, Abstracts of Papers Annual Meeting of the American Chemical Society, Las Vegas, Nevada, mars 1982,
Abstract No. MEDI 72.
Les brevets ci-après concernent la préparation de 7-(amino substitué)-mitosanes par réaction de la mitomycine A, de la mitomycine B ou d'un de leurs dérivés N -substitués avec une amine primaire ou secondaire: Cosulich et al. brevet EUA No.3.332.944 (25 juillet 1967); Matsui et al. brevet EUA No.3.420.846 (7 janvier 1969); Matsui et al. brevet EUA No.3.450.705 (17 juin 1969); Matsui et al. brevet EUA No.3.514.452 (26 mai
1970); Nakano et al. brevet EUA No. 4.231.936 (4 novembre
1980); Remers brevet EUA No.4.268.676 (19 mai 1981).
Différents dérivés delà mitomycine C portant un radical amino substitué en la position 7 ont aussi été obtenus par biosynthèse directe, en l'occurrence
par addition de différentes amines primaires au bouillon de fermentation et par conduite de la fermentation de
la manière habituelle pour produire une mitomycine
(C.A. Claridge et al. Abst. of the Annual Metting
of Amer. Soc. for Microbiology 1982. Abs. 028).
La mitomycine C est la principale mitomycine obtenue par fermentation et constitue la forme commercialisée. La technique habituelle de conversion de la mitomycine C en mitomycine A convenant pour produire
des analogues semi-synthétiques de la mitomycine C
qui portent un radical amino substitué, telle qu'elle
est exposée dans les mémoires précités, consiste à hydrolyser la mitomycine C en le 7-hydroxymitosane correspondant, qui est un composé fort instable, puis à méthyler celui-ci à l'aide de diazométhane, qui est une substance fort dangereuse à manipuler. Pour éviter de devoir méthyler à l'aide de diazométhane la 7-0-déméthylmitomycine A obtenue par hydrolyse de la mitomycine C,
on a essayé aussi d'utiliser les 7-acyloxymitosanes
(Kyowa Hakko Kogyo KK brevet japonais No. J5 6073-085, Farmdoc No. 56227 D/31).
La présente invention concerne un nouveau groupe de monoguanidino- ou mono-et bis-amidino-analogues de la mitomycine C dans lesquels l'atome d'azote du radical 7-amino et/ou l'atome d'azote du radical
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cal amidino ou bien l'atome d'azote du radical 7-amino fait partie d'un radical guanidino. Les analogues correspondants de la mitomycine A portant un radical méthoxy
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font également l'objet de l'invention. Les composés de l'invention répondent à la formule de structure suivante:
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où A représente un radical amino, méthoxy, hydroxyle,
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radical de formule:
<EMI ID=11.1>
B représente un radical amino ou le radical amidino
<EMI ID=12.1>
de formule R R N-C=N- et au moins l'un d'entre A et B représente l'un des radicaux spécifiés autres qu'amino, méthoxy ou hydroxyle,
n représente 0, 1, 2 ou 3,
<EMI ID=13.1>
inférieur, alcanoyle inférieur, benzoyle ou benzoyle substitué dont le substituant est un radical alcoyle inférieur, alcoxy inférieur, halogéno, amino ou nitro,
R2 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle inférieur, phényle, (alcoyl inférieur)phényle,
(alcoxy inférieur)phényle, halogénophényle, aminophényle, nitrophényle, thiényle, furyle, cyano, di(alcoyl inférieur)amino, alcoxy inférieur ou alcoylthio inférieur,
R<3> représente un radical alcoyle inférieur, alcoxy inférieur ou constitue avec R4 et l'atome d'azote auquel ils sont unis un radical pyrrolidine, 2-, ou 3-
<EMI ID=14.1>
( alcoyl inférieur ) pipéridine, 2 , 6-di ( alcoyl inférieur ) pipéridine, pipérazine, pipérazine 4-substituée (dont
le substituant est un radical alcoyle ou carbalcoxy comptant chacun 1 à 8 atomes de carbone, phényle, méthylphényle, méthoxyphényle, halogénophényle, nitrophényle
ou benzyle), azépine, 2-, 3-, 4- ou 5-(alcoyl inférieur)azépine, morpholine, thiomorpholine, thiomorpholine-1oxyde ou thiomorpholine-1,1-dioxyde,
R4 représente un radical alcoyle inférieur ou constitue avec R<3> et l'atome d'azote auquel ils sont unis
un radical pyrrolidine, 2- ou 3-(alcoyl inférieur)pyrrolidine, pipéridine, 2-, 3- ou 4-�alcoyl inférieur)pipéridine, 2,6-di(alcoyl inférieur)pipéridine, pipérazine, pipérazine 4-substituée (dont le substituant
est un radical alcoyle ou carbalcoxy dont chacun compte 1 à 8 atomes de carbone, phényle, méthylphényle, méthoxyphényle, halogénophényle, nitrophényle ou benzyle), azépine, 2-, 3-, 4- ou 5-(alcoyl inférieur)azépine, morpholine, thiomorpholine, thiomorpholine-1-oxyde ou thiomorpholine-1,1-dioxyde,
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génoalcoyle, Cl-18 hydroxyalcoyle, C4-8 cycloalcoyle, aryle ou aralcoyle inférieur dont chacun compte jusqu'à 12 atome�s de carbone ou un radical hétéroalicyclique ou hétéroaromatique de 3 à 8 chaînons dont au moins deux sont des atomes de carbone,
R 7 et R 9 représentent indépendamment des atomes d'hydrogène ou radicaux alcoyle inférieurs,
étant entendu que chacun des radicaux alcoyle inférieur, alcanoyle inférieur et alcoxy inférieur précités compte 1 à 6 atomes de carbone.
Il est évident pour le spécialiste que certains des radicaux amidino donnent lieu à des formes tautomères. Celles-ci sont également définies par les formules cidessus et font l'objet de l'invention.
Les substances de formule I ci-dessus ont une activité antitumorale chez les animaux d'expérience. Elles sont utiles aussi comme intermédiaires pour la préparation d'autres composés manifestant cette activité. L'invention a aussi pour objet les procédés permettant
de préparer les susbtances ci-dessus et de les transformer en autres composés utiles ayant une activité antitumorale chez les animaux d'expérience, comme décrit ci-après.
Le procédé de la présente invention mettant en oeuvre les substances ci-dessus comme intermédiaires
pour la préparation d'autres composés ayant une activité antitumorale chez les animaux comprend la réaction d'un composé de formule I où A et/ou B représentent le radi-cal amidino indiqué avec une amine primaire conduisant
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<EMI ID=17.1>
la mitomycine A et la mitomycine C. A quelques exceptions près, les amines primaires réagissent également
à la position 7 en éliminant le radical amidino et en le remplaçant par le radical amino qu'elles apportent. Ces procédés sont illustrés par les équations suivantes:
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formule IV
R représentant_le substituant porté par l'atome d'azote dans différentes 7-(amino-substitué)mitomycines C connues et nouvelles décrites ici et des amines primaires capables de déplacer le radical 7-amidino de formule II est choisi parmi les radicaux Cl-18 alcoyle
<EMI ID=19.1>
alcoyle, C4-8 cycloalcoyle, aryle, aralcoyle inférieur ou aralcoxy inférieur dont chacun compte jusqu'à 12 atomes de carbone et radicaux hétéroalicycliques et hétéroaromatiques comptant 3 à 8 chaînons dont au moins deux sont des atomes de carbone. R représentant le substituant porté par l'azote des amines primaires ca-
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est le reste d'une amine aliphatique très faiblement basique ou d'une alcoylamine ou aralcoylamine à fort empêchement stérique. Des exemples en sont la trifluoroéthylamine, la benzhydrylamine (ou aminodiphénylméthane) et la t-butylamine.
Les composés de formule I sont obtenus par réaction de la mitomycine C, du 7-hydroxy-9a-méthoxymitosane ou de.la mitomycine A ou bien d'un analogue N substitué de l'un quelconque de ces composés avec un amide-acétal. Les composés de formule I dans lesquels
A mais non B représente ce radical amidino peuvent être préparés aussi par réaction de la mitomycine C ou d'un de ses analogues N -substitués avec une base forte
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réaction de l'anion avec un réactif capable d'engendrer le radical aminométhylène, comme un sel d'halogénométhylèneiminium.
Les composés préférés faisant l'objet de l'invention sont les analogues de la mitomycine C dans lesquels le radical 7-amino fait partie d'un radical amidino substitué ou non substitué. Ils manifestent une activité puissante contre les tumeurs expérimentales chez l'animal. Ces composés sont préparés par réaction de la mitomycine C avec un réactif capable de transformer le radical 7-amino en radical 7-amidino. Les réactifs préférés à cette fin sont les amides-acétals qui réagissent avec un bon rendement et dans des conditions modérées avec la mitomycine C (exemples 1-5 et 18).
D'autres réactifs formateurs d'amidine sont les halogénures d'imidoyle (exemple 17), les sels d'halogénométhylèneiminium (exemple 15), les halogénures de 2-halogéno-lalcoylpyridinium (exemple 16) et les iminoéthers ou iminothioéthers (exemples 13 et 14) qui réagissent avec la forme anionique de la mitomycine C résultant de la déprotonation du radical 7-amino par réaction avec une base forte. Les conditions pour la déprotonation de
la mitomycine C reviennent à faire réagir la mitomycine C en solution dans le diméthylformamide avec environ 1,5 proportion molaire d'hydrure de sodium à la température ambiante. La réaction de la forme anionique résultante avec l'un des réactifs précités se fait de préférence avec 1 à 1,5 proportion molaire de celui-ci par rapport à la mitomycine C entre la température ambiante et environ -60[deg.]C. Les solvants organiques polaires aprotiques tels que le diméthylformamide, l'hexaméthylphosphoramide, le diméthylsulfoxyde ou la pyridine
sont utilisés comme milieux de réaction. Le procédé n'est toutefois pas limité à la formation de la mitomycine C anionique de cette seule façon, du fait que différentes variantes sont évidentes pour le spécialiste.
Le procédé préféré de préparation des composés de formule I où B ou bien A et2B représentent le
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radical amidino de formule R R N-C=N- consiste dans la réaction de la mitomycine C ou de la mitomycine A ou d'un de leurs dérivés N -substitués avec un amide-acétal de formule:
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où R , R et R sont tels que définis ci-dessus et R est un radical alcoyle inférieur ou cycloalcoyle comptant jusqu'à 6 atomes de carbone ou bien les deux ra-
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avec les deux atomes d'oxygène et l'atome de carbone intermédiaire une structure cyclique à 5 ou 6 chaînons. La réaction de ces amides-acétals avec des amines primaires est classique et il est de la compétence du spécialiste d'effectuer la réaction avec la mitomycine C, la mitomycine A ou leurs dérivés Nla-alcoylés. On peut se référer à ce propos, par exemple, à H.E. Winberg brevet des Etats-Unis d'Amérique n[deg.] 3.121.084 (11 février
1964) et à R.F. Abdulla et al. "The Chemistry of Formamide Acetals", Tetrahedron, volume 35 pages 1720-1724
(1979).
La Demanderesse préfère exécuter la réaction dans un milieu de réaction anhydre liquide dans lequel le diluant est un liquide qui est compatible avec les conditions de réaction. De préférence, ce liquide est un hydrocarbure aliphatique halogéné inférieur ou un alcanol inférieur ou plus avantageusement un mélange
des deux. Le chloroforme et le méthanol de même que leurs mélanges conviennent éminemment. La réaction est exécutée à une température de 40 à 65[deg.]C pendant une durée suffisante pour qu'elle s'achève.
Lors de l'utilisation d'un grand excès (environ 60 fois) de l'acétal, le produit prépondérant est
le produit bis-amidin� c'est-à-dire un composé de formule I où A et B représentent chacun le radical amidino. Le dérivé N -formylé apparaît parfois comme sous-produit. Néanmoins, lorsque la quantité d'acétal est limitée (environ 10 fois) il se forme en plus du produit bis-.amidiné un produit mono-amidiné,à savoir un produit de formule I où A représente le radical amino et B représente le radical amidino. Les mélanges de ces produits de réaction sont séparés aisément par chromatographie comme décrit dans les exemples ci-après.
Divers amides-acétals commercialisés qui conviennent pour ce procédé sont mentionnés au tableau I repris de l'article précité de Abdulla et al., page 1685.
TABLEAU I
Divers amides-acétals commercialisés
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sente un radical cyano, di(alcoyl inférieur)amino, alcoxy inférieur ou alcoylthio inférieur sont obtenus par remplacement des amides-acétals dans le procédé ci-dessus par les orthocarbonates ci-après:
<EMI ID=27.1>
Ces réactifs peuvent être obtenus comme décrit pour celui de formule VI par Kantlehner et al., Liebigs Ann. Chem., 1981, 70-84 et pour ceux des formules VII, VIII et IX par H. Meerwein, et al., Liebigs Ann. Chem.
641, 1 (1961).
Les dérivés amidinés de formule I où repré-
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sente R NHC=N-, ou R N=C-N- sont obtenus à partir de
la forme anionique de la mitomycine C ou d'un de ses dérivés N7-substitués comme décrit précédemment. Des sels d'halogénométhylèneiminium convenant pour le procédé de l'invention ont été décrits dans la littérature. Des exemples en sont donnés par W. Kantlehner dans "Advances in Organic Chemistry", volume 9, partie 2, Wiley Interscience, 1079, pages 81 et 82. Le tableau
II ci-après est repris de l'article de Kantlehner.
Tableau II
Sels d'halogénométhylèneiminium
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Lorsqu'un sel d'halogénométhylèneiminium
tel qu'illustré au tableau II sert de réactif, il est parfois avantageux d'utiliser l'amide correspondant comme solvant, c'est-à-dire l'amide dont est issu
le sel d'iminium. Lorsque les amides correspondants sont solides, l'hexaméthylphosphoramide ou la pyridine conviennent aussi. Ceci est illustré dans les exemples 17 et 19.
Les chlorures d'imidoyle issus des formamides N-substitués conviennent également comme réactifs à cette fin. Leur préparation est connue,comme il ressort
<EMI ID=31.1>
of Imidoyl Halides", Plenum Press, New York, 1968, pages 74-76. La réaction de ces composés avec les amines formant les amidines est également bien connue, comme décrit par S.R. Sandler et W. Karo dans "Organic Chemistry", volume 12-111, A.T. Blomquist
et H. Wasserman, éditeurs, Academic Press New York, page 227.
Tableau III
Chlorures d'imidoyle
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Tableau III (suite)
<EMI ID=33.1>
Tableau III (suite)
<EMI ID=34.1>
Les composés de formule I où A représente le
R<2>
radical amidino non substitué sur l'azote, H2N-C=N-,
R<2>R5
ou HN=C-N- sont obtenus par réaction d'un imino éther
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de l'une ou l'autre forme anionique de la manière décrite ci-dessus. Le radical protecteur est ensuite éliminé de manière classique. Le formimidate d'isopropyle dont le radical amino est protégé par le radi-
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formule
<EMI ID=37.1>
les procédés de préparation consistent à faire réagir la forme anionique de la mitomycine C avec des sels d'halogénométhylèneiminium cycliques ou halogénures d'imidoyle cycliques où R2 et R<3> de la formule
<EMI ID=38.1>
sont unis en un cycle. Des réactifs convenant
pour la réaction avec la mitomycine C anionique sont l'iodure de 2-chloro-l-méthylpyridinium (exemple 16),
le chlorure de 2-chloro-4,5-dihydro-1-méthyl-1(3H)-pyrrolidinium (tableau II), le chlorure de N,N'-diméthylN,N'-triméthylènechloroformamidinium (exemple 28) et d'autres halogénures d'imidoyle cycliques issus de 2-azétidinones, de 2-pyrrolidinones, de 2-pipéridinones et de 2-azépinones. A nouveau, lorsque R 7 ou R9 dans
le produit final représente un atome d'hydrogène, le radical protecteur tel que ci-dessus est utilisé dans
le sel d'halogénométhylèneiminium cyclique intermédiaire.
