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La présente invention concerne une chalcone glucosidique nouvelle et offrant un intéret thérapeutique considérable, laquelle est isolée à partir de Glycyrrhiza glabra L., ainsi que le procédé de préparation de celle-ci qui peut être formulée en produits pharmaceutiques à usage thérapeutique -
La Glycyrrhiza glabra L., c'est-à-dire la réglisse commune, a été utilisée en médecine depuis longtemps. Les analyses d'extraits aqueux des racines séchées et réduites en poudre démontrent la présence d'albumine, de mucines, de sels d'acide glycyrrhizique, d'hydrates de carbone et d'autres substances com- plexes qui toutes peuvent être considérées comme étant des composants actifs selon les usages particuliers auxquels on destine la plante ou ses extraits.
Le liquiritoside-chalcone préparé conformément au procédé de la pré- sente invention constitue un composé chimique nouveau qui possède des propriétés chimiques caractéristiques pouvant être identifiées. Il s'agit d'une substance cristallinejaune, fondant à 139 C et dont la formule chimique est C27H32013' A l'analyse chromatographique, en utilisant un papier Whatman module 1 et un solvant d'acide acétique à 15%, ce composé révèle un R.F. de 0,4 et donne une tache brune à la lumière ultra-violette, ainsi qu'une teinte jaune avec une solution de potas- se alcoolique. La réaction à l'acide citroborique (test de Wilson) est positive.
Le spectre à l'ultra-violet en solution alcoolique montre trois maxima à 2 700, 3 120 et 3 650 A, ainsi que 3 minima à 2 500, 3 000 et 3 400 En milieu alcalin, le spectre d'absorption révèle trois maxima à 2 500 , 3 400 et 4 100 A et deux minima à 2 850 et 3 650
La chalcone est obtenue par l'application d'un processus d'extraction utilisant des solvants organiques anhydres tels que l'alcool isobutylique et/ou l'alcool éthylique et/ou n'importe quel autre alcool. Comme la présence de glycyr- rhizine et,de sucres constituent un obstacle à l'extraction de la chalcone, il est préférable d'utiliser des racines contenant de faibles concentrations de ces agents. Il y a lieu d'utiliser des racines décortiquées car l'écorce contient des résines qui constituent également un obstacle au déroulement correct du processus d'extraction.
Lorsqu'il s'agit d'extractionsconduites à échelle réduite, des réci- pients en verre "Pyrex" peuvent être utilisés, mais dans le cas de lots importants, il y a lieu d'utiliser des récipients émaillés. L'appareillage en acier inoxyda- ble pourrait éventuellement laisser des traces métalliques qui détermineraient un noircissement de la solution d'extrait alcoolique.
Ladite chalcone possède des propriétés thérapeutiques importantes en médecine, par exemple dans le traitement de maladies gastro-intestinales carac- térisées par un spasme musculaire, et elle agit efficacement pour contrôler des ulcères gastriques provoqués expérimentalement par ligature du pylore. Il joue un rôle détoxicant dans l'emploi de certains antibiotiques et de composés anti- @numatismaux tels que cortisone, phénylbutazone, aspirine , etc. Des recherches pharmacologiques soigneusement contrôlées permettent d'établir que chez le rat, aussi bien in vitro qu'in vivo, la chalcone exerce une action spécifique anti- spasmodique.
Lorsqu'on désire utiliser ce composé en médine clinique pour les humains et les animaux, des préparations destinées à l'administration par voies parentérale, orale ou rectale peuvent être convenablement préparées en utilisant les méthodes et techniques bien connues dans l'art de la fabrication pharmaceu- tique.
Les exemples ci-après décrivent le procédé de préparation de la chalcone.
EXEMPLE I Phase 1.- On procédé au déchiquetage d'un kilogramme de racines séchées et dé- cortiquées de Glycyrrhiza glabra L., que l'on dégraisse ensuite en laissant bouil- lir pendant quatre heures avec un kg de tétrachlorure de carbone sec et neutre.
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Le résidu solide est ensuite égoutté et séché à l'air.
Phase 2.- On soumet la poudre sèche à extraire à la température de reflux, en utilisant de l'alcool isobutylique primaire (point d'ébullition 108 C) avec un rapport de six litres d'alcool par Kg de racines de réglisse séchée. Ce procédé d'extraction est répété au moins trois fois, en utilisant du solvant frais à chaque opération, et on le fait durer chaque fois deux heures. Les extraits sont associés et filtrés à travers une gaze et la matière solide est finalement mise de côté.
