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PROCEDE DE PREPARAT ION D'ANATOXINES ET PRODUITS SIMILAIRES.
La présente invention a pour objet un procédé de préparation ou fabrication d'anatoxines et autres produits modificateurs du sang, de la lym- phe des animaux, de la sève végétale et d'autres milieux circulatoires ou nourriciers, produits obtenus en utilisant un parasite de ces divers milieux.
Le parasite auquel s'applique par excellence le procédé objet de la présente invention est le "Siphonospora Polymorpha" connu et décrit de- puis plusieurs années. D'autres agents parasitiques des tissus ou milieux internes animaux ou végétaux peuvent également être la base du procédé dé- crit ci-après.
D'après le procédé conforme à la présente invention, l'isolement du Siphonospora Polymorpha ou autre parasite semblable est facilité et sa cul- ture contrôlée au microscope, par l'emploi d'un colorant sélectif.
En conformité avec la présente invention, ce colorant est un mé- lange de fuchsine et de bleu de méthylène employé dans les proportions et suivant le modus operandi ci-après
On étale en couche aussi mince que possible le sang ou milieu à examiner microscopiquement au centre d'une mince lamelle ou porte-objet que l' on soumet pendant quelques instants à une chaleur d'environ 120 C.
On la plonge ensuite pendant quelques secondes dans un bain fait de 1 % d'acide lactique, 10 % d'alcool méthylique absolu et 89 % d'eau dis- tillée.
On la lave alors et on la baigne pendant dix minutes environ dans un mélange composé de un gramme de bleu de méthylène; deux grammes de fuchsine, quinze grammes d'alcool méthylique absolu et 135 grammes d'eau distillée.
Par suite de ce traitement, l'examen microscopique montrera les
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leucocytes, les hématoblastes ou déchets cellulaires ressortant en rouge bor- deaux,tandis que les globules rouges auront une légère teinte rosée. Les si- phonospora ou autres micro-organismes ressortiront comme des petites taches tranchant sur la transparence rosée-des globules rouges qu'ils infestent.
Au moyen de ce procédé de coloration il sera plus facile de con- trôler microscopiquement les opérations d'isolement et de culture du Siphono- spora ou autre parasite semblable.
Le milieu de culture où se font les ensemencements peut être tout bouillon approprié, plus particulièrement peptoné. L'acidométrie de ce milieu doit de préférence correspondre à l'indice pH 7,7. La température optima de culture sera d'environ 38 C.
L'ensemencement se fait d'après la routine habituelle pour cultu- res aérobies. On procède à un ou plusieurs repiquages successifs contrôlés mi- croscopiquement après coloration, de préférence avec le colorant sélectif ci- dessus mentionné. Ce contrôle doit porter tant sur le nombre des parasites que sur la pureté de la culture, et ce jusqu'à ce que soit obtenue une souche ac- tive et exempte d'autres micro-organismes.
Cette souche sert, à son tour, à ensemencer un bouillon ou milieu de culture qui est mis à mûrir dans une étuve le maintenant, de préférence, aux environs de 38 C.
Quand ce bouillon ou milieu de culture a atteint le degré de matu- rité et de virulence désirables, on procède à des opérations ayant pour but de tuer les.parasites ou micro-organismes semblables.
Ces opérations se font en trois temps :une formolisation qui tue les éléments les moins ténus, une déformolisation qui enlève l'excédent de ce produit et une vibrolysa,tion qui tue les éléments filtrants et achève de dévi- taliser la culture.
Le formol est, de préférence, au tiers de 40 % et on l'ajoute à la culture dans la proportion de 5 % en volume. On laisse alors reposer afin de permettre au formol de s'évaporer.
Pour vérifier si la déformolisation est complète on incorpore len- tement dans une solution aqueuse dite A au titre de 5 % de SO3Na H une secon- de solution aqueuse dite B contenant 5 % d'alcool saturé de fuchsine et on ar- rte quand on constate que la couleur de B ne vire plus, mais reste constante.
Dans le mélange A + B ainsi obtenu on incorpore lentement la cul- ture formolée. Si la coloration vire au foncé, il y a encore du formol libre, sinon, il n'y en a plus.
