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"substances antibiotiques à noyau stéro'de amin at leurs procédés de pr6paration".
On sait que les alcaloldes extraits des feuilles de Funtumia et des feuilles d'Holarrhena, dont la structure est celle du Prégnane et du Prégnène porteur d'une Amine ou d'une
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méthylamine en 3 ou en 3 S sont antibactêriens, notamment sur les cocci et bactéries à Gram positif, antifungiques et anti- viraux.
Ces alcaloïdes de Funtumia et d'Holarrhena sont:
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- la Funtumine ou 3a-Amino-20-oxo-Prégnane-(5a).
- la Ppntumidine ou 3a-1lmint23a-hydrox-Prgnane-(5a ).
- l'Holàphylline ou 3&-mét,.cuino-20-oxo-Prgn-5-cne.
- l'Holaphyllamine ou ,-rn,o-2o-oxo-Prgn-5-ène.
- l'Holamine ou 3a-Amino-20-axo-Prégn-5-éne.
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La Demanderesse a découvert que des modifications de substitution et des associations avec divers radicaux, dans la forme de sels ou d'esters, ont permis de créer de nouvelles molécules à activité antibiotique accrue par rapport aux Amines de départ.
Ces substances faisant l'objet de la présente invention dérivent des alcaloïdes ci-dessus et répondent au schéma confi-
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guratif gênerai suivant: ..JR R , 11 R 2 /' où r est une liaison simple avec l'hydrogène 5 en a ou en ss ou une double liaison 4-5 ou 5-6 où R est un oxygène ou un hydrogène et un hydroxyle disposé en a ou en ss ou un hydrogène et un alcoyle ou un hydrogène et un ose ou un hydrogène et une osamine où Rl et R2 sont chacun et indépendamment l'un de l'autre, soit un hydrogène soit un groupement méthyle ou éthyle soit un groupe alkyle sature ou insaturé.
Conformément à l'invention, ces stéroïdes aminés peuvent être salifiés par un acide minéral mono ou polyvalent tel que l'acide chlorhydrique ou l'acide phosphorique, ou par un acide organique de structure :
R - COOH où R représente un atome d'hydrogène ou un radical méthyle ou un radical alkyl sature ou insaturé ou un cycle benzénique ou un cycle thénoïque ou un cycle pyridinique.
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Par rapport aux antibiotiques généralement connus, les composés selon la présente invention présentent les avantages d'une faible toxicité par voie parentérale, de l'ordre de 250 mg par kg, chez la Souris, d'être actifs sur les germes résistant à la Pénicilline et aux autres antibiotiques, et de présenter une thermostabilité très satisfaisante.
Ces substances selon l'invention peuvent être employées en usage interne, soit par voie orale en gellules ou comprimés éventuellement glutinisés, ou en suspension, soit par la voie parentérale par exemple en solution huileuse ou en pseudo @ solution aqueuse, avec la hyaluronidase comme éventuel adjuvant de diffusion.
Elles peuvent également être employées en usage exter- . ne, comme antibactériens ou antiviraux, par exemple sur les muqueuses du rhinopharynx, sous la forme de pulvérisations par spray ou en aérosol.
Enfin, elles peuvent aussi être employées n usage exter- ne, comme antifungique en pommade à excipient gras ou hydroso- luble ou en lotion aboolique, hydroalcoolique ou en solvant favorisant la pénétration.
L'invention s'étend également aux procédés d'obtention des susdites substances, lesquels peuvent être définis de la manière générale suivante: en ce qui concerne les dérivés, ceux-ci sont obtenus soit à partir des bases aminées naturelles, par réduction, soit à par-
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tir de la prénneol- ana,par semi-synthèse; en ce qui concerne les sels, ceux-ci sont obtenus par dissolution des ba3es stéroides aminées dans un solvant convena- ble, où elles sont mises en présence d'un acide organique, lui- même dissous dans un solvant, les sels formés étant ensuite sépa- rés par les procédésde séparation usuels.
Pour mieux faire ressortir les caractéristiques de
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l'invention, la préparatior. constituant son objet est décrite en détails ci-dessous à titre purement illustratif.
Exemple 1: Gluconate de funtumine.
1 g de Funtumine dissous dans 100 ml d'éthanol est traité par 630 mg d'acide gluconique dissous dans 100 ml d'eau.