Les composés de formule I où A ou bien A et B
représentent un radical amidino de formule
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réagissent avec les amines primaires de formule R5NH2
<EMI ID=40.1>
coyle, aryle ou aralcoyle inférieur dont chacun compte jusqu'à 12 atomes de carbone et les radicaux hétéroalicycliques ou hétéroaromatiques comptant 3 à 8 chaînons dont au moins deux sont des atomes de carbone.
La seule limitation pesant sur le choix de l'amine primaire, autre que l'absence de radicaux fonctionnels incompatibles avec les conditions de réaction, est que l'atome d'azote de la fonction amine est uni à un atome de carbone qui porte au moins un atome d'hydrogène et moins de deux radicaux aryle. Un composé organique liquide anhydre sert de milieu de réaction et tout composé de ce genre convient pour autant qu'il soit compatible avec les conditions de réaction et ne participe pas de façon nuisible à la réaction. Un excès moléculaire de l'amine primaire est généralement utilisé.
Une température de réaction d'environ -15[deg.]C à +50[deg.]C est préférée. Le produit de la réaction est un 7-(amino
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tomycine C portant un substituant tel que défini à
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connus comme ayant une activité notable contre les tumeurs expérimentales chez les animaux.
Certaines amines primaires de formule R6NH2
se sont révélées impropres à déplacer le radical 7-amidino par le procédé décrit dans le paragraphe ci-dessus. R6 représente un radical alcoyle, cycloalcoyle, cycloalcoylalcoyle, aralcoyle ou hétéroalicyclique de 4 à
18 atomes de carbone dont l'atome de carbone portant
le radical amino est un atome de carbone tertiaire
ou un atome de carbone secondaire portant deux radicaux aryle. Certaines autres amines aliphatiques faiblement basiques, comme la trifluoroéthylamine ne permettent pas non plus de déplacer le radical 7-amidino. Ces amines sont utiles pour transformer un composé de formule I où A et B représentent chacun le radical ami-
dino de formule
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en un composé de formule I
où seul A représente ce radical amidino. Ces amines, bien qu'elles n'aient pas la possibilité de déplacer le radical 7-amidino, ont toutefois la capacité de scinder le radical amidino B en un radical NH2 pour donner naissance à la fonction carbamido caractéristique des mitosanes non substitués. L'amine elle-même convient comme milieu de réaction ou bien un système solvant du type défini dans le paragraphe précédent peut être mis en oeuvre. Ce procédé est exécuté de préférence à une température de 20 à 60[deg.]C.
Les points de fusion sont déterminés à l'aide d'un appareil à point de fusion en capillaire ThomasHoover et ne sont pas corrigés. Les températures sont exprimées en degrés Celcius. Les spectres de résonance magnétique nucléaire du proton (RMN) sont relevés à l'aide d'un spectromètre Varian XL100, dans la pyridine d5 sauf indication contraire. Les spectres infrarouges
(IR) sont relevés à l'aide d'un spectrophotomètre Beckman 4240 sur l'échantillon mélangé à du bromure
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à l'aide d'un spectrophotomètre Varian-Cary 219.
La chromatographie en couche mince (CCM) est effectuée sur des plaques pré-enduites de 0,25 mm de gel de silice qui sont observées en lumière UV. La chromatographie rapide est exécutée sur de la silice
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pression réduite au-dessous de 50[deg.]C.
EXEMPLE 1 -
Composé V
<EMI ID=46.1>
méthylène-9a-méthoxymitosane
Composé VI
<EMI ID=47.1>
<EMI ID=48.1>
<EMI ID=49.1>
On ajoute au total 9,6 ml (fractions de 2,4 ml à 0, 18, 21 et 23 heures) de diméthylacétal de N,N-diméthylformamide à une suspension de 500 mg (1,50 millimole ) de mitomycine C dans 25 ml de chloroforme et on agite la suspension à environ 50[deg.] pendant 41 heures. Après évaporation du solvant et des réactifs en excès sous pression réduite, on obtient un résidu vert foncé; la CCM (chlorure de méthylène/méthanol 20:1) révèle l'absence de la mitomycine C et la présence de deux nouveaux constituants verts (Rf = 0,16 et 0,22).
On isole le constituant majeur (Rf = 0,16) par chromatographie rapide avec élution au moyen de chlorure de méthylène/méthanol 20:1 pour obtenir un solide vert
(340 mg, 51,5%) donnant, par dissolution dans l'éther diéthylique, puis addition d'hexane, le composé V qui est une poudre amorphe vert foncé.
<EMI ID=50.1>
(s, 3H), 2,82 (s, 3H), 2,86 (s, 6H), 3,22 (s, 3H), 3,30
(si, 1H), 3,60 (d, J=12Hz), 4,12 (dd, 1H, J=10, 4Hz), 4,43 (d, 1H, J=12Hz), 4,90 (si, 1H), 5,10 (t, 1H, J=10 Hz), 5,52 (dd, 1H, J=10, 4Hz), 7,85 (s, 1H), 8,64 (s, 1H).
<EMI ID=51.1>
calculé C, 56,71; H, 6,08; N, 18,90% trouvé C, 56,20; H, 6,28; N, 17,88% On isole le constituant mineur (Rf = 0,22)
(180 mg, 25,35%) sous la forme d'un solide amorphe par précipitation à partir de l'éther diéthylique et de l'hexane et on l'identifie comme étant le composé VI.
<EMI ID=52.1>
gulets, 12H),3,2 (s, 3H), 3,65 (m, 2H), 4,04 (d, 1H, J=4Hz), 4,16 (dd, 1H, J=12, 4Hz), 4,60 (d, 1H, J=13Hz), 4,86(t, 1H, J=12Hz), 4,90 (s, 1H), 5,48 (dd, 1H, J=12, 4Hz), 7,90 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 9,06 (s, 1H).
<EMI ID=53.1>
calculé C, 55,89; H, 5,93; N, 17,78%
trouvé C, 55,41; H, 5,96; N, 16,99% L'examen par CCM des solutions des composés V et VI dans l'acétate d'éthyle ou dans le diméthylacétal
<EMI ID=54.1>
ambiante pendant plus de 10 heures révèle que le composé VI (Rf = 0,22) se convertit en composé V (Rf = 0,16) pour donner une solution fortement enrichie en ce dernier.
On exécute les exemples 2 à 7 suivant le mode opératoire de l'exemple 1 avec les différences indiquées ci-après afin d'obtenir différents autres composés conformes à l'invention.
EXEMPLE 2 -
Composé VII
<EMI ID=55.1>
amino)-méthylène-9a-méthoxymitosane
On chauffe sous agitation pendant 15 heures
à 53[deg.] une suspension de mitomycine C (200 mg, 0,6 millimole) dans du diéthylacétal de N,N-diisopropylformamide (3 ml). On verse le mélange de réaction dans 50 ml d'eau et on l'extrait à l'acétate d'éthyle (3 x 30 ml).
<EMI ID=56.1>
on les évapore pour obtenir un sirop vert foncé dont
la CCM (chlorure de méthylène/méthanol 10:1) révèle
la présence d'un constituant majeur à Rf = 0,43 en présence d'impuretés plus mobiles (Rf = 0,45 - 0,50). On isole le constituant majeur VII sous la forme d'un solide vert foncé (156 mg, 46,8%) par deux chromatographies rapides avec élution à l'aide de chlorure de méthylène/méthanol 20:1.
<EMI ID=57.1>
2,78 (dd, 1H, J=4, 2Hz), 3,05 (d, 1H, J=4Hz), 3,22 (s,
<EMI ID=58.1>
1H, J=12 Hz), 4,56 (t, 1H, J=10 Hz), 4,88 (dd, 1H, J=10, 4Hz), 7,83 (s, 1H), 8,67 (s, 1H).
<EMI ID=59.1>
1600, 1550, 1235, 1060.
UV(MeOH)À max , nm: 246 et 393
Analyse pour C29H44N605.
calculé C, 62,55; H, 7,91; N, 15,10% trouvé C, 62,03; H, 7,80; N, 14,60% EXEMPLE 3 -
Composé XIV
<EMI ID=60.1>
méthylène-9a-méthoxy-N -méthylmitosane
Dans le présent exemple, on part de porfiromycine (Nla-méthyl mitomycine C) en quantité de 130 mg,
(0,37 millimole) pour la réaction avec 0,8 ml (1,5 millimole)de diméthylacétal de N,N-diméthylformamide dans
10 ml de chloroforme et 2 ml de méthanol comme solvant
<EMI ID=61.1>
isole le composé XIV sous forme d'un sirop après évaporation des solvants et on le purifie par chromatographie rapide sur 20 g de gel de silice qu'on élue avec du chlorure de méthylène/méthanol (20:1).
<EMI ID=62.1> (d, 1H, J=4Hz), 2,80 (s, 3H), 2,84 (s, 3H), 2,90 (s,
6H), 3,20 (s, 3H), 3,52 (dd, 1H, J=2, 12Hz), 4,10 (dd,
1H, J=4, llHz), 4,38 (d, 1H, J=12 Hz), 4,92 (t, 1H, J=llHz), 4,96 (sl, 1H), 5,46 (dd, 1H, J=4, llHz), 7,86
(s, 1H), 8,70 (s, 1H).
CCM avec du chlorure de méthylène/méthanol 9:1, Rf = 0,53.
<EMI ID=63.1>
calculé C, 57,60; H, 6,55; N, 18,33%
trouvé C, 57,11; H, 6,11; N, 17,99%
On obtient de la sorte,sous forme de sous-produit le composé XV ou 7-amino-N -diméthylaminométhylène-9a-méthoxy-N -méthylmitosane avec un rendement de
30% CCM, Rf = 0,40 (chlorure de méthylène/méthanol 9:1).
<EMI ID=64.1>
5Hz), 2,25 (s, 3H), 2,66 (d, 1H, J=5Hz), 2,76 (s, 3H), 2,86 (s, 3H), 3,18 (s, 3H), 3,51 (dd, 1H, J=2, 12Hz), 4,08 (dd, 1H, J=4, lOHz), 4,50 (d, 1H, J=10Hz), 4,90
(t, 1H, J=10 Hz), 5,05 (sl), 5,43 (dd, 1H, J=4, lOHz), 8,70 (s, 1H).
<EMI ID=65.1>
1625, 1553, 1230, 1125.
UV(MeOH) � max, nm: 358, 244 et 216.
<EMI ID=66.1>
calculé C; 56,53; H, 6,20; N, 17,38% trouvé C, 54,68; H, 6,13; N, 16,59% EXEMPLE 4 -
Composé IX
<EMI ID=67.1>
(1-pipéridinylméthylène)mitosane
On fait réagir 3 ml de N-(diéthoxyméthyl� pipéridine et 200 mg de mitomycine C à 60[deg.] pendant 2,5 heures en solution dans du chloroforme (3 ml).
On obtient avec un rendement de 27,6% le produit dont la CCM indique un Rf de 0,20 (chlorure de méthylène/ méthanol 20:1).
<EMI ID=68.1>
2,80 (sl, 1H), 3,24 (s, 3H), 3,00-3,40 (m, 5H), 3,403,80 (m, 5H), 4,13 (dd, 1H, J=10, 4Hz), 4,45 (d, 1H, J=12 Hz), 4,90 (si, 2H), 5,12 (t, 1H, J=lOHz), 5,56
(dd, 1H, J=10 4Hz), 7,87 (s, 1H), 8,70 (s, 1H).
<EMI ID=69.1>
calculé C, 61,79; H, 6,87; N, 16,02%
trouvé C, 61,01; H, 6,85; N, 15,34%
On obtient comme constituant majeur le dérivé N -formylé du composé ci-dessus,qui est le composé VIII ou Nla-formyl-9a-méthoxy-7-[(1-pipéridinylamino)-
<EMI ID=70.1>
avec un rendement de 43% et dont la CCM indique un Rf de 0,25 (chlorure de méthylène/méthanol 20:1).
<EMI ID=71.1>
4,90 (t, 1H, J=llHz), 4,94 (si, 1H), 5,54 (dd, 1H, J=ll, 4Hz), 7,94 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 9,08 (s, 1H).
<EMI ID=72.1>
Analyse pour C28H36N606
calculé C, 60,08; H, 6,52; N, 15,21% trouvé C, 59,99; H, 6,17; N, 15,07% EXEMPLE 5 -
Composé X
<EMI ID=73.1>
pholinométhylène)mitosane
On chauffe à environ 53[deg.] pendant 42 heures une suspension agitée de mitomycine C (200 mg, 0,6 millimole) dans du chloroforme (10 ml) et de la N-diéthoxyméthylmorpholine (4 ml). On concentre le mélange de réaction en un sirop sous vide poussé. On effectue une séparation par chromatographie rapide sommaire
(chlorure de méthylène/méthanol 25:1) pour isoler les composés de couleur verte de l'excès des réactifs. On dissout l'ensemble des composés verts dans 20 ml d'acétate d'éthyle et on lave la solution à l'eau (3 x 20 ml). On extrait le mélange des eaux de lavage à nouveau à l'acétate d'éthyle (3 x 15 ml). Après combinaison de toutes les fractions dans l'acétate d'éthyle, on sèche celles-ci (Na2S04) et on les évapore pour obtenir un sirop vert foncé dont la CCM (chlorure de méthylène/ méthanol 10:1) révèle un constituant vert défini à
Rf = 0,33, outre différentes impuretés vertes (Rf = 0,35 à 0,40). Par chromatographie rapide, on isole le composé de Rf = 0,33 (130 mg, 56,8%) qui est un solide amorphe vert foncé identifié comme étant le composé X.
<EMI ID=74.1>
1H, J=2Hz), 3,22 (s, 3H), 3,30-3,94 (m, 18H), 4,20 (d, 1H, J=12Hz), 4,40-�sl, 1H), 4,54 (t, 1H, J=lOHz), 4,88
(dd, 1H, J=lOHz, 4Hz), 7,74 (s, 1H), 8,51 (s, 1H).
<EMI ID=75.1>
calculé C, 56,78; H, 6,06; N, 15,90%
trouvé C, 53,07; H, 6,03; N, 15,37% EXEMPLE 6 -
Composé XVI
7-Amino-N -diméthylaminométhylène-9a-méthoxymitosane
On dissout de la mitomycine C (200 mg, 0,6 millimole) dans 10 ml de chloroforme et on ajoute 2 ml de méthanol et 0,64 ml de diméthylacétal de N,N-dimé-thylformamide (4,8 millimoles), puis on agite la solution à environ 50[deg.] pendant 50 minutes. La CCM (chlorure de méthylène:méthanol 90:10) révèle une trace de mitomycine C qui n'a pas réagi (Rf = 0,22) et deux nouveaux constituants (Rf = 0,42 et 0,33 respectivement). On concentre la solution sous pression réduite en un sirop qu'on soumet à la chromatographie rapide (25 g
de gel de silice) avec élution au chlorure de méthylène/ méthanol (20:1).
On isole le constituant le plus mobile (Rf = 0,42) sous la forme d'un solide vert (60 mg, 22,5%)
<EMI ID=76.1>
étant le composé V.
On isole le constituant majeur bleu (Rf = 0,33) sous la forme d'un solide amorphe (148 mg, 63,3%) qu'on caractérise comme étant le composé XVI. On prépare un échantillon analytique par précipitation à partir de chlorure de méthylène et de n-pentane.
<EMI ID=77.1>
(s, 3H), 3,21 (s, 3H), 3,28 (d, 1H, J=4Hz), 3,62 (dd, 1H, J=2, 13Hz), 3,94 (si), 4,14 (dd, 1H, J=4, 12Hz), 4,56 (d, 1H, J=13Hz), 5,12 (t,lH, J=lOHz), 5,52 (dd, 1H, J=4, lOHz).
<EMI ID=78.1>
calculé C, 55,48; H, 5,91; N, 17,98% trouvé C, 54,70; H, 6,14; N, 17,95% EXEMPLE 7 -
Composé XVII
<EMI ID=79.1>
On remplace la mitomycine C de l'exemple 1 par la mitomycine A (170 mg) qu'on fait réagir avec le diméthylacétal de N,N-diméthylformamide (0,6 ml) en solution dans le chloroforme/méthanol (10:1) à 50[deg.] pendant 1 heure. On obtient avec un rendement de 48% le composé recherché dont la CCM indique un Rf de 0,50
(chlorure de méthylène/méthanol 9:1).