Pour compléter sa dévitalisation, on soumet la culture à des vibra- tions d'ordre ultra-soniques c'est-à-dire de fréquence supérieure à 18.000 pé- riodes/seconde. On utilisera pour cela tout moyen approprié, notamment les pro- priétés piézo-électriques des cristaux de quartz.
L'opération est poursuivie jusqu'à ce que l'examen microscopique avec adjuvant du colorant spécifique sus-indiqué, et le repiquage prouvent que toute vie est éteinte dans la culture.
En vue de l'utilisation de la culture dévitalisée et afin de con- trôler son action par ralentissement, on la soumet, d'après la présente inven- tion, à un traitement par un hydroxyde d'alumine, (Aluminium Hydroxydatum).
La méthode la plus effective de l'employer est de l'obtenir par dyalise d'un précipité ou gel par réaction d'ammoniaque volatil sur une solution contenant un mélange de chlorure d'alumine (Al C13) et de citrate de soude (natrium Citratum) (C6 H5 07) Na3. Par ce procédé le retardement de l'action peut attein- dre et même dépasser cinq jours au lieu de deux par d'autres méthodes.
Afin d'assurer la conservation du produit ainsi obtenu, on y ajou- te, avant sa mise en bouteilles ou ampoules scellées, et toujours en conformi- té avec la présente invention, de l'acide phénique dans la proportion d'un millième en poids.
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Les indications de temps, de proportions et de modus operandi ci- dessus données répondent à des'conditions générales et elles pourront être mo- difiées suivant les cas, sans cesser, pour cela, d'être en conformité avec la présente invention. C'est ainsi qu'il y aura lieu de procéder à un ou plusieurs filtrages au cours des opérationso
Les avantages du procédé, objet de la présente invention, sont, en- tre autres, d'obtenir des anatoxines ou produits semblables par un modus ope- randi dont la technique perfectionnée décrite ci-dessus assure la pureté, la régularité de constitution, la qualité constante, l'action freinée et la con- servation.
Quand le produit ainsi obtenu provient du Siphonospora Polymorpha ou de parasites semblables, il possède des propriétés, modificatrices de la lymphe, du sang humain et animaux, et de la sève des végétaux et ayant, en outre, les propriétés d'un antigène du Benzo-Gynoestryl 5 et aussi une action destructrice de divers parasites et autres micro-organismes de ces milieux ainsi que des cellules anormales de 3'organisme humain, animal ou végétal.
-REVENDICATIONS-
1. Procédé de préparation de produits modificateurs du sang, de la lymphe, de la sève et de tous autres tissus ou milieux internes animaux ou végétaux, ce procédé étant caractérisé par l'isolement et la culture en colonies pures, sous contrôle microscopique aidé par l'emploi de colorants ap- propriés, d'un parasite ou micro-organisme semblable vivant dans les tissus ou milieux internes humains, animaux ou végétaux, la dévitalisation de cette colonie cultivée au moyen d'un agent chimique approprié et de vibrations d'or- dre ultra-sonique, le freinage de Inaction de cette culture dévitalisée par un agent retardateur, et l'addition d'un agent de conservation préalablement à l'embouteillage ou la mise en ampoules du produit ainsi obtenu.
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PROCESS FOR THE PREPARATION OF ANATOXINS AND SIMILAR PRODUCTS.
The present invention relates to a process for the preparation or manufacture of toxoids and other modifying products for the blood, the lymph of animals, the plant sap and other circulatory or nourishing media, products obtained using a parasite of these various backgrounds.
The parasite to which the process which is the subject of the present invention applies par excellence is the “Siphonospora Polymorpha” known and described for several years. Other parasitic agents of internal animal or plant tissues or media can also be the basis of the process described below.
According to the method according to the present invention, the isolation of Siphonospora Polymorpha or other similar parasite is facilitated and its cultivation monitored under a microscope by the use of a selective dye.
In accordance with the present invention, this dye is a mixture of fuchsin and methylene blue used in the proportions and according to the modus operandi below.
The blood or medium to be examined microscopically is spread in as thin a layer as possible in the center of a thin coverslip or slide which is subjected for a few moments to a heat of about 120 C.
It is then immersed for a few seconds in a bath made of 1% lactic acid, 10% absolute methyl alcohol and 89% distilled water.