Phase 3.- L'extrait à l'alcool est concentré sous vide à une température ne dépassant pas 60 C jusqu'à ce que la précipitation s'amorce. Le précipité est séparé par filtration en prenant soin d'éviter tout contact indésirable avec l'air, et la liqueur-mère est concentrée davantage jusqu'à constatation d'une deuxième cristallisation. Le processus peut être répété trois fois, à condition qu'il y ait suffisamment de matière à extraire.
Phase 4.- La matière précipitée est combinée et lavée avec de l'éther sulfurique, puis lavée à fond avecde l'éther et séchée sous vide au-dessus d'anhydride phos- phorique. Elle est finalement séchée à 40 C afin d'éliminer les dernières traces d'éther.
La chalcone brute est obtenue avec un rendement compris entre 2 et 2,5% et fond entre 110 et 116 C. Elle est soluble dans l'alcool isobutylique froid jusqu'à 0,28% et dans l'alcool isobutylique chaud (100 C) jusqu'à 3,2%.
Elle est très soluble dans l'alcool éthylique bouillant.
Phase 5.- 100 g de chalcone brute obtenue suivant la phase 4 sont dissous dans 0,4 à 0,5 litre d'éthanol bouillant, en remuant pendant quize minutes , après quoi l'on filtre à chaud. Le filtrant est refroidi et filtré de nouveau. Il s'agit là essentiellement d'un processus de purification puisque la chalcone est dissou - te et que la saccharose se sépare par précipitation. Au refroidissement on obtient un précipité composé de sucres et de glycyrrhizine.
Phase 6.- Un volume égal d'éther de pétrole est ajouté à l'éthanol filtré. Le précipité résineux ainsi obtenu est laissé au repos pendant 24 heures, puis on sépare les liqueurs-mères.
Phase 7.- Le précipité obtenu suivant la phase 6 est dissous dans une quantité minimum d'éthanol absolu chaud et cette solution est ajoutée à 5 à 6 litres d' alcool isobutylique à 60-80 C La solution est concentrée sous pression réduite, jusqu'à l'amorçage de la précipitation, puis on laisse cristalliser dans une glacière.
Phase 8.- Le précipité semi-cristallin est filtré, lavé rapidement en utilisant successivement trois parties d'éther éthylique, puis on fait sécher sous-vide au-dessus d'anhydride phosphorique. Le rendement en chalcone purifiée est d'en- viron 40% de la quantité utilisée dans la phase 50
Le composé purifié fond à 139 C et donne à l'analyse carbone, hydro- gène et oxygène la formule C27H32013 A l'analyse chromatographique, en utilisant un solvant d"acide acétique à 15% son R F est de 0,4 et il donne une tache brune à la lumière ultra-violette, de même qu'une teinte jaune lorsqu'on utilise la potasse alcoolique. Le composé cristallin jaune donne un test de Wilson positif (réaction à l'acide citroborique).
EXEMPLE II
On peut remplacer le tétrachlorure de carbone de l'Exemple I, phase I, par un solvant gras tel que l'éther di-éthylique, l'essence de pétrole, le ben- zène , le chloroforme ou l'hexane.
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EXEMPLE III
On peut remplacer en totalité ou en partie l'alcool isobutyle pri- maire de l'Exemple I, phase 2, par tout alcool liquide à chaîne droite ou déri- vée de la formule ROH, où R désigne un groupe alcoyle comprenant de 1 à 8 atomes de carbone.
EXEMPLE IV
Lorsqu'on désire utiliser la chalcone en médécine humaine ou vétérinai- re on peut l'administrer par voie orale, rectale, ou parentérale. Ainsi, en mé- langeant de la chalcone avec les diluants classiques, tels que l'amidon de céré- ales ou la lactose, et en ajoutant à ce mélange une charge ou substance liante appropriée, par exemple de la gomme arabique, puis en comprimant le mélange pour en faire des comprimés, on obtient une forme dosée permettant l'administration par voie orale.
Si l'on préfère'la. préparation sous forme de capsules, celles-ci peu- vent être préparées en mélangeant la chalcone avec un diluant tel que l'amidon de céréale ou la lactose, ce mélange étant ensuite utilisé pour remplir des capsules ordinaires en gélatine.
Lorsqu'on prévoit l'utilisation de la chalcone pour l'administration sous forme de comprimés ou de capsules, la concentration préférée d'ingrédient actif est de 50 mg, mais chaque comprimé peut être dosé de 10 mg à 500 mg. Les comprimés ou capsules sont administrés de 2 à 4 fois par jour, selon les besoins et l'âge du patient.
Pour l'administration parentérale, une solution stérile de la chalcone dans de l'eau distillée est préparée de façon qu'elle contienne au moins 10% en poids de l'ingrédient actif par centimètre cube de solution. La solution pour injection est administrée par doses de 1 à 2 cc, 2 à 4 fois par jour.