<EMI ID=80.1>
(s, 3H), 3,22 (s, 3H), 3,28 (d, 1H), 3,56 (dd, 1H, J=2,
13Hz), 4,02 (s, 3H), 4,10 (dd, 1H, J=4, lOHz), 4,24
<EMI ID=81.1>
calculé C, 56,39; H, 5,94; N, 13,85%
trouvé C, 56,51; H, 5,92; N, 13,71%
On obtient avec un rendement de 16,5% le dérivé Nla-formylé du composé XVII, c'est-à-dire le composé
<EMI ID=82.1>
b formylmitosane,dont la CCM indique un Rf de 0,61 (chlorure de méthylène/méthanol 9:1).
<EMI ID=83.1>
(d, lH,.J=13Hz), 4,86 (t, 1H, J=12Hz), 5,42 (dd,
1H, J=4, 12Hz) , 8,66 (s, 1H), 9,08 (s, 1H).
EXEMPLE 8 -
Composé XIX
7-(Diméthylaminométhylène)amino-9a-méthoxymitosane
On ajoute de l'aminodiphénylméthane (2,2 ml,
10,8 millimoles) à 600 mg de composé V (1,35 millimole) en solution dans du méthanol (10 ml) et on agite la solution à 54[deg.] pendant 4 heures. On observe l'avancement de la réaction par CCM (chlorure de méthylène/méthanol 90:10). Au terme des 4 heures, le composé de départ (Rf = 0,35) a disparu et une nouvelle zone verte importante (Rf = 0,29) est apparue. On concentre la solution sous pression réduite et on soumet le sirop résultant à la chromatographie rapide (25 g de gel de silice) avec élution à l'aide de chlorure de méthylène/ méthanol 20:1. On rassemble les fractions contenant
le composé vert (Rf = 0,29), on les sèche (Na2S04) et
on les concentre. On isole le composé XIX sous la forme d'un solide amorphe (215 mg, 41%).
<EMI ID=84.1>
(s, 3H), 2,88 (s, 3H), 3,08 (si, 1H), 3,24 (s, 3H), 3,56
(si, 1H, J=12Hz), 4,00 (dd, 1H), 4,44 (d, 1H, J=12Hz), 5,06 (t, 1H, J=lOHz), 5,56 (dd, 1H, J=10, 4Hz), 7,58
(si, 2H), 7,88 (s, 1H).
<EMI ID=85.1>
calculé C, 55,48; H, 5,91; N, 17,98%
trouvé C, 54,83; H, 5,67; N, 16,90%
En remplaçant le composé V dans l'exemple 8 comme composé de départ par le dérivé N -formylé ou composé VI et en exécutant la réaction pendant 20 heures à la température ambiante, on obtient le composé XIX en substance de la même façon et avec le même rendement.
EXEMPLE 9 -
Composé XX
7-(Diméthylaminométhylène)amino-9a-méthoxy-Nla-méthylmitosane
On dissout 1 g du composé XIV (2,18 millimoles) dans du méthanol (20 ml) et on ajoute de l'aminodiphénylméthane (3,5 ml, 17,18 millimoles), puis on agite la solution résultante pendant 5 heures à la température ambiante et pendant 5 heures à 40[deg.] . La CCM (CH2C12MeOH 90:10) du mélange de réaction révèle que la majeure partie du composé de départ (Rf = 0,55) a été consommée et qu'il s'est formé une nouvelle zone verte importante(Rf = 0,48). La poursuite des opérations comme dans l'exemple 8 conduit au composé XX
qui est un solide amorphe (350 mg). On achève la purification par chromatographie rapide (7 g de gel de silice) avec élution au moyen de chlorure de méthylène/ méthanol (250 ml, 96/4 v/v) et par précipitation du solide résultant (Rf = 0,48) à partir de chlorure de méthylène (5 ml) et d'hexane (50 ml) pour isoler le composé XX analytiquement pur (314 mg, 35,7%) qui est un solide.
<EMI ID=86.1>
lOHz), 4,17 (d, 1H, J=12Hz), 4,38 (t, 1H, J=lOHz), 4,68 (m, 2H), 4,76 (dd, 1H, J=4, lOHz), 7,72 (s, 1H).
<EMI ID=87.1>
calculé C, 56,53; H, 6,20; N, 17,36%
<EMI ID=88.1>
EXEMPLE 10 -
Composé XI
7-(n-Propyl)amino-9a-méthoxymitosane
On dissout 330 mg du composé V (0,74 millimole) dans du méthanol anhydre (10 ml) et on y ajoute de la n-propylamine (1,0 ml). On agite le mélange de réaction pendant 6 heures à la température ambiante
<EMI ID=89.1>
solvant et les réactifs en excès sous pression réduite et on soumet le résidu à une chromatographie rapide
sur gel de silice. On reprécipite le constituant bleu
(Rf = 0,40),obtenu par élution au chlorure de méthylène/ méthanol 30:1,à partir du chlorure de méthylène au moy-en d'hexane pour obtenir le composé XI qui est une poudre grise amorphe (125 mg, 44,5%).
<EMI ID=90.1>
(s, 3H), 2,74 (sl, 1H), 3,12 (sl, 1H), 3,22 (s, 3H), 3,36 (q, 2H), 3,60 (d, 1H, J=12Hz), 3,96 (dd, 1H, J=llHz, 4Hz), 4,54 (d, 1H, J=12Hz), 5,00 (m, 3H), 5,36 (dd, 1H, J=ll, 4Hz), 6,90 (t, 1H).
<EMI ID=91.1>
calculé C, 57,40; H, 6,38; N, 14,88%
trouvé C, 57,28; H, 6,41; N, 14,08%
EXEMPLE 11 -
Composé XII
7-(2-Hydroxyéthyl)amino-9a-méthoxymitosane
On dissout 330 mg du composé V (0,74 millimole) dans du méthanol anhydre (5 ml) et on ajoute de l'éthanolamine (2 ml). On agite le mélange de réaction à la température ambiante pendant 2 heures, puis on le dilue avec de l'eau (50 ml) et on l'extrait à l'acétate d'éthyle (5 x 60 ml). On sèche le mélange des extraits dans l'acétate d'éthyle (Na2S04) et on le concentre en un résidu pourpre bleuâtre donnant, par chromatographie sur colonne avec élution au moyen de 10% de méthanol dans le chlorure de méthylène et par concentration des fractions rassemblées contenant le composé XII, 105 mg
(37%) du composé XII.qui est un solide amorphe.
<EMI ID=92.1>
(d, 1H, H=4Hz), 3,24 (s, 3H), 3,65 (dd, 1H, J=2, 12Hz), 3,70-4,20 (m, 5H), 4,52 (d, 1H, J=13Hz), 4,96 (t, 1H, J=12Hz), 7,38 (t, 1H), 7,58 (si).
<EMI ID=93.1>
Analyse pour C17H22N406
calculé C, 53,92; H, 5,82; N, 14,80%
trouvé C, 51,30; H, 5,88; N, 14,80%
EXEMPLE 12 -
Composé XIII
7-[2-Benzylthioéthyl]amino-9a-méthoxymitosane
On dissout 200 mg du composé V (0,45 millimole) dans du méthanol (2 ml) et on ajoute du S-benzyl2-aminoéthanethiol (0,5 ml), puis on agite la solution à la température ambiante pendant 16 heures. On soumet le résidu que donne l'évaporation du solvant sous pression réduite à la chromatographie rapide (40 g de gel de silice) avec élution au moyen de 6% de méthanol dans le chlorure de méthylène (400 ml). On isole le constituant bleu (Rf environ 0,5 dans le méthanol à
10% dans le chlorure de méthylène) sous la forme d'un solide amorphe (65 mg, 29,8%). Les données spectroscopiques (RMN, IR, UV et masse) sont compatibles avec la structure attribuée.
<EMI ID=94.1>
calculé C, 59,49; H, 5,82; N, 11,56% trouvé C, 59,72; H, 5,94; N, 11,08%
<EMI ID=95.1>
(A) On ajoute lentement de la diisopropyléthylamine
(2,1 millimoles) à 0[deg.] en atmosphère d'azote à une solution de chlorhydrate de formimidate d'isopropyle
(1 millimole) dans le diméthylformamide (DMF). A la solution résultante, on ajoute goutte à goutte à 0[deg.] <EMI ID=96.1> tion limpide résultante est la solution'A.
(B) On ajoute une solution de mitomycine C (1 millimole) dans 5 ml de DMF à une suspension d'hydrure de sodium
(1,5 millimole) dans 3 ml de DMF. On agite la suspension à la température ambiante pendant 20 minutes et on la refroidit à environ -40 à -50[deg.] avant d'ajouter la solution A ci-dessus. On conserve la solution à
-40[deg.] pendant 1 heure, puis on la laisse se réchauffer jusqu'à la température ambiante. Après repos à la température ambiante pendant environ 6 à 18 heures, on dilue le mélange de réaction avec du chlorure de méthylène et on le filtre.
On soumet le résidu solide que donne l'évaporation du filtrat à la chromatographie sur du gel de silice pour isoler le composé recherché dont la fonction amidino est protégée.
(C) On élimine le radical protecteur de la fonction amidino de l'intermédiaire ci-dessus suivant le procédé décrit par Carpino et Tsao (J. Chem. Soc. Chem. Comm.
358 (1978)) de manière à obtenir l'amidine non substituée recherchée.
<EMI ID=97.1>
(A) On ajoute lentement de la diisopropyléthylamine (21 millimoles) à 0[deg.] en atmosphère d'azote à une solution de chlorhydrate de formimidate d'isopropyle (1 millimole) dans du DMF (2 ml). On ajoute de l'iodure de méthyle à <EMI ID=98.1>
la solution B.
(B) On répète les opérations de l'exemple 13(B) en remplaçant la solution A par la solution B afin d'obtenir le composé recherché.
EXEMPLE 15 -
<EMI ID=99.1>
composé XIX
On prépare une solution 0,5 M de chlorure de N,N-diméthylchlorométhylèneiminium en ajoutant goutte
à goutte du chlorure d'oxalyle (1,57 g, 12,5 millimoles)
<EMI ID=100.1>
dans 25 ml de chloroforme, puis en agitant le mélange pendant 30 minutes à la température ambiante. Séparément, on ajoute une solution de mitomycine C (334 mg,
1 millimole) dans 5 ml de DMF à une suspension de NaH
(36 mg, 1,5 millimole) dans 3 ml de DMF. On agite la solution à la température ambiante pendant 20 minutes
et on la refroidit à environ -40 à -50[deg.] , puis on y ajoute la solution ci-dessus de chlorure de N,N-diméthylchlorométhylèneiminium (3 ml, 1,5 millimole). On ajoute un supplément de NaH (18 mg, 0,75 millimole) après 10 minutes d'agitation à -40[deg.] . On conserve la solution à -40[deg.] pendant 1 heure, puis on la dilue au chlorure de méthylène et on la filtre. On soumet le résidu que donne l'évaporation du filtrat à la CCM sur gel de silice (élution avec 10% de méthanol dans le chlorure de méthylène). L'extraction de la bande verte principale donne
78 mg (43% sur base de la mitomycine C recueillie) d'un solide amorphe dont le spectre RMN et la CCM sont identiques à ceux du composé XIX obtenu dans l'exemple 8. L'extraction de la bande pourpre donne 150 mg de mitomycine C.
EXEMPLE 16 -
7-(1-Méthyl-2-(H)-pyridinylidène)amino-9a-méthoxymitosane
<EMI ID=101.1>
<EMI ID=102.1>
C (242 mg, 0,725 millimole) et de NaH (43,5 mg, 1,81 millimole). Après 15 minutes d'agitation, on ajoute de l'iodure de 2-chloro-1-méthylpyridinium (370 mg, 1,45 millimole) à la température ambiante. On agite la solution pendant 1,5 heure et on la dilue ensuite avec de l'acétate d'éthyle, puis on la filtre. On soumet le résidu que donne l'évaporation du filtrat à la CCM sur gel de silice (élution avec 5% de méthanol dans le chlorure
de méthylène). Le produit mineur (12 mg) est le composé XIX (exemple 8). On purifie le produit majeur (75 mg) par CCM sur gel de silice (10% de méthanol dans le chlorure de méthylène) pour recueillir 6 mg (2%) du composé recherché.
<EMI ID=103.1>
5,10 (t, 1H, J = 10 Hz), 5,43 (dd, 1H, J=10, 4Hz), 5,99 (dt, 1H, J=9, 2 Hz), 6,09 (dd, 1H, J=9, 1 Hz), 6,95 (dd, 1H, J=9, 7, 2 Hz), 7,32 (dd, 1H, J=7,l Hz). EXEMPLE 17 -
�[(Méthylaminométhylène)amino]-9a-méthoxymitosane
<EMI ID=104.1>
On ajoute de l'hydrure de sodium (12 mg, 0,5 millimole) en atmosphère d'azote à une solution de mitomycine C (167 mg, 0,5 millimole) dans 2 ml d'hexaméthylphosphoramide. On ajoute à cette solution du chlorure de N-méthylformimidoyle (19mg, 0,25 millimole), N.H. Bosshard et H. Zollinger, Helv. Chim. Acta, 42,
1659 (1959). On agite la solution à la température ambiante pendant 10 minutes, puis on y ajoute de l'hydrure de sodium (6 mg, 0,25 millimole) et du chlorure de N-méthylformimidoyle (9,5 mg, 0,13 millimole). Après 6 à 12 heures d'agitation, on dilue la solution à l'acétate d'éthyle et on la filtre. Par évaporation du solvant et purification chromatographique du résidu, on obtient le composé recherché.
EXEMPLE 18 -
Composé XXI
9a-Méthoxy-7-(1-morpholinométhylène)aminomitosane
<EMI ID=105.1>
On ajoute de la 4-diéthoxyméthylmorpholine
(12,5 ml) à de la mitomycine C (600 mg, 1,8 millimole) en suspension dans du chloroforme (30 ml) et on chauffe la suspension résultante à 58[deg.] pendant 48 heures. Au terme des 48 heures, la CCM (20% de méthanol dans le chlorure de méthylène) révèle que la réaction n'est pas achevée. On concentre la solution sous pression réduite pour obtenir un sirop auquel on ajoute de l'eau
(100 ml). Après 20 minutes d'agitation, on extrait la solution vert foncé au chlorure de méthylène (5x50 ml.) et on sèche les extraits combinés qu'on concentre en
un sirop. On ajoute de l'aminodiphénylméthane (6,5 ml) au sirop dans du méthanol (20 ml) et on agite la solu-EXEMPLE 23 -
Composé XXV
<EMI ID=106.1>
<EMI ID=107.1>
On chauffe à 55[deg.] pendant 5 heures 1,5 g de 2,2-diméthoxy-1-méthylpyrrolidine (10,3 millimoles)
(H. Eilingsfeld et al. Angew. Chem., 72, 836 (1960)), et 280 mg de mitomycine C (0,34 millimole) dans 20 ml de méthanol. On examine le mélange de réaction par chromatographie en couche mince sur plaque à l'alumine avec du chlorure de méthylène/méthanol 97:3 comme solvant. La CCM révèle une tache verte principale correspondant au produit et une tachebleue mineure correspondant à la mitomycine C de départ. On chasse le solvant par distillation sous vide à 40[deg.] et on dissout le résidu dans du chlorure de méthylène, puis on verse la solution sur une colonne de 4,5 cm contenant 150 g d'alumine. On effectue l'élution avec 50 ml de chlorure de méthylène, puis 600 ml de méthanol à 1% dans
le chlorure de méthylène. On élimine les impuretés importantes, mais sans isoler de fractions pures. On concentre l'éluat combiné par distillation à 20[deg.] en un résidu huileux qui semble contenir une certaine quantité de 2,2-diméthoxy-1-méthylpyrrolidine. On chromatographie la substance à nouveau sur une colonne d'alumine (25 g) au moyen de 200 ml de chlorure de méthylène, puis de 100 ml de méthanol à 1% dans le chlorure de méthylène. On élimine ainsi la 2,2-diméthoxy-1méthylpyrrolidine pour obtenir un certain nombre de fractions contenant des impuretés mineures et quelques fractions pures confirmées par CCM (une seule tache verte) apportant le produit désiré, rendement 53 mg.