Apres quelques instants, il y a formation d'un précipité. Le produit est filtré, lavé par l'éthanol et séché sous vide.
Fus: 191 - 193 C.
Exemple 2: Thénoate de funtumidine.
1 g de funtumidine dissous dans 50 ml d'éthanol est traité par 900 mg d'acidea thiophèhe carboxylique dissous dans 10 ml d'éthanol. Après concentration, il y a formation ' d'un précipité. Le produit est filtré, lavé par l'éthanol et séché sous vide.
Fus : 233 - 235 C.
Exemple 3: Holaphyllinol.
1 g d'holaphylline dissous dans 100 ml de méthanol est traité par 1 g de borohydrure de sodium sous agitation constante.' Apres addition, l'agitation est poursuivie 3h00. La solution est ensuite diluée dans 100 ml d'eau et extraite au chlorure de ; méthylène. Le chlorure de méthylène lavé à l'eau, séché sur sul- fate de soude anhydre, distillé, laisse un résidu de 1 g cristal- lisé dans le méthanol.
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Fus: 226 C. (a) - '3,5 (CHCl 3 C=1,5)
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Exemple 4: lIolaphyllaminol. a) l'holaphyllaminol peut être obtenu par réduction de l'holaphyllamine suivant le procédé décrit en 3. b) l'holaphyllaminol peut être obtenu à partir de la prégnènolone suivant le procédé suivant :
La prégnènolone traitée par le paratoluène sulfochlorure et en-. suite par l'acétate de potassium en milieu cétone aqueux donne le cyclo-3a-5a hydroxy 6ss pregnanone-20 ou isopregnenolone
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Cyoto 3-5 prérnane diol 6s- 20a
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A 7 g dtiaoprggnènoloner dissous dans 300 em3 de méthanol, on ajoute lentement et avec agitation magnétique 3,5 g de borohy- drure de sodium, Apres repos à la température du laboratoire pendant 12 heures, on dilue à l'eau et extrait par du chlorure de méthylène qui, lavé et séché, est distillé à sec, La mousse blanche obtenue pesé 7 g et cristallise dans l'acétone,
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Fus:
90-9200# (a) + 25 (CECI , 03182) Azido-36"prëgnëne e-ol-206 -##<.###m# 7 g de vroZa-35 prîsnanedîol -6o-20o sont traités à la tempe'* rature du laboratoire par 300 cm3 de solution d'acide azothy- drique en présence de 7 cm3 d'éthérate de trifluorure de bore,
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Apres 3 h d'agitation, la solution est lavëe par l'atrnoniaq'àe.
L'eau est séchée sur sulfate de sodium. La distillation sous ' pression réduite du solvant laisse un résidu cristallisé pesant 7,40 g qui cristallise dans l'acétone.
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Fus: lZwll2 C fa'! ' D - 50 CHCî , 3 C=2) Amino-3a- prêgnène-5-ol-20a; holaphyllaminol.
-.----------------------o------------------ 6 g d'azido-30- prégnne-5..o3-20g dissous dans 600 em3 d'éther sont réduits par 3 g d'hydrure d'aluminium-lithium à la tempéra- . ture du laboratoire pendant 4h00. L'excès de réactif est détruit par les procédés habituels, le solvant séché et distillé à sec laisse un résidu cristallisé pesant 5,5 g qui cristallise dans un mélange d'ac6tate d'éthyle-méthanol.
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Fus 218-2141 (muid - 61 0 (CHC1 , C=1) l'isoholaphyllaminol ou 6a -amino-3a, peut être obtenu à partir du ey<?Zo-3a,5a-prêgnanediol-6s-50spar le même procédé en diminuant la quantité d'éthérate detrifluorure de bore (1/20 de mole) Fus: 1550C ra' + 2365 (CHfi. , cul) D
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Exemple 5 : Dihydroholaphyllaminol, 2 g d'holaphyllaminol sont dissous dans 75 ml d'acide acétique glacial, 2 g de charbon palladié à 15% sont ajoutés. On agite en atmosphère d'hydrogène à la pression ordinaire.
L'hydrogénation est pratiquement terminée en 4h00. Le catalyseur est séparé par filtration et l'acide acétique est distillé à sec, Le résidu repris par l'eau est extrait au chlorure de méthylène après aloalinisation par l'ammoniaque* Le chlorure de méthylène lavé à l'eau, séché sur sulfate de sodium anhydre distillé laisse un résidu de 2 g.