Des suppositoires peuvent être préparés en incorporant la chalcone à la base (support) de suppositoire composée par exemple de beurre de cacao ou d'un polyéthylène-glycol solide. La concentration de.l'ingrédient actif varie en- tre 100 et 750 mg par suppositoire, avec une concentration préférée de 500 mg l'administration s'effectuant de 2 à 4 fois par jour.
On peut mélanger la chalcone avec un glucoside flavanone préparé à par- tir de Glycyrrhiza glabra : les deux formes s'isomérisent facilement l'une dans l'autre et s'entraînent mutuellement dans les extractions décrites.
On peut obtenir encore le liquiritoside-ohaloone à partir des eaux- mères de fabrication du liquiritoside flavanone décrit dans un brevet demandé le même jour par la même déposante. Les eaux-mères obtenues dans l'exemple I sont concentrées sous pression réduite et à basse température à sec. On reprend ensui- te le procédé de fabrication du liquiritoside- chalcone de l'exemple I phase 7.
L'invention s'étend non seulement à l'ensemble des opérations ci- dessus décrites mais à celles-ci prises séparément. Ainsi le dégraissage initial peut être supprimé; de même on peut employer des racines non écprcées et même des racines riches en glycyrrhizinea
REVENDICATIONS.
1.- Liquiritoside-chalcone.
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The present invention relates to a novel glucosidic chalcone of considerable therapeutic interest, which is isolated from Glycyrrhiza glabra L., as well as to the process for the preparation thereof which can be formulated into pharmaceutical products for therapeutic use -
Glycyrrhiza glabra L., i.e. common licorice, has been used medicinally for a long time. Analyzes of aqueous extracts of dried and powdered roots demonstrate the presence of albumin, mucins, salts of glycyrrhizic acid, carbohydrates and other complex substances, all of which can be considered to be. active components according to the particular uses for which the plant or its extracts are intended.
Liquiritoside-chalcone prepared in accordance with the process of the present invention constitutes a new chemical compound which has characteristic chemical properties which can be identified. It is a yellow crystalline substance, melting at 139 C and whose chemical formula is C27H32013 'On chromatographic analysis, using Whatman module 1 paper and a 15% acetic acid solvent, this compound reveals a RF 0.4 and gives a brown spot in ultraviolet light, as well as a yellow tint with an alcoholic potassium solution. The reaction to citroboric acid (Wilson test) is positive.
The ultraviolet spectrum in alcoholic solution shows three maxima at 2700, 3120 and 3650 A, as well as 3 minima at 2500, 3000 and 3400 In an alkaline medium, the absorption spectrum reveals three maxima at 2,500, 3,400 and 4,100 A and two minima at 2,850 and 3,650
Chalcone is obtained by applying an extraction process using anhydrous organic solvents such as isobutyl alcohol and / or ethyl alcohol and / or any other alcohol. As the presence of glycyrrhizin and sugars constitute an obstacle to the extraction of chalcone, it is preferable to use roots containing low concentrations of these agents. Hulled roots should be used because the bark contains resins which also constitute an obstacle to the correct progress of the extraction process.
When it comes to small scale extractions, "Pyrex" glass containers can be used, but in the case of large batches enameled containers should be used. The stainless steel apparatus could possibly leave metallic traces which would cause the alcoholic extract solution to darken.
Said chalcone has important therapeutic properties in medicine, for example in the treatment of gastrointestinal diseases characterized by muscle spasm, and it acts effectively to control gastric ulcers experimentally caused by pyloric ligation. It plays a detoxifying role in the use of certain antibiotics and anti-traumatic compounds such as cortisone, phenylbutazone, aspirin, etc. Carefully controlled pharmacological research has made it possible to establish that in rats, both in vitro and in vivo, chalcone exerts a specific anti-spasmodic action.
When it is desired to use this compound in clinical medicine for humans and animals, preparations for parenteral, oral or rectal administration can be suitably prepared using methods and techniques well known in the art of manufacture. pharmaceu- tical.
The following examples describe the process for preparing chalcone.
EXAMPLE I Phase 1.- A kilogram of dried and peeled roots of Glycyrrhiza glabra L. is shredded, which is then degreased by allowing it to boil for four hours with one kg of dry carbon tetrachloride and neutral.
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The solid residue is then drained and air dried.
Phase 2.- The dry powder to be extracted is subjected to reflux temperature, using primary isobutyl alcohol (boiling point 108 C) with a ratio of six liters of alcohol per kg of dried licorice roots. This extraction process is repeated at least three times, using fresh solvent at each operation, and is carried out for two hours each time. The extracts are combined and filtered through a gauze and the solid material is finally set aside.