<EMI ID=108.1>
calculé C, 58,66; H, 6,64; N, 16,42% trouvé C, 58,63; H, 6,46; N, 16,50% UV (MeOH)�max. nm: 354, 239
<EMI ID=109.1>
compatible avec la structure du composé.
EXEMPLE 24 -
7-[(1-Méthyl-2-pyrrolidinylidène)aminoJ-9a-méthoxymitosane
<EMI ID=110.1>
On chauffe au reflux pendant 48 heures une solution de 80 mg (0,16 millimole) du composé XXV et de 0,48 ml de n-butylamine dans 15 ml de chloroforme.
La CCM (méthanol/chlorure de méthylène, 2% sur alumine) révèle une tache verte principale, une petite tache bleue plus avancée et une petite tache rouge plus en retard qui sont dues au composé de départ. On verse la solution de réaction sur une colonne contenant 50 g d'alumine qu'on élue avec 200 ml de méthanol à 1% dans le chlorure de méthylène, puis 400 ml de méthanol à 2% dans le chlorure de méthylène. On combine les frac-tions contenant un seul constituant vert principal révélé par la CCM et on les concentre en un résidu qui est le produit recherché d'un poids de 24 mg.
<EMI ID=111.1>
(q, 2H), 2,72 (sl, 1H), 2,84 (s, 3H), 3,12 (m, 3H), 3,24 (s,.3H), 3,60 (dd, 1H, J=14, 2 Hz), 4,00 (dd, 1H, J=12, 6 Hz), 4,40 (d, 1H, J=14 Hz), 5,04 (t, 1H, J=14 Hz), 5,38 (dd, 1H, J=12, 6 Hz), 7,48 (sl, 2H). EXEMPLE 25 -
Composé XXVI
7-[(Méthoxyamino)méthylène]amino-9a-méthoxymitosane
<EMI ID=112.1>
On prépare une solution de 660 mg du composé XIX (1,7 millimole) dans 10 ml de méthanol et on y ajoute 170 mg de chlorhydrate de méthoxyamine (2,0 millimoles). On agite la solution à 10[deg.] pendant 3 heures et à la température ambiante pendant 2 heures. La CCM ne révèle qu'une trace du composé XIX qui n'a pas réagi. Il se forme au repos un précipité noir qu'on recueille et qu'on lave à l'acétone pour obtenir 380 mg du produit recherché (57%).
<EMI ID=113.1>
calculé C, 52,19; H, 5,40; N, 17,90% trouvé C, 51,64; H, 5,40; N, 17,83%
<EMI ID=114.1> compatible avec la structure du composé annoncé ou celle de son tautomère en C-7, à savoir
<EMI ID=115.1>
EXEMPLE 26 -
Composé XXVII
7-[(Benzyloxyamino)méthylène]amino-9a-méthoxymitosane
<EMI ID=116.1>
On prépare une solution de 100 mg du composé XIX (0,26 millimole) dans 2 ml de méthanol contenant 0,5 ml de triéthylamine et on y ajoute 400 mg (2,5 millimoles) de chlorhydrate de O-benzylhydroxylamine. On laisse la réaction progresser pendant 2,5 heures à
la température ambiante. La CCM (chlorure de méthylène/méthanol 10:1) révèle une zone brun orange principale devant la zone verte,qui est celle correspondant au composé XIX. On concentre le mélange de réaction en un résidu qu'on soumet à la chromatographie rapide sur du gel de silice (20 g) au moyen de chlorure de méthylène/méthanol 20:1 pour l'élution. On recueille la zone brune principale apportant le produit désiré qu'on collecte sous la forme d'un solide amorphe d'un poids de 80 mg (rendement de 65,6%).
<EMI ID=117.1>
calculé C, 59,10; H, 5,35; N, 14,97% trouvé C, 58,43; H, 5,48; N, 14,62%
<EMI ID=118.1> 1570, 1275, 1220, 1060.
<EMI ID=119.1>
compatible avec la structure du composé annoncé ou celle de son tautomère en C-7, à savoir
<EMI ID=120.1>
On récupère 10 mg de composé XIX qui n'a pas réagi.
EXEMPLE 27 -
Composé XXVIII
7-(1,3-Diméthyl-2-imidazolinylidène)-9a-méthoxymitosane
<EMI ID=121.1>
On dissout 0,34 g de mitomycine C (1 millimole) dans 5 ml de 1,3-diméthyl-2-imidazolidone et on y ajoute à la température ambiante 0,1 g d'hydrure de sodium
(à 50% dans l'huile, 2,08 millimoles). On conserve le mélange pendant 20 minutes à la température ambiante, puis on le refroidit au bain de glace et de sel (-15[deg.]
On conserve le mélange pendant 10 minutes à cette température, puis on y ajoute 0,65 g (2 millimoles) de chlorure de 2-chloro-1,3-diméthyl-4,5-dihydro-(3H)-imidazoliminium. On maintient le mélange à -15[deg.] pendant
1 heure, puis on le dilue à l'acétate d'éthyle et on
le chromatographie sur une colonne d'alumine. On élue la colonne au chlorure de méthylène, puis au chlorure de méthylène contenant 2% en volume de méthanol. On recueille une fraction de couleur verte consistant en le produit recherché qu'on purifie davantage par chromatographie sur alumine qu'on élue avec du chlorure de méthylène contenant 10% en volume de méthanol, production 20 mg (5%).
<EMI ID=122.1>
calculé C, 53,03; H, 6,34; N, 18,55% trouvé C, 52,68; H, 6,21; N, 18,15%
<EMI ID=123.1>
(s, 3H), 2,74 (m, 1H), 3,03-3,32 (m, 5H), 3,26 (s, 3H), 3,66 (dl, 1H, J=12 Hz), 4,02 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz), 4,75 (d, 1H, J=12 Hz), 5,09 (tl, 1H, J=ll Hz), 5,44
<EMI ID=124.1>
IR (KBr) 3400, 3280, 2930, 1700, 1610, 1480, 1330,
<EMI ID=125.1>
EXEMPLE 28 -
Composé XXIX
7 -(1,3-Diméthyltétrahydropyrimidinylidène)amino-9améthoxymitosane
<EMI ID=126.1>
On ajoute de l'hydrure de sodium (dispersion à 50% dans l'huile, 200 mg, 4,2 millimoles) en atmosphère d'azote à une solution de mitomycine C (680 mg, 2 millimoles) dans 8 ml de 1,3-diméthyl-3,4,5,6-tétrahydro(lH,3H)-2-pyrimidinone. On conserve le mélange pendant 20 minutes à la température ambiante, puis
on le refroidit à -25[deg.] . On y ajoute 0,73 g de chlorure de 2-chloro-1,3-diméthyl-2,3,4,5-tétrahydro-pyrimidinium (4 millimoles) et on conserve le nouveau mélange à -25[deg.] pendant 3 heures. On le dilue ensuite avec de l'acétate d'éthyle et 2 ml de méthanol. On verse le mélange sans autre traitement sur une colonne sèche d'alumine chromatographique qu'on élue d'abord avec du chlorure de méthylène, puis avec 2% de méthanol dans du chlorure de méthylène pour obtenir 0,35 g du composé recherché (rendement de 39,5%),
P.F. 138-140[deg.] .
<EMI ID=127.1>
calculé C, 54,65; H, 6,33; N, 18,21% trouvé C, 54,78; H, 6,18; N, 18,21%
<EMI ID=128.1>
(s, 3H), 2,64 (s, 3H), 2,76 (m, 1H), 2,90-3,30 (m, 5H), 3,26 (s, 3H), 3,74 (d, 1H, J=12Hz), 4,05 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz), 4,97 (d, 1H, J=12 Hz), 5,09 (t, 1H, J=ll Hz), 5,41 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz).
IR (KBr) 3430, 3280, 2930, 1710, 1570, 1480, 1450,
<EMI ID=129.1>
EXEMPLE 29 -
Composé XXX
7-(Tétraméthyldiaminométhylène)amino-9a-méthoxymitosane
<EMI ID=130.1>
V
On mélange 425 mg de mitomycine C (1,42 millimole) avec 85,3 mg d'hydrure de sodium en dispersion
à 50% dans de l'huile et on y ajoute 4 ml de diméthylformamide. On agite le mélange à la température ambiante en atmosphère d'argon pendant 10 minutes, puis on le refroidit à -35[deg.] . On ajoute 289 mg de chlorure de tétraméthylchloroformamidinium (2,13 millimoles) et
on laisse le mélange se réchauffer jusqu'à 5[deg.] en
2 heures. On ajoute ensuite de la carboglace pilée
au mélange pour arrêter la réaction et on chasse le solvant par distillation sous pression réduite. On chromatographie le résidu sur une colonne de 100 g d'alumine qu'on élue avec du méthanol à 3% en volume dans du chlorure de méthylène. On purifie le composé davantage par CCM sur alumine (5% de méthanol en volume dans du chlorure de méthylène) pour obtenir deux fractions de 17 mg et de 76 mg. On recristallise cette dernière dans l'acétone-éther pour obtenir le produit recherché, P.F. 193-195[deg.] , (rendement 12%).
<EMI ID=131.1>
calculé C, 55,54; H, 6,53; N, 19,43% trouvé C, 54,92; H, 6,53; N, 19,29%
<EMI ID=132.1>
(s, 6H), 2,75 (m, 1H), 3,15 (d, 1H , J=4 Hz), 3,26 (s, 3H), 3,65 (d, 1H, J=12 Hz), 4,00 (dd, 1H, J=ll, 5 Hz), 4,62 (d, 1H, J=12 Hz), 5,04 (t, 1H, J=ll Hz), 4,38
(dd, 1H, J=ll, 5 Hz).
IR (KBr) 3430, 3280, 2920, 1710, 1610, 1495, 1335,
<EMI ID=133.1>
EXEMPLE 30 -
Composé XXXI
<EMI ID=134.1>
<EMI ID=135.1>
On prépare une solution 0,5 M de chlorure de pipéridinylchlorométhylèneiminium en ajoutant goutte
à goutte du chlorure d'oxalyle (380 mg, 3 millimoles)
à 6 ml de chloroforme contenant 0,34 g (3 millimoles) de 1-formylpipéridine. On ajoute séparément de l'hydrure de sodium (96 mg) (dispersion à 50% dans l'huile, 2 millimoles) en atmosphère d'azote à une solution de mitomycine C (334 mg, 1 millimol.e) dans 3 ml de 1-formylpipéridine. Après 15 minutes d'agitation à la température ambiante, on refroidit la solution à -25[deg.]
et on y ajoute la solution d'iminium préparée précédemment (4 ml, 2 millimoles). On conserve le mélange de réaction à -25[deg.] pendant 1 heure et on arrête la réaction par addition de glace carbonique. Après addition de méthanol (1 ml), on absorbe le produit sur de l'alumine neutre. On dépose l'alumine chargée sur une colonne de 30 g d'alumine. On élue la colonne d'abord avec du chlorure de méthylène,puis avec 3% en volume de méthanol dans du chlorure de méthylène pour obtenir 360 mg (84%) du composé recherché, P.F.68-70[deg.] .
<EMI ID=136.1>
calculé C, 55,80; H, 6,58; N, 15,49% trouvé C, 55,57; H, 6,21; N, 15,91%
<EMI ID=137.1>
(m, 1H), 3,06-3,30 (m, 3H), 3,25 (s, 3H), 3,48-3,70
(m, 2H), 3,57 (d, 1H, J=13 Hz), 4,01 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz). 4,43 (d, 1H, J=13 Hz), 5,02 (tl, 1H, 3=11 Hz), 5,55 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz), 7,86 (s, 1H).
IR (KBr) 3440, 3350, 3300, 2935, 2835, 1710, 1615, 1520,
<EMI ID=138.1>
212 (épaulement) nm.
EXEMPLE 31 -
7-Hydroxy-N -diméthylaminométhylène-9a-méthoxymitosane
<EMI ID=139.1>
On ajoute du diméthylacétal de diméthylformamide (1 ml) à une solution de 7-hydroxy-9a-méthoxymitosane (20 mg) dans du chlorure de méthylène (3 ml)
et on agite la solution à environ 65[deg.] pendant 30 minutes. On observe l'avancement de la réaction par CCM
(chlorure de méthylène/méthanol 10:1). On recueille le produit en concentrant le mélange sous pression réduite et en chromatographiant le résidu sur du gel de silice pour isoler le composé recherché.
Le tableau IV rassemble les résultats d'épreu-
<EMI ID=140.1>
melles auxquelles on a implanté intrapéritonéalement un inoculum de tumeur de 106 cellules d'ascite de la leucémie P-388 de la souris et auxquelles on a administré différentes doses d'un composé expérimental de la formule I ou bien de mitomycine C. Les composés sont administrés par injection intrapéritonéale. Pour chaque dose, on prend des groupes de six souris auxquelles on administre une seule dose du composé une seule fois par jour. Pour chaque série d'expériences, on prend un groupe de dix souris témoins recevant de la solution physiologique salée. Le témoin positif est formé par les groupes de souris recevant de la mitomycine C. On applique un programme de 30 jours et on détermine la survie moyenne en jours dans chaque groupe de souris, de même que le nombre de souris survivantes au terme des 30 jours.
On pèse les souris avant le traitement et à nouveau au sixième jour. On évalue la toxicité
du principe actif d'après l'évolution de la perte de poids. On choisit des souris d'un poids de 20 g et
on considère comme n'étant pas excessive une perte de poids atteignant 2 g. On exprime les résultats sous
la forme % T/t qui est le rapport du temps moyen de survie dans le groupe traité au temps moyen de survie dans le groupe témoin recevant la solution physiologique salée, que multiplie 100. Habituellement, les animaux recevant la solution physiologique salée meurent dans les neuf jours. L"'effet maximum" au tableau ciaprès est indiqué en % T/t et la dose assurant cet effet est précisée. Les valeurs entre parenthèses
sont celles obtenues avec la mitomycine C au cours
de la même expérience sur le témoin positif. Il est donc possible d'estimer la toxicité des composés de l'invention par comparaison avec celle de la mitomycine C. On considère qu'un effet minimum en termes
de % T/t est de 125. La dose effective minimale mentionnée au tableau ci-après est la dose assurant un % T/t d'environ 125. Les deux valeurs précisées dans chaque cas dans la colonne intitulée "changement moyen de poids" sont respectivement le changement moyen de
poids par souris à la dose efficace maximale et à la dose efficace minimale.
TABLEAU IV
Inhibition de la leucémie P-388 de la souris
<EMI ID=141.1>
TABLEAU IV (suite)
Inhibition de la leucémie P-388 de la souris
<EMI ID=142.1>
<1> en mg/kg de poids du corps
<2> en g par souris, aux jours 1 et 6 aux doses efficaces maximale et minimale
Les composés XIX et XX sont exceptionnellement intéressants parce que leur activité l'emporte nettement sur celle de la mitomycine C tant par l'effet maximum que par la puissance en mg (importance des doses assurant des effets équivalents). Ce sont chacun des composés de formule I où A représente le radi-
<EMI ID=143.1>
<EMI ID=144.1>
<EMI ID=145.1>
un radical aminométhylène de la formule R<3>R4N-C=
<EMI ID=146.1>
Les bis-amidines de formule I faisant l'objet de l'invention où A et B représentent chacun un tel radical amidino sont également d'un intérêt sensible par leur activité contre les tumeurs. On peut se référer à ce propos aux données précisées dans le tableau pour les composés V, VI, VII, IX, X et XIV qui ont cette particularité de structure.
Le tableau V rassemble les résultats d'épreuves contre le mélanome B16 entretenu chez la souris. On
<EMI ID=147.1>
péritonéalement un implant de la tumeur. Le programme est d'une durée de 60 jours. On prend des groupes de dix souris pour chaque dose et on détermine le temps
de survie moyen dans chaque groupe. Les animaux témoins inoculés comme les animaux d'épreuve et recevant le véhicule de l'injection sans principe actif
ont un temps de survie moyen de 21 jours. On évalue l'efficacité par la comparaison du temps de survie à celui des témoins (% T/t) et on détermine pour chaque composé la dose efficace maximale et la dose efficace minimale. La dose efficace minimale est celle donnant
un % T/t de 125. Pour chaque dose, on administre aux animaux le composé expérimental aux jours 1, 5 et 9 par voie intrapéritonéale. On évalue la toxicité par mesure du changement moyen de poids au jour indiqué, à la dose efficace maximale et à la dose efficace minimale. Une perte de poids de 2 g pour une souris de 20 g n'est pas excessive.