It is then washed and bathed for about ten minutes in a mixture composed of one gram of methylene blue; two grams of fuchsin, fifteen grams of absolute methyl alcohol and 135 grams of distilled water.
Following this treatment, microscopic examination will show the
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leukocytes, blood cells or cell wastes will show up in border red, while red blood cells will have a slight pinkish tinge. Sphonospora or other microorganisms will stand out as small sharp spots on the pinkish transparency of the red blood cells they infest.
By means of this staining process it will be easier to microscopically control the isolation and cultivation of Siphonospora or other similar parasite.
The culture medium in which the inoculations are carried out can be any suitable broth, more particularly peptone. The acidometry of this medium should preferably correspond to the pH 7.7 index. The optimum temperature for cultivation will be around 38 C.
Seeding is done according to the usual routine for aerobic cultures. One or more successive microscopically controlled subcultures are carried out after staining, preferably with the selective dye mentioned above. This check must cover both the number of parasites and the purity of the culture, until an active strain is obtained which is free from other microorganisms.
This strain serves, in turn, to inoculate a broth or culture medium which is left to mature in an oven maintaining it, preferably, at around 38 C.
When this broth or culture medium has reached the desired degree of maturity and virulence, steps are taken to kill the parasites or similar microorganisms.
These operations are carried out in three stages: formalinization which kills the less tenuous elements, deformolization which removes the excess of this product and vibrolysis which kills the filtering elements and completes the devitalization of the culture.
The formalin is preferably one third of 40% and it is added to the culture in the proportion of 5% by volume. It is then left to stand in order to allow the formalin to evaporate.
To check whether the deformolization is complete, we slowly incorporate in an aqueous solution called A as 5% SO3Na H a second aqueous solution called B containing 5% alcohol saturated with fuchsin and we stop when we notes that the color of B no longer changes, but remains constant.
The formalin culture is slowly incorporated into the A + B mixture thus obtained. If the color turns dark, there is still free formalin, if not, there is no more.
To complete its devitalization, the culture is subjected to ultra-sonic vibrations, that is to say of a frequency greater than 18,000 periods / second. Any suitable means will be used for this, in particular the piezoelectric properties of quartz crystals.
The operation is continued until the microscopic examination with adjuvant of the specific dye mentioned above, and the subculturing prove that all life is extinct in the culture.
With a view to using the devitalized culture and in order to control its slowing action, it is subjected, according to the present invention, to a treatment with an alumina hydroxide (Aluminum Hydroxydatum).
The most effective method of employing it is to obtain it by dialysis of a precipitate or gel by reaction of volatile ammonia on a solution containing a mixture of alumina chloride (Al C13) and sodium citrate (natrium Citratum) (C6 H5 07) Na3. By this process the delay of the action may reach and even exceed five days instead of two by other methods.
In order to ensure the preservation of the product thus obtained, before its bottling or sealed ampoules, and still in accordance with the present invention, carbolic acid is added in the proportion of one thousandth in weight.
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The indications of time, proportions and modus operandi given above respond to general conditions and they may be modified as appropriate, without ceasing, for this, to be in accordance with the present invention. This is how it will be necessary to carry out one or more filtering during the operations.
The advantages of the process which is the object of the present invention are, among others, to obtain toxoids or similar products by a modus operandi, the improved technique of which described above ensures purity, regularity of constitution, constant quality, slowed down action and conservation.
When the product thus obtained comes from Siphonospora Polymorpha or similar parasites, it has properties which modify the lymph, human and animal blood, and plant sap and have, in addition, the properties of a Benzo antigen -Gynoestryl 5 and also a destructive action of various parasites and other microorganisms of these media as well as abnormal cells of the human, animal or plant organism.
-CLAIMS-
1. Process for the preparation of modifying products for blood, lymph, sap and any other internal animal or plant tissues or media, this process being characterized by the isolation and cultivation in pure colonies, under microscopic control aided by the use of suitable dyes, a parasite or similar micro-organism living in internal human, animal or plant tissues or environments, the devitalization of this cultured colony by means of an appropriate chemical agent and vibrations of ultra-sonic order, the braking of the Inaction of this devitalized culture by a retarding agent, and the addition of a preservative prior to bottling or placing in ampoules of the product thus obtained.