Fus: Chlorhydrate > 300 C.
Ces composes selon l'invention ont une action bactério- statique et fungistatique caractérisée par les valeurs numériques d'inhibition consignées dans le tableau suivant, en microgrammes par millilitre et pour les bactéries suivantes: 1 Staphyllococcus ATCC 6538 2 = Staphylocoque résistant à la pénicilline et à la streptomy- cine 3 z Streptococcus pneumoniae NCTC 7465 4 = Corynebacterium diphteriae NCTC 3984 5 = Bacterium Coli ATCC 9637 6Candida albicans (Baarn) 7 = Aspergillus fumigatus (Baarn).
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<tb>
1 <SEP> 2 <SEP> 3 <SEP> 4 <SEP> 5 <SEP> 6 <SEP> 7
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Funtumine <SEP> 40 <SEP> 45 <SEP> 20 <SEP> 15 <SEP> 120
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Funtumidine <SEP> 10 <SEP> 12 <SEP> 100
<tb>
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Holaphylline. 10 10 80-100 : Holaphyllamine 8 10 ' 6 6 100 totale totale ###############¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯50 50y Holaphyllaminol Chte 4-6 3 3 10fl 80-100 $0-100 Holaphyllinol Chte 6-io 4 6 >100 totale
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<tb> DihydroholaPhyllaminol <SEP> 3- <SEP> 6 <SEP> 6 <SEP> 3 <SEP> 2 <SEP> 100 <SEP> 50
<tb>
<tb>
<tb> Gluconate <SEP> de <SEP> Funtumine <SEP> 40 <SEP> 22 <SEP> 16 <SEP> 130 <SEP>
<tb>
<tb> Thénoate <SEP> de <SEP> Funtumidine <SEP> 20 <SEP> 22 <SEP> 10 <SEP> 8 <SEP> 50 <SEP>
<tb>
<tb> Holamine <SEP> 30 <SEP> 80
<tb>
<tb> Isofuntumidine <SEP> (20a)
<SEP> 12 <SEP> 12 <SEP> 80-100
<tb>
<tb> Holaminol <SEP> 20 <SEP> 15 <SEP> 100 <SEP> faible <SEP> totale
<tb>
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Diméthy1holamine inactif inactif 100 totale mactif 100 totale
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<tb> à <SEP> 50 <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> antispo-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> re <SEP> à <SEP> 10
<tb>
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Dim6thylholaminoi inactif inactif 100 totale !##########....¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ ¯¯¯¯¯¯ à 30
Tests effectués en milieux standards Oxo "Nutrient N 2" et "Typtone Soja" et pour les Fungi, sur Sabouraud Maltosé et Glucosé.
Ces composés ont un facteur de -fixation protéique in. vitro (protein-binding) asses élevé, de l'erdre de 94 à 97%.
Ils ne diffusent pas dans l'Agar.
REVENDICATIONS.
**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.
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"Steroid Amino-Ringed Antibiotic Substances and Their Methods of Preparation".
It is known that the alkalies extracted from the leaves of Funtumia and the leaves of Holarrhena, the structure of which is that of Pregnane and Pregnene carrying an amine or a
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3 or 3 S methylamine are antibacterial, especially against cocci and Gram-positive bacteria, antifungals and anti-virals.
These alkaloids of Funtumia and Holarrhena are:
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- Funtumine or 3a-Amino-20-oxo-Pregnane- (5a).
- Ppntumidine or 3a-1lmint23a-hydrox-Prgnane- (5a).
- Holàphylline or 3 & -met, .cuino-20-oxo-Prgn-5-cne.
- Holaphyllamine or, -rn, o-2o-oxo-Prgn-5-ene.
- Holamine or 3a-Amino-20-axo-Pregn-5-en.
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The Applicant has discovered that substitution modifications and associations with various radicals, in the form of salts or esters, have made it possible to create new molecules with increased antibiotic activity compared to the starting amines.
These substances which are the subject of the present invention are derived from the above alkaloids and correspond to the confi-
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gurative general following: ..JR R, 11 R 2 / 'where r is a single bond with hydrogen 5 in a or ss or a 4-5 or 5-6 double bond where R is oxygen or hydrogen and a hydroxyl arranged in a or ss or a hydrogen and an alkyl or a hydrogen and an ose or a hydrogen and an osamine where R1 and R2 are each and independently of each other, either a hydrogen or a methyl group or ethyl is either a saturated or unsaturated alkyl group.