TABLEAU V
Inhibition du mélanome B16 Changement
<EMI ID=148.1>
* Les valeurs entre parenthèses sont celles des témoins recevant la mitomycine C.
On essaye le composé XXX (exemple 29) et le composé XXIX (exemple 28) sur le mélanome B16 de la souris après implantation sous-cutanée de la tumeur
et par administration intraveineuse du principe actif. On détermine comme précédemment le temps de survie au cours d'un traitement de 40 jours. On note le changement de poids au 12e jour. La dose efficace maximale du composé XXX est de 1 mg par kg et assure un % T/t de 156 avec un gain de poids de 1,5 g. On utilise des groupes de six animaux dont trois animaux survivent pendant les 40 jours avec cette dose. La dose efficace minimale est de 0,25 mg/kg, pour laquelle le changement de poids au 12e jour est de 1,0 g. La dose efficace maximale du composé XXIX est de 8 mg/kg avec un % T/t
de 177 et un changement de poids de -0,6. La dose efficace minimale est de 4 mg/kg avec un changement de poids de +0,8. Au cours de la même expérience, la dose efficace maximale de mitomycine C est de 3 mg/kg avec un % T/t de 195 et un changement de poids de -0,5. La dose efficace minimale de mitomycine C n'a pas été déterminée.
Au cours d'une étude toxicologique rapide sur des groupes de cinq souris mâles BDFl par dose recevant une dose intrapéritonéale unique du composé XIX, on n'observe pas de diminution sensible du nombre des lymphocytes à la dose efficace optimale de ce composé
(1,6 mg/kg i.p.). A cette dose, il n'y a pas d'augmentation sensible de l'azote urique sanguin ni de la phosphotransférase glutamique du sérum, ce qui révèle l'absence d'effet sur la fonction rénale ou hépatique ou la suppression de l'activité lymphocytaire.
En raison de l'activité remarquable manifestée contre les tumeurs expérimentales chez les animaux et d'une toxicité plus faible que celle de la mitomycine C, l'invention a aussi pour objet l'administration des composés de formule I pour inhiber les tumeurs chez les mammifères. A cette fin, les composés peuvent être administrés par voie systémique en quantité sensiblement non toxique,mais efficace contre les tumeurs à un animal porteur d'une tumeur.
Amidines
The present invention relates to mitomycin analogs which contain one or more amidino radicals (class 260, subclass 326.24). These compounds are derivatives of mitomycin C in which the 7-amino radical and / or the nitrogen atom of the carbamido radical are part of an amidino radical. These compounds exhibit activity against experimental tumors in animals.
According to the systematic nomenclature of Chemical Abstracts, mitomycin C is called the
<EMI ID = 1.1>
number of the azirinopyrroloindole ring system being as follows:
<EMI ID = 2.1>
Chemical Abstracts
According to current terminology in the field of mitomycins, this ring system carrying different substituents characteristic of mitomycins is called mitosan.
�
<EMI ID = 3.1>
Mitosan
This nomenclature is suitable for simple derivatives such as those bearing substituents on the nitrogen atom of the azirino radical and at positions 7 and 9a, but exposes to some ambiguities and drawbacks. No traditional numbering system distinguishes between the nitrogen atom of the azirino radical and the nitrogen atom
of the carbamoyl radical in the side chain which carry both of the substituents in certain of the compounds of the invention. For this reason, the nitrogen atom <EMI ID = 4.1>
<EMI ID = 5.1>
mitosanes for the purposes of the invention. When the compounds of the invention are identified by the term "mitosan" or by the structural formula, their stereochemical configuration is that of mitomycin C.
Mitomycin C is an antibiotic produced by fermentation and currently used in particular in the United States of America for the treatment of concealed adenocarcinoma of the stomach or pancreas in proven combinations with other recognized chemotherapeutic agents, as well as for palliative treatment after the failure of another therapy
<EMI ID = 6.1>
13201, Physicians' Desk Reference 35th edition, 1981, pages 717 and 718). Mitomycin C and its preparation by fermentation are the subject of United States patent n [deg.] 3,660,578 based in particular on a patent application in Japan of April 6, 1957.
The structures of mitomycins A, B and C and porfiromycin have been published by J.S. Webb et al. from Lederle Laboratories Division American Cyanamid Company, J. Amer. Chem. Soc. 84, 3185-3187
(1962). One of the chemical transformations carried out during this structural study to establish the relationship between mitomycin A and mitomycin C is the conversion of the first or 7-9 d-dimethoxymitosan, by reaction with ammonia in the second or 7-amino9o (-methoxymitosan. Elimination of the 7-methoxy radical from mitomycin A has proved to be a reaction of considerable interest for preparing the antitumor derivatives of mitomycin C. all relate to the conversion of mitomycin A to an antitumor 7- (substituted amino) -mitomycin C.
This research aimed to prepare more active derivatives, but less toxic than mitomycin C: Matsui et al. "The Journal of Antibiotics", XXI, 189-198 (1968). Kinoshita et al. "J. Med. Chem."
14, 103-109 (1971). Iyengar et al. "J. Med. Chem."
24, 975-981 (1981). Iyengar, Sami, Remers, and Bradner, Abstracts of Papers Annual Meeting of the American Chemical Society, Las Vegas, Nevada, March 1982,
Abstract No. MEDI 72.
The following patents relate to the preparation of 7- (substituted amino) -mitosans by reaction of mitomycin A, mitomycin B or one of their N derivatives -substituted with a primary or secondary amine: Cosulich et al. EUA patent No. 3,332,944 (July 25, 1967); Matsui et al. EU Patent No. 3,420,846 (January 7, 1969); Matsui et al. EU Patent No. 3,450,705 (June 17, 1969); Matsui et al. EUA patent No 3,514,452 (May 26
1970); Nakano et al. EUA Patent No. 4,231,936 (November 4
1980); Remers EUA patent No 4,268,676 (May 19, 1981).
Different derivatives of mitomycin C carrying an amino radical substituted in position 7 have also been obtained by direct biosynthesis, in this case
by adding different primary amines to the fermentation broth and by conducting the fermentation of
the usual way to produce mitomycin
(C.A. Claridge et al. Abst. Of the Annual Metting
of Amer. Soc. for Microbiology 1982. Abs. 028).
Mitomycin C is the main mitomycin obtained by fermentation and constitutes the marketed form. The usual technique of converting mitomycin C to mitomycin A suitable for producing
semi-synthetic mitomycin C analogs
which carry a substituted amino radical, such as
is exposed in the aforementioned memoirs, consists in hydrolyzing mitomycin C into the corresponding 7-hydroxymitosan, which is a highly unstable compound, then in methylating the latter using diazomethane, which is a very dangerous substance to handle. To avoid having to methylate with diazomethane 7-0-demethylmitomycin A obtained by hydrolysis of mitomycin C,
we also tried to use 7-acyloxymitosans
(Kyowa Hakko Kogyo KK Japanese patent No. J5 6073-085, Farmdoc No. 56227 D / 31).
The present invention relates to a new group of monoguanidino- or mono- and bis-amidino-analogs of mitomycin C in which the nitrogen atom of the 7-amino radical and / or the nitrogen atom of the radical
<EMI ID = 7.1>
cal amidino or the nitrogen atom of the 7-amino radical is part of a guanidino radical. Corresponding mitomycin A analogs carrying a methoxy radical
<EMI ID = 8.1>
are also the subject of the invention. The compounds of the invention correspond to the following structural formula:
<EMI ID = 9.1>
where A represents an amino, methoxy, hydroxyl radical,
<EMI ID = 10.1>
radical of formula:
<EMI ID = 11.1>
B represents an amino radical or the amidino radical
<EMI ID = 12.1>
of formula R R N-C = N- and at least one of A and B represents one of the specified radicals other than amino, methoxy or hydroxyl,
n represents 0, 1, 2 or 3,
<EMI ID = 13.1>
lower, lower alkanoyl, benzoyl or substituted benzoyl whose substituent is a lower alkyl, lower alkoxy, halo, amino or nitro radical,
R2 represents a hydrogen atom or a lower alkyl, phenyl, (lower alkyl) phenyl radical,
(lower alkoxy) phenyl, halophenyl, aminophenyl, nitrophenyl, thienyl, furyl, cyano, di (lower alkyl) amino, lower alkoxy or lower alkylthio,
R <3> represents a lower alkyl radical, lower alkoxy or constitutes with R4 and the nitrogen atom to which they are united a pyrrolidine radical, 2-, or 3-
<EMI ID = 14.1>
(lower alkyl) piperidine, 2,6-di (lower alkyl) piperidine, piperazine, 4-substituted piperazine (of which
the substituent is an alkyl or carbalkoxy radical each having 1 to 8 carbon atoms, phenyl, methylphenyl, methoxyphenyl, halophenyl, nitrophenyl
or benzyl), azepine, 2-, 3-, 4- or 5- (lower alkyl) azepine, morpholine, thiomorpholine, thiomorpholine-1oxide or thiomorpholine-1,1-dioxide,
R4 represents a lower alkyl radical or constitutes with R <3> and the nitrogen atom to which they are united
a pyrrolidine radical, 2- or 3- (lower alkyl) pyrrolidine, piperidine, 2-, 3- or 4 - inférieur lower alkyl) piperidine, 2,6-di (lower alkyl) piperidine, piperazine, piperazine 4- substituted (including the substituent
is an alkyl or carbalkoxy radical, each of which has 1 to 8 carbon atoms, phenyl, methylphenyl, methoxyphenyl, halophenyl, nitrophenyl or benzyl), azepine, 2-, 3-, 4- or 5- (lower alkyl) azepine, morpholine, thiomorpholine, thiomorpholine-1-oxide or thiomorpholine-1,1-dioxide,
<EMI ID = 15.1>
genoalkyl, Cl-18 hydroxyalkyl, C4-8 cycloalkyl, aryl or lower aralkyl each of which has up to 12 carbon atoms or a 3 to 8 membered heteroalicyclic or heteroaromatic radical of which at least two are carbon atoms ,
R 7 and R 9 independently represent hydrogen atoms or lower alkyl radicals,
it being understood that each of the lower alkyl, lower alkanoyl and lower alkoxy radicals mentioned above has 1 to 6 carbon atoms.
It is obvious to the specialist that some of the amidino radicals give rise to tautomeric forms. These are also defined by the formulas above and are the subject of the invention.
The substances of formula I above have anti-tumor activity in experimental animals. They are also useful as intermediates for the preparation of other compounds exhibiting this activity. The invention also relates to the methods for
to prepare the above substances and to transform them into other useful compounds having anti-tumor activity in experimental animals, as described below.
The process of the present invention using the above substances as intermediates
for the preparation of other compounds having an antitumor activity in animals comprises the reaction of a compound of formula I where A and / or B represent the indicated radiocalamidino with a primary amine leading
<EMI ID = 16.1>
<EMI ID = 17.1>
mitomycin A and mitomycin C. With a few exceptions, primary amines also react
at position 7 by eliminating the amidino radical and replacing it with the amino radical which they provide. These processes are illustrated by the following equations:
<EMI ID = 18.1>
formula IV
R representing_the substituent carried by the nitrogen atom in various known and new 7- (amino-substituted) mitomycins C described here and primary amines capable of displacing the 7-amidino radical of formula II is chosen from the radicals Cl-18 alkyl
<EMI ID = 19.1>
alkyl, C4-8 cycloalkyl, aryl, lower aralkyl or lower aralkoxy each of which has up to 12 carbon atoms and heteroalicyclic and heteroaromatic radicals having 3 to 8 members, at least two of which are carbon atoms. R representing the substituent carried by the nitrogen of the primary amines ca
<EMI ID = 20.1>
is the remainder of a very weakly basic aliphatic amine or of a highly sterically hindered alkylamine or aralkoylamine. Examples are trifluoroethylamine, benzhydrylamine (or aminodiphenylmethane) and t-butylamine.
The compounds of formula I are obtained by reacting mitomycin C, 7-hydroxy-9a-methoxymitosan or mitomycin A or else a substituted N analog of any of these compounds with an amide-acetal. The compounds of formula I in which
A but not B represents this amidino radical can also be prepared by reaction of mitomycin C or one of its analogues N-substituted with a strong base
<EMI ID = 21.1>
reaction of the anion with a reagent capable of generating the aminomethylene radical, such as a halogenomethyleniminium salt.
The preferred compounds which are the subject of the invention are the analogs of mitomycin C in which the 7-amino radical is part of a substituted or unsubstituted amidino radical. They show potent activity against experimental tumors in animals. These compounds are prepared by reacting mitomycin C with a reagent capable of transforming the 7-amino radical into a 7-amidino radical. The preferred reagents for this purpose are amide acetals which react in good yield and under moderate conditions with mitomycin C (Examples 1-5 and 18).
Other amidine-forming reagents are imidoyl halides (example 17), halogenethyleneimium salts (example 15), 2-halogenoalkylpyridinium halides (example 16) and iminoethers or iminothioethers (examples 13 and 14) which react with the anionic form of mitomycin C resulting from the deprotonation of the 7-amino radical by reaction with a strong base. The conditions for the deprotonation of
mitomycin C amounts to reacting mitomycin C in solution in dimethylformamide with approximately 1.5 molar proportion of sodium hydride at room temperature. The reaction of the resulting anionic form with one of the abovementioned reagents is preferably carried out with 1 to 1.5 molar proportion thereof relative to mitomycin C between room temperature and around -60 [deg.] C. Polar aprotic organic solvents such as dimethylformamide, hexamethylphosphoramide, dimethylsulfoxide or pyridine
are used as reaction media. The method, however, is not limited to the formation of anionic mitomycin C in this way alone, since different variants are obvious to the specialist.
The preferred method for preparing the compounds of formula I where B or A and 2B represent the
<EMI ID = 22.1>
amidino radical of formula R R N-C = N- consists in the reaction of mitomycin C or mitomycin A or one of their N derivatives -substituted with an amide-acetal of formula:
<EMI ID = 23.1>
where R, R and R are as defined above and R is a lower alkyl or cycloalkyl radical containing up to 6 carbon atoms or both
<EMI ID = 24.1>
with the two oxygen atoms and the intermediate carbon atom a 5- or 6-membered ring structure. The reaction of these amide acetals with primary amines is conventional and it is the skill of the specialist to carry out the reaction with mitomycin C, mitomycin A or their Nla-alkyl derivatives. One can refer on this subject, for example, to H.E. Winberg patent of the United States of America n [deg.] 3,121,084 (February 11
1964) and to R.F. Abdulla et al. "The Chemistry of Formamide Acetals", Tetrahedron, volume 35 pages 1720-1724
(1979).
The Applicant prefers to carry out the reaction in a liquid anhydrous reaction medium in which the diluent is a liquid which is compatible with the reaction conditions. Preferably, this liquid is a lower halogenated aliphatic hydrocarbon or a lower alkanol or more advantageously a mixture
both. Chloroform and methanol as well as their mixtures are eminently suitable. The reaction is carried out at a temperature of 40 to 65 [deg.] C for a time sufficient for it to be completed.
When using a large excess (about 60 times) of acetal, the predominant product is
the bis-amidin product � that is to say a compound of formula I where A and B each represent the amidino radical. The N-formylated derivative sometimes appears as a by-product. However, when the quantity of acetal is limited (approximately 10 times), in addition to the bis-amine product, a mono-amine product is formed, namely a product of formula I where A represents the amino radical and B represents the radical. amidino. The mixtures of these reaction products are easily separated by chromatography as described in the examples below.
Various commercial amide-acetals which are suitable for this process are mentioned in Table I taken from the abovementioned article by Abdulla et al., Page 1685.
TABLE I
Various amide-acetals marketed
<EMI ID = 25.1>
<EMI ID = 26.1>
a cyano, di (lower alkyl) amino, lower alkoxy or lower alkylthio radical are obtained by replacing the amide-acetals in the above process with the following orthocarbonates:
<EMI ID = 27.1>
These reagents can be obtained as described for that of formula VI by Kantlehner et al., Liebigs Ann. Chem., 1981, 70-84 and for those of formulas VII, VIII and IX by H. Meerwein, et al., Liebigs Ann. Chem.