Phase 3.- The alcohol extract is concentrated under vacuum at a temperature not exceeding 60 ° C. until precipitation begins. The precipitate is filtered off, taking care to avoid unwanted contact with air, and the mother liquor is further concentrated until a second crystallization is observed. The process can be repeated three times, provided there is sufficient material to be extracted.
Phase 4.- The precipitated material is combined and washed with sulfuric ether, then washed thoroughly with ether and dried in vacuo over phosphoric anhydride. It is finally dried at 40 ° C. in order to remove the last traces of ether.
Crude chalcone is obtained with a yield of between 2 and 2.5% and melts between 110 and 116 C. It is soluble in cold isobutyl alcohol up to 0.28% and in hot isobutyl alcohol (100 C ) up to 3.2%.
It is very soluble in boiling ethyl alcohol.
Phase 5.- 100 g of crude chalcone obtained according to phase 4 are dissolved in 0.4 to 0.5 liter of boiling ethanol, stirring for fifteen minutes, after which it is filtered hot. The filter is cooled and filtered again. This is essentially a purification process since the chalcone is dissolved and the sucrose precipitates out. On cooling, a precipitate is obtained composed of sugars and glycyrrhizin.
Phase 6.- An equal volume of petroleum ether is added to the filtered ethanol. The resinous precipitate thus obtained is left to stand for 24 hours, then the mother liquors are separated.
Phase 7.- The precipitate obtained according to phase 6 is dissolved in a minimum quantity of hot absolute ethanol and this solution is added to 5 to 6 liters of isobutyl alcohol at 60-80 C. The solution is concentrated under reduced pressure, until 'at the onset of precipitation, then left to crystallize in a cooler.
Phase 8.- The semi-crystalline precipitate is filtered, washed rapidly using successively three parts of ethyl ether, then dried under vacuum over phosphorus pentoxide. The yield of purified chalcone is about 40% of the amount used in phase 50.
The purified compound melts at 139 C and on analysis of carbon, hydrogen and oxygen gives the formula C27H32013 On chromatographic analysis, using a 15% acetic acid solvent, its RF is 0.4 and it gives a brown spot in ultraviolet light, as well as a yellow tint when alcoholic potash is used.The yellow crystalline compound gives a positive Wilson test (reaction to citroboric acid).
EXAMPLE II
The carbon tetrachloride of Example I, phase I, can be replaced by a fatty solvent such as diethyl ether, petroleum gasoline, benzene, chloroform or hexane.
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EXAMPLE III
The primary isobutyl alcohol of Example I, phase 2, can be replaced in whole or in part by any straight chain or derivative liquid alcohol of the formula ROH, where R denotes an alkyl group comprising from 1 to 8 carbon atoms.
EXAMPLE IV
When it is desired to use chalcone in human or veterinary medicine, it can be administered orally, rectally, or parenterally. Thus, by mixing chalcone with conventional diluents, such as cereal starch or lactose, and adding to this mixture a suitable filler or binding substance, for example gum arabic, then compressing the mixture to make tablets, one obtains a dosage form allowing oral administration.
If you prefer it. preparation in the form of capsules, these can be prepared by mixing the chalcone with a diluent such as cereal starch or lactose, this mixture then being used to fill ordinary gelatin capsules.
When providing the use of chalcone for administration in tablet or capsule form, the preferred concentration of active ingredient is 50 mg, but each tablet may be dosed from 10 mg to 500 mg. The tablets or capsules are administered 2 to 4 times a day, depending on the needs and the age of the patient.
For parenteral administration, a sterile solution of the chalcone in distilled water is prepared so that it contains at least 10% by weight of the active ingredient per cubic centimeter of solution. The solution for injection is administered in doses of 1 to 2 cc, 2 to 4 times a day.
Suppositories can be prepared by incorporating chalcone into the suppository base (carrier) composed, for example, of cocoa butter or a solid polyethylene glycol. The concentration of the active ingredient varies between 100 and 750 mg per suppository, with a preferred concentration of 500 mg being administered 2 to 4 times per day.
Chalcone can be mixed with a flavanone glucoside prepared from Glycyrrhiza glabra: the two forms readily isomerize into each other and carry over to each other in the extractions described.
Liquiritoside-ohaloone can also be obtained from the mother liquors for the manufacture of liquiritoside flavanone described in a patent applied for the same day by the same applicant. The mother liquors obtained in Example I are concentrated under reduced pressure and at low temperature to dryness. The process for the manufacture of liquiritoside-chalcone of Example I phase 7 is then repeated.
The invention extends not only to all of the operations described above but to those taken separately. Thus the initial degreasing can be eliminated; in the same way one can use roots not peeled and even roots rich in glycyrrhizinea
CLAIMS.
1.- Liquiritoside-chalcone.
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