In accordance with the invention, these amino steroids can be salified with a mono or polyvalent mineral acid such as hydrochloric acid or phosphoric acid, or with an organic acid of structure:
R - COOH where R represents a hydrogen atom or a methyl radical or a saturated or unsaturated alkyl radical or a benzene ring or a thenoic ring or a pyridine ring.
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Compared with generally known antibiotics, the compounds according to the present invention have the advantages of low toxicity by parenteral route, of the order of 250 mg per kg, in mice, of being active against germs resistant to penicillin. and other antibiotics, and exhibit very satisfactory thermostability.
These substances according to the invention can be used internally, either orally in capsules or tablets optionally glutinized, or in suspension, or parenterally, for example in an oily solution or in pseudo @ aqueous solution, with hyaluronidase as possible. diffusion adjuvant.
They can also be used for exter-. ne, as antibacterials or antivirals, for example on the mucous membranes of the nasopharynx, in the form of spray or aerosol sprays.
Finally, they can also be used for external use, as an antifungal ointment with a fatty or water-soluble excipient or as an aboolic or hydroalcoholic lotion or as a solvent which promotes penetration.
The invention also extends to the processes for obtaining the aforesaid substances, which can be defined as follows: as regards the derivatives, these are obtained either from natural amino bases, by reduction, or from
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shooting of prenneol-ana, by semi-synthesis; as regards the salts, these are obtained by dissolving the amino steroid bases in a suitable solvent, where they are placed in the presence of an organic acid, itself dissolved in a solvent, the salts formed then being separated by the usual separation methods.
To better highlight the characteristics of
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the invention, the preparation. constituting its object is described in detail below for purely illustrative purposes.
Example 1: Funtumine gluconate.
1 g of funtumine dissolved in 100 ml of ethanol is treated with 630 mg of gluconic acid dissolved in 100 ml of water.
After a few moments, a precipitate forms. The product is filtered, washed with ethanol and dried under vacuum.
Fus: 191 - 193 C.
Example 2: Funtumidine thenoate.
1 g of funtumidine dissolved in 50 ml of ethanol is treated with 900 mg of thiophthic carboxylic acid dissolved in 10 ml of ethanol. After concentration, a precipitate forms. The product is filtered, washed with ethanol and dried under vacuum.
Fus: 233 - 235 C.
Example 3: Holaphyllinol.
1 g of holaphylline dissolved in 100 ml of methanol is treated with 1 g of sodium borohydride with constant stirring. After addition, stirring is continued for 3 hours. The solution is then diluted in 100 ml of water and extracted with chloride; methylene. Methylene chloride washed with water, dried over anhydrous sodium sulphate, distilled, leaves a residue of 1 g crystallized in methanol.
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Fus: 226 C. (a) - '3.5 (CHCl 3 C = 1.5)
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Example 4: lIolaphyllaminol. a) holaphyllaminol can be obtained by reduction of holaphyllamine according to the process described in 3. b) holaphyllaminol can be obtained from pregnenolone according to the following process:
Pregnenolone treated with paratoluene sulfochloride and en-. following potassium acetate in aqueous ketone medium gives cyclo-3a-5a hydroxy 6ss pregnanone-20 or isopregnenolone
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Cyoto 3-5 prérnane diol 6s- 20a
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3.5 g of sodium borohydride are added slowly and with magnetic stirring to 7 g of dtiaoprggnènoloner dissolved in 300 em3 of methanol. After standing at laboratory temperature for 12 hours, diluted with water and extracted with methylene chloride which, washed and dried, is distilled to dryness, The white foam obtained weighed 7 g and crystallizes in acetone,
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Fus:
90-9200 # (a) + 25 (CECI, 03182) Azido-36 "prëgnëne e-ol-206 - ## <. ### m # 7 g of vroZa-35 prîsnanedîol -6o-20o are treated at the temple '* rature of the laboratory with 300 cm3 of azothyric acid solution in the presence of 7 cm3 of boron trifluoride etherate,
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After 3 hours of stirring, the solution is washed with atrnoniaq'àe.
The water is dried over sodium sulfate. Distillation under reduced pressure of the solvent leaves a crystalline residue weighing 7.40 g which crystallizes from acetone.