641, 1 (1961).
The amine derivatives of formula I where represent
<EMI ID = 28.1>
sense R NHC = N-, or R N = C-N- are obtained from
the anionic form of mitomycin C or one of its N7-substituted derivatives as described above. Halogenomethyliminium salts suitable for the process of the invention have been described in the literature. Examples are given by W. Kantlehner in "Advances in Organic Chemistry", volume 9, part 2, Wiley Interscience, 1079, pages 81 and 82. The table
II below is taken from Kantlehner's article.
Table II
Halogenomethyliminium salts
<EMI ID = 29.1>
<EMI ID = 30.1>
When a halogenomethyliminium salt
as illustrated in table II serves as a reagent, it is sometimes advantageous to use the corresponding amide as solvent, that is to say the amide from which
iminium salt. When the corresponding amides are solid, hexamethylphosphoramide or pyridine are also suitable. This is illustrated in Examples 17 and 19.
Imidoyl chlorides from N-substituted formamides are also suitable as reagents for this purpose. Their preparation is known, as it appears
<EMI ID = 31.1>
of Imidoyl Halides ", Plenum Press, New York, 1968, pages 74-76. The reaction of these compounds with the amine-forming amines is also well known, as described by SR Sandler and W. Karo in" Organic Chemistry ", volume 12-111, AT Blomquist
and H. Wasserman, editors, Academic Press New York, page 227.
Table III
Imidoyl chloride
<EMI ID = 32.1>
Table III (continued)
<EMI ID = 33.1>
Table III (continued)
<EMI ID = 34.1>
The compounds of formula I where A represents the
R <2>
amidino radical unsubstituted on nitrogen, H2N-C = N-,
R <2> R5
or HN = C-N- are obtained by reaction of an imino ether
<EMI ID = 35.1>
in either anionic form as described above. The protective radical is then removed in a conventional manner. Isopropyl formimidate whose amino radical is protected by the radical
<EMI ID = 36.1>
formula
<EMI ID = 37.1>
the preparation methods consist in reacting the anionic form of mitomycin C with cyclic halomethyleneethylene salts or cyclic imidoyl halides where R2 and R <3> of the formula
<EMI ID = 38.1>
are united in one cycle. Suitable reagents
for the reaction with anionic mitomycin C are 2-chloro-1-methylpyridinium iodide (example 16),
2-chloro-4,5-dihydro-1-methyl-1 (3H) -pyrrolidinium chloride (Table II), N, N'-dimethylN, N'-trimethylenechloroformamidinium chloride (Example 28) and others cyclic imidoyl halides from 2-azetidinones, 2-pyrrolidinones, 2-piperidinones and 2-azepinones. Again, when R 7 or R9 in
the final product represents a hydrogen atom, the protective radical as above is used in
the cyclic halogenomethyleneiminium intermediate salt.
Compounds of formula I where A or A and B
represent an amidino radical of formula
<EMI ID = 39.1>
react with primary amines of formula R5NH2
<EMI ID = 40.1>
coyl, aryl or lower aralkyl each of which has up to 12 carbon atoms and heteroalicyclic or heteroaromatic radicals having 3 to 8 members, at least two of which are carbon atoms.
The only limitation weighing on the choice of the primary amine, other than the absence of functional radicals incompatible with the reaction conditions, is that the nitrogen atom of the amine function is united to a carbon atom which brings to the minus one hydrogen atom and less than two aryl radicals. An anhydrous liquid organic compound serves as a reaction medium and any such compound is suitable as long as it is compatible with the reaction conditions and does not adversely participate in the reaction. A molecular excess of the primary amine is generally used.
A reaction temperature of about -15 [deg.] C to +50 [deg.] C is preferred. The reaction product is a 7- (amino
<EMI ID = 41.1>
tomycin C carrying a substituent as defined in
<EMI ID = 42.1>
known to have significant activity against experimental tumors in animals.
Certain primary amines of formula R6NH2
have been found to be unsuitable for displacing the 7-amidino radical by the method described in the above paragraph. R6 represents an alkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, aralkyl or heteroalicyclic radical from 4 to
18 carbon atoms including the carbon atom bearing
the amino radical is a tertiary carbon atom
or a secondary carbon atom carrying two aryl radicals. Certain other weakly basic aliphatic amines, such as trifluoroethylamine also do not make it possible to displace the 7-amidino radical. These amines are useful for transforming a compound of formula I where A and B each represent the amino radical
formula dino
<EMI ID = 43.1>
into a compound of formula I
where only A represents this amidino radical. These amines, although they do not have the possibility of displacing the 7-amidino radical, nevertheless have the capacity to split the amidino radical B into an NH2 radical to give rise to the carbamido function characteristic of unsubstituted mitosanes. The amine itself is suitable as a reaction medium or a solvent system of the type defined in the previous paragraph can be used. This process is preferably carried out at a temperature of 20 to 60 [deg.] C.
Melting points are determined using a ThomasHoover capillary melting point device and are not corrected. Temperatures are expressed in degrees Celcius. The proton nuclear magnetic resonance (NMR) spectra are recorded using a Varian XL100 spectrometer, in pyridine d5 unless otherwise indicated. Infrared spectra
(IR) are measured using a Beckman 4240 spectrophotometer on the sample mixed with bromide
<EMI ID = 44.1>
using a Varian-Cary 219 spectrophotometer.
Thin layer chromatography (TLC) is carried out on plates pre-coated with 0.25 mm of silica gel which are observed in UV light. Rapid chromatography is performed on silica
<EMI ID = 45.1>
reduced pressure below 50 [deg.] C.
EXAMPLE 1 -
Compound V
<EMI ID = 46.1>
methylene-9a-methoxymitosan
Compound VI
<EMI ID = 47.1>
<EMI ID = 48.1>
<EMI ID = 49.1>
A total of 9.6 ml (2.4 ml fractions at 0, 18, 21 and 23 hours) of N, N-dimethylformamide dimethyl acetal is added to a suspension of 500 mg (1.50 mmol) of mitomycin C in 25 ml of chloroform and the suspension is stirred at about 50 [deg.] for 41 hours. After evaporation of the solvent and the excess reactants under reduced pressure, a dark green residue is obtained; TLC (methylene chloride / methanol 20: 1) reveals the absence of mitomycin C and the presence of two new green constituents (Rf = 0.16 and 0.22).
The major constituent is isolated (Rf = 0.16) by rapid chromatography with elution using methylene chloride / methanol 20: 1 to obtain a green solid
(340 mg, 51.5%) giving, by dissolution in diethyl ether, then addition of hexane, compound V which is a dark green amorphous powder.
<EMI ID = 50.1>
(s, 3H), 2.82 (s, 3H), 2.86 (s, 6H), 3.22 (s, 3H), 3.30
(if, 1H), 3.60 (d, J = 12Hz), 4.12 (dd, 1H, J = 10, 4Hz), 4.43 (d, 1H, J = 12Hz), 4.90 (if , 1H), 5.10 (t, 1H, J = 10 Hz), 5.52 (dd, 1H, J = 10, 4Hz), 7.85 (s, 1H), 8.64 (s, 1H) .
<EMI ID = 51.1>
calculated C, 56.71; H, 6.08; N, 18.90% found C, 56.20; H, 6.28; N, 17.88% The minor constituent is isolated (Rf = 0.22)
(180 mg, 25.35%) as an amorphous solid by precipitation from diethyl ether and hexane and identified as Compound VI.
<EMI ID = 52.1>
gulets, 12H), 3.2 (s, 3H), 3.65 (m, 2H), 4.04 (d, 1H, J = 4Hz), 4.16 (dd, 1H, J = 12, 4Hz) , 4.60 (d, 1H, J = 13Hz), 4.86 (t, 1H, J = 12Hz), 4.90 (s, 1H), 5.48 (dd, 1H, J = 12, 4Hz) , 7.90 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 9.06 (s, 1H).
<EMI ID = 53.1>
calculated C, 55.89; H, 5.93; N, 17.78%
found C, 55.41; H, 5.96; N, 16.99% TLC examination of the solutions of compounds V and VI in ethyl acetate or in dimethyl acetal
<EMI ID = 54.1>
ambient for more than 10 hours reveals that compound VI (Rf = 0.22) is converted into compound V (Rf = 0.16) to give a solution highly enriched in the latter.
Examples 2 to 7 are carried out according to the procedure of Example 1 with the differences indicated below in order to obtain different other compounds in accordance with the invention.
EXAMPLE 2 -
Compound VII
<EMI ID = 55.1>
amino) -methylene-9a-methoxymitosan
It is heated with stirring for 15 hours
at 53 [deg.] a suspension of mitomycin C (200 mg, 0.6 millimole) in diethylacetal of N, N-diisopropylformamide (3 ml). The reaction mixture is poured into 50 ml of water and extracted with ethyl acetate (3 x 30 ml).
<EMI ID = 56.1>
they are evaporated to obtain a dark green syrup which
TLC (methylene chloride / methanol 10: 1) reveals
the presence of a major constituent at Rf = 0.43 in the presence of more mobile impurities (Rf = 0.45-0.50). The major constituent VII is isolated in the form of a dark green solid (156 mg, 46.8%) by two rapid chromatographies with elution using methylene chloride / methanol 20: 1.
<EMI ID = 57.1>
2.78 (dd, 1H, J = 4.2Hz), 3.05 (d, 1H, J = 4Hz), 3.22 (s,
<EMI ID = 58.1>
1H, J = 12 Hz), 4.56 (t, 1H, J = 10 Hz), 4.88 (dd, 1H, J = 10, 4Hz), 7.83 (s, 1H), 8.67 ( s, 1H).
<EMI ID = 59.1>
1600, 1550, 1235, 1060.
UV (MeOH) At max, nm: 246 and 393
Analysis for C29H44N605.
calculated C, 62.55; H, 7.91; N, 15.10% found C, 62.03; H, 7.80; N, 14.60% EXAMPLE 3 -
Compound XIV
<EMI ID = 60.1>
methylene-9a-methoxy-N -methylmitosan
In the present example, one starts from porfiromycin (Nla-methyl mitomycin C) in an amount of 130 mg,
(0.37 millimole) for the reaction with 0.8 ml (1.5 millimole) of N, N-dimethylformamide dimethylacetal in
10 ml chloroform and 2 ml methanol as solvent
<EMI ID = 61.1>
isolates compound XIV in the form of a syrup after evaporation of the solvents and is purified by rapid chromatography on 20 g of silica gel which is eluted with methylene chloride / methanol (20: 1).
<EMI ID = 62.1> (d, 1H, J = 4Hz), 2.80 (s, 3H), 2.84 (s, 3H), 2.90 (s,
6H), 3.20 (s, 3H), 3.52 (dd, 1H, J = 2, 12Hz), 4.10 (dd,
1H, J = 4, llHz), 4.38 (d, 1H, J = 12 Hz), 4.92 (t, 1H, J = llHz), 4.96 (sl, 1H), 5.46 (dd , 1H, J = 4, 11Hz), 7.86
(s, 1H), 8.70 (s, 1H).
TLC with methylene chloride / methanol 9: 1, Rf = 0.53.
<EMI ID = 63.1>
calculated C, 57.60; H, 6.55; N, 18.33%
found C, 57.11; H, 6.11; N, 17.99%
In this way, compound XV or 7-amino-N-dimethylaminomethylene-9a-methoxy-N -methylmitosan is obtained in the form of a by-product.
30% TLC, Rf = 0.40 (methylene chloride / methanol 9: 1).
<EMI ID = 64.1>
5Hz), 2.25 (s, 3H), 2.66 (d, 1H, J = 5Hz), 2.76 (s, 3H), 2.86 (s, 3H), 3.18 (s, 3H ), 3.51 (dd, 1H, J = 2, 12Hz), 4.08 (dd, 1H, J = 4, 10Hz), 4.50 (d, 1H, J = 10Hz), 4.90
(t, 1H, J = 10 Hz), 5.05 (sl), 5.43 (dd, 1H, J = 4, 10Hz), 8.70 (s, 1H).
<EMI ID = 65.1>
1625, 1553, 1230, 1125.
UV (MeOH) � max, nm: 358, 244 and 216.
<EMI ID = 66.1>
calculated C; 56.53; H, 6.20; N, 17.38% found C, 54.68; H, 6.13; N, 16.59% EXAMPLE 4 -
Compound IX
<EMI ID = 67.1>
(1-piperidinylmethylene) mitosan
3 ml of N- (diethoxymethyl pip piperidine and 200 mg of mitomycin C at 60 [deg.]) Are reacted for 2.5 hours in solution in chloroform (3 ml).
The product is obtained with a yield of 27.6% whose TLC indicates an Rf of 0.20 (methylene chloride / methanol 20: 1).
<EMI ID = 68.1>
2.80 (sl, 1H), 3.24 (s, 3H), 3.00-3.40 (m, 5H), 3.403.80 (m, 5H), 4.13 (dd, 1H, J = 10, 4Hz), 4.45 (d, 1H, J = 12 Hz), 4.90 (if, 2H), 5.12 (t, 1H, J = 10Hz), 5.56
(dd, 1H, J = 10 4Hz), 7.87 (s, 1H), 8.70 (s, 1H).
<EMI ID = 69.1>
calculated C, 61.79; H, 6.87; N, 16.02%
found C, 61.01; H, 6.85; N, 15.34%
As a major constituent, the N-formylated derivative of the above compound is obtained, which is compound VIII or Nla-formyl-9a-methoxy-7 - [(1-piperidinylamino) -
<EMI ID = 70.1>
with a yield of 43% and whose TLC indicates an Rf of 0.25 (methylene chloride / methanol 20: 1).
<EMI ID = 71.1>
4.90 (t, 1H, J = llHz), 4.94 (si, 1H), 5.54 (dd, 1H, J = ll, 4Hz), 7.94 (s, 1H), 8.71 ( s, 1H), 9.08 (s, 1H).
<EMI ID = 72.1>
Analysis for C28H36N606
calculated C, 60.08; H, 6.52; N, 15.21% found C, 59.99; H, 6.17; N, 15.07% EXAMPLE 5 -
Compound X
<EMI ID = 73.1>
pholinomethylene) mitosan
A stirred suspension of mitomycin C (200 mg, 0.6 millimole) in chloroform (10 ml) and N-diethoxymethylmorpholine (4 ml) is heated to about 53 [deg.] For 42 hours. The reaction mixture is concentrated to a syrup under high vacuum. Separation is carried out by summary rapid chromatography
(methylene chloride / methanol 25: 1) to isolate green compounds from excess reagents. All the green compounds are dissolved in 20 ml of ethyl acetate and the solution is washed with water (3 x 20 ml). The mixture is extracted from the washing water again with ethyl acetate (3 x 15 ml). After combining all the fractions in ethyl acetate, they are dried (Na2SO4) and evaporated to obtain a dark green syrup whose TLC (methylene chloride / methanol 10: 1) reveals a defined green constituent at
Rf = 0.33, in addition to various green impurities (Rf = 0.35 to 0.40). By rapid chromatography, the compound of Rf = 0.33 (130 mg, 56.8%) which is a dark green amorphous solid identified as compound X is isolated.
<EMI ID = 74.1>
1H, J = 2Hz), 3.22 (s, 3H), 3.30-3.94 (m, 18H), 4.20 (d, 1H, J = 12Hz), 4.40 - � sl, 1H), 4.54 (t, 1H, J = 10Hz), 4.88
(dd, 1H, J = 10Hz, 4Hz), 7.74 (s, 1H), 8.51 (s, 1H).
<EMI ID = 75.1>
calculated C, 56.78; H, 6.06; N, 15.90%
found C, 53.07; H, 6.03; N, 15.37% EXAMPLE 6 -
Compound XVI
7-Amino-N-dimethylaminomethylene-9a-methoxymitosan
Mitomycin C (200 mg, 0.6 millimole) is dissolved in 10 ml of chloroform and 2 ml of methanol and 0.64 ml of N, N-dimethylformamide dimethylacetal (4.8 mmol) are added, then the solution is stirred at about 50 [deg.] for 50 minutes. TLC (methylene chloride: methanol 90:10) reveals a trace of unreacted mitomycin C (Rf = 0.22) and two new constituents (Rf = 0.42 and 0.33 respectively). The solution is concentrated under reduced pressure in a syrup which is subjected to rapid chromatography (25 g
silica gel) with elution with methylene chloride / methanol (20: 1).