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Fus: lZwll2 C fa '! 'D - 50 CHCl, 3 C = 2) Amino-3a-prenegen-5-ol-20a; holaphyllaminol.
-.---------------------- o ------------------ 6 g of azido-30 - Pregnne-5..o3-20g dissolved in 600 em3 of ether are reduced with 3 g of lithium aluminum hydride at temperature. ture of the laboratory for 4 hours. The excess of reagent is destroyed by the usual methods, the solvent dried and distilled to dryness leaves a crystalline residue weighing 5.5 g which crystallizes from a mixture of ethyl acetate-methanol.
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Fus 218-2141 (muid - 61 0 (CHC1, C = 1) isoholaphyllaminol or 6a -amino-3a, can be obtained from ey <? Zo-3a, 5a-prêgnanediol-6s-50s by the same method in decreasing the quantity of boron trifluoride etherate (1/20 of a mole) Fus: 1550C ra '+ 2365 (CHfi., cul) D
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Example 5: Dihydroholaphyllaminol, 2 g of holaphyllaminol are dissolved in 75 ml of glacial acetic acid, 2 g of 15% palladium on charcoal are added. Stirred in a hydrogen atmosphere at ordinary pressure.
The hydrogenation is practically complete in 4 hours. The catalyst is separated by filtration and the acetic acid is distilled to dryness, The residue taken up in water is extracted with methylene chloride after aloalinization with ammonia * The methylene chloride washed with water, dried over sodium sulfate. Distilled anhydrous sodium leaves a residue of 2 g.
Fus: Hydrochloride> 300 C.
These compounds according to the invention have a bacteriostatic and fungistatic action characterized by the numerical values of inhibition shown in the following table, in micrograms per milliliter and for the following bacteria: 1 Staphyllococcus ATCC 6538 2 = Staphylococcus resistant to penicillin and streptomycin 3 z Streptococcus pneumoniae NCTC 7465 4 = Corynebacterium diphteriae NCTC 3984 5 = Bacterium Coli ATCC 9637 6Candida albicans (Baarn) 7 = Aspergillus fumigatus (Baarn).
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<tb>
1 <SEP> 2 <SEP> 3 <SEP> 4 <SEP> 5 <SEP> 6 <SEP> 7
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Funtumine <SEP> 40 <SEP> 45 <SEP> 20 <SEP> 15 <SEP> 120
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Funtumidine <SEP> 10 <SEP> 12 <SEP> 100
<tb>
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Holaphylline. 10 10 80-100: Holaphyllamine 8 10 '6 6 100 total total ############### ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ 50 50y Holaphyllaminol Chte 4-6 3 3 10fl 80-100 $ 0-100 Holaphyllinol Chte 6-io 4 6> 100 total
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<tb> DihydroholaPhyllaminol <SEP> 3- <SEP> 6 <SEP> 6 <SEP> 3 <SEP> 2 <SEP> 100 <SEP> 50
<tb>
<tb>
<tb> Gluconate <SEP> of <SEP> Funtumine <SEP> 40 <SEP> 22 <SEP> 16 <SEP> 130 <SEP>
<tb>
<tb> Thenoate <SEP> of <SEP> Funtumidine <SEP> 20 <SEP> 22 <SEP> 10 <SEP> 8 <SEP> 50 <SEP>
<tb>
<tb> Holamine <SEP> 30 <SEP> 80
<tb>
<tb> Isofuntumidine <SEP> (20a)
<SEP> 12 <SEP> 12 <SEP> 80-100
<tb>
<tb> Holaminol <SEP> 20 <SEP> 15 <SEP> 100 <SEP> low <SEP> total
<tb>
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Dimethylolamine inactive inactive 100 total mactive 100 total
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<tb> to <SEP> 50 <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> antispo-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> re <SEP> to <SEP> 10
<tb>
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Dim6thylholaminoi inactive inactive 100 total! ########## .... ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ ¯¯¯¯¯¯ to 30
Tests carried out in standard Oxo "Nutrient N 2" and "Typtone Soja" media and for Fungi, on Sabouraud Maltosé and Glucose.
These compounds have a protein binding factor in. vitro (protein-binding) asses high, from 94 to 97% erdre.
They do not broadcast in the Agar.
CLAIMS.
** ATTENTION ** end of DESC field can contain start of CLMS **.