The most mobile constituent is isolated (Rf = 0.42) in the form of a green solid (60 mg, 22.5%)
<EMI ID = 76.1>
being compound V.
The major blue constituent is isolated (Rf = 0.33) in the form of an amorphous solid (148 mg, 63.3%) which is characterized as being compound XVI. An analytical sample is prepared by precipitation from methylene chloride and n-pentane.
<EMI ID = 77.1>
(s, 3H), 3.21 (s, 3H), 3.28 (d, 1H, J = 4Hz), 3.62 (dd, 1H, J = 2, 13Hz), 3.94 (si), 4.14 (dd, 1H, J = 4, 12Hz), 4.56 (d, 1H, J = 13Hz), 5.12 (t, 1H, J = 10Hz), 5.52 (dd, 1H, J = 4, 10Hz).
<EMI ID = 78.1>
calculated C, 55.48; H, 5.91; N, 17.98% found C, 54.70; H, 6.14; N, 17.95% EXAMPLE 7 -
Compound XVII
<EMI ID = 79.1>
The mitomycin C of Example 1 is replaced by mitomycin A (170 mg) which is reacted with the dimethylacetal of N, N-dimethylformamide (0.6 ml) in solution in chloroform / methanol (10: 1) at 50 [deg.] for 1 hour. The desired compound is obtained with a yield of 48%, the TLC of which indicates an Rf of 0.50
(methylene chloride / methanol 9: 1).
<EMI ID = 80.1>
(s, 3H), 3.22 (s, 3H), 3.28 (d, 1H), 3.56 (dd, 1H, J = 2,
13Hz), 4.02 (s, 3H), 4.10 (dd, 1H, J = 4, 10Hz), 4.24
<EMI ID = 81.1>
calculated C, 56.39; H, 5.94; N, 13.85%
found C, 56.51; H, 5.92; N, 13.71%
The Nla-formylated derivative of compound XVII, that is to say the compound, is obtained with a yield of 16.5%.
<EMI ID = 82.1>
b formylmitosan, whose TLC indicates an Rf of 0.61 (methylene chloride / methanol 9: 1).
<EMI ID = 83.1>
(d, 1H, .J = 13Hz), 4.86 (t, 1H, J = 12Hz), 5.42 (dd,
1H, J = 4, 12Hz), 8.66 (s, 1H), 9.08 (s, 1H).
EXAMPLE 8 -
Compound XIX
7- (Dimethylaminomethylene) amino-9a-methoxymitosan
Aminodiphenylmethane (2.2 ml,
10.8 millimoles) to 600 mg of compound V (1.35 millimoles) dissolved in methanol (10 ml) and the solution is stirred at 54 [deg.] For 4 hours. The progress of the reaction is observed by TLC (methylene chloride / methanol 90:10). At the end of the 4 hours, the starting compound (Rf = 0.35) has disappeared and a new important green zone (Rf = 0.29) has appeared. The solution is concentrated under reduced pressure and the resulting syrup is subjected to rapid chromatography (25 g of silica gel) with elution using methylene chloride / methanol 20: 1. We gather the fractions containing
the green compound (Rf = 0.29), they are dried (Na2SO4) and
we concentrate them. The compound XIX is isolated in the form of an amorphous solid (215 mg, 41%).
<EMI ID = 84.1>
(s, 3H), 2.88 (s, 3H), 3.08 (si, 1H), 3.24 (s, 3H), 3.56
(if, 1H, J = 12Hz), 4.00 (dd, 1H), 4.44 (d, 1H, J = 12Hz), 5.06 (t, 1H, J = 10Hz), 5.56 (dd , 1H, J = 10.4Hz), 7.58
(if, 2H), 7.88 (s, 1H).
<EMI ID = 85.1>
calculated C, 55.48; H, 5.91; N, 17.98%
found C, 54.83; H, 5.67; N, 16.90%
By replacing compound V in Example 8 as the starting compound with the N-formylated derivative or compound VI and carrying out the reaction for 20 hours at room temperature, compound XIX is obtained in substantially the same way and with the same yield.
EXAMPLE 9 -
Compound XX
7- (Dimethylaminomethylene) amino-9a-methoxy-Nla-methylmitosan
1 g of compound XIV (2.18 mmol) is dissolved in methanol (20 ml) and aminodiphenylmethane (3.5 ml, 17.18 mmol) is added, then the resulting solution is stirred for 5 hours at room temperature and for 5 hours at 40 [deg.]. The TLC (CH2C12MeOH 90:10) of the reaction mixture reveals that the major part of the starting compound (Rf = 0.55) has been consumed and that a significant new green zone has formed (Rf = 0.48 ). Continuation of operations as in Example 8 leads to compound XX
which is an amorphous solid (350 mg). The purification is completed by rapid chromatography (7 g of silica gel) with elution using methylene chloride / methanol (250 ml, 96/4 v / v) and by precipitation of the resulting solid (Rf = 0.48) at starting from methylene chloride (5 ml) and hexane (50 ml) to isolate the analytically pure compound XX (314 mg, 35.7%) which is a solid.
<EMI ID = 86.1>
10Hz), 4.17 (d, 1H, J = 12Hz), 4.38 (t, 1H, J = 10Hz), 4.68 (m, 2H), 4.76 (dd, 1H, J = 4, 10Hz), 7.72 (s, 1H).
<EMI ID = 87.1>
calculated C, 56.53; H, 6.20; N, 17.36%
<EMI ID = 88.1>
EXAMPLE 10 -
Compound XI
7- (n-Propyl) amino-9a-methoxymitosan
330 mg of compound V (0.74 millimole) are dissolved in anhydrous methanol (10 ml) and n-propylamine (1.0 ml) is added thereto. The reaction mixture is stirred for 6 hours at room temperature
<EMI ID = 89.1>
solvent and excess reagents under reduced pressure and the residue is subjected to rapid chromatography
on silica gel. We reprecipitate the blue constituent
(Rf = 0.40), obtained by elution with methylene chloride / methanol 30: 1, from methylene chloride with hexane to obtain compound XI which is an amorphous gray powder (125 mg, 44 , 5%).
<EMI ID = 90.1>
(s, 3H), 2.74 (sl, 1H), 3.12 (sl, 1H), 3.22 (s, 3H), 3.36 (q, 2H), 3.60 (d, 1H, J = 12Hz), 3.96 (dd, 1H, J = llHz, 4Hz), 4.54 (d, 1H, J = 12Hz), 5.00 (m, 3H), 5.36 (dd, 1H, J = 11.4 Hz), 6.90 (t, 1H).
<EMI ID = 91.1>
calculated C, 57.40; H, 6.38; N, 14.88%
found C, 57.28; H, 6.41; N, 14.08%
EXAMPLE 11 -
Compound XII
7- (2-Hydroxyethyl) amino-9a-methoxymitosan
330 mg of compound V (0.74 millimole) are dissolved in anhydrous methanol (5 ml) and ethanolamine (2 ml) is added. The reaction mixture is stirred at room temperature for 2 hours, then diluted with water (50 ml) and extracted with ethyl acetate (5 x 60 ml). The mixture of extracts in ethyl acetate (Na2SO4) is dried and concentrated to a bluish purple residue, giving, by column chromatography with elution using 10% methanol in methylene chloride and by concentration of the fractions pool containing compound XII, 105 mg
(37%) of compound XII. Which is an amorphous solid.
<EMI ID = 92.1>
(d, 1H, H = 4Hz), 3.24 (s, 3H), 3.65 (dd, 1H, J = 2, 12Hz), 3.70-4.20 (m, 5H), 4.52 (d, 1H, J = 13Hz), 4.96 (t, 1H, J = 12Hz), 7.38 (t, 1H), 7.58 (if).
<EMI ID = 93.1>
Analysis for C17H22N406
calculated C, 53.92; H, 5.82; N, 14.80%
found C, 51.30; H, 5.88; N, 14.80%
EXAMPLE 12 -
Compound XIII
7- [2-Benzylthioethyl] amino-9a-methoxymitosan
200 mg of compound V (0.45 millimole) are dissolved in methanol (2 ml) and S-benzyl2-aminoethanethiol (0.5 ml) is added, then the solution is stirred at room temperature for 16 hours. The residue which the evaporation of the solvent gives under reduced pressure is subjected to rapid chromatography (40 g of silica gel) with elution using 6% methanol in methylene chloride (400 ml). The blue constituent is isolated (Rf about 0.5 in methanol at
10% in methylene chloride) as an amorphous solid (65 mg, 29.8%). The spectroscopic data (NMR, IR, UV and mass) are compatible with the assigned structure.
<EMI ID = 94.1>
calculated C, 59.49; H, 5.82; N, 11.56% found C, 59.72; H, 5.94; N, 11.08%
<EMI ID = 95.1>
(A) Diisopropylethylamine is added slowly
(2.1 millimoles) at 0 [deg.] In a nitrogen atmosphere to a solution of isopropyl formimidate hydrochloride
(1 millimole) in dimethylformamide (DMF). To the resulting solution is added dropwise to 0 [deg.] <EMI ID = 96.1> resulting limpid tion is the solution'A.
(B) Add a solution of mitomycin C (1 millimole) in 5 ml of DMF to a suspension of sodium hydride
(1.5 millimole) in 3 ml of DMF. The suspension was stirred at room temperature for 20 minutes and cooled to about -40 to -50 [deg.] Before adding solution A above. We keep the solution at
-40 [deg.] For 1 hour, then allowed to warm to room temperature. After standing at room temperature for about 6-18 hours, the reaction mixture is diluted with methylene chloride and filtered.
The solid residue which the evaporation of the filtrate gives is subjected to chromatography on silica gel to isolate the desired compound whose amidino function is protected.
(C) The protective radical of the amidino function of the above intermediate is eliminated according to the method described by Carpino and Tsao (J. Chem. Soc. Chem. Comm.
358 (1978)) so as to obtain the desired unsubstituted amidine.
<EMI ID = 97.1>
(A) Diisopropylethylamine (21 millimoles) is added slowly at 0 [deg.] Under a nitrogen atmosphere to a solution of isopropyl formimidate hydrochloride (1 millimole) in DMF (2 ml). Methyl iodide is added to <EMI ID = 98.1>
solution B.
(B) The operations of Example 13 (B) are repeated, replacing solution A with solution B in order to obtain the desired compound.
EXAMPLE 15 -
<EMI ID = 99.1>
compound XIX
A 0.5 M solution of N, N-dimethylchloromethyleniminium chloride is prepared by adding drop
oxalyl chloride (1.57 g, 12.5 millimoles)
<EMI ID = 100.1>
in 25 ml of chloroform, then stirring the mixture for 30 minutes at room temperature. Separately, a solution of mitomycin C (334 mg,
1 millimole) in 5 ml DMF to a NaH suspension
(36 mg, 1.5 millimole) in 3 ml of DMF. The solution is stirred at room temperature for 20 minutes
and it is cooled to about -40 to -50 [deg.], then the above solution of N, N-dimethylchloromethyleniminium chloride (3 ml, 1.5 millimole) is added to it. An additional NaH (18 mg, 0.75 millimole) is added after 10 minutes of stirring at -40 [deg.]. The solution is stored at -40 [deg.] For 1 hour, then it is diluted with methylene chloride and filtered. The residue which the evaporation of the filtrate gives is subjected to TLC on silica gel (elution with 10% methanol in methylene chloride). The extraction of the main green strip gives
78 mg (43% based on the mitomycin C collected) of an amorphous solid whose NMR spectrum and TLC are identical to those of compound XIX obtained in Example 8. The extraction of the purple band gives 150 mg of mitomycin C.
EXAMPLE 16 -
7- (1-Methyl-2- (H) -pyridinylidene) amino-9a-methoxymitosan
<EMI ID = 101.1>
<EMI ID = 102.1>
C (242 mg, 0.725 millimole) and NaH (43.5 mg, 1.81 millimole). After 15 minutes of stirring, 2-chloro-1-methylpyridinium iodide (370 mg, 1.45 millimole) is added at room temperature. The solution is stirred for 1.5 hours and then diluted with ethyl acetate, then filtered. The residue which the evaporation of the filtrate gives is subjected to TLC on silica gel (elution with 5% methanol in chloride
methylene). The minor product (12 mg) is compound XIX (Example 8). The major product (75 mg) is purified by TLC on silica gel (10% methanol in methylene chloride) to collect 6 mg (2%) of the desired compound.
<EMI ID = 103.1>
5.10 (t, 1H, J = 10 Hz), 5.43 (dd, 1H, J = 10, 4Hz), 5.99 (dt, 1H, J = 9.2 Hz), 6.09 (dd , 1H, J = 9.1 Hz), 6.95 (dd, 1H, J = 9, 7.2 Hz), 7.32 (dd, 1H, J = 7.1 Hz). EXAMPLE 17 -
� [(Methylaminomethylene) amino] -9a-methoxymitosan
<EMI ID = 104.1>
Sodium hydride (12 mg, 0.5 millimole) is added under a nitrogen atmosphere to a solution of mitomycin C (167 mg, 0.5 millimole) in 2 ml of hexamethylphosphoramide. To this solution is added N-methylformimidoyl chloride (19 mg, 0.25 millimole), N.H. Bosshard and H. Zollinger, Helv. Chim. Acta, 42,
1659 (1959). The solution is stirred at room temperature for 10 minutes, then sodium hydride (6 mg, 0.25 millimole) and N-methylformimidoyl chloride (9.5 mg, 0.13 millimole) are added thereto. After 6 to 12 hours of stirring, the solution is diluted with ethyl acetate and filtered. By evaporation of the solvent and chromatographic purification of the residue, the desired compound is obtained.
EXAMPLE 18 -
Compound XXI
9a-Methoxy-7- (1-morpholinomethylene) aminomitosan
<EMI ID = 105.1>
4-diethoxymethylmorpholine is added
(12.5 ml) to mitomycin C (600 mg, 1.8 millimole) suspended in chloroform (30 ml) and the resulting suspension is heated to 58 [deg.] For 48 hours. After 48 hours, the TLC (20% methanol in methylene chloride) reveals that the reaction is not completed. The solution is concentrated under reduced pressure to obtain a syrup to which water is added
(100 ml). After 20 minutes of stirring, the dark green solution is extracted with methylene chloride (5 × 50 ml.) And the combined extracts are dried and concentrated to
a syrup. Aminodiphenylmethane (6.5 ml) is added to the syrup in methanol (20 ml) and the solution is stirred-EXAMPLE 23 -
Compound XXV
<EMI ID = 106.1>
<EMI ID = 107.1>
Heated to 55 [deg.] For 5 hours 1.5 g of 2,2-dimethoxy-1-methylpyrrolidine (10.3 millimoles)
(H. Eilingsfeld et al. Angew. Chem., 72, 836 (1960)), and 280 mg of mitomycin C (0.34 millimole) in 20 ml of methanol. The reaction mixture was examined by thin layer chromatography on an alumina plate with methylene chloride / methanol 97: 3 as solvent. The TCC reveals a main green spot corresponding to the product and a minor blue spot corresponding to the starting mitomycin C. The solvent is distilled off under vacuum at 40 [deg.] And the residue is dissolved in methylene chloride, then the solution is poured onto a 4.5 cm column containing 150 g of alumina. The elution is carried out with 50 ml of methylene chloride, then 600 ml of 1% methanol in
methylene chloride. Large impurities are removed, but without isolating pure fractions. The combined eluate is concentrated by distillation at 20 [deg.] To an oily residue which appears to contain a certain amount of 2,2-dimethoxy-1-methylpyrrolidine. The substance is again chromatographed on an alumina column (25 g) using 200 ml of methylene chloride, then 100 ml of 1% methanol in methylene chloride. The 2,2-dimethoxy-1methylpyrrolidine is thus eliminated in order to obtain a certain number of fractions containing minor impurities and some pure fractions confirmed by TLC (a single green spot) providing the desired product, yield 53 mg.
<EMI ID = 108.1>
calculated C, 58.66; H, 6.64; N, 16.42% found C, 58.63; H, 6.46; N, 16.50% UV (MeOH) max max. nm: 354, 239
<EMI ID = 109.1>
compatible with the structure of the compound.
EXAMPLE 24 -
7 - [(1-Methyl-2-pyrrolidinylidene) aminoJ-9a-methoxymitosan
<EMI ID = 110.1>
A solution of 80 mg (0.16 millimole) of compound XXV and 0.48 ml of n-butylamine in 15 ml of chloroform is heated at reflux for 48 hours.
The TLC (methanol / methylene chloride, 2% on alumina) reveals a main green spot, a small more advanced blue spot and a small more late red spot which are due to the starting compound. The reaction solution is poured onto a column containing 50 g of alumina which is eluted with 200 ml of 1% methanol in methylene chloride, then 400 ml of 2% methanol in methylene chloride. The fractions containing a single main green constituent revealed by the TLC are combined and concentrated in a residue which is the desired product with a weight of 24 mg.
<EMI ID = 111.1>
(q, 2H), 2.72 (sl, 1H), 2.84 (s, 3H), 3.12 (m, 3H), 3.24 (s, .3H), 3.60 (dd, 1H , J = 14.2 Hz), 4.00 (dd, 1H, J = 12.6 Hz), 4.40 (d, 1H, J = 14 Hz), 5.04 (t, 1H, J = 14 Hz), 5.38 (dd, 1H, J = 12.6 Hz), 7.48 (sl, 2H). EXAMPLE 25 -
Compound XXVI
7 - [(Methoxyamino) methylene] amino-9a-methoxymitosan
<EMI ID = 112.1>
A solution of 660 mg of compound XIX (1.7 millimole) in 10 ml of methanol is prepared and 170 mg of methoxyamine hydrochloride (2.0 millimoles) are added thereto. The solution is stirred at 10 [deg.] For 3 hours and at room temperature for 2 hours. The TCC reveals only a trace of the unreacted compound XIX. A black precipitate is formed on standing, which is collected and washed with acetone to obtain 380 mg of the desired product (57%).
<EMI ID = 113.1>
calculated C, 52.19; H, 5.40; N, 17.90% found C, 51.64; H, 5.40; N, 17.83%
<EMI ID = 114.1> compatible with the structure of the announced compound or that of its C-7 tautomer, namely
<EMI ID = 115.1>
EXAMPLE 26 -
Compound XXVII
7 - [(Benzyloxyamino) methylene] amino-9a-methoxymitosan
<EMI ID = 116.1>
A solution of 100 mg of compound XIX (0.26 millimole) in 2 ml of methanol containing 0.5 ml of triethylamine is prepared and 400 mg (2.5 millimoles) of O-benzylhydroxylamine hydrochloride are added thereto. The reaction is allowed to progress for 2.5 hours at
Room temperature. The TLC (methylene chloride / methanol 10: 1) reveals a main orange brown zone in front of the green zone, which is that corresponding to compound XIX. The reaction mixture is concentrated to a residue which is subjected to rapid chromatography on silica gel (20 g) using methylene chloride / methanol 20: 1 for elution. The main brown zone is collected providing the desired product which is collected in the form of an amorphous solid with a weight of 80 mg (yield of 65.6%).
<EMI ID = 117.1>
calculated C, 59.10; H, 5.35; N, 14.97% found C, 58.43; H, 5.48; N, 14.62%
<EMI ID = 118.1> 1570, 1275, 1220, 1060.
<EMI ID = 119.1>
compatible with the structure of the compound announced or that of its C-7 tautomer, namely
<EMI ID = 120.1>
10 mg of compound XIX which has not reacted are recovered.
EXAMPLE 27 -
Compound XXVIII
7- (1,3-Dimethyl-2-imidazolinylidene) -9a-methoxymitosan
<EMI ID = 121.1>
0.34 g of mitomycin C (1 millimole) is dissolved in 5 ml of 1,3-dimethyl-2-imidazolidone and 0.1 g of sodium hydride is added thereto at room temperature
(50% in oil, 2.08 millimoles). The mixture is stored for 20 minutes at room temperature, then cooled in an ice and salt bath (-15 [deg.]
The mixture is stored for 10 minutes at this temperature, then 0.65 g (2 millimoles) of 2-chloro-1,3-dimethyl-4,5-dihydro- (3H) -imidazoliminium chloride is added thereto. The mixture is kept at -15 [deg.] For
1 hour, then diluted with ethyl acetate and
chromatography on an alumina column. The column is eluted with methylene chloride, then with methylene chloride containing 2% by volume of methanol. A green fraction is collected consisting of the desired product which is further purified by chromatography on alumina which is eluted with methylene chloride containing 10% by volume of methanol, production 20 mg (5%).
<EMI ID = 122.1>
calculated C, 53.03; H, 6.34; N, 18.55% found C, 52.68; H, 6.21; N, 18.15%
<EMI ID = 123.1>
(s, 3H), 2.74 (m, 1H), 3.03-3.32 (m, 5H), 3.26 (s, 3H), 3.66 (dl, 1H, J = 12 Hz) , 4.02 (dd, 1H, J = ll, 4 Hz), 4.75 (d, 1H, J = 12 Hz), 5.09 (tl, 1H, J = ll Hz), 5.44
<EMI ID = 124.1>
IR (KBr) 3400, 3280, 2930, 1700, 1610, 1480, 1330,
<EMI ID = 125.1>
EXAMPLE 28 -
Compound XXIX
7 - (1,3-Dimethyltetrahydropyrimidinylidene) amino-9amethoxymitosan
<EMI ID = 126.1>
Sodium hydride (50% dispersion in oil, 200 mg, 4.2 millimoles) is added in a nitrogen atmosphere to a solution of mitomycin C (680 mg, 2 millimoles) in 8 ml of 1, 3-dimethyl-3,4,5,6-tetrahydro (1H, 3H) -2-pyrimidinone. The mixture is stored for 20 minutes at room temperature, then
it is cooled to -25 [deg.]. 0.73 g of 2-chloro-1,3-dimethyl-2,3,4,5-tetrahydro-pyrimidinium chloride (4 millimoles) is added thereto and the new mixture is stored at -25 [deg.] For 3 hours. It is then diluted with ethyl acetate and 2 ml of methanol. The mixture is poured without further treatment onto a dry column of chromatographic alumina which is eluted first with methylene chloride, then with 2% methanol in methylene chloride to obtain 0.35 g of the desired compound (yield 39.5%),
P.F. 138-140 [deg.].
<EMI ID = 127.1>
calculated C, 54.65; H, 6.33; N, 18.21% found C, 54.78; H, 6.18; N, 18.21%
<EMI ID = 128.1>
(s, 3H), 2.64 (s, 3H), 2.76 (m, 1H), 2.90-3.30 (m, 5H), 3.26 (s, 3H), 3.74 ( d, 1H, J = 12Hz), 4.05 (dd, 1H, J = ll, 4 Hz), 4.97 (d, 1H, J = 12 Hz), 5.09 (t, 1H, J = ll Hz), 5.41 (dd, 1H, J = ll, 4 Hz).
IR (KBr) 3430, 3280, 2930, 1710, 1570, 1480, 1450,
<EMI ID = 129.1>
EXAMPLE 29 -
Compound XXX
7- (Tetramethyldiaminomethylene) amino-9a-methoxymitosan
<EMI ID = 130.1>
V
425 mg of mitomycin C (1.42 millimole) is mixed with 85.3 mg of sodium hydride in dispersion
at 50% in oil and 4 ml of dimethylformamide are added thereto. The mixture is stirred at room temperature in an argon atmosphere for 10 minutes, then cooled to -35 [deg.]. 289 mg of tetramethylchloroformamidinium chloride (2.13 millimoles) are added and
the mixture is allowed to warm up to 5 [deg.]
2 hours. Then add crushed dry ice
to the mixture to stop the reaction and the solvent is distilled off under reduced pressure. The residue is chromatographed on a column of 100 g of alumina which is eluted with 3% by volume methanol in methylene chloride. The compound is further purified by TLC on alumina (5% methanol by volume in methylene chloride) to obtain two fractions of 17 mg and 76 mg. The latter is recrystallized from acetone-ether to obtain the desired product, mp 193-195 [deg.], (Yield 12%).
<EMI ID = 131.1>
calculated C, 55.54; H, 6.53; N, 19.43% found C, 54.92; H, 6.53; N, 19.29%
<EMI ID = 132.1>
(s, 6H), 2.75 (m, 1H), 3.15 (d, 1H, J = 4 Hz), 3.26 (s, 3H), 3.65 (d, 1H, J = 12 Hz ), 4.00 (dd, 1H, J = ll, 5 Hz), 4.62 (d, 1H, J = 12 Hz), 5.04 (t, 1H, J = ll Hz), 4.38
(dd, 1H, J = 11.5 Hz).
IR (KBr) 3430, 3280, 2920, 1710, 1610, 1495, 1335,
<EMI ID = 133.1>
EXAMPLE 30 -
Compound XXXI
<EMI ID = 134.1>
<EMI ID = 135.1>
A 0.5 M solution of piperidinylchloromethyleniminium chloride is prepared by adding drop
oxalyl chloride (380 mg, 3 millimoles)
to 6 ml of chloroform containing 0.34 g (3 millimoles) of 1-formylpiperidine. Sodium hydride (96 mg) (50% oil dispersion, 2 millimoles) is added separately in a nitrogen atmosphere to a solution of mitomycin C (334 mg, 1 millimol.e) in 3 ml of 1-formylpiperidine. After 15 minutes of stirring at room temperature, the solution is cooled to -25 [deg.]
and there is added the iminium solution prepared previously (4 ml, 2 millimoles). The reaction mixture is kept at -25 [deg.] For 1 hour and the reaction is stopped by adding dry ice. After addition of methanol (1 ml), the product is absorbed on neutral alumina. The loaded alumina is deposited on a column of 30 g of alumina. The column is eluted first with methylene chloride, then with 3% by volume of methanol in methylene chloride to obtain 360 mg (84%) of the desired compound, P.F. 68-70 [deg.].
<EMI ID = 136.1>
calculated C, 55.80; H, 6.58; N, 15.49% found C, 55.57; H, 6.21; N, 15.91%
<EMI ID = 137.1>
(m, 1H), 3.06-3.30 (m, 3H), 3.25 (s, 3H), 3.48-3.70
(m, 2H), 3.57 (d, 1H, J = 13 Hz), 4.01 (dd, 1H, J = ll, 4 Hz). 4.43 (d, 1H, J = 13 Hz), 5.02 (tl, 1H, 3 = 11 Hz), 5.55 (dd, 1H, J = ll, 4 Hz), 7.86 (s, 1H).
IR (KBr) 3440, 3350, 3300, 2935, 2835, 1710, 1615, 1520,
<EMI ID = 138.1>
212 (shoulder) nm.
EXAMPLE 31 -
7-Hydroxy-N-dimethylaminomethylene-9a-methoxymitosan
<EMI ID = 139.1>
Dimethylformamide dimethylacetal (1 ml) is added to a solution of 7-hydroxy-9a-methoxymitosan (20 mg) in methylene chloride (3 ml)
and the solution is stirred at about 65 [deg.] for 30 minutes. The progress of the reaction is observed by TLC
(methylene chloride / methanol 10: 1). The product is collected by concentrating the mixture under reduced pressure and by chromatographing the residue on silica gel to isolate the desired compound.
Table IV collates the test results.
<EMI ID = 140.1>
those to which a tumor inoculum of 106 mouse P-388 leukemia ascites cells was intraperitoneally implanted and to which different doses of an experimental compound of formula I or of mitomycin C were administered. administered by intraperitoneal injection. For each dose, groups of six mice are taken and given a single dose of the compound once a day. For each series of experiments, a group of ten control mice receiving saline physiological solution is taken. The positive control is formed by the groups of mice receiving mitomycin C. A 30-day program is applied and the average survival in days is determined in each group of mice, as well as the number of mice surviving after 30 days .
The mice are weighed before treatment and again on the sixth day. We assess the toxicity
of the active ingredient based on the evolution of weight loss. We choose mice weighing 20 g and
weight loss of up to 2 g is considered not to be excessive. We express the results under
the form% T / t which is the ratio of the average survival time in the treated group to the average survival time in the control group receiving the physiological saline solution, which multiplies 100. Usually, the animals receiving the physiological saline solution die in the nine days. The "maximum effect" in the table below is indicated in% T / t and the dose ensuring this effect is specified. Values in parentheses
are those obtained with mitomycin C during
of the same experience on the positive control. It is therefore possible to estimate the toxicity of the compounds of the invention by comparison with that of mitomycin C. It is considered that a minimum effect in terms
% T / t is 125. The minimum effective dose mentioned in the table below is the dose ensuring a% T / t of approximately 125. The two values specified in each case in the column entitled "average weight change" are respectively the average change of
weight per mouse at maximum effective dose and minimum effective dose.
TABLE IV
Inhibition of mouse P-388 leukemia
<EMI ID = 141.1>
TABLE IV (continued)
Inhibition of mouse P-388 leukemia
<EMI ID = 142.1>
<1> in mg / kg bodyweight
<2> in g per mouse, on days 1 and 6 at the maximum and minimum effective doses
Compounds XIX and XX are exceptionally interesting because their activity clearly outweighs that of mitomycin C both by the maximum effect and by the power in mg (importance of the doses ensuring equivalent effects). These are each of the compounds of formula I where A represents the radical
<EMI ID = 143.1>
<EMI ID = 144.1>
<EMI ID = 145.1>
an aminomethylene radical of the formula R <3> R4N-C =
<EMI ID = 146.1>
The bis-amidines of formula I forming the subject of the invention where A and B each represent such an amidino radical are also of significant interest by their activity against tumors. In this connection, reference can be made to the data specified in the table for the compounds V, VI, VII, IX, X and XIV which have this structural characteristic.
Table V collates the results of tests against melanoma B16 maintained in mice. We
<EMI ID = 147.1>
peritoneally an implant of the tumor. The program lasts 60 days. Groups of ten mice are taken for each dose and the time is determined
average survival in each group. Control animals inoculated as test animals and receiving the injection vehicle without active ingredient
have an average survival time of 21 days. Efficacy is evaluated by comparing the survival time with that of the controls (% T / t) and the maximum effective dose and the minimum effective dose are determined for each compound. The minimum effective dose is that giving
a% T / t of 125. For each dose, the animals are administered the test compound on days 1, 5 and 9 intraperitoneally. The toxicity is evaluated by measuring the average change in weight on the day indicated, at the maximum effective dose and at the minimum effective dose. A 2 g weight loss for a 20 g mouse is not excessive.
TABLE V
Inhibition of melanoma B16 Change
<EMI ID = 148.1>
* The values in brackets are those of the controls receiving mitomycin C.
Compound XXX (example 29) and compound XXIX (example 28) are tested on mouse B16 melanoma after subcutaneous implantation of the tumor
and by intravenous administration of the active ingredient. The survival time is determined as above during a 40-day treatment. We note the change in weight on the 12th day. The maximum effective dose of compound XXX is 1 mg per kg and provides a% T / t of 156 with a weight gain of 1.5 g. Groups of six animals are used, of which three animals survive for 40 days with this dose. The minimum effective dose is 0.25 mg / kg, for which the change in weight on day 12 is 1.0 g. The maximum effective dose of compound XXIX is 8 mg / kg with a% T / t
of 177 and a change in weight of -0.6. The minimum effective dose is 4 mg / kg with a weight change of +0.8. In the same experiment, the maximum effective dose of mitomycin C is 3 mg / kg with a% T / t of 195 and a change in weight of -0.5. The minimum effective dose of mitomycin C has not been determined.
During a rapid toxicological study on groups of five male BDFl mice per dose receiving a single intraperitoneal dose of compound XIX, no significant reduction in the number of lymphocytes was observed at the optimal effective dose of this compound
(1.6 mg / kg i.p.). At this dose, there is no appreciable increase in blood uric nitrogen or serum glutamic phosphotransferase, which reveals the absence of effect on renal or hepatic function or the suppression of activity. lymphocyte.
Because of the remarkable activity manifested against experimental tumors in animals and of a lower toxicity than that of mitomycin C, the invention also relates to the administration of the compounds of formula I for inhibiting tumors in mammals. To this end, the compounds can be administered systemically in an amount which is substantially non-toxic, but effective against tumors, to an animal carrying a tumor.